CIENCIAS DE LA VIDA, 10

Autor: Senovilla González Laura.
Año: 2005.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: La hipófisis está formada por dos lóbulos de origen embrionario distinto, el lóbulo posterior o neurohipófisis y el lóbulo anterior o adenohipófisis. La adenohipófisis está formada por al menos cinco tipos de células secretoras que reciben el nombre de la hormona que almacenan. Así, las células corticotropas almacenan adrenocorticotropina (ACTH), las células gonadotropas almacenan las hormonas gonadotropinas que son la hormona estimulante del folículo (FSH) y la hormona luteinizante (LH), las células tirotropas almacenan tirotropina (TSH), las células lactotropas o mamotropas que almacenan prolactina (PRL), y, por último, las células somatotropas que almacenan hormona de crecimiento (GH). El control de la secreción hormonal adenohipofisaria está bajo el control del hipotálamo a través de los factores de liberación (HRHs), fundamentalmente. Los HRHs clásicos son el factor liberador de corticotropina (CRH), el factor liberador de gonadotropinas (LHRH ó GnRH), el factor liberador de tirotropina (TRH) y el factor liberador de hormona de crecimiento (GHRH). Según la Visión Clásica, cada uno de los tipos celulares adenohipofisarios se caracteriza por ser estimulado de forma específica por un HRH, y del mismo modo liberar una hormona adenohipofisaria, estableciéndose así cinco ejes endocrinos totalmente diferenciados e independientes. Sin embargo, encontra de lo descrito por la Visión Clásica, se han descrito células con fenotipos híbridos, como las células mamosomatotropas descritas por Frawley y las células somatogonadotropas descritas por Childs. Estas células con fenotipo híbrido son capaces de almacenar más de una hormona adenohipofisaria (células polihormonales) y/o expresar en su membrana el receptor para más de un HRH (células polirreceptoriales). A las células polihormonales y células polirreceptoriales nosotros las denominamos células multifuncionales. Estas células multifuncionales serían fenotipos híbridos capaces de comportarse como un tipo u otro dependiendo del requerimiento hormonal del momento. A la capacidad que tiene la adenohipófisis para cambiar en momentos fisiológicos con mayor demanda de una hormona se conoce como Plasticidad Adenohipofisaria. Además, la presencia de las células multifuncionales podría explicar la Secreción Paradójica. La Secreción Paradójica se define como la secreción de una hormona adenohipofisaria estimulada por un HRH no correspondiente. Esta secreción paradójica ha sido ampliamente descrita en pacientes con tumores adenohipofisarios humanos. Estos tumores tienen una incidencia en la población del 20%. Se clasifican según sus características secretoras y los más comunes son los GHomas, prolactinomas, ACTHomas y los No Funcionantes. Además de presentar secreción paradójica, estos tumores se caracterizan por ser muy heterogéneos. Por lo tanto, además de los cinco tipos celulares descritos por la Visión Clásica, sabemos que existen otras células con fenotipos híbridos de las que no conocemos si están presentes en todos los tipos celulares, si las células polihormonales son las mismas que las células polirreceptoriales, si estos fenotipos cambian en determinadas situaciones fisiológicas concretas, o fisiopatológicas como en los tumores adenohipofisarios humanos. Para contestar a todas estas preguntas si hizo necesario la Caracterización de las células adenohipofisarias, especialmente las células multifuncionales. Para ello deberíamos desarrollar una técnica que nos permitiera analizar a nivel de célula única los 4 receptores funcionales y las 6 hormonas adenohipofisarias, para así poder caracterizar los distintos tipos celulares y las posibles diferencias entre sexos, ver si los fenotipos cambian en el estrés y a lo largo de la vida, y si están presentes en los tumores adenohipofisarios humanos. Se ha elaborado una metodología original basada en la combinación de imagen de calcio e inmunoct 8 iquímica be0 secuencial múltiple que nos ha permitido realizar la primera caracterización de las células adenohipofisarias de ratón en lo que se refiere al almacenamiento de hormonas y las respuestas a los HRHs. La mayor parte de las células somatotropas y mamotropas presentaron un fenotipo clásico. El tipo celular corticotropo presentó un gran dimorfismo sexual. En los machos predominó el fenotipo clásico, mientras que en hembras eran polihormonales y polirreceptoriales. La mayoría de las células gonadotropas fueron monohormonales en el macho, pero en la hembra más de la mitad de las células almacenaban otras otras hormonas, sobre todo ACTH (células corticogonadotropas). La mayoría de las células tirotropas fueron polihormonales tanto en machos como en hembras. En definitiva, aunque los fenotipos híbridos se dan en todos los tipos celulares, fueron más abundantes en los tipos celulares minoritarios: tirotropos, gonadotropos y corticotropos. Dentro de los fenotipos híbridos, las células polirreceptoriales fueron más abundantes que las polihormonales; y, las células multifuncionales fueron más frecuentes en hembras que en los machos. En cuanto a la respuesta al estrés, observamos un dimorfismo sexual en la respuesta al mismo y que sólo la fracción de células clásicas se modificaron con lo que la plasticidad adenohipofisaria no sólo implica a las células multifuncionales, sino también a las células con fenotipo clásico. Las células adenohipofisarias pueden clasificarse en tres grupos de acuerdo con sus respuestas a los HRHs en monorreceptoriales, polirreceptoriales y no sensibles a los HRHs. La abundancia de cada una de ellas varió a lo largo de lavida, en el nacimiento abundaban las células no sensibles a los HRHs, en la senescencia las células monorreceptoriales y en la pubertad las células polirreceptoriales. Por último, se caracterizaron fenotípicamente las células de diversos tumores adenohipofisarios. Se encontró una gran heterogeneidad entre los distintos tumores e incluso entre diferentes casos de tumores del mismo tipo. Fueron muy frecuentes los fenotipos híbridos, formados fundamentalmente por células polirreceptoriales. Esta abundancia de células multifuncionales podría estar relacionada con la secreción paradójica, descrita en muchos pacientes. Y podría sugerir, también, una relación fisiopatogénica entre plasticidad hipofisaria y susceptibilidad a los adenomas.

Autor: LUZON TORO BERTA.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: La enfermedad del Alzeimer (EA), la enfermedad de Parkinson (EP) y la esclerosis múltiple (EM) son procesos neurodegenerativos de origen multifactorial, que cursan con reacciones inflamatorias, neurotoxicidad glutamatérgica, incremento en los niveles de hierro y óxido nítrico, eliminación de los antioxidantes endógenos, reducción de los factores tróficos y pérdida neuronal. El que un proceso neurodegnerativo sea un mecanismos multifactorial, podría explicar porqué el limitado número de terapias clínicas neuroprotectoras que utilizan drogas simples, no consiguen generar resultados significativos. Los mecanismos neuroprotectores pueden ser afrontados desde modificaciones dietarias, que es el fundamento de la presente memoria, basada en la aplicación de los ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y de un compuesto polifenólico (2-(3,4-dihidroxifenil)etanol) en una serie de sistemas in vitro e in vivo asociados a procesos y enfermedades neurodegenerativas como la EA, la EP y la EM. Se analizarán marcadores propios de cada patología, parámetros de oxidación y la modificación del perfil lipídico.

Autor: ROMERO LÓPEZ CRISTINA.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE PARASITOLOGÍA Y BIOMEDICINA LÓPEZ-NEYRA.
Centro de realización: INSTITUTO DE PARASITOLOGÍA Y BIOMEDICINA LÓPEZ-NEYRA.

Resumen: Existen múltiples enfermedades virales para las que aún no existen terapias efectivas. Por ello se hace necesario el desarrollo de tratamientos alternativos que permitan combatir de una manera eficiente a estos patógenos, y en su caso, que sean insensibles a la adquisición de resistencia por parte del agente viral. El principal objetivo de la Tesis Doctoral presentada ha consistido en el desarrollo de nuevos RNAs inhibidores basados en ribozimas. Como modelo frente al cual dirigir el diseño se ha elegido el genoma del virus causante de la Hepatitis tipo C. El descubrimiento de moléculas de RNA con capacidad catalítica (conocidas como ribozimas) se remonta a principios de 1980. La mayoría de las ribozimas presentes en la naturaleza catalizan el corte y/o ligación de una molécula de RNA. Entre las múltiples características de las ribozimas destaca que son altamente específicas y selectivas de la molécula de sustrato que procesan, por lo que desde su descubrimiento se perfilaron como unos excelentes candidatos para ser utilizados como agentes terapéuticos. Hasta la fecha las ribozimas han sido ampliamente utilizadas para la inactivación específica de RNAs virales o celulares, implicados en la generación de diversas patologías, como SIDA o diversos procesos tumorales. En algunos casos la tecnología de ribozimas ha sido ensayada clínicamente. Sin embargo, aún existen una serie de factores que limitan su empleo, entre los que destacan la estabilidad del inhibidor y su asociación eficaz al RNA sustrato. Se requiere que esta unión sea lo suficientemente estable, rápida y efectiva como para que la diana sea procesada activamente por el dominio catalítico. El trabajo presentado en la Tesis Doctoral ha consistido en el desarrollo de ribozimas dirigidas frente al agente etiológico de la hepatitis tipo C (HCV). Uno de los principales escollos a solventar en el diseño de agentes anti-HCV es la alta capacidad para evadir la respuesta inmunológica y su alta tasa de mutagénesis. Sin embargo, en el genoma viral existen regiones altamente conservadas entre los diferentes aislados descritos; una de ellas es la región 5'UTR. Esta secuencia además es relevante para el ciclo viral, ya que contiene elementos esenciales para el inicio de replicación del RNA genómico y un lugar de entrada interna del ribosoma (IRES) que dirige la traducción dela poliproteína viral. Esta región constituye, por consiguiente, un buen blanco de acción para nuevos tratamientos alternativos, y en nuestro caso como una excelente diana para el desarrollo de ribozimas. El gran número de factores proteicos que se unen a esta región, así como su compleja estructura secundaria y terciaria, pueden limitar la capacidad de unión de ribozimas en un contexto celular. Para solucionar este problema se propuso la incorporación de un dominio de RNA capaz de unirse al IRES (es decir, que actuaría como aptámerto del IRES) en 3' de un dominio catalítico consistente en la ribozima hammerhead que procesa el RNA viral en la posición 363 (HH363). La incorporación de este nuevo dominio aptámetro favorecería la asociación de la ribozima a su sitio diana sin abolir la capacidad catalítica. El diseño de estos novedosos RNAs inhibidores se ha lleva do a cabo mediante un abordaje experimental, utilizando un proceso de selección molécula in vitro. Este tipo de estrategias son muy poderosas y permiten mimetizar en el laboratorio el efecto de la naturaleza sobre los ácidos nucleicos. En nuestro caso se han utilizado para la identificación de dominios de RNA con capacidad de asociación al IRES de HCV. En el método de selección desarrollado se ha utilizado una población de moléculas de RNA basadas en la ribozima HH363. En su extremo 3'se ha incorporado una secuencia aleatoria de 25 nucleótidos, lo cual genera un número teórico de variantes posibles de más de 10e15. A través de este dominio se espera la unión al IRES. En 3'de dicha construcción de adicionó una secuencia conocida 8 y en 5' d3f la secuencia promotora para el enzima T7 RHNA polimerasa, lo cual permite la transcripción in vitro de la construcción. La presencia de secuencias conocidas en ambos extremos permite la retro-transcripción y amplificación de las moléculas seleccionadas mediante su hibridación con oligonulceótidos cebadores específicos. Durante el proceso selectivo se incorporaron dos pasos: 1,- Selección para la asociación: se diseñó un RNJA sustrato que carecía del sitio de procesamiento para la ribozima HH363. De esta manera las moléculas de la población podrán asociarse al IRES pero no procesarlo. Por tanto, en este primer paso se seleccionan moléculas activas para la asociación a través de su dominio aptámero. 2,- Selección para el corte; en este segundo paso el sustrato diseñado contenía el IREs y el sitio de procesamiento para HH363. La población resultante del primer paso es incuabada en su presencia, lo cual permite seleccionar moléculas que portan capz de unirse al IRES y cuya presencia no elimina la actividad catalítica. Como resultado final de los dos pasos se identificaron 30 secuencias independeintes, todas ellas con motivos consenso que permitían su agrupación en site familias. Estos motivos consenso son complementarios a regiones únicas en el IRES de HCV. Durante el desarrollo de la Tesis Doctroal presentada se demostró que eesto smotivos consenso estaban directamente implciaso en la interacicón con el IREs de HCV a través de su asociación con secuencias complementarias y únicas presentes en el RNA sustrato. Asimismo se procedió a analizar la capacidad de asocaicón y procesamiento de un representante de cada familia. Se comprobó que todos ellos se unían eficazmente a su RNA sustrato y los precoesaban de una manera específica. Finalmente se estudió la capacidad para inhbir la traducción dependiente del IRES de cada uno de los representates. Los distintos inhbidiores escogidos inteferían de una manera efica y específica con la traducción dependiente de IREs, alcanznado valores de inhbición del 97% en algunos casos. También se comprobó que los distintos dominios aptámeros identificados ejercían un efecto inhibidor, aunque en menor grado que las moléculas que combinaban tanto el dominio catalítico como el dominio aptámero. Esto permitía concluir que le potente efecto observado se debe a una acción combianda de ambos dominios, y que se precisa su presencia conjunta en el inhibidor para obtener los mayores efectos. Como conclusión final del trabajo, se puede afirmar que el método de selección desarrollado permite la identificación de nuevos RNAs inhibidores altamente eficaces, y que puede hacerse extensivo para la selección frente a otros sustratos virales o celulares.

Autor: LLORENTE LÓPEZ JOSÉ IGNACIO.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD DE GRANADA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: En los últimos años se ha producido un interés creciente por parte de la comunidad investigadora en la comprensión del desarrollo ontogénico de los esturiones, especies de gran importancia económica. Aunque se han descrito los patrones generales del desarrollo en los Acipenséridos, la existencia de diferencias interespecíficas de orden temporal, hace necesario el determinar la cronología del desarrollo embrionario en Acipenser naccarri, esturión autóctono de la Península Ibérica. Para la observación a microscopía óptica, los animales enteros, tras anestesia, fueron fijados en Bouin, incluidos en parafina, posteriormente se cortaron en diferentes planos y las secciones obtenida se tiñeron con la técnica del PAS (Mcmanus, 1948), Azul alcián (AA) pH 2,5 y pH 1 (Lev & Spicer, 1964) y la técnica combinada del PAS-AA pH 2'5 (Mowry, 1963). Para el examen con microscopía electrónica de transmisión y barrido, porciones de la diferentes regiones digestivas, tras su fijación en glutaraldehído al 4%, fueron sometidas a los protocolos habituales de preparación de muestras. Para los estudios de actividades enzimáticas realizamos las siguientes determinaciones analíticas: actividad alfa-amilasa (Somogy-Nelson, 1951), actividad proteolítica total (Kunitz, 1947) y contenido proteico (Bradford, 1976). En Acipenser naccarii, la eclosión se produce en torno a los 7b días 18 horas post-fecundación a 15ºC, momento en el cual los embriones poseen un sistema digestivo parcialmente desarrollado y representado por un gran saco vitelino y un primorido de válvula espiral. La presencia de actividades enzimáticas en este momento del desarrollo se relacionaría con la digestión de los componentes del vitelo y con la preparación de la cubierta embrionaria para la eclosión. Hacia el día 7 post-eclosión (dpe), en el epitelio que recubre la cavidad orofaríngea puede observarse la presencia de células mucosas que muestran positividad frente a las técnicas del PAS y del AA pH 2,5. Otras estructuras presentes en el eptileio bucafaríngeo son los botones gustativos y los dientes. El esófago se mantiene indiferenciado hasta el día 6-7 dpe, momento en elcual podemos observar que en el epitelio estratificado esofágico se distribuyen células ciliadas y células mucosas que se caracterizan por PAS-positividad y por su alcianofilia, tanto a pH 2,5 como a pH 1. En los días posteriores a la eclosión, la porción gástrica sufrirá una serie de modificaciones encaminadas a la adquisición de la estructura cecal, de forma que, alrededor del día 7 dpe el epitelio gástrico es mucosecretor de tipo columnar y se caracteriza por la PAS-positividad de la porción apical de su citoplasma. Las células glandulares gástricas, denominadas oxíntico-pépticas, no presentan gránulos de zimógeno en este momento del desarrollo. El desarrollo intestinal se inicia hacia el día 3 dpe, a partir de un pliegue de la pared del saco vitelino. En embriones de 7 dpe, el epitelio intestinal, así como el de la válvula espiral, es de tipo columnar y posee algunas células ciliadas y células caliciformes. Estas últimas muestran positividad frente a las técnicas del AA pH 2,5 y pH 1, lo que indica la presencia de mucosustancias ácidas (tanto carboxiladas como sulfatadas). Las características ultraestructurales de los enterocitos intestinales y de los ciegos pilóricos al final del periodo lecitotrófico los relacionan con proceso de absorción lipídica. En la válvula espiral las primeras células caliciformes aparecen hacia el día 3 dpe y se caracterizan por su fuerte alcianofilia a pH 2,5 y pH1. Durante la etapa final del desarrollo, las características ultraestructurales de los enterocitos de esta porción intestinal indican su implicación en procesos de absorción de proteínas por pinocitosis. La transición a la alimentación exógena coincide con un aumento en la capacidad digestiva total de 8 los emb 5d8 riones libre. El aumento en las actividades alfa-amilasa y proteásicas se relaciona con la presencia de un páncreas funcional, aunque no podemos descartar la influencia del alimento exógeno. La observación de gránulos de zimógeno únicamente en las células oxíntico-pépticas de ejemplares de más de 19 dpe indica que la digestión ácida del alimento no está asegurada en los individuos que inician la alimentación exógena. A partir del inicio del periodo lecito-exotrófico, las características histológicas e histoquímicas del tracto gastrointestinal no sufren cambios de consideración, únicamente puede citarse un aaumento generalizado en el número de células productoras de mucosustancias en todos los compartimentos digestivos, pero especialmente en la porción más distal de la válvula espiral.

Autor: GINER SANCHEZ DANIEL.
Año: 2005.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: INSTITUTO DE NEUROCIENCIAS DE ALICANTE.

Resumen: Las imágenes obtenidas por microscopía de luz transmitida empleando objetivos de gran aumento muestran una compleja y dinámica red estructural citoplasmática en células cromafines bovinas en cultivo. Estas estructuras se ven afectadas por agentes químicos que alteran la distribución y/o función del complejo f-actina-miosina. Además estas estructuras colocalizan con la barrera periférica de f-actina, beta-actina y el subtipo II de miosina. Por otro lado, inductores de la secreción producen un proceso de desorganización dependiente de calcio, rápido (inferior a los 10 segundos) y transitorio (en ciclos de aproximadamente 60 segundos) de estas estructuras corticales. Estos cambios se ven acompañados por la formación simultánea de dos estructuras características. En primer lugar, estas estructuras se organizan perpendicularmente a la membrana plasmática formando estructuras tipo canal que permiten el transporte de las vesículas secretoras desde las regiones citoplasmáticas más internas a los límites externos de la célula. En segundo lugar, se observa la formación de espacios abiertos desprovistos de f-actina en las regions citoplasmaticas más internas. Las vesiculas se desplazan a traves de estas estructuras de f-actina evitando difundir por las regiones citoplasmáticas desprovistas de f-actina. Además, estas reorganizaciones corresponden a una transferencia de f-actina desde las regiones externas correspondientes a la barrera cortical hasta las regiones citoplasmáticas adyacentes tal y como queda demostrado en los estudios sobre los cambios asociados a la fluorescencia en estas regiones en células que sobrexpresan GFP-beta-actina. Por último, al caracterizar las oscilaciones sufridas por los niveles de calcio durante la secreción mediante el empleo de sondas fluorescentes afín a este ión (fluo3-AM) se detectaron dos fenómenos que relacionan el citoesqueleto de f-actina con las zonas de mayor niveles de calcio. En primer lugar, se observó como las zonas citoplasmáticas de mayores niveles de calcio correspondían a las regiones del citoesqueleto de f-actina más activas y en segundo lugar, los puntos calientes de calcio (o zonas con niveles de calcio más elevados) se corresponden a las zonas citoplasmáticas desprovistas de f-actina. Estas primeras observaciones realizadas sobre los niveles de calcio durante la secreción en relación con el citoesqueleto merecen un estudio más en detenimiento y profundidad que desvele la verdadera relación existente entre ambos sistemas y abre futuras líneas de investigación. Estos datos reflejan la función desempeñada por la compleja red citoplasmática formada por el binomio f-actina-miosina actuando simultáneamente como barrera y como motor en el transporte de las vesículas secretoras durante la exocitosis y pone de manifiesto la utilidad de la microscopía de luz transmitida como una alternativa a la microscopía de fluorescencia confocal en el estudio de la dinámica del citoesqueleto en un modelo neuroendocrino.

Autor: COROMINAS TABARÉS LLUÍS.
Año: 2005.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Autor: SÁNCHEZ RUIZ NOEMÍ.
Año: 2005.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD DE GIRONA, FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GIRONA.

Resumen: El objetivo de esta tesis doctoral ha sido estudiar a nivel taxonómico y ecofisiológico, las especies de la familia Faucheaceae (Rhodymeniales, Rhodophyta) presentes en las costas de la Península Ibérica y de las Islas Baleares: Fauchea repens (C. Agardh) Montagne y Bory in Montagne, Gloiocladia furcata (C. Agardh) J. Agardh y Gloiocladia microspora (Bornet ex Rodríguez y Femenías) Sánchez y Rodríguez-Prieto, comb. nov. El estudio taxonómico se ha realizado a partir de muestras recolectadas en las costas de la Península Ibérica y de las Islas Baleares, y se ha completado con la revisión de los ejemplares conservados en los herbarios de diversas universidades españolas y de los ejemplares tipo localizados en el herbario de C. Agardh o en el de J.J. Rodríguez y Femenías. Así pues, con este trabajo se han podido completar los datos ya existentes en referencia a la morfología, la estructura vegetativa y los tetrasporófitos de las tres especies, y se han aportado datos inéditos en cuanto a las estructuras reproductoras masculinas de Fauchea repens y las estructuras reproductoras femeninas y estadios de postfertilización de F. repens, G. furcata y G. microspora comb. nov. Se detallan también la corologia, el hábitat y la fenologia de las tres especies. A raíz de estos resultados y el estudio de F. repens y G. furcata, las especies tipo de sus géneros y, en el caso de la primera también de la familia, se propone una corrección de la descripción original de la família Faucheaceae I.M. Strachan, G.W. Saunders & Kraft, así como la nueva combinación Gloiocladia microspora comb. nov. para la especie designada hasta el momento como Fauchea microspora Bornet ex Rodríguez y Femenías. Los datos obtenidos se acompañan de una iconografía original de dibujos y fotografías, y de una clave de determinación para los taxones estudiados. En cuanto al estudio ecofisiológico, se han realizado diversos ensayos de laboratorio para determinar los requerimientos de luz, temperatura y fotoperíodo para el crecimiento y supervivencia de las tres especies. Finalmente, se han aportado datos inéditos para Fauchea repens, Gloiocladia furcata y Gloiocladia microspora comb. nov., y los resultados obtenidos nos han permitido explicar la distribución batimétrica y geográfica de cada una de las especies.

Autor: ALAZZOUZI Hafid.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Hosp. Universitario de Vall d Hebron.
Centro de realización: Hospital Universitari de Vall d Hebron.

Autor: Martínez Bueno Manuel.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: Estación Experimental del Zaidín (CSIC).
Centro de realización: Estación Experimental del Zaidín.

Resumen: La transcripción constituye la componente principal del control de la expresión genética. El primer nivel en la jerarquía del control de la transcripción es el factor sigma de la ARN polimerasa que determina la especificidad por el promotor. En un segundo nivel se situan los factores transcripcionales, tanto activadores ccomo represores. En este trabajo se datectan, describen y estudian los factores sigma presentes en el genoma de Pseudomonas putida KT2440 y se comparan con el represtorio de factores sigma del microorganismo filogenéticamente más próximo en la fecha del estudio, Pseudomonas aeruginosa PAO1. Además construimos un perfil convencional que define a la familia TetR de represores de la transcripción, procediendo al estudio general de la familia. Del análisis de los co-cristales ADN/proteína disponibles se deduce un modelo de interacción con el ADN para los miembros de la familia y se hace la predicción de los residuos de interacción con el ADN para los 2353 miembros de la familia TetR seleccionados por nuestro perfil. La infromación reccopilada en el estudio de la familia TetRse ha organizado en una base de datos. Para ellos hemos construído la base de datos de reguladores transcripcionales BacTregulators que actualiza e incluye a la anterior AraC-XylS. La entrada de BacTregulators se define a cuatro niveles: (1) secuencia de aminoácidos, (2) nivel taxonómico del organismo fuente, (3) elemento de genoma en el que está en gen que codifica a la secuencia, y (4) posición del gen en el elemento de genoma. Con esta estrucutra se evita la redundancia. La información contenida en la entrada es de dos tipos: información extraída automáticamente de otrass bases de datos e información extraída manualmente de las referencias bibliográficas. Esta última se organiza en párrafos referenciados individualmente a la ficha Medline del trabajo del que se extrajo. Además se incluye el dato 'evidencia 'experimental' en apoyo de lo dicho en el párrafo, también conectada al abstract del trabajo fuente. Así pues BacTregulators es la unión de una Base de Datos de Proteínas y otra de referncias bibliográficas. Además se incluye una base de datos de relaciones que permitirá al usuario interrogar a la base de datos. Otro aspecto novedoso es la herramienta que permite al usuario obtener un informe integrado del conocimiento de un conjunto de secuencias relacionadas por nivel taxonómico y/o similitud de secuencia, lo que contribuye a la extensión del conocimiento a secuencias sin anotación.

Autor: Rodriguez Rincón Francisco.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: Facultad de Farmacia.
Centro de realización: Facultad de Farmacia.

Resumen: P. flavido-alba elimina la toxicidad del alpechín (OMW) mediante la oxidación de sus componentes aromáticos monoméricos y poliméricos. Varias enzimas ligninolíticas fueron identificadas como responsables de dicha transformación. Entre ellas la lacasa fue la única enzima detectada en cultivos añadidos de compuestos aromáticos monoméricos del alpechín, sugiriendo un papel importante en su detoxificación. En este trabajo se identificó y caracterizó el gen de la lacasa de P. flavido-alba (pfaL). Tiene un tamaño de 2755 nt. Está formado por una secuencia de codificación de 1704 nt, 19 intrones y por una región reguladora UTR-3' de 244 nt. En el extremo 5´ se identificaron secuencias consenso de regulación general y otras frecuentes en genes de lacasas tales como elementos de respuesta antioxidante (ARE), a metales (MRE), a xenobióticos (XRE), a regulación por nitrógeno (NIT2) y a carbono (Mig1). La estructura del gen y de la proteína son similares a las de multicobre oxidasas de P. chrysosporium, con las que

Autor: MORÓN GARCÍA ESPERANZA.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE EDUCACIÓN.
Centro de realización: FACULTAD DDE EDUCACIÓN.

Resumen: Esta tesis trata de desarrollar, desde un punto de vista historiográfico, la evolución histórica de la población en localidades españolas, sobre todo, en las cercanas a las grandes ciudades como es el caso de Pozuelo de Alarcón, donde se han dado una serie de transformaciones socioeconómicas que han motivado un cambio en la vida de su población a partir de la segunda mitad del siglo XX. Por este motivo, hemos realizado este estudio y aportado estas investigaciones que nos acercan al conocimiento de esos proceso de cambio que han tenido lugar en localidades que tradicionalmente habían basado su economía en la agricultura y la ganadería y han pasado de depender de la industria, la construcción y los servicios. El estudio se ha realizado a partir de los padrones municipales de 1940, 1950, 1960 y 1970 y los Censos de 1990 y 2000 publicados por el Instituto Nacional de Estadística. Además, tiene la vertiente pedagógica del desarrollo de herramientas de uso en el diseño de los proyectos curriculares ajustados a los diseños curriculares en las asignaturas de Ciencias Sociales; Geografía e Historia, Geografía Humanan, Economía, Sociología, etc., lo que puede aportar multiplicidad de usos en los niveles de Enseñanza Secundaria Obligatoria y Bachillerato. El hecho de haber elegido Pozuelo de Alarcón se debe a que es uno de esos municipios donde claramente se han dado esas transformaciones, pasando de una economía agraria y tímidamente industrial a principios del Siglo XX, a una economía dependiente de la construcción y fundamentalmente de los servicios.

Autor: SANZ MONTERO ALBERTO.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA (UCM).

Resumen: El envejecimiento constituye uno de los problemas más serios a los que se enfrentan los sistemas de Seguridad Social de los países occidentales. Para solucionar este problema es necesario cambiar el actual enfoque sintomático (centrado en tratar las enfermedades una a una) por uno que vaya a la raíz del problema: retrasar el envejecimiento (y con ello todas las enfermedades asociadas a éste). Esta última opción requiere conocer en profundidad las causas del envejecimiento para, así, combatirlas directamente. En los últimos años la teoría mitocondrial de envejecimiento por radicales libres se ha erigido como la más firme candidata para explicar este complejo fenómeno. Según esta teoría, el envejecimiento se produce como consecuencia del daño causado por las especies reactivas del oxígeno producidas durante la respiración aerobia. Esta teoría señala, además, a las mitocondrias como el principal blanco de la acción de estos radicales libres. La restricción calórica es la única manipulación experimental que incrementa la longevidad media y máxima en todas las especies en las que se ha estudiado. De acuerdo a la teoría mitocondrial de envejecimiento para radicales libres los animales restringidos (más longevos) producen menos radicales libres en sus mitocondrias y sufren menores niveles de daño oxidativo. Hasta el momento los mecanismos de actuación de la restricción calórica sobre el estrés oxidativo continúan en su mayor parte siendo una incógnita. Por ello, la presente tesis ha estado dedicada a estudiar los mecanismos de actuación de la restricción calórica sobre el estrés oxidativo. En primer lugar cabe destacar que la restricción calórica sigue actuando el estrés oxidativo cuando se inicia a edades muy avanzadas, utilizando además el mismo mecanismo: el descenso en la fuga de radicales libres en el complejo I y en el daño oxidativo al ADN mitocondrial. Por otra parte el estrés oxidativo y el ayuno puntual tienen efectos totalmente distintos sobre el estrés oxidativo, mientras que la restricción calórica disminuye el estrés oxidativo, el ayuno lo incrementa. Nuestros resultados experimentales apuntan a que la restricción calórica no disminuye el estrés oxidativo a través de la vía de señalización insulina/IGF I, sino que es la ingesta de proteínas o la demetionina la que controla la fuga de radicales libres de la cadena de transporte de electrones y los niveles de daño oxidativo sobre el ADN mitocondrial. Estos resultados están de acuerdo con la bibliografía existente que muestra que tanto la restricción proteica como la de metionina incrementan la longevidad media y máxima de los roedores. El mecanismo fisiológico por el que la fuga de radicales libres se reduce está relacionado con un descenso en la concentración de los complejos respiratorios, que es curiosamente el mismo fenómeno que parecen emplear otro modelo de longevidad extrema: las aves.

Autor: MERINO GARCÍA RUBÉN.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE QUÍMICA ORGÁNICA GENERAL, CSIC.

Resumen: En esta Tesis se han evaluado contaminantes químicos en los huevos fracasados de las poblaciones de Halcón peregrino y milano negro del parque regional del sureste de Madrid. Los contaminantes estudiados fueron PCBs, PCDDs, PCDFs, DDTs, Pb, Cd y As. De todos ellos los PCBs representaron los de mayor riesgo por las altas concentraciones encontradas en una de las especies, el Milano Negro, en algunos casos superiores a las descritas en otras aves como nocivas. En una segunda parte se evaluó la posible influencia de los PCBs, DDTS, CD, Pb y As sobre los niveles de hormonas tiroideas y proteínas plasmáticas de los pollos de milano nacidos en dos épocas de cría. Los resultados no permitieron demostrar una clara relación significativa entre estos niveles y los contaminantes. Las complejas interacciones entre contaminantes-proteínas-hormonas del tiroides sugieren que las proteínas podrían mediar en la tirotoxicidad de los contaminantes químicos.

Autor: HOYO BECERRA CAROLINA.
Año: 2005.
Universidad: MÁLAGA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS, UNIVERSIDAD DE MÁLAGA.

Resumen: El órgano subcomisural es una diferenciación ependimaria ubicada en la línea media dorsal del prosomero 1 (región caudal del diencéfalo), justo debajo de la comisura posterior. Estas células ependimarias están especializadas en la secreción de glicoproteínas de alto peso molecular (entre ellas la OSC-espondina) hacia el líquido cefalorraquídeo, donde pueden quedar solubles o polimerizar en una estructura fibrilar denominada fibra de Reissner. La presente tesis aporta nuevos datos sobre: 1,- La actividad secretora de estas células en etapas embrionarias muy tempranas. 2,- La polimorización de la fibra de Reissner durante el desarrollo embrionario. 3,- El papel de las células del órgano subcomisural en la formación de la comisura posterior. Todos los diseños experimentales se han realizado en el embrión de pollo y los resultados obtenidos sugieren que: 1,- En etapas muy tempranas del desarrollo embrionario del pollo (4-5 días de desarrollo) existe material soluble en el líquido cefalorraquídeo, relacionado inmunológicamente con el material de secreción del órgano subcomisural. 2,- La formación de la fibra de Reissner durante el desarrollo embrionario depende de un factor extrínseco al órgano subcomisural, dicho factor aparece a partir del estadio de los 11 días de desarrollo embrionario. 3,- El órgano subcomisural produce moléculas de la guía axonal y posee efectos in vitro sobre la formación de neuritas que se generan a partir de explantes del núcleo magnocelular de la comisura posterior (núcleo que produce la mayor pate de las fibras que forman la comisura posterior en etapas tempranas) Estos resultados sugieren que las células del órgano subcomisural podría participar en la formación de la comisura posterior durante etapas tempranas del desarrollo embrionario del pollo.

Autor: PALOMINO NANTÓN DAVID.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: A pesar de su corta historia en términos evolutivos, el desarrollo urbano constituye una de las formas de perturbación humana de los ecosistemas más preocupante, pues sus efectos se prolongan en el tiempo y en el espacio casi ilimitadamente. Para resolver este conflicto se necesitan protocolos de estudio rigurosos, basados en conocimientos básicos de ecología, que generen diagnósticos y predicciones fiables, con los que: 1,- Adoptar medidas que preserven la integridad de áreas aún no afectadas por el desarrollo urbano. 2,- Aplicar medidas de restauración de las zonas ya impactadas. Las aves son muy frecuentemente elegidas como modelo para definir prácticas de gestión que favorezcan la conservación de la biodiversidad, pues constituyen un grupo animal de estudio para el que existe gran cantidad de información acumulada, y al ser abundantes y estar ecológicamente muy diversificados, sus marcadas preferencias de hábitat las convierte en muy buenos indicadores de alteraciones medioambientales. En el caso concreto estudiado en esta tesis, los distintos municipios de las laderas meridionales de la Sierra de Guadarrama vienen experimentando un muy rápido crecimiento urbanístico, potencialmente problemático para preservar importantes poblaciones reproductoras de especies de aves con un estatus de conservación delicado a nivel provincial, nacional y europeo. La presente tesis trata de diversos aspectos del efecto del urbanismo (y de las carreteras y actividades de ocio al aire libre más asociadas con el desarrollo urbano) sobre la distribución y abundancia de las aves de la Sierra de Guadarrama en el periodo reproductor, tratando de ofrecer información aplicable en términos de biología de la conservación.

Autor: TENA GARCÍA DAVID.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UCM.
Centro de realización: INSTITUTO DE RECURSOS NATURALES-CENTRO DE CIENCIAS MEDIOAMBIENTALES DEL CSIC.

Resumen: La construcción de nuevas infraestructuras varias lleva asociadas toda una serie de acciones como generación de terraplenes de forma artificial, desmonte de terrenos, movimientos de tierras, asfaltado del firme y circulación de vehículos. Desde la ecología, el resultado de estas acciones es la generación de grandes superficies de suelo desnudo, en numerosas ocasiones de levadas pendientes, sobre los que se genera una cubierta vegetal formada por especies herbáceas eminentemente anuales. El presente trabajo trata de aportar información acerca de características, patrones y mecanismos subyacentes que definen a una comunidad particular desarrollada en taludes de carreteras del sur dela península ibérica.

Autor: MARTÍNEZ BUEY RUBÉN.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS / FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: Los microtúbulos son estructuras celulares altamente dinámicas fundamentales para la segregación de los cromosomas durante la división de células eucariotas. Este comportamiento dinámico se debe fundamentalmente a ciclos de activación/desactivación, inducidos por nucleótido, de la tubulina, su principal componente. Desde hace ya unas décadas, la modulación farmacológica dela dinámica de los microtúbulos se ha mostrado una herramienta eficiente para la quimioterapia antitumoral. El uso clínico satisfactorio del taxol, un compuesto que estabiliza a los microtúbulos bloqueando su dinámica, ha disparado la búsqueda de nuevos compuestos antimitóticos con mecanismos de acción similares pero que eviten los inconvenientes de éste (baja solubilidad en agua, difícil síntesis, química, efectos laterales no deseados y aparición de resistencias en las células tumorales como consecuencia de tratamientos prolongados. La búsqueda intensiva de este tipo de compuestos ha propiciado la descripción de una gran diversidad de compuestos, químicamente no relacionados, que poseen actividad estabilizadora de microtúbulos. Entre éstos, se encuentran epotilonas, discodermolida, dictiostatina, sarcodictinas, eleuterobina, derivados esteroides, ciclostreptina, laulimalida, pelorusido A, tacalonolidas, lonafarnib, dicumarol, etc. En colaboración con diversos grupos de investigación que han purificado o sintetizado estos compuestos, se ha realizado un estudio detallado de su interacción con los microtúbulos. De esta forma, mediante la monitorización del desplazamiento de un análogo fluorescente de taxol, Flutax-2, o de laulimalida, se ha clasificado a la mayoría de los compuestos descritos como estabilizadores de microtúbulos en tres grupos principales. Un primer grupo estaría compuestos por aquellos ligandos del sitio de taxol; un segundo grupo compuesto por lo ligandos del sitio de laulimalida y un último grupo en el que se incluirían aquellos compuestos que no se comportaron como verdaderos estabilizadores de microtúbulos en sistemas in vitro de tubulina pura. Además, se ha cuantificado la termodinámica de la reacción de unión de los ligandos al sitio de taxol y se ha encontrado la entalpía aparente de la reacción de unión a este sitio como un parámetros capaz de predecir su citotoxicidad, lo que podría resultar de utilidad en el diseño racional de fármacos. Dado que las epotilonas son uno de los grupos de ligandos del sitio de taxol más prometedores como futuros fármacos antitumorales, se ha realizado un estudio de las relaciones estructura-actividad de estos compuestos. Este ha generado información sobre la influencia de modificaciones químicas sencillas sobre la afinidad, la termodinámica de la unión y la actividad de estabilización de microtúbulos y citotóxica. Se ha demostrado que algunos de los parámetros termodinámicos de la unión son capaces de predecir la citotoxicidad y éstos se han usado para optimizar las propiedades citotóxicas de estos compuestos. Por último, se han estudiado los mecanismos de unión de los ligandos del sitio de taxol. Para ello, se ha utilizado la interacción covalente de la ciclostreptina con este sitio. Este ligando es el primer estabilizador de microtúbulos conocido que modifica covalentemente a la tubulina. Mediante un exhaustivo análisis pro cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas se ha conseguido determinar qué residuos de tubulina están siendo modificados pro ciclostreptina, tanto en los microtúbulos como en al tubulina dimérica no polimerizada. Esto nos ha permitido proponer un mecanismo, de al menos dos etapas, por el que los ligandos accederían al sito de taxol, situado en el interior de los mcirotúbulos. En una primera etapa, los ligandos se unirían a un posible sitio de taxol en el exterior de los microtúbulos, que ya había sido previamente propuesto. En una segunda etapa, los ligando se translocarían al sitio interno, siguiendo una reacción monomocelular lenta, que posiblemente implicaría cambios conformacionales locales de los residuos involucrados.

Autor: CRUZ MATA ISRAEL.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA, INSTITUTO DE SALUD CARLOS III.

Resumen: El episodio de Leishmaniasis Visceral fue monitorizado en un total de 24 pacientes (13 pediátricos y 11 adultos VIH+). Muestra de sangre y médula ósea se obtuvieron al comienzo del episodio, en el control post-tratamiento y durante el seguimiento. En cada uno de estos momentos las muestras fueron analizadas mediante IFI, técnicas Gold Standard (cultivo en medio NNN y microscopía de médula ósea) y LnPCR en sangre y médula ósea. La carga parasitaria fue estimada mediante PCR cuantitativa a tiempo real, y los niveles séricos de TNF-alfa e IFN-gamma fueron determinados mediante ELISA. La cura estéril (Gold Standard y PCR negativos) ocurrió en 7 pacientes pediátricos y estuvo asociada con niveles elevados de IFN-gamma en suero así como con una menor carga parasitaria, junto con niveles bajos de TNF-alfa. Los pacientes con cura parasitológica (Gold Estándar negativa y PCR positiva) en este grupo (n=4) mostraron niveles moderados de ambas citoquinas, y también baja carga parasitaria. Sin embargo, 2 pacientes que recayeron presentaron una mayor expresión de TNF-alfa a lo largo de episodio y también una mayor carga parasitaria. En el grupo de VIH+ ningún paciente consiguió la cura estéril, sin embargo un grupo de 3 pacientes con cura parasitológica no presentó ningún episodio de recaída a lo largo del seguimiento, este grupo fue el único capaz de expresar IFN-gamma mostraron un carga parasitaria baja, en relación con una expresión menor de TNF-alfa. Otros pacientes en el grupo de VIH+recayeron (n=4) o tuvieron un fracaso terapéutico (n=4); en estos pacientes se detectó una mayor carga parasitaria a lo largo del episodio junto con el mantenimiento de niveles elevados de TNF-alfa y una capacidad de TNF-alfa e IFN-gamma en el primoataque puede ayudar en el pronóstico del episodio de Leishmaniasis Visceral en pacientes pediátricos y adultos VIH+.

Autor: TECEDOR CABRERO LUIS.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS, UNIV. COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS (UNIV. COMPLUTENSE DE MADRID).

Resumen: La expresión de receptores de glucocorticoides por parte del feto comienza en el desarrollo a partir del día 13 de la gestación, mientras que la síntesis y liberación de los glucocorticoides fetales no ocurre hasta el día 17 de la gestación. Esto deja un periodo de tiempo en el cual los únicos glucocorticoides que actúan sobre el feto son de origen materno. Mediante un modelo con adrenalectomía bilateral materna en el primer día de gestación, se estudiaron los efectos de la ausencia de glucorticoides maternos en el desarrollo del encéfalo de las crías. Los estudios de neurogénesis con inyección de bromodeuxiridina mostraron que la proliferación celular esta aumentada en el encéfalo de las crías gestadas en ausencia de glucocorticoides maternos. Resultados que coincidieron con los obtenidos mediante tinción inmunohistoquímica para el marcador neuronal NeuN. Los estudios inmunohistoquímicos para diversas subunidades de los receptores de glutamato, para la enzima Óxido Nítrico Sintasa, y para la enzima de biosíntesis de catecolaminas Tirosina Hidroxilasa, mostraron que las crías gestadas en ausencia de glucocorticoides maternos presentan un desarrollo retrasado durante la primera semana postnatal para estos marcadores. Resultados coincidentes con los obtenidos en los estudios de trazado con la carbocianina Dil del desarrollo de diversas vías encefálicas. El estudio del desarrollo de los patrones de expresión de las proteínas ligantes de calcio Calretinina y Parvalbúmina mostraron que las diferencias producidas por ausencia de glucocorticoides maternos durante la gestación va más allá de la primera semana postnatal. Pudiendo ser la base celular de las diferencias comportamentales encontradas en individuos adultos en cuya gestación humo modificaciones de los niveles de glucocorticoides.

Autor: AGUILAR CALAFELL HELENA.
Año: 2005.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: Con el fin de identificar nuevos miembros de la familia de receptores CD300, se hizo una búsqueda en la base de datos genómica utilizando las secuencias de IREM-1 y CMRF-35, y se describió un nuevo miembro de la familia llamado "Inmune Receptor Expressed on Myeloid cells" (IREM-2/CD300e). El gen localizado en el cromosoma 17q25.1 codifica para una proteína de 205 aminoácidos formada por una región extracelular con un dominio inmunoglobulina y una región transmembrana que contiene un residuo cargado positivamente (Lys), el cual nos permite predecir su posible asociación a una molécula adaptadora. La interacción de IREM-2 con DAP-10 y DAP-12 se confirmó en células COS transfectadas. Utilizando los anticuerpos específicos generados en células de sangre periférica y muestras de médula ósea observamos que la expresión de IREM-2 está restringida a células hematopoéticas maduras del linage mielomonocítico. La diferenciación in vitro en los monocitos a células dendríticas inmaduras provoca una disminución del a expresión de IREM-2. La estimulación con los anticuerpos específicos, de IREM-2 asociado a DAP-12 en la línea celular RBL (leucémia basofílica de rata) induce la actividad transcripcional de NFAT y en auséncia de DAP-12 se requiere la presencia de un coestímulo, el PMA, para producir actividad transcripcional. La estimulación del IREM-2 en monocitos induce la producción de TNF-a y la liberación de calcio intracelular. Como conclusión, estos resultados indican que IREM-2 es un nuevo receptor activador de la superfamilia de las immunoglobulinas expresado en el linage mielomonocítico.