CIENCIAS DE LA VIDA, 11

Autor: VIVANCOS PRELLEZO ANA.
Año: 2005.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: La vida aeróbica conlleva la información de especies reactivas derivadas del oxígeno (ROS): el radical hidroxilo (OH.), el ión superóxido (O"-) y el peróxido de hidrógeno (H2O2). Estos ROS son de elevada toxicidad y pueden provocar daños en prácticamente la totalidad de las biomoléculas: lípidos, proteínas y DNA. Las células, por tanto, deben poseer sistemas de detoxificación de estos ROS a la vez que sistemas de señalización en respuesta a niveles elevados o tóxicos de estos ROS, que constituyen la situación de estrés oxidativo. La levadura Schizosaccharomyces pombe, sistema eucariota unicelular, posee dos rutas de señalización en respuesta a estrés oxidativo: el factor de transcripción Pap1 (pombe AP-1) y la MAPK (mitogen activated protein kinase) Sty1 responde específicamente a estrés oxidativo, mientras que la vía de Sty1 responde a múltiples situaciones de estrés, como son de tipo osmótico, de temperatura, por deprivación de fuente de carbono o entrada en fase estacionaria. La activación por fosforilación de Sty1 culmina en la fosforilación y activación del factor de transcripción Atf1. Durante la realización de esta tesis, se ha caracterizado, la respuesta a estrés por H2O2 de Pap1 y su relación con Sty1. En S.pombe existe una respuesta diferente en función de la severidad del estrés por H2O2, bajas dosis de H2O2 en el medio extracelular provocan la activación mediante de Pap1, mientras que altas dosis de este oxidante provocan una activación tardía, dependiente de la MAPK Sty1, del factor de transcripción. La superexpresión de genes diana de la vía de Sty1-Atf1 como gpz1 o ctt1, que codifican por actividades detoxificantes de H2O2, es capaz de adelantar la activación de Pap1 tras tratamientos de altas dosis de H2O2. Por otra parte, la expresión ectópica de gpx1 es capaz de revertir el fenotipo de una cepa Dsty1, permitiendo la activación de Pap1 tras tratamientos de altas dosis del oxidante, aunque con cinética más tardía que la salvaje. La búsqueda de más genes implicados en la activación de Pap1 tras dosis altas de H2O2, condujo a la caracterización de la peroxirredoxina (Prx) Tpx1 como sensor de H2O2 y transductor de la señal a Pap1. Tpx1 se halla en un ciclo catalítico redox de peróxidos en situación de bajas dosis de éstos. La actividad catalítica de Tpx1 consiste en la reacción de sus dos cisteínas, la peroxidática (CP) y la resolutiva (CR), para oxidarse y formar un puente disulfuro a cambio de reducir H2O2. En estas condiciones, Tpx1 es capaz de activar a Pap1. La inactivación temporal por elevadas dosis de H2O2 que sufre Tpx1 explica el retraso observado en la activación de Pa1 en estas condiciones. La reactivación de Tpx1, necesaria para la señalización a Pap1, es mediada por la sulflirredoxina Srx1, que reduce a sulfhidrilo la forma oxidasa a sulfínico de la CP de Tpx1. El gen srx1 es diana de la vía Sty1-Atf1 y se induce de forma específica en respuesta a altas dosis de H2O2, estableciéndose así la relación entre la activación de Pap1 y Sty1. A partir de los estudios que condujeron a la caracterización de Tpx1 como sensor de estrés oxidativo, se reveló su importancia en aerobiosis. Quisimos, pues, determinar si su papel detoxificante o bien otra función desconocida, era responsable de esta esencialidad. A partir de estudios "in vitro" hemos hallado que su elevada afinidad por H2O2 permite que Tpx1 se halle detoxificando peróxidos en la situación basal celular, siendo por ello vital su presencia. También hemos sido capaces de determinar el papel de cada una de sus dos cisteínas redox, la peroxidática y la resolutiva en aerobiosis. Sorprendente, la única cisteína esencial para la supervivencia en presencia de oxígeno es la peroxidática, indicando que es capaz, en ausencia de la resolutiva, de hallarse en un ciclo detoxificante. Finalmente, hemos estudiado las implicaciones en el sistema de S.pombe de la presencia de una Prx que no se inactiva por exceso de H2O2, una forma truncada de Tpx1 en el extremo carboxilo terminal: Tpx1DCTD y la Prx de Escherichia coli, AhpC a nivel de resistencia a estrés oxidativo y de activación de Pap1 y Sty1.

Autor: BRUNET ROIG MAURICI.
Año: 2005.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: La apoptosis, o muerte celular programada, es un proceso activo que moviliza los recursos de la célula con el objetivo de mantener la homeostasis del organismo a cambio del suicidio de células individuales afectadas. Diferentes estudios han demostrado la existencia de un incremento de la actividad de algunas proteínas cdk, especialmente Cdk1 y Cdk2, en correlación con la progresión de los primeros estadios de la apoptosis. En nuestro laboratorio el estudio de este proceso en timocitos, o células arrestadas en G1 y sin actividad cdk debida al ciclo celular, demuestra que la inducción de la actividad de Cdk2 después del tratamiento con radiación gamma o glucocorticoides es necesaria para el inicio de la apoptosis. Mientras ninguna de las ciclinas conocidas parece ser la proteína activadora de Cdk2 en apoptosis, en nuestro laboratorio hemos identificado un nuevo miembro de la familia de las ciclinas, denominado Ciclina O, capaz de activar la kinasa Cdk2 in vivo en líneas celulares. La expresión de esta nueva ciclina en el timo, y otros tejidos, se induce rápidamente después del tratamiento con radiación gamma y coincide con la aparición de la apoptósis. Estos resultados posicionan la Ciclina O como el mejor candidato a ser el activador de Cdk2 necesario para inducir la muerte celular programada en el tiempo, y probablemente también en otros órganos.

Autor: LAMARCA CASADO ROSA.
Año: 2005.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Autor: ACOSTA ROJAS EMILIA RUTHY.
Año: 2005.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: OBJETIVO 1,- Evaluar la asociación entre medidas clínicas, (Agudeza Visual (AV), sensibilidad al contraste, (SC) y estereopsis) y el índice de función visual (VF-14). 2,- Evaluar el impacto de la AV y SC sobre la esteropsis. MÉTODOS Se evaluó una cohorte de 137 pacientes, con catarata bilateral (CB), antes y después de la primera y segunda cirugía de catarata. Se calcularon coeficientes parciales de correlación y modelos de regresión. RESULTADOS 1,- La AV tiene una mayor asociación con el VF-14 (r= -0.30, p=0.003) en la CB y la estereopsis en la pseudofaquia monocular y binocular, (r= 0.26 y -0.51, p= 0.001, respectivamente). 2,- La AV y la SC tuvieron un mayor impacto en la CB. La AV tuvo un mayor impacto después de la cirugía del primer ojo, y la SC después de la cirugía del segundo ojo. CONCLUSIONES La identificación de la discapacidad visual en pacientes con mejor nivel visual, puede ser mejor detectada a través de la esteropsis y la SC, en caso de peor nivel visual, es la AV la que mejor identifica la discapacidad.

Autor: Fuentes Enriquez de Salamanca Susana.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: Facultad de Farmacia.
Centro de realización: Universidad de Granada.

Resumen: Son muchas las propiedades que se le atribuyen a los microorganismos probióticos, entre las que destacan las asociadas con el tracto gastrointestinal, el sistema inmune (entre los que se incluyen los procesos alérgicos), el sistema cardiovascular o con el tracto urogenital. Aún se desconoce los efectos de los microorganismos probióticos sobre la composición de la microbiota gastrointestinal, así como las relaciones que se establecen entre los las bacterias endógenas y el hospedador. En cuanto a los mecanismos moleculares de los denominados "efectos probióticos" también se conoce poco, los cuales pueden variar de una cepa probiótica a otra, o estar producidos por un conjunto de reacciones. El estado previo del sistema inmune o del tracto gastrointestinal de los individuos que reciben tratamiento con agentes probióticos es un factor de gran influencia en la elección de las cepas y los resultados obtenidos. Una de las aplicaciones potenciales de los microorganismos probióticos es la restauración de las funciones inmunitarias deterioradas por infecciones, quimioterapia antitumoral y tratamientos inmunosupresores entre otras. Los microorganismos probióticos también han sido propuestos para su aplicación en el tratamiento de enfermedades inflamatorias intestinales. Para todas estas aplicaciones es de especial importancia considerar la seguridad de estos probióticos al ser microorganismos vivos administrados a sujetos inmunocomprometidos o con la microbiota endógena alterada. El presente trabajo de tesis se realizó dentro de un proyecto del Fondo de Investigación Sanitaria del Ministerio de Sanidad, cuyo fin fue abordar el estudio de la capacidad de bacterias probióticas para colonizar la mucosa intestinal, interaccionar con comunidades representantes de la microbiota endógena y modificar la capacidad de respuesta del sistema inmune en modelos murinos, evaluando asimismo la seguridad de dichas bacterias. Estos modelos se llevaron a cabo como aproximaciones a situaciones clínicas de inmunocompromiso y de enfermedad inflamatoria intestinal. Para la elaboración de este proyecto se aislaron e identificaron cepas de Lactobacillus casei y Lactobacillus plantarum aisladas de productos comerciales derivados de la leche. Se administró mediante cánula intragástrica una dosis diaria de 100 l de una suspensión en leche descremada con 109 UFC del probiótico, durante distintos periodos de tiempo, a ratones hembra BALB/c de 8-10 semanas de edad. En todos los ensayos realizados se tomaron muestras de heces y de biopsias del tracto gastrointestinal completo. Los ensayos iniciales tuvieron como objeto el establecimiento de la dosis más efectiva de probiótico, y las condiciones apropiadas para la aplicación de las distintas técnicas de análisis de la microbiota intestinal y el efecto de la administración de microorganismos probióticos así como las distintas situaciones clínicas ensayadas sobre las bacterias endógenas. Para determinar los cambios en la microbiota gastrointestinal de ratones por los distintos tratamientos, se realizó un enfoque polifásico para el estudio de la evolución de los principales grupos de microorganismos fecales e intestinales, mediante técnicas clásicas de coprocultivo y técnicas de biología molecular basadas en el estudio del gen rRNA 16S (DGGE, T-RFLP, construcción de librerías de clones y la cuantificación por PCR a tiempo real de determinadas poblaciones bacterianas). El aislamiento del DNA y las reacciones de PCR se realizaron bajo las mismas condiciones para todas las muestras. Se utilizaron los oligonucleótidos universales para la región V6-V8 del gen rRNA 16S así como cebadores específicos de lactobacilos para la obtención de productos de PCR para los análisis de DGGE. Además, se evaluó la influencia de la respuesta inmune y/o el tratamiento probiótico sobre el grupo de bacterias filamentosas segmentadas, presentes en el intestino de ratones jóvenes hasta el desarrollo del sistema inmune. La posible diseminación de las bacterias probióticas testad 8 as por v 814 ía hemática se investigó mediante técnicas moleculares para la evaluación de la seguridad de las cepas, con el uso de oligonucleótidos específicos sobre biopsias de ganglios linfáticos mesentéricos. Los datos obtenidos de las distintas técnicas aplicadas se integraron mediante análisis estadístico de multivariantes. Los resultados obtenidos del análisis de las distintas muestras mediante DGGE y T-RFLP mostraron una gran diversidad en los perfiles, sin efecto importante de la administración de probióticos sobre la composición de la microbiota intestinal. Se observaron algunos efectos sobre los perfiles específicos de lactobacilos. Se detectó la cepa probiótica de manera irregular en las muestras fecales y de biopsias, posiblemente debido niveles reducidos del probiótico en comparación con el resto de la comunidad endógena de lactobacilos. En los modelos analizados de inmunosupresión no se observó efecto sobre el sistema inmune determinado mediante recuento de leucocitos periféricos por la administración de la cepa probiótica, si bien tampoco se vio agravado por la misma. Se obtuvo un efecto claro del tratamiento probiótico en la eliminación de bacterias filamentosas, bacterias asociadas con el desarrollo del sistema inmune. En el modelo de enfermedad inflamatoria intestinal se observó un aumento de la respuesta inflamatoria por la administración conjunta del microorganismo probiótico.

Autor: Navajas Pérez Rafael.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Departamento de Genética, Facultad de Ciencias, Universidad de Granada.

Resumen: En esta Tesis Doctoral hemos analizado en profundidad el género Rumex (Polygonaceae) en relación con los sistemas reproductivos que presenta, así como en relación con sus sistemas de cromosomas sexuales. El género Rumex se divide actualmente en cuatro subgéneros que incluyen especies hermafroditas, polígamas, ginodioicas, monoicas y dioicas. Asimismo, las especies dioicas presentan sistemas de cromosomas sexuales en distintos estadios evolutivos, simples (XX/XY) y complejos (XX/XY1Y2). De esta clasificación, se deducía que la aparición de la dioecia y de los distintos sistemas de determinación sexual han aparecido varias veces a lo largo de la evolución del género Rumex. En esta Memoria hemos comparado las secuencias ribosómicas ITS, así como el intrón del gen trnL y el espaciador intergénico entre éste y el gen trnF procedentes de 31 especies de Rumex, y hemos utilizado estas secuencias como marcadores para inferir las relaciones filogenéticas entre ellas. Nuestra clasificación apoya una nueva sistemáti

Autor: PARANTU SHAH.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: EUROPEAN MOLECULAR BIOLOGY LABORATORY HEIDELBERG.

Autor: SOLÉ SERRA CARME.
Año: 2005.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: FACULTAT DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA.

Resumen: El presente trabajo se basa en el estudio de dos proteínas identificadas como antagonistas de la muerte inducida por el receptor de muerte Fas, FAIM y FLIP, en el sistema nervioso. Para ello, y pese a que comparten el fenotipo de promoción del crecimiento neurítico, existen diferencias mecanísticas que detallaremos de forma separada. Inicialmente, caracterizamos la proteina FAIM (Fas Apoptosis Inhibitory Molecule), de la cual existen dos únicas referencias en la bibliografía. Hemos demostrado que la expresión forzada de FAIM no protege las neuronas de la retirada de suporte trófico, pero ejerce una clara acción promotora del crecimiento neurítico en los diversos sistemas neuronales estudiados. Por una parte, la expresión forzada de FAIM incrementa la longitud y el grado de arborización de las neuritas inducidos por el factor de crecimiento nervioso (NGF), tanto en línea celular PC12 como en cultivos primarios de neuronas del ganglio cervical superior (SCG). Por otra parte, si se reducen los niveles endógenos de FAIM mediante la técnica del ARN de interferencia, se disminuye el crecimiento neurítico en dichas células. La expresión forzada de FAIM promueve la activación de la vía NF-?B, mientas que el bloqueo de esta vía, mediante la transacción de una forma mutada de l?B? No degradable o bien usando neuronas corticales de ratones nulos que carecen de la subunidad p65 de NF-?B, previene el crecimiento neurítico promovido por NGF. El efecto estimulador del crecimiento neurítico también puede ser bloqueado por la inhibición de la vía de Ras/ERK. Finalmente, demostramos que FAIM interacciona con los dos receptores de la neurotrofina NGF, p75NTR y TrkA, de una forma dependiente de ligando. Estos resultados revelan una nueva función de FAIM como promotor de crecimiento neurítico mediante un mecanismo dependiente de NF-?B. En el caso de FLIP, se ha descrito su función como inhibidor endógeno de la apoptosis mediada por Fas, pero, también se ha visto implicado en promoción de proliferación. El trabajo describe por primera vez una función, hasta ahora desconocida, de FLIP en el sistema nervioso. FLIP se expresa en motoneuronas, en neuronas SCGs y células PC12, aunque su expresión forzada, únicamente protege de la muerte celular inducida por la retirada de factores tróficos en motoneuronas. De todos modos, dicha expresión aumenta de forma considerable el crecimiento neurítico en los tres modelos, después del estímulo neurotrófico apropiado. De forma interesante, y sin excepción, la reducción de los niveles endógenos de FLIP inhibe la neuritrogénesis en estos modelos. Las vías intracelulares reguladas por FLIP implican tanto ERK como NF-B. La expresión forzada de FLIP promueve un incremento en su actividad, mientras que la reducción de su expresión provoca una diminución de ésta, después de un estímulo de NGF en células PC12. Finalmente, demostramos que FLIP interacciona con el receptor del NGF, TrkA de una manera dependiente de estímulo. Estos resultados revelan una nueva función para FLIP, la neuritogénesis, a través de un mecanismo que implica la activación de las vías Ras/ERK yNF-B, y que no está relacionada con su clásica función antiapoptótica.

Autor: PABLO LLAVALL YOLANDA DE.
Año: 2005.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: TrkA se descubrió como un oncogén producto de la fusión de su dominio tirosina kinasa (TK) con la tropomiosina. Posteriormente, aumentó su interés tras descubrirse que la proteína nativa constituía el receptor del factor de crecimiento nervioso (NGF). Se conocen bien los acontecimientos que ocurren tras la unión del ligando al receptor y que dan lugar a la activación de las vías de señalización de las MAPK y Pl 3-K/Akt. Se sabe que, in vivo, la internalización del receptor y su transporte retrógrado también juegan un papel importante para el efecto a largo plazo del NGF y que es una característica distintiva de otros receptores de factores de crecimiento. La activación del receptor también conlleva un aumento transitorio de Ca2+ intracelular. Por ello nos planteamos estudiar la relación entre la activación de TrkA y calmodulina (CaM), como sensor de los niveles de Ca2+ intracelulares. En primer lugar observamos una interacción directa y Ca2+ dependiente entre CaM y la mitad c-terminal del dominio intracelular de TrkA. La primera parte del trabajo se centra en caracterizar esta interacción. Para ver el efecto de la unión sobre Trk, utilizamos inhibidores de CaM. Éstos no impiden la fosforilación de TrkA inducida por NGF, pero sí conlleva la proteolisis del receptor dando lugar a un fragmento con actividad tirosina kinasa constitutiva. Dada la ubicuidad de CaM y su importancia en procesos vitales para la célula, el segundo objetivo consistió en buscar el sitio de unión a CaM de TrkA, para así poder obtener una construcción de Trk en que se perdiera la unión a CaM. Basándonos en diversas evidencias, nos centramos en la caracterización de una región que contenía una Tyr fosforilable /Y701) y que además forma parte de un motivo de internalización. La última parte del trabajo se centra en describir las características de dicha Tyr y su función, que más allá de la relación con CaM, puede constituir una fosforilación inhibitoria para la actividad de Trk y un lugar de regulación negativa de su internalización.

Autor: SEGURA GINARD MIGUEL FRANCISCO.
Año: 2005.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD DE LLEIDA.

Resumen: La apoptosis es un mecanismo fisiológico que contribuye a regular el número de células de un organismo de tal forma que aquéllas que realizan funciones transitorias, que están lesionadas, o en exceso, serán eliminadas. Éste es un proceso estrictamente regulado durante el desarrollo embrionario e íntimamente ligado con el inicio o progresión de determinadas patologías. Así pues, el exceso de apoptosis contribuye al desarrollo de enfermedades neurodegenerativas mientras que su defecto sería el origen de neoplasias. El principal regulador del proceso apoptótico es la activación de las caspasas, cisteína-proteasas con especificidad para residuos de aspartato. Los principales mecanismos que activan las caspasas son la salida de citocromo C de la mitocondria por una alteración de la función mitocondrial, y la activación de proteínas de membrana denominadas receptores de muerte (DRs, Death Receptors). Estos últimos han sido ampliamente caracterizados en el sistema inmune, mientras que en tejidos como el sistema nervioso sus funciones están en las fases iniciales de caracterización. El objetivo del presente trabajo es contribuir a esclarecer los mecanismos moleculares que regulan la actividad de estos receptores en el sistema nervioso, a través de la caracterización funcional de dos nuevas proteínas, FAIM y Lifeguard, propuestas inicialmente como antagonistas del receptor de muerte CD95/Fas/APO-1. Para ello se han usado las líneas celulares PC12 y SH-SY5Y, ampliamente utilizadas en modelos de diferenciación y de muerte CD95/Fas/APO-1. Para ello se han usado las líneas celulares PC12 y SH-SY5Y, ampliamente utilizadas en modelos de diferenciación y muerte celular, junto con cultivos primarios de neuronas corticales y neuronas granulares de cerebelo. En la primera parte de este trabajo se describe la clonación del ortólogo de ratón de Lifeguard, y su caracterización como antagonista funcional de CD95 en el sistema nervioso. Hemos demostrado que su sobreexpresión es capaz de bloquear la muerte inducida por CD95 en el modelo del neuroblastoma humano SH-SY5Y así como en neuronas corticales murinas. También hemos comprobado que la disminución de sus niveles endógenos sensibiliza a las neuronas granulares y las corticales de ratón. Además, se ha constatado que su mecanismo molecular de acción depende de su localización exclusiva en microdominios de membrana llamados Lipid Rafts, donde puede interaccionar con CD95 e inhibir la activación de caspasas iniciadoras. De los resultados obtenidos en la segunda parte del trabajo se deduce que los niveles de la isoforma larga del antagonista FAIM, FAIML, específica del sistema nervioso, aumentan durante el desarrollo embrionario. Su máxima expresión es en los períodos del desarrollo en los que se modelan y ajustan las estructuras neurales que darán lugar al cerebro adulto. Funcionalmente, hemos demostrado que no participa en procesos de neuritogénesis (a diferencia de la isoforma corta de FAIM, FAIMS) y que no bloquea la muerte apoptótica inducida a través de estímulos mitocondriales. Sin embargo, FAIML es capaz de antagonizar la apoptosis inducida a través de los DRs CD95 y TNFR1. Los ensayos con RNA de interferencia nos ha permitido elucidar que FAIML es, al menos en parte, responsable del bloqueo de la actividad de caspasas iniciadoras activadas por DRs. Por tanto, este trabajo aporta claves sobre las bases moleculares que regulan la actividad de los DRs en el sistema nervioso y que pueden constituir una base para el desarrollo de estrategias terapéuticas en neuropatologías en las que los DRs participan de forma relevante.

Autor: VILELLA MITJANA FELIPE.
Año: 2005.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA, DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MÉDICAS BÁSICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LLEIDA.

Resumen: La vía de integridad celular o vía Pkc1-MAP quinasa de Saccharomyces cerevisiae posee un papel central en los mecanismos de respuesta celular frente a diferentes estreses ambientales, como son: el estrés térmico, el estrés hipoosmótico o cualquier estrés que afecte a la pared celular. En esta tesis doctoral se demuestra que esta vía de transducción de señal también está implicada en la supervivencia y adaptación frente a los efectos del estrés oxidativo. Hemos observado que las proteínas Pkc1 y Rom2 son esenciales para la supervivencia celular frente al estrés oxidativo mediado por dos agentes (peróxido de hidrógeno y diamida). Además, el citoesqueleto de actina es una de las dianas de acción del peróxido de hidrógeno y de la diamida, ambos agentes median la desvalorización del citoesqueleto de actina con el consecuente efecto en morfogénesis y viabilidad. Este fenómeno ocurre de manera independiente de las proteínas dela vía de integridad celular. Sin embargo, para que el citoesqueleto de actina repolarice en respuesta a agentes oxidantes se requieren las proteínas Mtl1, Rom2 y Pkc1, todas ellas elementos constituyentes de la vía de integridad celular. La diamida induce la formación de puentes disulfuro en las proteínas de la superficie celular, lo que provoca cambios estructurales en la misma, que en última instancia, causan la activación de la vía de integridad celular. Nuestros estudios han permitido asignar una función al receptor de pared celular Mtl1, como sensor de estrés oxidativo en superficie, y parte integrante de la vía Pkc1-MAP quinasa. El peróxido de hidrógeno afecta esencialmente a una función celular relacionada con los últimos estadios de secreción y con la morfogénesis cellar. Además observamos dos funciones esenciales de la proteína Pkc1 en respuesta al tratamiento con peróxido de hidrógeno: 1,- Pkc regula la biogénesis de ribosomas en respuesta a los problemas en secreción provocado por el agente oxidante. Además, la inhibición de la transcripción de genes ribosomales se lleva acabo dependiendo de un citoesqueleto en polimerización activa. 2,- Pkc induce la restauración de los cables de actina y con ello de la morfogénesis y polaridad celular a través de la activación de la profilina Pfy1.

Autor: RIBAS FORTUNY JUDIT.
Año: 2005.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA.

Resumen: La olomoucina y la roscovitina son dos inhibidores de las cinasas dependientes de ciclinas (CDKs) cuyo mecanismo de acción es competir con el ATP por la unión a la enzima. Presentan una alta selectividad in vitro ante la CDK1, 2,5,7,9 y las ERKs. Este perfil inhibidor les confiere amplias perspectivas en la terapia antitumoral. En este trabajo, hemos mostrado que la línea de las SH-SY5Y, derivada de neuroblastoma, y la de las HL-60, derivada de una leucemia promielocítica, morían apoptoticamente en respuesta a amos fármacos. Una caracterización más amplia del proceso apoptótico, evidenció que la expresión forzada de Bcl-2 o de Bcl-XL no conferían resistencia ante ninguna de nuestras drogas. En cambio, si se hacían parcialmente más resistentes cuando era tratadas con un inhibidor general de las caspasas (z-VAD-fmk). En consecuencia, neutra hipótesis fue que nos hallábamos ante una apoptosis por vía extrínseca iniciada por la caspasa 8 (CASP8) y/o la caspasa 10 (CASP10). Curiosamente, dichas caspasas no se expresan en las SH-SY5Y debido a un proceso de metilación génica, y pudimos ver que el tratamiento tampoco inducía su reexpresión. En conclusión, descartamos que las SH-SY5Y iniciasen una vía extrínseca canónica en respuesta a nuestras drogas. Por otro lado, la inhibición de la síntesis proteica en nuestro modelo frenaba la apoptosis. Es más, el z-VAD-fmk junto con, por ejemplo, la cicloheximida, presentaban un sinergismo en el rescate. Esto sugería la coexistencia en nuestro cultivo de distintas subpoblaciones capaces de iniciar diferentes vías apoptóticas. El tratamiento con PD98059 o UO126, dos inhibidores de la vía de Erk1/2, se mostró inocuo a la hora de inducir muerte, por lo cual descartamos que la inhibición de Erk1/2 fuera la responsable de la apoptosis. Sorprendentemente, el estudio del estado de fosforilación de Erk1/2, nos permitió constatar que éstas se activaban en respuesta a la olomoucina y la roscovitina. Más sorprendente aún, resultó el hecho que la iso-olomoucina, un isómero inactivo de la olomoucina, causara los mismos efectos sobre Erk1/2. Esto nos permitió afirmar que no existía correlación entre la fosforilación de Erk1/2 y la inhibición de las CDKs. En base principalmente a los resultados de la iso-olomoucina, pudimos afirmar que la fosforilación de las ERKs y su subsiguiente activación, no se correlacionaban con la apoptosis, proliferación y diferenciación celular. Finalmente, evidenciamos que las SH-SY5Y diferenciadas se volvían resistentes a la olomoucina y a la roscovitina, hecho a favor de que la inhibición de las CDKs fuera el evento iniciador dela cascada apoptótica. Alternativamente, la olomoucina y la roscovitina están siendo cada vez más estudiadas en el contexto de la terapia combinatoria frente al cáncer. En mis experimentos, utilicé también la R-roscovitina, uno de los dos estereoisómeros de la roscovitina. En su combinación con el docetaxel (DTX), no observamos sinergismo. El caso contrario sucedió cuando fue administrada junto a la nutlina-3, un nuevo y prometedor inductor de p53. Vimos como la R-roscovitina sensiblizaba las SH-SY%Y a la apoptosis inducida por la nutlina-3.

Autor: MOLINA NAVARRO MARIA MICAELA.
Año: 2005.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: UNIVERSITAT DE LLEIDA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE LLEIDA.

Resumen: Las glutaredoxinas son tiol oxidoreductasas que regulan el estado redox de los grupos sulfidrilo de las proteínas. En la levadura Saccharomyces cerevisiae Grx1 y Grx2 son glutaredoxinas ditiólicas localizadas en el citosol, mientras que Grx3, Grx4 y Grx5 son monotiólicas. Grx5 se localiza en la matriz mitocondrial y está involucrada en la síntesis de centros hierro/azufre (Fe/S). En su ausencia, enzimas con centros Fe/S como la aconitasa son inactivas, no hay crecimiento en condiciones respiratorias, hay acumulación de hierro intracelular y se produce una oxidación constitutiva de proteínas. Mientras que Grx5 contiene un dominioglutaredoxina simple, Grx3 y Grx4 poseen un dominio tipo tioredoxina fusionado al dominio glutaredoxina. Estas dos últimas proteínas se localizan en el núcleo, siendo el dominio tioredoxina necesario para tal localización. Se ha utilizado el mutante nulo grx5 como modelo de células que manifiestan un estréx oxidativo endógeno constitutivo (opuesto a las situaciones de estrés provocadas por un estímulo externo) para estudiar el transcriptoma celular en dichas condiciones. Se ha observado que: 1,- Se inducen principalmente genes del regulón Aft1 involucradas en la captación y utilización de hierro. 2,- Se reprime la expresión de genes implicados en el metabolismo respiratorio dependientes del regulador Hap4. Este último efecto es suprimido por la sobreexpresión de HAP4, de modo que la inhibición del metabolismo respiratorio durante condiciones moderadamente oxidantes podría constituir una respuesta protectora por parte de las células de la levadura. Utilizando una construcción capaz de internalizar proteínas en la mitocondria gracias a la señal de localización mitocondrial de Grx5, se ha demostrado que las glutaredoxinas ditiólicas de S.cerevisiae no son capaces de rescatar los defectos de un mutante grx5, en tanto que las monotiólicas Grx3 y Grx4 sólo hacen cuando son dirigidas a la matriz mitocondrial. Ello demuestra que las glutaredoxinas ditiólicas son funcionalmente divergentes de las monotiólicas, pero que estas últimas pueden intercambiar entre ellas sus actividades biológicas cuando se sobrepasan las barreras compartimentales. La conservación funcional entre glutaredoxinas monotiólicas se extiende a lo largo de toda la escala evolutiva, dado que los defectos del mutante grx5 de S.cerevisiae son también suprimidos por otras proteínas de la misma familia como son Grx4 de Escherichia coli, GrxC de Synechocystis sp., y las respectivas proteínas homólogas de pollo y de células humanas.

Autor: AMO DE PAZ LUISA.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS (UCM).

Resumen: El riesgo de depredación está considerado como una de las mayores fuerzas selectivas en la evolución numerosas características morfológicas y comportamentales de los animales. Para hacer frente a un incremento en el riesgo de depredación, los animales muestran cambios comportamentales que se conocen como estrategias antidepredatorias. Una de las primeras estrategias preventivas de las presas para hacer frente al riesgo de depredación s la selección de hábitats seguros. Sin embargo, la actividad humana está ocasionando cambios drásticos en el medio a una velocidad vertiginosa en relación al tiempo evolutivo, que pueden afectar al riesgo de depredación percibido por las presas y a las estrategias antidepredatorias. Dado que las estrategias antidepredatorias como las adecuaciones de escape o el uso de refugios con costosas, en términos de pérdida de tiempo para realizar otras actividades y en términos de pérdida de condición corporal, un cambio en la estructura del medio podría afectar al mantenimiento de las poblaciones de reptiles. Así mismo, ya que las lagartijas responden a la presencia de personas como a la de depredadores, un incremento en el ecoturismo de una zona podría también afectar al mantenimiento de estas poblaciones. El objetivo principal de esta tesis doctoral es identificar los factores antropogénicos que puedan estar afectando al mantenimiento de las poblaciones de lagartijas de la Sierra de Guadarrama. Los resultados muestran que la modificación del medio natural supone una pérdida de hábitat óptimo para algunas especies, por lo que cambios drásticos del hábitat, como los cambios drásticos del hábitat, como las repoblaciones con pinos en lugares originalmente ocupados por robledales, conllevan la desaparición de unas especies y la colonización de otras. Los cambios en la estructura de la vegetación también implican un incremento en el riesgo de depredación percibido por las lagartijas, ya que, por ejemplo, pueden ser más fácilmente detectables en áreas degradadas. Las lagartijas responden a este incremento en el riesgo con estrategias antidepredatorias preventivas como la selección de microhábitats seguros, y son capaces de modificar sus patrones de locomoción para minimizar el riesgo al desplazarse por zonas inseguras. Además, ante el ataque de un depredador, presentan estrategias de escape acordes al nivel de riesgo. El ecoturismo supone un incremento en el riesgo de depredación para las lagartijas. Ante el ataque simulado de un depredador, las lagartijas responden igual en zonas con alto o bajo nivel de ecoturismo. Por ello, en zonas con alto nivel de ecoturismo, las lagartijas deben realizar frecuentemente estrategias antidepredatorias. Los comportamientos antidepredatorios son energéticamente costosos, por lo que un incremento en la frecuencia de estos comportamientos debido al incremento del riesgo en medios degradados o con una alta afluencia de turistas, con lleva una pérdida de condición corporal. La pérdida de condición corporal parece afectar en algunos casos a la capacidad de las lagartijas para desarrollar una respuesta inmune adecuada para la defensa frente a parásitos, lo que puede incrementar los efectos negativos de los parásitos y afectar a la eficacia biológica de los individuos.

Autor: ESTEBAN FRANCO ALEXANDRE.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La presente Memoria de Tesis Doctoral, presentada en forma de compendio de publicaciones, recoge el estudio fisiológico y molecular realizado con especies del género Aspergillus sección Nigiri productoras de ocratoxina A (OTA). Esta micotoxina está recibiendo una especial atención en todo el mundo debido a su marcado carácter nefrotóxico. Además, es una sustancia carcinógena, teratógena e inmunotóxica y desde el año 2002, la UE ha comenzado a establecer niveles máximos de esta micotoxina en algunos alimentos. Estudios muy recientes han puesto claramente de manifiesto la implicación de algunas especies del género Aspergillus de la sección Nigri (A.carbonarius y las incluidas en el "agregado A.niger") en la presencia de OTA en alimentos como la uva, las pasas y el vino, entre otros. No obstante, no se conocen hasta el momento las condiciones ambientales que favorecen la producción de la micotoxina por estas especies. En los modelos fisiológicos utilizados, se han incluido cepas de A.carbonarius y del agregado A.niger, seleccionadas en base a su diferente origen y capacidad ocratoxígena. Se ha estudiado el efecto del sustrato (medios CYA y YES), la temperatura (5-45ºC), la actividad de agua (aw) (0,78-0,99) y el pH (2-10) en el crecimiento y la producción de OTA. Asimismo, se ha analizado la relación filogenética de las cepas estudiadas mediante diferentes técnicas de biología molecular (RFLP, RAPD, secuenciación, ERIC-PCR, AFLP y microsatélites). Los resultados obtenidos han permitido determinar las condiciones óptimas para la producción de OTA en las cepas del agregado A.niger (medio YES a 20-25ºC en el intervalo 0,96-0,99 aw y pH 5-10) y en las de a.carbonarius (medio CYA a 15-20ºC en el intervalo 0,98-0,99 aw y pH 5-7). En relación a la caracterización molecular de las cepas estudiadas, las técnicas de RAPD y secuenciación confirman la separación del agregado A.niger en dos grupos que se corresponden con los patrones de RFLP (N y T) establecidos previamente. En el caso de A.carbonarius estas técnicas han permitido la diferenciación molecular de una de las cepas estudiadas. Esta cepa pertenecería a la nueva especie propuesta dentro de la sección Nigri, denominada "A.ibericus". Las técnicas ERIC-PCR, AFLP y microsatélites han resultado útiles para la caracterización molecular de las especies estudiadas. Los resultados más significativos se han obtenidos mediante AFLP y el análisis de microsatélites, permitiendo ambos la diferenciación de las cepas del agregado A.niger en dos grupos que se corresponden con los patrones de RFLP N y T. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto la capacidad de las cepas del agregado A. Niger y A.carbonarisu para crecer y elaborar OTA en amplios márgenes de temperatura, pH y actividad de agua. Esta capacidad permite explicar el papel que juegan estas especies ocratoxígenas en la presencia de estamicotoxina en los alimentos y especialmente en aquellos donde constituyen la micobiota predominante.

Autor: SERRANO CÁNOVAS RAQUEL.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Resumen: En este trabajo hemos abordado el estudio de la respuesta a estrés alcalino de s.cerevisiae utilizando como herramientas principales dos técnicas de análisis a gran escala. Por un lado, hemos realizado un análisis mediante microarrays de DAN de la respuesta transcripcional a estrés alcalino y, por otro, hemos utilizado una biblioteca de más de 4800 mutantes para identificar genes esenciales para la supervivencia a pH alcalino. Todo ello nos ha permitido identificar nuevos aspectos en la respuesta y en la adaptación de dicha levadura a estrés alcalino. En primer lugar, partiendo de la identificación de ENA1 t PHO89 como genes regulados por pH alcalino cuya expresión es dependiente de calcineurina hemos establecido una relación entre la respuesta a pH alcalino y la vía de señalización de calcio/calcineurina. Demostramos que la alcaliniación extracelular estimula el transporte de calcio desde el exterior dando lugar a un incremento en los niveles citoplasmáticos de este catión. Esta señal es la que desencadena la activación de la fosfatas calcineurina, cuya acción principal, aunque no la única, es activar la expresión de una serie de genes implicados en la resistencia a ph alcalino. Por otro lado, los resultados de microarrays indican que el estrés alcalino induce la transcripción de varios de los genes implicados en la obtención de fosfato y en el metabolismo de hierro y cobre. A su vez, el análisis de mutantes revela que tanto la integridad de elementos del regulón PHO como la del transporte de metales es esencial para la supervivencia en medio alcalino. Todo ello sugiere que la alcalinización medioambiental genera una situación de escasez de estos iones. Asimismo hemos demostrado que la alcalinización extracelular provoca un incremento intracelular de ROS (o especies reactivas de oxígeno), lo que genera una situación de estrés oxidativo capaz de activar un conjunto de genes a través de los mecanismos específicos de respuesta a estrés oxidativo. Por último, hemos descubierto una implicación de la vía de la integridad de la pared celular (CWI) en la respuesta a estrés alcalino. Hemos descrito que la ausencia de varios elementos implicados en dicha vía, como el sensor Wsc1 o las quinasas Bck1 y Slt2, da lugar a un fenotipo de sensibilidad a pH alcalino. Además, confirmamos que este estrés provoca la activación de Slt2, la MAPK de la vía CWI, y que el sensor dela vía más relevante en dicha activación es Wsc1. Por otro lado, el estudio de la respuesta transcripcional a pH alcalino de un mutante slt2 sugiere que esta quinasa es responsable de una parte de la respuesta transcripcional y que, probablemente, la alcalinizaicón extracelular tiene efectos sobre la estructura de glucanos de la pared celular. La conclusión final que se extrae de todos nuestros resultados es que la alcalinización medioambiental da lugar a una respuesta adaptativa que no es el resultado de la activación de una única vía de señalización específica para ph alcalino, sino que es el protocolo de activar diversas vías ecaminadas a paliar las variadas alteraciones producidas por el estrés alcalino.

Autor: AULÍ CASACUBERTA MARIONA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El modelo de inflamación intestinal inducido con el parásito Trichinella spiralis es un modelo extensamente utilizado para estudiar alteraciones intestinales y otras que ocurren durante ésta infección. Por otro lado, la utilización de éste parásito para inducir inflamación en el colón ha sido muy poco investigada. OBJETIVOS El objetivo de éste estudio ha sido analizar hasta que punto la colitis inducida por T.spiralis en rata comparte semejanzas con la colitis ulcerosa y puede ser útil como modelo de ésta enfermedad humana. MATERIAL Y MÉTODOS Los métodos utilizados en éste trabajo son el baño de órganos para el estudio de la actividad mecánica, los micro electrodos intracelulares para el estudio de la actividad eléctrica y técnicas inmunohistoquímicas y/o de inmunofluorescéncia para el marcaje de neurotransmisores y de algunos tipos celulares. RESULTADOS Las ratas infectadas presentan 2 periodos de disminución de ingesta y peso. El primero ocurre entre el día 1 y 4 post infección (PI) y el segundo ocurre entre los días 11 y 15 Pl, a partir del día 15 las ratas se recuperan sin alcanzar los valores observados en los animales control. Las ratas infectadas presentan además leucocitosis con neutrofilia y eosinofilia desde el día 6 al 21 Pl. La consistencia de las heces disminuye y la presencia de mucus aumenta del día 2 al 20 Pl. Los hallazgos histológicos de éste modelo consisten en: atrofia epitelial, ederma y hiperplasia de la mucosa, edema de la submucosa, presencia de larvas de T.spiralis y infiltrado inflamatorio de tipo agudo a nivel de mucosa y submucosa a día 2Pl: micro -ulceras y larvas en la mucosa y edema sumbucoso severo con aumento del infiltrado inflamatorio a día 6 Pl; a día 14 Pl se observa regeneración de la mucosa y presencia de algunas larvas; a día 30 Pl no se observa ningún tipo de lesión inflamatoria. El infiltrado inflamatorio es mayoritariamente neutrofílico del día 2 al 6 Pl mientras que los macrófagos son más abundantes alrededor del día 14 Pl. El número de células inmunoreactivas a OX-6, que reconoce el antífeno del complejo mayor de histocompatibilidad de tipo II (MHCII), se encuentra dramáticamente incrementado en el plexo mientérico y submucoso de las ratas infectadas (6-14 Pl). Además, el número de células inmunorectivas al ED1, que se expresa en monocitos y macrófagos de rata, se encuentra muy incrementado en ambos plexos enféricos; en cambio, el número de células inmunoreactivas al ED2, que se expresa en una subpoblación diferenciada de macrófagos residentes intestinales, solo se encuentra incrementado en el plexo submucoso de los animales infectados. La inflamación colónica inducida con T.spiralis se caracteriza también por un incremento en la expresión de la iNOS en el epitelio y en el infiltrado inflamatorio presente en la mucosa y submucosa, y se asocia a la disminución de la motilidad colónica que se observa en las ratas infectadas. Las tiras circulares del colon de estas ratas presentan además una respuesta disminuida a la acetilcolina y/o al cloruro potásico; por otro lado, la depleción del calcio intracelular disminuye más marcadamente la contracción inducida por acetilcolina en las ratas infectadas que no en las control. Este hallazgo sugiere que la utilización del calcio extracelular puede estar alterada durante la inflamación colónica por T.spiralis. El potencial de membrana de las células musculares lisas del colon inflamado se encuentra más hiperpolarizado que en animales control, este hecho también podría participar en la hipomotilidad colónica observada. Los potenciales de unión de tipo inhibitorio (IJPs) tienen una duración disminuida en el colon inflamado, hecho que sugiere una disminución en la liberación es óxido nítrico desde las montoneuronas inhibitorias del plexo mientérico. La disminución en el número de neuronas inmunoreactivas a la nNOS observada en el plexo mientérico de ratas infectadas, puede explicar la disminución observada en la duración de los IJPs. Durante la colitis inducida por T.spiralis también hemos encontrado una disminución en la densidad e intensidad de las fibras inmunoreactivas al CGRP (calcitonine gene realted pepetide), hecho que sugiere una 8 mayor l 553 iberación de éste péptido durante el proceso inflamatorio. CONCLUSIONES El modelo de colitis inducido por la administración intra rectal de larvas de T.spiralis comparte semejanzas con la colitis ulcerosa, como son entre otras: los episodios de pérdida de peso, disminución en la consistencia de las heces, la hipomotilidad colónica y hallazgos histológicos parecidos. Los macrófagos ED1 positivos que expresan MHC II podrían mediar los cambios neurales y alteraciones que se observan en éste modelo; por otro lado, parece ser que el incremento en la expresión de la iNOS es el responsable de la hipomotilitdad colónica observada durante el proceso inflamatorio inducido con este parásito.

Autor: PÉREZ MACHADO GISSELLE.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Resumen: La carcinogénesis es un complejo proceso con base multigénico-ambiental; en el cual intervienen genes de control del ciclo celular, del metabolismo y de reparación del DAN, entre otros de funciones propias del órgano afectado. Los polimorfismos de estos genes, ya sea de manera individual en combinación, pueden alterar la susceptiblidad a la carcinogénesis. El cáncer de tiroides es la neoplasia maligna más común del sistema endocrino y contribuye en más del 50% a las muestras por cánceres de este origen. Sin embargo, no está esclarecido el mecanismo molecular que subyace en su malignización, ni cuál es la influencia de los distintos polimorfismos genéticos sobre su riesgo. Por ello se estudiaron 14 SNPs que afectan a genes del mecanismo de reparación por escisión de bases (XRCC1 y OGG1), del mecanismo de reparación por recombinación homóloga (XRCC2 y XRCC3), genes propios del tiroides (TG y TSHR) y genes de control del ciclo celular (PTPRJ). Para el genotipado se utilizaron técnicas de PCR RFLP, PCR en tiempo real con sondas FRET y PCR alelo específica con cebadores LNA. Se hizo el estudio de la asociación alélica y el análisis de múltiples loci, además se evaluaron las interacciones entre los polimorfismos de los genes en estudio y la modulación del riesgo por efecto de la interacción genotipo-ambiente. Los mejores marcadores de susceptiblidad resultaron ser los SNPs del gen TG, sus alelos variantes analizados solos y en combinación haplotípica aumentaron la susceptibilidad al riesgo. El SNP ARg28His de XRCC1 se asoció con un incremento del riesgo de cáncer de tiroides, sobre todo con su variante papilar; por su parte el SNP del codón 194 de XRCC1 disminuyó la susceptiblidad para este carcinoma. Los haplotipos 399Gln-280His-194Arg y 399ARg-280His-194Arg incrementaron el riesgo e indicaron que los alelos 280His y 194ARg están en desequilibrio de ligamiento. Asimismo, en SNP de región intrónica IVS5-14 de XRCC3 y el del codón 188 de XRCC2 tuvieron efecto protector. El cambio de aminoácido que representa el polimorfismo Thr241Met de XRCC3 es irrelevante sobre el riesgo al cáncer de tiroides, pero el alleo Met en combinación haplotípica con el alelo A-IVS5-14 incremento el riesgo, posiblemente por estar en desequilibrio con un SNP funcional y de susceptibilidad al cáncer de tiroides. Los resultados en relación a PTPRJ, sin ser significativos, sugieren que la sustitución en el codón 872 de PTPRJ pudiera tener un efecto protector frente al desarrollo del cáncer de tiroides. La combinación de algunos genotipos de XRCC1 y de XRCC3, aumentan la susceptibilidad al cáncer y revelan la interacción entre enzimas de dos mecanismos reparadores. Las interacciones de los genotipos de las GST con las enzimas de reparación no tuvieron efecto significativo sobre el riesgo a desarrollar cáncer de tiroides, en tanto la susceptibilidad al cáncer de tiroides se incrementa por el genotipo NAT2 (en concreto por NAT2*5 +/+ y NAT2*6) en individuos donde los mecanismos reparadores están alterados por los plimorfismos en los codones 280 y 399* de XRCC1, y IVS5-14 de XRCC3. El sexo femenino hace más susceptible a los portadores de los genotipos de riesgo y, por el contrario, el hábito de consumir alcohol se relacionó con un efecto protector. No se detectaron interacciones significativas de los diversos genotipos con el hábito de fumar y con la edad.

Autor: FERNÁNDEZ CADENAS ISRAEL.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: HOSPITAL VALL D'HEBRON.
Centro de realización: HOSPITAL VALL D'HEBRON.

Resumen: El ictus isquémico es el tipo de ictus más frecuente. El único tratamiento aprobado para su uso en esta patología es el tratamiento fibrinolítico mediante el fármaco t-PA. El t-PA activa al plasminógeno endógeno y este en su forma activa plasmina activa la cascada fibrinolítica que degrada el trombo causante de la oclusión arterial. A pesar del enrome beneficio de este tratamiento, entre el 30 y el 40% de los pacientes no se produce recanalización arterial y de un 5 a un 10% de los pacientes sufren transformaciones hemorrágicas sintomáticas con altos índices de mortalidad. Pretendemos valorar si la presencia de determinados polimorfismos genéticos en genes relacionados con inflamación e inhibición de la fibrinolisis podrían predecir los índices de recanalización arterial y la aparición de estas transformaciones hemorrágicas. Determinamos que el background genético propio de cada individuo está asociado a los índices de recanalización arterial y le predispone a sufrir la aparición de transformaciones hemorrágicas después de la administración del t-PA.

Autor: MIÑANO MOLINA ALFREDO JESÚS.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Durante los últimos años, debido principalmente al incremento de la esperanza de vida de la población en sociedades desarrolladas y a las consecuencias del ritmo de vida de esta población, se ha incrementado la incidencia y el desarrollo de enfermedades neurodegnerativas. Esta situación ha obligado a realizar grandes esfuerzos para ampliar el saber sobre uno de los grandes enigmas del S. XXI; el cerebro. A lo largo del desarrollo de las enfermedades neurodegenerativas las neuronas mueren. Una de las consecuencias más comunes del desarrollo de enfermedades neurodgenerativas es la activación en la mayoría de ellas del programa de muerte celular, conocido como apoptosis. El conocimiento exhaustivo de este programa apoptótico es clave para poder abordar estrategias terapéuticas que puedan frenar el avance de estas enfermedades. La apoptosis es un proceso fisiológico importante durante el desarrollado el SNC manteniendo la homeóstasis celular. El cerebelo es una de las regiones del cerebro en la cual este fenómeno es especialmente dramático. Durante el desarrollo de las neuronas granulares de cerebelo (CGCs) prácticamente la mitad se pierden durante el proceso apoptótico. Este fenómeno puede minetizarse in vitro, a partir de un cultivo puro de estas neuronas. El cultivo primario de las CGCs es un modelo ampliamente utilizado para el estudio de la apoptosis, incudiendola por deprivación de potasio. En este proceso se puede producir un incremento en las concentraciones intracelulares de ceramida, implicada en este proceso de muerte. La ceramida es una molécula señalizadora implicada en diferentes procesos celulares como la proliferación, senescencia, diferenciación y prado del ciclo celular. Durante los últimos años se ha propuesto que la ceramida podría tener un papel más importante como regulador de la muerte apoptótica. Uno de nuestros objetivos fue, mediante la utilización de este modelo, caracterizar el proceso de muerte apoptótica por ceramida. Durante los últimos años se han acumulado evidencias sugiriendo que la exposición a estrógenos disminuye el riesgo y retasa el principio y desarrollo de enfermedades neurodegenerativas como el Alzheimer y el Parkinson, así como potencian la recuperación frente a daños neurológicos traumáticos como la isquemia cerebral. Estas hormonas pueden desempeñar estas funciones implicando diferentes procesos como la supervivencia celular, respuestas regenerativas, crecimiento axonal, potenciando de la señal sináptica y neurogénesis. Se han visto implicadas en multitud de estos procesos, desde la neuroprotección frente a procesos apoptóticos pasando por la plasticidad y crecimiento neurítico, hasta ejercer un efecto antioxidante beneficioso para el organismo. Así pues, estuvimos interesados en estudiar los posibles efectos que el 17-beta-estradil (E2) podría tener un nuestro modelo de trabajo, el cultivo de CGCs. Los resultados de nuestras investigaciones indican que: 1,- La ceramida induce apoptosis en CGCs activando tanto la caspasa-9 como la caspasa-2; dos vías de muerte a priori paralelas y que en esta muerte apotótica. 2,- La inhibición de Akt y la activación de las MAPKs están implicadas. 3,- El E2 falla como neuroprotector frente a la apoptosis falla como neuroprotector frente a la apoptósis en las CGCs y la ausencia de activación de Akt puede ser clave en esta falta de neuroprotección. 4,- La ausencia de neuroprotección podría deberse a que el receptor de estrógenos ER-alfa no interacciona con el receptor de IGF-I. 5,- ER-alfa está localizado en la membrana plasmática de las CGCs y media la activación de ERK1/2 por E2. La activación de la vía clásica de las MAPKs por E2 implica un mecanismo diferente de acción para E2 en el modelo de las CGCs. 6,- El E2 ejerce un efecto neuroprotector en las CGCs debido a sus propiedades como molécula antioxidante. 7,- La activación de la vía Src/Ras/ERK/CREB estaría relacionada con fenómenos de plasticidad sináptica y el mantenimiento de conexiones entre neuronas de las CGCs aunque no sería suficiente para proteger las CGCs de la muerte apoptótica. A pesar de que el E2 no acaba protegiendo a las CGCs de la muerte apoptótica, podrí 8 a tener 5c6 una gran relevancia el hecho de conocer cómo el E2 puede poner en marcha mecanismos que desencadenen fenómenos de mantenimiento dendrítico y disminución potencial de la vulnerabilidad de las neuronas frente a estímulos adversos, que nos permitiría poder incidir en un futuro sobre modelos de enfermedades neurodegenerativas como el Alzheimer o procesos isquémicos, donde le mantenimiento de las conexiones dendríticas existentes y la generación de nuevas sinapsis, además de mantener su estructura, pueden ser de utilidad para hacer frente a las temibles consecuencias que tiene el paso del tiempo en una sociedad cada días más envejecida, con esperanzas de vida mayores, pero con muchas más enfermedades neurodegenerativas y con más problemas para afrontar un futuro con garantías y una calidad de vida más humana.