CIENCIAS DE LA VIDA, 13

Autor: EUGENIO GOSALBO MÀRCIA.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: UNIDAD DE ECOLOGÍA, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Autor: OLIVERAS MENOR IMMACULADA.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA ANIMAL, VEGETAL Y ECOLOGÍA.

Resumen: Esta tesis tiene dos partes diferenciadas: los grandes incendios forestales y las quemas prescritas. La primera parte se compone de tres capítulos, y la segunda parte consta de dos capítulos. Finalmente, hay un capítulo de discusión y conclusiones generales de la tesis. El objetivo del Capítulo 1 (Factores que afectan a la severidad de un gran incendio forestal bajo condiciones meteorológicas extremas) es analizar el efecto de la heterogeneidad espacial, estructura de vegetación, comportamiento del fuego y momento del día que quemó sobre la severidad del fuego en un área afectada por un GIF. El estudio tenía tres hipótesis principales: (i) la estructura forestal (cobertura de arbórea y tamaño de copa) puede afectar la severidad en el modo que incendios mayores se relacionan inversamente con la severidad del fuego; (ii) La pendiente y la rugosidad del terreno, pero no la orientación, afectan a la severidad (iii) El comportamiento del fuego y el momento del día en que quemó afectan directamente a la severidad del incendio. Para testar estas hipótesis, estudiamos un GIF que ocurrió en Sant Llorenç Savall y Gallifa (Vallés Occidental, Cataluña) en agosto 2003, y que ardió casi 4.000 hectáreas en tres días. El incendio fue conducido principalmente por las condiciones meteorológicas extremas (una fuerte sequía, temperaturas muy altas, humedad relativa baja y un fuerte viento). A partir de fotografías aéreas de antes y de después del incendio, seleccionamos aleatoriamente 300 parcelas de 900 m2 y en cada una identificamos la severidad (expresada como porcentaje de copas negras, marrones y verdes), las variables topográficas (pendiente, orientación, rugosidad del terreno) y las variables de estructura de vegetación (cubierta arbórea, tamaño medio de copas grandes). El comportamiento del fuego y momento del día que quemó se derivaron haciendo una reconstrucción exhaustiva del incendio con material audiovisual y las posiciones GPS de los vehículos que participaron en la extinción. Entre los factores analizados, la severidad se relacionaba con la orientación, la rugosidad del terreno y el comportamiento del fuego. Estos resultados pueden ayudar los gestores forestales a considerar la heterogeneidad del paisaje para la prevención de incendios forestales. El objetivo del Capítulo 2 (Número de incendios, área quemada y grandes incendios en Europa Occidental Mediterránea) es determinar las relaciones entre el número de incendios, superficie quemada y tamaño del incendio en una cantidad sustancial de regiones de Europa Occidental Mediterránea. También quisimos testar si los posibles patrones encontrados persisten al añadir regiones de fuera de Europa. Esperábamos una relación positiva entre el número de incendios y el área quemada pero con un aumento menos que lineal por el efecto que una menor disponibilidad de combustible tiene sobre el tamaño del incendio. También esperábamos que hubiera pocos GIF en regiones con muchos incendios, porque más fuegos proporcionan más heterogeneidad de combustibles y por consiguiente es más difícil que se desarrolle un GIF. Usamos los registros temporales de incendios de 35 regiones de Francia, España y Portugal. Elegimos 7 regiones de EE.UU. y Australia para hacer las comparaciones no-europeas. Incluimos fuegos mayores a 1 hectárea que quemaron superficie forestal, y los clasificamos en cuatro clases de tamaño. Establecimos relaciones entre el número de fuegos y el área total quemada, el número de incendios y la proporción de GIF, el número de fuegos y la superficie quemada por GIF, y el número de incendios y el tamaño medio de los GIF. Una disminución sobre el número de fuegos daba lugar a una disminución del área total quemada, pero aumentaba la proporción de área quemada por GIF y el tamaño medio de los mismos. Las políticas que aspiran a una reducción del número de igniciones pueden, por tanto, favorecer incendios más grandes y más superficie quemada a alta intensidad. Consecuentemente estas políticas necesitarían complementarse con técnicas de gestión 8 que intr 1677 oducen heterogeneidad al paisaje y, como se vio en el Capítulo 1, que proporcionen la oportunidades de incendios más heterogéneos. El objetivo del Capítulo 3 (Modelización del efecto a largo plazo de cambios en la frecuencia de incendios en el área total quemada) es determinar cómo se relaciona la frecuencia de incendios con el área total quemada y la proporción de GIF utilizando un modelo de régimen de incendios a escala regional. Consideramos dos posibles covariantes que podrían afectar a esta relación: la reducción de la capacidad de extinción con un mayor número de incendios, y una distribución espacial irregular de igniciones. Supusimos que el modelo reproduciría las mismas tendencias encontradas en el Capítulo 2 para una escala inter-regional, pero también supusimos, que una reducción de la capacidad de extinción tendría un fuerte efecto sobre el área quemada y sobre la aparición de GIF, es decir, habría menos GIF. Utilizamos un modelo, descrito por Piñol et al. (2005), que consistía en 316 x 316 píxeles (un píxel representaba 1 hectárea) cubiertos por vegetación homogénea en terreno plano. El modelo de parametrizó con la estadística de incendios de dos regiones: Tarragona y Coimbra. El modelo encontró tendencias similares a los encontrados en el Capítulo 2, aunque el aumento en el área quemada con un aumento en la cantidad de incendios fue menor del que se encontró en el Capítulo 2. Este capítulo por sí mismo respalda la idea de que los combustibles son el factor principal al determinar aparición de GIF, pero también encontró que los GIF no son un artefacto de la extinción. Reinterpretado dentro del contexto de la tesis, este capítulo refuerza la idea de que las políticas de exclusión de fuego deberían complementarse con técnicas de gestión de combustible. El capítulo 4 inicia los estudios sobre quemas prescritas. Este capítulo describe las estadísticas de quemas prescritas en Cataluña para el periodo 1998 - 2005, da algunos ejemplos de aplicación y analiza los efectos sobre la supervivencia de dos especies Mediterráneas: Pinus halepensis Mill. y Quercus ilex L.. Analizamos una base de datos que contenía información sobre la mayoría de quemas hechas en Cataluña, como el número de quemas, su tamaño, objetivos, resultados esperables y ventana de prescripción. También había información sobre la meteorología y el comportamiento del fuego durante las quemas, y fotografías después del fuego. Mostramos algunos ejemplos prácticos de quemas realizadas, y probamos de evaluar el cumplimiento de los objetivos y los efectos de las quemas con el material provisto por la base de datos. Realizamos también un trabajo experimental antes, durante y después de 6 quemas prescritas realizadas entre 2004 y 2006. Las estadísticas mostraron que en Cataluña se realizaron pocas quemas, pero que fueron cuidadosamente planeadas y ejecutadas siguiendo una metodología similar a la de otros países. Los efectos de las quemas en Quercus ilex fueron de poca importancia ya que la mayoría de árboles rebrotaron después del fuego. Pinus halepensis tuvo una mortalidad mayor porque unos de los objetivos de varias de las quemas estudiadas era reducir su densidad. Finalmente, dado el debate abierto en la bibliografía sobre los impactos ecológicos del fuego prescrito, así como sobre su eficacia para reducir el riesgo de incendio forestal, realizamos una encuesta en Cataluña y en una comunidad local de Victoria (Australia). El objetivo del estudio es conocer la aceptación social de esta técnica en un lugar dónde se ha prohibido a fuego durante décadas (Cataluña) y en un lugar donde se ha utilizado siempre para la gestión de combustible (Victoria). Utilizamos tres grupos: comunidad, estudiantes de Universidad, y expertos (bomberos, gestores e investigadores forestales). Las hipótesis eran: (i) La comunidad de Victoria tiene más conocimientos sobre la aplicación de quemas que la comunidad catalana; (ii) Los estudiantes de Victoria aceptan y conocen mejor las quemas por estudiantes de Cataluña; y (iii) no hay diferencias sobre la percepción de las quemas prescritas entre el de expertos de los dos lugares. Elegimos como áreas de estudio el Wombat State Forest, que se localiza en la parte centro-occidental de Victoria (Australia) y la Comunidad Autónoma de Cataluña (España). Diseñamos un cuestionario en lenguaje claro, evitando el uso de palabras técnicas para que fuese bien comprendido por la comunidad. El cuestionario consistía en dos partes: la primera aspiraba a determinar información general acerca de los participantes y de su conocimiento y uso del bosque. La segunda se refería a la realización de quemas en el área local. Los cuestionarios se distribuyeron en reuniones presenciales y a través del envío por correo a 250 unidades familiares. Los participantes victorianos mostraron conocer mejor esta práctica pero también fueron mucho más críticos con las políticas de gestión forestal que los participantes catalanes. El estudio reafirma la necesidad de información, educación social y consulta pública sobre las políticas de gestión.

Autor: Bech Serra Joan Josep.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Universitari Vall d'Hebrón.
Centro de realización: Institut de Recerca de l'Hospital Universitari Vall d'Hebrón (Laboratorio de Recerca en Oncologia).

Resumen: Uno de los mecanismos implicados en la regulación de la actividad de las proteínas de la superficie celular se denomina shedding y consiste en un corte proteolítico que da lugar a la liberación de la región extracelular de las mismas. Dicho mecanismo está muy especializado y es básicamente responsabilidad de las superfamilia de metaloproteasas dependientes de zinc denominada metzincina, la cual incluye a las metaloproteasas de matriz extracelular (MMPs) y a las ADAM (A Disintigrin And Metalloprotease domain). Estas últimas se han relacionado con tumorogénesis ya que algunos de sus miembros se sobreexpresan en tumores procedentes de una gran variedad de tejidos. Teniendo en cuenta estos datos varios grupos de investigación han iniciado ensayos clínicos con inhibidores de estas proteasas que inesperadamente han fracasado. La explicación a estos resultados la encontramos, probablemente, a la complejidad funcional de las ADAM debida a la diversidad de moléculas que forman su degradoma así como al desconocimiento de parte de los componentes del mismo. Uno de los miembros más importantes de la familia ADAM debido a su sobreexpresión en determinados tumores es ADAM17. Esta proteasa tiene como sustrato a un factor de crecimiento que juega un papel importante en tumorogénesis llamado proTGF- . El shedding de este factor de crecimiento es crítico ya que solo de este modo se obtiene su forma soluble activa. Debido a estos antecedentes y con el objetivo de profundizar en el conocimiento del papel de ADAM17 en la formación de tumores nos planteamos, por una parte, estudiar el papel de la endocitosis en la regulación de la disponibilidad de proTGF- por parte de ADAM17 en la superficie celular y, por otra, la identificación de nuevos sustratos de ADAM17, mediante la técnica proteómica del DIGE (Differential Gel Electrophoresis). Los resultados del primer punto nos permitieron concluir que proTGF- es un factor de crecimiento que regula sus niveles en la superficie celular mediante su endocitosis y posterior reciclaje. Además, también pudimos observar que el dominio citoplasmático de proTGF- es importante en el control de dicho proceso ya que su ausencia claramente lo bloqueaba dando lugar a un incremento del factor de crecimiento en la superficie celular. Por otra parte, la ausencia del dominio citoplasmático no interfiere en la capacidad de ADAM17 para cortar proteolíticamente proTGF- pero si que incrementa la capacidad del factor de crecimiento para activar a su receptor. Todo esto indica que el dominio citoplasmático del factor de crecimiento controla la disponibilidad de proTGF- a la superficie celular y, por lo tanto, la capacidad de producir su forma activa. Respecto al segundo objetivo, los resultados obtenidos permitieron identificar a tres sustratos de shedding: El receptor de transferrina (TfnR) y las moléculas de adhesión desmogleina 2 (Dsg-2) y ALCAM las cuales fueron confirmadas como sustratos mediante western-blot. En el caso de Dsg-2 determinamos que es sustrato de ADAM17 solo en condiciones de sobreexpresión de la metal·loproteasa mientras que ADAM10 es la principal responsable de su shedding. Respecto a la regulación del shedding de Dsg-2 hemos demostrado que EGF aumenta su procesamiento proteolítico. Es importante destacar también que hemos caracterizado a una nueva forma de Dsg-2 que no tiene el dominio citoplasmático. Muy probablemente la actividad de una proteasa desconocida que no hemos conseguido identificar sea la responsable de su formación. En el caso de ALCAM es ADAM17 la principal responsable de su shedding. El estudio de la regulación de su corte proteolítico nos ha permitido determinar que en condiciones de elevada confluencia celular aumenta el shedding de esta molécula de adhesión.

Autor: MARTÍNEZ ALONSO EMMA.
Año: 2006.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En la presente tesis doctoral hemos estudiado la estructura, organización y dinámica del complejo de Golgi en células HeLa incubadas a 15ºC, condiciones en las que se induce el bloqueo del tráfico a nivel del compartimento intermedio. Para ello hemos utilizado diferentes aproximaciones técnicas como son la microscopía electrónica, crioinmunocitoquímica ultraestructural, técnicas de inmunofluorescencia y microscopía confocal in vivo. El análisis de la distribución de los marcadores del compartimento intermedio (ERGIC-53 y KDELr) confirma un patrón de marcaje más concentrado en condiciones de 15ºC que en condiciones fisiológicas en células HeLa, resultados descritos anteriormente por otros autores en otros tipos celulares. Sin embargo, la tinción con diferentes enzimas de glicosilación residentes del aparato de Golgi, como son Manosidasa II (ManII), Galactosiltransferasa (GalTr) y N-acetil-galactosaminiltransferasa (GalNAcTr) han puesto en evidencia la formación de túbulos derivados del aparato de Golgi en estas condiciones de baja temperatura. Por otro lado, la tinción con las proteínas de matriz del aparato de Golgi, GM130, Giantina y Golgina-84 no marcan los túbulos que contienen las enzimas. El marcaje contra la proteína TGN-46, marcador del TGN, demuestra que estos túbulos no son derivados del TGN ya que no son positivos para la proteína. El análisis funcional con el mutante sensible a temperatura del virus de la estomatitis vesicular (VSV-G) y el fragmento B de la toxina Shiga, ha demostrado que los túbulos derivados del Golgi a 15ºC no contienen ningún tipo de carga ni anterógrado ni retrógrado, respectivamente. De la caracterización de la formación de los túbulos derivados del Golgi con diferentes drogas y reactivos, podemos decir que la formación de los túbulos es dependiente de energía y de un citoesqueleto intacto de actina y microtúbulos. Por el contrario, la acción de la brefeldina A o cicloheximida no tiene efectos sobre la formación de los túbulos derivados del aparato de Golgi. Mediante el estudio crioinmunocitoquímico ultraestructural hemos evidenciado grandes cambios morfológicos en la estructura del complejo de Golgi en estas condiciones de baja temperatura (15ºC). Así, las cisternas alcanzan una longitud el doble de la que tienen a 37ºC. Además, el número de cisternas también sufre un ligero aumento. Otro cambio que hay que destacar en la morfología del aparato de Golgi es que, en estas condiciones de 15ºC los dictiosomas sufren una gran curvatura llegando incluso a formarse estructuras completamente circulares. Las cisternas del aparato de Golgi se encuentran rodeadas por un gran número de elementos túbulo-vesiculares y también pueden observarse túbulos directamente conectados con las cisternas, en los cuales se localiza la enzima de glicosilación GalTr. El análisis cuantitativo de la distribución de los marcadores del aparato de Golgi a 15ºC demuestra que GalTr sufre una alteración en la distribución sobre las cisternas. Tras la incubación a baja temperatura, se localiza sobre todas las cisternas de una manera homogénea en vez de sobre la cara trans del aparato de Golgi. Mientras, la distribución de las proteínas de la matriz del Golgi, así como, la de los marcadores de compartimento intermedio permanece inalterada. Las cubiertas proteicas tipo COP I y COP II sufren también una deslocalización. Así, ambas presentan una disociación de las membranas en estas condiciones de baja temperatura (15ºC). COP II salta hacia zonas electrodensas del citoplasma libres de membrana, mientras que COP I se dispersa por el citoplasma. El análisis de la localización de diferentes proteínas implicadas en la regulación del transporte, como son proteínas de la familia de las SNARE y de las Rab, ha determinado que estos túbulos inducidos por la baja temperatura están enriquecidos en proteínas implicadas en el transporte intra-Golgi, como son las proteínas Gos28, GS15 y Rab6. Además, el estudio realizado en células a temperatura fisiológica, ha demostrado la existencia de túbulos derivados 8 del apa dee rato de Golgi positivos para Gos28, GS15 y Rab6. En estas condiciones de 37ºC también es posible observar túbulos positivos para la enzima de glicosilación Galactosiltransferasa. Mediante la utilización de técnicas de microscopía confocal in vivo hemos estudiado la dinámica de la tubulación en condiciones de baja temperatura (15ºC) y fisiológicas (37ºC). Como control de estos experimentos hemos comprobado que la distribución de la proteína Galactosiltransferasa-CFP (GalTr-CFP) es la misma que la de la proteína endógena, tanto en condiciones de 15ºC, de 37ºC o tras el tratamiento con BFA. En condiciones de baja temperatura, la trayectoria que siguen estos túbulos durante su crecimiento es recta en su inicio aunque en el extremo pueden curvarse. El movimiento neto de los túbulos es el de crecimiento pero no es un movimiento continuo hacia delante, sino que siguen un movimiento "delante-atrás". Muchos de los túbulos que hemos estudiado, crecen y tras alcanzar su máxima longitud, decrecen hasta desaparecer. Un porcentaje bajo pero representativo de estos túbulos se fragmentan y se separan del aparato de Golgi, tras lo cual, se desplazan hasta la periferia de la célula donde después de un tiempo desaparecen. En algún caso, estos túbulos derivados del aparato de Golgi, permanecen como estructuras estables durante un largo periodo de tiempo. Tanto los túbulos que crecen-decrecen como los que se separan se pueden observar en la misma célula. Una de las diferencias de los túbulos observados a 37ºC con respecto a los de baja temperatura, estriba en la velocidad. En condiciones fisiológicas esta velocidad de crecimiento es 10 veces más rápida que en 15ºC. En este caso, la mayoría de túbulos se rompen y se separan del complejo de Golgi. No obstante, también se observan túbulos que crecen y decrecen. Es decir, tanto a 15ºC como a 37ºC, existen dos tipos de túbulos: los que se separan y los que crecen-decrecen. Las condiciones de baja temperatura incrementan la proporción del tipo que crece-decrece. Estudios previos indican que los túbulos inducidos por BFA se mueven directamente hacia los sitios de salida del RE donde se fusionan con las membranas del mismo. En nuestro estudio los dobles marcajes realizados con la enzima GalTr-CFP y los marcadores Sec13 (subunidad del complejo COP II) y KDELr demuestran que no existe una relación directa entre los extremos de los túbulos derivados del Golgi (a 15ºC y 37ºC) y las áreas de salida del RE. Por lo tanto, los túbulos derivados del Golgi en condiciones fisiológicas y de baja temperatura tienen un comportamiento diferente de los túbulos inducidos por BFA y descritos por otros autores. Todos estos datos apuntan a que los túbulos observados a 15ºC serían representativos de los intermediarios de transporte intra-Golgi y más concretamente serían responsables del reciclaje de las enzimas de glicosilación tal y como postula el modelo de maduración de cisternas.

Autor: BRITO MIRALLES GONZALO.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FACULTAD DE QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA.

Resumen: Se han desarrollado procedimientos de análisis multivariado para la caracterización, clasificación e identificación de pastas de hígado envasadas mediante su contenido en metales pesados y una serie de variables cuantitativas y cualitativas. Se han establecido las características relativas a los diferentes envases comerciales en función del contenido en metales pesados y cualidades relativas a la marca, país de origen. Se ha estudiado la concentración de elementos metálicos en diferentes zonas de los envases. Se han estudiado diferentes métodos estadísticas univariados y multivariados para la ordenación de las muestras por clases relativas a la zona de muestreo, tipo de envase, país de origen, marca comercial e ingredientes.

Autor: GIMENEZ MARIÑO CRISTINA.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: INST.U.BIOORGANICA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Se han estudiado las plantas pertenecientes a La Laurisiva, formación vegetal de gran biodiversidad y bien representada en los Archipiélagos Macaronésicos de Canarias, Azores y Madeira. A partir de las mismas se han aisado hongos endofitos, organismos objeto de estudios en las ultimas decadas por considerarse fuente importante de productos naturales activos.Dichos hongos fueron identificados y cultivados para obtener extractos que nos permitieran determinar su actividad biologica frente a insectos plaga masticadores y chupadores, hongos fitopatógenos de diversos cultivos, y parásitos que causan enfermedades severas en humanos. A su vez, se llevaron a cabo ensayos con los extractos vegetales de las plantas a partir de las cuales se aislaron dichos hongos, para poder establecer una comparación endófito-planta hospedera. Se obtuvieron 209 aislados fúngicos, pertenecientes a 21 especies de hongos, de las cuales 9 se citan por primera vez como organismos endófitos. La mayor parte de los hongos ensayados presentaron porcentajes de actividad altos frente a los diversos organismos diana, sobre todo frente a parásitos, y cuatro fueron las especies de hongos endófitos con mayor espectro de actuación. Se ensayaron 28 especies vegetales frente a los hongos fitopatógenos y un insecto plaga masticador. Cuatro de dichas especies resultaron activas frente a los organismos diana seleccionados. De forma general, y en base a los resultados obtenidos, se detectó mayor actividad frente a los insectos diana y los parásitos que frente a los hongos fitopatógenos. Por otro lado, resultaron más activos los extractos de los endófitos que los obtenidos a partir de las especies vegetales. Como conclusión final, las especies vegetales que resultaron más interesantes, tanto por la actividad de sus extractos como por la de sus hongos endofitos, y que podrían incluirse en programas de control de plagas y enfermedades fueron Laurus novocanariensis, Ocotea foetens y Persea indica.

Autor: NAVARRO RIVERO FRANCISCO JOSÉ.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Esta tesis doctoral está dedicada fundamentalmente al estudio del mecanismo de regulación de la proteína Ynt1, una proteína que se encuentra en la membrana plasmática de la levadura Hansenula polymorpha y que transporta nitrato y nitrito con alta afinidad al interior de las células. Dentro de las células el nitrato es utilizado para sintetizar los componentes celulares nitrogenados. Los resultados del presente trabajo sugieren que la entrada de nitrato se regula controlando la cantidad de Ynt1 en la membrana plasmática en función de la fuente de nitrógeno. De esta forma, cuando las células disponen de fuentes de nitrógeno más favorables que el nitrato para crecer, se prescinde del transportador de nitrato enviándolo a la vacuola para ser degradado, un proceso que requiere la unión covalente de la proteína ubiquitina a Ynt1 como señal para que sea endocitado. La ubiquitina se une preferentemente a residuos de lisina localizados en un amplio dominio citosólico de Ynt1. Por otro lado, en este mismo dominio hemos identificado residuos de senina que se fosforilan también en función de la disponibilidad y calidad de la fuente de nitrógeno. La fosforilación de estos residuos, que ocurre en ausencia de nitrógeno, permite aumentar la estabilidad de Ynt1. Por tanto, fosforilación y ubiquitinación controlan la cantidad de Ynt1 y con ello, la entrada de nitrato a las células. Estos resultados contribuyen a la comprensión, en términos moleculares, de la regulación de los transportadores de nitrato en eucariotas.

Autor: PEREZ ROTH EDUARDO.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MATEMATICAS.
Centro de realización: UDI DE MICROBIOLOGIA.FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Las infecciones causadas por SARM en el ámbito hospitalario

Autor: LUIS DIAZ VANESA CRISTINA.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: I.U.DE BIORGANICA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: SE ESTUDIA LA CALIDAD DE PLANTA DE PINO CANARIO EN VIVERO CULTIVADO EN CONTENEDOR CON FINES DE REFORESTACIÓN. SE ESTABLECEN DOS FASES DE CULTIVO DURANTE DOS AÑOS CONSECUTIVOS EN LOS QUE SE COMBINAN 3 TIPOS DE CONTENEDORES (SL-M32, AT-48C, FP-400), 5 TIPOS DE SUSTRATOS EN DISTINTAS PROPORCIONES (TIERRA DE MONTE, PICÓN, TURBA RUBIA, VERMICULITA Y PERLITA) Y DOS TIPOS DE FERTILIZACIÓN, DE LIBERACIÓN LENTA (OSMOCOTE) EN DISTINTAS DOSIS Y FERTILIZACIÓN APLICADA AL AGUA DE RIEGO (PETERS PROFESIONAL). COMO COMBINACIÓN DE ESTOS TRES ELEMENTOS SE FORMAN EN TOTAL 26 TRATAMIENTOS DE VIVERO ENTRE LAS DOS FASES DE CULTIVO, QUE SE DIVIDEN EN DOS BLOQUES PRINCIPALES, EL CULTIVO TRADICIONAL, BASADO EN COMPONENTES NATURALES (TIERRA DE MONTE Y PICÓN) SIN FERTILIZAR Y EL CULTIVO ALTERNATIVO, FORMADO POR TRATAMIENTOS COMPUESTOS A BASE DE TURBAS FERTILIZADAS. LA HIPÓTESIS DE PARTIDA ES QUE PLANTAS DE ALTA CALIDAD EN VIVERO ALCANZARÁN MAYORES CRECIMIENTOS Y DESARROLLOS EN EL CAMPO, Y SE CONTRASTARÁ LA CALIDAD DE PLANTA PRODUCIDA POR ESTOS TIPOS DE CULTIVO, TANTO EN VIVERO COMO EN EL CAMPO. ADEMÁS SE REALIZA UN SEGUIMIENTO DE LA SUPERVIVENCIA, CRECIMIENTO, FENOLOGÍA Y FISIOLOGÍA DE LAS PLANTACIONES EN ZONAS ÁRIDAS CON PROBLEMAS DE SUPERVIVENCIA. CONJUNTAMENTE SE ESTUDIA LA FISIOLOGÍA DE PLANTAS DE ESTOS DOS TIPOS DE CULTIVO EN MACETA MEDIANTE MEDIDAS A NIVEL DE ACÍCULA (ESTADO HÍDRICO, INTERCAMBIO GASEOSO Y FLUORESCENCIA DE LA CLOROFILA) Y A NIVEL DE PLANTA ENTERA (FLUJO DE SAVIA), Y SE REALIZAN MEDIDAS DE CONDUCTANCIA HIDRÁULICA A PLANTAS SOMETIDAS A TRATAMIENTOS DE SOMBREO Y FERTILIZACIÓN PARA VER LA CÓMO LOS CAMBIOS MORFOLÓGICOS PRODUCIDOS POR ESTOS TRATAMIENTOS DE VIVERO AFECTAN A LA FISIOLOGÍA DE LA PLANTA EN TÉRMINOS DE CONDUCTANCIA HIDRÁULICA Y SU INFLUENCIA EN LA FOTOSÍNTESIS Y EFICIENCIA EN EL USO DEL AGUA. LOS RESULTADOS SON CONTUNDENTES A FAVOR DEL CULTIVO ALTERNATIVO, MOSTRANDO ÉSTE MAYOR CALIDAD MORFOLÓGICA Y FISIOLÓGICA, MAYORES TASAS DE SUPERVIVENCIA Y CRECIMIENTO EN CAMPO Y MEJOR ESTADO FISIOLÓGICO. ADEMÁS SE PROPONE LA ALTURA INICIAL COMO UNA MUY BUENA VARIABLE PREDICTIVA DE LA SUPERVIVENCIA DE LAS PLANTAS EN LAS CONDICIONES DE ESTE ESTUDIO.

Autor: PÉREZ MARTÍNEZ DAVID.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: El objetivo general de esta tesis está dentro de un proyecto de nuestro laboratorio que persigue la caracterización de GTPBP3, el gen humano homólogo de mnmE. Para ello se estudiaron las variedades de mRNAs maduros resultantes del ayuste alternativo del gen GTPBP3 propuestas previamente en la literatura. Las dos variantes encontradas difieren en la presencia o no del exon SA situado entre las motivos G3 y G4 del dominio G de GTPBP3 .Además, mediante PCR cuantitativa vimos que ambas isoformas existen en todos las tejidos analizados aunque su nivel de expresion es baja ya que GTPBP3 no pudo ser detectada por el anticuerpo anti-GTPBP3. Respecto alas características bioquímicas analizadas, la afinidad de GTPBP3, isoforma larga, par mGTP y GDP es muy similar a la mostrada par su proteina homologa bacteriana MnmE. Sin embargo, la isoforma corta (isoforma deleción) tiene una afinidad par el GDP 100 veces superior a la que presenta la isoforma inserción, mientras que su afinidad par el GTP es del mismo rango. Las dos isoformas de GTPBP3, al igual que su homologa bacteriana MnmE, san capaces de formar un mimético del estado de transicion can el GDP y el fluoruro de aluminio; sin embargo, ambas isoformas, contrariamente a lo que ocurre can MnmE, no pueden hidrolizar el GTP in vitro. GTPBP3 es además capaz de dimerizar, la que posiblemente le permita, coma se ha observado can su homologa bacteriana, crear el sitio de unión para un derivado del tetrahidrofolato que actuará como donador del grupo unicarbonado en la reacción de modificación de las tRNAs. Finalmente, se ha podido observar que la proteína GTPBP3 no es capaz de complementar mutantes mnmE bacterianos, posiblemente porque no es capaz de reconocer las tRNAs bacterianos y/o otros participantes en la reacción de modificación controlada por MnmE.

Autor: VILLENA ÁLVAREZ MARÍA JOSÉ.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: El presente trabajo aborda la ecología de los productores primarios en varios lagos somerosmediterrÁneos, a través de dos estudios experimentales en mesocosmos in situ con enriquecimiento de nutrientes y distintas densidades de peces planctívoros, junto a un estudio de la ecología del lago de la Albufera de Valencia. Los resultados muestran que: 1) La ecologÍa de los lagos someros estudiados se asemeja mas a la ecologia de los lagos tropicales y subtropicales que a la descrita para los lagos someros del norte y centro de Europa. 2) El desvío de nutrientes en el lago de la Albufera fue insuficiente para conseguir un cambio de estado trófico, pero condujo a la reducción de la biomasa del fitoplancton y a la aparición de varias fases claras. 3) En los estudios experimentales con mesocosmos, las concentraciones de nutrientes influyeron mas que la densidad de peces planctívoros sobre la biomasa del fitoplancton, epifiton y macr6fitos sumergidos. 4) El crecimiento del epifitón fue exponencial y máximo entre concentraciones de 0,1-0,35 mg L-1 de fósforo, mientras que el fitoplancton tuvo un incremento lineal y dominó por encima de 0,35 mg L-1 de fósforo y la biomasa de las carófitas fue mayor con valores por debajo de 0,05 mg L-1 5) La ausencia de los macrófitos sumergidos favoreci6 la liberación de nutrientes desde el sedimento perpetuando biomasas algales elevadas y un estado de turbidez. 6) Las cianobacterias dominaron bajo un amplio rango de concentraciones de nutrientes. La densidad de peces planctívoros y la depredación debida al zooplancton tuvieron un papel selectivo de su tamalio. 7) Los modelos de dominancia de cianobacterias propuestos por Gragnani et al. (1999) y Scheffer et al. (1997), no se cumplen para los lagos someros estudiados. 8) Se propone un modelo alternativo que explica la alternancia observada de dominancia entre cianobacterias croococales y oscilatoriales, en base a su requerimientos de nutrientes, luz, sensibilidad a la depredación por el zooplancton y condiciones de estabilidad de la columna de agua. 9) Las comunidades del fitoplancton y epifiton estuvieron estrechamente vinculadas y su composición tendió a homogeneizarse al aumentar la concentración de nutrientes. 10) El reclutamiento de las algas desde el sedimento fue mayor que- desde el perifiton y se incrementó con las concentraciones de nutrientes. 11) El reclutamiento de las cianobacterias rue un factor importante que retroaliment6 y estabilizó sus poblaciones y dominancia en el fitoplancton. 12) La visión de un espacio continuo y heterogéneo (multihabitats) entre el bentos y plancton en los lagos someros, puede ayudar a mejorar el conocimiento del ticoplancton que caracteriza a estos sistemas. 13) La diversidad de las comunidades del epifiton y del fitoplancton se redujo frente a un incremento de la concentraciones de nutrientes y peces planctívoros, especialmente en ausencia de plantas sumergidas. 14) Los grupos funcionales propuestos para el fitoplancton por Reynolds et al. (2002), ofrecen una valiosa y complementaria información para entender la ecologia del fitoplancton en los lagos someros de la zona mediterránea, aunque se sugieren algunas modificaciones de algunos de los grupos funcionales originalmente descritos. 15) La recuperación y conservación de los lagos someros mediterráneos implica una reducción importante de la carga externa de nutrientes y la adopción de medidas complementarias que potencien un control interno de la carga de nutrientes dentro de la red trófica para recuperar su calidad ecológica y biodiversidad.

Autor: ALONSO PERAL MARIA MAGDALENA.
Año: 2006.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE.
Centro de lectura: INSTITUTO DE BIOINGENIERIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNANDEZ.

Resumen: El sistema vascular de los organismos pluricelulares forma parte de una familia de estructuras biológicas ramificadas arborescentemente, jerarquizadas y tridimensionales, que también incluye a los sistemas respiratorios y nerviosos de muchas especies animales. Para disecar las reglas generativas de estas topologías pueden utilizarse como modelo los patrones de venación de las hojas de las plantas y las alas de los insectos, que son bidimensionales y muy sencillos. En esta Tesis doctoral hemos estudiado los mutantes hemivenata (hve), que presentan alteraciones en su patrón de venación foliar. Hemos clonado posicionalmente el gen HVE y caracterizado tres de sus alelos mutantes, hve-1, hve-2 y hve-3, a nivel molecular y fenotípico. Estos mutantes presentan un patrón de venación foliar muy simple, con un número de venas secundarias y terciarias muy inferior al silvestre, y ausencia o acortamiento de las de orden superior. Los mutantes hve también manifiestan una floración y senescencia retrasadas, disminución de la fertilidad, porte arbustivo y ausencia de ondulaciones en la raíz. Algunos de estos rasgos recuerdan a los mutantes alterados en la percepción de la auxina. Hemos establecido que los mutantes hve son ligeramente insensibles a auxina, aunque responden como el tipo silvestre a los inhibidores del transporte de esta hormona. El producto del gen HVE es una proteína CAND1 (CULLIN-ASSOCIATED AND NEDDYLATION-DISSOCIATED1) cuya participación en la ubiquitinación ha sido demostrada en células de mamífero. El alelo espontáneo hve-1 altera el procesamiento de los transcritos del gen HVE, y hve-2 y hve-3 son portadores de inserciones de ADN-T. El tamaño de la inflorescencia y la fertilidad son reducidos más severamente por hve-2 y hve-3 que por hve-1, lo que sugiere que este último alelo es hipomorfo. El patrón de venación sencillo de las plantas hve parece deberse a un defecto temprano en el desarrollo del patrón de venación. Hemos determinado in vitro que la proteína HVE se une a la CULINA1 y que los patrones de venación de los mutantes axr1 y hve son similares. Estos resultados y nuestro análisis del fenotipo vascular de los mutantes hve indican que la señalización de la auxina mediada por la ubiquitina participa en el establecimiento del patrón de venación de los cotiledones, las hojas vegetativas, los pétalos y los sépalos. Nuestros análisis de dobles mutantes y plantas transgénicas indican que el transporte y la percepción de la auxina intervienen independientemente en la formación del patrón de venación, y que HVE actúa antes que ATHB8 en una ruta de desarrollo en la que participa AXR1, pero no lo hacen LOP1, PIN1, CVP1 ni CVP2

Autor: Roura Pascual Núria.
Año: 2006.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: Facultat de Ciències, Universitat de Girona.
Centro de realización: Universitat de Girona.

Autor: Álvarez Cobo Yolanda.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultat de Biociéncias.
Centro de realización: Universidad Autónoma de Barcelona.

Resumen: En la leucemia linfoblástica aguda (LLA) más de un 80% de los pacientes muestran alteraciones genéticas útiles en el estudio de la enfermedad, tanto en el diagnóstico y seguimiento de la enfermedad como en investigación. Además, muchas de dichas alteraciones se relacionan con valor pronóstico, como es el caso de la reorganización ETV6/RUNX1.Los objetivos de nuestro trabajo sobre una serie de 201 pacientes diagnosticados de LLA han sido: a) establecer la incidencia de la reorganización ETV6/RUNX1, b) analizar las alteraciones asociadas a dicha reorganización y evaluar su influencia en la evolución de los pacientes, c) comparar las características clinicobiológicas de los pacientes con la reorganización con aquellos que no la presentan y d) valorar el pronóstico de la reorganización ETV6/RUNX1.La incidencia de la reorganización ETV6/RUNX1 en nuestra serie ha sido del 27.86%, mostrando un 71.42% de los mismos alteraciones asociadas, las cuales no parecen alterar el valor pronóstico de dicha reorganización.Los pacientes con la reorganización ETV6/RUNX1 han mostrado unas características clinicobiológicas relacionadas con pronóstico favorable, como un recuento leucocitario inferior a 50x109/L, edades comprendidas entre 1 y 10 años o bajas tasas de recaída. Estas características han resultado estadísticamente diferentes respecto a las de los pacientes que no muestran la reorganización ETV6/RUNX1.Al realizar el estudio de supervivencia libre de enfermedad (SLE) a los cinco años comparando los pacientes que mostraban la reorganización ETV6/RUNX1 con aquellos que no la mostraban observamos que los primeros muestran una SLE significativamente más elevada.Cuando se compara la SLE a los cinco años entre la reorganización ETV6/RUNX1 y otras alteraciones genéticas recurrentes en LLA se ha observado que la reorganización ETV6/RUNX1 y las hiperdiploidias de más de 50 cromosomas muestran una SLE similar, mientras que es estadísticamente superior a la SLE de la reorganización BCR/ABL, reorganización del gen MLL o la t(1;19). La reorganización ETV6/RUNX1 se relaciona con un pronóstico favorable

Autor: BARRERO GIL JAVIER.
Año: 2006.
Universidad: POLITÉCNICA DE MADRID.
Centro de lectura: ESCUELA TECNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TECNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: En este estudio se han desarrollado varias líneas de investigación, siguiendo principalmente dos aproximaciones distintas: la caracterización de sistemas de transporte que pudieran tener interés biotecnológico en el ámbito del incremento de la tolerancia a la salinidad de los cultivos y el establecimiento de Physcomitrella patens como organismo modelo en estudios de homeostasis iónica. 1. Identificación y caracterización de Na+,K+-ATPasas en algas Las bombas de Na+ son sistemas muy eficientes en la extrusión de Na+ hacia el exterior celular por lo que son de gran interés biotecnológico. En este estudio hemos realizado una búsqueda de bombas de Na+ en algas macroscópicas marinas identificando y clonando dos cDNAs, uno en una especie marina de alga roja Porphyra yezoensis y otro en otra especie marina de alga verde Udotea petiolata. Ambas secuencias muestran gran homología con Na+,K+-ATPasas de origen animal, nombrándose KPA1. Hemos caracterizado la función de la bomba PyKPA1 de Porphyra, mediante expresión heteróloga en bacterias y levaduras, como un sistema capaz de mediar una entrada de K+ y una salida de Na+. Mediante búsquedas informáticas en bases de datos hemos podido identificar secuencias relacionadas con este tipo de ATPasas en el alga verde Chlamydomonas reinhardtii y el estramenopilo Phytophthora sojae. Estos resultados sugieren que las bombas de Na+/K+ no sólo se hallan presentes en animales, sino que están presentes en diversos organismos como estramenopilos, algas rojas, y algas verdes. Su implicación en la homeostasis iónica necesita estudios más detallados. 2. Caracterización del transporte de K+ en el musgo Physcomitrella patens Se han establecido técnicas de cultivo y manipulación genética básicas en el laboratorio. Hemos caracterizado las respuestas al ayuno de nutrientes de esta planta mostrando su capacidad para absorber K+ con alta afinidad, las características de este transporte sugieren la implicación de un transportador KUP/HAK/KT. Además, algunos indicios sugieren que un transportador de esta familia también podría intervenir en la absorción de K+ en plantas con un contenido normal de K+. Se han clonado cuatro genes que codifican transportadores HAK en Physcomitrella, escogiéndose dos de ellos para su caracterización funcional (PpHAK1 y PpHAK2). Se ha establecido la localización subcelular del transportador PpHAK1 en la membrana plasmática. En el caso de PpHAK2 se han obtenido algunos indicios que apuntan a su localización en el tonoplasto. Los resultados de experimentos de expresión heteróloga de PpHAK1 y PpHAK2 en mutantes de levadura sugieren fuertemente la capacidad de PpHAK1 para mediar flujos de entrada de K+ de alta afinidad. También se han identificado y clonado en Physcomitrella dos secuencias con pertenecientes a familia de canales iónicos tipo Shaker (PpAKT1 y PpAKT2). Se ha podido establecer la función de PpAKT1 como sistema de absorción de K+ mediante la expresión heteróloga en mutantes de levadura. Se ha logrado la interrupción del gen PpHAK1 en Physcomitrella. La línea mutante hak1 parece tener los sistemas de transporte de K+ de alta y baja afinidad muy afectados, lo cual sugiere que el transportador PpHAK1 puede estar implicado en ambos modos de transporte de K+. 3. Clonación y caracterización de un transportador NHAD en Physcomitrella La homeostasis del Na+ en Physcomitrella es particularmente interesante ya que es la única planta conocida en la que bombas de Na+ y antiportadores Na+/H+ coexisten. En este trabajo, nos hemos planteado la caracterización de uno de los presuntos antiportadores Na+/H+ de Physcomitrella, el antiportador PpNHAD1. Este transportador pertenece a una familia muy poco conocida. Una búsqueda electrónica nos ha permitido descubrir que los transportadores NHAD están muy ampliamente distribuidos entre los organismos eucariotas fotosintéticos, lo cual nos ha llevado a clonar el cDNA PpNHAD1. La construcción de una fusión del cDNA de PpNHAD1 con GFP ha permitido demostrar la localización d 8 e este t 49c ransportador en la envoltura del cloroplasto. Utilizando Li+ como catión análogo a Na+, hemos podido demostrar mediante expresión heteróloga su función como transportador de Na+. Esta función parece ser dependiente de un pH ácido. Sorprendentemente, este transportador también parece mediar un flujo de entrada de K+, siendo esta función independiente del pH. Así pues, parece que PpNHAD1 es un transportador de la envoltura cloroplástica implicado en la homeostasis iónica de este orgánulo.

Autor: BONNARD NATHALIE.
Año: 2006.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: ESTACIÓN EXPERI. DEL ZAIDIN, CSIC.
Centro de realización: ESTACIÓN EXPERIMENTAL DEL ZAÍDIN, CSIC, GRANADA.

Resumen: Las bacterias del orden Rhizobiales son bien conocidas por su capacidad

Autor: Cobos del Moral Enrique José.
Año: 2006.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: Los objetivos de esta Tesis doctoral fueron profundizar en el conocimiento del receptor sigma-1 mediante: 1.- La caracterización de in método in vitro que permita discriminar ligandos agonistas y antagonistas de este receptor mediante su modulación alostérica diferencial por fenitoína en membranas cerebrales de cerebro de cobaya. 2.- Estudiar la unión del ligando prototípico haloperidol valorando si esta unión es reversible o irreversible, y si es producida por el ligando original o alguno de sus metabolitos, en cerebro de cobaya y en una línea celular humana (neuroblastoma humano SH-SY5Y). La metodología que se ha utilizado ha sido: subfraccionamiento celular, ensayos de fijación de radioligandos y cultivos neuronales. Las principales conclusiones obtenidas han sido: 1.- La fenitoina modula alostéricamente, y de manera diferencial, la fijación de los ligandos sigma-1 en función de su actividad sobre los receptores sigma-1, por lo que sería un método in vitro fiable para discriminar entre agonista

Autor: Hurtado Rodríguez Antonio.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Institut de Recerca Hospital Vall d'Hebron.
Centro de realización: Institut de Recerca Hospital Vall d'Hebron.

Resumen: Las próstatas sin tumor y la de los pacientes con cáncer de próstata expresan el RNA mensajero y la proteína ERb1 y ERb2. La immunohistoquínica de ERb1 de los pacientes revela que el receptor se expresa tanto en el núcleo y en el citoplasma del epitelio tumoral de pacientes con grado 3 de la enfermedad y que en los de grado 4 y 5 desaparece. Los pacientes con cáncer de próstata también expresan el enzima P450 aromatasa tanto en el estroma como en el epitelio tumoral.Se desconoce cual es el patrón de expresión de ambas isoformas del receptor durante la progresión del ciclo celular. Para contestar a esta cuestión utilizamos la línea celular hormono dependiente LNCaP que expresa tanto el receptor de andrógenos como las isoformas del receptor de estrógenos b1 y b2. El análisis de expresión en las fases del ciclo ha revelado que las isoformas b1 y b2 muestran un perfil de expresión distinto. Para la isoforma b1, el nivel de la proteína fue más abundante en la fase S y bastante escasa en la fase G2/M. Por el contrario, los niveles de proteína de la isoforma b2 fueron más abundantes en las fases G1/G0 y G2/M que los de la fase S. También se pudo constatar que tanto los niveles de RNA como de proteína coincidían en cada una de las fases, sugiriendo que ambas isoformas deben estar reguladas por promotores distintos. La localización de la isoforma b1 fue tanto citoplasmática como nuclear en las diferentes fases del ciclo. En cambio la localización de la isoforma b2 fue únicamente nuclear. Experimentos de luciferasa para determinar la actividad transcripcional del receptor en las células LNCaP transfectando un vector que contiene las secuencias génicas ERE en la región promotora, revelaron que la proteína endógena de ERb1 es activa únicament en la fase S del ciclo. Para valorar la función de la proteína ERb1 en las células LNCaP se transfectaron las células con un vector de expresión constitutiva del receptor. Los resultados han mostrado que ERb1 inhibe la progresión del ciclo porque induce un bloqueo en fase G1. La proteína ERb1 induce este bloqueo impidiendo la activación del factor de transcripción AP1. La localización muy abundante de la proteína ERb2 en la fase G2/M sugiere la participación de dicho receptor en la Mitosis.

Autor: Tornavaca Lázaro Olga.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Inst.de Rec.dels H. Vall d'Hebron..
Centro de realización: CIBBIM, Institut de Recerca dels Hospitals Vall d'Hebron..

Resumen: El gen de la KAP s'expressa en les cèl.lules del túbul proximal renal murí on és estretament regulat per hormones esteroïdals i tiroïdals. Es tracta d'una proteïna de funció desconeguda que no exhibeix dominis estrucurals ni funcionals coneguts. Canvis en l'expressió del seu mRNA s'han vist associats a diferents situacions fisiopatològiques i s'ha identificat la seva interacció amb la ciclofilina B, un dels receptors de l'immunosupressor CsA. L'administració d'aquest fàrmac, que presenta una marcada toxicitat renal, disminueix els nivells de la KAP en el ronyó murí i la sobreexpressió de KAP en un sistema cel.lular renal en cultiu protegeix de la toxicitat induïda per la CsA. El propòsit del treball descrit a continuació ha estat aprofundir en la caracterització de la KAP, així com, estudiar els efectes que la CsA promou en el comportament de la proteïna KAP. Assajos in vitro i in vivo demostren que la KAP és un bon substrat per a la proteïna quinasa CK2, i que aquesta fosforilació estimula la degradació de la proteïna per un sistema depenent de calci i calpaïna. La fosforilació de KAP per CK2 no regula la localització de KAP en les diferents estructures estudiades, el reticle endoplasmàtic, l'aparell de Golgi i el nucli. No obstant, si té un efecte promotor sobre la secreció de la proteïna al medi de cultiu. La relació KAP-CypB, tant pel que fa a la colocalització en el reticle endoplasmàtic i aparell de Golgi com per la seva interacció, no es troba sota el control de la fosforilació de la proteïna KAP. En canvi, es descriu una degradació de KAP induïda per la presència de CsA sensible a l'estat de fosforilació de la proteïna. La presència nuclear de KAP, regulada per una seqüència NES identificada en KAP, s'associa a una disminució de la proliferació cel.lular deguda a una aturada del cicle cel.lular en les fases G0/G1. Aquest efecte podria donar-se per la manca d'expressió de ciclines D en les cèl.lules que sobreexpressen la KAP. Aquesta és la primera vegada que s'associa la KAP a una funció cel.lular concreta a la vegada que es descriuen nous mecanismes de control de la seva expressió. Es proposa també a la KAP com un possible nexe comú en l'evolució de la malaltia renal induïda per diversos factors.

Autor: Quilis Blasi Jordi.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Ins. de Biol. Molecular de Barcelona.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR DE BARCELONA, CONSEJO SUPERIOR INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS (CID-CSIC).

Resumen: Este trabajo se enmarca dentro de una de las principales líneas de investigación de nuestro grupo, dirigida a la evaluación de estrategias aplicables a la obtención de variedades de arroz resistentes a patógenos e insectos plaga mediante la transformación genética. El objetivo general perseguido ha sido la expresión simultánea de genes que codifican proteínas insecticidas y antifúngicas en plantas de arroz transgénicas. En primer lugar se ha evaluado la eficacia de la expresión de un gen fusión que codifica dos inhibidores de proteasas, los genes mpi de maiz (maize proteinase inhibitor) y pci de patata (potato carboxypeptidase inhibitor). Para la expresión simultánea de estos dos inhibidores de proteasas se han utilizado varias estrategias, como son 1) el uso de una secuencia viral llamada '2A' capaz de sufrir autoprocesamiento, 2) mediante una secuencia de procesamiento de la protoxina Cry1B (definida como secuencia 'C') o 3) mediante cruzamiento de líneas de arroz pci y mpi. En segundo lugar, se ha estudiado el uso de un gen regulador de la respuesta de defensa en Arabidopsis, el gen AtNPR1 (Non Expressor of Pathogenesis Related genes 1), como transgen para la expresión simultánea de genes de defensa endógenos de la planta de arroz. En la primera parte del trabajo, al evaluar la expresión del gen fusión mpi-pci en plantas de arroz, se ha comprobado que éste se expresa correctamente bajo su propio promotor y terminador de maiz. Cuando se utiliza la secuencia de procesamiento 2A para la fusión de los genes mpi y pci, el producto génico obtenido, la proteína fusión MPI-2A-PCI, se procesa parcialmente en la célula de arroz. El producto del gen mpi-C-pci se acumula en forma de poliproteína no procesada en la planta de arroz transformada. La expresión de los genes fusión mpi-pci, tanto el gen fusión mpi-2A-pci como el gen fusión mpi-C-pci dirigida por el promotor inducible del propio gen mpi, confiere protección a la planta de arroz frente la infestación de larvas del lepidóptero plaga C. suppressalis. La estrategia basada en el uso de la secuencia de procesamiento Cry1B resulta sin embargo, más eficaz para la protección frente a este insecto lepidóptero. Las larvas de C. suppressalis al ser alimentadas en plantas de arroz que expresan un gen fusión mpi-pci, presentan un peso menor respecto las larvas alimentadas en plantas control. La reducción de peso oscila entre el 23,5% y el 47% en el caso de las líneas mpi-2A-pci, y de entre 32,2% y 50% para las líneas mpi-C-pci. El efecto de la expresión de un gen fusión sobre el crecimiento de las larvas es muy superior al que se observa en el caso de la expresión del gen mpi de manera individual (30% de reducción de peso en promedio) en plantas de arroz. En el caso de las líneas obtenidas por cruces entre parentales que expresan bien el gen mpi o bien el gen pci de manera individual, se observa una reducción en el peso de las larvas alimentadas en estas plantas que oscila entre el 20% y el 40%. En otra línea de este trabajo, ha sido demostrado que la proteína PCI presenta actividad antifúngica in vitro frente hongos fitopatógenos. En presencia de este inhibidor, se observan importantes anomalías morfológicas e inhibición del proceso de elongación de las hifas de M. grisea. Además, la expresión del gen pci en plantas de arroz confiere resistencia contra los hongos fitopatógenos M. grisea y F. verticillioides. Se ha purificado y caracterizado una Carboxipeptidasa B del hongo M. grisea denominada MgCPB, que es completamente inhibida por el PCI, sugiriendo que la acción antifúngica de este inhibidor se basa, como mínimo en parte, en su capacidad para inhibir este enzima fúngico. En la segunda parte de este trabajo de tesis, se ha demostradi que la expresión constitutiva del gen AtNPR1 en arroz confiere resistencia frente los fitopatógenos fúngicos M. grisea y F. verticillioides, y el patógeno bacteriano Erwinia chrysantemi. Se ha determinado también, que la resistencia observada frente M. grisea, está asociada a un aumento en la capacidad de la planta para activar los mecanismos endógenos de 8 defensa 7e0 en condiciones de infección, concretamente la expresión de los genes PR-1b, PR-5, Sci1 (PR-6), PR-10 y PBZ. Se ha visto también, que las plantas de arroz AtNPR1 crecidas en condiciones de invernadero presentan un tamaño menor y producen menos semillas que las plantas no transformadas. Cuando las plantas de arroz AtNPR1 se crecen en condiciones de baja intensidad, desarrollan lesiones espontáneas. Estas lesiones van acompañadas de una serie de efectos citológicos como son la acumulación de superóxido (o2-) y la acumulación de compuestos fluorescentes en la pared celular, fenómenos que mimetizan la respuesta hipersensible de defensa. Contrariamente a la resistencia observada contra patógenos fúngicos y bacterianos, las plantas de arroz AtNPR1 presentan una mayor susceptibilidad a la infección por el virus RYMV (Rice Yelow Mottle Virus), desarrollando síntomas de la enfermedad vírica de forma más severa que las plantas de la variedad Sénia no transformadas. La expresión constitutiva del gen AtNPR1 en plantas de arroz provoca una mayor sensibilidad a estrés abiótico, como salinidad y sequía. Así pues, los resultados obtenidos en el transcurso de esta tesis, demuestran que el reto en la transgenia de plantas, es conseguir resistencia frente a distintos fitopatógenos o insectos plaga, siempre minimizando los posibles efectos pleiotrópicos en estas estrategias.