CIENCIAS DE LA VIDA, 15

Autor: GUILLEN FRETES ROSA MARIA.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: INSTITUTO UNIVERSITARIO ANTONIO GONZALEZ.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LA LAGUNA.

Resumen: La asimilación de nitrato es una de las ruta más importantes para la adquisición de nitrógeno en la biosfera y por tanto para la incorporación del nitrógeno inorgánico. H. polymorpha es una levadura capaz de asimilar nitrato como única fuente de nitrógeno y ha sido empleada como modelo experimental para el estudio de la vía. Los conocimientos actuales sobre la regulación de la vía de asimilación de nitrato plantean que el proceso global es el resultado del balance entre señales positivas (inducción por nitrato) y señales negativas (represión por fuentes reducidas de nitrógeno). Hasta el momento se han aislado genes que participan en la inducción por nitrato (YNA1 e YNA2) y en la represión/desrepresión por fuentes de nitrógeno preferenciales (URE2, GAT1, GLN3, GZF3, DAL80 y DEH1), además de que evidencias indirectas indican la participación de la vía de señalización mediada por las Tor quinasas.

Autor: Ramírez Hidalgo Cristina Micaela.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: Universidad de La Laguna.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: En este trabajo de tesis doctoral se identifican y caracterizan varias formas de un receptor de estrógenos alpha en la membrana plasmática de las células SN56 y HT22 y en áreas cerebrales particularmente afectadas en procesos degenerativos, tales como el septum, la corteza y el hipocampo. En estos modelos celulares demuestran la participación de una forma de membrana del canal VDAC, conocido tradicionalmente como porina mitocondrial, en la preservación neuronal frente al efecto tóxico del péptido beta amiloide. Los estudios realizados sobre el receptor de estrógenos de membrana y VDAC, así como los datos previos indicativos de una posible relación molecular entre ambas, condujeron a la primera evidencia experimental de la asociación entre estas dos proteínas en la membrana plasmática neuronal. Estos nuevos datos sobre la asociación del receptor de estrógenos de membrana y VDAC y sobre la ubicación conjunta en dominios de señalización como las caveolas, abren nuevas vías de estudio sobre la modulación y regulación de este complejo proteico en relación a los fenómenos de neuroprotección estrogénica iniciados a nivel de la membrana plasmática.

Autor: SICILIA MARTÍN DESSIRE C..
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTA DE FARMACIA.

Resumen: ESTUDIO TAXONÓMICO Y SISTEMÁTICO DE LA BIOTA LIQUÉNICA DE GARAJONAY CON DATOS A CERCA DE SU DISTRIBUCIÓN EN EL PARQUE Y LA CORRELACIÓN CON LA VEGETACIÓN CORMOFÍTICA. UTILIZACIÓN DE LOS LÍQUENES COMO BIOSENSORES DE LA POTENCIAL CONTAMINACIÓN DERIVADA DE LA CENTRAL TÉRMICA DE GRANADILLA (SUR DE TENERIFE).

Autor: CABALLER GUTIERREZ MANUEL.
Año: 2006.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: E.T.S. DE INGENIEROS DE CAMINOS, CANALES Y PUERTOS.
Centro de realización: E.T.S. DE INGENIEROS DE CAMINOS, CANALES Y PUERTOS.

Resumen: Con la finalidad de determinar la identidad de las especies crípticas de sacoglosos y opistobranquios presentes en la bahía de Santander, se revisan los 5 géneros que las contienen: Hermaea Lovèn ¡, 1844; Hermaeopsis Costa, 1869, Placida Trinchese, 1879, Cuthona Alder y Hancock, 1855 y Eubranchus Forbes, 1838. Se estudia para ello material procedente de ambas orillas del Atlántico norte. En el género hermaea, tres especies han resultado ser nuevas para la ciencia, una de ellas ya publicada (Hermaea ghanensis Caballer, Ortea y Moro, 2006). Una cuarta, Hermaea Coirala Marcus, 1955, se redescribe citándola ambos lados del Atlántico. Adicionalmente, se describe la primera especie atlántica del género Alderiopsis Baba, 1968, Alderiopsis garfio, Caballer, Ortea y Esponosa, 2006, mezclada con las anteriores. En el género Placida, se establecen los caracteres diagnósticos de todas las especies atlánticas del género con el digestivo verde, aclarando el problema histórico de sus sinonimias. Se redescribe una especie que era conocida tan solo apartir de su descripción original. Placida dakariensis (Pruvot-Fol, 1953). En el género Cuthona, se demuestra que le supuesto para Cuthona genovae (O'Donoghue, 1926) - Cuthona folaita (Iforbes y Goodsir, 1839), es en realidad una sola especie. En el género Eubranchus, se recupera el nombre Eubranchus capellinii (Trinchese, 1879), una especie tradicionalmente considerada sinónima de Eubranchus doriae (Trinchese, 1873), que a su vez permanece incierta. Adicionalmente se redescribe otra especie críptica, Eubranchus cingulatus (Alder y Hancock, 1847). También, se cita por primera vez par la Península Ibérica una especie de reciente descripción, Eubranchus vascoi Ortea, Caballer y Moro, 2002. Se realiza un catálogo ilustrado y comentado de las 82 especies de moluscos sacoglosos y opistobranquios colectadas en la bahía de Santander, aportando datos de su anatomía, biología y distribución. Siete de estas especies se citan por primera vez para la fauna Ibérica.

Autor: TURON PLANELLA CLAUDIA.
Año: 2006.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS..
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: EDSS-maintenance prototype: An environmental decision support system to assess the definition of operation and maintenance protocols for horizontal subsurface constructed wetlands El tractament d'aigües residuals ha esdevingut un tema ambiental fonamental per al manteniment de la qualitat dels recursos hídrics. En aquesta línia, la Directiva Europea 91/271 fixa les pautes per a les Estacions Depuradores d'Aigües Residuals (EDAR) en termes de tipus de tecnologia i nivell de tractament requerit. Sigui quina sigui la tecnologia i el nivell de tractament requerits, les EDAR es poden considerar sistemes complexos perquè es tracta de dominis mal estructurats que es basen en processos de depuració dinàmics i poc definits. Aquests factors (domini i processos) dificulten el manteniment de l'eficàcia dels processos de depuració. El manteniment de la qualitat de l'efluent de les EDAR és un aspecte molt important, no tan sols per a les regulacions ambientals i socials cada vegada més restrictives, sinó també per motius econòmics. Les característiques especials de les EDAR fan que els models numèrics convencionals no siguin suficients per a un bon maneig quan (1) l'estat dels processos de les EDAR estan lluny del seu estat operacional normal i (2) el raonament amb informació qualitativa és essencial per tractar els problemes. En aquest sentit, els Sistemes d'Ajuda a la presa de Decisions en dominis Ambientals (SADA) han generat moltes expectatives com a eines per afrontar la complexitat associada al maneig de les EDAR. Un SADA es pot definir com un software interactiu, flexible i adaptable, que combina models/algoritmes numèrics amb tècniques basades en el coneixement, informació geogràfica i ontologies ambientals, i dóna suport als responsables ambientals en les eleccions entre alternatives. Els SADA permeten (1) manejar grans volums de dades; (2) incorporar coneixement expert; (3) afrontar la incertesa de les dades i del coneixement; (4) integrar les dades i el coneixement, a través de diversos models, en un software; (5) avaluar alternatives múltiples; (6) diagnosticar una situació anormal i proposar una teràpia per a solucionar els problemes i (7) proporcionar solucions offline o online. Aquesta tesi s'ha desenvolupat en el marc d'un projecte que té per objectiu la construcció d'un SADA per donar suport a la definició de protocols d'operació i manteniment per a EDAR petites. Aquestes instal·lacions tenen un maneig més complex que les grans EDAR perquè l'escassa disponibilitat de recursos econòmics, humans i tècnics limita el correcte funcionament d'aquestes instal·lacions. Una tecnologia comú a les EDAR petites és la de Sistemes d'Aiguamolls Construïts de Flux Subsuperficial Horitzontal (SAC de FSH). Per aquest motiu, l'objectiu principal d'aquesta tesi és desenvolupar un SADA per donar suport a la definició de protocols d'operació i manteniment per a SAC de FSH (SADA-manteniment prototip). Un altre objectiu d'aquesta tesi és proporcionar algunes pautes per a desenvolupar un SADA que englobi les tecnologies de tractament més comuns en EDAR petites (SADA-manteniment) (2. Objectius). El primer pas per assolir l'objectiu de la tesi va ser la selecció d'una metodologia per a desenvolupar el prototip del SADA-manteniment. Vam escollir la metodologia de cinc etapes proposada per Poch et al. (2004) perquè (1) ha estat aplicada amb èxit en la construcció de set SADA en el marc de la gestió de l'aigua i (2) proporciona certa flexibilitat per adquirir i integrar les dades i el coneixement requerits per a solucionar els problemes ambientals de l'aigua, i per representar aquesta informació a través de diversos models (3. Metodologia per a desenvolupar un SADA). El desenvolupament del SADA-manteniment va començar amb l'anàlisi del problema ambiental (4.1. Anàlisi del problema ambiental). Una àmplia recerca bibliogràfica va permetre caracteritzar la complexitat associada a les EDAR petites i a la tecnologia dels SAC de FSH. A partir d'aquesta informació es van identificar 8 els requ e9f eriments per a desenvolupar el prototip del SADA-manteniment. Aquesta informació es va obtenir de diverses fonts: (1) literatura, (2) una enquesta distribuïda a 13 EDAR petites que es basen en la tecnologia de SAC de FSH i (3) visites. Totes les dades i coneixement obtinguts van ser analitzats utilitzant la categorització, i després es van organitzar en termes de: problemes, modes, efectes, causes, controls i accions. D'aquest estudi es van identificar i caracteritzar 18 problemes (4.2. Adquisició de dades i coneixement). El pas següent en el desenvolupament del prototip del SADA-manteniment va ser la selecció d'una metodologia per a representar les dades i coneixement adquirits. Després d'una anàlisi d'aquesta informació i dels mètodes disponibles per a la representació vam escollir el Sistema Basat en Regles (SBR). En aquest pas també es van seleccionar Java i Drools com a software per a construir el prototip del SADA-manteniment (4.3. Selecció del model). En la fase següent va tenir lloc la representació de les dades i el coneixement adquirits segons la metodologia de SBR. En primer lloc, la informació dels SAC de FSH es va organitzar en 37 arbres de decisió i una matriu. A continuació aquesta informació es va traduir en regles del tipus IF-THEN, travessant cada branca dels arbres de decisió de l'arrel a la fulla o creuant les columnes i les files a la matriu (4.4. Implementació i integració dels models). Un pas important en el desenvolupament del prototip del SADA-manteniment va ser el procés d'avaluació que té per objectiu verificar si hem construït el sistema correctament i validar si hem construït el sistema correcte. Per a realitzar aquesta avaluació vam proposar una metodologia basada en quatre passos: (1) verificació, (2) validació de laboratori amb dades històriques, (3) validació de laboratori amb experts i (4) validació de camp. Aquesta metodologia inclou dues funcions matemàtiques per quantificar l'eficàcia del SADA (4.5. Procés d'avaluació). Al llarg del desenvolupament del prototip del SADA-manteniment es van fer una sèrie de recomanacions per a desenvolupar el SADA-manteniment complet. Aquestes propostes es basen en les modificacions fetes en la metodologia de cinc etapes i en l'experiència adquirida durant el desenvolupament del prototip del SADA-manteniment. El primer objectiu d'aquestes recomanacions és millorar l'adquisició de les dades i del coneixement (quantitat i qualitat). Llavors aquestes recomanacions se centren en l'anàlisi i representació d'aquesta informació, i conclouen amb uns consells per al procés d'avaluació del SADA-manteniment. En la tesi també es presenta el funcionament del prototip del SADA-manteniment desenvolupat i un exemple de protocol d'operació i manteniment per a un SAC de FSH particular, per il·lustrar les capacitats del prototip del SADA-manteniment (5. Funcionament del prototip del SADA-manteniment). Finalment, en el capítol 6 (6. Conclusions) s'enumeren les conclusions principals derivades d'aquesta tesi i es presenten alguns reptes a afrontar en el futur.

Autor: PRADO VILLEGAS PATRICIA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: La reevaluación a gran escala espacial (menor de 300 Km) y mediante métodos de cuantificación directa, del impacto del herbivorísmo en los ecosistemas de Posidonia oceánica revela pérdidas de biomasa foliar muy superiores a anteriores estimas basadas en métodos indirectos (i.e., frecuencia de marcas de acción). En un promedio anual, los herbívoros causan la pérdida de aproximación el 57% de la producción foiliar, si bien existen grandes diferencias estacionales y las mayores presiones se producen durante el periodo estival. El pez Sarpa salpa se erige como el herbívoro principal, con unas tasas de defoliación de ca. 40% de la producción foliar anula (70% del herbivorísmo) seguido por el erizo del mar Paracentrotus lividus (17% de la producción foliar y 30% del herbivorísmo). No obstante, se detecta también la existencia de una gran variabilidad espacial, con valores de presión de herbivorísmo que fluctúan entre el 23 y más del 85% de la producción foliar en función de la localidad. Entre los factores causantes de tales diferencias, la pesca y la disponibilidad de P.oceanica como hábitat y como recurso de alimentación, fueron identificados como los más influyentes en la estructura poblacional de S.salpa. El efecto de la presión pesquera resulta en una disminución del número de individuos y por tanto de la presión de herbivorísmo. Por el contrario, el efecto de la disponibilidad de P.oceanica dentro de la extensión territorial de S.salpa, causa su concentración sobre el recurso, y por tanto, el incremento de la presión deherbivorísmo. Por lo que respecta al erizo de mar P.lividus, el aporte de nuevos individuos a la población se produce por dos proceso fundamental: la migración desde el substrato rocoso en contacto con la pradera y al disponibilidad de estructura de mata del rizoma de P.oceanica como elemento vinculado al refugio y/o alimentación de los estadios tempranos de esta especie y sin la cual no se detecta reclutamiento. Otros factores de variabilidad tales como cambios cuantitativos y cualitativos inducidos por la disponibilidad de nutrientes (e.g. Biomasa y composición de las comunidades de epífitos foliares, contenido de nutrientes en planta y epífitos), si bien, capaces de alterar las preferencias de s.salpa por P.oceanica, poseen, a la escala espacial estudiada, un rango de variabilidad inferior a los factores de tipo paisajístico y a la influencia de la pesca. Por lo tanto, los resultados de esta tesis indican que la presión de herbivorísmo puede alcanzar magnitudes localmente muy relevantes y que resultan de la interacción entre las alteraciones humanas en el medio (i.e., pérdida de hábitat y reducción de las abundancias de herbívoros) y la biología de las especies en cuanto a su particular uso del hábitat.

Autor: FERNÁNDEZ SANTIDRIÁN ANTONIO.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: En la tesis doctoral se ha estudiado los mecanismos de inducción de drogas que afectan directamente a la mitocondria, como es el caso de 2-metoxiestradiol y PK11195 en la leucemia linfocíticacrónica. Además se ha estudiado el mecanismo de inducción de apoptosis por acadesina en la leucemia linfocítica crónica, así como se ha analizado los efectos de acadesina sobre la linfocitosis in vivo en ratones Balb/c. Durante el trabajo desarrollado hemos mostrado que 2-ME induce apoptosis a través de un mecanismos en el que podría estar implicado VDAC o canales de cloro mitocondriales. Sin embargo, las células B normales son iguales de sensibles que las células de LLC.2-ME induce los genes NOXA y PUMA. Un efecto interesante es la observación que el Ruthenium Red (RuR), un inhibidor de canales de calcio unidireccionales de la mitocondria, sensibiliza de forma clara a la células de LLC a dosis muy bajas de 2-ME. A raíz de los estudios con 2-ME, nos planteamos analizar el efecto de otras drogas de acción mitocondrial que tuvieran como diana alguna de las proteínas que forman el PTPC, para analizar el efecto de la alteración de este grupo de proteínas en la apoptosis de las células de LLC. PBR es una proteína que se encuentra sobreexpresada en la LLC. Observamos que PK11195, un ligando de PBR, induce apoptosis en las células B de LLC y también en los linfocitos B de donantes sanos, mientras que los linfocitos T son más resistentes. Sin embargo, actualmente, la diana propaoptótica de PK11195 no está clara y la participación de PBR es controvertida. Es la primera vez que se describe que PK11195 induce apoptosis, y no sólo sensibilización, en células leucémicas primarias. Además, el estudio del mecanismo nos ha mostrado que PK11195 induce apoptosis de forma independiente de p53, dato de interés para su posible uso en pacientes refractorios a la quimioterapia actual. El objetivo principal de la tesis fue estudiar el mecanismos de inducción de apoptosis por acadesina en las células de LLC. Antes del inicio de la tesis observábamos que la activación de AMPK siempre correlacionaba con la inducción de apoptosis. Sin embargo, hemos mostrado que la activación de AMPK, con otros activadores como fenformina o A-769662, es insuficiente para inducir apoptosis. Hemos observado que acadesina induce una caída del ATP intracelular. Además, hemos observado que acadesina induce apoptosis a través de la vía mitocondrial, y induce cambios en los miembros de la familia de BCL-2. Por último, acadesina es una droga que posiblemente entrará durante el año 2007 en ensayos clínicos. Debido al trabajo desarrollado, hemos demostrado que acadesina también puede tener efectos sobre la linfocitosis in vivo de ratón, y aunque hay que esperar a los ensayos en humanos, éste es un dato esperanzador de cara a que tenga actividad después de una administración sistémica.

Autor: BAO CUTRONA MERITXELL.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA (UNVIERSIDAD DE BARCELONA).

Resumen: El objetivo principal de la tesis era crear un sistema condicional para el estudio in vivo (ratones transgénicos) en el que la expresión de una proteína a (SOD1, portador dela mutación G93A) se pudiera controlar. Hasta ahora la Esclerosis Lateral Amiotrófica de tipo familiar se ha analizado mediante modelos transgénicos clásicos. A partir de estos modelos se han elaborado distintas hipótesis sobre cual pudiera fuer la relación causa-consecuencia entre la proteína SOD1 y los mecanismos moleculares causantes de degeneración (muerte de las motoneuronas) y por tanto los símptomas clínicos manifestados en los ratones modelos. Pero el mecanismo/s exacto que desencadena la patología se desconoce todavía. Por este motivo, decidimos que sería interesante poder controlar los lapsus de tiempo en el que la proteína mutante estuviera presente en las células del organismo transgéncio, y así poder estudiar la reversibilidad el fenótipo, y entender que mecanismos clave estaban implicados en la patología. Para realizar esto, nos propusimos construir un sistema condicional (basado en tetraciclina; tet-off) apoyado por ejemplos exitosos publicados. En particular, el sistema tet-off está compuestos por dos elementos: un elemento activator (de la expresión) y un elemento responsivo (a partir del cual se controla la expresión del gen humano clonado y de interés). Por ello, seleccionamos este sistema, puesto que nos permitía clonar el cDNA de la SOD1 que codifica para la proteína mutante conocida como G93A (indica la mutación sobre la posición amonoacídica) y controlar su expresión en el tiempo y en el espacio (por ejemplo el sistema nervioso, dónde la enfermedad se manifiesta). Así pues generamos ocho líneas viables de ratones trasngénicos "responsivos" que se cruzaron con la cepa de ratones "activadores" los cuales son portadores de un transgen en el que la expresión del elemento "tTA" (que evoca la actividad transcripcional del promotor responsivo) está bajo el control del promotor del gen para la proteína priónica de hámster. Desgraciadamente, se observó que el sistema tet-off manifestaba claras dificultades en su funcionamiento in vivo. Así pues, nos concentramos en intentar diseccionar los posibles aspectos que afectaban su función para intentar reparar y restablecer el modelo deseado. El efecto principal consistía en la expresión restringida a pocos tipos celulares, básicamente los receptores de la mucosa olfativa. El análisis de los niveles y distribución del ARN mensajero y proteína para el tTA, la SOD1 humana y EGFP (su cDNA reporter iba incluido en el transgén responsivo), demostraron que tTA estaba presente en todo el sistema nervioso. Además la proteína se detectó en los extractos de núcleos de cualquier área del mismo sistema. A pesar de ello la activación del responsivo solo ocurría en tipos específicos del epitelio olfativo, dónde por cierto, se manifestaba como un patrón heterogéneo, que clásicamente se ha relacionado a regulación epigenética ya fenómenos de interferencia de ARN. Nos propusimos analizar los niveles de metilación del ADN del constructo para averiguar si la respuesta transcripcional estaba reprimida por causas epigenéticas. De hecho se detectó que las secuencias principalmente metiladas correspondían aquellas de origen procariota (Virus y bacterias), y que su distribución correlacionaba con los niveles de expresión observados. De todas formas este fenómeno no explicaba el porqué de la restricción observada, y sugiere que factores adicionales interfieren en la regulación de la respuesta transcripcional de este sistema, que posiblemente estaría en relación a otras observaciones como la dependencia inversamente proporcional entre el número de copias y los niveles de expresión y/o la robustez del patrón a pesar del cambio de cepa de ratones.

Autor: ESCALONA ARAS NOELIA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA. UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El GMPc es un mensajero intracelular que actúa como mediador de importantes acciones del óxido nítrico y del péptido natriurético atrial. Se ha descrito una reducción notable del contenido de GMPc en el miocardio de rata y de cerdo sometidos a una isquemia transitoria. Además, se ha demostrado que el GMPc reduce el daño miocárdico por reperfusión. En este trabajo se han investigado los mecanismos que modulan la concentración de GMPc durante la isquemia y reperfusión miocárdicas en células endoteliales microvasculares coronarias y en caridomiocitos de rata adulta. En células endoteliales microvasculares, la isquemia simulada (hipoxia en condiciones ácidas) reduce drásticamente el contenido de GMPc basal y la capacidad de estas células para sintetizar GMPc en respuesta tanto a la estimulación de la guanilil ciclasa sensible a NO (GC-NO) como de la guanilil ciclasa particulada (GCp). La acidosis y la depleción energética participan en esta reducicón. En cardiomiocitos de rata, la isquemia reduce la síntesis de GMOc dependiente de la actividad guanilil ciclasa particulada, pero no afecta de forma significativa la síntesis mediada por guanilil ciclasa dependiente de NO. El efecto de la acidosis sobre la síntesis de GMPc parece ser un efecto directo sobre la actividad de los enzimas de síntesis (GC-NO y GCp) dada la causada dependencia del pH que se observa cuando se determina la actividad in vitro. La reperfusión simulada revierte completamente los efectos de la acidosis previa en los dos tipos celulares, era sólo parcialmente la reducción inducía por hipoxia. El hecho de que en cardiomiocitos la síntesis de GMPc mediada por GC-NO no se vea afectada por condiciones de acidosis intracelular, cuando el enzima es extremadamente sensible al pH in vitro, ha de pensar en una regulación compleja del enzima durante la isquemia-reperfusión. En este sentido, se ha descrito recientemente que la actividad GC-NO puede encontrarse asociada a la membrana plasmática de tejido miocárdico y de plaquetas, donde la translocación del enzima tendría lugar durante le proceso de activación de éstas y estaría regulada por el calcio intracelular. En la última parte de este trabajo se ha analizado la posible importancia funcional de la actividad GC-NO asociada a la membrana de los caridomiocitos. Se observó que un tercio de la GC-NO se encontraba asociada a la fracción de membrana de estas células. Los enzimas citosólico y participado in vitro presentan las mismas características cinéticas para los factores analizados: GTP, NO, pH y calcio. Se observó que la entrada de calcio en la célula provoca la translocación de la GC-NO a la membrana, aumenta la actividad en esta fracción e incrementa la respuesta de la célula donadores de NO. Este efecto es potenciado tanto por inhibidores de proteína quinasas como por inhibidores de fosfatasas, lo que sugiere un mecanismo de regulación complejo a través de fosforilación y desfosforilación de proteínas (incluyendo probablemente la propia GC-NO y proteína reguladoras). Finalmente, el efecto sobre la síntesis de GMPc de diferentes agentes farmacológicos utilizados en caridomiocitos aislados se correlaciona con el efecto de estas mismas drogas sobre la actividad del enzima asociado a la membrana, lo que sugiere que le enzima asociada la membrana determina en gran parte la síntesis de GMPc dependiente de NO en este tipo celular.

Autor: POYATOS LÓPEZ RAFAEL.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La transpiración de dos especies forestales representativas de la media montaña mediterránea (Pinus sylvestris y Quercus pubescens) fue medida con métodos de flujo de savia, en el área experimental de Vallcebre (Pirineo Oriental). La regulación de la transpiración por parte de ambas especies fue estudiada en relación a diferentes variables meteorológicas, humedad del suelo y otros parámetros fisiológicas de la planta. Además, la fisiología de P.sylvestris con respecto a la demanda evaporativa y la disponibilidad de agua, fue estudiada a lo largo de su área de distribución.

Autor: MATEO LOZANO SILVIA.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: HOSPITAL UNIVERSITARIO VALL D'HEBRON.
Centro de realización: AUTONOMA DE BARCELONA.

Resumen: La familia de tumores del sarcoma de Ewing (ESFT) incluye un grupo heterogéneo de neoplasias formadas por células redondas de pequeño tamaño con mínima evidencia morfológica de diferenciación, o por células más grandes con diferentes grados de diferenciación neuroectodérmica. El sarcoma de Ewing es el segundo tumor óseo más frecuente, afectando fundamentalmente a niños y adolescentes. Aunque aparece preferentemente en hueso, aproximadamente un 15 % de los pacientes presentan tumores primarios en tejidos blandos. El tratamiento actual combina dosis elevadas de agentes quimioterapéuticos para el control sistémico de la enfermedad, con cirugía y/o radiación para el control local. A pesar del uso de terapias multimodales y medidas agresivas de control local, la supervivencia de pacientes con metástasis es menor del 30 %, mientras que en ausencia de enfermedad metastásica, es aproximadamente de 50-70 %. Debido a esto, son necesarias nuevas aproximaciones terapéuticas dirigidas a reducir la morbilidad relacionada con el tratamiento y a mejorar el índice de supervivencia. Afortunadamente, los ESFT presentan una diana molecular perfecta que resulta de la translocación cromosómica que define a este tipo de tumores, e involucra al gen EWS y a un miembro de la familia de factores de transcripción ETS (Erytroblastic Transforming Sequence), fundamentalmente FLI-1 o ERG. La translocación más común, t(11;22)(q24;q12), genera la formación de la oncoproteína de fusión EWS/FLI-1 que actúa como factor de transcripción y regula de forma aberrante la expresión de genes diana, favoreciendo de esta forma el proceso tumorigénico. De esta forma la inactivación de la proteína de fusión EWS/FLI-1 se convierte en una estrategia atractiva, no sólo debido a su especificidad en células transformadas, sino también por su función fundamental en la tumorigénesis de ESFT. En este estudio se evaluaron diferentes estrategias dirigidas a reducir los niveles expresión de EWS/FLI-1 in vitro e in vivo. La primera estrategia utilizada para inhibir los niveles de expresión de la proteína de fusión EWS/FLI-1 se basó en el uso de la rapamicina, un antifúngico e inmunosupresor con propiedades anticancerígenas, resultando en la inhibición de la vía de señalización de mTOR/p70s6K. El rapamicina inhibió la proliferación de células de ESFT sin causar apoptosis, sugiriendo el uso de esta droga como agente citostático en el tratamiento de este tipo de tumores. La segunda aproximación terapéutica se basó en la inhibición simultánea de EWS/FLI-1 a nivel transcripcional y post-transcripcional mediante el tratamiento combinado de oligonucleótidos antisentido y rapamicina. Los resultados mostraron un incremento en la muerte de células de ESFT, a través de un proceso que involucra la restauración de la vía de señalización pro-apoptótica del TGFß1/TGFß-RII. Además, los ensayos in vivo en ratones inmunodeprimidos mostraron un retraso en el crecimiento de los tumores. Estos datos aportan la base para una mayor exploración del potencial del tratamiento combinado como una nueva estrategia en el tratamiento de este tipo de tumores. Los tumores de la familia del sarcoma de Ewing presentan alteraciones en proteínas reguladoras del ciclo celular, incluyendo la sobreexpresión de proteínas quinasas ciclina-dependientes (CDK) y la pérdida o baja expresión de sus inhibidores. Basándonos en ésto, la tercera estrategia se basó en la reversión de alguna de estas alteraciones, mediante el uso de la roscovitina, un potente inhibidor de la actividad quinasa de las CDKs. Los resultados mostraron que la roscovitina induce apoptosis en células de ESFT in vitro e in vivo, por un mecanismo dependiente de la activación de caspasas. Numerosos estudios han identificado genes cuya expresión se encuentra regulada por la expresión de EWS/FLI-1, favoreciendo de esta forma el proceso tumorigénico. Con el objetivo de identificar y evaluar nuevas proteínas que interactúan 8 con EWS/ 4e3 FLI-1 y contribuir de esta forma a la comprensión de los mecanismos de transformación, identificamos como una diana directa de EWS/FLI-1 a caveolina-1, proteína involucrada en gran variedad de procesos celulares, tales como endocitosis, homeostasis del colesterol, transducción de señales y tumorigénesis. Los resultados de este trabajo mostraron que caveolina-1 juega un papel determinante en la tumorigénesis de células de ESFT y su inhibición podría permitir el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas moleculares dirigidas a mejorar el tratamiento de los pacientes de ESFT.

Autor: Pérez Lluch Sílvia.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Centre d'Investigació i Desenvolupament (CSIC).
Centro de realización: Institut de Biologia Molecular de Barcelona.

Resumen: Els gens homeòtics són els encarregats del correcte desenvolupament dels organismes. A Drosophila, aquests gens s’agrupen en dos clusters: el Complex Antenapèdia i el Complex Bitòrax (BX-C). El BX-C està format per tres gens homeòtics: l’Ultrabithorax, l’Abdominal-A i l’Abdominal-B (Abd-B) i per les seves regions reguladores. L’expressió de l’Abd-B, concretament, es troba conduïda per quatre dominis reguladors (iab-5 a iab-8). En el nostre treball, hem aprofondit en l’estudi dels elements reguladors de l’expressió de l’Abd-B i en la contribució de GAGA en la seva regulació. En primer lloc, hem identificat dues noves regions hipersensibles a la digestió amb nucleases al domini iab-6, que suggereixen la presència d’elements reguladors en aquesta regió. Mitjançant assajos amb gens reporter, hem observat que la regió més proximal mostra silenciament i Pairing-Sensitive Silencing dependent de proteïnes del Grup Polycomb, indicant que es comporta com a un PRE (Polycomb Reponse Element). D’altra banda, hem observat que la presència de llocs lliures de nucleosomes als elements reguladors és una característica molt conservada al llarg del desenvolupament de l’organisme i que no depèn de l’estat transcripcional de la regió ni del recrutament de proteïnes dels grups Polycomb o Trithorax als PREs. Si bé, aquestes hipersensibilitats només són observables quan l’element regulador és funcional. Finalment, hem observat que la disminució de la proteïna GAGA en estadis tardans del desenvolupament larvari indueix la desregulació de l’expressió de l’Abd-B al segment abdominal A6, suggerint que els patrons d’expressió establerts per les proteïnes dels grups Polycomb i Trithorax no són inalterables.

Autor: MARTÍNEZ GALLO MÓNICA.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: HOSPITAL DE LA SANTA CREU I SANT PAU..
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA. HOSPITAL DE LA SANTA CREU I SANT PAU..

Resumen: Las inmunodeficiencias primarias o congénitas (IDP) constituyen un grupo de enfermedades de etiología diversa que tienen en común un defecto cualitativo o cuantitativo del sistema inmunitario a consecuencia del cual se alteran sus funciones, comprometiendo la defensa contras la agresiones externas. En la actualidad, se ha flexionado esta definición dadno cabida a un mayor espectro de enfermedades que afectan al sistema inmune, y que no siempre implican un mayor aumento en la frecuencia de las infecciones, como aquellas que afectan a la homeostasis del sistema inmune. En el presente trabajo se describen las características clínicas e inmunológicas de tres pacientes con IDP monogénicas, dos pacientes con Síndrome de Hiper-IgM, varias familias con Síndrome Linfoproliferativo Autoinmune ALPS y un paciente con linfoproliferación de células T doble positivas, en los que se llevó a cabo el diagnóstico molecular. Se analizó la capacidad oxidativa mediante NBT en granulocitos estimulación con PMA y E.coli, en una paciente que sufria infecciones de repetición desde la infancia por bacterias catalasa positiva, observándose la falta de producción de superóxido. Se realizó el estudio genético de la subunidad p47-phox de la NADPH oxidasa y se encontró que la mutación responsable del defecto en la fagocitosis era una deleción del dinucleótido GT al inicio del exón 2 del gen NCF1, siendo diagnosticada de Enfermedad granulomatosa Crónica (ECG). Se estudió un paciente con infecciones de repetición desde los primeros meses de vida con lifnopenia T y B. Se realizó el diagnóstico de Déficit de ADA a través de un ensayo de actividad enzimática. Posteriormente, se llevó a cabo un trasplante alogénico de un donante emperantedo haploidéntico. La recuperación del sistema inmunollógico del paciente tras el trasplante fue evidente. Se estudió un paciente varón con sospeccha clínica de IDP humoral que mostró un número disminuido de células B . Se examinó la presencia de las cinasa Btk por tinción intracelular mediante citometría de flujo y western blot, el resultado puso de manifiesto la falta de expresión de la proteína en el paciente. Se realizó el análisis genético del gen BTK, encontrando una nueva mutación Gln-103-STOP (Q 103X) que afecta al dominio PH de la proteína, por lo que fue diagnosticado de Agammanglobulinemia ligada al cromosoma X (XLA) con una correlación completa entre el genotipo, expresión proteíca y fenotipo clínico. la aproximaicón pro métodos bioquímcios y funcionales proporciona un diagnóstico rápido, imprescindible para aplicar un tratamiento precoz, como se ha llevado a cabo en los pacientes con ECG, Déficit de ADA y XLA. El Síndrome de Hiper Ig-M incluye una serie de defectos moleculares que afectan directa o indirectamente al linaje B. En los dos casos estudiados se descartó que fuesen formas debidas a alteraciones en alguna de las dos moléculas principales del eje CD40-CD40L. Se analizó mediante citometría de flujo la expresión de HLA-DR, CD25 e ICOS sin encontrar alteraciones. Se estudió la presencia de células B de memoria analizando la expresión de IgM y CD27 en células B CD20 positivas, encontrando ausente esta población en los dos pacientes. Se realizó el estudio genético del gen AID, así como de las regiones constantes de las cadenas pesadas IgG1 e IgG2 de las inmunogloblinas, sin encontrar alteraciones en ninguno de los pacientes. Aunque aun se desconocen las bases moleculares en los dos casos de Hiper IgM aquí presentados, los hallazgos clínicos e inmunológicos están bien caracterizados y el hecho de no encontrar células memoria B CD27 en ninguno de los casos, nos indica que el defecto que da lugar a un cambo de isotipo alterado, podría encontrarse en este proceso tras la rotura del DAN y nos permite caracterizarlos dentro del grupo HIGM4. Por último, se ha estudiado una población doble positiva (DP) en un paciente con patolgoía respiratoria. Las características de la población DP indican que fenotipicamente 8 se trata 73c de una población T CD3CD4Cd8ab, que funcionalmente pertenece a la estirpe de células T CD4. Se encontró un aumento en la expresión de la integrina CD103 y del receptor de quimiocinas CCR6 en la población DP, que junto a la presencia de estas en el órgano diana, justifican su tropismo a mucosa pulmonar y relaciona dicha población con la patología respiratoria. Aunque el paciente no presentó organomegalia/linfoadenopatía, linfocitosis u otros rasgos de malignidad, el análisis de las cadenas beta y gamma del TC mostró reordenamietnos clonales. El estudio citogenético mostró alteraciones cromosómics surigiendo un estado preleucémico, que requería alteraciones genéticas adicionales para desarrollar un proceso neoplásico franco. Los resultados de esta Tesis muestran que la complejidad de las patologías que afectan al sistema inmunológico, requiere técnicas cada vez más innovadoras y específicas para determinar los defectos responsables de un fenotipo concreto. El estudio genético, molecular y funcional sistemático de estas enfermedades o permite diagnosticar y clasificar entidades ya descritas así como abordar el diagnóstico de nuevas patologías.

Autor: Andreu Martín Nuria.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultad de Biociencias.
Centro de realización: Instituto de Biotecnología y de Biomedicina.

Resumen: El conocimiento de los factores de virulencia de Mycobacterium tuberculosis es primordial para el desarrollo de nuevos fármacos y vacunas, esenciales para combatir esta enfermedad infecciosa que causa anualmente 1,7 millones de muertes. Una característica distintiva de las cepas virulentas de M. tuberculosis es la capacidad de fijar el colorante rojo neutro en su forma ácida. En trabajos anteriores se refutó la relación, ampliamente aceptada hasta el momento, entre este comportamiento y el sulfolípido (un componente de la envuelta celular); y se determinó que el gen Rv0577, cotranscrito con el posible regulador transcripcional Rv0576, confería a M. smegmatis (una micobacteria saprófita) el fenotipo rojo neutro positivo de las cepas virulentas de M. tuberculosis. En el presente trabajo, mediante fusiones transcripcionales y el análisis con microchips, se ha demostrado que el gen Rv0576 es, efectivamente, un regulador transcripcional que reprime la expresión del operón Rv0576-Rv0577. Sin embargo, el estudio de cepas mutantes y complementadas en estos genes ha mostrado que ninguno de estos dos genes es necesario para la tinción con rojo neutro de M. tuberculosis, ni para la virulencia en el modelo de infección murino. Asimismo se ha comprobado que M. tuberculosis, in vitro, forma poblaciones celulares heterogéneas para el carácter rojo neutro y para la síntesis de dimicocerosatos de ftiocerol, unos lípidos de la envuelta celular relacionados con la virulencia del bacilo. Los mutantes espontáneos rojo neutro negativos revierten, con cierta frecuencia, al fenotipo salvaje; mientras que no se ha detectado reversión en los mutantes en la síntesis de dimicocerosatos de ftiocerol, que se acumulan con las sucesivas resiembras de M. tuberculosis, hasta resultar en la población mayoritaria. Estas observaciones, y la relación de la tinción con rojo neutro y de los dimicocerosatos de ftiocerol con la virulencia de M. tuberculosis, ponen de manifiesto la necesidad de comprobar estos fenotipos antes de realizar el análisis de la virulencia de una determinada cepa o mutante de M. tuberculosis.

Autor: GOMEZ MORUNO ANTONIO.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: UNIVERSITAT AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: INSTITUT DE BIOTECNOLOGIA I BIOMEDICINA (UNIVERSITAT AUTONOMA DE BARCELONA).

Resumen: LA PREDICCION BIOINFORMATICA DE FUNCION A PARTIR DE LA SECUENCIA PROTEICA ES UNA HERRAMIENTA FUNDAMENTAL PARA EL DESARROLLO CON EXITO DE LOS ACTUALES PROGRAMAS DE ANALISIS DE PROTEOMAS. EN EL PRESENTE TRABAJO SE UTILIZAN UNA SERIE DE HERRAMIENTAS BIOINFORMATICAS DISPONIBLES HASTA AHORA PARA PREDECIR LA FUNCION A PARTIR DE SECUENCIA, A LA VEZ QUE SE DESARROLLAN NUEVOS ALGORITMOS QUE INTENTAN MEJORAR Y/O COMPLEMENTAR A LOS EXISTENTES, CON EL OBJETIVO DE CONSEGUIR LA MAXIMA INFORMACION SOBRE LA FUNCION BIOLOGICA DE UNA PROTEINA EN ANALISIS QUE PARTEN TAN SOLO DE SU SECUENCIA.

Autor: López Castejón Gloria.
Año: 2006.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Biología.
Centro de realización: Facultad de Biología.

Resumen: Durante el desarrollo de este trabajo se han clonado y caracterizado tres moléculas claves en el sistema de la interleuquina-1beta (IL-1beta ) de dorada (Sparus aurata L., Teleostei): el receptor P2X7, la caspasa-1 y el receptor tipo II de la IL-1beta (IL-1RII). En primer lugar, se clonó el receptor P2X7 de dorada y se compararon sus perfiles de actividad en respuesta a diferentes agonistas y antagonistas con los de los receptores P2X7 de rata, xenopus y pez cebra expresados en células HEK, y también se estudió dicha respuesta en la línea celular de fibroblastos de dorada SAF-1. Esta información se usó para investigar los mecanismos de liberación de la IL-1beta inducida por los receptores de mamífero y peces. A pesar de la exposición de fosfatidilserina en la cara externa de la membrana y la permeabilización celular observada en leucocitos de dorada tras la activación con altas concentraciones de BzATP, la IL-1beta permanecía dentro de las células sin ser procesada. Sin embargo, la activación del receptor P2X7 de rata expresado de forma ectópica en células HEK293 junto a la caspasa-1 humana producía la liberación de la forma precursora de la IL-1beta de dorada. Por el contrario, ni la activación del receptor P2X7 de dorada ni del pez cebra inducían la secreción la IL-1beta ni de mamífero ni de peces cuando se expresaban en células HEK293. Estos datos indicaban que la activación de caspasa-1 mediada por el receptor P2X7 y la liberación de la IL-1beta ocurren mediante diferentes vías de señalización y sugieren que, aunque los mecanismos implicados en la secreción estén conservados durante la evolución, diferentes señales inflamatorias, han sido seleccionadas para la secreción de esta citoquina en diferentes vertebrados. En segundo lugar, se clonó la caspasa-1 de dorada, que presentaba un dominio conservado amino terminal CARD (dominio de reclutamiento de caspasa) y un dominio catalítico de caspasa carboxi-terminal. Se comprobó que el gen de la caspasa-1 se expresaba en larvas de un día después de la eclosión y que los niveles de dicho mRNA aumentaban durante el desarrollo. En adultos, la caspasa-1 se expresaba de forma constitutiva en todos los tejidos analizados y dicha expresión disminuía tanto tras la infección con Vibrio anguillarum en todos los tejidos estudiados, como tras la estimulación de fagocitos de dorada con diferentes moléculas derivadas de patógenos (PAMPs). También se demostró que la caspasa-1 recombinante de dorada expresada de forma ectópica en células HEK293 era capaz de procesar un sustrato fluorogénico específico de caspasa-1 y que esta actividad aumentaba tras la activación del receptor P2X7 con BzATP. Además tanto las células SAF-1 como los leucocitos de dorada, mostraban actividad endógena caspasa-1, que se inhibía completamente con un inhibidor específico de caspasa-1. Por último, se aisló y caracterizó en dorada un homólogo del receptor tipo II de la IL-1 (IL-1RII) de mamífero. El IL-1RII de dorada presentaba dos dominios similares a Ig en la región extracelular y un pequeño dominio citoplasmático sin el dominio de señalización TIR. El cDNA de dorada mostraba un 3'UTR inesperadamente largo comparado con el de otras especies, y que contenía tres motivos de inestabilidad ATTTA, que probablemente sean los responsables de su relativamente corta vida media (menos de 2h). Se observó un aumento en la expresión del receptor de dorada, mayor que la propia expresión de la IL-1beta, en todos los tejidos analizados tras una infección con V. anguillarum. La estimulación de leucocitos de dorada con DNA bacteriano y flagelina in vitro aumentaba los niveles de mRNA del IL-1RII en macrófagos, mientras que únicamente la flagelina era capaz de inducir un aumento de la expresión del gen en granulocitos acidófilos. Finalmente, se observó que el IL-1RII se localizaba en la membrana plasmática y era capaz de interaccionar con la IL-1beta de dorada.

Autor: MARTÍN GARCÍA PALOMA.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS.

Resumen: En este trabajo se desarrolla una metodología novedosa para la gestión de la visita en espacios naturales protegidos, que se basa en al consideración de la visita como un sistema descrito constituido por piezas iteradas. De esta forma, es posible formalizar dichos sistemas en la denominada "Descripción Modular" y concretar la información necesaria para conocer su funcionamiento. A partir de la Descripción Modular del sistema de visita, la parametrización de sus elementos constituyentes y las funciones de impacto y percepción, es posible construir Modelos Funcionales de Flujo de Visitantes mediante las herramientas integradas en el denominado "Sistema De Seguimiento Funcional De La Visita (SSFV)", que permiten conocer tanto la distribución y dinamismo de los visitantes en el interior del espacio como sus consecuencias asociadas sobre el medio y percepción de la calidad de la visita. Esta metodología constituye un avance metodológico en el desarrollo y aplicación de nuevas herramientas para la gestión de la visita, que además de proporcionar un conocimiento muy detallado del funcionamiento de estos sistemas, permite definir un completo programa de seguimiento que optimiza la recogida de datos para la detección delas variaciones que se puedan producir y posibilita gestionar la capacidad de carga de visitantes mediante actuaciones alternativas a la mera limitación del número total de visitantes, gracias a la posibilidad de simular fácilmente diferentes escenarios de funcionamiento y conocer así sus consecuencias sobre los objetivos de gestión. Su aplicación a todos los Parques Nacionales ha de ser entendida como una primera aproximación al conocimiento del funcionamiento de estos espacios que pone de manifiesto la flexibilidad y utilidad de la metodología expuesta para la gestión de la visita en cualquier espacio natural protegido.

Autor: Cerviño Gómez MMa. del Carmen.
Año: 2006.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: Facultad de Biología.
Centro de realización: Facultad de Biología.

Resumen: La proteína quinasa C (PKC) es una familia de serina-treonina quinasas que participa, entre otros procesos, en la transducción de señales de activación en los linfocitos T. Esta familia consta de, al menos, diez isoformas, con expresión variable según el tipo celular. Con el objetivo de analizar la función específica de la PKC beta en el proceso de activación de linfocitos T, se inhibió su expresión mediante la tecnología antisentido, utilizando como modelo de estudio las células Jurkat (una línea leucémica de células T humanas). Utilizando esta técnica, consistente en la introducción en la célula de una secuencia de RNA complementaria a la del RNA mensajero que codifica la proteína objeto de estudio, inhibimos la expresión de esta enzima. Para obtener una inhibición permanente, se introdujo en las células Jurkat, mediante electroporación, un vector episomal (el plásmido pREP3), con un inserto correspondiente a un fragmento del gen que codifica la PKC beta en orientación antisentido. De forma paralela, en las células Jurkat se introdujo el vector pREP3 sin inserto, con el objetivo de obtener poblaciones que pudieran utilizarse como control. Con la finalidad de obtener poblaciones homogéneas en cuanto a su expresión de esta isoforma de PKC, las células se clonaron mediante dilución límite, seleccionándose a continuación aquéllas con menor expresión de PKC beta con respecto a los controles analizados. En estas células pudo demostrarse una inhibición selectiva de PKC beta entre el 40% y el 60% y la disminución en los niveles del RNA mensajero que la codifica. La reducción en la expresión de PKC beta se relacionó en las células Jurkat con una alteración en la formación de agregados, más numerosos y formados por un mayor número de células con respecto a los controles, sin que se observaran diferencias con respecto a la viabilidad o proliferación celular en ausencia de estímulo. Tras el estímulo de las células con un éster de forbol (PMA) y un ionóforo de calcio (ionomicina), se observó la relación entre la disminución de la expresión de PKC beta y el aumento en la expresión del CD25 (cadena alfa del receptor de IL-2) y la reducción de la expresión de CD69, moléculas marcadoras de activación de las células T. Además, se demostró en las mismas células la inhibición de la producción de IL-2 e IL-8, y el aumento en la producción de TNFbeta. No se observó en las células deficientes en PKC beta ninguna alteración con respecto a la fosforilación en tirosinas ni el grado de activación de las proteínas de las cascadas de MAP quinasas ERK o p38. Sin embargo, la inhibición de la expresión de PKC beta se asoció en las células Jurkat con un aumento en el grado de activación de la ruta de las JNK (reflejada en una mayor activación de la p46 y su diana, el factor de transcripción ATF-2). Estos resultados permiten establecer la participación diferencial de dos isoformas calcio-dependientes de PKC (PKC alfa y PKC beta) en el proceso de activación linfocitaria, al comparar los resultados obtenidos con los de otro trabajo que, utilizando la misma técnica y el mismo tipo celular, demostraban la relación de la inhibición de PKC alfa con el descenso en la síntesis de IL-2 y su receptor de alta afinidad y una disminución en la expresión de la citoquina TNF alfa. En estas células, las alteraciones observadas no podían asociarse con un diferente grado de activación de ninguna de las MAP quinasas analizadas (ERK, JNK e p38) ni del factor de transcripción ATF-2. La comparación de los resultados obtenidos en estos trabajos demuestra que las funciones de PKC alfa y PKC beta pueden ser similares, diferentes e incluso antagónicas en diferentes aspectos de la activación de las células Jurkat.

Autor: NAVARRO AVILES GLORIA M.
Año: 2006.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Las bacterias se adaptan a las condiciones ambientales fluctuantes regulando la expresión de genes específicos. Un estímulo externo crítico, la luz, afecta a varios procesos metabólicos, de desarrollo y de comportamiento tanto en bacterias como en organismos superiores. En algunas especies bacterianas la luz provoca la síntesis de carotenoides, que sirven para proteger del daño fotooxidativo celular causado por el oxigeno singlete y otros radicales libres producidos como consecuencia de la iluminación (Armstrong, 1997). Los carotenoides juegan también un papel como intermediarios redox y como precursores de moléculas necesarias para la fotorrecepción y la acción hormonal (Frank y Brudvig, 2004). Un modelo importante para el estudio de la carotenogénesis inducida por luz es la bacteria Gram negativa M. xanthus, en la que los análisis genéticos y moleculares revelan un complejo circuito genético que incluye varios factores y mecanismos de regulación novedosos para la fotoinducción de las enzimas responsables de la síntesis de carotenoides. Todos los genes de M. xanthus implicados en la carotenogénesis están agrupados en el operón carB, a excepción del gen crtlb (Fontes et al., 1993; Botella et al., 1995). El promotor que dirige la expresión del operón carB, PB, depende de la unión de la polimerasa de RNA (RNAP) asociada a A, el principal factor sigma vegetativo en M. xanthus. La inducción de PB por la luz esta íntimamente ligada a la actividad del represor CarA (Ruiz-Vázquez et al., 1993; Whitworth y Hodgson, 2001; Cervantes y Murillo, 2002; López-Rubio et al., 2002). Así, en la oscuridad, PB se encuentra reprimido por la unión de CarA a su operador de diseño bipartito. Dicho operador consta de un sitio de alta afinidad (pI), que corresponde a un palíndrome perfecto interrumpido localizado aguas arriba de PB, y un sitio de baja afinidad (pII), una versión imperfecta de pI que solapa con la región -35 de PB. CarA se une de forma cooperativa a su operador, primero a pI y después a pII, para impedir de forma efectiva el acceso de la RNAP al promotor y reprimir carB (López-Rubio et al., 2004). Por otro lado, la activación de carB por la luz se debe al desmantelamiento del complejo CarA-operador. Para ello, la luz induce la producción de la proteína CarS, un antirrepresor de CarA. CarS, que no se une al DNA, interacciona físicamente con CarA e impide la unión del represor a su operador. CarS se expresa a partir del operón fotoinducible carQRS, que también produce CarQ, un factor sigma alternativo de tipo ECF ("ExtraCytoplasmic Function"), y su factor antisigma, CarR, que se localiza en la membrana (McGowan et al., 1993). La expresión de carQRS (y también de crtlb) requiere CarQ (McGowan et al., 1993; Fontes et al., 1993). CarQ, secuestrada en la oscuridad por su unión a CarR, se libera cuando la luz inactiva a CarR (Browning et al., 2003). El mecanismo de esta inactivación no es conocido, pero involucra al menos a una proteína de expresión constitutiva, CarF (Fontes et al., 2003), aunque la necesidad de luz y CarF puede verse soslayada por la presencia de cobre (Moraleda-Muñoz et al., 2005). La proteína CarQ libre se asocia con la RNAP para transcribir el operón carQRS. Esto requiere, además, la acción de otros tres factores expresados de manera constitutiva: CarD, el único ejemplo conocido en bacterias que se asemeja a las proteínas arquitectónicas eucarióticas de la familia HMGA (Nicolás et al., 1994; Nicolás et al., 1996; Padmanabhan et al., 2001; Cayuela et al., 2003); IhfA, otra proteína arquitectónica en bacterias parecida a las histonas (Moreno et al., 2001); y CarG, un factor transcripcional novedoso que se asocia a zinc (Peñalver-Mellado et al., 2006). La represión de carB en la oscuridad y su activación en la luz reflejan un juego antagónico entre las interacciones de CarA con su operador o con CarS. Previamente, habíamos demostrado que ambas interacciones ocurren a través de su segmento N-t 8 erminal 86c de 78 residuos, que constituye un dominio autónomo, monomérico y estable, CarA(Nter), que por sí solo puede reprimir carB in vivo de una manera dependiente de la dosis (Pérez-Marín et al., 2004). En este trabajo se ha profundizado en las bases estructurales del mecanismo molecular subyacente a esta unión competitiva. Hemos determinado la estructura tridimensional por RMN de CarA(Nter), e identificado residuos específicos y elementos estructurales que son cruciales para el reconocimiento del operador y de CarS y, por tanto, para su función in vivo. CarA(Nter) adopta la topología en hélice-giro-hélice alada ("winged helix") típica del dominio de unión a DNA (DUD) de las proteínas MerR, en concordancia con las predicciones obtenidas mediante el análisis in silico de su secuencia. Además, hemos demostrado que CarA(Nter) posee la mayoría de los contactos con el DNA que son característicos del DUD de las proteínas de tipo MerR en sus motivos hélice-giro-hélice y "alas". Un descubrimiento significativo de este trabajo es que la hélice 2 del motivo hélice-giro-hélice no sólo es la región específica de unión al operador sino también a la proteína antirrepresora CarS. Esto implicaría que la unión de CarS y la unión del operador a CarA son dos hechos mutuamente excluyentes. La oclusión de la región del represor CarA implicada en la unión al operador por el antirrepresor CarS proporciona así la base molecular del mecanismo que controla la inducción de la expresión génica por la luz en M. xanthus

Autor: ALONSO PERAL MARIA MAGDALENA.
Año: 2006.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA APLICADA E INSTITUTO DE BIOINGENIERIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNANDEZ.

Resumen: El sistema vascular de los organismos pluricelulares forma parte de una familia de estructuras biológicas ramificadas arborescentemente, jerarquizadas y tridimensionales, que también incluye a los sistemas respiratorios y nerviosos de muchas especies animales. Para disecarlas reglas generativas de estas topologías pueden utilizarse como modelo los patrones de venación de las hojas de las plantas y alas de los insectos, que son bidimensionales y muy sencillos. En esta Tesis Doctoral hemos estudiado los mutantes hemivenata (hve), que presentan alteraciones en su patrón de venación foliar. Hemos clonado posicionalmente el gen HVE y caracterizado tres de sus alelos mutantes, hve-1, hve-2 y hve-3, a nivel molecular y fenotipico. Estos mutantes presentan un patrón de venación foliar muy simple, con un número de venas secundarias y terciarias muy inferior al silvestre, y ausencia o acortamiento de las de orden superior. Los mutantes hve también manifiestan una floración y senescencia retrasadas, disminución de la fertilidad, porte arbustivo y ausencia de ondulaciones en la raíz. Algunos de estos rasgos recuerdan a los mutantes alerados en la percepción de la auxina. Hemos establecido que los mutantes hve son ligeramente insensibles a auxina, aunque responden como el tipo silvestre a los inhibidores del transporte de esta hormona. El producto del ben HVE es una proteína CAND1 (CULLIN-ASSOCIATED AND NEDDYLATION-DISSOCIATED1) cuya participación en la ubiquitinación ha sido demostrada en células de mamífero. El alelo espontáneo hve-1 altera el procesamiento de los transcritos del gen HVE, y hve-2 y hve-3 son portadores de inserciones de ADN-T. El tamaño de la inflorescencia y la fertilidad son reducidos más severamente por hve-2 y hve-3 que por hve-1, lo que sugiere que este último alelo es hipomorfo. El patrón de venación sencillo de las plantas hve parece deberse a un defecto temprano en el desarrollo del patrón de venación. Hemos determinado in vitro que la proteína HVE se une a la CULINA1 y que los patrones de venación de los mutantes axr1 y hve son similares. Estos resultados y nuestros análisis del fenotipo vascular de los mutantes hve indican que la señalización de la auxina mediada por la ubiquitina participa en el establecimiento del patrón de venación de los cotiledones, las hojas vegetativas, los pétalos y los sepálos. Nuestros análisis de dobles mutantes y plantas transgénicas indican que el transporte y la percepción de la auxina intervienen independientemente en la formación del patrón de venación, y que HVE actúa antes que ATHB8 en una ruta de desarrollo en la que participa AXR1, pero no lo hacen LOP1, PIN1, CVP1 ni CVP2.