CIENCIAS DE LA VIDA, 3

Autor: RODRÍGUEZ MURILLO LAURA.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La información del desequilibrio gamético (DG) de background es relevante para la realización de un correcto diseño e interpretación de los estudios de localización de genes de enfermedades mediante DG. Estos estudios se han realizado mediante marcadores genéticos con dinámicas evolutivas diferentes como son los SNPs y los microsatélites. Por lo tanto, la cuantificación del DG puede verse perturbada por la existencia de DG dependiente de marcador, de manera que se requiere averiguar qué fracción del DG de background es debida a las características propias de cada marcador. En el presente trabajo se ha realizado una evaluación del DG dependiente de marcador con 18 SNPs y 22 microsatélites localizados a lo largo de una extensa región anónima del genoma humano, como es el brazo corto del cromosoma 11. El DG se comparó entre pares de SNPs y entre pares de microsatélites. El DG entre pares de microsatélites reveló un patrón de DG dependiente de la frecuencia y tamaño de los alelos implicados. Este patrón de DG dependiente de alelo confirma resultados previos obtenidos en las regiones cromosómicas 11p15 y Zq25-28, y presenta una explicación basada en la alta tasa y compleja dinámica mutacional de los microsatélites. El DG se extiende hasta distancias muy inferiores entre pares de SNPs que entre pares de microsatélites. Así, la mayoría de los pares de SNPs en DG están separados por menos de 0,5 cM. Sin embargo, la distancia entre pares de microsatélites en DG es próxima a la segregación independiente (42 cM). Además, la relación de la intensidad del DG son la frecuencia de recombinación entre pares de microsatélites en DG con la frecuencia de recombinación entre pares de SNPs sigue una correlación negativa significativa. Por el contrario, esta tendencia no se observa entre pares de microsatélites parece ser el principal factor determinante para las diferencias observadas en los patrones de DG con uno y otro tipo de marcador. Los resultados sugieren que los SNPs son mejores marcadores que los microsatélites del DG de background en el genoma. Así, el DG dependiente de marcador representa una fracción importante del DG de background a lo largo del genoma. Por esta razón, será relevante su cuantificación para otras regiones del genoma con el fin de realizar apropiadamente el diseño e interpretación de los estudios de localización de genes de enfermedades mediante DG. La otosclerosis es una de las causas más comunes de pérdida de audición entre adultos de origen caucasoide. Los genes CIL1A1 y COL1A2 se han propuesto como genes candidatos implicados en la otosclerosis. En el presente trabajo se presenta un estudio independiente de asociación entre la otosclerosis y polimorfismos en los genes COL1A1 y COL1A2 con 100 individuos afectados y 100 controles sanos, todos provenientes de la población gallega. Específicamente, se estudiaron dos marcadores en COL1A1 que habían sido asociados con la otosclerosis en un estudio previo, y seis marcadores en COL1A2. Los análisis de asociación se basaron en la comparación de las frecuencias alélicas, genotípicas y haplotípicas de dos loci entre individuos afectados y controles. Los resultados no aportan ninguna evidencia para una posible implicación de los genes CIL1A1 y COL1A2 en la etiología de la otosclerosis.

Autor: PEREZ PINERA PABLO.
Año: 2004.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La pleiotrofina (PTN) es una citoquina que se expresa en diversos tejidos durante el desarrollo embrionario, pero con expresión restringida durante la vida adulta excepto durante procesos de reparación tisular. La pleiotrofina es también un proto-oncogén como demuestran los hechos de tiene capacidad para transformar células normales, aumentar la malignidad de células en estadio premaligno e interferencia con la señalización de PTN revierte el fenotipo maligno de esos tumores. PTN señaliza por medio de la inhibición de la actividad fosfatasa de su receptor Receptor Protein Tyrosine Phosphatase (RPTP) beta/zeta incrementando los niveles de fosforilación en tirosina del substrato de RPTP beta/zeta, beta-catenina. Hemos diseñado los experimentos aquí descritos para analizar en profundidad la vía de señalización PTN/RPTP beta/zeta/beta-catenina, así como identificar nuevos substratos de RPTP beta/zeta que son por lo tanto dianas de señalización de PTN. Hemos demostrado que tras estimulo con PTN, beta-catenina se discia de N-cadherina y N-cadherina es degradada iniciando una serie de cambios compatibles con una transformación epiteli-mesenqumal. Hemos descubierto que las proteínas beta-adducida y Fyn son sustratos de RPTP beta/zeta y que los niveles de fosforilación en tirosina de beta-adducina y Fyn aumentan en respuesta a PTN. PTN simultáneamente activa proteína quinasa C la cual incrementa los niveles de fosforilación en serina de beta-adducina determinada el destino subcelular de beta-adducina. Los resultados de estos experimentos por lo tanto identifican varias proteínas que son dianas de la vía de señalización de PTN/RPTP beta/zeta y potenciales candidatos para el diseño de inhibidores que de forma especifíca interfieran con PTN y puedan ser utilizados para el tratamiento de tumores con expresión constitutiva de Ptn.

Autor: FERNANDEZ FERNANDEZ AGUSTIN.
Año: 2004.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTADE DE MEDICINA.

Resumen: El principal objetivo de esta tesis es analizar la influencia de factores genéticos y ambientales sobre la estrategia de desarrollo del salmón atlántico (Salmo salar L.) durante su primer año de vida. Se utilizaron 5 loci enzimáticos y 9 loci microsatélites como marcadores genéticos. Por un lado se analizó la influencia de los factores ambientales al comparar dos muestras con el mismo fondo genético cultivándolas en ambientes diferentes (España y Escocia), y por otro, la influencia del componente genético al comparar dos muestras con diferentes fondos genéticos en un mismo ambiente (España). Los resultados obtenidos demuestran que la interacción de ambos factores determina la evolución de la estructura poblacional. Existe un tamaño mínimo a partir del cual los juveniles inician el proceso de esguinado, que junto al tamaño medio de los esguines está fijado a nivel poblacional. Los factores ambientales, entre los cuales destacan la temperatura y el fotoperiodo, determinan la proporción de individuos que son capaces de superar ese tamaño mínimo y esguinan en la primavera siguiente, de forma que bajo condiciones más favorables de crecimiento esa proporción aumenta. Aunque los niveles de variabilidad encontrados con los loci microsatélites duplican a los encontrados con los loci enzimáticos, no se halló ningún marcador genético inequívoco de clase fisiológica, pero sí una asociación con la heterocigosidad enzimática, que parece no existir con la heterocigosidad enzimática, que parece no existir con la heterocigosidad microsatélite. Los individuos con mayor heterocigosidad enzimática individual son los que presentan mayor tamaño y menores valores de asimetría, mientras que al utilizar loci microsatélites estas relaciones no se presentan. De esta forma la "sobredominancia funcional" es la hipótesis que mejor explica las relaciones encontradas, apoyando la idea de que los enzimas y los microsatélites son diferencialmente afectados por la selección natural y que los loci enzimáticos participan activamente en el incremento de la eficacia biológica.

Autor: PUPO BALBOA JUDITH BEATRIZ.
Año: 2004.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR. FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La caracterización del cDNA de mHax-1 permitió concluir que la transcripcion de este gen da lugar a dos mensajeros como resultado de un procesamiento de corte y empalme alternativos del transcrito primario. Uno de los mensajeros retiene el segundo intrón, dando lugar al mensajero mayor. El otro mensajero, donde se han eliminado todos los intrones y que contiene todos los exones, se le ha denominado mensajero corto. Ambos se expresan en las células RAW 264.7 y en leucocitos de ratón, y se inducen en las células RAW 264.7 por efecto del LPS y la sílice, agentes estimuladores de la respuesta inflamatoria. El mensajero mayor origina una proteina truncada como consecuencia de la aparición de un triplete fin de mensaje al incorporarse el intrón 2. Esta proteina es inestable. El mensajero corto codifica una proteina de 35 kDa que contiene la pauta completa. Esta proteina está mayoritariamente expresada en todas las células ensayadas. El análisis funcional de ambas proteinas reveló que no producen ningún efecto sobre la apoptosis inducida por BAX. La caracterización bioinformatica del gen reveló que se localiza en el cromosoma 3 de ratón y contiene 7 exones y 6 intrones. Se ha aislado 1,2 kb de la secuencia 5 prima flanqueante del gen y se ha estudiado como región promotora. Este fragmento de DNA es suficiente para que ocurra la transcripción. Su actividad no se induce por efecto del LPS y en cambio es inducida por el interferón gamma.

Autor: Prieto Lloret Jesús.
Año: 2004.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: Está descrito que la hiperoxia en periodos perinatales produce atrofia de cuerpo carotídeo. Empleando dicho protocolo experimental hemos querido estudiar la funcionalidad delas estructuras con respuesta fisiológica a la hipoxia (células quimiorreceptoras del cuerpo carotídeo, células de músculo liso de arteria pulmonar y células productoras de eritropoyetina)tras someter alos animales de estudio a unos niveles de oxígeno de 55 al 60%, utilizando dicho portocolo experimental para estudiar los efectos que podría tener la estancia en la incubadora a la que se ven sometidos los niños prematuros. El objetivo final sería identificar, el caso de encontrarse diferencias en estas estructuras entre los animales controles y los hiperóxidos, los pasos de la cscada de transducción del estímulo hipócico que han resultado afectados por la hipóxico que han resuoltado afectados por la hiperoxia, y por medio de mircroarrays diferenciales ser capaces de identificar los genes implicados en esta respuesta alterada. Por otro lado el papel de ciertos neurotransmisores en la etapa de quimiotransducción en el cuerpo carotídeo tampoco está aclarada, entre ellos el papel que tendría en esta etapa la sustancia P y la dopamina. Empleando un diseño experimental de animales Knockouts para los receptores NK1 para sustancias P, y D2 para la dopamina, hemos intentado aclarar el papel que desempeñan dichas sustancias en el cuerpo cartídeo, siendo la preparación de animales knockouts idónea para definir la función del gen anulado.

Autor: Chamero Benito Pablo.
Año: 2004.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: El objetivo general de este trabajo es caracterizar el papel del calcio en los procesos de señalización a nivel subcelular, principalmente en el núcleo y en las mitocondrias. El núcleo está rodeado por una doble membrana, la envuelta nuclear, que es capaz de acumular calcio en el interior de su lumen. Se ha propuesto que el calcio puede ser liberado directamente desde la envuelta nuclear hacia el citoplasma a través de canales iónicos asociados tanto a receptores de inositol trisfosfato presentes en la membrana interna de la envuelta nuclear. Por otro lado, el citosol y el nucleoplasma están comunicados a través de poros nucleares de 10 nm de diámetro, aparentemente susceptibles al paso libre de iones. En primer lugar se miden los niveles de calcio en el interior de las mitocondrias de células GH3 vivas mediante imágenes de bioluminiscencia obtenidas a partir de la sonda de calcio aequorina (AEQ) dirigida a las diferentes organelas. Para medir la [Ca2+], se expresa la AEQ en células GH3 mediante la infección con un vector vírico del tipo herpes simplex (HSV). Así se comprueba que existen oscilaciones de calcio en las mitocondrias que se comportan de forma similar a las citosólicas. El significado fisiológico de estas oscilaciones de calcio mitocondrial podría ser la modulación de la respiración. El incremento de la [Ca2+]m a niveles de micromolar es capaz de activar numerosas deshidrogenasas mitocondriales que resulta en un aumento de la respiración. Otro de los objetivos de esta tesis doctoral es comparar las señales de calcio citosólicas y nucleares registradas mediante AEQs dirigidas tanto al citosol como al núcleo de diversos tipos celulares, tanto en reposo como frente a distintos estímulos. Para comprobar si la envuelta nuclear afecta a la progresión de la onda de calcio se inducen incrementos de la [Ca2+]c tanto por activación de la entrada de calcio a través de la membrana plasmática por despolarización con alto K+, como por liberación de calcio desde los depósitos intracelulares mediante agonistas acoplados a la generación de inositol 1,4,5-trisfosfato (IP3). Posteriormente se comparan los picos de calcio obtenidos en el núcleo y en el citosol, siendo similares en ambos casos. Sin embargo, si se registran las oscilaciones espontáneas nucleares de calcio en células GH3, mediante imagen de bioluminiscencia en célula única, son menos frecuentes y de menor magnitud que las citosólicas. De esta forma, la envuelta nuclear actúa como una barrera de permeabilidad que amortigua la difusión del calcio hacia el núcleo. Por otro lado, existen diversas evidencias que sugieren una regulación activa de la [Ca2+]n e independiente de la [Ca2+]c. Para estudiar la posible regulación diferencial, se estudia el calcio nuclear y citosólico en respuesta a la liberación de calcio por IP3 5 M, utilizando células GH3 permeabilizadas, donde el incremento de calcio en el núcleo es mayor que en el citosol. El inhibidor de los propios receptores de IP3 heparina, que no penetra en el interior del núcleo, inhibe el pico de la [Ca2+]c pero no de la [Ca2+]n durante la estimulación con IP3. Sin embargo, usando el inhibidor permeable de los receptotes de IP3 2-aminoetoxidifenil borato (2APB), se bloquea la liberación de calcio inducida por el IP3 tanto en el núcleo como en el citosol. Se elabora una curva dosis-respuesta del IP3 y se comparan las curvas obtenidas en el núcleo y en el citosol. De esta forma se comprueba si el núcleo posee un umbral más bajo que el citosol para la liberación de calcio inducida por IP3, que resultaría en un aumento preferencial en el núcleo cuando las células se estimulan con concentraciones submáximas de agonista. Dado que el calcio alcanza el interior del núcleo por difusión desde la envuelta nuclear, se busca un mecanismo que pueda liberar calcio localmente en regiones concretas del interior del núcleo. Con una GFP dirigida al citosol se detectan extensiones intranucleares del citoplasma. También se examina la distrib 8 ución de 421 la proteína asociada a la envuelta nuclear lamina B comprobando que hay prolongaciones de la envuelta nuclear. Se comprueba la presencia de mitocondrias en las invaginaciones mediante GFP mitocondrial y MitoTracker red. Se estudia la distribución del RE con una GFP dirigida al RE y con el colorante ER-tracker. Por último, se confirma las extensiones nucleares del citosol y del RE mediante microscopía electrónica.

Autor: MARCHAL ORTEGA JUAN ALBERTO.
Año: 2004.
Universidad: JAÉN.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Introducción La determinación del sexo en la especie Microtus cabrerae presenta unas características que hacen de ella un interesante modelo para estudiar la estructura, composición y evolución de los cromosomas sexuales y los mecanismos de determinación del sexo en mamíferos. Los cromosomas X e Y de esta especie son especialmente grandes debido a la presencia de grandes bloque de heterocromatina constitutiva. Los cromosomas sexuales de M. cabrerae no aparean durante la profase I de la meiosis, siendo por tanto asinápticos. El gen determinante de testículo SRY tiene en esta especie una distribución única dado que se localiza en el cromosoma Y, como es normal en la mayoría de los mamíferos, y en el cromosoma X, estando presente en las hembras siendo M. cabrerae la única especie en la que esto ha sido descrito. Objetivos Hemos estudiado la composición y organización de los cromosomas sexuales gigantes de M. cabrerae mediante técnicas citogenética y moleculares. Los objetivos propuestos son los siguientes: 1. Estudiar secuencias repetidas de los bloques heterocromáticos de los cromosomas X e Y en M. cabrerae. 2. Analizar el origen y la evolución de los cromosomas sexuales gigantes in especies de Microtus. 3. Estudiar la localización cromosómica, la organización, la secuencia y el origen de las copias múltiples del gen SRY presentes en machos y hembras de la especie M. cabrerae. Métodos Para realizar este trabajo hemos empleado técnicas citogenéticas (preparaciones cromosómicas, bandas C, FISH y "chromosome painting") y moleculares (extracción de ADN genómico y plasmídico, aislamiento de ADN repetido mediante restricciones, amplificaciones por PCR, clonado y secuenciación de ADN, marcaje de sondas y Southern blot). Resultados y Discusión 1. Secuencias repetidas de los cromosomas sexuales de M. cabrerae Hemos caracterizado tres tipos de secuencias repetidas de estos cromosomas: MSAT-160, McaY(851) y McaL1. a) MSAT-160 Esta es una secuencia repetida rica pares AT, organizada en tándem, con un monómero de 161 pares de bases. Se localiza en la heterocromatina de los cromosomas sexuales: en el cromosoma X está presente en la región pericentromérica y en menor medida por todo el bloque heterocromático; en el cromosoma Y está presente solo en tres bandas intersticiales en la heterocromatina. Además, MSAT-160 se localiza en las regiones pericentroméricas de todos los autosomas. Los resultados en ésta y otras especies del género Microtus muestran que este ADN satélite tiene una distribución cromosómica, grado de amplificación y metilación que son especie-específicos. b) McaY(851) Es una secuencia repetida interdispersa de 851 pares de bases muy conservada y rica en pares AT. Se localiza exclusivamente en la heterocromatina del cromosoma Y de M. cabrerae y de otras especies de Microtus. c) Secuencias McaL1 Las secuencias, McaL1(1.8), McaL1(750) y McaL1(500), son fragmentos diferentes de elementos L1. Se acumulan preferentemente en la heterocromatina del cromosoma Y. Secuencias homólogas a estos fragmentos se localizan por todos los autosomas y la región eucromática del cromosoma X. 2. Evolución de los cromosomas sexuales en especies de micrótidos Este estudio se ha llevado a cabo mediante la preparación de sondas a partir de cromosomas aislados por microdisección cromosómica. Los resultados demuestran que los bloques heterocromáticos de los cromosomas sexuales de la especie M. cabrerae tienen diferentes composición los que sugiere un origen y evolución independiente para cada uno de ellos. Sin embargo, en la especie M. agrestis los bloques de ambos cromosomas sexuales presentan la misma composición. Todo indica que los cromosomas sexuales de la especies de micrótidos tienen la capacidad para acumular secuencias repetidas, pero el tipo de secuencias acumuladas y los mecanismos de acumulación difieren de unas especies a otras. Por otro lado, los re 8 sultados 6ba indican que las regiones eucromáticas de los cromosomas sexuales de las especies de micrótidos están muy conservadas. 3. Análisis del gen SRY en M. cabrerae Hemos demostrado que los machos y las hembras de la especie M. cabrerae procedentes de diferentes poblaciones presentan copias múltiples del gen SRY. Las copias múltiples de este gen se localizan por todo el bloque heterocromático del cromosoma X y en la región eucromática del cromosoma Y. Además, hemos analizado secuencias parciales y completas de copias del gen SRY de ambos cromosomas sexuales. Demostrando que todas ellas son pseudogenes y que presentan una estructura sumamente compleja estando todas las copias analizadas asociadas con elementos genéticos móviles. La asociación con retrotransposones de las copias del gen SRY sugiere que la anómala distribución de estas copias en el genoma de M. cabrerae se haya producido por retrotransposición. De esta forma se explicaría el paso de las copias del gen del cromosoma Y al X y, posiblemente, su posterior expansión por todo el bloque heterocromático del cromosoma X.

Autor: MELLADO DIAZ ANDRES.
Año: 2004.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Biología.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Autor: Calvó Perxas Laia.
Año: 2004.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: Facultat de Ciències. Institut d'Ecologia Aquàtica.
Centro de realización: Facultat de Ciències. Institut d'Ecologia Aquàtica.

Resumen: La agricultura y la industrialización han causado un aumento significativo del número de ambientes ricos en amonio. La presencia de compuestos nitrogenados reduce la calidad del agua, causando problemas de toxicidad, deteriorando el medio ambiente e incluso afectando la salud humana. En consecuencia, la nitrificación se ha convertido en un proceso global que afecta al ciclo del nitrógeno en la biosfera. Este ciclo está principalmente mediado por la actividad de varios microorganismos, entre ellos las bacterias oxidadoras de amonio (AOB), que son las responsables de la oxidación del amonio a nitrito. Los primeros oxidadores de amonio fueron aislados a finales del siglo XIX, pero la lentitud de su crecimiento y las dificultades por cultivarlos hicieron que hasta finales de los años 80, cuando se realizaron los primeros estudios con el gen 16S rDNA, no se lograra un conocimiento completo de este grupo bacteriano. Actualmente las bases de datos contienen multitud de entradas con secuencias correspondientes a bacterias oxidadoras de amonio. El objetivo de este trabajo era el de encontrar, desarrollar y evaluar herramientas útiles y fiables para el estudio de las bacterias oxidadoras de amonio en muestras ambientales. En este trabajo primero describimos la utilización de la hibridación in situ con fluorescencia (FISH). Mediante la aplicación de sondas con diana específica en el 16S rRNA de las bacterias oxidadoras de amonio, la FISH nos permitió detectar y contar este grupo bacteriano. No obstante, este método no permitía la detección de nuevas secuencias, por lo que se necesitaba una nueva herramienta. Con esta intención intentamos aplicar la secuencia de la sonda Nso1225 junto con un oligonucleótido universal para eubacterias en una PCR. El hecho de poder amplificar específicamente un fragmento del 16S rDNA de las AOB supuso el desarrollo d'una nueva herramienta molecular que permitía detectar la presencia y la diversidad de las bacterias oxidadoras de amonio en ambientes naturales. No obstante, con esta técnica se obtenían también algunas secuencias pertenecientes a bacterias no oxidadoras de amonio del subgrupo à de las proteobacterias. Asimismo, uno de los inconvenientes del uso del 16S rDNA como marcador molecular es la imposibilidad de detectar simultáneamente las oxidadoras de amonio pertenecientes a los subgrupos à y ? de las proteobacterias. El gen amoA, que codifica por la subunidad A de la enzima amonio monooxigenasa (AMO), era entonces ampliamente utilizado como marcador para la detección de las AOB en muestras ambientales. En este trabajo también describimos la utilización de este marcador en muestras de fangos procedentes de un reactor SBR (Sequencing Batch Reactor). El uso de este marcador nos permitió identificar secuencias de bacterias oxidadoras de amonio en la muestra, pero la necesidad de detectar amoA mediante clonación requiere demasiado tiempo para la utilización de este marcador como herramienta en estudios de ecología microbiana con multitud de muestras. Por otra parte, algunos autores han señalado la obtención de secuencias de bacterias no oxidadoras de amonio al utilizar amoA en un protocolo de PCR-DGGE. Con la finalidad de obtener una herramienta rápida y rigurosa para detectar e identificar las AOB, desarrollamos un nuevo juego de oligonucleótidos con diana en el gen amoB, que codifica para la subunidad transmembrana de la enzima AMO. Este gen ha demostrado ser un buen marcador molecular para las AOB, ofreciendo, sin tener en cuenta afiliaciones filogenéticas, una elevada especificidad, sensibilidad y fiabilidad. En este trabajo también presentamos un análisis de PCR a tiempo real basada en la detección del gen amoB para la cuantificación del género Nitrosococcus (de las ?-proteobacterias). El nuevo juego de iniciadores diseñado permite la enumeración altamente específica y sensible de todos los ?-Nitrosococcus conocidos. Finalmente realizamos un estudio poligénico comparando y evaluando los marcadores amoA, amoB y 16S rDNA individualmente y entre sí, y construimos un árbol filogenético combinado. Como resultado concluímos que amoB es un marcador adecuado para la detección e identificación de las AOB en muestras ambientales, proporcionando a la vez 8 agrupaci 3a7 ones consistentes al hacer inferencias filogenéticas. Finalmente, la secuencia entera del gen 16S rDNA es indicada como marcador en estudios con finalidades taxonómicas y filogenéticas al trabajar con aislados de AOB.

Autor: Mir Arnau Gisela.
Año: 2004.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: Facultat de Ciències.
Centro de realización: Facultat Ciències, Universitat de Girona.

Resumen: En aquest treball es caracteriza per primera vegada la capacitat de coordinació metàl·lica d'una metal·lotineïna (MT) de planta i es proposa un model de plegament per a les MTs de planta en general. Els resultat mostren que aquestes proteïnes poden tenir un paper molt important en la regulació de l'estat redox de les cèl·lules, probablement a través de la coordinació a Cu. Les MTs de planta són molt desconegudes. A diferència de les MTs de mamífer tenen un nombre menor de cisteïnes (10-17) i una zona central d'enllaç entre les dues zones riques en cisteïna més llarga (30-40 aminoàcids). La dificultat en la producció i purificació d'aquestes proteïnes ha fet que se'n tinguin molt poques dades estructurals, i se'n desconegui aspectes com la capacitat de coordinació metàl·lica i el plegament. Es postula que en planta les MTs participen en l'homeòstasi del Cu i en la protecció contra l'estrès oxidatiu. En aquest treball s'han estudiat diversos aspectes d'una metal·lotioneïna d'alzina surera, QsMT, aïllada d'una llibreria de cDNA de fel·lema. Els objectius que ens hem proposat han estat: (1) estudiar l'expressió de QsMT i la seva resposta a l'estrès oxidatiu; (2) determinar la capacitat de coordinació metàl·lica i la funcionalitat in vivo; (3) fer una aproximació al plegament de les MTs de planta. L'expressió del gen s'ha estudiat mitjançant la hibridació in situ. En plàntules i en embrions d'alzina surera QsMT s'expressa majoritàriament en cèl·lules amb fort estrès oxidatiu associat a la síntesi de polifenols (cèl·lules suberitzades i lignificades) i a la senescència. També s'expressa en cèl·lules dels meristemes i en la massa proliferativa d'embrions somàtics, cèl·lules en divisió molt activa on la funció de les MTs podria estar relacionada amb el manteniment de l'estat redox. L'aplicació d'estrès oxidatiu exogen (H2O2 i paraquat) en embrions somàtics incrementa fortament l'expressió de QsMT en aquells teixits on hi havia expressió constitutiva, confirmant la regulació de l'expressió del gen per estrès oxidatiu. Per l'estudi de les propietats de coordinació metàl·lica es va expressar QsMT com a proteïna de fusió a GST en cèl·lules d'E. coli en medi de cultiu suplementat amb Cu, Zn o Cd. Es van aïllar els agregats metàl·lics corresponents a la proteïna de fusió i posteriorment es va digerir amb trombina per a l'anàlisi de QsMT mitjançant tècniques espectroscòpiques i espectromètriques molt resolutives (ICP-OES, ESI-MS i CD). Els resultats mostren que QsMT coordina de forma estable Cu (8 ions metàl·lics/molècula), Zn (4 ions de Zn/molècula) i Cd (6 ions de Cd/molècula), i adopta una estructura especialment quiral en coordinació a Cu. L'elevada capacitat quelant de la proteïna i la quiralitat de l'estructura indiquen que QsMT possiblement té preferència metàl·lica pel Cu i per tant una funció relacionada amb aquest metall in vivo. A més, estudis de complementació en llevat demostren que QsMT coordina Cu de forma funcional in vivo. En coordinació a Cd QsMT presenta una peculiaritat no observada fins ara en altres MTs: la participació d'ions sulfur en la formació de l'agregat metàl·lic incrementant la capacitat de coordinació metàl·lica (6 ions metàl·lics divalents de Cd enlloc de 4 ions de Zn). Els resultats de complementació funcional en llevat mostren que QsMT pot coordinar Cd in vivo, i per tant la seva funció també podria estar relacionada amb la destoxicació de Cd en la planta. QsMT s'ha utilitzat com a model per fer una aproximació al plegament de les MTs de planta i entendre la contribució dels diferents dominis en l'estructura i funció. Amb aquest objectiu vam dissenyar tres pèptids mutants derivats de QsMT: N25 correspon a la zona rica en cisteïna en posició amino-terminal, C18 correspon a la zona rica en cisteïna en posició carboxil-terminal, i N25-C18 a les dues zones riques en cisteïna enllaçades per 4 glicines substituint la zona central de 39 aminoàcids que conté QsMT. Es van expressar i estudiar aquests pèptids per les mateixes tècniques utilitzades en l'estudi de QsMT. Els resultats indiquen que QsMT es plega formant un sol agregat metàl·lic per la interacció de les dues zones riques en cisteï 8 na. En a 3f4 quest model la zona central d'enllaç, típica de les MTs de planta, no participa en la coordinació metàl·lica però és imprescindible per a la funció de la proteïna. El paper de la zona central podria variar en funció del metall que coordina, participant en el plegament i estructura de la proteïna quan coordina Zn i Cd i en la seva regulació i estabilització quan coordina Cu.

Autor: OLIVERAS HUIX JORDI.
Año: 2004.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Universidad de Girona.

Resumen: La hormiga invasora Linepithema humile (Mayr), también conocida como la hormiga argentina, es una especie presente en la península Ibérica. En esta tesis se ha estudiado como afecta la presencia de esta especie plaga a la comunidad de hormigas autóctonas y al proceso de dispersión de semillas de plantas mediterráneas. El estudio se realizó en un área de alcornocal y matorral de estepas y brezo situada en el nordeste peninsular, en la provincia de Girona, cerca de la línea de costa mediterránea. Uno de los primeros y mas notables efectos de la invasión en nuestras áreas de estudio es la dramática alteración de la comunidad de hormigas, en forma de una reducción de la riqueza específica y de la homogeneidad de abundancias. Además, en las zonas invadidas no permanece ninguna especie de hormiga autóctona dispersante de semillas. A casua de la gran abundancia de obreras de la hormiga argentina en las zonas invadida, y de su elevado rito de actividad, esta especie lleva a cabo un intensísimo rastreo del suelo, lo que le permite localizar los recursos en un tiempo menor que las hormigas autóctonas de las zonas no invadidas. No obstante la apertura mandibular de la comunidad de hormigas se ve muy disminuida en las zonas invadidas a causa de la desaparición de las especies autóctonas, la mayoría de las de mayor tamaño que la hormiga artentina, lo que podría limitar la capacidad de manipulación del entorno que tiene la comunidad de hormigas en las zonas invadidas, y podría explicar la no sustitución de algunos de los roles que llevaban a cabo las especies de hormigas autóctonas antes de la invasión. La hormiga argentina se muestra atraída por las semillas de las nueve especies vegetales estudiadas (2 euforbiáceas: Euphorbia biumbellata y E. characias; 2 compuestas; Cirsium vulgare y Galactites tomentosa; y 5 papilionáceas Genista linifolia, G. monspessulana, G.triflora, Sarothamnus arboreus y Ulex parviflorus), llegando a transportar e incluso introducir al nido algunas semillas, aunque siempre con probabilidades inferiores a las realizadas por las hormigas autóctonas de las zonas no invadidas. No obstante, su comportamiento ante las nueve especies es variable, con lo que parece que su efecto sobre la dispersión de semillas puede ser diferente para cada especie vegetal. La alteración del proceso de dispersión no parece que su efecto sobre la dispersión de semillas puede ser diferente para cada especie vegetal. La alteración del proceso de dispersión no parece alterar el éxito reproductivo de una especie concreta, Euphoriba characias, en las zonas invadidas; ni su reclutamiento, ni la distribución espacial ni la supervivencia de las plántulas son significativamente diferentes en las zonas invadidas que en las no invadidas. La desaparición de las especies de hormigas granívoras de las zonas invadidas puede afectar la dinámica de las semillas de plantas no mirmecócoras, así las semillas de tres papilioáceas (California spinosa, Psoralea bituminosa y Spartium juceum) resultaron con un menor nivel de transporte (y probablemente menor depredación) en las zonas invadidas por la horminga argentina).

Autor: Semir Frappart David de.
Año: 2004.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: Dep. Ciencias Experimentales y de la Salud.
Centro de realización: Dep. de Ciencias Experimentales y de la Salud.

Resumen: LA FIBROSIS QUÍSTICA (FQ) ES LA ENFERMEDAD AUTOSÓMICA RECESIVA MÁS FRECUENTE EN LA POBLACIÓN CAUCASOIDE CON UNA FRECUENCIA DE PORTADORES DE 1/25. LAS MANIFESTACIONES CLÍNICAS MÁS IMPORTANTES SON LAS INFECCIONES CRÓNICAS RECURRENTES DEL PULMÓN CONLLEVANDO AL DETERIORO DEL MISMO. EN ESTA TESIS NOS PROPUSIMOS CORREGIR DOS MUTACIONES EN EL GEN CFTR, RESPONSABLE DE LA FQ, EN LA LINEA CELULAR DE EPITELIO BRONQUIAL IB3.1 DE GENOTIPO (F508DEL/W1282X). PARA ELLO, MEDIANTE CITOMETRÍA DE FLUJO Y MICROSCOPÍA CONFOCAL PUSIMOS A PUNTO LA INCORPORACIÓN NO VIRAL (VECTORES PEI, GENEPORTER Y CITOFECTINA) DE OLIGONUCLEÓTIDOS MODIFICADOS (QUIMERAPLASTOS Y OLIGONUCLEÓTIDOS FOSFOROTIOATO) Y DE FRAGMENTOS SFHR EN ESTAS CÉLULAS. LOS QUIMERAPLASTOS SON OLIGONUCLÉOTIDOS QUIMÉRICOS DE RNA Y DNA Y LOS OLIGONUCLEÓTIDOS FOSFOROTIOATO CONTIENEN ENLACES FOSFOROTIOATO PARA EVITAR SU DEGRADACIÓN ADEMÁS DE ENLACES FOSFODIÉSTER. AMBOS, SON CAPACES DE ESTIMULAR LOS MECANISMOS DE REPARACIÓN INTRÍNSECOS DE LAS CÉLULAS PARA CORREGIR A NIVEL DE DNA MUTACIONES PUNTUALES. LOS FRAGMENTOS SFHR (Small Fragment Homologous Replacement) SON FRAGMENTOS DE PCR DE LONGITUD VARIABLE CON LA SECUENCIA SALVAJE DEL GEN QUE SE INTERCAMBIAN CON LAS SECUENCIAS GENÓMICAS DIANA MUTADAS POR RECOMBINACIÓN HOMÓLOGA PARA REVERTIR MUTACIONES PUNTUALES (CAMBIOS DE 1 NUCLEÓTIDO, PEQUEÑAS INSERCIONES O DELECIONES). PARA ESTIMAR EL PORCENTAJE DE CORRECCIÓN GÉNICA ADAPTAMOS LA TÉCNICA DIAGNÓSTICA DE PCR-OLA A NUESTRO MODELO PARA UTILIZARLA COMO METODOLOGÍA DE CUANTIFICACIÓN. ADEMÁS, HEMOS CONFIRMADO QUE LAS CÉLULAS IB3.1 TIENEN LOS MECANISMOS DE REPARACIÓN DE MUTACIONES PUNTUALES ACTIVOS TANTO POR RT-PCR COMO POR UN ENSAYO IN VITRO EN E.Coli CON EL PLÁSMIDO pKsm4021 QUE CONTIENE EL GEN DE RESISTENCIA A AMPICILINA Y EL GEN DE RESISTENCIA A KANAMICINA INACTIVADO POR UNA MUTACIÓN PUNTUAL. LOS RESULTADOS QUE SE PUBLICARON EN LOS SIGUIENTES ARTÍCULOS NOS HAN PERMITIDO EXTRAER LAS SIGUIENTES CONCLUSIONES: LAS CÉLULAS IB3.1 DE EPITELIO BRONQUIAL DE FQ SON COMPETENTES EN CUANTO AL SISTEMA DE REPARACIÓN MMR. LA INCORPORACIÓN CELULAR DE QUIMERAPLASTOS, OLIGONUCLEÓTIDOS MONOCADENA Y FRAGMENTOS SFHR ES MUY EFICIENTE EN LAS CÉLULAS IB3.1. EL LÍPIDO CATIÓNICO CITOFECTINA, EL POLICATIÓN PEI Y LA ELECTROPORACIÓN, AUNQUE NO EL LÍPIDO CATIÓNICO GENEPORTER, SON SISTEMAS DE TRANSFECCIÓN EFICIENTES PARA INCORPORAR OLIGONUCLEÓTIDOS MODIFICADOS EN EL NÚCLEO DE LAS CÉLULAS IB3.1. LOS POLIPLEJOS DE PEI Y LOS LIPOPLEJOS DE CITOFECTINA SON INTERNALIZADOS POR DISTINTOS MECANISMOS AUNQUE EN AMBOS CASOS LOS OLIGONUCLEÓTIDOS MODIFICADOS SON DEGRADADOS SIGNIFICATIVAMENTE EN LAS CÉLULAS IB3.1. EL ANÁLISIS GENESCAN DE ELECTROFEROGRAMAS FLUORESCENTES CONSTITUYE UN SISTEMA FIABLE, FÁCIL, SENSIBLE Y SEGURO PARA EVALUAR Y CUANTIFICAR LA DEGRADACIÓN INTRACELULAR Y EXTRACELULAR DE OLIGONUCLEÓTIDOS MARCADOS CON FLUORESCENCIA EN FLUIDOS BIOLÓGICOS. LA TECNOLOGÍA DE PCR-OLA CONSTITUYE UN SISTEMA FIABLE Y PRECISO DE CUANTIFICACIÓN DE REPARACIÓN GÉNICA APLICABLE A MODELOS CELULARES HETEROCIGOTOS. LOS FRAGMENTOS SFHR PUEDEN ACTUAR COMO CEBADOR ARTEFACTUAL EN LAS REACCIONES DE PCR Y GENERAR UN ARTEFACTO QUE DA LUGAR A FALSOS POSITIVOS EN LA DETECCIÓN DE CONVERSIÓN GÉNICA. ES INDISPENSABLE DISEÑAR LOS CEBADORES DE DETECCIÓN DE LA MODIFICACIÓN GÉNICA FUERA DE LA REGIÓN DE HOMOLOGÍA CON LOS FRAGMENTOS SFHR. LA CORRECCIÓN GÉNICA DE MUTACIONES PUNTUALES MEDIADA POR QUIMERAPLASTOS, OLIGONUCLEÓTIDOS MONOCADENA Y FRAGMENTOS SFHR ES UN PROCESO INEFICIENTE EN LAS CÉLULAS IB3.1. SERÁ NECESARIO ESTIMULAR LOS MECANISMOS ENDÓGENOS DE REPARACIÓN GÉNICA PARA INCREMENTAR LA FRECUENCIA DE REPARACIÓN GÉNICA HASTA NIVELES TERAPÉUTICOS EN DICHAS CÉLULAS.

Autor: Casadomé Burriel Laura.
Año: 2004.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: Dep. Ciencias Experimentales y de la Salud.
Centro de realización: Dep. Ciencias Experimentales y de la Salud.

Resumen: En Saccharomyces cerevisiae increments en la osmolaritat extracel-lular són detectats per la via de MAPK de HOG. La via de HOG es la homòloga funcional de les MAPKs activades per estrés en mamífers p38 i JNK. Publicacions recents han mostrat que la MAPK Hog1, l´element central de la via, pot regular diferents processos, com el cicle cel-lular, l´adaptació metabòlica o la regulació de l´expressió gènica. Al començament d´aquest treball, els mecanismes mitjançant els cuals Hog1 estava controlant l´expressió gènica eren desconeguts perquè els factors de transcripció que estaven sota el control de la MAPK no estaven ben caracteritzats. El nostre objectiu va ser la identificación de nous factors de transcripció sota el control de Hog1. Amb aquest objectiu, es va disenyar un screening genètic per identificar nous elements sota el control de la MAPK, on es va identificar Smp1. SMP1 codifica per un factor de transcripció de tipus MEF2C. La seva sobreexpressió induïa la resposta d´alguns gens que responen a situacions d´osmostrès, alhora que les cèlul-les smp1 mostren deficiències en la seva expressió. Els assajos de coimmunoprecipitació, van mostra que Smp1 interaccionava amb Hog1. A més, els experiments d fosforilació in vivo i in vitro vam mostrar que Smp1 era fosforilat per la MAPK, el que regulava la seva activitat transcripcional. D´altra banda, estudis d´expressió mitjançant microarrays van posar de manifest, que el transportador de glucosa de baixa afinitat HXT1 era induït després d´un estrès osmòtic de forma Hog1 depenent. El nostre treball afegeix noves dades sobre la regulació del promotor d´aquest gen. Així, mostrem que no només és induït en presència de glucosa per l´activació d´una via de senyalització depenent de la glucosa, sinó que la via de HOG és necessària per la seva trancripció tant en presència de glucosa com en presència de glucosa i estrés osmòtic. La via de HOG controla l´expressió d´HXT1 regulant l´activitat transcripcional del factor de transcripció sota el control de Hog1, Sko1.

Autor: Abril Ferrando Josep Francesc.
Año: 2004.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: Dep. Ciencias Experimentales y de la Salud.
Centro de realización: Dep. de Ciencias Experimentales y de la Salud.

Resumen: El aumento incesante del número de secuencias genómicas, junto con el incremento del número de técnicas experimentales de las que se dispone, permitirá la obtención del catálogo completo de las funciones celulares de los diferentes organismos, incluida nuestra especie. Este catálogo definirá las bases sobre las que se pueda entender mejor el funcionamiento de los organismos a nivel molecular. Al mismo tiempo, se obtendrán más pistas sobre los cambios asociados a enfermedades. Por tanto, la secuencia en bruto, tal y como se obtiene en los proyectos de secuenciación masiva, no tiene ningún valor sin los análisis y la posterior anotación de las características que definen estas funciones. Esta tesis presenta nuestra contribución a tres aspectos relacionados de la anotación de los genes en genomas eucariotas. Primero, la comparación a nivel de secuencia entre el genoma humano y el de ratón se llevó a cabo mediante un protocolo semi-automático. El programa de predicción de genes SGP2 se desarrolló a partir de elementos de dicho protocolo. El concepto sobre el que se fundamenta el SGP2 es que las regiones de similaridad obtenidas con el programa TBLASTX, se utilizan para aumentar la puntuación de los exones predichos por el programa geneid, con lo que se obtienen conjuntos más precisos de anotaciones de estructuras génicas. SGP2 tiene una especificidad suficiente como para validar esas anotaciones experimentalmente vía RT-PCR. La validación de los sitios de splicing mediante el uso de la técnica de la RT-PCR es un buen ejemplo de cómo la combinación de aproximaciones computacionales y experimentales produce mejores resultados que por separado. Se ha llevado a cabo el análisis descriptivo a nivel de secuencia de los sitios de splicing obtenidos sobre un conjunto fiable de genes ortólogos para humano, ratón, rata y pollo. Se han explorado las diferencias a nivel de nucleótido entre sitios U2 y U12 para el conjunto de intrones ortólogos derivado de esos genes. Se ha visto que las señales de splicing ortólogas entre humanos y roedores, así como entre roedores, están más conservadas que las no ortólogas. Esta conservación puede ser explicada en parte a nivel de conservación basal de los intrones. Por otro lado, se ha detectado mayor conservación de la esperada entre sitios de splicing ortólogos entre mamíferos y pollo. Los resultados obtenidos indican también que las clases intrónicas U2 y U12 han evolucionado independientemente desde el ancestro común de mamíferos y aves. Tampoco se ha hallado ningún caso convincente de interconversión entre estas dos clases en el conjunto de intrones ortólogos generado, ni ningún caso de substitución entre los subtipos AT-AC y GT-AG en intrones U12. Por el contrario, el paso de GT-AG a GC-AG, y viceversa, en intrones U2 no parece ser inusual. Finalmente, se han implementado una serie de herramientas de visualización para integrar anotaciones obtenidas por los programas de predicción de genes y por los análisis comparativos sobre genomas. Una de estas herramientas, gff2ps, se ha utilizado para cartografiar los genomas humano, de la mosca del vinagre y del mosquito de la malaria. El programa gff2aplot y los filtros asociados, han facilitado la tarea de integrar anotaciones a nivel de secuencia con los resultados obtenidos por herramientas de búsqueda de homología, como BLAST. Se ha adaptado también el concepto de pictograma al análisis comparativo de los sitios de splicing ortólogos, con el desarrollo del programa compi.

Autor: PUIGGRÒS LLAVINÉS FRANCESC.
Año: 2004.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: Les Procianidines són flavonoides (flavan-3-ols), de tipus oligomèric, que exerceixen efectes beneficiosos atribuïts clàssicament, al seu caràcter antioxidant, eliminador d'espècies reactives d'oxigen (ROS). En diverses malaties, sovint es descriu un estat associat d'estrès oxidatiu degut a l'excés de ROS. No obstant, cal aprofundir en els efectes i mecanismes d'acció de les procianidines, que depassen ja aquest rol tradicional d'antioxidants en mostrar recentment noves propietats que permeten ampliar els seu ventall d'actuació i de possibles aplicacions terapèutiques. L'objectiu principal de la tesi és, doncs, contribuir a entendre com les procianidines modulen l'equilibri redox cel.lular, tant a nivell de DNA com a nivell de l'expressió gènica d'enzims que formen part del sistema de defensa antioxidant en models d'estudi (in vivo i in vitro) induïts a estrès oxidatiu. Donat que les procianidines són força abundants en el vi negre, s'ha utilitzat com a font d'aquests compostos un extracte de procianidines de pinyol de raïm (GSPE). L'anàlisi in vitro de la capacitat antigenotòxica del GSPE demostra que els flavonoides protegeixen el DNA de l'estrès oxidatiu, i que l'eficiència de la protecció es correlaciona estretament amb l'estructura del flavonoide. Així, les procianidines, d'estructura oligomèrica i que, per tant, posseeixen més centres reactius antioxidants respecte els seus monòmers base (catequina i epicatequina), són més efectives en la protecció contra el dany oxidatiu genòmic. L'efecte preventiu és més rellevant si, previament a induir les cèl.lules a estrès oxidatiu, incubem els flavonoides en el medi de cultiu. Per tant, el mecanisme d'eliminació de les ROS no és la via exclusiva d'actuació de les procinidines i dels altres flavonoides en la prevenció dels danys al DNA sinó que s'estimulen mecanismes d'adaptació cel.lular, com la modulació de l'expressió gènica dels enzims del sistema de defensa antioxidant. En aquests darrers, l'anàlisi in vitro de l'efecte de les procianidines en l'expressió gènica mostra una activació transcripcional de la GPx, la GST i una regulació post-traduccional de la Cu, Zn-SOD marcada a la dosi de 15 mg/L de GSPE. Les condicions d'estrès oxidatiu s'estableixen per una disminució dels nivells de glutació (GSH) associat a un alt índex de peroxidació lipídica. En aquestes condicions, no hi ha una reposta coordinada del patró d'expressió dels enzims antioxidants malgrat que s'activen els enzims del cicle del glutatió. La pre-incubació dels hepatòcits amb procianidines prevé la disminució de glutatió, mantenint l'estat redox estable tot i exposar-los a condicions oxidants, probablement en activar els enzims limitants en la síntesi del glutatió, ajudant a regenerar-lo de nou i enfortint el sistema antioxidant contra alteracions redox. Les procianidines regulen post.traduccionalment la Cu, Zn-SOD en un model in vivo d'hepatòcits de rata marcada de nou a 15 mg/L, suggerint que aquesta dosi exerceix efectes més notables i que mereix ser estudiada en més profunditat.

Autor: FERNÁNDEZ BANET JULIO.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL CLÍNICO - UNIVERSIDAD DE SANTIAGO/FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La Poliquistosis Renal Autosómica Dominante (ADPKD de sus siglas en inglés) es una de las enfermedades monogénicas hereditarias más frecuentes. PKD1 es un gen complejo con una longitud de 50 kb.aprox.distribuidos en i46 exons. La proteína que codifica (poliquistina 1) contiene dominios transmembrana, extra e intra-celulares. Para el estudio del gen PKD1 y la proteína que codifica se han desarrollado una serie de programas de ordenador. El primer paso fue el desarrollo de un programa en PERL -BioPERL con el fin de automatizar el análisis de las secuencias del gen PKD1 obtenidas a partir de individuos afectos de ADPKD, y para anotar cualquier cambio encontrado en la secuencia del gen. El segundo paso fue la integración de la información obtenida en una base de datos relacional. Mediante el uso de estos programas se ha podido anotar un total de 384 cambios nucleotídicos distintos. También se han podido identificar nuevas variantes de secuencia. Para un mejor entendimiento de la función de la proteína poliquistina 1 se han empleado métodos para la predicción de la estructura terciaria de la proteína. Debido a la complejidad de la poliquistinta 1 (36 dominios diferentes), se modeló la proteína empleando métodos de "ab initio", sugiriendose al menos dos funciones diferentes para la poquistina 1 a partir de las estructuras obtenidas. Se ha sugerido que la región extracelular podría jugar un papel en fenómenos de adhesión celular. Esta afirmación se soporta en la estructura obtenida para los dominios PKD, los cuales parecen estar organizados en "7-bladed beta-propellers", estructura que ha sido descrita en varias proteínas con función conocida en adhesión/unión celular. Para los dominios transmembrana se ha descrito una homología con proteínas que forman canales catiónicos lo que ha llevado a sugerir que la poliquistina 1 podría formar parte de un canal catiónico no específico multimérico.

Autor: ALVAREZ BERMUDEZ MARIA JOSE.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA LY ODONTOLOGÍA.

Resumen: La habilidad para detectar bordes de contraste ha sido propuesto como uno de los mecanismos básicos que explican el reconocimiento de imágenes por el sistema visual. Actualmente se sabe que las células visuales corticales son sensibles a la orientación y dirección de estos bordes y la organización de las aferencias "O N" y "OFF" procedentes del geniculado a las células coroca les ha sido propuesto como el posible origen de esta sensibilidad. Sin embargo, el sistema visual es capaz de reconocer imágenes no solo por el contraste de sus bordes. En los estereogramas dinámicos de puntos (RDS), las figuras pueden ser identificadas basándose solamente en las disparidades retinianas que producen. Ambos tipos de bordes (de contraste y estereoscópicos), se detectan por procesos diferentes porque la detección de bordes de contraste en una escena visual puede realizarse a través de información monocular mientras que la identificación de bordes estereoscópicos requiere la detección de disparidad que solamente es posible mediante ínteracción binocular. Actualmente, se sabe que las células visuales corocales son sensibles a disparidades retlnianas en muchas áreas corticales pero no se conocen los mecanismos concretos que intervienen en su sensibilidad a la orientación y dirección de figuras estereoscópicas. El propósito de este estudio es comprobar si las células visuales corocales son sensibles a la dirección del movimiento de bordes estereoscópicos en "las áreas V1 y V2 de dos monos despiertos usando RDS dinámicos para construir las barras estereoscópicas usadas como estimulo. Nosotros hemos encontrado sensibilidad a la dirección de bordes estereoscópicos en ambas áreas. El número de células sensibles a bordes de contraste fué mayor que el número de células sensibles a bordes stereoscópicos, sugiriendo la necesidad de un procesamiento adicional para la detección de bordes estereoscópicos. La dirección preferente fué la misma para barras sólidas y estereoscópicas sugiriendo mecanismos neruronales básicos comunes para la detección de ambos tipos de estímulos. Nuestros sugieren además que la detección de disparidades retinianas ocurre primariame{lte en el área V1 junto con la detección del movimiento y seguidamente 'esta información es transferida al área V2. Nosotros hemos encontrado un (ndice de sensibilidad a la dirección significativa mente más alto en el área V2 que en el área V1 sugiriendo un efecto amplificador. Finalmente, no hemos encontrado ninguna relación entre la sensibilidad a la disparidad y a la orientación para barras sólidas en ambas áreas.

Autor: MARTINEZ LOPEZ M. JOSÉ.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: DEPT. DE BIOQUIMICA I BIOLOGÍA MOLECULAR .FARMACIA UB.

Resumen: La migración celular es un evento importante en múltiples aspectos del desarrollo de los seres vivos, sin embargo, los mecanismos moleculares que guían esta migración están lejos de conocerse. La identificación de los genes implicados en estos procesos en Caenorhabditis elegans y Drosophila, y el estudio de sus homólogos en mamíferos han revelado la conservación a través de la evolución de las moléculas de guía de transducción de las señales. El gen unc-53 de Caenorhabditis elegans es uno de estos genes con un papel clave en la migración antero-posterior de un conjunto de células migratorias y de sus axones. En este trabajo describimos el clonaje y primera caracterización funcional de su homólogo murino, mouse Neuron navigator 1(Mnav1).Mnav1 es un nuevo gen preferentemente expresado en el sistema nervioso (SN) y en el corazón. La expresión de Mnav1 en el SN está restringida a estadios embrionarios y etapas postnatales. Durante el desarrollo del SN está restringida a estadios embrionarios y etapas postnatales. Durante el desarrollo del SN, está limitada a neuronas pstmitóticas postmigratorias y algunas vías migratorias. EGFP-Mnav1 se asocia con los microtúbulos (MTs), una característica única que no ha sido previamente descrita para otros miembros de la familia. Además, esta asociación es especialmente importante en los extremos + de los MTs y está mediada por un nuevo dominio. En las neuronas, EGFP-Nnav1 está localizada en los conos de crecimiento, donde vías de señalización celular son activadas por moléculas de guía y que convengen en el citoesqueleto de los conos de crecimiento. Finalmente, el silenciamiento de su expresión endógena provoca la pérdida del direccionamiento de algunas neuronas en migración sugiriendo la implicación Mnav1 en los mecanismos en los cuales los leading processes encuentran la ruta hasta su diana apropiada a través del embrión en desarrollo.

Autor: GIMENO SORIANO ISABEL.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIÓN ECOLÓGICA Y APLICACIONES FORESTALES.

Resumen: Oxalis pes-caprae es una especie vegetal exótica originaria de Sudáfrica que en España ha invadido las comarcas litorales de la península y las islas Baleares. Los estudios realizados pusieron de manifiesto que esta especie presenta una mayor distribución en las islas que en las áreas continentales vecinas. Esto podría deberse al mayor potencial invasor de las poblaciones insulares de O. pes-caprae respecto las poblaciones continentales. El efecto de esta especie sobre el banco de semillas se produce a largo plazo, afectando sólo a la diversidad y no a la riqueza de especies vegetales. El impacto de la invasión de O. pes-caprae en campos de cultivo de Menorca es debido a la reducción de la productividad de las cosechas. Por ello se practican diferentes métodos de control, el que resultó más eficaz en nuestro estudio fue el control mecánico ya que redujo un 80% la cobertura de O. pes-caprae.

Autor: VILLAR CHEDA BEGOÑÁ.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOLOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR.

Resumen: La proliferción celular es una actividad fundamental en el desarrolla del sistema nervioso central. El estudio de proliferación celular nos permite deducir los patrones de desarrollo comunes a diferentes grupos de vertebrados. Al mismo desviaciones de estos patrones comunes ser reconocidos y relacionados con la generación de fenotipos específicos. La lamprea de mar pertenece al grupo de vertebrados existente por lo que retiene más características del supuesto antecesor común de los vertebrados de ningún constituyendo un buen modelo para estudios del desarrollo, estructura y función del sistema nervioso central. Los patrones reproliferación descritos en el sistema nervioso central de la lamprea presenta muchas similitudes con los descritos en otros vertebrados, pudiendo diferenciarse regiones de proliferación que se adscriben a las principales regiones neuroanatómicas tanto en el cerebro como en la retina. Además al igual que lo descrito en otros vertebrados las regiones de proliferación definidas en la lamprea se pueden se interpretada en un contexto neuromérico. El patrón de proliferación presente en el sistema nervioso central de la lamprea se corresponde con los patrones tempranos de diferenciación y están profundamente relacionados con el complejo ciclo de vida que presenta esta especie.