CIENCIAS DE LA VIDA, 7

Autor: LÓPEZ MOLINA DOROTEA.
Año: 2005.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La industria conservera de la alcachofa origina una gran cantidad de desechos agrícolas o industriales, constituidos principalmente por las hojas, el tallo y la parte externa de la flor (brácteas) de la alcachofa, no aptos para el consumo humano. A modo de ejemplo, el 70% en peso de la flor de la alcachofa corresponde a desechos no destinados al consumo humano. Sin embargo, tales desechos se utilizan para la alimentación animal y están destinados a la elaboración de forrajes ensilados. Esta Tesis aborda la búsqueda de nuevas aplicaciones para tales desechos desarrollando y caracterizando nuevos subproductos. Los extractos de alcachofa comprenden enzimas con actividad peroxidasa y polifenol oxidasa, y pueden ser obtenido a partir de desechos (tallos, hojas y brácteas) mediante homogeneización de dichos desechos en un medio acuoso, y puede ser utilizado para descontaminar medios líquidos, sólidos y semisólidos contaminados con fenoles, aminas aromáticas, haluros orgánicos y/o metales pesados, mediante tratamiento con peróxido en presencia de dicho extracto de alcachofa. Otro subproducto caracterizado en esta Tesis es una peroxidasa (AKPC). Las enzimas con actividad peroxidasa (EC 1.11.1.7) son óxidorreductasas que se encuentran ampliamente distribuidas en toda la escala filogenética y que catalizan la oxidación de un amplio número de sustratos orgánicos e inorgánicos, utilizando el poder oxidante del peróxido de hidrógeno. Además de su interés académico y fisiológico estas enzimas son ampliamente utilizada en laboratorios clínicos y en la industria. Se ha caracterizado una isoenzima de peroxidasa de la bráctea de la alcachofa y algunas de sus aplicaciones han sido discutidas. El último subproducto obtenido y analizado en esta memoria es la inulina. La inulina está siendo incluida hoy en día en numerosos productos alimentarios humanos y animales por su efecto positivo como prebiótico, estimulante del crecimiento de la flora intestinal no patógena. Ha encontrado aplicación en nutraceuticos y dietética, productos lácteos, alimentos para animales de compañía y, en menor medida, en animales de producción.

Autor: ARNAN VIADIU XAVIER.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS..
Centro de realización: UNIDAD DE ECOLOGÍA. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Autor: Cuñé Castellana Jordi.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias de la U.A.B..
Centro de realización: Facultad de Ciencias.

Resumen: El sistema SOS es una red multigénica bajo el control negativo del represor LexA, con importancia vital para la supervivencia celular, puesto que su desrepresión se da cuando la célula presenta daños en el material genético que puede ser transmitidos a la descendencia. Este hecho, junto con su amplia distribución en el dominio Bacteria, nos presentan el conocimiento de su funcionamiento en los diferentes grupos, como una herramienta filogenética idónea. Para tal fin, y como hilo conductor de este trabajo, se procedió al estudio del regulón LexA a Dehalococcoides ethenogenes, una bacteria verde no sulfurosa; Magnetococcus sp. cepa MC-1, una bacteria magnetotáctica; y Leptospira interrogans serovar Lai, la primera espiroqueta con un gen lexA identificado. Con tal finalidad, se procedió a la clonación del gen lexA de cada uno de ellos y a la purificación de su producto proteico. En el primero de ellos, se definió la caja de unión de LexA (AGAACN(4)GTTCT), comprobando a partir de ella, sus vínculos con las bacterias grampositivas, así como la no regulación del gen recA, considerado como canónico en el sistema SOS. A Magnetococcus sp. cepa MC-1, la caja SOS descrita fue CCTN(10)AGG. Hasta el momento, este microorganismo se encontraba ubicado dentro de la subclase Alfa de las Proteobacterias, pero el conocimiento del motivo de unión de su LexA, y los genes que integran su regulón, nos lo muestran como una rama estrechamente relacionada con este clase, pero claralmente independiente. En lo que refiere a Leptospira interrogans serovar Lai, el resultado fue sorprendente, puesto que la caja SOS de esta bacteria, tuvo que ser identificada en la región promotora de recA, puesto que no es presente en la de lexA, aconteciendo así, el primer ejemplo en el que LexA no autoregula su expresión. Este dato, así como el hecho de no poder detectar ningún otro gen bajo su control, nos muestran el genero Leptospira, como un paso intermedio en la tendencia evolutiva seguida por las espiroquetas de perder su gen lexA.

Autor: Ghirardi Juan José.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultat de veterinaria.
Centro de realización: Facultad de Veterinaria.

Resumen: Esta tesis se centra en el desarrollo de bolos para la identificación electrónica (IDE) de ovinos y bovinos, en la estimación de una ley biológica para predecir su retención y finalmente en la evaluación de su uso para la implementación de un sistema de trazabilidad basado en IDE y ADN en corderos y terneros.

Autor: LOPEZ VIADO MARIA DEL CARMEN.
Año: 2005.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Resumen: Uno de los principales intereses actualmente en biología del desarrollo es clarificar los procesos que tienen lugar, para que las células inicialmente indiferenciadas se organicen en el espacio y en el tiempo para formar órganos complejos. Nuestro objetivo inicial ha sido identificar nuevos genes implicados en el desarrollo de la extremidad, ya que la extremidad es un modelo clásico muy empleado. En este trabajo hemos clonado a partir de una genoteca de cDNA de pollo, el cDNA correspondiente a ps20 de pollo (cps20). Las proteínas ps20 pertenecen a la superfamilia de proteínas WAP. Esta superfamilia incluye proteínas que tienen al menos un dominio WAP. El dominio WAP es un dominio estructural que presenta poca homología en la secuencia peptídica entre las diferentes proteínas, excepto en 8 residuos de cisteína que están altamente conservados. Entre las 8 cisteínas se forman 4 puentes disulfuro, y son estos 4 puentes disulfuro los responsables del dominio WAP. Aunque no tienen ninguna función asignada, algunos dominios WAP tienen función inhibidora de serinproteasas. El estudio del patrón de expresión de cps20 mostró que se expresa de manera dinámica en la extremidad del embrión pollo, adoptando un patrón posterodistal. Este patrón tan interesante hacía prever una función durante el desarrollo, sin embargo la sobreexpresión de cps20 en el embrión de pollo, mediante la utilización de vectores retrovirales RCAS no dio lugar a ninguna alteración en la formación de la extremidad, obteniéndose extremidades completamente normales. El estudio en células en cultivo dio como resultado una inhibición del crecimiento en células que sobreexpresaban esta proteína. También se estudió para cps20 la función inhibidora de serinproteasas que había sido descrita en otras proteínas WAP. Para ello se utilizó la proteína recombinante cps20his y se estudió la función inhibidora de tripsina. Se obtuvo que cps20 era capaz de inhibir la actividad proteolítica de la tripsina. Esta función está en consonancia con la anteriormente descrita ya que se ha visto que diferentes inhibidores de proteasas como el Pefabloc inhiben el crecimiento celular. Por último se analizó mediante inmunoflluorescencia la localización celular de cps20. Para ello en un primer momento se obtuvieron anticuerpos policlonales en el laboratorio que se purificaron por afinidad para asegurar su especificidad. Se observó que, en diferentes líneas celulares transfectadas con cps20, ésta se localizaba en la membrana plasmática. Por tanto se ha identificado un nuevo gen implicado en el desarrollo de la extremidad, que mediante su función inhibidora podría estar regulando los procesos de proliferación que ocurren durante el desarrollo. Por otra parte y puesto que varias proteínas implicados en el desarrollo de la extremidad son activadas por proteolísis, cps20 podría estar implicada en el control de alguna de estas vías de activación.

Autor: DUQUE ALVAREZ PALOMA.
Año: 2005.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Resumen: El presente trabajo ha sido desarrollado para mejorar los métodos de producción de embriones bovinos in vitro. Se ha conseguido identificar factores capaces de mejorar tanto la calidad como el desarrollo de los embriones, contribuyendo así a la consecución de un sistema de producción de embriones de características químicamente definidas y libre de sustancias de origen animal. La tesis consta de cuatro trabajos trabajos publicados en revistas del área de Biología Reproductiva del ISI Journal Of Citation Reports: Effects of acetoacetate on in vitro development of bovine embryos in medium containing citrate and myo-inositol. Gómez E, Duque P, Díaz E and Díez C. Reprod Domest Anim 2001 Aug; 36 (3-4): 189-94. Effects of acetoacetate and D-beta-hydroxybutyrate on bovine in vitro embryo development in serum-free medium. Theriogenology 2002 Mar 15, 57 (5): 1551-62. Enhancement of development capacity of meiotically inhibited bovine oocytes by retinoic acid. Duque P, Díez C, Royo L, Lorenzo PL, Carneiro G, Hidalgo CO, Facal N and Gómez E. Hum Reprod 2002 Oct 17 (10): 2706-14. Use of two replacements of serum during bovine embryo cultire in vitro. Duque P, Gómez E, Díaz E, Hidalgo CO and Díez C. Theriogenology 2003 Feb, 59 (3-4): 889-99.

Autor: Espadaler Mazo Jordi.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultad de ciencias.
Centro de realización: Universidad Autonoma de Barcelona.

Autor: RUIZ GARZÓN MARÍA AMPARO.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: DEPT. BIOQUÍMICA I BIOLOGIA MOLECULAR.
Centro de realización: FACULTAT DE VETERINÀRIA.

Resumen: La fosforilación/desfosforilación de proteínas es el principal mecanismo de regulación post-transcripcional que presentan todas las células eucariotas. El estado de fosforilación de una proteína determinada depende del balance entre las actividades proteína quinasa y proteína fosfatasa que actúan sobre ella. A su vez, estas proteínas quinasas y fosfatasas se encuentran fuertemente reguladas, convirtiendo la fosforilación en un mecanismo complejo y extremadamente controlado. El hecho de que en las células eucariotas haya un número considerablemente mayor de proteínas quinasas que de proteínas fosfatasas implica que estas fosfatasas participen en múltiples procesos celulares y, por ello, presenten a menudo mecanismos de regulación más complejos, como la existencia de subunidades reguladoras que pueden modular su actividad enzimática, localización intracelular o capacidad para interaccionar con otras proteínas. A este respecto, la levadura Saccharomyces cerevisiae representa una herramienta muy útil para estudiar tanto el proceso de fosforilación como su regulación, ya que, aunque es un organismo eucariota, es unicelular. Además, esta levadura presenta ventajas respecto al resto, ya que se conoce su secuencia cromosómica desde hace ya bastante tiempo y se dispone de toda una serie de herramientas que la hacen idónea para la investigación básica de cualquier proceso celular eucariota. Las proteínas fosfatasas Ppz1 y Ppz2, que desfosforilan residuos serina/treonina de otras proteínas, están relacionadas estructuralmente con la fosfatasa PP1. En Saccharomyces cerevisiae esta fosfatasa consta de una única subunidad catalítica (Glc7), que es esencial, y una gran variedad de subunidades reguladoras que le confieren la especificidad de función. A diferencia de Glc7, que se encuentra muy conservada evolutivamente, las fosfatasas Ppz sólo se encuentran en hongos y, en el momento de iniciar este trabajo, únicamente se había descrito una subunidad reguladora que modula su actividad fosfatasa en todos los procesos en los que éstas están implicadas: la proteína Hal3. Las fosfatasas Ppz participan en la regulación de funciones tales como el mantenimiento de la integridad celular, la transición G1/S del ciclo celular, la homeostasis salina y la fidelidad traduccional. Aunque se conocía poco de los elementos a través de los cuales ejercen estas funciones, durante la realización de este trabajo se describió la existencia de una relación entre las fosfatasas Ppz y los transportadores de potasio Trk1 y Trk2. La defosforilación de estos transportadores por acción de las fosfatasas Ppz daría lugar a una menor entrada de potasio al interior celular, lo cual permite explicar en gran medida las funciones que realizan estas fosfatasas. En este trabajo presentamos nuevas dianas biológicas de las fosfatasas Ppz, como son la vía de señalización de calcio/calcineurina y el sistema de transporte de potasio de baja afinidad. El análisis de la tolerancia salina de células que carecen de Ppz1 y Ppz2 demuestra que estas células son tolerantes a litio y sodio porque presentan una mayor expresión de la ATPasa Ena1, el principal sistema detoxificador de la levadura S. cerevisiae. Este incremento en la expresión de ENA1 es independiente del sistema de transporte de potasio de alta afinidad (Trks) pero totalmente dependiente de la vía de señalización de la fosfatasa calcineurina. Nuestros resultados sugieren que las fosfatasas Ppz, y específicamente Ppz1, regulan negativamente a los transportadores de calcio de la membrana plasmática, alterando la homeostasis de calcio y, por tanto, inhibiendo la actividad de la fosfatasa calcineurina. Por otro lado, el análisis de los requerimientos de potasio de células que carecen de los transportadores de potasio Trk1 y Trk2 y las fosfatasas Ppz1 y Ppz2, nos ha permitido identificar a estas fosfatasas como reguladores positivos del sistema de transporte de potasio de baja afinidad, denominado NSC1. Por otra parte, describimos una nueva subunidad reguladora negativa de las fosfatasas Ppz, la proteína Vhs3. A diferencia de las fosfatasas Ppz1 y Ppz2, que son exclusivas de hongos, Hal3 y Vhs3 presentan homólogos en eucariotas superiores. En la levadura las dos proteínas actúan inhibiendo la activid 8 ad de Pp 96d z1 y Ppz2 en todas sus funciones descritas, aunque Hal3 parece ser más eficiente que Vhs3. También demostramos la participación de las proteínas Hal3 y Vhs3 en el proceso celular de la floculación. Hal3 y Vhs3 estarían regulando de forma negativa la vía de señalización de la PKA, que regula al factor de transcripción Flo8 y la expresión de la floculina Flo11, de tal manera que un doble mutante condicional hal3 vhs3 presenta un fenotipo de floculación acompañado de un incremento en la expresión de FLO11. Este efecto parece ser dependiente de las fosfatasas Ppz y podría ser explicado por la regulación negativa que ejercen éstas sobre los transportadores de potasio. Asimismo, demostramos la existencia de una nueva función esencial para las proteínas Hal3 y Vhs3 que no implica a las fosfatasas Ppz, dado que el doble mutante hal3 vhs3 es letal y ello no es debido a un exceso de actividad fosfatasa Ppz. Para esta nueva función es importante el residuo His90 descrito en AtHal3a de Arabidopsis thaliana como imprescindible para catalizar in vitro la descarboxilación de 4'-fosfopantotenoilcisteína a fosfopanteteína, un paso clave en la síntesis de coenzima A. Aunque Hal3 y Vhs3 conservan este residuo histidina, no conservan el residuo equivalente a la Cys175, también necesario en eucariotas y eubacterias para que tenga lugar esta reacción in vitro. Por tanto, no es evidente que esta nueva función descrita sea participar en la síntesis de coenzima A. Aun así, la letalidad del doble mutante hal3 vhs3 se suprime por la expresión en la levadura de homólogos de Hal3 de eucariotas superiores, como son los de planta, ratón y humano, por lo que sea cual sea su naturaleza, esta función esencial está conservada a lo largo de la evolución.

Autor: RUIZ GARZÓN MARÍA AMPARO.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: DEPT. BIOQUÍMICA I BIOLOGIA MOLECULAR.
Centro de realización: FACULTAT DE VETERINÀRIA.

Resumen: La fosforilación/desfosforilación de proteínas es el principal mecanismo de regulación post-transcripcional que presentan todas las células eucariotas. El estado de fosforilación de una proteína determinada depende del balance entre las actividades proteína quinasa y proteína fosfatasa que actúan sobre ella. A su vez, estas proteínas quinasas y fosfatasas se encuentran fuertemente reguladas, convirtiendo la fosforilación en un mecanismo complejo y extremadamente controlado. El hecho de que en las células eucariotas haya un número considerablemente mayor de proteínas quinasas que de proteínas fosfatasas implica que estas fosfatasas participen en múltiples procesos celulares y, por ello, presenten a menudo mecanismos de regulación más complejos, como la existencia de subunidades reguladoras que pueden modular su actividad enzimática, localización intracelular o capacidad para interaccionar con otras proteínas. A este respecto, la levadura Saccharomyces cerevisiae representa una herramienta muy útil para estudiar tanto el proceso de fosforilación como su regulación, ya que, aunque es un organismo eucariota, es unicelular. Además, esta levadura presenta ventajas respecto al resto, ya que se conoce su secuencia cromosómica desde hace ya bastante tiempo y se dispone de toda una serie de herramientas que la hacen idónea para la investigación básica de cualquier proceso celular eucariota. Las proteínas fosfatasas Ppz1 y Ppz2, que desfosforilan residuos serina/treonina de otras proteínas, están relacionadas estructuralmente con la fosfatasa PP1. En Saccharomyces cerevisiae esta fosfatasa consta de una única subunidad catalítica (Glc7), que es esencial, y una gran variedad de subunidades reguladoras que le confieren la especificidad de función. A diferencia de Glc7, que se encuentra muy conservada evolutivamente, las fosfatasas Ppz sólo se encuentran en hongos y, en el momento de iniciar este trabajo, únicamente se había descrito una subunidad reguladora que modula su actividad fosfatasa en todos los procesos en los que éstas están implicadas: la proteína Hal3. Las fosfatasas Ppz participan en la regulación de funciones tales como el mantenimiento de la integridad celular, la transición G1/S del ciclo celular, la homeostasis salina y la fidelidad traduccional. Aunque se conocía poco de los elementos a través de los cuales ejercen estas funciones, durante la realización de este trabajo se describió la existencia de una relación entre las fosfatasas Ppz y los transportadores de potasio Trk1 y Trk2. La defosforilación de estos transportadores por acción de las fosfatasas Ppz daría lugar a una menor entrada de potasio al interior celular, lo cual permite explicar en gran medida las funciones que realizan estas fosfatasas. En este trabajo presentamos nuevas dianas biológicas de las fosfatasas Ppz, como son la vía de señalización de calcio/calcineurina y el sistema de transporte de potasio de baja afinidad. El análisis de la tolerancia salina de células que carecen de Ppz1 y Ppz2 demuestra que estas células son tolerantes a litio y sodio porque presentan una mayor expresión de la ATPasa Ena1, el principal sistema detoxificador de la levadura S. cerevisiae. Este incremento en la expresión de ENA1 es independiente del sistema de transporte de potasio de alta afinidad (Trks) pero totalmente dependiente de la vía de señalización de la fosfatasa calcineurina. Nuestros resultados sugieren que las fosfatasas Ppz, y específicamente Ppz1, regulan negativamente a los transportadores de calcio de la membrana plasmática, alterando la homeostasis de calcio y, por tanto, inhibiendo la actividad de la fosfatasa calcineurina. Por otro lado, el análisis de los requerimientos de potasio de células que carecen de los transportadores de potasio Trk1 y Trk2 y las fosfatasas Ppz1 y Ppz2, nos ha permitido identificar a estas fosfatasas como reguladores positivos del sistema de transporte de potasio de baja afinidad, denominado NSC1. Por otra parte, describimos una nueva subunidad reguladora negativa de las fosfatasas Ppz, la proteína Vhs3. A diferencia de las fosfatasas Ppz1 y Ppz2, que son exclusivas de hongos, Hal3 y Vhs3 presentan homólogos en eucariotas superiores. En la levadura las dos proteínas actúan inhibiendo la activi 8 dad de P 96e pz1 y Ppz2 en todas sus funciones descritas, aunque Hal3 parece ser más eficiente que Vhs3. También demostramos la participación de las proteínas Hal3 y Vhs3 en el proceso celular de la floculación. Hal3 y Vhs3 estarían regulando de forma negativa la vía de señalización de la PKA, que regula al factor de transcripción Flo8 y la expresión de la floculina Flo11, de tal manera que un doble mutante condicional hal3 vhs3 presenta un fenotipo de floculación acompañado de un incremento en la expresión de FLO11. Este efecto parece ser dependiente de las fosfatasas Ppz y podría ser explicado por la regulación negativa que ejercen éstas sobre los transportadores de potasio. Asimismo, demostramos la existencia de una nueva función esencial para las proteínas Hal3 y Vhs3 que no implica a las fosfatasas Ppz, dado que el doble mutante hal3 vhs3 es letal y ello no es debido a un exceso de actividad fosfatasa Ppz. Para esta nueva función es importante el residuo His90 descrito en AtHal3a de Arabidopsis thaliana como imprescindible para catalizar in vitro la descarboxilación de 4'-fosfopantotenoilcisteína a fosfopanteteína, un paso clave en la síntesis de coenzima A. Aunque Hal3 y Vhs3 conservan este residuo histidina, no conservan el residuo equivalente a la Cys175, también necesario en eucariotas y eubacterias para que tenga lugar esta reacción in vitro. Por tanto, no es evidente que esta nueva función descrita sea participar en la síntesis de coenzima A. Aun así, la letalidad del doble mutante hal3 vhs3 se suprime por la expresión en la levadura de homólogos de Hal3 de eucariotas superiores, como son los de planta, ratón y humano, por lo que sea cual sea su naturaleza, esta función esencial está conservada a lo largo de la evolución.

Autor: TOMAS ZAPICO CRISTINA.
Año: 2005.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. DPTO.BIOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR.

Resumen: La glándula de Harder del hámster sirio (Mesocricetus auratus) muestra como principal característica un elevado metabolísmo porfirinogénico, más incluso que el hígado. La baja actividad del último enzima de la ruta porfiriogénica, ferfroquelatasa, lleva a la acumulación de porfirinas, principalmente protoporfirina IX, en la glándula de Harder de las hembras. Debido a la localización de esta blándula, estos metabolitos están expuestos a la luz, generando especies reactivas de oxigeno. Por ello, la glándula de Harder presenta un estrés oxidativo fisiológico, con gran número de signos de degeneración, pero sin que la integridad de la glándula se vea comprometida. La aparición de características morfológicas anómalas en esta glándula ha sido descrita en el pasado,aunque nunca se había realizado una interpertación de las mismas hasta la fecha . Los estudios realizados en esta Tesis Doctoral parten del análisis de los factores fisiológicos que marcan el metabolismo característico de la glándula de Hader, esto es, los principales enzimas porfirinogénicos, relacionándolos tanto en el sistema antioxidante enzimático glandular, con el daño celular causado por las especies reactivas de oxígeno, como con la presencia de la molécdula antioxidante melatonina, que además juega otros papeles en la glándula de Hader como modular determinados procesos tanto fisiológicos como morfológicos. Los resultados obtenidos de estos estudios llevaron a la descripción de procesos autofágicos como primera barrera contra el elevado metabolismo porfirinogénico, observado en ambos sexos. Este mecanismo es considerado, en la glándula de Harder, como un sistema de renovación constante que permite continuar con la actividad glandular normal. Aparte, existe un segundo mecanismo, consistente en procesos invasivos hacia el tejido conjuntivo, pudiendo llegar incluso a alcanzar vasos sanguíneos produciéndose un proceso de intravasación de material glandular dañado. Este efecto es consecuencia de un ambiente con elevado estrés oxidativo, que es observado principalmente en las hembras, recordando la progresión tumoral. Ambos mecanismos, autofagia y procesos invasivos, deben estar implicados en el mantenimiento de la intgridad celular.

Autor: Fernandez Tajes Juan.
Año: 2005.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Facultad de Ciencias.

Resumen: Las navajas son un grupo de moluscos bivalbos que agrupan especies de los géneros Ensis y Solen. Recientemente se han iniciado diferentes estudios sobre su biología y ecología con el fin de mejorar la producción y explotación de estos recursos marinos de gran interés comercial nacional y gallego. Hasta el momento, los estudios genéticos son practicamente inexistentes por lo que en este trabajo de tesis doctoral se han planteado los siguientes objetivos; Analizar las características citogenéticas de Ensis arcuatus, E. siliqua y Solen marginatus, llevar a cabo el análisis molecular de los genes ribosomales nucleares ADNr 18S-5, 8S-28S y ADNr 5S en diferentes poblaciones europeas de navajas y establecer la variabilidad genética y la estructura poblacional en E.arcuaturs, E. siliqua y E. directurs de Galicia, Portugal, Irlanda y Holanda mediante los marcadores moleculares de regiones anónimas nucleares (RAPDs). La caracterización citogenética ha revelado que las tres especies analizadas presentan una dotación cromosómica diploide de 2n=38. Las especies E. arcuatur y E. siliqua presentan cromosomas accesorios B en número variable tanto intra- como interindividual. En las especies E. arcuatus y E. siliqua se han encontrado un elevado número de regiones genómicas ricas en GC. Se localizaron 13 regiones CA3 en E. siliqua, nueve en E. arcuatus y dos en S. marginatus. Se analizan las regiones Ag-NORs y la posición de los genes ribosomales mendiante FISH. La caracterización molecular del gen ribosomal 5S ha revelado que todas las especies poseen un tamaño de región codificante de 120 pb, siendo la región no transcrita de tamaño variable. Debemos destacar la existencia de al menos tres tipos de NTS, el tipo I característico de E. arcuatus y E. siliqua, el NTS Tipo II característico de E. directus y el NTS Tipo III característico de S. marginatus. Además la especie E. directus mostró otro tipo de NTS caracterizado por la inserción en su interior de un microsatélite compuesto. La región ITS mostró unos valores de divergencia muy similares entre las dos especies, siendo la región ITS2 la más divergente. El análisis filogenético permitió separar en dos clusters bien diferenciados los clones de E. arcuatus de los de E. siliqua. Para el análisis de las regiones anónimas de ADN en diferentes poblacionales de E. arcuatus, E. siliqua y E. directus se han seleccionado un total de 62 loci generados a partir de cinco primers, mediante el empleo de estos loci RAPDs se ha podido observar que la especie E. directus es la que se muestra más alejada respecto al resto de especies y poblaciones analizadas. Refieriéndose sólo a las poblaciones de E. siliqua las poblaciones gallegas mostraron una menor diferenciación reflejando la existencia de una estructura panmictica, con respecto al resto de poblaciones de E. siliqua los datos apoyan que existe una influencia de la distancia geográfica sobre las distintas poblaciones mostrando las más alejadas una mayor diferenciación. En el caso de la población de Strangford Lough el análisis de componentes principales la muestra separada del resto de poblaciones.

Autor: Fernandez Moreno Mercedes.
Año: 2005.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Facultad de Ciencias.

Resumen: El ADNmt constituye un marcador genético útil en estudios genético-poblacionales y en la elaboración de filogenias. En el caso de diferentes especies de moluscos (pertenecientes tanto a la subclase Heterodonta como Pteriomorphia) los patrones de amplificación generados fueron de -420 pb para el gen ARNr 12S y de -710 pb para el COI. Para el gen ARNr 16S consistieron de un fragmento de -550 pb (banda I) y otro de -610 pb (banda h). La composición nucleotídica de los tres genes reveló un mayor contenido en AT (-60%)que en GC. Los valores de distancias genéticas son, en general, más elevados entre las especies de la subclase Heterodonta que entre las de la subclase Pteriomorphia. Los valores para el coeficiente Ts/Tv próximos a 10 fueron los obtenidos a partir del gen ARNr 12S. En el caso del ARNr 16S, estos valores fueron de =,756 a 8,168 entre las especies del género Ensis, e inferiores a 1 en el caso de los clones de banda h de E. siliqua y E. arcuatus. Entre las demás especies analizadas el valor fue -1. Los valores obtenidos a partir del gen COI fueron inferiores o próximos a 1 para todas las especies. Estos resultados indican que, en general, las secuencias analizadas se encuentran saturadas de transiciones o cercanas a la saturación, y que los niveles de divergencia genética entre especies son bastante elevados en el caso de los genes ARNr 16S y COI. Los análisis filogenéticos realizados en los tres genes mitocondriales muestran la agrupación en un cluster de las especies pertenecientes a las familias Pharidae y Solenidae, reflejando en el mismo dos grupos claramente diferenciados, uno que engloba a las especies del género Ensis y otro a S. marginatus. Sin embargo, en el caso del ARNr 16S la agrupación del género Ensis varía. Así, los individuos con patrón de amplificación de banda única y los clones de banda 1 aparecen en un clúster próximo a las especies de la subclase Heterodonta, mientras que los clones de banda h lo hacen en otro con las especies pertenecientes a la subclase Pteriomorphia. En el caso de las especies de pectínidos estudiadas el análisis filogenético indica un posible origen polifilético para este grupo. Por otra parte, el orden Veneroida muestra un posible origen polifilético teniendo en cuenta los arboles generados a partir de los tres genes. Los valores de D, D* y F* obtenidos indican que las tres regiones analizadas siguen la teoría neutralista. No obstante, los clones de E. siliqua de banda h parecen estar bajo la acción de la selección purificadora o haber sufrido recientemente un cuello de botella que haya eliminado la variación. La heteroplasmia detectada a partir del análisis del gen ARN 16S podría deberse a la existencia de tres tipos de cromosomas mitocondriales: cromosomas con el gen ARNr 16S tipo 1, cromosomas con el gen ARNr 16S tipo h y cromosomas con ambos tipos. Así, las mitocondrias podrían estar constituidas por cualquiera de los tres tipos de cromosomas o por mezcla de ellos. Esta heteroplasmia podría ser generada y mantenida o bien porque el proceso de eliminación de lasd mitocondrias masculinas fuese poco eficiente, por la existencia en si misma de gran variabilidad intraindividual y/o por la presencia de mecanismos de recombinación homóloga o no homóloga. El análisis de los patrones de restricción generados a partir del gen ARNr 16S permiten establecer 50 haplotipos diferentes y muestra la existencia de un mayor polimorfismo en las localidades gallegas. No se obtuvieron haplotipos específicos de especie pero si de localidad. La distribución de los haplotipos en las diferentes localidades de Galicia sugiere que no están aisladas geneticamente. Sin embargo, las localidades de Galicia y las de Irlanda si lo 8 están. E 500 l escaso polimorfismo detectado en las localidades irlandesas y portuguesas puede ser consecuencia de las características geográficas de esas zonas. Por otra parte, también hay que considerar el hecho de la reducción del tamaño de las poblaciones naturales provocada, en el caso de Portugal, por la sobreexplotación pesquera, lo cual podría originar un cuello de botella transitorio que afectaría a la diversidad mitocondrial. Los resultados de los AMOVAs revelan que la mayor parte de la variación genética se distribuye dentro de las localidades (variación intraindividual) más que entre los grupos.

Autor: Acerete Rodríguez Laura.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Univ.Autónoma de Barcelona.
Centro de realización: Universidad Autónoma de Barcelona.

Resumen: El cortisol es el principal glucocorticoide en peces teleósteos, asumiendo también funciones mineralocorticoideas. Es el principal indicador de la respuesta al estrés, participa en diversas vías metabólicas, es inmunosupresor y antiinflamatorio y es la principal hormona osmorreguladora en peces. En el hígado, los glucocorticoides aumentan la transcripción de genes implicados en la gluconeogénesis, en el catabolismo de los aminoácidos y en la respuesta de fase aguda. La secreción de cortisol en peces está regulada por el eje hipotalámico-pituitario-interrenal (HPI), equivalente al eje hipotalámico-pituitario-adrenal (HPA) en mamíferos. Las hormonas corticosteroideas, en mamíferos, actúan a través de receptores intracelulares específicos, receptor mineralocorticoide (MR) y receptor glucocorticoide (GR), que actúan como factores de transcripción dependientes de ligando. Últimamente se ha demostrado que algunas especies de peces expresan un MR y/o más de un GR. En este trabajo hemos clonado, por primera vez, el GR de la dorada (Sparus aurata). La región codificante se traduce en una proteína de 784 aminoácidos y muestra elevada homología con los dominios de unión al DNA y a la hormona, de otros receptores glucocorticoides, incluidos los de mamíferos. La expresión del GR de la dorada es ubícua, ya que se ha detectado en todos los tejidos estudiados: corazón, hígado, bazo, riñón anterior y posterior, intestino, gónada, tejido adiposo, branquia, cerebro y músculo. La respuesta global al estrés requiere la interacción neuro-inmuno-endocrina a través de comunicaciones paracrinas bidireccionales. Esta comunicación es importante para mantener la homeostasis en diferentes condiciones estresantes, incluida la endotoxemia. La endotoxina de las bacterias gramnegativas o LPS, en los vertebrados, desencadena una reacción inmunitaria compleja que comporta la producción de citoquinas proinflamatorias por parte de los macrófagos, principalmente el TNFa (factor de necrosis tumoral alfa) y la IL1b (interleuquina 1 beta). Las citoquinas producidas en respuesta a una exposición de LPS están implicadas también en la activación del eje HPA y activan, por tanto, la liberación de cortisol. Nuestros resultados muestran que la administración in vio de LPS estimula el eje HPI en la dorada desencadenando la liberación de cortisol, siguiendo un patrón de respuesta aguda. Esta hormona modula la respuesta inflamatoria inhibiendo la producción de citoquinas inducidas por LPS. Nuestro estudio muestra que esta regulación se podría dar a través del GR porque interfiere con los factores de transcripción encargados de inducir la transcripción de genes implicados en la respuesta inflamatoria. La expresión del GR en la dorada después de una inyección de LPS está regulada de manera específica en función del tiempo y el tejido. En general, vemos que existe una correlación inversa entre los niveles de cortisol plasmático y los niveles de expresión del GR en los tejidos. La inyección intraperitoneal de LPS también aumenta la expresión de otros genes inmunes (TNFa, IL1b, catepsinaD, proteína Mx, PPAR gamma) en los principales tejidos inmunológicos de la dorada, concretamente en riñón anterior, bazo, intestino anterior y branquias. Los cambios en la expresión de estos genes es diferente en función del tejido y el tiempo. En el cultivo primario de hepatocitos de dorada, dosis bajas de un estímulo inmune (TNFa recombinante) o endocrino (cortisol) modifican la expresión diferencial de genes inmunes (TNFa, IL1b) y endocrinos (GR, catD), respectivamente. A dosis más elevadas de cortisol disminuye la expresión del GR y del TNFa 12 horas después del tratamiento. Los cambios en la expresión de ambos genes siguen un patrón temporal porque con estas mismas dosis altas de cortisol, aumenta la expresión del GR y disminuye la del TNFa 3 horas después del tratamiento. Esta respuesta demuestra que, en peces, la regulación de la respuesta inflamatoria también puede darse a travé 8 s del GR 3cd . Finalmente, la perca europea (Perca fluviatilis) sometida a factores estresantes típicos de las prácticas acuícolas (transporte y manipulación) muestra la respuesta fisiológica primaria de liberación de cortisol pero bajo nivel de actividad en las respuestas secundarias de liberación de glucosa y lactato.

Autor: Meghelli Nacima.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultad de ciencias.
Centro de realización: Unidad de Ecología. Universidad Autónoma de Barcelona.

Resumen: Esta tesis tiene como objetivo evaluar diferentes metodologías para la optimización de la producción viverística y el establecimiento en campos diferentes especies forestales mediterráneas con diferentes características morfológicas. Durante la fase de establecimiento en campo las plántulas pueden experimentar importantes periodos de estrés, sobretodo hídrico, lo que puede limitar su supervivencia y desarrollo. Por este motivo, la calidad morfo-fisiológica de las plantas es un factor que juega un papel esencial en el éxito de un proyecto de repoblación. Esta calidad representa un compendio de diferentes características destinadas a obtener un material de mayor resistencia una vez se encuentre en el monte, de modo que se favorezca la disminución del estrés sufrido por el manejo, se mejore la capacidad de arraigo, su óptimo crecimiento y, por lo tanto, la garantía de la repoblación de la zona a largo tiempo. La mayor parte de las investigaciones sobre la mejora de la calidad de planta en vivero (aumento de la temperatura, aplicación de atmósferas enriquecidas en CO2, diferentes niveles de estrés hídrico, el empleo de diferentes sustratos) se han centrado especialmente en la producción intensiva de especies hortícola, cuando existe muy poca información en su aplicación en el caso de especies forestales. En este contexto, esta tesis aporta nuevas ideas sobre el uso previo de diferentes tratamientos en vivero sobre 4 especies forestales mediterráneas de P. nigra, P. pinaster, Q. ilex y Q. humilis. Esta tesis aporta también novedades sobre el uso de algunas técnicas para la mejora del establecimiento de las plántulas en campo, como el uso del fango de depuradora secado térmicamente, un residuo generado en cantidades grandes, que a priori son reutilizables para mejorar las características físico-químicas de los suelos degradados, pero del que se tiene muy poca información. En este proyecto de tesis la investigación realizada contempla todos los procesos claves con respecto al uso del material vegetal para la restauración de zonas degradadas, desde la producción en vivero hasta el establecimiento en campo.

Autor: Oliva Paterna Francisco José.
Año: 2005.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Biología.
Centro de realización: Facultad de Biología (Universidad de Murcia).

Resumen: La finalidad consistió en establecer las bases científicas para la recuperación y conservación de Aphanius iberus en la Región de Murcia. En el contexto de los axiomas de la Biología de la Conservación, los resultados principales obtenidos han sido: 1) Determinación y cuantificación de la distribución de la especie en el ámbito de estudio, con el establecimiento de Unidades Ecogeográficas de gestión. A su vez, se establece un listado de Hábitats potenciales para la reconstitución de poblaciones de la especie en la Región. 2) Se presenta una primera aproximación a la variabilidad genética de la especie en la Región y el establecimiento de las Unidades de Conservación Operativas de la especie. 3) Se ha analizado su estrategia de vida en un humedal con salinas costeras, con la finalidad de mejorar la gestión enfocada sobre la especie de estos sistemas. 4) Se han caracterizado los tipos de poblaciones locales de la especie presentes en el Mar Menor y su entorno y se propone un modelo de dinamica y estructura metapoblacional. 5) Se establece el estatus de conservación de la especie en el área de estudio con la aplicación de criterios UICN aplicados a nivel regional. Con la finalidad de presentar una recomendaciones, desde el contexto académico, para la gestión de la especie: 6) Se reunen los conocimientos adquiridos y se establecen recomendaciones para la gestión de la especie. 7) Se elabora un documento con las directrices a seguir para las actuaciones sobre la especie mientras no sea elaborado su Plan de Recuperación.

Autor: GALLEGO DEL SOL FRANCISCA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA.

Resumen: Las lectinas son proteínas de origen no inmune, que reconocen específicamente hidratos de carbono pero ejercen ninguna acción enzimática sobre ellos. Son ubicuas en organismos de toda la escala evolutiva, estando implicadas en multitud de procesos biológicos, tanto fisiológicos como patológicos. Además de ser esenciales para el normal funcionamiento de los seres vivos, son importantes herramientas en biotecnología. El objetivo de la tesis ha sido el estudio de lectinas vegetales pertenecientes a la familia de las leguminosas. Por una parte, se ha resuelto la primera estructura primaria y cristalina de una lectina de la subfamilia de las Mimosoideas. La lectina de Parkia platycephaia presenta tres dominios de tipo jacalina dispuestos en tándem. Cada subunidad posee un sitio de unio a azúcar con por glucosa y manosa. Esta lectina forma dimeros independientemente del pH. Por otra parte se ha profundizado en el estudio de las bases estructurales del equillibrio dimero-tetrámero en lectinas del género Diocleinae. Para esto se han resuelto las estructuras cristalinas de lectinas de semillas Dioclea guianensis. Dioclea violacea y Cratylia floribunda para poderlas comparar entre ellas.

Autor: Porras Pardo Mònica.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultad de Veterinaria.
Centro de realización: Unidad Fisiología. facultad de Veterinaria.

Resumen: La inflamación intestinal es una de las causas más frecuentes de patología digestiva. Bajo el nombre de enfermedad inflamatoria intestinal (EII) se agrupan dos patologías inflamatorias crónicas y recidivantes de etiología desconocida: la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa La relativamente elevada incidencia de estas patologías hace que estudiar su etiopatogenia sea un objetivo importante, ya que actualmente no existe ningún tratamiento curativo y/o que prevenga la recidiva A pesar de que los pacientes afectados de EII presentan síntomas relacionados con alteraciones de la motilidad digestiva se desconoce la implicación que pueden tener estos desordenes en la patogénesis de la enfermedad. Nuestro grupo se ha centrado en la caracterización de un modelo experimental de inflamación intestinal crónica, con el objetivo inicial de valorar los cambios que la inflamación provoca en la motilidad intestinal y estudiar que mecanismos están implicados en estos cambios. El estudio se ha llevado a cabo en un modelo experimental inducido por indometacina en rata, en el que hemos logrado reproducir las recidivas que se producen de forma espontánea en los pacientes humanos Así, los animales a los que se les administra indometacina presentan una alternancia de fases de inflamación activa, caracterizadas por leucocitosis, incremento de TNF en suero y aumento de la actividad MPO, con otras de aparente recuperación de la normalidad. Los estudios realizados en este modelo demuestran claramente que las diferentes fases van acompañadas de cambios en la flora intestinal y alteraciones de la motilidad. Mientras que durante la fase activa se observa una hipomotilidad generalizada acompañada de un sobrecrecimiento de bacterias luminales, la fase de recuperación está asociada a un incremento en los parámetros motores que ayuda al restablecimiento de la flora microbiana La regulación de la síntesis de NO juega un papel clave en el curso de las alteraciones motoras asociadas al proceso inflamatorio Mientras que el incremento de motilidad observado durante las fases de recuperación parece ser debido a la reducción del tono inhibitorio intestinal derivado de la inhibición de la expresión de nNOS, la disminución de motilidad y sobrecrecimiento bacteriano asociado a las fases activas parecen ser debidos a un incremento de la síntesis de NO producido por la sobre-expresión de iNOS. Recientemente también hemos demostrado que los animales con inflamación inducida presentan un aumento sostenido de la permeabilidad intestinal, sugiriendo que la vulnerabilidad de la función barrera epitelial es uno de los factores involucrados en la perpetuación del proceso inflamatorio. De manera conjunta, todos estos resultados dan pie a la siguiente hipótesis: mientras que la carga antigénica se mantiene dentro de unos límites, debido a una normal o incrementada motilidad, no hay respuesta inflamatoria a pesar del incremento de permeabilidad intestinal. Sin embargo, cuando la actividad motora decrece, el incremento de la interacción antígeno-mucosa facilita el paso de moléculas a través del epitelio, resultando en la activación del sistema inmune y la liberación de mediadores inflamatorios

Autor: Peluffo Zavala Hugo.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Escuela de Postgrado, UAB.
Centro de realización: Unidad de Histología, Fac.de Med. UAB.

Autor: Ribas Cabezas Laia.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Universitat Autònoma de Barcelona.
Centro de realización: Universitat Autònoma de Barcelona.

Autor: FORMENT DASCA JOSEP VICENT.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE AGRICULTURA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS-UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: El hongo filamentoso Aspergillus nidulans es un microorganismo modelo para el estudio de rutas metabólicas dada la gran variedad de sustratos sobre los que es capaz de crecer. Aunque se conoce mucho sobre el tipo y la regulación de las actividades enzimáticas que expresa el hongo dependiendo de la fuente de carbono disponible, se sabe muy poco sobre los mecanismos de captación de metabolitos fundamentales como los monosacáridos. En este trabajo se describe la clonacion de seis genes (mstA, mstB, mstC, mstD, mstE y mstF) cuyos productos proteicos hipotéticos podrían estar relacionados con el transporte de azúcares. Dos de estos seis genes se caracterizan funcionalmente, descubriéndose que el gen mstC codifica una proteína de transporte de glucosa de alta afinidad que se expresa preferentemente en conidios en germinación de A. nidulans, mientras que el gen mstE codifica una permeasa de glucosa y manosa de baja afinidad. La expresión del gen mstC se encuentra reprimida por la presencia de fuentes de carbono represoras en el medio mediante la acción del factor de transcripción CreA y se encuentra inducida bajo condiciones de pH ambiental alcalino gracias a la acción del factor de transcripción PacC. La eliminación del gen mstC provoca la pérdida del transporte de glucosa de alta afinidad de manera análoga a lo que ocurre en el mutante sorA3 de A. nidulans. El gen mstC es capaz de complementar la mutacion sorA3, por lo que se deduce que mstC y sorA son el mismo gen. La expresión del gen mstE esta inducida por la presencia de fuentes de carbono represoras en el medio de una manera dependiente del factor de transcripción CreA. Una fusión de la proteina MstE a la proteina fluorescente GFP permitio la localización subcelular del transportador en la membrana plasmática del hongo. La eliminación del gen mstE produce la pérdida del transporte de glucosa de baja afinidad en conidios en germinacion de A. nidulans. Dada la gran cantidad de genes en A. nidulans que a priori podrían presentar capacidad de transporte de azúcares (con el consiguiente problema en la búsqueda de fenotipos por posible redundancia funcional), en este trabajo también se describe el desarrollo de una herramienta molecular para la eliminación consecutiva de genes en una misma cepa de A. nidulans. Esta estrategia se basa en el sistema de la recombinasa Cre y los sitios 10XP del bacteriofago P1 , que permiten el reciclaje selectivo de un marcador de selección bidireccional (es decir, que se puede seleccionar positivamente tanto su ausencia como su presencia). En este caso se uso el gen pyr-4 de Neurospora crassa, que complementa la incapacidad de crecimiento en medios sin uracilo y uridina de la cepa pyrG89 de A. nidulans, que en su ausencia se muestra muy resistente a los efectos tóxicos del ácido 5- fluoroorotico. Para demostrar la efectividad del sistema se eliminaron de forma consecutiva los genes yA y wA, implicados en la coloracion de las esporas del hongo.