CIENCIAS DE LA VIDA, 8

Autor: LUCAS GAY MARIA JESUS.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La relaxasa es la proteína responsable de las reacciones de iniciación en el procesamiento conjugativo del DNA. La relaxasa reconoce y corta un enlace fosfodiéster específico situado en el origen de transferencia mediante el ataque nucleofílico de una tirosina. En este trabajo se ha estudiado el recnocimiento del DNA y la bioquímica de la reacción de corte de DNA catalizada por la relaxasa del plásmido R388, TrwC. El fragmento TrwC-N293, que contiene los primeros 293 aminoácidos de la proteína, une oligonucleótidos de la región de corte, nic, que abarcan la repetición invertida IR2 con una afinidad nanomolar. Esta unión implica a una molécula de proteína y de DNA. La estructura tridimensional de este complejo está construida sobre dos capas alfa/beta y posee una grieta donde se sitúa el centro activo. Las estructuras disponibles muestran que la unión de TrwC-N293 al DNA está asociada a un plegamiento de la proteína. La afinidad de la unión de TrwC-N293 por la región nic está determinada por sus interacciones con los 22 primeros nucleótidos en dirección 5' al sitio nic. Los contactos con la doble cadena de la repetición invertida son los que muestran una mayor contribución en la afinidad de la unión. La unión de la secuencia próxima al nic en forma de cadena sencilla muestra menor afinidad, pero su reconocimiento es esencial para el posicionamiento correcto del DNA en el centro activo, de tal manera que se pueda realizar el ataque nucleofílico sobre el fosfato de corte. Esta diferente afinidad sugiere que TrwC va a contactar primero la secuencia de IR2 y esta unión va a facilitar el reconocimiento de la secuencia adyacente (las bases entre IR2 y el sitio nic y dos bases 3' del nic). Estas dos regiones de DNA son reconocidas específicamente por TrwC, por lo que ambas interacciones van a ayudar a la relaxasa a discernir entre otras secuencias y su diana, el sitio nic del oriT de R388. Un estudio de los mutantes de los residuos deTrwC Arg81, Ser89 y Lys92 ha mostrado que su función está relacionada con su interacción con el DNA. Los resultados sugieren que R81 facilita el desapareamiento de la doble cadena en torno al nic, S89 interacciona con el extremo 3' del DNA cortado y K92 ayuda al correcto posicionamiento del DNA en el centro activo. También se ha estudiado el papel de los iones metálicos en la actividad de TrwC. Por una parte, los iones metálicos tienen un papel en la catálisis de la reacción de corte, ya que a partir de la posición del ion metálico en el centro activo de de las estructuras resueltas de TrwC se infiere que los iones metálicos pocionan y polarizan el fosfato de corte. Por otra parte, se ha comprobado que también tienen un papel estructural, ya que la unión de los iones metálicos Mn y Ni hace que el plegamiento de la proteína sea más compacto. Por último, se ha analizado que residuos de TrwC además de las tirosinas Tyr18 y Tyr26 intervienen en el mecanismo de la reacción de corte del DNA. Un estudio de mutagénesis a alanina ha puesto de manifiesto que los residuos Asp85, His 150, His 161 y His 163 contribuyen al ataque nucleofílico realizado por Tyr18 y Tyr26. La tríada de histidinas coordinan el ion metálico, que es esencial para la reacción,y se ha propuesto que Asp85 activa el grupo hidroxilo de Tyr18 por abstracción de un protón.

Autor: QUINTANA BUSTAMANTE OSCAR.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La presencia de hepatocitos derivados de la médula ósea (HDMO) en el hígado se ha descrito en diferentes modelos. El mecanismo implicado en su origen no está del todo claro. Se ha propuesto como posibles mecanismos la diferenciación directa de células madre hematopoyéticas (CMHs) y/o fusión celular entre células derivadas de CMHs y hepatocitos endógenos. La frecuencia de aparición de HDMO está relacionada con el modelo estudiado, y varía según la fuente desde el 30% de todos los hepatocitos a ser un fenómeno muy escaso. Para estudiar el proceso de generación de HDMO, se ha desarrollado un modelo en ratón, en el que ratones hembra letalmente irradiados fueron trasplantados con células de MO de ratones transgénicos machos, que expresaban la proteína verde fluorescente (EGFP) bajo el control del promotor ubicuo de la b-actina. Después del establecimiento de la hematopoyesis quimérica, los animales fueron inyectados con solución salina o tetracloruro de carbono (CCl4) para inducir un daño hepático similar a una cirrósis crónica. En los animales tratados con CCl4 se observó una gran diferencia en los parametros plasmáticos y una estructura hepática completamente alterada. Los HDMO se identificaron mediante inmunofluorescencia como células EGFP+ con morfología de hepatocito, expresando proteínas específicas de hepatocito y no expresando marcadores hematopoyéticos; la frecuencia de HDMO en los hígados dañados fue de 1 por 250.000 hepatocitos totales. Posteriormente, se movilizó durante tres semanas con el factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) o con G-CSF/Trombopoyétina (TPO) a la mitad de los animales de cada grupo. Una semana más tarde, se sacrificaron los animales y se analizó la presencia de HDMO. La movilización con G-CSF incrementó significativamente el porcentaje de HDMO (más de 17 veces) en el hígado de los animales tratados con CCl4. Una frecuencia igual, se alcanzó con la movilización con G-CSF/TPO. Números similares de HDMO se detectaron también cuando los ratones fueron trasplantados con una población purificada de CMHs (fenotipo Lin-/Sac-1+/c-Kit+/EGFP), las cuales necesitaron un injerto previo en médula ósea. El análisis de los mecanismos implicados en la generación de HDMO, se realizó mediante la colocalización de marcadores del donante de MO hembra (EGFP) y de los ratones receptores macho (cromosoma Y). Se detectó que la mayoría de los hepatocitos que expresaban EGFP también tenian el cromosoma Y, indicando que su origen era el resultado de una fusión in vivo entre hepatocitos endógenos y células sanguineas de la hembra. Este proceso fué incrementado usando cloruro amónico (NH4Cl), un inhibidor de la fagocitosis, sugiriendo que los procesos endocíticos característicos de monocítos-macrófagos, estaban implicados en la formación de HDMO. Por último, para determinar la forma en el que el núcleo hematopoyético se reprogramaba, se analizó cualitativa y cuantitativamente la morfología y la expresión de antígenos nucleares específicos de linaje. Se identificó un proceso secuencial, a través del cual el núcleo hematopoyético cambiaba su morfología, perdía factores nucleares hematopoyéticos y finalmente adquiría factores nucleares hepáticos, igualando a los núcleos de los hepatocitos. En resumen, hemos demostrado que: i) la presencia de HDMO en el hígado se produce cuando existe un daño hepático. ii) La presencia de estas células puede ser incrementada significativamente con el uso de factores de crecimiento hematopoyéticos. iii) El origen de los HDMO es hematopoyético y se produce mediante fusion in vivo entre células hematopoyéticas y hepatocitos. iv) El núcleo hematopoyético de los HDMO sufre cambios en su morfología, silencia genes hematopoyéticos y presenta marcadores nucleares hepáticos.

Autor: BENITO GARZÓN MARTA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS, DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID, DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA.

Resumen: Se analizan las distribuciones de 19 especies forestales en la península Ibérica en relacción al clima. Se genera un marco de modelización en ambiente open source oara la predicción de hábitat de las especies. Este marco engloba tres técnicas de aprendizaje automático de datos: árboles de clasificación y regresión, redes neuronales y el algoritmo de random forest. Se predijeron las distribuciones de estas especies para distintos escenarios climáticos: el último máximo glaciar (LGM, 21000BP), el Óptimo Climático (6000BP), presente, 2020, 2050 y 2080. Los escenarios climáticos se adaptaron para la península Ibérica a partir de Modelos Generales de Circulación Atmosférica (GCM). Los resultados para el pasado muestran como las áreas de distribución de las especies en el LGM dibujan los refugios de flora puestos de manifiesto por medio de palinología y filogeografía. Los resultados también muestran el incremento en área de distribución que sufrieron las especies durante el Óptimo Climático. En el futuro, la tendencia general en las distribuciones de las especies para cualquiera de los escenarios climáticos y líneas evolutivas del IPCC (A1, A2, B1 y B2) es una disminución drástica de las áreas de ocupación como respuesta al cambio climático. El grupo de especies que se ve más drásticamente afectada en términos de disminución de área es el compuesto por las especies submediterráneas, que se verían avocadas en algunos casos casi hasta la extinción. Los bosques de coníferas de montaña también sufrirían una disminución patente en sus áreas de distribución. Ésta no sería tan fuerte en el caso de los bosques planocaducifolios. Los bosques mediterráneos muestran una mayuor capacidad de movimiento como respuesta al cambio climático que otros tipos de bosques. Las especies que viven en las zonas más continentales sufrirían una disminución muy acusada debido al aumento de temperaturas que se producirá en las zonas más continentales.

Autor: Barrio Burgos Jorge.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Centro Nacional Biotecnología.
Centro de realización: Centro Nacional de Biotecnología.

Autor: JOHNSTONE ESPAÑA CAROLINA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El virus respiratorio sincitial (VRS) humano es una de las mayores causas de infecciones respiratorias en neonatos y ancianos. La glicoproteína de fusión (F) del VRS es una diana antigénica en el desarrollo de vacunas ya que desencadena una respuesta inmune mediada por anticuerpos y por linfocitos T citotóxicos CD8+ (CTL). En la proteína F de la cepa A2 del VRS se han descrito dos epítopos de CTL murinos restringidos por H-2Kd, los epítopos F85-93 y F92-106. Con objeto de estudiar la respuesta inmune frente a la proteína F del VRS mediada por CTL, en el modelo de ratón BALB/c, se generaron in vitro líneas de CTL policlonales específicas de la proteína F mediante procedimientos que las mantenían monoespecíficas o multiespecíficas. En el segundo caso se ha utilizado de forma novedosa la estimulación con las células BCH4 persistentemente infectadas con la cepa Long del VRS. Las líneas de CTL se utilizaron en ensayos funcionales de presentación de antígeno mediante citotóxicidad o tinción intracelular de citoquinas (ICS). Además, para evaluar la respuesta in vivo de linfocitos T CD8+ se llevaron a cabo ensayos de ICS con esplenocitos ex-vivo. Las conclusiones más relevantes de los resultados obtenidos son las siguientes: - En la proteína F de la cepa Long del VRS, se conserva el epítopo F85-93 presentado por Kd y descrito en la cepa A2. Sin embargo, no hay ninguna evidencia de la presencia del epítopo F92-106 en la cepa Long. - La secuencia F249-258 de la proteína F de la cepa Long del VRS es un nuevo epítopo presentado por Kd a CTL como nonámero (TYMLTNSEL) o decámero (TYMLTNSELL). La infección in vivo de ratones BALB/c con VRS o con un virus vaccinia recombinante que codifica la proteína F del VRS (vvF) induce CTL frente a este epítopo. - En la respuesta inmune in vivo mediada por linfocitos T CD8+ en ratones BALB/c infectados con vvF, se va estableciendo una inmunodominancia de F85-93 sobre F249-258, siendo la línea policlonal multiespecífica CTL F/BCH4 representativa de este patrón de inmunodominancia. - Los epítopos de la proteína F del VRS F85-93 y F249-258 presentados por Kd son procesados por vías diferentes dependiendo del epítopo, de la forma de proteína F, y de su contexto viral. Ambos epítopos pueden ser presentados por vías independientes de TAP diferentes. Los resultados presentados en esta tesis doctoral contribuyen al estudio en modelos murinos del papel de los CTL en la respuesta inmune a la proteína F del VRS, y subrayan la diversidad de vías de procesamiento disponibles para la presentación de epítopos por MHC de clase I a CTL.

Autor: Medina Vico Pedro Pablo.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Cen. Nac. de Inv. Oncol.(U.A.M).
Centro de realización: Cen. Nac. de Inv. Oncol.(U.A.M).

Resumen: El cáncer de pulmón actualmente es un grave problema sanitario en España siendo el primer cáncer en cuanto a mortalidad y el segundo en cuanto a incidencia. Esta tesis contribuye desde diferentes ángulos al avance de la biología molecular de cáncer de pulmón, una herramienta que puede colaborar en el descenso de estas estadísticas: Por una parte se ha estudiado la relación entre polimorfismos en genes de reparación de daños en el ADN (vinculados a los carcinógenes del tabaco) y características genéticas y patológicas de tumores primarios de pulmón. Por otra parte se ha estudiado la contribución a la carcinogénesis pulmonar de los genes supresores tumorales BRG1 y LKB1, cuyos productos se había relacionado funcinalmente. Finalmente se ha realizado una búsqueda de oncogenes activados por amplificación génica en el cáncer de pulmón, que puedan ser dianas para un posible tratamiento terapeutico.

Autor: ALONSO LOBO JUAN MANUEL.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR.
Centro de realización: INSTITUTO DE SALUD CARLOS III (MADRID).

Resumen: EL OBJETIVO DE ESTE TRABAJO EN UN PRICIPIO FUE ANALIZAR LA REGULACIÓN DEL PROMOTOR DEL CXCL12 EN CÉLULAS PRODUCTORAS CONSTITUTIVAS: LC5, MS5, Y U373, Y DETERMINAR TANTO LOS ESTÍMULOS DE INDUCCIÓN, COMO LAS REGIONES REGULADORAS IMPLICADAS EN LA REGULACIÓN DE DICHO PROMOTOR. EN UNA SEGUNDA PARTE, EL OBJETIVO FUE ANALIZAR EL EFECTO DE LA PROTEÍNA TAX DE HTLV-1 SOBRE LA EXPRESIÓN DE CXCL12 EN LINFOCITOS, ASÍ COMO EN CÉLULAS T DE LEUCEMIAS/LINFOMAS ASOCIADOS A UNA INFECCIÓN POR HTLV-1. SE OBSERVÓ QUE UNA EXPRESIÓN TRANSITORIA DE LA PROTEÍNA TAX EN CÉLULAS JURKATT PRODUJO UNA IMPORTANTE TRANSACTIVACIÓN DEL PROMOTOR DE CXCL12. DE ACUERDO CON ESTOS RESULTADOS, SE OBSERVÓ LA PRESENCIA TANTO DE mRNA COMO DE PROTEÍNA EN CÉLULAS MT2 (LÍNEA CELULAR INFECTADA DE FORMA CRÓNICA POR EL HTLV-1); TODO ELLO VISTO POR RT-PCR, CITOMETRÍA DE FLUJO Y MARCAJE POR INMUNOFLUORESCENCIA. CXCL12 FUE DETECTADO TAMBIÉN EN EL SOBRENADANTE DE CÉLULAS MT2 POR TÉCNICAS DE ELISA Y CHEQUEADA SU ACTIVIDAD FUNCIONAL POR ENSAYOS DE QUIMIOTAXIS. BIOPSIAS DE PACIENTES INFECTADOS CON HTLV-1 MOSTRARON LINFOCITOS CD3+ POSITIVOS PARA LA EXPRESIÓN DE CXCL12, MIENTRAS QUE NO APARECÍA ESTA EXPRESIÓN EN GANGLIOS LINFÁTICOS DE PACIENTES NO INFECTADOS POR EL HTLV-1. EN BASE A ESTOS RESULTADOS SE PUEDE CONCLUIR QUE LA PROTEÍNA TAX DE HTLV-1 INDUCE LA EXPRESIÓN DE LA QUIMIOCINA CXCL12 A NIVEL TRANSCRIPCIONAL, APARECIENDO ASÍ UNA EXPRESIÓN ABERRANTE DE LA PROTEÍNA CXCL12 TANTO EN LÍNEAS CELULARES INFECTADAS CON EL HTLV-1 COMO EN LINFOCITOS DE BIOPSIAS PROVENIENTES DE LINFOMAS ASOCIADOS A ESTE VIRUS. EL INCREMENTO EN LA EXPRESIÓN DE CXCL12 POR LA INFECCIÓN HTLV-1 PUEDE CONTRIBUIR AL RECLUTAMIENTO DE LINFOCITOS SANOS HACIA LOS GANGLIOS INFECTADOS POR EL HTLV-1, INDUCIENDO ASÍ LA PROPAGACIÓN DE LA INFECCIÓN.

Autor: Muñoz Risueño Ruth.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Fa. de Cien. Secc. Biol.Biol. Molec..
Centro de realización: Facultad de Ciencias.

Resumen: La activación del receptor para el antígeno de células T (TCR) puede producir diferentes respuestas dependiendo de la naturaleza del péptido antigénico enmarcado en el complejo principal de histocompatibilidad (MHCp). Este potencial implica la combinación de la especificidad del ligando por el TCR y de la activación de las distintas cascadas intracelulares de señalización. El mecanismo molecular que permite la discriminación se conoce parcialmente. El anticuerpo monoclonal APA1/1 reconoce un epítopo en el tallo citosólico de CD3e que se expone cuando el TCR es activado completamente. La exposición del epítopo de APA1/1 se produce rápida e independientemente de la actividad tirosín-quinasa; de hecho, esta exposición se produce cuando las células son estimuladas a 0º C. Únicamente la estimulación del TCR con el ligando agonista fuerte induce la exposición del epítopo de APA1/1. En la mayoría de las células T en reposo en ganglios linfáticos, el epítopo de APA1/1 no está expuesto, pero tras la inyección del antígeno in vivo, el epítopo se expone en la mayoría de las células T específicas para el antígeno. Estos resultados demuestran que el TCR sufre un cambio conformacional tras la unión del MHCp in vitro e in vivo, y se estable una correlación molecular con la activación productiva del TCR. Una característica única del TCR es su habilidad para explorar los ligandos de MHCp estructuralmente similares y transmitir diferencialmente las señales bioquímicas dependiendo de la fortaleza del reconocimiento del ligando. En el desarrollo de timocitos, los ligandos débiles inducen la selección positiva y los ligandos fuertes inducen la selección negativa. Una minoría de timocitos de ratones no transgénicos exponen el epítopo reconocido por APA1/1. Las células APA1/1 positivas son DP, están en la corteza y las uniones cortico-medulares y están en contacto con las células epiteliales y dendríticas. La población APA1/1 positiva aumenta en condiciones de selección negativa tanto en ratones transgénicos para el TCR restringido para MHC de clase I como de clase II. La mayoría de los timocitos APA1/1 positivos son TUNEL positivos, indicando la existencia de una correlación directa entre la exposición del epítopo de APA1/1 y la inducción de apoptosis mediada por ligandos de MHCp que inducen selección negativa. Aunque existen evidencias experimentales del cambio conformacional en CD3e tras la estimulación del TCR, no se conoce la forma de transmisión del reconocimiento antigénico desde las subunidades reconocedoras del ligando TCRab a las subunidades señalizadoras del CD3. La estimulación del TCR induce una protección frente a la digestión con proteasas en los tallos de CD3e y CD3z. Utilizando una aproximación termodinámica, se describen las propiedades de la conformación no activa y activa de los dímeros del CD3. Finalmente, se propone un modelo en el que la estimulación del TCR induce la rigidificación de la estructura y una compactación de los tallos del CD3.

Autor: VANDERMEEREN Andrée Marie.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Departamento de Biología Molecular.
Centro de realización: Centro Nacional de Biotecnología (CSIC).

Resumen: El virus de la hepatitis C (HCV) es el agente causal de la hepatitis no A y no B. La OMS estima que el 3% de la población mundial está clínicamente afectada por este virus. Más de la mitad de los casos progresan a infecciones crónicas que frecuentemente desarrollan cirrosis hepática que puede evolucionar a carcinoma hepatocelular. Sin embargo, el mecanismo de patogénesis es aún poco conocido debido a la falta de un sistema de cultivo celular y un modelo viral adecuado para la infección y replicación del virus. El virus vaccinia (VV) ha sido un vector ampliamente usado para la expresión de proteínas heterólogas, por ello hemos desarrollado un nuevo sistema de expresión basado en un virus recombinante del virus vaccinia y que denominamos VT7-HCV7.9. Este virus recombinante expresa de forma inducible las proteínas estructurales (Core, E1 y E2) y no estructurales (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y parte de NS5B) del ORF del subtipo 1b del HCV. Análisis por microscopía confocal y por Western blot han revelado que la poliproteína viral es eficientemente procesada en diferentes líneas celulares (Hela, BSC40 y HepG2) infectadas con el virus recombinante VT7-HCV7.9, expresándose las diferentes proteínas estructurales y no estructurales de HCV. Además, hemos visto que las proteínas de HCV expresadas a partir de VT7-HCV7.9 se localizan exclusivamente en el citoplasma con una distribución puntuada, colocalizan con el retículo endoplasmático (RE) y las mitocondrias y produce rotura del aparato de Golgi. En estudios por miscroscopía electrónica de células humanas infectadas con el virus recombinante, se observó que las proteínas de HCV inducen alteraciones en la arquitectura de las células infectadas caracterizadas por la pérdida de la organización del RE, hinchamiento de las mitocondrias, formación de red de membranas y de estructuras electrón densas en la red de membrana, dispersas en varias áreas. Dichas alteraciones son similares a las vistas en células hepáticas de chimpancés infectados por HCV. Por otro lado, la expresión inducida de HCV a partir de VV, provoca la inhibición de la síntesis de proteínas totales en las células humana de carcinoma, Hela, y hepáticas, HepG2, por fosforilación del factor de iniciación eIF2alfa. Dicha expresión también afecta a la replicación del virus vaccinia. Hemos mostrado que las proteína quinaza inducida por IFN, PKR, es la principal quinasa responsable de la fosforilación de eIF2alfa y de la inhibición de la traducción en las células infectadas con VT7-HCV7.9. También observamos que la expresión de las proteínas de HCV en las células infectadas con VT7-HCV7.9 induce apoptosis dependiente de las caspasas (caspasa-3, -8 y -9) y mediada por la mitocondria. Además, dicha apoptosis esta mediada por el sistema 2-5A sintetasa/RNasa L de manera independiente a PKR. Finalmente, observamos que la muerte celular por apoptosis podría ser relacionada con la expresión de las proteínas E1-E2 y NS5A del virus HCV. Estos resultados indican que el sistema de expresión del genoma de HCV por recombinante de VV puede facilitar el conocimiento sobre la morfogénesis viral y su relación con el huésed.

Autor: CAÑADAS CARBÓ ANA MARÍA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El objetivo general de la tesis fue contribuir a la conservación de los cetáceos en el mar de Alborán, mediante el estudio de su ecología y la propuesta de medidas de gestión y conservación. El área de estudio incluye la sección norte del mar de Alborán y el Golfo de Vera. La plataforma de observación fue el barco de investigación Toftevaag. Se recogieron datos de transecto lineal, comportamiento, tamaño de grupo y otros para cada avistamiento de cetáceos, así como datos ambientales y de actividades humanas. La primera fase de este trabajo, que se centró en el estudio de la distribución de siete especies de cetáceos en el sur de Almería, indicó que la fisiografía local puede desempeñar un papel significativo en su distribución. Se identificaron dos grupos de especies según su distribución con respecto a profundidad. Delfines listados, calderones grises, calderones negros, ballenas picudas y cachalotes, muestran preferencia por aguas profundas. El delfín común y el mular fueron encontrados con más frecuencia en aguas menos profundas. La caracteristica común a todas las especies en el grupo de aguas profundas más obvia es sus hábitos de alimentación (predominantemente teutofágicas). Sin embargo, los delfines común y el mular (grupo de aguas menos profundas), han demostrado tener preferencia por peces en muchos estudios de dieta. En una segunda fase se profundizó en el análisis de las preferencias de hábitat de las diferentes especies de cetáceos utulizando la herramienta del análisis espacial. Los resultados de estos nuevos analísis básicamente coinciden con los de la primera fase,pero dotándoles de mayor robustez. Los delfines mulares y comunes siguen mostrando la mayor presencia en las aguas de la plataforma continental y la caída de la plataforma en toda la región (y especialmente alrededor del Seco de los Olivos para el delfin mular). Las otras cinco especies se distribuyen fundamentalmente por las aguas profundas, evitando la plataforma continental. Gracias a este trabajo, se han podido identificar los patrones de distribución generales de estas especies en toda la zona, de lo cual no existía ninguna información previa. Un estudio más específico y avanzado se realizó sobre los delfines mulares y comunes, estimándose también su abundancia. Para el delfín mular, la estima de abundancia para el período 2000 a 2003 en el área de Alborán es de 584 delfines (95%CI = 278-744), concentrados principalmente en el sur de Almeria,las áreas costeras de Granada y el sur de Punta CDAlaburras en Málaga. En el área de Almwería, la abundancia estimada entre 1992 y 1997 fuew de 111 delfines (95%CI = 54-234). Entre 1998 y 200, después de la llegada de animales "inmigrantes", la abundancia estimada aumentó en un factor de cuatro. En 2001-2003, la abundancia estimada disminuyó a la mitad. El área central de mayor densidad fue la misma en los tres períodos: alrededor del "Seco de los Olivos". La abundancia total de delfín común para toda el área de estudio desde Gibraltar hasta el Golfo de Vera entre 2000 y 2004 fue estimada en 19,428 animales (95%CI = 15,277 - 22,804): Existe una variación estacional en desidad en la zona sur de Almería, con una densidad media más alta en verano que en el invierno. Hay también diferencias geográficas cuando se considera el conjunto del área de estudio durante el verano, con una densidad mucho más alta en el oeste que en el este, y densidad intermedia al sur de Almería en la zona centro. La población se mantiene estable desde 1992 hasta 2004 en el mar de Alborán, mientras que se detectó una disminución importante en el Golfo de Vera a partir de 1996. Por otra parte, los grupos con crís tienden a preferir aguas más costeras y los grupos sin crías aguas más profundas. Los grupos monoespecíficos siguieron el patrón general de densidades más altas alrededor de la caída de la plataforma, mientras que las densidades más altas de animales en grupos mixtos (mezclados con delfín listado) se dan en las aguas profundas. Las densidades más altas de animales alimentándose se dan en las aguas más costeras. La densid 8 ad de lo 4f9 s animales en desplazamiento sigue el patrón general indicado más arriba. Hay un fuerte patrón bimodal en grupos socializando, con más grupos más pequeños en aguas profundas, y menos grupos pero más grandes en aguas menos profundas. Los trabajos realizados en este estudio han contribuido significativamente a la conservación de los cetáceos en el mar de Alborán. Se han propuesto varias AMPs: cuatro LIC y una ZEPIM. Se han sentado las bases para la elaboración del Plan de Conservación del Delfín mular en Andalucía y Murcia, y se ha colaborado activamente en la elaboración del Plan de Conservación del delfín común en el Mediterraneo de ACCOBAMS.

Autor: Letizia Annalisa.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Centro de Biología Molecular S. Ochoa.
Centro de realización: Centro de Biología Molecular S. Ochoa.

Resumen: El Complejo Iroquois (C-Iro) de Drosophila melanogaster está constituido de tres genes, araucan (ara), caupolican (caup) y mirror (mirr), que codifícan por unas proteínas con homeodominio. Estos genes se expresan en diferentes dominios de los discos imaginales de Drosophila, unas estructuras epiteliales de la larva de las cuales se originan la mayoría de las estructuras cuticulares de la mosca adulta. La expresión de tales genes en diferentes y característicos dominios a lo largo del desarrollo es muy importante ya que contribuyen a la especificación de los territorios en los cuales se expresan y a la formación de los patrones que caracterizan a estas estructuras. Los genes del C-Iro se expresan en dominios muy similares, por lo que se propuso que esta característica se debiera a la presencia de unas secuencias reguladoras en cis (o enhancers) que actuarían simultáneamente sobre los tres genes regulándone la transcripición y dando como resultado final unos patrones espaciales y temporales de expresión idénticos (en el caso de ara y caup) o similares (en el caso de mirr respecto a ara y caup). En este trabajo hemos identificado cinco secuencias reguladoras, localizadas en el C-Iro entre las unidades de transcripción de caup y mirr. Ninguno de los 5 fragmentos aislados media la expresión de un gen marcador (lacZ) según el patrón completo de los genes del C-Iro en el disco imaginal de ala (el sistema modelo utilizado en este trabajo), lo cual confirmaría la hipótesis inicial de que el patrón es el resultado de la actividad conjunta de diferentes enhancers específicos de los territorios que representan los sub-dominios del patrón completo. Uno de los elementos reguladores analizados en este trabajo (e-Iro1) dirige la expresión del gen lacZ en un dominio del disco que corresponde al futuro mesotórax dorsal (notum) de la mosca adulta, de una manera muy similar al patrón original de los genes C-Iro en este territorio. Diferentes trabajos han demostrado que la expresión delos genes del C-Iro depende esencialmente de la actividad de dos vías de señalización: la vía de Dpp (Decapentaplegic) y la vía del EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor). La vía del EGFR es activa en el disco de ala gracias al ligando Vn (Vein): este desata una cascada de eventos que lleva a la activación de factores de transcripción celulares que a su vez activan una serie de genes dianas. Se ha visto que entre estos genes están los del C-Iro. Por otro lado la vía de Dpp reprime la transcripción de los genes del C-Iro confinando su patrón de expresión a la región del notum lateral. El enhancer e-Iro1 contiene diferentes sitios de unión a ADN específicos para factores de transcripción efectores de las dos vías mencionadas, en concreto el factor ETS Pointed (Pnt) activado por la vía del EGFR y la proteína GATA Pannier (Pnr) activada por la vía de Dpp. Algunos de estos sitios están conservados evolutivamente. La funcionalidad de tales sitios se analizó in vivo mediante la generación de moscas transgénicas que llevan formas mutadas o truncadas del elemento e-Iro1 original. Nuestros resultados indican que Pnt lleva a cabo la activación de los genes del C-Iro dependiente de la vía del EGFR, por lo menos en parte, a través del elemento e-Iro1, mientras que la represión de estos genes en el notum medial, dependiente de la vía de Dpp, se debe a la actividad represora del dímero Pnr-Ush también a través del elemento regulador e-Iro1. En resumen, gracias a un análisis molecular de la región genómica del C-Iro, hemos identificado una secuencia reguladora en cis responsable de llevar a cabo la regulación de la trascripción de los genes del C-Iro, la cual depende a su vez de dos vías de señalización: la de Dpp y la del EGFR.

Autor: García Marcos Alberto.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Centro de Biología Molecular Severo Ochoa.
Centro de realización: Centro de Biología Molecular Severo Ochoa.

Resumen: El tallo ribosómico es una estructura protuberante lateral muy flexible en la subunidad mayor del ribosoma. En procariotas, está compuesta por una proteína central llamada L10, y otras cuatro proteínas denominadas ácidas que se unen en forma de dímeros L7/L12. Es S. cerevisiae la complejidad es mayor, ya que además de la proteína central, denominada en este caso P0, hay 4 proteínas ácias distintas: P1a, P1b, P2a y P2b. Aunque la mayoría de datos experimentales apuntan a que estas proteínas ácidas se unen en forma de monómeros a los ribosomas, y por tanto estos siguen una distribución homogénea en la célula, con tallos compuestos por una proteína ácida de cada tipo. Sin embargo, ciertos datos de entrecruzamiento químico, la comparación con procariotas, y la capacidad de P2b en solución de formar homodímeros, hacen pensar que también pudiera darse un modelo heterogéneo de composición de los ribosomas, con distintas combinaciones de homodímeros de las proteínas ácidas. Todo esto tiene una importancia no sólo estructural, sino también funcional, ya que en función de las proteínas ácidas unidas al ribosoma, se ha comprobado que varía el patrón de proteínas que la célula expresa. Con el objetivo general de dilucidar la presencia o ausencia de homodímeros de proteínas ácidas en el ribosoma, y discriminar entre la existencia del modelo homogéneo o heterogéneo de composición del tallo ribosómico, se plantearon una serie de objetivos y técnicas específicas. En primer lugar, se sustituyeron residuos de algunas proteínas proteínas ácidas por cisteínas y se realizaron experimentos de entrecruzamiento químico. Los resultados obtenidos son compatibles con un modelo homogéneo de composición del tallo ribosómico, y también muestran una interacción directa entre P2a y P1b. Se comprueba además, que la aparición de homodímeros de P2a (con un residuo mutado a cisteína) en cepas en las que se ha eliminado la P2a endógena es meramente artefactual, sin significado biológico, ya que la reacción de entrecruzamiento se da en el citoplasma antes de la unión al ribosoma, y de este par, sólo una de las dos proteínas se une directamente al ribosoma, mientras que la otra lo hace a través de su asociación con la priemra, pero no forma parte integrante del tallo. El segundo objetivo era el análisis de la estructra del tallo in vivo, utilizando una moderna técnica biofísica, la microscopía de dos fotones asociada a la espectroscopía de correlación de fluorescencia. Para ello se obtuvieron una serie de cepas mutantes de levadura, en las que se delecionaron bien cada una de las proteínas ácidas individualmente, bien todas las posibles combinaciones de dos proteínas ácidas. Posteriormente se fusionó la proteína verde fluorescente (GFP) al extremo carboxilo de todas las proteínas ácidas y se introdujeron bien individualmente, bien por parejas, en las cepas de levadura apropiadas. Se realizaron medidas in vivo sobre las células, siendo capaces de discriminar la presencia de una o de dos proteínas ácidas unidas simultáneamente al ribosoma. De este modo pudo establecerse la capacidad de unión de los distintos pares de proteínas al ribosoma, y se determinó que en la célula, una gran mayoría de los ribosomas siguen el modelo homogéneo, con una proteína ácida de cada tipo unida, aunque también resultó evidente la presencia de pequeñas subpoblaciones de ribosomas que siguen el modelo heterogéneo, con distintas combinaciones de homodímeros. Además, se observó un gran dinamismo en la unión al ribosoma de las proteínas ácidas, y que los sitios de unión para cada proteína ácida en el ribosoma no son absolutamente específicos y en determinadas condiciones una proteína puede ocupar un sitio que no es su sitio de unión específico. Los datos obtenidos, junto con otros resultados del laboratorio y datos presentes en la bibliografía, permitieron proponer un modelo para el tallo ribosómico en el que las proteínas de tipo P2 y P0 se encuentran con sus extremos carboxilo próximos y extendidos hacia el citoplasma, probablemente encargados de estabilizar la unión transitoria de los factores solubles de traducción, mientras que las proteínas de tipo P1 se encontrarían con sus extremos carboxilo próximos y replegad 8 os sobre 4ee el cuerpo del ribosoma, pudiendo estar encargados de activar la hidrólisis de GTP en los factores de traducción dependientes de GTP. Por último, una comparación entre los resultados in vivo y los resultados in vitro obtenidos tras la purificación de ribosomas, muestran que dicha purificación puede alterar la composición del tallo ribosómico, y que las subpoblaciones que siguen el modelo heterogéneo, al ser muy minoritarias, son indetectables. Por tanto, todas las técnicas in vitro, que suponen purificación de ribosomas, estarían introduciendo un importante artefacto en los estudios referentes a la composición del tallo ribosómico.

Autor: Jimenez Mateos Eva María.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Biología.
Centro de realización: Centro de Biología Celular "Severo Ochoa".

Autor: Valle Velasco Laura.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE INVESTIGACIONES ONCOLÓGICAS.

Resumen: El Cáncer Colorrectal Hereditario No Polipósico (CCHNP) es el síndrome de susceptibilidad al cáncer colorrectal de herencia dominante más común y se caracteriza por el desarrollo de cáncer colorrectal, de endometrio y de otros tumores, a una edad temprana. Este síndrome está causado por mutaciones en línea germinal en uno de los genes de reparación de los errores de emparejamiento del ADN, y más del 90% de los casos con CCHNP genéticamente definidos está causado por mutaciones en los genes MLH1 y MSH2. El funcionamiento defectuoso del sistema reparador produce un fenotipo mutador y la acumulación de errores en los microsatélites, denominado inestabilidad de microsatélites (IMS). Debido al gran tamaño de los genes y a la ausencia de puntos calientes de mutación, el estudio molecular de los genes de reparación resulta costoso a nivel económico y de tiempo. Por esta razón y por la elevada ocurrencia de agregación familiar de cáncer colorrectal, resulta esencial la selección precisa de familias candidatas para el estudio molecular. Actualmente, para esta selección se utilizan: los criterios clínicos de Ámsterdam, Bethesda, y sus modificaciones; la presencia de IMS en el tejido tumoral; y la expresión inmunohistoquímica de las proteínas codificadas por los genes de reparación. Los resultados de los estudios que evalúan los criterios de selección son contradictorios, varían de unos trabajos a otros, y no son concluyentes. Este hecho hace necesaria la búsqueda de nuevos criterios o marcadores que, combinados con los anteriores, mejoren el proceso de selección. En el presente trabajo se han evaluado y discutido los resultados obtenidos de los estudios genéticos realizados en 399 familias con sospecha de CCHNP y asesoradas en la Consulta de Cáncer Familiar y Consejo Genético del Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas. El 28% de los casos presentó IMS en el tumor, estudiando únicamente el microsatélite BAT26, sin detectar mayor sensibilidad al utilizar el "panel de Bethesda". Tras el estudio completo de los genes MLH1 y MSH2 en los casos IMS, el 48% resultó portador de una alteración a nivel germinal en alguno de estos genes. Se confirma que la hipermetilación monoalélica del promotor de MLH1 en línea germinal es un mecanismo de susceptibilidad al cáncer colorrectal y se observa que las mutaciones en el gen MSH6 parecen ser poco frecuentes en la población española. Utilizando la técnica de inmunohistoquímica en micromatrices de tejido, se han estudiado 271 tumores pertenecientes a diferentes familias con sospecha de CCHNP. Los tumores se han agrupado de acuerdo a la presencia o ausencia de IMS; de mutación en los genes de reparación; y según la presencia de la alteración en MLH1 o en MSH2. Se han comparado las características familiares, clínicas e inmunofenotípicas entre los grupos de tumores definidos. Al comparar los tumores con y sin IMS se ha observado que el primer grupo presenta una edad media de aparición más temprana; un mayor número de familiares con cáncer colorrectal y con otros cáncers asociados al síndrome de Lynch; con mayor frecuencia localización proximal del tumor; mejor pronóstico; pérdida de expresión de las proteínas de reparación; sobre-expresión de proteínas relacionadas con el ciclo celular: Ciclina A, D1, E, p16 y Skp2; mayor índice de proliferación ki-67; sobre-expresión de SMAD4; y falta de expresión de CK-20. Por otro lado, los tumores sin IMS presentan más frecuentemente sobre-expresión de RAD50 y p53, y expresión nuclear de beta-catenina. Dentro del grupo de los tumores IMS, los de pacientes con mutación en línea germinal en alguno de los genes de reparación se diferencian de los de los pacientes en los que no se ha identificado mutación , en que presentan una edad media de aparición menor; cumplen los criterios más estrictos del CCHNP; y muestran con mayor frecuencia pérdida de expresión de las proteínas de reparación y de RAD50, y presencia de expresión de Cdk2. Las diferencias observadas entre los tumores con mutación germinal en MLH1 y con mutación en MSH2 se basan principalmen 8 te en la 516 expresión diferencial de las proteínas de reparación; en un mayor índice de proliferación Ki-67 en los tumores con mutación en MLH1; en la mayor frecuencia de tumores con alteración en MLH1 con expresión aberrante de beta-catenina, indicando que la ruta de Wnt está activa en una elevada proporción de estos tumores. Además, se han identificado tres grupos de tumores sin IMS, con componente familiar o edad temprana de aparición, en base al perfil de expresión de los marcadores inmunohistoquímicos. Basado en los resultados obtenidos en este trabajo se ha propuesto un procedimiento de actuación para la selección de familias candidatas al estudio de los genes de reparación.

Autor: Sanchez Pulido Luis Fracisco.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias Biologicas.
Centro de realización: Centro Nacional de Biotecnologia.

Resumen: El trabajo desarrollado en esta tesis trata sobre la disciplina del análisis de secuencias proteicas, con la intención de mostrar relaciones de homología entre ellas y la siguiente definición de dominios o regiones conservadas en alineamientos múltiples de proteinas. Permitiendo en esta forma el establecimiento de hipótesis de similitud funcional entre aquellas proteinas similares en secuencia. Aplicando el análisis de secuencias, el Segundo postulado del Método de Descartes : "Dividir cada una de las dificultades a examinar, en este caso secuencias de proteínas, en tantas partes (dominios)como sea posible y necesario para resolver mejor" [Descartes, 1637]. Aplicamos un abordaje metodológico común a los análisis de diferentes secuencias de proteinas con el objeto de identificar dominios a nivel dee secuencia, evaluando su conservación y distribución entre diferentes familias de proteínas. Con el propósito principal de racionalizar e interpretar la similitud de secuencias en términos funcionales comunes, tales como : interacciones con otras moléculas o proteínas, mecanismos de reacción y/o regulación coincidentes, etc. identificamos varios dominios en proteínas vinculadas a diversas enfermedades humanas, ofreciendo de éste modo nuevos puntos de vista para su posterior caracterización experimental.

Autor: Esteras Chopo Alexandra.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: EUROPEAN MOLECULAR BIOLOGY LABORATORY.

Resumen: Bajo determinadas circunstancias proteinas normalmente solubles pierden su estructura tridimensional y se depositan en forma de material insoluble conocido como fibras amiloides.Este proceso esta asociado a un serie de enfermedades humanas como Alzheimer o Parkinson,conocidas como amiloidosis.Nuestra hipotesis de trabajo es que son secuencias cortas de aminoaciados las que determinan la amilogeneicidad de una proteina.Para demostrar esta hipotesis hemos llevado a cabo la conversion de una proteina no amiloidogenica en una molecula capaz de formar fibras amiloides a traves de la insercion de hexapeptidos.Como proteina modelo hemos elegido el domino SH3 de espectrina , que no forma fibras amiloides bajo ninguna de las condiciones probadas en nuestro laboratorio.Como fragmentos amiloides hemos seleccionado una de las secuencias diseñadas de novo en el grupo,STVIIE,altamente amiloidogenica in vitro y una serie de mutantes puntuales.Las versiones amiloidogenicas del dominio SH3 son tan estables como la proteina original pero forman fibras en condiciones en las cuales el dominio original permanece soluble. Por lo tanto la amiloigenicidad de dichas proteinas no es debida a una desestabilizacion adicional debida a las inserciones sino a las propiedades amiloidogenicas de las secuencias insertadas. Una potencial estrategia para el tratamiento de las amiloidosis es la reversion del proceso de formacion de fibras amiloides.Puesto que hemos demostrado que secuencias cortas son las responsables del inicio del proceso de formacion de fibras,nuestra propuesta es que moleculas capaces de unirse a la secuencia corta amiloidogenica de una proteina deberian ser efectivas para evitar la formacion de intermedios amiloides o para desensamblar fibras maduras.Nuestra aproximacion para el desarrollo de estas moleculas es el uso de D-peptidos.Como primera diana de inhibicion hemos seleccionado una de las secuencias amiloidogenicas mejor caracterizadas en el grupo STVIIE,1.LA mejor secuncia para un D-inhibidor de 1 ha sido determinada usando una peptidoteca posicional de tipo D. El efecto de cada D-aminoacido en cada posicion de un D-hexapeptido lineal en la inhibicion de 1 fue evaluado por medio de Dicroismo CIrcular y Microscopia Electronica.BAsados en esta deconvolucion ,se sintetizaron y ensayaron 32 D-peptidos de secuencia definida contra 1. De este estudio se seleccionaron un set de moleculas cuya capacidad inhibitoria contra la version amiloidogenica del dominio SH3 que lleva la secuencia 1,1-SH,fue probada.Mas del 60% de las moleculas demostaron su efectividad contra esta proteina lo que ratifica nuestra hipotesis de trabajo.Del estudio detallado de las 32 secuencias tambien obtuivmos un conjunto de reglas empiricas para el diseño de inhibidores peptidicos de tipo D . Estas reglas han sido experimentalmente validadas con el diseño de potentese inhibidores contra las secuenias amiloidogenicas cortas del peptido ABeta amiloide y la proteina TAU.Estos D-peptidos diseñados de acuerdo con las reglas empiricas son ademas especificos para la secuencia corta amiloide para la que han sido diseñados.

Autor: DRAPER Y DÍAZ DE ATAURI ISABEL.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Se ha realizado un estudio biogeográfico sobre los briófitos epifitos de los cuatro principales sistemas montñosos de Marruecos. Los resultados florísticos obtenidos han quedado resumidos en el catálogo de los brióftos epifitos, constituido por un total de 93 taxones pertenecientes a 22 familias. En este catálogo se han incluido datos referentes a la afinidad de los diferentes taxones por el hábitat estudiado, su ecología y su distribución conocida en Marruecos. Los taxones más abundantes y más frecuentemente encontrados fructificados son los epifitos habituales, que constituyen el 32% del total. Los taxones indiferentes y cortico-saxícolas, que constituyen respectivamente el 9% y el 19% del total en ocasiones son también abundantes y están ampliamente distribuidos por todas las cadenas montañosas, aunque en general son menos frecentes. Los taxones preferentemente no corticícolas, que constituyen el 39% del total, suelen ser raros en el estrato epifitos y hallarse restringidos a los estratos basales de los árboles. Este estudio ha contribuido al conocimiento de la brioflora del territorio estudiado con 13 primeras citas para el norte de África y 6 primeras citas para Marruecos, además de aportar numerosas novedades regionales (7 para el Rif, 7 para el Medio Atlas, 13 para el Alto Atlas y 3 para el Antiatlas). Además, algunas de las localidades prospectadas son localidades tipo o suponen la extensión a Marruecos del área de dstribución de taxones recientemente propuestos para la Ciencia, como es el caso de Orthotrichum speciosum var. brevisetum, O. tortidontium y Zygodon catarinoi. El análisis de la distribución de los briófitos epifitos en Marruecos ha puesto en evidencia importantes diferencias entre los distintos sistemas montañosos estudiados, tanto en lo que se refiere a la tasa de colonización del hábitat epifítico como en relación a la riqueza específica y el número de taxones exclusivos. La diferente representación de los distintos taxones en el territorio ha permitido definir cinco tipos corológicos para los briófitos epifitos de Marruecos: "taxones de amplia distribución", "taxones del Rif", "taxones del Rif y el Medio Atlas", "taxones del Atlas" y "taxones de presencia local". Como resultado del análisis conjunto de la ordenación y la clasificación de las localidades se han podido describir cinco tipos principales de comunidades brioepifíticas en Marruecos: "comunidades de Frullania dilatata de los alcornocales de Ouezzane", "comunidades de Fabronia pusilla de los encinares de Al Haddada", "comunidades de Orthtorichum lyellii de las montañas del Rif y el Medio Atlas", "comunidades de Orthotrichum diaphanum de las montañas del dominio Atlásico" y "comunidades de Orthtorichum philibertii de los encinares de Oulmés". Tres de estas comunidades se desarrollan en localidades de singulares condiciones ecológicas, lo que les confiere una composición florística única en el territorio de estudio. Las otras dos están por el contrario ampliamente distribuídas por Marruecos y se sustituyen gradualmente en función de las condiciones de humedad. Finalmente, se ha realizado una propuesta de las áreas de especial interés para la conservación de los briófitos epifitos. Esta propuesta se basa en los criterios de riqueza específica, número de especies raras, singularidad florística y representatividad de la flora regional. Se proponen 17 áreas de especial interés, 8 en el Rif, 6 en el Medio Atlas, 2 en el Alto Atlas y una en el Antiatlas. Estas áreas cubren los aspectos más importantes del territorio y se considera que su protección aseguraría una mínima conservación de los briófitos epifitos marroquíes.

Autor: DÍAZ MUÑOZ LAURA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: HOSPITAL GREGORIO MARAÑÓN.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La transmisión vertical del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) es un serio problema a nivel mundial. Se ha estimado que aproximadamente unos 1.600 niños se infectan cada día. La transmisión del virus "in útero" ocurre principalmente a través de la placenta aunque se desconoce todavía el mecanismo por el cual las células de placenta se infectan por el VIH-1, además de su localización y origen. Por otro lado, citocinas y otros factores maternos, como la progesterona, estarían implicados tanto en el desarrollo y/o regulación de la placenta y el feto como en la regulación de la replicación del VIH-1. En esta Memoria se ha querido abordar alguno de estos factores. En primer lugar, se ha encontrado que tanto las células del trofoblasto placentario como líneas celulares trofoblásticas son capaces de ser infectadas por diferentes aislados del VIH-1, aunque con baja eficicacia. En estos tipos celulares se expresa en superficie receptores de quimiocinas, CXCR4 y CCR5, pero no CD4, y la infección del VIH-1 parece que no ocurre a través de estas moléculas. Hay que destacar que anticuerpos contra B2-integrinas y LFA-1 son capaces de bloquear significativamente la infección de los linfocitos T a células de placenta. La expresión en superficie de ICAM-1, molécula implicada en la adhesión de los linfocitos a la barrera trofoblástica, está aumentada en placentas infectadas por el VIH-1 y estas células van a transferir la infección a los linfocitos T. Para que ocurra esta transmisión es necesario el contacto celular que es inhibido por anticuerpos anti--LFA-1. Los resultados sugieren que las células de trofoblasto placentario se pueden infectar por el VIH-1 a través de un mecanismo en el que participarían el contacto de los linfocitos T a la placenta. Además, la infección en células de placenta produce aumento de la expresión de ICAM-1 y adherencia leucocitaria, evento que es requerido para transferir la infección del VIH-1. Esto podría explicar de algún modo cómo ocurre la transmisión vertical a través de la barrera placentaria. La progesterona está aumentada en la interfase fetoplacentaria durante el embarazo. Hasta el momento no se conoce el posible papel de esta hormona en la transmisión vertical del VIH-1. Los experimentos in vitro tuvieron como resultado una inhibición de la replicación del VIH-1 en células trofoblásticas purificadas y en líneas celulares trofoblásticas, a la concentración que se encuentra en la interfase placentaria. Además, la progesterona inhibiría esta replicación de una manera post-entrada. Sorprendentemente, la progesterona no produce una inhibición basal o inducida de la transcripción del LTR o el factor nuclear kappa-B (NF-kB) en estas células. A esto hay que añadir que la síntesis del TNF en células de placenta es inducida por la infección por el VIH-1, el cual va a provocar una activación de la replicación viral, neutralizado por anticuerpos anti-TNF. La progesterona inhibe la inducción de la transcripción del TNF debido al virus o a la gp120. Por tanto, los resultados sugieren que la progesterona inhibe la replicación del VIH-1 en células de placenta reduciendo los niveles de TNF, los cuales son requeridos para una buena replicación viral. El mecanismo por el cual la progesterona inhibe la transcripción del TNF debe ser estudiada en más profundidad y parece que no tiene lugar a través de una inhibición de los factores de transcripción NF-kB, NF-AT o AP-1.

Autor: Viera Vicario Alberto.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Facultad de Cencias, Dpto. Biología UAM.

Resumen: Desde un punto de vista citológico el término "telómero" se utiliza para definir el extremo físico de los cromosomas lineares de los organismos eucariotas. En este dominio cromosómico está contenido el ADN telomérico, en mamíferos constituido por un número variable de repeticiones en tandem de la secuencia TTAGGG, así como diversas proteínas específicas asociadas conformando los denominados "complejos teloméricos". En la presente tesis se ha tratado de contribuir no sólo al conocimiento de la estructura, composición y localización de los complejos teloméricos durante la meiosis, sino también aportar nuevos datos relativos a los cambios morfofuncionales que éstos experimentan durante las dos divisiones meióticas. El modelo experimental utilizado ha sido el ratón de laboratorio (Mus musculus) por presentar todos los cromosomas telocéntricos, es decir, en el extremo centromérico de todos los cromosomas los complejos teloméricos proximales se hallan inmersos en las regiones de heterocromatina centromérica. Esta peculiaridad ha hecho que ésta sea una especie de elección por la particular conformación que durante la primera división meiótica deben presenta las regiones centroméricas de este tipo de cromosomas. Así, en metafase I los cinetocoros hermanos se deben orientar a un mismo polo celular, por lo que la presencia de los complejos teloméricos en estas regiones supondría un impedimento estérico para la correcta interacción de los microtúbulos del huso con los cinetocoros. Se ha pretendido detectar y analizar las posibles diferencias en la longitud de las repeticiones teloméricas en cromosomas condensados durante las dos divisiones meióticas de machos de ratón mediante hibridación in situ fluorescente (FISH) con una sonda telomérica (C3TA2)3 péptidonucleica (PNA). Los reultados demuestran heterogeneidad en el número de repeticiones de ADN telomérico entre los distintos cromosomas del complemento, entre cromosomas homólogos e incluso dentro de un mismo cromosoma. Asímismo, existen numerosas proteínas descritas cuyas funciones son esenciales para la estructuración y el correcto funcionamiento de los telómeros en cromosomas mitóticos. Por ello, se ha analizado mediante inmunofluorescencia su aparición, localización y dinámica en los complejos teloméricos durante las divisiones meióticas en espermatocitos de ratón. Adicionalmente, se ha estudiado su relación con diversas proteínas del centrómero/cinetocoro, y con la proteína del elemento lateral del complejo sinaptonémico SYCP3. Los resultados muestran que los complejos teloméricos, al contrario de lo que ocurre durante la profase I, no están localizados en el extremo físco de las cromátidas de los cromosomas condensados. Consecuentemente, la estructura del cromosoma meiótico debe cambiar desde paquitene hasta metafase I, lo que implicaría que los complejos teloméricos oscilarían hasta su reubicación en cromosomas condensados. Además, se ha obsevado que los complejos telomérico proximales se sitúan por debajo de los cinetocoros desde metafase I hasta anafase II. Igualmente, se ha analizado la presencia de la proteína RAD51D, una recombinasa que recientemente ha sido identificada en los complejos teloméricos de la línea somática. Nuestros resultados muestran que RAD51D aparece asociada a los complejos teloméricos a lo largo de las dos divisiones meióticas, proponiéndose un modelo para su asociación a los mismos. Se ha estudiado por primera vez en vertebrados la presencia y localización de las subunidades del complejo de condensina I durante la meiosis. Los resultados demuestran que este complejo proteico aparece en los núcleos de los espermatocitos en la profase I, localizándose en los nucleolos. En cromosomas condensados el complejo de condensina I forma unos ejes que transcurren por el interior de las cromátidas presentando acúmulos en sus extremos, que colocalizan con los complejos teloméricos, en el dominio citológico del telómero. Asímismo, por primera vez se presenta la distribución relativa de los complejos de condensina I y de cohesina en los cromos 8 omas de b5a ratón a lo largo de la meiosis. Adicionalmente, se ha realizado impregnación argéntica de los cromosomas meióticos condensados, con el objetivo de visualizar sus ejes cromatídicos. Los resultados así obtenidos demuestran que estos ejes se diponen en la región central de las cromátidas en metafase I, mostrando un patrón de dsitribución muy similar al del complejo de condensina I. Como colofón de este estudio, se ha analizado la distribución de los complejos teloméricos en un modelo de ratón genéticamente alterado, que presenta severas alteraciones de la espermatogénesis, para poder compararla con la de los ratones control. Se han seleccionado para ello ratones knockout para la quinasa dependiente de ciclina CDK2, dado que esta proteína, con importantes implicaciones en la regulación del ciclo celular, ha sido identificada en los complejos teloméricos de ratón durante la profase I. Si bien hasta la fecha no se conoce el papel de CDK2 en los complejos teloméricos, su ausencia en meiosis conlleva que los complejos teloméricos no se unan a la envoltura nuclear durante la profase I. Igualmente, se ha detectado la existencia de fenómenos de sinapsis no homóloga y fusiones entre los extremos de diferentes cromosomas. Todos estos desórdenes culminan con la entrada en apotosis de los espermatocitos, que al no superar el estricto punto de control de paquitene son eliminados, por lo que estos individuos presentan azoospermia. Finalmente, se discuten el posible origen de la variabilidad de la longitud del ADN telomérico en la línea germinal, el significado funcional de la reubicación de los complejos teloméricos en cromosomas meióticos condensados y las posibles implicaciones de RAD51D en el mantenimiento de la estructura de los complejos teloméricos. Se propone un modelo conciliador de la organización y disposición de los complejos teloméricos en el dominio citológico del telómero en cromosomas meióticos condensados, que recoge los datos obtenidos durante la realización de la presente tesis. Se presenta también un modelo sobre cómo operan los cambios estructurales que experimentan los cromosomas de mamíferos a lo largo de la meiosis haciendo especial énfasis en la distribución de los ejes cromatídicos y los complejos teloméricos en cada estadio meiótico.

Autor: Carrasco Rando Marta.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Centro de Biología Molecular Severo Ochoa.
Centro de realización: Centro de Biología Molecular Severo Ochoa.

Resumen: Los músculos de Drosophila y de vertebrados son fibras sincitiales formadas por fusión de mioblastos. El proceso de fusión es asimétrico y está precedido por la subdivisión del mesodermo en subtipos de mioblastos: fundadores y competentes en fusión. Los fundadores contienen la información necesaria para el desarrollo específico de los distintos músculos y son los únicos capaces de completar miogénesis en ausencia de fusión. Los competentes en fusión son atraídos por los fundadores siendo reclutados a sus patrones específicos de expresión génica mediante el proceso de fusión. Así, además de los programas de expresión génica específicos de tipo muscular, los fundadores comparten una serie de propiedades características de población, como la atracción de los mioblastos competentes en fusión o la formación de apodemas (tendones). Con el objetivo de estudiar como se especifican dichas propiedades, iniciamos la caracterización funcional de genes de expresión restringida a las distintas subpoblaciones. Este es el caso del gen CG17492, el cual hemos nombrado como musculus morbidus (mumo). mumo codifica para una proteína E3 ubiquitín ligasa cuya función es indispensable para la miogénesis de Drosophila melanogaster. Así, en embriones mutantes para mumo tiene lugar la formación inicial de un patrón muscular correcto, lo que indica que ni la segregación ni la especificación de los mioblastos fundadores se encuentra alterada en estos embriones. Sin embargo, presentan defectos de diferenciación que se reflejan tempranamente en fallos en el proceso de fusión la musculatura somática y en problemas morfológicos en la musculatura visceral. Además, la actividad contráctil que ocurre al final del desarrollo embrionario tiene como consecuencia la desestabilización de las bandas Z de las miofibrillas y el consecuente desprendimiento de las fibras del tendón que da lugar a mioesferas. Por lo tanto, los datos recogidos en este trabajo demuestran que Mumo es necesario para el correcto mantenimiento de la integridad de la banda Z en músculos larvarios, así como para estabilizar su anclaje a la epidermis. Además, hemos comprobado que la falta de función de mumo produce el mismo fenotipo en las fibras musculares adultas, en las cuales se acumula en la banza Z. De nuevo en estas fibras, Mumo es necesario para el mantenimiento de la integridad del sarcómero. También hemos demostrado que Mumo es la E3 ubiquitín ligasa responsable de la síntesis de Artrina, una forma estable de Actina mono-ubiquitinada que se encuentra formando parte del filamento fino de los músculos indirectos de vuelo. Sin embargo, nuestros datos apoyan la idea de que la falta de producción de Artrina no es el único factor responsable del fenotipo observado, sugiriendo que, o bien Mumo está actuando sobre otros sustratos, o bien Mumo tiene adicionalmente una función estructural en el sarcómero.