CIENCIAS DE LA VIDA, 9

Autor: BLANCO CHAPINAL SOLEDAD.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA.

Resumen: La malaria es una de las mayores causas de efermedad y mortalidad en humanos frente a la cual todavía no existe una vacuna eficaz. En este estudio hemos analizado diferentes estrategias diseñadas para modular la respuesta inmune inducida frente a la proteína CS de Plasmodium yoelii (PyCS), uno de los modelos murinos de malaria. Se ha observado que la coadministración de varias citoquinas potencia las respuestas celulares específicas de antígeno. Hemos generado recombinantes del virus vaccinia (rVV) que coexpresan las citoquinas IL-15 y GM-CSF junto con el antígeno PyCS o con el gen testigo de la luciferasa. Con el rVV que expresa la luciferasa y la IL-15 hemos determinado que la IL-15 atenúa la replicación del VV "in vivo". También hemos determinado que la coexpresión de estas citoquinas no potencia significativamente la respuesta celular específica frente a PyCS. Sin embargo, cuando las citoquinas son coadministradas junto con el antígeno PyCS mediante vectores de DNA seguidos de una dosis de recuerdo con un rVV que expresa PyCS, se consiguen mejoras relevantes. Con la coadministración del GM-CSF se potencia la respuesta celular específica entre 4 y 7 veces y esta potenciación de la respuesta celular se correlaciona con un elevado nivel de protección (97%). Por otro lado, con la coinoculación de la IL-15 se consigue mantener esta respuesta celular específica a lo largo del tiempo. Tratando de mejorar la respuesta celular inducida mediante la inoculación de vectores de DNA, se generó un vector con una secuencia de la proteína PyCS modificada de forma que contenía los codones más utilizados en mamíferos, carecía de dos sitios de glicosilación y del dominio de unión a membrana. A pesar de estos cambios, la respuesta celular específica fue similar a la obtenida con el plásmido que contiene la secuencia original de la proteína. Para llevar a cabo otra de las aproximaciones propuestas, hemos generado rVV multiepitópicos que contienen las secuencias que codifican distintos epítopos como minigenes separados por elementos IRES (sitios de iniciación interna) de distintos orígenes. La presentación del epítopo CD8 de la proteína PyCS (PyCD8) por células presentadoras de antígeno infectadas con los distintos rVV fue similar independientemente de: i) el contexto en el que es expresado (dentro de la proteína PyCS y aislado, inmediatamente después del promotor viral o detrás de una secuencia IRES), ii) la presencia de otros epítopos en el rVV y iii) el origen de la secuencia IRES que le precede. Además, estos rVV inoculados en ratones son capaces de inducir respuestas celulares específicas frente a cada uno de los epítopos que están presentes en los rVV: PyCD8 (haplotipo H-2d), V3 de la proteína Env de VIH (haplotipo H-2d) y PfCD8 de la proteína CS de P.falciparum (haplotipo H-2k) y estas respuestas celulares fueron similares a las que se inducen con la inoculación de los rVV que expresan las correspondientes proteínas completas (PyCS, Env, PfCS). Ésta es una aproximación novedosa que podría ser útil para el desarrollo de vacunas multivalentes que contengan epítopos de antígenos procedentes de diferentes agentes patógenos y/o antígenos presentes en los distintos estadios del ciclo vital de un patógeno, lo que tiene gran importancia para parásitos con un ciclo vital complejo como es el caso de Plasmodium.

Autor: Porlan Alonso Eva.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Instituto de Investigaciones Biomédicas "Alberto Sols".

Resumen: Los receptores de hormona tiroidea mayoritarios (TR) alfa1 y beta1 presentan patrones de expresión característicos. Gracias a los modelos de inactivación génica in vivo se está constatando la existencia de funciones específicas de isoforma en algunos procesos celulares. Mientras que el papel de los TRs en la proliferación celular es todavía controvertido, así como su expresión en células mitóticas, los efectos diferenciadores de la hormona tiroidea (TH) se han caracterizado extensivamente en multitud de tipos celulares. Sin embargo, en la mayor parte de los trabajos publicados no es posible correlacionar el efecto de la hormona con la isoforma de TR que expresan las células objeto de estudio. Así mismo, la información sobre las posibles funciones fisiológicas que los TRs ejercen en ausencia de su ligando es aún más escasa en la literatura. En un intento por dilucidar estos puntos, se expresaron ectópicamente los TRs mayoritarios por separado en fibroblastos Swiss 3T3, y se estudió la proliferación celular en ausencia de TH, describiendo una función fisiológica específica de TR beta1 desconocida hasta el momento. TR beta1 bloquea la proliferación de los fibroblastos de manera específica de isoforma e independientemente de su ligando, afectando a los principales efectores de la fase G1; TR beta1 reprime la transcripción del promotor de la ciclina D1 y bloquea la actividad transcripcional del factor E2F-1 en respuesta a suero, disminuyendo los niveles de ARN mensajero y proteicos de las ciclinas D1, E y A2, impidiendo la activación de Cdk2 y evitando la fosforilación de Rb. Caracterizando el perfil génico de las células TR beta mediante micromatrices de ADN identificamos un grupo de genes cuya expresión en condiciones proliferativas está afectada por la presencia de este receptor, lo que pone de manifiesto la importancia de las funciones desempeñadas por TR beta en ausencia de su ligando. Finalmente, estudiamos el papel de TR beta en la proliferación asociada a la neurogénesis en ratones con inactivación de los productos del locus Thrb. Nuestros resultados demuestran que TR beta se expresa en la SVZ y en la SGZ del cerebro adulto, ejerciendo efectos marcadamente antiproliferativos sobre los precursores neurales de estas zonas, confirmando el efecto observado in vitro e implicando a TR beta en la regulación de los procesos que dirigen la neurogénesis en el SNC.

Autor: CUEVAS LABRADOR YOLANDA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: MUTACIONES EN LA PROTEINA SUPRESORA DE TUMOR DE VON HIPPEL-LINDAU (vhl) PROVOCAN UN SINDROME TUMORAL HEREDITARIO. ADEMAS LA MAYORIA DE LOS TUMORES RENALES ESPONTANEOS DE CELULA CLARA (RCC) PRESENTAN UNA PERDIDA DE LA HETEROZIGOSIDAD DEL LOCUS DE VHL. RECIENTEMENTE, SE HA VISTO QUE VHL FUNCIONA COMO COMPONENTE DE RECONOCIMIENTO DE SUSTRATO DE UN COMPLEJO E3-UBIQUITININ-LIGASA QUE DIRIGE EL FACTOR INDUCIBLE EN HIPOXIA (HIF) A DEGRADACION VIA PROTEOSOMA. EN CONDICIONES NORMALES DE OXIGENO, LA VIDA MEDIA DE HIF ES MUY CORTA, DEBIDO A SU DEGRADACION POR EL PROTEOSOMA. EN LAS CELULAS DEFICIENTES PARA VHL, HIF NO ES UBIQUITINADO DE FORMA QUE ESTA ACTIVO DE MANERA CONSTITUTIVA. PARA DIRIGIR UNA TERAPIA ESPECIFICA CONTRA TUMORES DEFICIENTES PARA VHL HEMOS GENERADO UN ADENOVIRUS REPLICATIVO CONDICIONAL (CRAD), CUYA REPLICACION ES DEPENDIENTE DE HIF. ESTE VIRUS ES CPAZ DE MATAR DE FORMA EFICIENTE CELULAS VHL-DEFICIENTES TANTO IN VITRO COMO IN VIVO, AL IGUAL QUE LAS CELULAS NORMALES SOMETIDAS A CONDICIONES DE HIPOXIA. ESTOS DATOS SUGIEREN QUE EL AD-9XHRE1A SE PUEDE EMPLEAR DE FORMA MUY EFICIENTE COMO TERAPIA DE TUMORES VHL-DEFICIENTES Y DE MUCHOS OTROS TUMORES QUE PRESENTAN ELEVADAS AREAS DE HIPOXIA O QUE TIENEN AUMENTADO LA ACTIVIDAD DE HIF COMO CONSECUENCIA DE OTROS TIPOS DE ALTERACIONES GENETICAS DISTINTAS DE LA PERDIDA DE VHL

Autor: Martínez García Ma.Ángeles.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Fac. de Cien.- C.B.M. Severo Ochoa.
Centro de realización: Centro de Biol. Molecular Severo Ochoa.

Resumen: El objetivo principal de este trabajo ha sido la caracterización de las bases moleculares de la acidemia metilmalónica aislada (MMA). Con este propósito hemos llevado a cabo el análisis mutacional de 16 pacientes MMA pertenecientes a los grupos de complementación mut (13) y cblA (3), describiendo 11 genotipos distintos (8 mut y 3 cblA). Hemos identificado un total de 19 variantes alélicas distintas en el gen MUT (deficiente en el grupo de complementación mut) que incluyen 16 posibles mutaciones patogénicas y 3 polimorfismos previamente descritos. Doce variantes se han descrito por primera vez en este estudio de las cuales una (A324T) probablemente corresponda a una mutación mut asociada al fenotipo más leve de la enfermedad y otra (I69V) a un polimorfismo o SNP. En el gen MMAA (deficiente en el grupo cblA) hemos detectado 4 mutaciones nuevas, todas responsables de la aparición de codones de parada de traducción prematuros. Asimismo, hemos estudiado el grado de conservación entre proteínas MCM homólogas de diferentes organismos y realizado el análisis estructural de algunas variantes MUT identificadas con el fin de obtener más información sobre el mecanismo causante de enfermedad. El efecto estructural de las mutaciones missense ha sido estudiado mediante la localización de los diferentes residuos afectados en la estructura 3D del enzima metilmalonil-CoA mutasa en bacterias (subunidad de la MCM de P.shermanii). De esta manera hemos visto que la mayoría de los cambios afectan a residuos muy conservados entre organismos alejados filogenéticamente que probablemente ejercen un papel importante en el plegamiento y mantenimiento de la conformación óptima y estabilidad de la proteína. En este trabajo también hemos llevado a cabo la expresión de diferentes proteínas mutantes en un sistema in vitro libre de células de transcripción/traducción acoplada con objeto de estudiar la viabilidad de este sistema de expresión en la síntesis de proteínas que ejercen su función en diferentes entornos celulares como el citosol (péptidos PAH) y la mitocondria (subunidades -PCC y MCM) y de suministrar información adicional sobre el efecto fisiológico de los cambios analizados. Hemos analizado el efecto estructural de nueve mutaciones PCCA sobre la síntesis, importación y estabilidad intramitocondrial de las subunidades -PCC. Para ello hemos medido la tasa de degradación de las proteínas mutantes expresadas in vitro mediante experimentos de pulso-caza. Los resultados obtenidos indican que la mayoría de las variantes analizadas son mutaciones estructurales que afectan a la estabilidad de los péptidos, presentando una degradación acelerada respecto a la proteína normal en el interior de la mitocondria. Adicionalmente, también hemos analizado tres mutaciones PKU asociadas a la respuesta in vivo a tetrahidrobiopterina (BH4) en pacientes fenilcetonúricos con el fin de estudiar si el cofactor del enzima PAH ejerce un efecto estabilizador sobre los péptidos mutantes. Hemos optimizado el sistema de expresión in vitro en ausencia y presencia de BH4 y observado que para las mutaciones analizadas en concreto el cofactor no protege a los péptidos de la degradación acelerada. Sin embargo, en posteriores estudios con otras variantes de plegamiento PAH se ha visto que el BH4 sí actúa como chaperona química aumentando la estabilidad de las proteínas mutantes. Por último, estos resultados proporcionan información relevante para comprender mejor la compleja relación existente entre el genotipo y el fenotipo de los pacientes afectados por estas enfermedades. Las inconsistencias genotipo-fenotipo descritas para algunas mutaciones podrían ser explicadas en parte por la diferente modulación in vivo de la maquinaria de control celular (chaperonas y sistemas proteolíticos) y otros f 8 actores, 328 tanto epigenéticos como ambientales, sugiriendo que en algunos casos no sólo la genética sino otros elementos influyen en la presentación y la clínica de estas enfermedades metabólicas.

Autor: MORENO RISUEÑO MIGUEL ÁNGEL.
Año: 2005.
Universidad: POLITÉCNICA DE MADRID.
Centro de lectura: E.T.S. DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Resumen: RESUMEN: Los factores transcripcionales de la clase DOF son una familia de proteínas implicada en la regulación de la expresión génica de procesos específicos de plantas que se unen a la secuencia 5´-(T/A)AAAG-3´ en los promotores de los genes que regulan. La presente tesis versa sobre: 1) la identificación y anotación de nuevos genes DOF de cebada, 2) la caracterización molecular y funcional de dos nuevos factores DOF de esta especie implicadas en la regulación de genes específicos de semillas, y 3) la realización de un análisis filogenético evolutivo de la familia DOF en siete especies representativas de la evolución de las plantas, el alga verde Chlamydomonas reinhardtii, el musgo Physcomitrella patens, el helecho Selaginella moellendorffii, la gimnosperma Pinus taeda, la angiosperma dicotiledónea Arabidopsis thaliana y las dos angiospermas moncotiledóneas Oryza sativa y Hordeum vulgare. En C. reinhardtii hemos identificado un único miembro de la familia DOF, en P. patens nueve, y ocho en S. moellendorffii y P. taeda. En cebada, nuestra especie de interés, se han identificado y anotado 18 nuevos miembros de esta familia en las bases de datos, que se suman a los ocho previamente anotados en este laboratorio. Para profundizar en el origen y evolución de esta familia de factores transcripcionales, realizamos un análisis filogenético con los DOFs previamente identificados y aquellos de A. thaliana y O. sativa. Todos estos genes pueden agruparse en seis familias de genes ortólogos y parálogos que se habrían originado desde un grado basal parafilético o subfamilia A. La estructura de intrones y exones del gen DOF de C. reinhardtii apoya la formación del primer DOF por barajado de exones en el ancestro de las plantas. Así, duplicaciones del DOF ancestral durante el subsiguiente proceso evolutivo habría ocasionado la formación de una familia de noventa y dos miembros en las plantas vasculares aquí estudiadas. Nuestros datos, sugieren además que la pérdida, adquisición y barajado de motivos conservados además del DOF entre los nuevos genes, habría condicionado la formación de las siete subfamilias aquí descritas. Entre los veintiséis genes DOF anotados en cebada, HvDof17 y HvDof19 fueron seleccionados para su caracterización posterior, ya que se expresaban preferentemente en la aleurona de las semillas en germinación. En la aleurona post-germinativa de los granos de cereales, se sintetizan un conjunto de hidrolasas, cuya expresión está inducida por GA y reprimida por ABA, que posteriormente se secretan en el endospermo amiláceo liberando los nutrientes que se movilizarán hacia el embrión. En los promotores de estos genes se ha identificado un motivo tripartito en cis necesario para una respuesta plena a GA (GARC: GA-Responsive Complex). Por el contrario, los elementos regulatorios en cis que median la respuesta de estos genes al ABA son desconocidos. Los tránscritos del gen HvDof19 se acumulan en la capa de aleurona en respuesta a ABA, estando su expresión, así como la del otro gen seleccionado, HvDof17, reprimida por GA. En este tejido, HvDOF19 media la represión por ABA del gen CatB, que codifica una tiol proteasa del tipo catepsina B, y HvDOF17 contribuye a la regulación negativa de este gen en una ruta independiente de esta hormona. Ambos factores son capaces de revertir la trans-activación del gen CatB mediada por GAMYB, el cual pertenece a la clase de factores R2R3MYB y está implicado en la activación de la expresión de genes de hidrolasas en respuesta a GA; e interaccionan con él in vivo. En el endospermo en desarrollo de cebada, hemos determinado que HvDOF17 y HvDOF19 también regulan la expresión del gen Hor2, que codifica la proteína de reserva B-hordeína. El patrón de expresión de HvDof19 durante la maduración del endospermo, se ajusta a su comportamiento como activador transcripcional del gen Hor2 y a la interacción detectada entre éste y BLZ2, un activador de la expresión de este mismo gen previamente caracterizado en el laboratorio. Por el contrario, HvDOF19 reprime la expresión del gen Hor2. En conlusión, esta tesis contribuye a un mejor conocimiento de la regulación transcripcional de los genes de hidrol 8 asas en 341 respuesta a ABA, y muestra la implicación de HvDOF19 y HvDOF17 en la activación y represión, respectivamente, de los genes que codifican proteínas de reserva en la semilla de cebada.

Autor: EDO SOLSONA MARÍA DOLORES.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA (CSIC).

Resumen: La proteína p27 es un importante inhibidor del ciclo celular que juega un papel clave en la transición G1-S y la proliferación del ciclo celular. Su regulación está gobernada por multitud de mecanismos, entre los que cabe destacar su degradación proteica por la ruta ubicuitín-proteasoma a través de diferentes interacciones con otras proteínas. El objetivo principal de los trabajos efectuados en esta tesis doctoral ha sido la identificación de nuevas dianas de interacción de la proteína p27. Nuestro abordaje experimental nos ha permitido identificar la interacción entre p27 y SNX6, una proteína involucrada en el tráfico proteico a través de la ruta endolisosomal. Mediante ensayos de doble híbrido en levadura y ensayos de arrastre con GST hemos identificado los dominios responsables de dicha interacción. Estudios de expresión y localización subcelular por inmunofluorescencia en células 3T3 y HeLa nos han permitido demostrar que SNX6 y p27 colocalizan y que ambas proteínas se encuentran en los diferentes orgánulos de la ruta endolisosomal. Además hemos analizado los efectos de los inhibidores de la degradación lisosomal sobre la expresión de p27 y los efectos de la ganancia y pérdida de función de SNX6 sobre la expresión de p27 y la progresión del ciclo celular. Nuestros resultados nos permiten proponer una nueva vía de degradación de p27 a través de la ruta endolisosomal que transcurre en el citoplasma y durante la fase G1.

Autor: MUÑOZ DESCALZO SILVIA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA DEL CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS-UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: El cierre dorsal es uno de los últimos procesos morfogenéticos que sufre el embrión de Drosophila, entre los estadios 12 a 15. Durante la primera mitad de la embriogénesis, la epidermis del embrión de Drosophila tiene un agujero a 10 largo de la parte mas dorsal, cubierto únicamente por la amnioserosa, un epitelio monocapa de grandes celulas poliploides unidas a la epidermis y que no contribuirán a la formación de la larva. Este agujero se produce por la retracción de la banda germinal, que deja como unica membrana que recubre al embrión dorsalmente a la amnioserosa. A los cambios coordinados que se producen en la forma de las células de la epidermis y la amnioserosa para cerrar el agujero y generar una epidermis dorsal continua se conoce por el nombre de cierre dorsal. El cierre dorsal implica: una polarización plana en las células más dorsales de la epidermis lateral, cambios en las células de la amnioserosa que se contraen e invaginan y la formación de un aparato contráctil de actomiosina en la interfase entre la amnioserosa y las células epidermicas. Para cerrar el agujero, las celulas epidermicas se alargan, el aparato contráctil tira de ellas y las células de la amnioserosa se contraen e invaginan. Algunos genes implicados en el cierre dorsal tambjen estan implicados en el establecimiento de la polaridad celular plana (PCP) en tejidos adultos, como son jun, basket y flamingo. En el ojo de Drosophila, la PCP esta reflejada en la distribución ordenada de los omatidios con respecto a una línea ecuatorial imaginaria (el ecuador). Los defectos de polaridad se manifiestan por la perdida de la quiralidad de los omatidios y por una rotación errónea de los mismos independientemente de su posición. En el ala de Drosophila la PCP se manifiesta porque cada célula produce un pelo que apunta hacia la parte distal de la misma. Defectos en este proceso se traducen en células del ala que producen pelos que apuntan hacia cualquier parte, o incluso células que producen más de un pelo. En este trabajo hemos caracterizado a cabut (cbt), un nuevo gen que esta implicado en el cierre anterior-dorsal del embrión de Drosophila. Este gen fue aislado en un rastreo genético de ganancia de función empleando la colección de líneas EP en busca de genes que pudieran estar implicados en el establecimiento de la PCP en ojo y ala; también hemos analizado la posible función de cbt en este proceso.

Autor: MARTINEZ LLAMAS MARIA SOLEDAD.
Año: 2005.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias, Universidad de Granada.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: La pérdida de la expresión de las moléculas MHC de clase I es un mecanismo de escape del sistema inmune que ocurre en muchos tumores humanos y murinos con fenotipo MHC de clase I positivo. Esto da lugar a la aparición de variantes tumorales con fenotipo MHC de clase I negativos que son reconocidas por células T. Se han descrito numerosas alteraciones en la expresión de moléculas MHC de clase I en tumores experimentales inducidos en ratones, y estas alteraciones influyen en el crecimiento del tumor y su capacidad metastásica. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un model GR9, formado por líneas celulares derivadas de un fibrosarcoma inducido por metilcolantreno, clonos de este tumor primario y metástasis derivadas de algunos clonos en ratones BALB/C inmunocompetentes y nude. El tumor primario ha sido ampliamente estudiado en nuestro laboratorio. Los clonos del tumor primario presentan distinta expresión de moleculas H-2, distinta inmunogenicidad y poder metastásico. En los ensayos de metástasis expontanes con el clon B9, en ratones nude (depleccionados de todas las metástasis obtenidas. Estos hallazgos presentan evidencias experimentales que apoyan la hipótesis de que el fenotipo H-2 de las distintas metástasis está influenciado por el repertorio de las células T del huésped lo que implica la existencia de inmunoseleccion durante el desarrollo metastásico. Al investigar el mecanismo responsable de la falta de expresión de las moléculas de clase I en superficie mostramos que en este sistema tumoral se produce una falta de expresión coordinada a nivel transcripcional de ciertos componentes del APM tales como: TAP1, TAP2, LMP2, LMP7, LMP10, calnexina y tapasina. La expresión de estos componentes del APM se recupera tras el tratamiento con IFN-g recuperándose también la expresión de las moléculas de clase I. En los ensayos realizados in vivo en ratones inmunocompetentes se observa que existe una relación directa entre la expresión de las moléculas MHC de clase I en superficie y local. Asi, las metástasis MHC de clase I positivas son muy inmunogénas en ratones que sugiere una participación directa de las células T. También se llevaron a cabo ensayos de inmunización in vivo, mostrando que las líneas metástasicas H2 de clase I positivas protegen frente al crecimiento tumoral de las metástasis H2 de clase I negativas. construimos diversas bibliotecas de sustracción con el fin de investigar el posible mecanismo regulador común que explique la baja expresión coordinada de ciertos componentes del APM, y encontramos diversos genes que pueden estar implicados y en los que se centrarán los estudios futuros. Entre ellos destacar dos de ellos: el gen supresor de tu mores Fhit y gen Glis I.

Autor: Escoté Miró Xavier.
Año: 2005.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: Ciencias Experimentales y de la Salud.
Centro de realización: Escuela de Postgrado y Doctorado de la Universidad Autónoma de Barcelona.

Resumen: La activación de las proteínas quinasas de estrés es esencial para la correcta adaptación celular a los estímulos exteriores. En la levadura S. cerevisiae, un incremento de la osmolaridad extracelular activa la vía de HOG1, lo que produce una compleja respuesta adaptativa. En este trabajo se ha caracterizado diversos aspectos de dicha respuesta, descubriendo que uno de los mecanismos protectores inducidos por HOG1 conlleva una parada en la progresión del ciclo celular tanto en G1 como en G2. En este trabajo se demuestra que la activación de Hog1 detiene a las células en la fase G1 a través de un doble mecanismo que termina con la inhibición de la CDK (quinasa dependiente de ciclinas, enzima clave que permite la progresión del ciclo celular). Por una parte, Hog1 inhibe la expresión de las ciclinas (proteínas necesarias para la activación de CDK) y por otra, estabiliza Sic1 (proteína inhibidora de CDK). El trabajo se centra en este último mecanismo, demostrando que Hog1 interacciona físicamente in vivo e in vitro con Sic1, fosforilándolo en una treonina del extremo carboxi terminal. La fosforilación de Sic1 alarga su vida media, retardando el proceso de ubiquitinación a la que se ve sometida en ausencia de estrés. El modelo propuesto predice por tanto que la fosforilación de Sic1 resulta esencial para la adaptación a condiciones de hiperosmolaridad. Efectivamente, células deficientes en Sic1 o que contienen un alelo de Sic1 mutado en el sitio de fosforilación de Hog1, son incapaces de parar en G1 ante la presencia de sal en el medio, lo que produce una serie de graves defectos entre los que destaca la aparición de poliploidias. Por su parte, la MAPK es capaz de regular la transición de G2 a mitosis mediante un mecanismo similar al de G1, en donde la MAPK a través de un doble mecanismo disminuye la actividad CDK de esta fase. En concreto la activación de Hog1 conlleva la caída de los niveles de mensajero de la principal ciclina de G2, Clb2, así como induce la estabilización del inhibor de CDK, Swe1. Esta estabilización, a diferencia de lo que ocurre en G1, se hace mediante un efecto indirecto, afectando los inhibidores de Swe1, Hsl1-Hsl7. Lo que se ha demostrado en estos resultados es una fosforilación directa de Hog1 sobre Hsl1, en concreto en la región de unión con Hsl7, lo que se traduce en una deslocalización de este último, y por tanto, en la inactivación del complejo Hsl1-Hsl7. Consecuentemente, la inactivación del complejo Hsl1-Hsl7 lleva a la estabilización del inhibidor de CDK Swe1. Si en condiciones de estrés no se dan estos condicionantes, la célula entra prematuramente en G2, apareciendo células osmosensibles con un elevado de células binucleadas. En conjunto, los resultados demuestran que los inhibidores de CDK Sic1 y Swe1 son dianas moleculares de Hog1 (directa e indirectamente), y a su vez refuerzan el papel de las MAP quinasas como controladoras del ciclo celular en células eucariotas

Autor: MURGUI PÉREZ ENRIQUE.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MATEMÁTICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: El municipio de Valencia (76 km2 excluyendo el parque natural de l'Albufera) fue dividido en 210 cuadrículas de 700 m * 700 m. Con respecto a la avifauna, el trabajo de campo se desarró durante los inviernos y épocas reproductoras de los años 1997 y 1998 y en estos períodos cada cuadrícula fue recorrida exhaustivamente Las aves observadas eran identificadas, contadas y adscritas a los diferentes hábitats que utilizaban en el momento de la observación, Con respecto alas características del paisaje, en cada cuadrícula se localizaron todas las parcelas de hábitat, y de cada una de ellas se obtuvo su superficie, perímetro, forma y aislamiento. Mediante estos datos se obtuvo tanto la composición (cantidad, número y diversidad de hábitats) como la estructura (ubicación espacial) del paisaje en cada unidad de muestreo. La comunidad de aves es rica en especies (79-85 especies dependiendo de la época) y con alta diversidad, si bien existe un predominio numérico de tres especies y una baja abundancia poblacional de la mayoría de especies Desde un punto de vista fenológico predominaron las especies temporales (invernantes 0 reproductores estivales, si bien la mayor parte de la abundancia se debía a la contribución de las especies sedentarias. Existia un marcado contraste estacional de modo que las comunidades de aves estaban mejor estructuradas durante la época invernal, aspecto relacionado Con factores biogeograficos y con la distribución y tipología de los hábitats que tienden a alcanzar su máximo de oferta trófica para numerosas especies durante la época invernal y en cambio ven seriamente mermada su capacidad de acogida de especies reproductoras durante primavera-verano. El análisis de la relación entre las características del paisaje y la avifauna se verificó mediante tres aproximaciones: analisis de gradientes, relaci6n entre la estructura y la comunidad de aves, y finalmente una aproximación semiexperimental mediante el análisis de la variación diacrónica de la avifauna tras un proceso de urbanización, Todas las aproximaciones coincidían en señalar que la que la riqueza de especies y la diversidad decrece con el grado de urbanización. La abundancia y biomasa de aves, no obstante, muestra patrones mas complejos, dependientes tanto de la inclusión o no de las tres especies mas abundantes Como de la estacionalidad. En el paisaje estrictamente urbano, la principal conclusión obtenida es que tanto las características de las comunidades de aves, como la abundancia o distribución de las diferentes especies, quedaban explicadas por variables concernientes a la composición del paisaje antes que a su estructura, lo cual se atribuye a la escasa distancia entre elementos del paisaje, adaptación previa de las especies a paisajes parcelados y a las complejas relaciones entre cantidad y disposición espacial del hábitat. El proceso de urbanización, implica la pérdida y rarefacción de numerosas especies tanto en el ámbito regional como local. Pese a est a tendencia, el municipio de Valencia aun mantiene una avifauna diversificada con un porcentaje apreciable de especies importantes para el mantenimiento de la biodiversidad en diferentes niveles territoriales. A un nivel local, los hábitats naturales y el paisaje agrario periferico, especialmente la porción situada al norte del municipio, Son los más interesantes desde el punto de vista de la conservación de la biodiversidad. Mantener o incrementar el valor que aun subsiste, pasa por diversas acciones que deberian insertarse en un contexto regional. En el ámbito local, esta fuera de toda duda que, tanto por su valor intrínseco como por su carácter proveedor de especies y poblaciones para el paisaje urbano, el paisaje agrario periférico, la Huerta, deberia ser activamente pr 8 otegida 4c3 a través de las diferentes figuras d protección que la legislación autonómica preve a tal efecto. Dentro del paisaje urbano dos son las principales acciones. (i) la consideración de los solares, en cuanto a su riqueza y valor conservacionista de las especies, como zonas verdes, en pie de igualdad con otros parques urbanos; (ii) un cambio sustancial en el diseño y gestión de los parques urbanos en lo que concierne a sus dimensiones, proporción de suelo pavimentado, composición florística y estructura de la vegetación.

Autor: MORANTE REDOLAT JOSÉ MANUEL.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: GEOGRAFÍA E HISTORIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA (C.S.I.C.).

Resumen: En este trabajo, mediante una aproximación de gen candidato en la región crítica del cromosoma 10 previamente descrita, se identifica a LGI1 como el gen causante de la Epilepsia Lateral Temporal Autosómica Dominante, un tipo de epilepsia caracterizado por crisis parciales originadas en la región lateral del lóbulo temporal, con frecuentes síntomas auditivos y generalización secundaria. Para ampliar la escasa información disponible en aquel momento sobre la biología del gen y a fin de obtener datos de su implicación en la patología epiléptica se analiza su estructura genómica describiendo una variante de procesamiento alternativo, se generan anticuerpos policlonales con los que se caracteriza el patrón de expresión en cerebro de ratón mediante inmunohistoquímica e inmunocitoquímica y se lIeva a cabo un rastreo mediante la técnica del Doble Hibrido en levadura para identificar moléculas con capacidad de interaccionar físicamente con LGI1. De los resultados obtenidos en el Doble Hibrido se formula una hipótesis que relaciona a LGI1 con la ruta de señalización mediada por el triple receptor p75NTR, NgR/Lingo1. Trasladando estos resultados a un modelo de líneas celulares de mamífero se demuestra la interaccion física de LGI1 con los tres miembros del receptor y su capacidad de actuar como ligando extracelular de este complejo. Finalmente se demuestra el efecto funcional de esta molécula sobre la ruta de inhibición del crecimiento de neuritas provocada por los inhibidores presentes en la mielina que media el receptor p75NTR/NgR/Lingo1, de modo que la presencia de LGI1 antagoniza el efecto inhibitorio permitiendo el crecimiento de neuritas y evitando el colapso del cono de crecimiento axonal de cultivos primarios de neuronas en presencia de mielina. Con todos estos datos se propone un papel de LGI1 en los procesos de plasticidad sináptica que ocurren en el sistema nervioso central y que requieren de una atenuación local de la presión inhibitoria del crecimiento que ejerce la mielina. Se hipotetiza que mutaciones en LGI1 que alteren su función podrían conducir a errores en los procesos de remodelación sináptica, fenómeno que se ha relacionado con la aparición de crisis epilépticas

Autor: CANALS MERSEBURGER M. GORETTI.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA - UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: La comprensión de los ciclos de nutrientes en ecosistemas fluviales es importante dada la creciente influencia de la actividad humana sobre su eutrofización. No obstante, el conocimiento existente sobre los ciclos de nutrientes en ríos afectados por entradas de nutrientes procedentes de la actividad humana es todavía escaso. El objetivo general de esta tesis es evaluar los efectos de una fuente puntual de nutrientes procedentes del efluente de una Estación Depuradora de Aguas Residuales (EDAR) sobre el funcionamiento de ríos receptores. Para examinar estos efectos, seleccionamos dos tramos situados aguas arriba y aguas debajo de una fuente puntual en dos ríos que drenaban cuencas con usos del suelo diferentes, para tener dos escenarios de estudios contrastados. Concretamente, el estudio se realizó en los ríos La Tordera y Gurri (Cataluña), los cuales drenan una cuenca mayoritariamente forestada y agrícola, respectivamente. En la Tordera, la fuente puntual constituye la entrada mayoritaria de nutrientes en el río. En el Curri, en cambio, el río recibe fuentes difusas de nutrientes procedentes de campos agrícolas adyacentes a los tramos de estudio además de la fuente puntual. Las concentraciones de amonio (NH4+ -N), nitrato (NO3-N), fósforo reactivo soluble (SRP) y carbono orgánico disuelto (DOC) era significativamente más elevadas en el tramo de aguas abajo que en el de aguas arriba en el río forestado. El efecto de la fuente puntual sobre la química del agua no fue claro en el río agrícola, donde sólo la concentración de SRP aumentó significativamente por debajo de la fuente puntual. Estos efectos se reflejaban en los efectos sobre parámetros funcionales en los ríos de estudio. La eficiencia de retención fluvial de NH4+ -N y SRP disminuyó aguas abajo (distancias de asimilación del orden de km) de la fuente puntual en relación a aguas arriba (distancias de asimilación del orden de centenares de m) en el río forestado. En cambio, la eficiencia de retención de nutrientes(NH4+ -N, NO3 -N y SRP) no estaba afectada por la fuente puntual en el río agrícola, donde estas eficiencias ya eran bajas (distancias de asimilación del orden de km) por encima de la fuente puntual. Las tasas de desnitrificación (mg N m-2 h-1) y eficiencias de desnitrificación (mg N g AFDM-1 h-1; donde AFDM corresponde a la biomasa) eran más elevadas aguas abajo que aguas arriba en el río forestado. Estas tasas y eficiencias no diferían significativamente entre los dos tramos en el río agrícola. Las tasas diarias de metabolismo (reproducción primaria bruta o GPP, y respiración o R) tendían a ser más elevadas por debajo de la fuente puntual en todos los casos de estudio en los dos ríos. No obstante, estos aumentos fueron significativos sólo en el caso de la R en el río forestado. En los tramos de los dos ríos, las tasas diarias de producción neta del ecosistema eran negativas en la mayoría de los casos, indicando que estos ecosistemas eran predominantemente heterotróficos. En los dos ríos observamos una relación potencial negativa entre la demanda biológica de PO4 3- -P y la concentración de SRP, y una relación potencial positiva entre las tasas de GPP y la concentración de SR, que se mantuvieron consistentes cuando combinamos nuestros resultados con los de la literatura de ríos de biomas diferentes. Estas relaciones indican que la disponibilidad de SRP es un factor común en la regulación de la demanda biológica de PO4 3- -P y del a actividad fotoautotrófica en ríos muy diferentes. En conclusión, las fuentes difusas de nutrientes saturaban el efecto local de la fuente puntual sobre el funcionamiento del río agrícola. En cambio, el río forestado era muy vulnerable a la fuente puntual.

Autor: SOTO SÁNCHEZ CRISTINA.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: VIGO.

Resumen: El subnúcleo reticular dorsal (SRD) se encuentra localizado en la formación reticular medial caudal al óbex. Estudios realizados en roedores indican que recibe información nociceptiva e incrementa su transmisión tanto hacia niveles supraespinales como hacia la médula espinal. En roedores, la transmisión ascendente viajar por el lemnisco medial hacia el núcleo ventral-medial talámico, y la transmisión descendente por el fascículo dorsolateral. Dado que los datos procedentes de este núcleo se han obtenido en estudios histológicos y comportamentales realizados en roedores, decidimos determinar la localización de las neuronas del SRD en el gato y estudiar sus propiedades electrofisiológicas. Los resultados obtenidos indican que: * En el gato, el SRD se localiza en la formación reticular situada en la médula oblonga caudal al óbex, pero a diferencia de lo que sucede en roedores, existe una cierta distribución somatotópica de las neuronas en el núcleo, de modo que las que reciben información a través de las columnas dorsales se encuentran en la región más medial de la formación reticular. * Al igual que en roedores y en primates, las neuronas del SRD son activadas únicamente por estímulos nociceptivos. * El 62% (n=102/165) de las células registradas envían un axón a la médula espinal. * El 44% (n=24/55) de las neuronas examinadas fueron activadas antidrómicamente por la estimulación de la formación reticular bulbar medial. * El 9% (9/103) de las neuronas examinadas fueron antidrómicas a la estimulación del lemnisco medial, a diferencia de lo que sucede en roedores donde la proyección rostral de estas neuronas se realiza a través del lemnisco medial. * El 82% (n=27/33) de las células activadas antidrómicamente por la estimulación rostral también fueron antidrómica a la estimulación medular, de modo que la información que se envía como retroalimentación a la médula es la misma que se envía rostralmente. Los resultados demuestran que en el gato, al igual que en la rata, las células del SRD procesan información dolorosa. Sin embargo, en el gato, estas células proyectan a niveles supraespinales más rostrales fundamentalmente a través de la formación reticular medial y en menor proporción a través del lemnisco medial. Aunque no sabemos el lugar de terminación de estas proyecciones a través de la formación reticular, datos histológicos indican que terminan a niveles reticulares más rostrales desde donde además pueden transmitirse hacia los núcleos intralaminares talámicos para alcanzar la corteza cerebral. Dado que la formación reticular bulbar alberga circuitos remotores relacionados con acciones motoras involuntarias que proyectan directamente a las motoneuronas del asta ventral de la médula espinal, el SRD puede participar en las reacciones motoras asociadas a procesos nociceptivos y dirigidas a prevenir o reducir el dolor generado por estímulos nociceptivos externos e internos. Esto puede ser importante para las reacciones posturales de defensa que se adoptan en respuesta a la presencia de un foco doloroso y que implican la modificación del tono de los grupos musculares dirigidos a inmoviliza la región dolorosa y alejarla de estímulos que puedan incrementar esa situación. Además, si la información que se transmite rostralmente alcanza la corteza cerebral a través de los núcleos intralaminares, la corteza podría controlar las reacciones posturales actuando a nivel de las células del SRD que proyectan a la formación reticular y a la médula espinal.

Autor: ALVAREZ FARIÑA PABLO.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE ACUICULTURA.
Centro de realización: DPTO. DE FISIOLOGÍA - FACULTAD DE FARAMCIA.

Resumen: La Tesis estudia el proceso reproductor de dos especies de almejas autóctonas en Galicia de interés comercial: la almeja Bicuda Venerupis aurea (Gmelin, 1791) y la almeja Babosa Venerupis pullastra (Montagü, 1803). Ambas almejas comparte habita y tienen comportamiento reproductor diferente en función de la capacidad de gestión de los recursos bionergéticos que sustentan la gametogénesis, el glucógeno y el lípido, en este aspecto las células vesiculares, constituyente fundamental del tejido de reserva, son capaces de almacenar ambos componentes bioenergéticos. Observamos que la almeja Bicuda, no presenta células vesiculares, almacenando glucógeno en el músculo intergonadal mientras que la almeja Babosa tiene una gran capacidad de desarrollar está célula, llegando a conformar alrededor del 60% del espacio gonadal. Estos Venéridos tienen la capacidad de invertir en Reproducción hasta el 75% de su cuerpo, (soma o partes blandas) y su evolución temporal nos indican; que en la almeja Bicuda las puestas se producen en primavera-verano y en la almeja Babosa a partir de fines del invierno hasta principios de otoño, la diferencia de estos perfiles se debe a la capacidad que tiene la almeja Babosa de almacenar más recursos bioenergéticos, lo que la hace más independiente de las condiciones medioambientales, principalmente comida. La fecundidad potencial y la fecundidad relativa son parámetros pocos estudiados en los moluscos, por ello realizamos la estimación en ejemplares maduros sexualmente, donde la almeja Babosa presentó mayor cantidad de ovocitos en condiciones de ser emitidos que la almeja Bicuda, y el número de ovocitos por ejemplar (fecundidad potencial) no presento diferencias significativas, extrayendo que es posible que una especie tenga mayor fecundidad que la obra, aunque el número de ovocitos por unidad de volumen (fecundidad relativa) no difiera significativamente. Para este estudio empleamos métodos cualitativos -histología convencional e histoquímica- para observar aspectos sobre la formación de gónada y localizar las reservas bioenergéticas y métodos cuantitativos -distribución de tallas de ovocitos y estereología- para describir los ciclos gonadales y el cálculo de la fecundidad en estos moluscos.

Autor: MOURIÑO LÓPEZ SUSANA.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE ACUICULTURA.
Centro de realización: INSTITUTO DE ACUICULTURA.

Resumen: Vibrio anguillarum es uno de los principales agentes etiológicos de la vibriosis de los peces. Entre los diversos mecanismos de virulencia que posee, destaca su capacidad para obtener el hierro a partir de distintas fuentes presentes en el hospedador, entre ellas los grupos hemo. En esta Tesis doctoral se ha llevado a cabo la caracterización estructural y funcional de un cluster génico que codifica la captación y transporte de la molécula de hemo desde el medio extracelular hasta el citoplasma bacteriano, analizando el posible papel que juega este mecanismo de obtención de hierro en la supervivencia y multiplicación del microorganismo durante el proceso infectivo. El sistema tangénico descrito está compuesto por nueve genes organizados en tres unidades transcripcionales (gen huvA y los operones huvXZ y tonB1exbBD1-huvBCD() y cuya expresión está regulada por la concentración de hierro intracelular, a través del regulador transcripcional Fur. Asimismo, la detección de secuencias del cluster génico descrito en distintas cepas de V.anguillarum de serotipos O1 al O10, confirma que la capacidad de utilización de hemo es una característica propia de la especie. Sin embargo, se ha puesto de manifiesto una notable variabilidad genética intraespecífica en el sistema de utilización de hemo, ya que únicamente los genes tonB1, exbB1 y exbD1 están presentes en todas las cepas estudiadas. La identificación de dos receptores de membrana externa diferentes, HuvA y HuvS, con una baja similitud en la secuencia aminoacídica, aunque funcionalmente intercambiables, sugiere también diferencias filogenéticas dentro de V.anguillarum, o la presencia de eventos de transfernecia génica horizontal Finalmente, la caracterización y análisis funcional de dos complejos TonB (TonB1 y TonB2) en V.anguillarum, han demostrado la participación de ambos sistemas en distintos mecanismos de obtención de hierro, siendo funcionalmente intercambiables para la utilización de hemo. Los ensayos de virulencia han puesto de manifiesto la relación de ambos sistemas con la virulencia de este microorganismo, así como el papel que el mecanismo de captación y transporte de hemo juega en la evolución de la evolución de la infección causada por V.anguillarum.

Autor: JULIÀ SAPÉ Ma. MARGARITA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE CIÈNCIES.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: OBJETIVO: Mejorar la caracterización no invasiva de los tumores cerebrales por medio de la técnica de la espectroscopía de resonancia magnética de protón. Para alcanzar este objetivo, se realizaron tres estudios, con los siguientes objetivos: Estudio 1) Generar una base de datos accesible por Internet, que contenga datos clínicos y espectroscópicos completamente validados de pacientes afectados por tumores cerebrales. Estudio 2) Determinar la influencia del tiempo de eco utilizado en la adquisición en la posterior calsificación de los espectros de tumores cerebrales humanos. Para ello se comparó el acierto obtenido en la clasificación tumoral utilizando dos tiempos de eco diferentes (30 ms y 136 ms). Estudio 3) Estimar el acierto en la interpretación de las imágenes de resonancia para la clasificación de los tumroes cerebales, tanto en términos de tipo como de grado de malignidad tumoral. MÉTODOS: Estudio 1) Todos los datos de los pacientes que entraron en el proyecto INTERPRET (International Network for Pattern Recognition of tumours using Magnetic Resonance, http://azizu.uab.es/INTERPRET) se guardaron en una base de datos accesible por Internet (iDB). Estos datos se seleccionaron mediante la interfaz de preguntas de la base de datos. Los criterios que se siguieron fueron que el caso tuviera un espectro adquirido a 1.5T mediante la técnica de volúmen único y a tiempo de eco corto (20-32 ms) sobre una área nodular del tumor, que el volúmen de adquisición hubiera sido posicionado en la misma región de la cual se tomó posteriormente la biopsia diagnóstica, y que el espectro a tiempo de eco corto no hubiera sido descartado por artefactos de adquisición u otras razones, y que un comité de neuropatólogos hubiera alcanzado consenso diagnóstico. Cuando los espectros se obtuvieron de voluntarios normales, o eran de abscesos o de metástasis probadas clínicamente no se requirió biopsia. Estudio 2) Se seleccionaron de forma retrospectiva ciento cincuenta y un estudios de pacientes con tumores cerebrales (37 meningiomas, 12 astrocitomas de bajo grado, 16 astrocitomas de alto grado, 54 glioblastomas y 32 metástasis) de una serie de trescientos setenta y ocho exámenes de masas cerebrales anómalas realizados dentro del proyecto MEDIVO. Se realizó espectroscopía de volúmen único a tiempo de eco 30 ms y 136 ms en todos los casos. Se normalizaron las áreas integradas de nueve resonancias de interés. Los tumroes se clasificaron en cuatro grupos mediante análisis discriminante: meningioma, astrocitoma de bajo grado, astrocitoma de alto grado y gliobalstomas juntamente con metástasis. Se evaluó el resultado del análisis discriminante a cada tiempo de eco mediante el método de dejar un caso fuera. Estudio 3) Se evaluó retrospectivamente el acuerdo entre la clasificación radiológica y el diagnóstico histopatológico, utilizando datos retrospectivos de trescientos noventa y tres pacientes de tumores cerebrales que estaban guardados en la base de datos de ITNERPRET (iDB). Se creó una ontología para poder definir acuerdo entre diagnósticos. Cada categoría tmoral se comparó bilateralmente con los diagnósticos histopatológcos correspondientes. Se calcularon los valores de sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivo y negativo, y también sus intervalos de confianza del 95% de Wilson. RESULTADOS: Estudio 1) Se obtuvo un subgrupo de trescientos cuatro casos (veintidós voluntarios normales y doscientos ochenta y dos pacientes). Estos casos se migraron a otra base de datos similar (base de datos validada). Estudio 2) La clasificación tumoral fue ligeramente mejor a tiempo de eco corto (123 [81%] de 151 casos clasificados correctamente) que a tiempo de eco largo (118 [78%] de 151 casos clasificados correctamente). Los meningiomas fueron el único grupo para el que la clasificación fue más sensible y específica a tiempo de eco largo. Los resultados mejoraron significativamente cuando ambos tiempos de eco se consideraban simultáneamente: el diagnóstico sugerido fue corecto en 105 (94%) de 112 casos cuando el resultado predicho a ambos tiempos de eco era el mismo. Se sugirió el diagnóstico correcto al menos en uno de los dos tiempos en 136 (90%) casos de 151. Estudio 3) Cuando los radiólogos informan e 8 studios bc2 de imagen de resonancia magnética, son altamente específicos (85.2-100%) en la caracterización del grado y el tipo de tumor. su sensibilidad es variable dependiendo del tipo y grado, separadamente y en combinación. En las categorías amplias (neuroepitelial, estirpe meníngea) fueron muy sensibles mientras que cuando se consideró la manera de informar el tipo detallado, la sensibilidad era variable, siendo la más alta para los meningiomas de bajo grado (sensibilidad 100%, intervalo de confianza, 96.2-100.0%) y la más baja en los meningiomas de alto grado (sensibilidad 0.0, intervalo de confianza, 0.0-65.8%) y en los oligodendrogliomas de bajo grado (sensibilidad, 15%, intervalo de confianza, 5.2%-36.0%). La sensibilidad en la detección de los tumores de orígen neuroepitelial se relacionó inversamente con la precisión al describir el grado y el orígen celular del tumor. "Glioma" fue una clasificación radiológica frecuente, asociada a una más alta sensibilidad en su categoría correspondiente. El valor predictivo positivo varió entre categorías, alcanzando en general valores por encima de la prevalencia de los tumores respectivos en esta base de datos. El valor predictivo negativo fue alto para todas las categorías analizadas (69.8-100%). CONCLUSIONES: La base de datos validada cumple con las regulaciones éticas y representa la población que estudia. Es accesible a neuroradiólogos de todo el mundo que deseen utilizar la información espectroscópica en el diagnóstico no invasivo de los tumores cerebrales. El tiempo de eco corto provee una clasificación ligeramente mejor que el tiempo de eco largo, y los resultados mejoran cuando se consideran los dos tiempos de eco de forma simultánea. Los meningiomas son el único grupo tumoral para el cual el tiempo de eco largo es ligeramente mejor que el tiempo de eco corto. Los valores predictivos positivo y negativo para el diagnóstico por imágenes de resonancia que se obtuvieron pueden utilizarse como estimadores de las probabilidades a posteriori para la caracterización de los tumores cerebrales en la base de datos INTERPRET. Además, se puso en evidencia la necesidad de aumentar la sensibilidad en la categorización de la mayoría de tumores cerebrales, manteniendo la alta especificidad, especialmente mediante técnicas como la espectroscopía de resonancia magnética de protón.

Autor: DOMENZAIN REYNA CLELIA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: D.DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BARCELONA.

Resumen: La composición de la matriz extracelular (MEC) determina algunos aspectos cruciales del comportamiento tumoral. Entre sus componentes destacan glicoproteínas y proteoglicanos (PGs), algunos de los cuales tienen receptores en la membrana celular. Nuestro grupo de investigación está interesado en la biología de los PGs en el melanoma humano. El VS es un PG de matriz de la familia de los hialectanos. Está formado por tres dominios: G1, G2 y G3. El splicing alternativo del dominio central G2 genera cuatro isoformas denominadas V0, V1, V2 y V3. En células de melanoma humano se ha descrito la expresión de proteoglicanos como el proteoglicano específico de melanoma (mel-PG), CD44 o versicano (VS), cuya presencia fue descrita en nuestro laboratorio. Asimismo, describimos su capacidad para incrementar la proliferación y migración en células de melanoma humano, además de disminuir su adhesión. En la primera parte de este trabajo determinamos el patrón de expresión de las isoformas de VS y de mel-PG durante el proceso de desdiferenciación de las células de melanoma, utilizando líneas celulares con diferentes grados de diferenciación (temprano, intermedio y tardío). Nuestros resultados muestran que el grado de diferenciación de las células determina la expresión diferencial de VS y mel-PG, de tal forma que las líneas celulares más indiferenciadas expresan todas las isoformas de versicano y las más diferenciadas ninguna de ellas. De ello concluimos que la pérdida del estado diferenciado se acompaña de la expresión de las diferentes isoformas de VS, hecho que parece ser común en tumores derivados de células con mismo origen embrionario, como muestran nuestros análisis preliminares realizados en células de neuroblastoma y astrocitoma. Durante el proceso de diferenciación in vitro de las líneas celulares SK-mel-1.36-1-5 y SK-mel-3.44 estos PGs desaparecen, por lo que proponemos que la producción de versicano es señal de regresión a un estado no diferenciado durante la progresión tumoral, y que existe un patrón temporal para la expresión de cada isoforma de versicano. En la segunda parte analizamos la regulación del promotor de VS en líneas celulares de melanoma humano con grados de diferenciación temprano y tardío. Aislamos, secuenciamos y clonamos el promotor de VS humano. El análisis in silico del mismo determinó tres regiones de regulación: la primera en el extremo 5', presenta dos cajas de reconocimiento para TCF-4; la segunda en la zona central, 6 cajas de unión para Sp1, 7 para AP-2 y una para Smad3/4; y la tercera en el extremo 3', una caja de unión para AP-1. Construimos diversos mutantes de deleción diseñados para aislar el papel de cada uno de los elementos reguladores del promotor de VS y los transfectamos de manera transiente en las líneas celulares. Los resultados muestran que TCF-4 es un activador responsable de más del 50% de la actividad total de este promotor, ya que la sobrexpresión de algunos de los participantes de la vía de señalización de TCF-4 tiene un efecto directo sobre la actividad del mismo. Además, mediante ensayos de EMSA determinamos la unión específica del complejo TCF-4/ -catenina. En la región central reside aproximadamente el 10% de la actividad total del promotor y hemos determinado la unión específica a 3 de los posibles sitios de unión para Sp1. Planteamos por tanto, que Sp1 es un modulador o quizás regulador de respuesta rápida de VS. Por último, en la región 3' del promotor, que contiene la secuencia de reconocimiento para AP-1, se encuentra el 40% restante de la actividad y hemos determinado que dicha secuencia es la responsable de la actividad basal de VS.

Autor: LAZZARO ALEJANDRA SILVIA.
Año: 2005.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: I.U.DE BIO ORGANICA.
Centro de realización: INSTITUTO UNIVERSITARIO DE BIO ORGANICA ANTONIO GONZALEZ.

Resumen: En esta Tesis se estudian diversos aspectos de las moléculas y de los mecanismos involucrados en el Mal de Panamá. Durante el desarrollo de esta enfermedad, M. acuminata y F. oxysporum interaccionan utilizando diversas estrategias desarrolladas durante el transcurso de la coevolución entre ellos. Ante la presencia de F. oxysporum, M. acuminata dispara la síntesis de diversas fitoalexinas fenilfenalenónicas y otros derivados de fenalenona, algunos de ellos con actividad antifúngica. Las fitoalexinas no sólo poseen actividad antifúngica directa sobre el patógeno sino que, además, liberan la especie reactiva oxígeno singlete (1O2) en presencia de luz. La actividad antifúngica de las fitoalexinas fenilfenalenónicas en presencia de luz se correlaciona con la intensidad de la producción de 1O2. Esta especie reactiva de oxígeno es altamente nociva para las células. Por una parte es tóxica para el patógeno, y por otra, activa la respuesta hipersensible en discos de hoja de M. acuminata. La habilidad de las fenilfenalenonas para producir 1O2 se refleja en su mayor capacidad para dañar el DNA plasmídico en experimentos in vitro. Además, está descrito que el 1O2 es capaz de inducir la peroxidación de lípidos de membrana, haciendo que las células pierdan su integridad. En este daño celular las enzimas involucradas son las lipoxigenasas. M. acuminata produce de forma natural el compuesto naproxeno, que junto con algunos análogos estructurales sintéticos se ha mostrado como un inhibidor de lipoxigenasas, además de poseer actividad antifúngica. El naproxeno, un derivado del ácido naftalenacético, influye en el crecimiento de plántulas in vitro de M. acuminata y callos de Bupleurum salycifolium. A su vez, F. oxysporum reacciona a las fenilfenalenonas de M. acuminata, detoxificando in vitro a una de las más agresivas en oscuridad y convirtiéndola por metilación en otra fenilfenalenona mucho más débil como antifúngica. Tanto la raza patógena (FOC4) como la no patógena (FOC1) son capaces de llevar a cabo la detoxificación, por lo que se puede suponer que la diferencia de patogenicidad observada para ambas razas no estaría relacionada con la capacidad de detoxificación. En cultivos in vitro de FOC4 en presencia de la fenilfenalenona PN3, el hongo produce el antioxidante natural tirosol. Sería interesante estudiar si el tirosol se produce en la interacción in vivo, y si está implicado en la relación M. acuminata - FOC4. El control del Mal de Panamá es bastante complejo por diversos motivos. Una estrategia de control consiste en la utilización de organismos completos, o exometabolitos producidos por ellos para contrarrestar el crecimiento de un determinado patógeno. En este trabajo se ha investigado la producción de compuestos antifúngicos en una cepa de Penicillium melinii, encontrándose cuatro compuestos, dos de ellos con actividad antifúngica contra FOC4 y dos inactivos. Los compuestos aislados, y cuyas estructuras han sido elucidadas, corresponden al ácido 2,3-dihidro-2-metil-4-benzofuran carboxílico (PM1) y al ácido 3-hidroxi-2-metil-4-benzofuran carboxílico (PM4).

Autor: CERVERÓ SANZ ANA CRISTINA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El sistema de la leptina esta implicado en la regulación del peso corporal yen la función reproductiva actuando a niveles endocrinos y paracrinos. Existen datos que indican que este sistema es esencial para la implantación embrionaria en el ratón. Este trabajo describe como la expresión del receptor de leptina y de sus distintas isoformas varia a 10 largo del ciclo menstrual en el endometrio humano. El receptor de leptina esta presente a 10 largo de todo el desarrollo embrionario preimplantatorio mientras que la leptina únicamente se expresa en el estadio de blastocisto. No existen diferencias significativas en los niveles de expresión ni en la localización del receptor de leptina en el endometrio de mujeres infértiles con endometriosis moderada/severa y mujeres fértiles durante la ventana de implantación. Además, ambos tipo de endometrios expresan leptina a niveles muy bajos. El bloqueo in vitro de la expresión del receptor de leptina no disminuye las tasas de adhesión embrionaria, indicando que este sistema no esta implicado en dicha fase. Sin embargo, no se descarta que pudiera estar implicado en la fase de invasión embrionaria a través de la activación de metaloproteasas y factores angiogénicos.

Autor: DE ANDRADE BASTOS AFRANIO.
Año: 2005.
Universidad: LEÓN.
Centro de lectura: ESCUELA DE VETERINARIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LEÓN.

Resumen: La práctica deportiva puede considerarse uno de los mayores fenómenos sociales del mundo contemporáneo. En la perspectiva deportiva, es de importancia fundamental que todo entrenador sepa los motivos de participación de un atleta en sus entrenamientos, cómo el deportista percibe su nivel de habilidad física, y en que medida esta orientado a alguna meta de logro. Y entre la gran variedad de deportes existentes actualmente, la natación es uno de los más practicados en todo el mundo. Por todo esto, el objetivo principal de la presente investigación ha sido analizar las relaciones entre los principales motivos que llevan a la práctica de la natación competitiva con el nivel de habilidad física percibida, y con las perspectivas de metas de logro en atletas brasileños. La muestra estuvo compuesta por 425 atletas (138 nadadoras y 287 nadadores), con una media de edad de 14,7 años, de diferentes clubes en cinco estados brasileños. Para recoger la información necesaria se utilizó una batería de tests. Dichos tests o cuestionarios sufrieron un proceso de tratamiento y ajuste a las características del estudio y de la muestra. El análisis de los datos fue llevado a cabo utilizando el paquete estadístico SPSS versión 11.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, IL). Para el estudio de la validez y fiabilidad de los cuestionarios fue utilizado el análisis factorial con rotación varimax , el estudio de las correlaciones inter-item y cálculo de los valores alfa de Cronbach, y el test-retest. Los resultados obtenidos indican que: Los principales motivos para la práctica de la natación competitiva en la población estudiada se relacionan con la necesidad de desarrollar nuevas habilidades motoras y mejorar la salud, la necesidad de socialización y la cooperación entre iguales, todos ellos de carácter intrínseco. La habilidad física percibida específica es puntuada con valores más altos en los nadadores de las categorías inferiores, quizá porque sobreestiman sus habilidades al disponer aún de información escasa sobre las técnicas de natación. Los sujetos participantes en el estudio mostraron una motivación de logro más orientada hacia la tarea que hacia el ego. Este resultado puede atribuirse a la especificidad de la disciplina deportiva practicada. Aunque existen diferencias de género, los datos obtenidos sugieren una mayor asociación de la orientación a la tarea con factores motivacionales intrínsecos y de la orientación al ego con factores motivacionales extrínsecos.