BIOFISICA

Autor: GONZÁLEZ MUÑOZ DIANA M..
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El desarrollo de la Ingenieria del ADN recombinante, y el conjunto de técnicas nacidas de la biología molecular que permiten manipular el genoma de un ser vivo, ha permitido la obtención de fragmentos de ADN portadores del gen o genes que se desee en cantidades ilimitadas (clonación de ADN recombinante). La expresión de genes clonados en bacterias, básicamente Escherichia coli, se ha usado ampliamente en la industria, para la producción de proteínas de uso farmacéutico, y en investigación, para realizar estudios bioquímicos y/o estructurales de las proteínas producidas. La bacteria puede producir una gran cantidad de proteína recombinante de forma rápida, a menudo con un bajo coste, mediante procesos a gran escala en fermentadores industriales, sin embargo, en muchos de estos procesos el producto de interés se deposita en forma de agregados insolubles e inactivos o en forma de cuerpos de inclusión. Por lo que es necesario realizar un proceso de plegamiento in vitro posterior para que la proteína adquiera sus actividad biológica. En esta tesis se ha abordado el estudio de la sustitución de urea por diferentes aditivos en el plegamiento in vitro de la BMP-2 humana expresada en escherichia coli. Esta proteína se caracteriza por ser un factor osteogenético que induce fenotipos osteoblásticos en células indiferenciadas. El estudio de dichos aditivos se realizó mediante la inducción de un marcador osteoblástico como es la actividad fosfatasa alcalina en una línea celular mioblástica, en concreto en la línea celular C2C12. Se investigó la presencia de diferentes aditivos evluándose la concentración de los mismos así como la concentración de proteína presente en el plegamiento y se compararon con los resultados obtenidos en presencia de urea, condición previamente establecida en nuestro laboratorio. Aquellas condiciones que presentaron resultados preliminares superiores a las condiciones control, se realizaron a mayor escala para poder purificar la proteína activa y por tanto establecer rendimientos. Asimismo se ha realizado una caracterización fisicoquímica preliminar de la rhBMP-2 en solución. Se ha utilizado como técnica la medida de emisión de fluorescencia intrínseca de la proteína, para realizar el seguimiento de la desnaturalización inducida en la rhBMP-2 por diferentes agentes químicos, estudios que se han completado con la caracterización de la solubilidad de la misma mediante espectroscopía UV-Vis.

Autor: GARCÍA SÁEZ ANA JESÚS.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA DEL CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Las proteínas de la familia Bcl-2 son importantes reguladores de la apotosis, y ejercen su función cuando se encuentran asociadas a las membranas celulares. En este trabajo hemos abordado la caracterización de la interacción de miembros representativos de la familia Bcl-xL. Bax y Bid, con membranas lipídicas. En primer lugar se determinaron los dominios de interacción con membranas en estas proteínas mediante "mapeo" por elicosilación. Algunos de estos dominios se sintetizaron químicamente, y se analizó su capacidad para permeabilizar membranas en sistemas modelo (vesículas unilamelares grandes y bicapas planas). En paralelo se inició su caracterización estructural en medios lipídicos y lipidomiméticos por dicroismo circular y espectroscopia de infrarrojo. Los resultados nos permitieron plantear modelos de acción.

Autor: IVORRA CANO ANTONI.
Año: 2004.
Universidad: POLITÉCNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: aula de teleensenyament.
Centro de realización: C4 Despatx Direcció nord.

Resumen: Aquesta tesi es centra en el desenvolupament i l'ús d'una sonda miniaturitzada de silici per a la mesura de la impedància elèctrica de teixits vius tous. El propòsit d'aquestes mesures d'impedància és la monitorització en temps real del dany isquèmic per a aplicacions com la cirurgia cardíaca o el trasplantament d'òrgans. Actualment, el rang de mètodes aplicables a nivell clínic per tal de detectar l'isquèmia tissular és limitat i no existeix cap mètode pràctic que permeti la quantificació en temps real de l'efecte d'aquesta isquèmia, això és, el dany isquèmic. En aquest sentit, la monitorització de la impedància elèctrica sembla esperançadora i el treball d'aquesta tesi contribueix al camp mitjançant el desenvolupament de nous instruments i mètodes i mitjançant l'aportació de noves dades experimentals i eines per a la comprensió de la relació entre la patofisiologia i la impedància elèctrica. Les principals contribucions d'aquesta tesi es resumeixen a continuació. En aquesta tesi, es descriu el desenvolupament d'una sonda que formada per quatre elèctrodes de platí (300 m 300 m) a sobre d'un substrat de silici en forma d'agulla ( longitud d'inserció = 9 mm i secció de 600 m 500 m). Els elèctrodes estan situats a una distància de separació no constant per tal de millorar la relació senyal-soroll i la resolució espacial. Es realitza una deposició electroquímica de platí negre sobre els elèctrodes per tal de reduir la impedància de la interfície i millorar la qualitat de les mesures. En el cas dels teixits vius, la banda freqüencial de mesura va dels 100 Hz fins als 100 kHz. Un mètode nou per a la mesura d'impedància a cinc elèctrodes es presenta i sâanalitza. Amb aquest mètode, es pretén minimitzar l'error a baixes freqüències degut a l'elevada impedància de la interfície elèctrode-electròlit. Malauradament, encara que aquest mètode a cinc elèctrodes funciona, sâhan trobat algunes limitacions que el fan quasi impracticable en el cas dels teixits vius. També es presenta el desenvolupament i l'ús d'un paquet de programari per a simular la impedància elèctrica dels teixits vius en les regions de dispersió i . Aquest programari es basa en la generació d'arxius SPICE a partir de l'especificació d'alguns paràmetres numèrics relacionats amb el teixit i el dibuix d'un mapa bi-dimensional que representa un tall de teixit. El resultat més significatiu d'aquest simulador és que és capaç d'obtenir respostes compatibles amb l'equació de Cole a partir d'un model basat únicament en resistències i capacitats. Sâhan realitzat diversos estudis experimental fent servir la sonda de silici. En aquesta tesi únicament es presenten els estudis amb ronyons de rata. Els resultats confirmen les principals observacions fetes anteriorment per altres investigadors que han treballat amb diferents animals, òrgans i protocols. Això vol dir, en termes generals, un increment significatiu

Autor: GUTIÉRREZ MARTÍN M. YOLANDA.
Año: 2004.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En la presente tesis es estudian los efectos causados por un estrés oxidativo extracelular inducido por peroxinitrio y peróxido de hidrógeno sobre los niveles de Ca2+ libre intracelular en células excitables. En primer lugar estudiamos la modulación de las bombas de Ca2+, tanto en vesículas de membrana plasmática de sinaptosomas (PMCA) como en vesículas de retículo sarcoplásmico de músculo esquelético (SERCA) inducida por el estrés oxidativo generado por la exposición a ONOO-. Para el estudio de la homeostasis de Ca2+ citosólico en células excitables expuestas a SIN-1, como agente liberador de ONOO-, se utilizaron como sistema modelo: células granulares de cerebelo (CGC) y miotubos diferenciados a partir de mioblastos de la línea celular C2C12. A partir de los resultados obtenidos podemos afirmar que: * El tratamiento de vesículas de membrana plasmática de sinaptosomas con ONOO- inhibe la actividad de la PMCA. Este oxidante también inhibe la actividad Ca2+ -ATPasa de retículo sarcoplasmático. La inhibición de estas actividades implica una pérdida de la capacidad de transporte de iones Ca2+, lo que puede contribuir a la desregulación de la homeostasis de Ca2+ intracelular. * La exposición de estas vesículas a ONOO- resulta en una oxidación de grupos tioles y nitración de residuos de tirosinas. Utilizando la Ca2+ -ATPasa de retículo sarcoplasmático hemos comprobado que la diana principal de ONOO- está localizada en su dominio citosólico. Concentraciones fisiológicas de agentes reductores como NADH, ascorbato y glutation reducido protegen a la Ca2+ -ATPasa de retículo sarcoplasmático del ONOO-. * Los canales de Ca2+ activados por voltaje de tipo L de células granulares de cerebelo sonaltamente sensibles a las especies oxidativas/nitrosativas generadas durante la descomposición e SIN-1. La Ca2+ -ATPasa de membrana plasmática se inhibe a concentraciones superiores de estas especies reactivas, por lo que la alteración de la homeostasis de Ca2+ dependerá de la intensidad del estrés oxidativo. * Los miotubos C2C12 tienen canales de Ca2+ activados por el vaciado de depósitos intracelulares que presentan propiedades farmacológicas diferentes a las de los canales sensibles a dihidropiridina. Estas propiedades son idénticas a las descritas para los canales SOCs (Store-operated calcium channels). El estrés oxidativo/nitrosativo extracelular generado durante la descomposición de SIN-1 relentiza la entrada capacitativa de Ca2+ mediada por los canales SOCs.

Autor: PÉREZ LÓPEZ SILVIA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: La presente tesis doctoral se ha estructurado en dos partes diferenciadas. La primera parte se ha estudiado un péptido sintético, de estructura multimérica, el MAP[VP1+VP3], que contiene lugares potencialmente antigénicos de las proteínas virales VP1 y VP3 del virus de la hepatitis A, y en la segunda, péptidos sintéticos correspondientes a la proteína E1 del virus GBV-C/HGV, o virus de la hepatitis G, y su interacción con modelos de membrana. Los principales objetivos de esta primera parte de la tesis doctoral han sido estudiar la capacidad inmunógena del péptido MAP[VP1+VP3] con dos formulaciones distintas que se administraron a animales de experimentación, y valorar las diferencias que se han obtenido en cuanto a términos de avidez y de reconocimiento de epítopos constituyentes de la macromolécula mediante dos técnicas distintas, una técnica de inmunoensayo clásica como es el ELISA, y otra más novedosa como es la basada en la resonancia del plasmón de superficie (RPS). Durante 98 días se siguió un protocolo de inmunización, en el que los conejos 1 y 2 fueron inmunizados con el péptido MAP[VP1+VP3], Al conejo 1 se le administró una formulación con adyuvante de Freund, y al conejo 2 una formulación con liposomas MLV. En el conejo 1 los niveles de anticuerpos totales se mantuvieron elevados hasta la última inmunización, en la que se observó un descenso, quizás debido a un efecto de tolerancia. En el conejo 2 los niveles de anticuerpos fueron creciendo hasta llegar a su punto máximo a los 98 días. En ambos caso se midieron los niveles de anticuerpos al mes de la última inmunización y se observó que en el caso del conejo 1 habían descendido prácticamente hasta desaparecer y no así en el caso del conejo 2. En el análisis de la avidez se utilizaron dos técnicas distintas, el ELISA y tecnología de RPS. En nuestros estudios, las curvas experimentales hechas para calcular la avidez a partir del ELISA, no se ajustaron completamente a las curvas teóricas del modelo seguido, diseñado para anticuerpos monoclonales. Esta discrepancia entre el modelo teórico y el experimental es atribuible tanto a la complejidad del antígeno MAP[VP1+VP3], como a la del analito (anticuerpo). El antígeno es un péptido complejo, con al menos 3 sitios reactivos, VP1, VP3 y la conformación MAP[VP1+VP3] y el anticuerpo puede reaccionar con mono o bivalencia. En los ensayos de RPS, uno de los puntos más problemáticos fue el encontrar una aproximación matemática que pudiera adaptarse a nuestro modelo. El MAP[VP1+VP3] contenía más de un epítopo, tal y como se vio en el ELISA, ya que se reconoció tanto la construcción MAP[VP1+VP3] como los péptidos lineales. Además, las IgG pudieron interaccionar con el ligando con 1 ó 2 dominios F ab con cada uno de los epítopos, haciendo el modelo más complejo todavía. Esta fue probablemente la causa de que ninguno de los modelos analíticos matemáticos pudiera adaptarse completamente a nuestros datos. Sin embargo, examinando las constantes de disociación, que son inversamente proporcionales a la avidez e independientes de la concentración bajo condiciones de saturación, pudieron establecerse comparaciones. Tanto el análisis con ELISA como con RPS indicaron que los liposomas produjeron un antisuero con mayor avidez que el del adyuvante de Freund. En la segunda parte de la tesis, se han sintetizado y estudiado péptidos sintéticos correspondientes a la proteína de envoltura E1 del virus de la hepatitis G (GBV-C/HGV). El GBV-C/HGV, de reciente descubrimiento, ha sido identificado como un posible inhibidor de la replicación del virus del SIDA (VIH). La utilización de modelos de membrana y la capacidad de los péptidos sintetizados de interaccionar con ellos mediante distintas técnicas, ha sido el principal objetivo de esta segunda parte. Se seleccionó como proteína a estudiar la E1 del virus GBV-C/HGV, que pertenece a las proteínas estructurales de este virus. No se conocen estudios a fecha de hoy sobre esta proteína, a a 8 parte, a ebc l ser proteína estructural debía tener importantes sitios de antigenicidad en su secuencia. A la hora de sintetizar los péptidos, se seleccionaron diferentes cepas del GBV-C/HGV y se compararon con la ayuda del programa Clustalw para obtener la secuencia conservada de la que se partiría para la síntesis. La conclusión final a la que se llegó era que la secuencia que presentaba las mejores características en cuanto antigenicidad, giros beta e hidrofilia era la comprendía entre los aminoácidos 53-66. También se utilizó otro método para analizar las regiones hidrobóbicas de la proteína E1. El método seleccionado fue un algoritmo llamado Predict Protein, relativo a la base Swiss Protein. El perfil de los 190 aa de la proteína E1 fue analizado mediante el programa PHD (profile fed neural network systems from HeiDelberg). Cerca de la región correspondiente a los aminoácidos 53-66 seleccionados, se hallaría, según el algoritmo de predicción PHDhtm, una hélice transmembrana. El algoritmo PiMohtm también confirmó la presencia de la hélice. Debido a ello se pensó en derivatizar el péptido E1(53-66) con un ácido graso, el ácido palmítico, ya que de esta manera se podría intentar mimetizar el entorno hidrofóbico nativo en el que se hallaba. Ya que los extremos proteicos están descritos como potencialmente inmunogénicos, y dado que la proteína E1 del virus ha sido poco estudiad, se decidió que se sinetizaría también un péptido correspondiente a su extremo amino terminal. Para ello y después de seguir el mismo proceso que se siguió para elección del péptido E1(53-66), se seleccionaron los aminoácidos comprendidos entre las posiciones 3 y 17, para obtener un péptido de 15 aa. Se valoró la interacción de los péptidos sintetizados con modelos de membrana mediante distintas técnicas: isotermas de Langmuir, fluorescencia, calorimetría diferencial de barrido y microscopía del ángulo de Brewster. Los péptidos E1(53-66), E1(3-14)G y E1(3-17)R se incorporan débilmente en monocapas de diferente carga eléctrica. Sin embargo la penetración fue más importante en monocapas aniónicas, lo que implica la existencia de un componente electrostático que se explica por el carácter catiónico de ambos péptidos al pH de los experimentos (7,4). El PalmE1(53-66) se incorpora a monocapas de diferente carga eléctrica: zwitteriónica (DPPC y DOPC) y aniónica (DPPG y DOPG). Los resultados obtenidos por el ensayo de isotermas de unión indicaron que la interacción que presenta la secuencia E1(53-66) con los lípidos estudiados, es básicamente debida a la presencia de las cargas positivas del péptido. Para su derivado palmitoílo, la interacción fue mayor con los lípidos DOPC y DPCC (zwitteriónicos) que con los lípidos aniónicos. Los resultados obtenidos por calorimetría diferencial de barrido indicaron que la secuencia E1(53-66) presentó una mayor capacidad de interacción con los liposomoas MLVs de DPPC y DPPG que las secuencias pertenecientes a la parte amino-terminal de la proteína de evoltura E1. Y los resultados obtenidos por el ensayo de isotermas de unión indicaron que la interacción que presenta la secuencia E1(53-66) con los lípidos estudiados, es básicamente debida a la presencia de las cargas positivas del péptido. Para su derivado palmitoílo, la interacción es mayor con los lípidos DOPC y DPPC (Zwitteriónicos) que con los lípidos aniónicos.

Autor: OLASAGASTI ARSUAGA FÉLIX.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.

Resumen: La tesis plantea y estudia un modelo teórico de sistema celular automantenido que es coherente con las leyes energéticas establecidas por la termodinámica. El modelo presenta un sistema de reacciones que forma los elementos constitutivos de membrana, así como elementos necesarios para su automantenimiento energético. El estudio se realiza mediante un formalismo de ecuaciones diferenciales que es establecido como resultado de un análisis estequiométrico exhaustivo de la red de reacciones. La tesis presenta también los resultados de la investigación realizada con dos modelos experimentales que avalan las hipótesis planteadas en el modelo teórico. Por un lado, se estudia el transporte de protones en vesículas gigantes porque éstas vesículas son óptimas para el estudio de sistemas de reacciones encapsuladas y los protones pueden constituir uno de los elementos responsables de la estabilidad celular en el modelo teórico. Por otra parte, se estudia la posible síntesis abiótica de ácidos ribonucleicos, como elementos capaces de llevar a cabo proceso catalíticos dentro del sistema celular. De esta forma, combinando la metodología teórica y la experimental, se abordan cuestiones relativas a los estadios de lata organización de la materia, previos a la formación de los primeros seres vivos, y se responde a cuestiones clave en estos últimos estadios de la evolución química.

Autor: MONTES BURGOS LIDIA RUTH.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR.

Resumen: Esta tesis tiene como objetivo principal de los efectos de las fosoflipasas C y esfingomielinasas sobre las propiedades estructurales y funcionales de las bicapas lipídicas. Para ello se han utilizado diversos enzimas de origen microbiano, que hidrolizan esfingomielina y, en ciertos casos, también glicerofosfolípidos, generando respectivamente ceramidas y diacilgliceroles. Se ha estudiado la permeabilización y liberación de contenidos vesiculares inducida por ceramidas, bien generadas in situ (por la hidrólisis enzimática dela esfingomielina), o bien añadidas a membranas. Para ello se ha utilizado como sistema LUV con diferentes composiciones de fosfolípidos y colesterol, que contenían moléculas fluorescentes atrapadas en su interior. En la mayoría de experimentos se han utilizado pequeñas cantidades de ceramidas, que podrían existir en condiciones fisiológicas de señalización dependiente de ceramidas. Dos propiedades de las ceramidas son importantes para el proceso de reestructuración de las membranas; su capacidad de inducir curvaturas de membrana negativas y su tendencia a segregar lateralmente en el plano de la membrana, dando lugar a dominios ricos en ceramidas. Listeria monocytogenes es una bacteria que produce infecciones en humanos y animales. La bacteria secreta una PLC activa sobre varios tipos de glicerofosfolípidos (PC y SM), por lo que se puede definir más apropiadamente como una esfingomielinasa/fosfolipasa C. La actividad enzimática va acompañada de cambios importantes en la estructura de las vesículas, como son: agregación y mezcla de lípidos y contenidos intervesiculares sin que se observe liberación de contenidos. Estos resultados indican que PLC LM induce la fusión de vesículas. PlcHR2 es una enzima que forma parte de una nueva superfamilia de fosfolipasas C/fosfatasas, con miembros en una gran variedad de especies bacterianas. Hemos descrito la actividad hidrolítica de PlcHR2 cuando el sustrato se encuentra en forma de LUV. PlcHR2 hidroliza PC y SM, pero es inactiva sobre otros lípidos. El calcio no modifica su actividad hidrolítica. El enzima induce fusión de vesículas, y el Ca2+ no afecta la fusión, aunque hace que aumente la velocidad de agregación y la velocidad y amplitud de la liberación de contenidos. Por otro lado, hemos realizado una serie de experimentos destinados a comprender la actividad hemolítica de PlcHR2, y tratar de explicar su mecanismo molecular.

Autor: CUESTA MATARREDONA EDUARD.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD DE BARCELONA, IDIBELL.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE BARCELONA, IDIBELL.

Resumen: OBJETIVO Fructosa 1,6-bisfosfat (F1, 6BP) protege los órganos contra gran número de procesos que provocan inflamación. Hipotetizamos que el efecto primario de la F1, 6BP es el de prevenir la activación de los macrófagos y la secreción de citoquinas. Nuestra intención fue determinar las dianas titulares y celulares de este azúcar bifosforilado e investigar en profundidad su mecanismo de acción. INTERVENCIONES La acción protector de F1,6BP fue analizada en ratas Saprague-Dawley (de entre 200 y 250 gramos de peso corporal) a las cuales se les había inducido hepatitis mediante la invención de galacctosamina (GalN). Los efectos in vivo de la F1,6BP fueron evaluados mediante la determinación de la actividad transaminasa en plasma, la determinación de endotoxinas en plasma y la determinación del factor necrótico de tumoración alfa (TNF-alfa) en plasma y en hígado total en ratas tratados con GalN. Las dianas de la F1,6BP para reducir la respuesta de los macrófagos al lipopolisacrádio LPS fueron determinadas mediante el estudio de la correlación entre los cambios en la producción de TNF-alfa y los flujos de potasio a través de la membrana celular en cultivos primarios de células de Kupffer. DETERMINACIONES Y PRINCIPALES RESULTADOS Los resutlados obtenidos in vivo indican que el tratamiento con F1,6BP previene el daño causado por la administración deGalN en células del parènquima hepático. Esta protección se ha asociado principalmente al reducción en la respuesta inflamatoria. FF1,6BP previene la endotoxemia inducida por GalN en rata y ésta correlaciona con la inhibición de la secreción de histamina por parte de los mastocitos peritoneales, evento que precede al incremento de endotoxinas en plasma y de la producción hepática de TNF-alfa. Por otro lado, el tratamiento con F1,6BP reduce la sensibilidad de los macrófagos al LPS, cosa que provoca un descenso en la producción de TNF-alfa. Los resultados in vitro muestran que la F1,6BP inhibe la respuesta y la secreción de TNF-alfa por parte de las células de Kupffer a las que se ha administrado LPS. La F1,6BP previene estos efectos mediante la inhibición de la activación de los canales de potasio por LPS en este modelo celular. CONCLUSIONES El efecto modulador de los canales de potasio en la adición exógena de F1,6BP explica sus efectos como antihistamínico y antiinflamatorio, cosa que incrementa enormemente el interés terapéutico de este compuesto bifosforilado.

Autor: DOMENECH CABRERA OSCAR.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FÍSICA Y QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: El principal objetivo del trabajo de esta Tesis ha sido el estudio de las propiedades fisicoquímicas de la membrana interna de la mitocondria y la interacción del citocromo c con modelos de membrana. Para conseguirlo se utilizaron varias técnicas: monocapas de Langmur y películas de Langmuir Blodgett, espectroscopía de la fluorescencia, Microscopía de Angulo de Brewster y la Microscopía de Fuerzas Atómicas. La conclusión general de esta Tesis ha sido: "En solución el calcio induce fases H II en la muestra de POPE: CL (0,8: 0,2, mol:mol). Esta composición es la monocapa más estable de ambos fostolípidos y se corresponde con la fracción molar en la membrana interna de la mitocondria. La extensión de estas micelas inversas formó bicapas planas sobre un soporte sólido, mostrando segregación lateral de dominios enriquecidos en CL en los que el citocromo c se unió específicamente. En este modelo de la membrana interna de la mitocondria el POPC se comportaría como un espaciador en los dominios enriquecidos de POPE formando la matriz lipídica". El proceso inverso sería una explicación de la liberación del citocromo c de la membrana interna de la mitocondria durante la apoptosis.