BIOLOGIA CELULAR

Autor: FRANCISCO MORCILLO JAVIER DE.
Año: 1999.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El análisis con bromodeoxiuridina y anticuerpo anti-PCNA indican que el cese dela proliferación en la retina sigue gradientes centro-periférico y dorso-ventral. En el estadio 22 no se detecta proliferación en la región dorso-central de la retina y en el estadio 24 no se detecta en la periferia. El patrón de expresión de Islet 1, calbindina, calretinina, GABA, vimentina y GFAP indica que la maduración de la retina sigue gradientes vitreo-escleral, centro-periférico y dorso-ventral. En la mayoría de los estadios se observa muerte celular en la retina. Las características estructurales y el marcaje con la técnica de TUNEL indican que las células degeneran por el proceso de apoptosis. En la capa de células ganglionares, la mayor intensidad de muerte tiene lugar entre los estadios 19 y 22, coincidiendo con el periodo de sinaptogénesis. En las capas nuclear interna y nuclear externa, la apoptosis muestra una mayor intensidad en el estadio 20. En las capas nucleares, la muerte comienza en la zona central del cuadrante dorso-temporal de la retina y avanza siguiendo sentidos centro-periférico, dorso-ventral y temporo-nasal. Las células que degeneran en la retina son fagocitadas mayoritariamente por células neuroepiteliales en estadios jóvenes y por células de Müller en etapas más avanzadas del desarrollo. La expresión de vimentina y GFAP se inicia en el nervio óptico en el estadio 17. Posteriormente se extiende al quiasma y finalmente al tracto óptico. Tanto en el nervio como en el quiasma la expresión sigue gradientes periférico-central y dorso-ventral. Fibras ópticas positivas para la proteína proteolipídica son detectas por primera vez en el estadio 24. La expresión aparece de forma simultánea en las diferentes regiones de la vía óptica.

Autor: PADILLA LÓPEZ SEGIO RAMÓN.
Año: 2003.
Universidad: PABLO DE OLAVIDE.
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES, U. PABLO DE OLAVIDE, DE SEVILLA.

Resumen: El comienzo Q (CoQ) es un lípido de tipo benzoquinona que funciona como transportador de electrones en la menbrana interna mitocondrial de las células eucariotas y como molécula antioxidante que protege a las menbranas de las células frente a la peroxidación lipída.Niveles bajos de CoQ producen enfermedades como la ataxia muscular. Por otro lado el CoQ se utiliza como agente terapeutico en ciertas enfermedades neurodegenerativas y en productos cosméticos contra el envejecimiento. En estos casos, el CoQ exógeno se ha detectado en el plasma senguíneo aunque existe una incorporación diferencial por las células de los distintos órganos. Así , es interesante estudiar la distribución de este lípido entre las membranas celulares y los procesos de incorporación en un organismo eucariota simple como Saccharomyces cerevisiae. Los estudios desarrollados en este trabajo han demostrado que elCoQ exógeno por las células es dependiente del proceso endocítico y de su unión a proteínas solubles del medio.Además ,el transporte de CoQ6, demostrándose que este intermediario es incapaz de llevar a cabo dichas funciones.En este trabajo se demuestra que el intermediario DMQ6 puede tener una función en la regulación de la síntesis de CoQ6 , pudiendo servir como reservorio rápido para la síntesis de su producto final en condiciones fisilógicos o de estrés oxidativo.

Autor: ROQUE MORENO MERCEDES.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL CLINICO DE BARCELONA.

Autor: LLUIS DUQUEZ JOSE M..
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MADICINA (U.B.).

Resumen: La hepatopatía alcohólica es un proceso multifactorial y entre los mecanismos implicados en su desarrollo cabe destacar la produción de acetaldehído, la disminución selectiva de los niveles de glutation (GSH)mitocondrial y la hipoxia en la zona centrilobular del hígado consecuencia del metabolismo oxidativo del etanol.Una de las caracteristicas predominantes del daño hepático inducido por el alcohol en el hígado, son las alteraciones morfologícas y funcionales que se observan en las mitocondrias. Por tanto, uno de los objetivos de la presente tesis fue evaluar. 1.El papel del acetaldehído en la regulación y transporte de glutation a la mitocondria, así como en la composición lipídica y las propiedades fisicas de la membrana mitocondrial. El primer trabajo aporta información sobre el mecanismo en la disminución selectiva de glutation mitocondrial, debido al consumo crónico de etanol.El acetaldehído, el primer metabolito del metabolismo oxidativo del etanol,redujo la afinidad (aumento la Km)delos dos componentes implicados en el transportes de GSH a la mitocondria y esto fue acompañado de una disminución de los nieveles de glutación mitocondrial (Mgsh).Esta disfunción en eltrasporte de mGSH se relacionó con un aumento en la viscosidad de la emnbrana mitocondrial consecuencia de un aumento en los niveles de colesterol en la mitocondria.Por otro lado, el acetaldehído indujo la expresión de los factores GADD153, marcador de estrés en el retículo endoplasmático, y SREBP-1, implicado en la activación de enzimas responsables de la síntesis de colesterol.Por último, el descenso en los niveles de mGSH, sensibilizó las células HepG2 a los efectos citotóxico del TNF-a. Hay evidencias que muestran un deposito de colesterol enla membrana mitocondrial, lo que conlleva una disminución de la fluidez de la bicapa lipídaca.Dada la implicación de la apertura del poro mitocondrial a citoquinas(TNF-a Fas) en la hepatopatía alcohólica y con el fin de esclarecer las consecuencias que tiene el aumento en colesterol sobre el proceso de la permeabilidad transitoria mitocondrial (MPT),nos planteamos: 2.Evaluar el efecto de la fluidez de la membrana mitocondrial incluido por el colesterol sobre la apertura del poro mitocondrial. El enriquecimiento de colesterol en mitocondrias de hígado de rata fue acompañado de una resistencia a la apertura del poro mitocondrial inducida por el agente atractilósido.Como consecuencia de ello, se observó una disminución en la liberación de los factores proapoptóticos:citocromo C, Smac/DIABLO y factor inductor de apoptosis (AIF).El aumento en la rigidez de la membrana mitocondrial debido a la acumulación de colesteros se relacionó con esta falta de respuesta al atractilósido, ya que la fluidificación de la menbrana mitocondrial restauró la respuesta a este agente.Por tanto, el proceso de la permeabilidad transitoria mitocondrial muestra un dependencia a las propiedades fisicoquímicas de la membrana mitocondrial. El estado hipermetabólico incluido en los hepatocitos por el metabolismo del etanol, da lugar a un desequilibrio entre la demanda y aporte de oxígeno a lo largo del acino hepático, lo que desencadena una hipoxia relativa en los hepatocitos perivenosos respecto a los periportales.En diversos estudios se involucra a la mitocondria como sensor celular frente a la hipoxia, al generar de radicales libres (ROS) que actuán como segundos mensajeros.Puesto que el mGSH es la única defensa antioxidante frente a los ROS mitocondriales, decidimos estudiar. 3.El papel del glutación mitocondrial en la supervivencia celular durante la hipoxia. La exposición de las células HepG2 a un 5% de oxígeno provocó un aumento de radicales libres procedentes de la mitocondria que actúan cmo segundos mensajeros sobre los factores de transcripción NF-KB y HIF-la.Ambos factores mostraron su actividad transactivadora al incluir la expresión de sus genes diana:TNF-a y Cjap2 y VEGF.Bajo estas circustancias las células no sufrieron cambios en la viabilidad celular, pero la disminución de los niveles de GSH y más en concreto del pool mitocondrial durante la hipoxia , provo 8 có un au 263 mento en la producción de ROS desencadenando la muerte celular.Nuestros resultados muestran que el glutatión mitocondrial es un factor crítico en el control de la viabilidad celular en respuestas a la hipoxia.

Autor: GALLEGO LOPEZ ANTONIO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO PUERTA DE HIERRO - MADRID.

Resumen: La leucemia linfoide crónica de células B es una neoplasia caracterizada por una acumulación de linfocitos B monoclonales en sangre, médula ósea, ganglios linfáticos, además de otros órganos. Se ha sugerido que el acúmulo de la población clonal, es debido a una apoptosis disminuida más que a una elevada proliferación. La progesión de la enfermedad se ha asociado con inmunodeficiencias secundarias y con un elevado riesgo de infecciones, que podrían obedecer a alteraciones en la producción de citocinas, tanto por el clon leucémico como por la población residual de linfocitos T. Las citocinas participarían en circuitos autocrinos o paracrinos en la expansión de los linfocitos B de LLC mediante la inducció o inhibición de la proliferación celular y la apoptosis. En este trabajo se ha estudiado la expresión intracelular de citocinas mediante citometría de flujo en los linfocitos B leucémicos y en los linfocitos T CD4+ y CD8+ ex vivo y tras la activación con ésteres del forbol e ionomicina. De forma simultánea, se ha estudiado la expresión de citocinas en linfocitos B y T de individuos sanos. Los resultados obtenidos muestran que los linfocitos B leucémicos, a diferencia de los individuos sanos, se encuentran preactivados produciendo citocinas tipo 2 (IL-4, IL-10) de forma espontánea que podrían inducir supervivencia. Tras estimulación in vitro, tienen capacidad para producir elevados niveles de citocinas tipo 1 (TNF-alfa) contribuyendo a la expación clonal. Los linfocitos T CD4+ de pacientes de LLC-B, tras activación muestran disminuida respuesta tipo 1 con respecto a los individuos sanos, pudiendo explicar su estado de inmunodeficiencia. Del mismo modo que la población leucémica, los linfocitos T CD8+ se encuentran preactivados produciendo citocinas tipo 2 de forma espontánea. Tras activación in vitro muestran una marcada respuesta tipo 1 (TNF-alfa e IFN-gamma) que podría contribuir en la expansión y supervivencia de los linfocitos B leucémicos. Este estudio aporta datos de interés respecto a la biología de los linfocitos B y T de la LLC-B, que pueden ser de utilidad en la búsqueda de nuevas aproximaciones patogénicas.

Autor: LÓPEZ AGUADO LAURA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD CC BIOLÓGICAS UCM.
Centro de realización: HOSPITAL RAMÓN Y CAJAL DE MADRID.

Resumen: En esta Memoria se recogen una serie de trabajos en los que hemos perseguido una visión integral de la electrogénesis celular de neuronas hipocámpicas, combinando las técnicas de campo , intracelulares (a partir de resultados experimentales in vivo e in vitro)y computacionales, tomando como objeto de estudio ,(aunque no exclusivo)la generación y propagación somatodendrítica de un potencial de acción y su contrapartida en la población, la espiga poblacional.Se han estudiado distintos factores implicados en la generación y modulación de los mismos , desde el nivel macroscópico (como la conducción de corrientes en el medio extracelular y la variación de la resistividad del tejido) hasta el subcelular.Dada la relevancia de las dendritas, en buena parte este estufio se ha centrado en los cambios electrogénicos que se suceden en las mismas y su repercusión tanto en otras regiones de la propia célula como en la población.

Autor: GALLEGO DÍAZ DE LÓPEZ DÍAZ M. VICTORIA.
Año: 2003.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE EXTREMADURA.

Resumen: En la presente Tesis Doctoral se ha realizado un estudio exhaustivo del patrón de expresión de genes neurales y epiteliales en el embrión de pollo durante los procesos de inducción natural, la región del embrión que va a generar el sistema nervioso. Además, se ha analizado los efectos producidos por la aplicación de factores de crecimiento en la formación del sistema nervioso. Concretamente hemos estudiado el efecto de las proteínas morfogenéticas de hueso (BMPs), los antagonistas de los BMPs (BMPs-A) y los factores de crecimiento fibroblástico (FGFs) en los procesos de inducción neural. La Tesis supone un avance en el conocimiento del modo de actuación de estas proteínas, pues pone de manifiesto que los BMPs en el embrión de pollo son capaces de inducir la formación e tejido epitelial, inhibiendo la formación del sistema nervioso. Por su parte, los GFGs y los BMPs-A, moléculas producidas por el organizador primario en aves, son capaces de inducir la formación de tejido nervioso. Estos resultados confirman que en la formación del sistema nervioso en vertebrados tiene lugar una compleja cascada de señalización molecular en la que proteínas como los BMPs y los FGFs intervienen estableciendo el destino neural o epitelial de las células.

Autor: GALLEGO DÍAZ DE LOPE DÍAZ M. VICTORIA.
Año: 2003.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE EXTREMADURA.

Resumen: En la presente Tesis Doctoral se ha realizado un estudio exhaustivo del patrón de expresión de genes neurales y epiteliales en el embrión de pollo durante los procesos de inducción neural, la región del embrión que va a generar el sistema nervioso. Además, se han analizado los efectos producidos por la aplicación de factores de crecimiento en la formación del sistema nervioso. Concretamente hemos estudiado el efecto de las proteínas morfogenéticas de hueso (BMPs), los antagonistas de los BMPs (BMPs-A) y los factores de crecimiento fibroblástico (FGFs) en los procesos de inducción neural. La Tesis supone un avance en el conocimiento del modo de actuación de estas proteínas, pues pone de manifiesto que los BMPs en el embrión de pollo son capaces de inducir la formación de tejido epitelial, inhibiendo la formación del sistema nervioso. Por su parte, los FGFs y los BMPs-A, moléculas producidas por el organizador primario en aves, son capaces de inducir la formación de tejido nervioso. Estos resultados confirman que en la formación del sistema nervioso en vertebrados tiene lugar una compleja cascada de señalización molecular en la que proteínas como los BMPs y los FGFs intervienen estableciendo el destino neural o epitelial de las células.

Autor: SOLÉ PASCUAL MARTA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En primera instancia, esta tesis evaluó los procesos que desencadena una axotomía de la vía perforante en cultivos organotípicos entorrino-hipocámpicos in vitro. Tras analizar la respuesta celular y molecular, podemos concluir que la mayoría de procesos desencadenados son similares tanto en términos absolutos como en el patrón temporal, a los observados in vivo. Esto valida nuestro modelo como modelo para el estudio de lesiones y, como consecuencia, para el estudio de la capacidad regenerativa de la conexión entorrino-hipocámpica. A través del modelo in vitro del cultivo organotípico entorrino-hipocámpico, se analizan los factores responsables del fracaso de regeneración que acontece en el sistema nervioso central adulto. Los resultados nos indican que un doble abordaje capaz por una parte de revertir las propiedades hostiles que genera una cicatriz y por otra parte de atraer los axones seccionados de nuevo sobre la que fue su diana, sería la clave para lograr una regeneración axonal completa. Las células de Cajal-Retzius son una poblaicón neuronal transitoria responsable de la formación de la vía perforante en desarrollo. El transplante de estas células, o su ambiente inmediato, parece ser suficiente para que las neuronas entorrinales axotomizadas inciden un programa de leongación neurítica que no sólo permita que estos axones crucen la cicatriz, sino que los dirige a la que fue su diana original, permitiendo la generación de nuevas sinapsis sobre un hipocampo perinatal trasplantado.

Autor: FERNÁNDEZ-VIZARRA BONET PAULA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La enfermedad de Alzheimer (AD) está caracterizada por la presencia de placas seniles (SPs) y ovillos neurofibrilares (NFTs) en regiones vulnerables del cerebro. La línea principal de pensamiento actual sitúa la causa primaria de la AD en la formación de las SPs y éstq en la secreción del péptido beta-amiloide (Abeta) al medio extracelular. Sin embargo, este punto de vista está siendo puesto en tela de juicio por varios estudios recientes realizados con cultivos celulares y animales transgénicos que han demostrado la existencia de depósitos intracelulares de Abeta en neuronas. Más recientemente, ha sido demostrada la existencia de depósitos intracelulares de Abeta en neuronas en la corteza cerebral humana. Sin embargo, en estos estudios no se ha excluido la posibilidad de que los anticuerpos generados contra el Abeta reconozcan también la proteína precursora del péptido beta-amiloide (APP) o no se ha descrito cómo ha sido descartada esta posibilidad. Nosotros hemos realizado un estudio inmunohistoquímico de la formación del péptido Abeta y de los filamentos helicoidales apareados (PHF) en la corteza temporal, como área selectivamente vulnerable en la AD, en individuos no dementes jóvenes y envejecidos y en pacientes afectados por la AD esporádica clínicamente evaluados y clasificados de acuerdo a la escala clínica de demencia (CDR) en el Proyecto Envejecimiento y Memoria del Centro de Investigación de la Enfermedad de Alzheimer de la Universidad de Washington, EE.UU. Esta escala ha sido previamente estandarizada neuropatológicamente. Por otra parte, se ha demostrado que el CDR es un método sensible y fiable para distinguir el evnejecimiento sin demencia de la demencia temprana de tipo AD, así como determinar el grado de afectación por la AD. Asimismo, el protocolo de evaluación utilizado aseguró que ningún individuo inlcuido en este estudio sufría ninguna enfermedad causante de demencia distinta de la AD. Hemos demostrado mediante el uso de un anticuerpo que reconoce específicamente Abeta y que no tiene reacción cruzada con la APP que en la AD se produce una acumulación intracelular de Abeta en subpobalciones de neuronas piramidales que presentan la misma distribución cortical y las mismas características morfológicas que las subpoblaciones de neuronas pirmidales selectivamente vulnerables a la muerte neuronal y a la formación de NFTs en la AD. Estas subpoblaciones neuronales se sitúan en las capas corticales donde se produce la formación de SPs en dicha enfermedad. La acumulación intracelular de Abeta en neuronas piramidales es un cambio temprano en la AD y precede a la más incipiente alteración de la proteína tau y a la formación de placas. Nuestros resultados muestran que las neuronas piramidales que acumulan Abeta intracelular presentan signos morfológicos de degeneración. Hemos descrito por primera vez la existencia de estructuras con morfologías de transición entre neuronas piramidales y SPs. En estas estructuras del producto de reacción del péptido Abeta presena elm ismo aspecto que el observado en las SPs típicas. Sin embargo, la morfología de la placa es claramente piramidal y en ella se pueden observar estructuras con morfología de porciones proximales de dendritas apicales y baales. Nuestros resultados sugieren que, al menos en parte, la formación de placas amiloides se produce por lisis celular de las neuronas afectadas por la acumulación intracelular de Abeta, y probablemente, como consecuencia de ésta. Por otra parte, la morfología del producto de reacción de algunas de las neuronas piramidales inmunorreactivas para Abeta sugiere que la formación de fibrillas de péptido Abeta en lámina beta característica de las SPs tiene lugar intracelularmente. Por último, la acumulación intracelular de Abeta es un fenómeno patológico asociado al envjecimiento que afecta selectivamente a las subpoblaciones neuronales selectivamente más vulnerable en la AD. Esta formación de acúmulos itnracelulares de Abeta es cuantitativamente menor en el envejecimiento que en la AD. Es probable que la acumulación intraneuronal de Abeta asocaida a la edad en las subpoblaciones piramidales implicadas en las proyecciones largas de as 8 ociación 957 corticortical esté implicada en los déficits cognitivos que se producen con el envejecimiento. Basándose en las observaciones de las alteraciones en las distintas isoformas de la óxido nítrico sintasa (NOS) en el cerebro de pacientes con la AD se sugirió la implicación del NO en la AD. Sin embargo, hasta el momento la implicación del NO/NOS en lapatogenia de la AD todavía no se comprende bien. Numerosas evidencias, y en constante aumento, sugieren la implicación del estrés oxidativo en la AD y, concretamente, en la muerte neuronal inducida por Abeta. Se ha encontrado gran cantidad de daño oxidativo en la AD, incluyendo glicación, nitración, peroxidación lipídica y formación de carbonilos. Por tanto, el establecimiento de la/s fuente/s de oxidación es clave en el entendimiento de la patogénesis de la AD. Mediante técnicas inmunohistoquímicas hemos demostrado, en la corteza temporal de pacientes con la AD clasificados de acuerdo a la CDR, que se produce una expresión aberrante de NOS neuronal (nNOS) e inducible (iNOS) y formación de nitrotirosina (3-NT) en subpoblaciones de neuronas piramidales que presentan las mismas características morfológicas y de distribución cortical que aquellas selectivamente vulnerables en la AD y que las subpoblaciones neuronales afectadas por la acumulación intracelular de Abeta. Nuestros resultados demuestran que la expresión aberrante de nNOS e iNOS y la formación de 3-NT precede a la formación de SPs. La producción sostenida de NO podría estar implicada en la muerte neuronal que tiene lugar en la AD y, de esta manera, podría estar implicada en la formación de las SPs. La expresión de nNOS e iNOS y la formación de 3-NT en neuronas piramidales es también un fenómeno patológico asociado al envejecimiento. Mediante técnicas de Western Blot y estereología hemos observado que tanto la expresión de estas isoformas, como la formación de 3-NT es significativamente menor en el envejecimiento que en la AD, según nuestros resultados.

Autor: DALFO CAPELLA ESTHER.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA , CAMPUS BELLITEE , UB.

Autor: ESPINOSA PARRILLA JUAN FRANCISCO.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: La actividad espontánea neuronal, caracterizada como oscilaciones espontáneas de calcio intracelular es un fenomeno necesario para el conrrecto desarrollo de las conexiones neuronales. Aunque se estipula que ésta actividad es un fenomeno general del Sistema Nervioso Central, tan solo ha sido caracterizada en determinadas áreas.Nuestra intención ha sido estudiar esta actividad espontánea en el córtex cerebeloso así como en las células astrogliales , un intentando analizar aquellos mecanismos que generan y regulan esta actividad espontánea oscitatoria coordinada.

Autor: ROMERO MUÑOZ EVA M..
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Con el fin de estudiar las posibles implicaciones del sistema inmune en la etiopatogenia de la esquizofrenia, el grupo dirigido por el Dr.Borrel ha desarrollado un nuevo diseño experimental basado en el efecto de la activación inmunológica prenatal sobre el procesamiento de la información sensoriomotora y la función inmunológica en la edad adulta(Borrell y col., 2002).Este modelo consiste en la administración de lipolisacárido bacteriano (LPS) a ratas preñadas y la evaluación de las alteraciones que se producen en el procesamiento de la información , el sistema inmune y la histología de algunas estructuras relacionadas con el procesamiento de la información sensoriomotora, en la descendencia adulta.El propósito de la presente Tesis , ha sido continuar y profundizar la caracterización de este modelo.

Autor: BARTOLOMÉ CONDE RUBÉN ÁLVARO.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIÓNES DE BIOLOGÍA (C.S.I.C.).

Resumen: RESUMEN: La invasión de tejidos por células tumorales implica su migración a través de membranas basales mediante una activación coordinada de la degradación de la matriz y de mecanismos de locomoción celular. Las quimioquinas proporcionan guíasquimotácticas hacia distintos órganos y, por tanto, podrían participar potencialmente en la diseminación de células tumorales. Aquí mostramos que varias líneas de melanoma y células de melanoma de gánglios linfáticos expresan los receptores de quimioquinas CXCR4 y CXCR3, y que sus ligandos, CXCL12 (SDF-1) y CXCL9 (Mig), promueven la invasión de células de melanoma a trvés de membranas basales. La actividad proteolítica de MT1-MMPera necesaria para estas invasiones, y CXCL12inducía un incremento en la expresión de MT1-MMP.Además CXCL12 y CXCL9 promueven la activación de las GTPasas RhoA y Rac, y la expresión de formas dominantes negativas de estas GTPasas inhibían la invasión de los transfectantes en respuesta a ambas quimioquinas. Encontramos además que las células de melanomaexpresan Vav1yVav2,que son proteínas GEFque catalizan la activaciónde GTPasas Rho.CXCL12 induce la activación de Vav1 y Vav2, y la interferencia de la expresión de estas GEF se tradujo en una inhibición de la activación de RhoA y Rac, el aumento de expresión de MT1-MMP,y la invasión de células de melanoma en respuesta a CXCL12. Adicionalmente, la expresión de CXCR4 en las células de melanoma fue notablemente aumentada por TGF.~1, un componente de las membranas basales, y anticuerpos anti-TGF-B inhibieron este aumento de expresión de CXCR4, así como la invasión de células de melanoma hacia CXCL12. La estimulación por CXCL12 de la ruta Vav/GTPasas Rho/MT1-MMPen las células de melanoma, así como la regulación de la expresión de CXCR4, constituyen mecanismos que contribuyen a la invasión de células de melanoma hacia CXCL12. Nuestros resultados proporcionan la base para futuras investigaciones o terapias conducentes a la inhibición de la diseminación de las células de melanoma. Las integrinas a,4 son receptores de membrana expresadas principalmente en leucocitos, mediando la adhesión célula-matriz y célula-célula. La actividad adhesiva de las integrinas a,4 puede ser rápidamente modulada durante la migración. Mostramos que TGF.B1 aumenta rápida y transitoriamente la adhesión mediada por integrinas a.4 a sus ligandos VCAM-1y CS-1/fibronectina. Aquí demostramos que TGF-B1 activa rápidamente las GTPasa RhoA y la p38 MAPquinasa, pero el aumento de adhesión no requiere la actividad de estas moléculas. En cambio, la polimerización de actina desencadenada por TGF-B1es necesario para el aumento de adhesión mediado por las integrinas a,4, y que una elevación de los niveles de cAMP se opone tanto a la polimerización como al aumento de invasión. Adicionalmente, TGF.B1 aumenta aún más el aumento de adhesión vía integrina a,4 inducido por CXCL12. Estos datos sugieren que TGF-B1 puede potencialmente contribuir a la migración celular mediante la regulación dinámica de la adhesión celular por integrinas a4.

Autor: ALONSO ARANA EDURNE.
Año: 2004.
Universidad: PAÍS VASCO.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.

Resumen: Las Células Germinales Primordiales (PGCs) aparecen muy temprano en el desarrollo embrionario y en una región bastante alejada de las células somáticas que formarán el tejido accesorio en las futuras gónadas. Mediante movimientos de migración activa, estas células alcanzan y colonizan las crestas genitales que darán origen a las gónadas en el adulto. Hay varios factores implicados en estos movimientos de migración. Las matriz extracelular adyacente es la base por la que van a dirigirse hacia su destino y además de estar compuesta de moléculas que permitan esos movimientos, es el medio en el que diferentes moléculas señalizadoras difunden. También los azúcares de los glicoconjugados de la superficie de estas células, parecen implicados en el reconocimiento de estas moléculas. Según estas premisas y con el embrión de Xenopus laevis como modelo experimental, en este trabajo se ha tratado de identificar la presencia de ciertas moléculas que pueden estar implicadas en dichos mecanismos migratorios. Por un lado, se han identificado secuencias oligosacarídicas de los glicoconjugados de la superficie de las PGCs mientras migran activamente a través del mesenterio y su posible implicación en el proceso. Por otro lado, seha clonado y analizado la expresión del gen x-cxcr4b, puesto que genes homólogos en ratón y pez cebra están implicados en los movimientos migratorios de las PGCs y en la señalización hacia las crestas genitales. Los resultados obtenidos tras el análisis histoquímico con lectinas y pretratamientos químicos y enzimáticos desglicosilativos indican que la composición oligosacarídica de la superficie de las PGCs mientras migran activamente y una vez colonizan las crestas genitales no muestra un cambio aparente de patrón. Las secuencias identificadas corresponden fundamentalmente a O-oligosacáridos: {Neu5Acalfa(2, 3)}Galbeta(1,4)GlcNAc, {Neu5Ac}GalNAcalfa(1,3)GalNAc, GlcNAc, Fucalfa(1,3) o alfa(1,4) y algo de Man. Mientras que los N-glicoconjugados son más escasos y se relacionan con las secuencias: Manalfa(1,6)[Manalfa(1,3)]Manbeta(1,4)GlcNacbeta(1,4)GlcNAc-Asn, Fucalfa(1,6)GlcNAc-Asn y GlcNAc. El gen cxcr4, aparece implicado en varios procesos migratorios fundamentalmente relacinados con el Sistema Nervioso y las células hematopoyéticas. Recientemente s eha descrito implicado en los movimientos migratorios de las PGCs en ratón y en pez cebra. La expresión del gen x-cxcr4b, analizada mediante las técnicas de RT-PCR, northern blot e hibridación in situ, aparece ligada desde muy temprano a importantes funciones en el desarrollo embrionario. Se ha observado cómo tiene una baja expresión de origen materno, que pudiera estar almacenada en el plasma germinal. Su expresión zigótica comienza a partir del estadio gástrula temparan y disminye a partir del estadio 45. Los resultados derivados delas hibridaciones in situ,sugieren que dicho gen parece implicado en diversos procesos durante el desarrollo embrionario, tales como el desarrollo del sistema nervioso central y periférico, y del sistema hematopoyético embrionario y definitivo. Sin embargo, no es evidente su implicación durante el proceso migratorio activo de las PGCs del embrión de Xenopus.

Autor: URIGÒEN ECHEVERRÍA LEYRE.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: RESUMEN: El desarrollo, en la última década, de numerosos estudios empleando A9-tetrahidrocannabinol(THC), el principio activo del cannabis, o diferentes agonistas sintéticos del reqeptor cannabinoide, ha contribuido de manera muy significativa al avance en el conocimiento de las acciones farmacológicas y los procesos neurobiológicos implicados en la activación de receptores cannabinoides. Este espectacular avance ha permitido identificar 1m nuevo sistema de neurotransmisión compuesto por dos tipos de receptores cannabinoides: el receptor CB1, localizado fundamentalmenteen sistema nervioso central y el receptor CB2, con funciones relacionadas.con la regulación del sistema inmunitario. Además, se . han identificado varios ligandos endógen()s (la anandamida y el 2-araquidonil-glicerol)y un sistema enzimático (amidohidrolasa de ácidos grasos) que permitela finalizaciónde las accionesde estos ligandosen las sinapsis. Los estudios preclínicos y clínicos relacionados con el consumo de THC o de agonistas del receptor cannabinoide sugieren que el sistema cannabinoide endógeno desempeña un papel relevante en la reguláción del estado de ansiedad. Esta idea se fundamenta en las alteraciones neuroquímicas y comportamentales que se producen en los animales de experimentación y en el hombre tras el consumo agudo o crónico de derivados de cannabis, tales como alteraciones en la regulación neuroendocrina del eje hipotálamo hipófisis adrenal (HHA), modificaciones en la expresiónde genes asociadosal control de la respuesta al estrés y aumentode la reactividadconductual y neuroquímicaante estímulosansiogénicos. La colocalización de receptores cannabinoides CB1 con receptores GABAérgicos y serotoninérgicos en neuronas de áreas cerebrales íntimamente ligadas a la regulación de la ansiedad, como el hipocampo y la amígdala, sugiere que las alteraciones en la funcionalidad de receptores cannabinoides puede, del mismo modo, afectar a la eficacia terapéutica de agentes ansiolíticos como las benzodiacepinasy los agonistas del receptor serotoninérgico5-HT1A. La eliminación del receptor cannabinoide CB1, por tanto, podría generar en los ratones algunos de los síntomas de los trastornos de ansiedad. Del mislÍ1o modo que la administración de derivados de cannabinoides produce alteraciones en el funcionamiento del sistema neuroendocrino,cabría esperar algún tipo de alteración constitutiva en el funcionamiento del eje hipotálamo hipófisis adrenal en estos animales a los que se ha eliminado el receptor cannabinoide CB1. Si se pueden comprobar dichas alteraciones en el comportamientoy en el eje hipotálamo hipófisis adrenal, es muy probable que estas alteraciones estén producidas por disfunciones a nivel neuroquímico y que estas disfunciones estén relacionadas con los sistemas sobre los que actúan los fármacos ansioliticos. Los resultados de este trabajo demuestran que el receptor cannabinoide CB1 desempeña un papel importante en 1$ regulación de la respuesta emocional en diversas situaciones experimentales y que la presencia del gen del receptor cannabinoide CB1 es necesaria para mantener una adecuada actividad basal (homeostática) en varios elementos del eje hi Jotalamohipófisis adrenal y una respuesta proporcionada al estrés. Ademásla ausenciadel receptorcannabinoideCB1modifICala funcionalidadde los receptores K y s-opioidesy la expresiónde genes precursoresde péptidos opioicleslo queconfirma la estrecha interacciónentre los sistemas receptorialesopioidey cannabinoide. Por otro lado las hormonas gonadales en los machos interaccionan con el sistema cannabinoide en el control de la ansiedad y la eliminación de las hormonas gonadales circulantes modifica la respuesta farmacológica de las benZodiacepinasen función de la ausencia o presencia del receptor cannabinoide CB1. La reducida respuesta ansiolítica de la buspirona y la alteración de la funcionalidad de los receptores 5-HT1Aen el hipocampo de los animales desprovistos del receptor ca 8 nnabinoi 4bc de sugiere la necesidad de un correcto funcionamiento del receptor cannabinoide para que este fármaco pueda producir una adecuada respuesta ansiolitica. De igual modo, la falta de respuesta ansiolítica del bromazepam en ratones desprovistos del receptor cannabinoide CB1 y las modificaciones funcionales en el receptor GABAAy GABABY él hecho de que la administración de bromazepam en ratones naturales reduzca la función del receptor cannabinoide CB1 sugiere la participación de este receptor en las acciones ansiolíticas de las benzodiacepinas. Los resultados anteriores sugieren la posibitidad de que alteraciones funcionales en diferente grado en los receptores cannabinoides CB1 puedan relacionarsecon la aparición y respuestafarmacológica modificada en patologías psiquiátricasque cursan con ansiedad.

Autor: NONTOLIO DEL OLMO MARISOL.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA.

Resumen: Nuestros datos demuestran que un peptoide, sichi, es capaz de inhibir específicamente la quimorepulsión producida por semaforina 3A, exogena yendogenamente, en el crecimiento de axoles hipocampicos en distintos modelos. Este bloqueo de la quimiorepulsión se debe principalmente a una prevención del colapso del cono axonal, y es dasis-dependiente. Actúa a nivel da ligando-receptor y es capaz de producir regeneración axonal de la vía perforante tras una lesión, además de aumentar la supervivencia neuronal de células de hipocampo, cerebelo y ganglio nodoso. Por otro lado, nuestros resultados indican la implicación del calcio intracelular en la señalización mediada por semafarina 3A. Mediante explantes de hipocampo confrontados a semafarina 3A tratados con quelantes de calcio, o inhibidores de calcineurina y calmoducinkinasa II se observó una implicación de calcineurina en -- de señalización de semaforina 3A. También observamos como semaforfina 3A y calcineurina pero no calmodulinkinasa II controlan la translocación nuclear del factor de transcripción NFATc4.

Autor: RODRÍGUEZ VILARIÑO VICTORIA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En células politenizadas, como las de las glándulas salivales de larvas de Chorinomus, el DNA está amplificado formando los cromosomas politécnicos, como resultado de la amplificación lateral de las cromátidas hermanas que se mantienen unidas a lo largo de sucesivas rondas de replicación. Los genes ribosómicos resultan también amplificados y su actividad da lugar al a formación de un nucleolo gigante, el llamado "Nucleolo de Células Politécnicas". (NCP), que llega a alcanzar un diámetro de 10-15 um. Hemos utilizado las ventajas que ofrece este modelo biológico para estudiar algunos aspectos básicos de la organización del NCP, contribuyendo a esclarecer problemas pendientes sobre la organización funcional del nucleolo. A nivel ultraestructural, el NCP apareció compuesto únicamente por componentes fibrilar denso (CDF) y componentes granular (CG). No han sido identificados en estos nucleolos los centros fibrilares (CFs). Sin embargo, los CFs sí están presentes en los nucleolos de células nerviosas no politéncias del mismo individual. La inexistencia de CFs en el NCP podría estar relacionada con los niveles y distribución de las proteínas estructurales del nucleolo, que podría ser una característica específica de tipo celular. Alternativamente, podría ser consecuencia de la elevada actividad del NCP. Sin embargo, los CFs tampoco aparecieron en el NCP tras el tratamiento con cicloheximida (CHM), que inhibe la transcripción nucleolar. El tratamiento con esta drogar produjo una reorganización o segregación en los componentes estructurales del NCP, de modo que el CFD se sitúa en las zonas cercanas al cromosoma y el CG en la periferia. Mediante el microscopio confocal y al microscopio electrónico hemos estudiado la distribución del DNA en el NCP. El DNA intranucleolar se observó extendido en el CFD, en forma de cromatina descondensada. La organización se observó extendido en el CFD, en forma de cromatina descondensada. La organización del DNA es muy dinámica, ya que, tras el tratamiento con CHM, se produce una fuerte condensación y retracción de la cromatina nucleolar. El uso de la hibridación in situ con marcadores fluorescentes (FISH), ha hecho posible la localización específica del rDNA, cuya distribución se observó focalizada, es decir, concentrada en pequeños acúmulos distribuidos irregularmente, de los que emergen fibras dispersas. Además, mediante un experimento de transcripción in vitro hemos localizado los sitios del CFD donde tiene lugar la transcripción. El patrón in situ de la transcripción nucleolar apareció también focalizado de la misma forma. Estos focos tienen el mismo significado funcional que los CFs en las células que los poseen, de modo que la no existencia de CFs no lleva consigo un cambio en el modelo de organización estructural del rDNa y de la transcripción en el nucleolo. Por otro lado, se ha llevado a cabo la inmunodetección de fibrilarina y nucleolina, dos proteínas implicadas en el procesamiento del pre-rNA. Ambas proteínas se localizaron en el CFD, pero en la colocalización de ambas, observamos que hay zonas donde solamente se localizó la fibrilarina, zonas donde sólo se localizó la nucleolina y zonas donde se localizaron las dos proteínas simultáneamente. Aunque ultraestructuralmente el CFD aparece como un componente homogéneo, su composición molecular y su organización funcional demuestran que es heterogéneo. El tratamiento con CHM, inhibidor de la transcripción, provocó la aparición en zonas de transcripción activas, tanto en el cromosoma como libres en el nucleoplasma, de unas estructuras de naturaleza fibrilar, denominadas droplets. Los experimentos inmunocitoquímicos permitieron localizar en ellos proteínas nucleolares como la fibrilarina y la nucleolina, pero no apareció señal del DNA. El origen de estas estructuras podría ser una segregación y microfragmentación del CFD, formándose agregaciones nucleoplásmicas de las proteínas nucleolares, las cuales no pueden ser transportadas al nucleolo cuando la transcripción de los genes del rRNA está alterada. Finalmente, se ha abordado el problema de la implicación del nucleolo en otras funciones celulares distintas de la síntesis de ribosomas. En concreto, hemos estudiado la localiza 8 ción nuc 4d0 leolar de una proteína no relacionada con la biogénesis de ribosomas, la transcriptasa reversa (rt), mediante un anticuerpo obtenido contra una proteína recombinate que contiene motivos de esta enzima filogenéticamente conservados. La presencia de esta enzima está relacionada con la estrategia del mantenimiento de los telómeros en Dípteros. Sorprendente, la transcriptasa reversa apareció localizada en el NCP, posiblemente en relación con los mecanismos reguladores de la actividad de la enzima. A partir de todos nuestros resultados podemos concluir que, a pesar de que el organizador nucleolar (NOR) se origina en el NCP como la adición lateral de múltiples copias del NOR original, el nucleolo se organiza funcionalmente como una entidad única e integrada, y no como la mera yuxtaposición de la actividad de múltiples NORs.

Autor: TONY VALENTE.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGÍA, UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: La tasa de proliferación celular resulta de un balance entre varios procesos celulares: mitosis, diferenciación celular y la muerte celular apoptótica. La regulación de este balance es fundamental durante el desarrollo embrionario, la regeneración celular y el envejecimiento, así como en distintos procesos degenerativos y patológicos. Recientemente, se ha clonado un gen, designado Zac1, el cuál codifica un actor de transcripción que regula la apoptosis y el paro del ciclo celular, mediante vías independientes. Se ha determinado que en ratones adultos Zac1 se expresa en la glándula pituitaria, en el cerebro, y en distintos tejidos periféricos, así como en el tubo neural de embriones de ratón con 9 días. Distintos estudios han demostrado que Zac1 está implicado en el desarrollo tumoral, en la diabetes mellitus neonatal transitoria, en la activación y/o represión de receptores nucleares, en la coactivación de la vía apoptótica p53/Apaf-1,etc. Sin embrago, su función en el sistema nervioso central es aún desconocida. La presente tesis tiene como objetivo general, determinar el papel de Zac1 en el sistema nerviosos central del ratón. En este sentido, se determinó el patrón de expresión e Zac1 durante el desarrollo embrionario del neuroectodermo y mesodermo, así como, durante la maduración del sistema nervioso central (mediante técnicas de hibridación in situ e inmunohistoquímicas). Además, se caracterizó el fenotipo de la poblaciones celulares que expresan Zac1 durante el desarrollo. En el desarrollo del neuroectodermo, los resultados obtenidos muestran que Zac1 se expresa en las células madre/progenitorias del sistema nervioso central, tanto en desarrollo cm en el animal adulto (Zonas germinativas). Su expresión en células diferenciadas se restringe a subpoblaciones neuronales de naturaleza GABAérgica y catecolinérgica. En el desarrollo del mesodermo, los resultados revelaron que Zac1 se expresa durante todas las fases del ciclo de vida de los condrocitos (condrogénesis) y del desarrollo de las células musculares (miogénesis), sugiriendo que Zac1 puede jugar un papel importante en el desarrollo del esqueleto y del músculo esquelético. Por otra parte, se estudió el papel de Zac1 en el sistema central, analizando el fenotipo neural de los ratone mutantes para Zac1, y estudiando el papel de Zac1 en los procesos neurodegenerativos asociados con la muerte celular apoptótica. Los animales mutantes para Zac1 presentan tasas de proliferación neural superiores a la de los animales salvajes, reforzando el papel de Zac1 en el control de la tasa de proliferación celular (ciclo celular y apoptosis). Además, los resultados obtenidos muertas que la expresión regional de Zax1 es imprescindible para la selección y/o diferenciación de distintos progenitorios neurales (tales como en los oligodendrocitos, las neuronas, los astrocitos, etc.). En los modelos neurodegenerativos, los resultados obtenidos muestran que Zac1 es imprescindible para activar los procesos apoptóticos que conducen a la fragmentación del DAN, apuntando a su implicación en las fases tempranas de la activación de las cascadas apoptóticas. Por tanto, los novedosos resultados obtenidos en este trabajo de tesis abren distintas líneas de enfoque sobre el papel de Zac1 en el sistema nervioso central, concretamente en los procesos de proliferación y diferenciación celular, en los proceso apoptóticos y en los mecanismos de plasticidad neural que ocurren durante el desarrollo temprano del organismo, así como, tras la activación neural que se desarrolla en los procesos de neurodegeneración.

Autor: GARCÍA GONZALO FRANCESC.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La familia HERC de proteínas está formada en humanos por seis miembros, cuyas secuencias se caracterizan por poseer dominios de tipo HECT y dominios homólogos a RCC1. La presencia de dichos dominios hace suponer que las proteínas HERC actúan como E3 ubiquitina ligasas y quizá también como factores intercambiadores de nucleótidos sobre GTPasas monoméricas. HERC1 es una proteína gigante de 532 kDa capaz de interaccionar con la cadena pesada de la clatrina y con GTPasas de las familias ARF y Rab. Mediante el uso de técnicas bioquímicas de detección de interacciones, hemos identificado a la piruvato quinasa M2, la cadena ligera de la clatrina, ARF6 y varios fosfoinosítidos como nuevas moléculas capaces de asociarse a HERC1. Asimismo, el uso de técnicas microscópicas nos ha permitido establecer que HERC1 se halla en vesículas del aparato de Golgi y su distribución en la célula es regulada por la activación de ARF6. Por otra parte, hemos visto que la reducción de los niveles de HERC1 mediante técnicas de interferencia por RNA no afecta el funcionamiento de las vías endocíticas y secretoras de las células, aunque la expresión de ciertas formas truncadas de HERC1 sí da lugar a una inhibición de la endocitosis.