BIOLOGIA MOLECULAR, 3

Autor: HERNÁNDEZ LÓPEZ MARÍA JOSÉ.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE AGROQUÍMICA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS.
Centro de realización: INSTITUTO DE AGROQUÍMICA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS.

Resumen: En los últimos años la utilización de masas congeladas para panadería y bollería ha experimentado un notable incremento. La callidad de estos productos está lejos de la que se obtiene con masas frescas, debido a la sensibilidad de las cepas comerciales de S. ceremisiae al proceso de congelación así como a las altas presiones osmóticas. En el primer capítulo de esta tesis se estudia la posible utilización de cepas de Torulaspora delbrueckii capaces de fermentar una masa panaria y que presentan características intrínsecas de criorresistencia y osmotolerancia. Los resultados obtenidos en este capítulo muestran que una cepa de esta especie, la cepa Pycc5321 muestra una elevada tolerancia a estrés osmótico e iónico por lo que proponemos a esta cepa como modelo de estudio de tolerancia a estrés en levadura de panadería. En el capítulo II se describe la obtención de las herramientas moleculares necesarias para poder trabajar con esta cepa en el laboratorio. En el capítulo III de este trabajo se describe el aislamiento de la proteína Tdhog1 de esta cepa, así como la caracterización de la ruta H0g, principal ruta implicada en resistencia a estrés osmótico EUS. cerevisiae en esta especie. En este capítulo se muestra también el aislamiento de los genes de T. delbrueckii TdENA1 y Tdcrz1, homólogos, respectivamente, a un gen que codifica para la Atp-0sa Ena1 de S. cerevisiae y otro que codifica para un factor transcripcional, CRZI, implicado en la regulación de ENA1, así como la caracterización de la ruta de la Calcineurina-CRZ1p en T. delbrueckii.

Autor: MARTÍNEZ BONO BÁRBARA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: La ruta de la Proteina quinasa C en Saccharomyces cerevisiae desemperia funciones esenciales en el control de la integridad celular y además se ha sugerido que participa en la coordinación entre el crecimiento y la división celular. En este trabajo se ha estudiado el mecanismo molecular de regulación de la expresión génica mediada por la ruta PKC, tomando como modelo en gen FKS1 que codifica para la subunidad catalítica de la glucano sintasa. Se ha caracterizado que la secuencia mínima responsable de la regulación mediada por la ruta PKC en el gen FKS1 corresponde con una secuencia de unión del factor Rlm1. Además se ha detectado unión in vivo de Rlm1 al promotor del gen FKS1 y que dicha capacidad de unión no está regulada por la ruta PKC. Por otro lado, se ha detectado que la MAP quinasa SIt2 de la ruta PKC se une al DNA en la zona cercana al ATG del gen FKS1. Se detecto que la RNA polimerasa II se une tanto a la zona del ATG como al final del gen FKS1 con independencia de la función de la ruta PKC. Por otro lado, se ha observado una modificación post-traduccional de la proteina Paf1 (miembro del complejo Paf1 C) dependiente de SIt2, consistente con una posible fosforilacion de Paf1 por SIt2. Se observo que aunque la ruta no regula la capacidad de union in viva al gen FKS1 de Paf1 en la zona del ATG si parece controlar el desplazamiento de Paf1 a 10 largo del gen FKS1. En esta tesis se ha realizado un estudio de expresión global de un mutante pkc1-8 termosensible, dicho estudio ha permitido identificar 65 genes cuya expresión se modifica significativamente al inactivar la funcion Pkc1. En este mismo sentido se han identificado proteínas asociadas a Pkc1 y Sit2 mediante la utilización del método TAP de purificación de proteínas. A destacar las proteínas Rpc34, Ssk22 y Apd 1 que se detectaron asociadas a Pkc1. y las proteínas Mot1, Sec31 y Kap123 asociadas a SIt2. Los estudios realizados han descubierto una relación de la carioferina Kap123 con la ruta PKC. Kap123 podria participar en la ruta PKC importando al núcleo a alguna de las proteínas downstream de la ruta PKC. Se ha detectado también una relación génica entre la ruta PKC y la cíclina Cln2, en la que la deleción del gen CLN2 suprime los defectos de crecimiento de los mutantes de la ruta PKC, posiblemente debido al retraso en el proceso de gemación que supane la inactivación de la cíclina Cln2.

Autor: RODRÍGUEZ PIÑEIRO ANA M..
Año: 2005.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: El cáncer colorrectal (CCR) constituye una de las neoplasias más frecuentes. Sin embargo, en la actualidad no existen buenos marcadores tumorales para su diagnóstico y pronóstico. Por ello, en este trabajo se han empleado metodologías proteómicas y bioquímicas, con el fin de detectar marcadores tumorales séricos de utilidad. En primer lugar, se empleó un método de prefraccinamiento mediante cromatografía de afinidad a través de Concanavalina A, analizando la fracción de N-glicoproteínas, ya que éstas presentan numerosas alteraciones en la carcinogénesis. Mediante electroforesis bidimensional, se estudiaron los patrones proteicos a través de tres aproximaciones distintas. La primera permitió detectar 72 proteínas con niveles alterados en CCR, 37 incrementadas. Entre ellas, se incluyeron proteínas relacionadas con la apoptosis (clusterina), y la transducción de señales (LRG), de gran interés como potenciales marcadores para el CCR. La segunda aproximación consiste en utilizar los patrones proteicos bidimensionales como herramienta diagnóstica. Empleando el análisis de componentes principales y el análisis discrimianate, se pudo establecer un patrón de expresión diferencial, que permite el diagnóstico de un individuo. La tercera aproximación es la detección de cambios en la posición relativa de proteínas en mapas bidimensionales, que reflejan variaciones en el punto isoeléctrico y la masa molecular. Mediante el análisis de deformaciones relativas, se detectaron variaciones significativas en la posición de N-glicoproteínas séricas de pacientes con CCR, permmitiendo además la discriminación entre individuos sanos y enfermos, y la detección de la contribución de cada proteína. A partir de las proteínas con niveles alterados se seleccionó la clusterina, con el fin de estudiar sus diversas formas séricas, y comparar su distribución y niveles en el suero de individuos sanos y de pacientes con CCR. El hallazgo más destacable fue la detección, exclusivamente en pacientes, de una forma de clusterina eluida en la primera fracción cromatográfica (FI CLU), constituida por al menos 5 isoformas, con una masa nativa de 85 kDa y subunidades de 40 kDa. Su desglicosilación permitió comprobar que era una N-glicoforma, probablemente con una glicosilación aberrante. En relación a su utilidad clínica, se determinó que la clusterina total de suero posee una eficiencia diagnóstica superior a la del marcador de uso clínico. CEA. El hallazgo clínico más importante fue la correlación significativa de la forma FI CLU con la metástasis. Esta fracción de clusterina se comporta como marcador pronóstico para el CCR.

Autor: ACOSTA COBACHO JUAN CARLOS.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Durante el transcurso de la tesis doctoral, se establecieron líneas transfectantes estables derivadas de K562 con expresión inducible de p27. De la inducción ectópica de p27 se concluyó que dicha proteína inducía un proceso de parada proliferativa en fase G1 del ciclo celular, acompañada de inhibición de la actividad de los reguladores de fase G1. También, se observó que p27 inducía un proceso de diferenciación específico hacia linaje eritroide. Para investigar la interacción funcional de dicha proteína p27 y MYC, se establecieron líneas transfectantes estables derivadas de K562 con expresión condicional tanto de p27 como de MYC. Del análisis de dichas líneas celulares, se concluyó que MYC es capaz de bloquear la diferenciación eritroide inducida por p27, en un proceso independiente de su acción sobre el ciclo celular. Además, se comprobó que este bloqueo de la diferenciación mediado por MYC se realiza a través fundamentalmente de la represión de genes clave en el control de dicha diferenciación eritroide. Por otro lado, se constató que MYC tenía un efecto sobre el ciclo celular dependiente de la cantidad de p27 en dicho sistema. Finalmente, se comprobó que existía una relación inversa en la expresión alta de MYC y baja de p27 en linfocitos B de pacientes con leucemia linfocítica crónica.

Autor: DANEL KORTAZAR ZABALA.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Tras el desciframiento del genoma humano, y dado que cada día existen más enfermedades que resultan de un plegamiento anormal de proteinas (aproximadamente un 50% de las patologías), se plantea ahora la necesidad de conocer cómo se pliegan los polipéptidos para poder desarrollar su función. Uno de los modelos más complejos -y completos- de plegamiento es el proceso que conlleva a la formación del heterodímero de tubulina, la subunidad de los microtúbulos. Los microtúbulos son polímeros de tubulina, ubicuos, involucrados en funciones variadas todas ellas fundamentales en la célula, desde la mitosis (y meiosis), al transporte citoplásmico y mantenimiento de la arquitectura celular. La subunidad funcional y estructural de los microtúbulos es el heterodímero de alfa-beta-tubulina que, unidos entre si de forma linear constituyen los protofilamentos, trece de los cuales asociados en círculo forman un microtúbulo. Los microtúbulos son estructuras del citosqueleto tremendamente dinámicas, y precisamente de la capacidad dinámica de éstos en cda célula (tejido) dependerán su/sus funciones concretas. La síntesis de novo de los heterodímeros a partir de los polipéptidos de alfa- y beta-tubulina es un proceso complejo el cual comienza con la interacción de los polipéptidos recién sintetizados con CCT y prefoldina. Una vez liberados los polipeptidos de la chaperonina son procesados por los cofactores de la tubulina: TBCA, TBCB, TBCC, TBCD, TBCE y Arl2. Tras la asociación de las tubulinas con éstos formando diferentes complejos, finalmente, tras la hidrólisis del GTP, se libera el hterodímero de alfa-beta-tubulina competente para la polimerización en los microtúbulos. Hasta la fecha la función de estos factores in vivo no se conoce, si bien se sabe que estas proetinas son necesarias para la vida y que mutaciones en sus genes produce síndormes, algunos de ellos muy importantes. Estudios recientes indican que, además de estar implicados en el plegamiento de la tubulina, estos cofactores podrían estar implicados en la dinámica microtubular, ya que cuando éstos son sobreexpresados en células se despolimeriza completamente el citosqueleto microtubular. De hecho, y contrariamente a lo que se pensaba, las tubulinas no son proteínas inestables y los heterodímeros no se disocian ni se asocian en ausencia de los cofactores del plegamiento. De este modo, los cofactores de la tubulina quizá tengan misiones in vivo como modular la dinamicidad con el fin de favorecer el intercambio de subunidades de tubulina, por ejemplo, tubulinas con diferentes postraduccionales o diferentes isotipos. Ambos TBCE y TBCB se unen a la alfa-tubulina. Estudios realizados a lo largo de esta tesis demuestran que la sobrexpresión de TBCB, al igual que la de TBCE, es capaz de despolimerizar los microtubulos de la célula. Este hallazgo forma parte del hilo conductor de los estudios realizados en la tesis. Comprender cómo TBCB es capaz de despolimerizar los polímeros de tubulina cuando estudios in vitro demuestran que no interacciona con la tubulina en su forma nativa (como heterodímero) es el cuerpo de las investigaciones realizadas. Por un lado se demuestra que TBCB no participa en la síntesis de novo de tubulina activamente y que no forma complejos con heterodímeros de tubulina tubulina, si bien es capaz de unirse a alfa tubulina durante el proceso de síntesis in vitro (es decir, el TBCB recombinante estudiado es funcional). Estos resultados llevan al autor a cuestionar si TBCB sería capaz de interacionar con TBCE con el fin de unirse y disociar el heterodímero de tubulina. Experimentos realizados con ambos cofactores producidos de forma recombinante y purificados, incubados in vitro sólos o en diversas combinaciones de éstos con/sin tubulina demuestran finalmente que TBCE y TBCB actúan conjuntamente, amplificándose el efecto que produce TBCE sólo. Estos hallazgos se confirman in vivo mediante experimentos de co-transfección. Subsiguientes estudios de alta resolución de gel filtración acompañados de electroforésis no desnaturalizantes finalmente demuestran que TBCE y TB 8 CB inter 49a acionan físicamente con una estequiometría 1:1, y a su vez con la alfa tubulina. Finalmente esta tesis propone un modelo de interacción entre ambos cofactores a través de uno de sus dominios, el dominio UBL que ambos comparten pero que en ambos, de acuerdo con modelos estructurales publicados, podrían observarse zonas estructurales complementarias que servirían para favorecer la interacción entre ambas proteinas, que a su vez favorecería la disociación del dínero de tubulina y la unión de complejo a la alfa tubulina.

Autor: RAMON PORTES EVA.
Año: 2005.
Universidad: POLITÉCNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: ETSEIB, EDIFICI H PLANTA 4 Campus SUD.
Centro de realización: ETSEIB, EDIFICI H PLANTA 4 Campus SUD.

Resumen: La rodopsina és el fotoreceptor visual responsable de la visió a baixa intensitat lumínica que es troba en les cèl·lules bastó de la retina. Aquesta proteïna és el model per excel·lència de la superfamília de receptors acoblats a proteïna G (GPCR), que estan constituïts per 7 hèlices transmembrana, i que tenen un gran interès farmacològic. La rodopsina és l'únic membre de la superfamília l'estructura del qual sâha determinat per difracció de Raigs X. El seu estudi és de vital importància per determinar aquells motius estructurals comuns als GPCR, així com per contribuir a l'elucidació dels trets bàsics d'un mecanisme d'activació comú. A més, l'estudi de mutacions en rodopsina associades a malalties de la retina com la retinosi pigmentària (RP) i la ceguesa nocturna congènita (CNC), ha de permetre determinar les bases moleculars d'aquestes patologies. Lâobjectiu principal d'aquesta tesi és aprofundir en l'estudi dels determinants estructurals de l'estabilitat, així com també contribuir a desxifrar els mecanismes moleculars de la RP i la CNC. Per això sâha estudiat l'efecte de factors externs, com la unió de cations (en particular del zenc), i l'estat de l'entorn lipídic (alterant la concentració del detergent dodecil maltòsid) en l'estabilitat de diferents estats de la rodopsina i del seu cromòfor. També sâha determinat com afecten l'estabilitat i la conformació de la rodopsina mutacions puntuals associades a la CNC, T94I, i a la RP, L46R; i a la xarxa electrostàtica present entre la part citoplasmàtica de les hèlices 3 i 6 mitjançant la construcció de mutants senzills, dobles i triples en les posicions 134, 247 i 251, els quals sâha vist que estan implicats en el canvi conformacional de pas a la forma activa. Els mutants sâhan obtingut mitjançant tècniques de DNA recombinant, les proteïnes mutades sâhan expressat en cèl·lules COS-1, immunopurificat amb l'anticòs monoclonal Rho-1D4, i caracteritzat per espectrofotometria UV-visible. Els resultats obtinguts demostren que el zenc sâuneix de manera específica a la rodopsina, disminuint la seva estabilitat tèrmica i la seva capacitat d'unir 11-cis-retinal. També sâha demostrat que la temperatura provoca la isomerització específica de l'11-cis-retinal a tot-trans-retinal quan aquest es troba unit a rodopsina però no quan es troba lliure en solució. Això reforça la idea de la interacció òptima present entre els aminoàcids de la butxaca del retinal i el cromòfor. Pel que fa a l'estudi de l'efecte de l'entorn lipídic en l'estructura i estabilitat de la rodopsina, sâha mostrat que elevades concentracions de detergent desestabilitzen la conformació activa (Metarodopsina II) però promouen la formació d'un fotointermediari inactiu (Metarodopsina III). El detergent, doncs, juga un paper molt important en el desplaçament de l'equilibri entre els diferents fotointermediaris. En el cas dels mutants associats a malalties de la retina, la mutació T94I disminueix l'estabilitat de la conformació inactiva però estabilitza enormement la conformació activa, indicant un paper rellevant de la T94 en l'estabilització d'una xarxa electrostàtica en l'entorn de la base de Schiff. La mutació L46R en la hèlix 1 i causant de la RP impedeix que la proteïna es processi correctament i arribi a la membrana. Aquest resultat posa èmfasi per primera vegada en la importància de l'hèlix 1 per a l'estructura de la rodopsina i probablement per altres GPCR. Lâestudi dels mutants en les posicions 134, 247 i 251 en la part citoplasmàtica de les hèlices 3 i 6 ha confirmat que aquestes posicions són importants per a l'estabilitat de la conformació inactiva de la rodopsina. Es proposa una paper central de la posició 251 en l'estructura i l'estabilitat de la xarxa eletrostàtica que implica aquestes posicions.

Autor: VAQUE DIEZ JOSE PEDRO.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En este trabajo se ha analizado la interferencia funcional entre los oncogenes Myc y Ras, en dos modelos celulares donde la actividad de Ras es antriproliferativa y diferenciadora. En el primer modelo celular, derivado de leucemia mieloide crónica humana (células K562), se demuestra que la sobre-expresión de los tres genes Ras tanto silvestres como oncogénicos inhiben el crecimiento de esta línea celular. Este dato es consistente con la ausencia de mutaciones en genes Ras detectada en la enfermedad. El mecanismo implica la activación de la proteína p21, un inhibidor del ciclo celular. En este trabajo se demuestra que Ras activa p21 a través de la activación de RAF-ERK de una manera independiente de p53. El factor de transcripción oncogénico Myc, es capaz de inhibir la actividad de Ras sobre la activación de p21 en un punto situado entre la unión de Sp1 al promotor de p21 y la actividad quinasa de ERK. Este mecanismo es diferente a cualquier otro mecanismo propuesto para explicar cómo Myc inhibe la transcripción si bien se han analizado y descartado las otras opciones en este sistema. Finalmente se demuestra que Myc revierte la parada proliferativa causada por Ras en estas células. El segundo modelo celular (células UR61) se diferencia en respuesta a la actividad de Ras. Se ha encontrado que células UR61-Myc no se diferencian al activar la ruta Ras-RAF-ERK. Myc en este sistema es capaz de inhibir la transcripción del gen de c-Jun. Esta inhibición es responsable de la falta de diferenciación de las células UR61-Myc frente a las células control. El hecho de que este modelo celular carece de la proteína Max (considerada indispensable para la actividad transcripcional de Myc), dota a este estudio de especial interés, puesto que demuestra la capacidad de Myc para unirse al DNA y de regular procesos transcripcionales de una manera independiente de Max, inédita hasta este trabajo. Además se demuestra que la inhibición de la diferenciación por Myc está desacoplada de posibles efectos sobre la activación de la proliferación. Este dato también es de interés puesto que numerosos autores consideran que la capacidad de aumentar la proliferación es la responsable de que se inhiban procesos de diferenciación terminal por Myc. Este trabajo muestra que la inhibición específica de la transcripción de genes implicados en diferenciación es la utilizada por Myc para inhibir diferenciación en el modelo de células UR61.

Autor: SAURÍ PERIS ANA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA DEL CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: La propagaci6n de una infecci6n viral en plantas esta mediada por unas proteínas codificadas por el propio virus denominadas proteínas de movimiento (MP). Estas proteínas unen el genoma viral de forma cooperativa y sin especificidad de secuencia, formando unos complejos RNA-MP, que se asocian al retículo endoplasmático (RE) para ser transportados a través del citoesqueleto hacia los plasmodesmos, canales membranosos que interconectan las celulas en plantas. Una vez estos complejos alcanzan los plasmodesmos, el RNA es translocado a las células adyacentes a través de un mecanismo todavía desconocido. La asociación de estos complejos RNA-MP al RE resulta ser esencial para que este transporte celula-a-celula del RNA viral tenga lugar. Asi pues, el objetivo central de la presente tesis se ha basado en el estudio y caracterización de la asociación de estas proteínas con la membrana de este orgánulo. El virus objeto de estudio ha sido el Virus del Moteado del Clavel, que codifica dos MPs, p7, una proteína soluble capaz de unir el genoma viral y p9, que presenta dos regiones hidrof6bicas susceptibles de interaccionar con las membranas celulares. En primer lugar, mediante experimentos de transcripción/traducción in vitro se ha demostrado que p9 es una proteína integral de membrana que contiene dos fragmentos transmembrana y adopta una orientación N-/C-terminal citoplasmática. En segundo lugar, se ha caracterizado el mecanismo de integración de p9 en las membranas celulares. Los resultados obtenidos demuestran que la inserción de p9 tiene lugar de forma co-traduccional y es dependiente de SRP .Además, el virus explota la propia maquinaria celular responsable de la integración de las proteínas de membrana celulares. El complejo Sec61 y la proteína TRAM participan en el proceso de inserción de p9 en la membrana del RE. Finalmente, se ha realizado un estudio de los determinantes topológicos de la proteína que determinan la orientación de proteína virales en la membrana. Se han explorado toda una serie de parametros, entre los que se encuentran la presencia de residuos cargados en la secuencia de la proteína, la hidrofobicidad de los fragmentos transmembrana, la longitud de dominio extramembranosos y/o la presencia de residuos aromáticos. Los resultados demuestran que la proteína viral p9 presenta la información topológica distribuida a 10 largo de la secuencia de la proteina, de manera que la posible aparición de una mutación no conservativa, proceso muy habitual en genomas virales, no altere la orientación de la proteina en la membrana yen definitiva su función biológica.

Autor: MARTÍNEZ JIMÉNEZ CELIA PILAR.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En la actualidad ha aumentado considerablemente la demanda de células hepáticas funcionales para la predicción del metabolismo y toxicidad de nuevos fármacos así como para aplicaciones clínicas como la terapia celular y el estudio de enfermedades hepáticas, por ello el desarrollo de modelos celulares humanos diferenciados se ha convertido en un tema importante tanto para la ciencia básica como aplicada. Sin embargo, el uso de modelos hepatocelulares humanos in vitro tiene serias deventajas como son los procesos de desdiferenciación y pérdida de fenotipo hepático. En primer lugar se han caracterizado diversos hepatomas humanos para establecer su grado de desdiferenciación y su pérdida de fenotipo. En segundo lugar, se han estudiado los mecanismos moleculares relacionados con estos procesos de desdiferenciación centrandose en los factores de transcripción hepáticos HNF4? y C/EBP , y su relación en el control transcripcional del citocromo P450. Y por último se ha estudiado el papel de los coactivadores PGC1? y SRC1 en el mantenimiento del fenotipo hepático y en la regulación del citocromo P450. C/EBP presenta dos isoformas: LAP y LIP, que participan de forma coordinada en el proceso de inflamación regulando la expresión del CYP3A4 y por tanto jugando un papel importante en la variabilidad interindividual de la expresión de este citocromo. Tras estudiar los mecanismos moleculares que participan en la regulación transcripcional CYP3A4 hemos visto que la función del factor de transcripción hepático HNF4? está limitado por dos coactivadores claves en el proceso de regulación génica de genes implicados en el mantenimiento del fenotipo hepático son PGC1 y SRC-1. Estos coactivadores juegan un papel crucial en el mantenimiento de la función de factores de transcripción estrechamente relacionados con el desarrollo y diferenciación de las células hepáticas como es el caso del factor HNF4 . Hemos estudiado como PGC1 , y en menor medida SRC-1, son indispensables para el mantenimiento de la funcionalidad del factor HNF4 en genes implicados en el metabolismo hepático tanto de compuestos endógenos, como de compuestos exógenos como serían los genes del citocromo P450 que metabolizan xenobióticos.

Autor: TORRANO MOYA VERONICA.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: CTCF es un factor de transcripción descrito como un represor de c-MYC. En su estructura encontramos un dominio de unión al DNA que contiene once dedos de zinc. CTCF es una proteína nuclear, expresada ubícuamente y altamente conservada. Gracias a la combinación de sus once dedos de zinc, CTCF es capaz de unirse a distintas secuencias de DNA, sin existir una secuencia consenso de unión. Gracias a esta capacidad multipotente de unión al DNA, a CTCF se le considera un factor de transcripción multivalente. Entre los genes regulados por CTCF encontramos al oncogen MYC, el gen de la lisozima de pollo, el gen APPB y el gen de la telomerasa. CTCF controla un gran número de secuencias aislantes de la cromatina, siendo la única proteína descrita cfapaz de unirse a dichas secuencias. CTCF es modificado por fosforilación y poly (ADP-ribosil)ación. Estudios anteriores a este trabajo revelan la capacidad de CTCF como inhibidor del crecimiento celular. Además se han econtrado pérdida de heterocigosidad en el locus donde mapea el gen CTCF. También se han encontrado mutaciones puntuales en sus dedos de zinc en algunos tumores. Por tanto, CTCF es un buen candidato a gen supresor de tumores. La importancia de CTCF en la regulación de la proliferación celular se ha descrito previamente, en cambio su posible papel en diferenciación celular ha sido menos estudiado. Resultados previos demostraban una expresión y fosforilación diferencial de CTCF durante la diferenciación mieloide. Uno de los objetivos de trabajo fue analizar el papel de CTCF en proliferación y diferenciación de las células mielodies K562. Los resultados muestran que la sobre-expresión de CTCF en células K562 conduce a un retraso en el crecimiento celular, sin que ello conlleve un incremento en la apoptosis. En cuanto a la diferenciación, la sobre expresión de CTCF induce un incremento en la expresión de marcadores de diferenciación eritroide, sin afectarse la diferenciación megacariocítica. Uno de los mecanismos propuestos por los cuales CTCF podría mediar sus efectos es la inhibición de MYC. En este trabajo se ha demostrado que CTCF se localiza en el nucleolo de células K562 diferenciadas y en neuronas post-mitóticas. Se ha demostrado que el dominio responsable de dicha localización es el dominio de unión al DNA, que dicha localización es dinámica, dependiente de transcripción del rDNA y síntesis protéica. También se demuestra que la localización nucleolar de CTCF inhibe la transcrición nucleolar mediante un mecanismo dependiente de la actividad poly(ADP-ribosil)polimerasa.

Autor: MASIÁ ADALID SUSANA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA-CSIC.

Resumen: El estudio de las acciones del ácido retinoico (RA) en células de neuroblastoma posee dos vertientes de interés. En primer lugar, el RA es una serial que desempeña un papel central en el desarrollo embrionario y la generación de diversos órganos y sistemas, incluyendo el sistema nervioso, y por 10 tanto hay un interés científico en conocer los mecanismos moleculares por los cuales ejerce estas acciones. En segundo lugar, el RA y sus derivados sintéticos estan siendo ensayados en terapia de enfermedades neoplásicas, debido a su capacidad de regular el crecimiento, la diferenciación y la supervivencia celular, con resultados clínicos muy relevantes, como en el caso del neuroblastoma. Sin embargo, los mecanismos moleculares por los que el RA ejerce sus acciones terapeuticas no han sido establecidos claramente. El objetivo de esta tesis ha sido descifrar los mecanismos moleculares por los que el RA induce la diferenciación de células neurales, utilizando como sistema modelo células de neuroblastoma. Resultados previos del laboratorio indican que, en células de neuroblastoma, la respuesta a la administración de RA no sólo se produce a nivel transcripcional, sino que también produce la activación de la ruta de señalización de PI3K/AKT (López-Carballo, G. 2002. J Biol Chem 277, 25297-25304). Esta activación es necesaria para la inducción de la diferenciación por RA y pensamos que ocupa un lugar central en el control ejercido por RA sobre el crecimiento, diferenciación y supervivencia celular, por lo que hemos lIevado a cabo su caracterizacion con mas detalle. A través del estudio de los aspectos mecanísticos de la activacion de la via de serializacion de PI3K/AKT por RA, hemos determinado que la activación de las vías PI3K/AKT y MAPK/ERK por RA se produce a través de un mecanismo no genómico, que no requiere ni transcripción de nuevos genes ni síntesis de proteinas. Además, hemos demostrado que esta activacion no es exclusiva de células de neuroblastoma, sino que es un proceso más general. Se ha establecido la participación del Receptor Nuclear RAR en la activación de la vía de serialización de PI3K/AKT, y hemos caracterizado qué dominio del receptor RAR está involucrads en la activacion de la vía de PI3K/AKT. Además hemos puesto de manifiesto que la localización intracelular de RAR desempeña un importante papel en la activación de PI3K, y hemos descrito las interacciones físicas entre el receptor RAR y componentes de la vía de transducción de señal PI3K/AKT y como la unión de RA al receptor RAR regula estas interacciones. Finalmente, hemos analizado las consecuencias transcripcionales de estas acciones no genómicas del RA en células de neuroblastoma mediante el uso de microarrays de DNA. Los resultados obtenidos permiten plantear un nuevo modelo para la activación de la via PI3K/AKT por RA en el que la unión del ligando al receptor nuclear RAR desempeña un papel central en la regulación de la localización intracelular de RAR y de la interacción de RAR con las subunidades de PI3K.

Autor: MARTÍNEZ HERNÁNDEZ CRISTINA.
Año: 2005.
Universidad: POLITÉCNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE VALENCIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE VALENCIA.

Resumen: Tradicionalmente se ha considerado a la -oxidación como un proceso fundamental durante la germinación de las semillas, movilizando los lípidos almacenados y proporcionando a la planta la energía suficiente para su desarrollo. No obstante, también está implicada en el procesamiento de moléculas complejas que dan lugar a moléculas más simples, como los ácidos jasmónico (JA) y salicílico (SA), con funciones importantes en el desarrollo de la planta y en las respuestas de defensa frente a determinados factores de estrés. En el presente trabajo se ha llevado a cabo el análisis molecular y funcional de los genes ACXs de Arabidopsis thaliana, responsables del primer paso de la -oxidación. De los seis genes ACXs descritos, se comprobó que sólo ACX1 responde a factores de estrés de naturaleza biótica y abiótica, representando un nodo de activación de respuestas frente a diferentes factores de estrés. Mediante la generación de líneas transgénicas antisentido para AXC1 se demostró que este gen codifica una de las proteínas de la -oxidación que participa en la síntesis de JA en respuesta a la herida en Arabidopsis. Esta función de ACX1 conecta la -oxidación con la activación de respuestas de defensa de la planta frente a un amplio rango de factores de estrés. No obstante, la función de ACX1 no es limitante para la activación de defensas dependientes de JA o SA, puesto que líneas de T-DNA nulas para ACX1 activan de manera plena la expresión de genes marcadores de ambas vías de señalización en respuesta a factores de estrés como la herida o la inoculación con patógenos biotrofos. También se comprobó que la reducción o anulación del transcrito de ACX1 no da lugar a cambios en procesos del desarrollo en los que el JA o la -oxidación están implicados como la germinación, la transición a la fase reproductiva o la senescencia, y tampoco altera la resistencia basal frente a patógenos biotrofos. Sin embargo, el análisis transcriptómico, que se realizó en el presente trabajo, indica que la expresión reducida de ACX1 da lugar a numerosos cambios moleculares manifestados por la expresión reducida de numerosos genes cuya función está relacionada directa o indirectamente con defensa. Por tanto, alteraciones en la -oxidación aún no dando lugar a un fenotipo fácilmente detectable pueden ser fundamentales para organizar la activación y el mantenimiento de diferentes respuestas de defensa en plantas sometidas a distintas situaciones de estrés.

Autor: AGORIO NORSTRÒM ASTRID MARÍA.
Año: 2005.
Universidad: POLITÉCNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE VALENCIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE VALENCIA.

Resumen: El gen EP5C codifica una peroxidasa catiónica extracelular y fue identificado con Lycopersicon esculentum, donde se observó que su transcripción se induce en interacciones patogénicas compatibles e incompatibles. El H202 es la molécula señalizadora que activa la transcripción de EP5C, mientras que otras moléculas señalizadoras de la respuesta a patógenos como son el ácido salicílico (SA), ácido jasmónico (JA), o el etileno (ET) no lo hacen. En base a esta observación, en esta tesis se utilizó el gen EP5C como marcador para estudiar la vía de transducción de señales mediadas por H2O2 en la respuesta defensiva frente a patógenos. Para abordar dicho estudio se utilizó una estrategia de biología molecular complementada con estudios de genética reversa, además de una estrategia de genética directa utilizando los mutantes ocp (overrexpressor of cationic peroxidase) que activan la transcripción del transgén pEP5C::GUS de forma constitutiva en Arabidopsis thaliana. Mediante un análisis funcional del promotor de EPSC en A.thaliana se delimitó una zona del promotor de EP5C, de 51 pb, denominada R1 y necesaria para la activación de la transcripción del gen frente a Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000 (P.S.T. DC3000) o H2O2. Un rastreo de simple híbrido en levadura permitió identificar factores de transcripción de A.thaliana que se unen a R1, que pertenecen a la familia R2R3 de factores MYB o a la familia WIP. Tras la caracterización de la unión a R1 de los factores de transcripción MYB46, MYB112, y WIP2 se demostró que los dos primeros requieren de las tres guanina presentes en el elemento cis MBSII contenido en R1 para unirse a este último; por el contrario, el factor WIP2 requiere de al menos dos vueltas de hélice con los elementos cis MBSII, caja H, y caja G contenidos en R1. Estudios de resistencia frente al patógenos P.s.t. DC3000 señalaron que ninguno de los tres factores es necesario para el correcto establecimiento de las defensas frente a esta bacteria. Mientras que estudios de la regulación de la transcripción de pEP5C::GUS en A.thaliana mostraron que la ausencia de MYB46 favorece la inducción de la transcripción de dicho gen en infecciones patogénicas, y que MYB112 es necesario para la expresión constitutiva de pEP5C::GUS en el mutante ocp3. En una segunda etapa se estudió al mutante ocp11, determinándose que se trata de una mutación semidominante que expresa constitutivamente el transgen pEP5C::GUS. Análisis de resistencia demostraron que ocp11 es hipersusceptible al patógeno biotrofo P.s.t. DC3000 tanto en interacciones compatibles como incompatibles, susceptibles a la bacteria "non host" P.tabaci, e hipersusceptible a los hongos necrotrofos Botrytis cinerea y Plectosphaerella cucumerina. Estudios con marcadores moleculares indican que probablemente la inhibición de la resistencia que muestra el mutante ocp11 no depende de las vías de defensas clásicas mediadas por SA o JA/ET. Finalmente se clonó la mutación ocp11, lo que permitió identificar al gen OCP11 como el gen AGO4 y convertir a la mutación ocp11 en el alelo ago4-2. Se demostró que el mutante ago4-2 tiene disminuida la metilación de islas CpNpGp en ellocus AtSN1, deduciéndose una pérdida de función de la proteína AGO4 en este mutante respecto a la metilación de AtSN1. En este trabajo se asocia por primera vez a los mutantes ago4, involucrados en la metilación del ADN e histonas, con la defensa de las plantas frente a patógenos bacterianos y fúngicos.

Autor: ORPINELL MERCADÉ MERITXELL.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA.

Resumen: El presente proyecto ha abordado la implicación del gen DOR (Diabetes and Obesity Related Gene) en la fisiopatología de la diabetes mellitus de tipo 2 mediante un análisis de la biología molecular (1) y celular (2) de la proteína codificada por éste gen. 1,- Análisis molecular del patrón de distribución y de la función mediante la caracterización de interacciones con otras proteínas. En base a evidencias previas que sugieren un papel de DOR como regulador de la actividad transcripcional, se ha establecido la potencial interacción de DOR con proteínas implicadas en mecanismos de expresión génica, tales como receptores nucleares de hormona (TR, GR, PPAR), coactivadores (SRC-1),histona acetilasas (CBP, p300), y desacetilasas (SirT1), mediante ensayos de inmunoprecipitación de proteína o cromatina (ChlP). Asimismo, se ha caracterizado de la interacción de dos proteínas citoplasmáticas identificadas previamente por la técnica del Doble Híbrido en Levadura. El análisis de la interacción de DOR con Translokina ha permitido establecer un posible mecanismo regulador de ésta en la translación de DOR al núcleo y de sus niveles de expresión y, en consecuencia, de su actividad reguladora. Por otra parte, la interacción de DOR con TXNIP ha permitido establecer una posible implicación de DOR en los mecanismos responsables del mantenimiento del potencial redox a nivel celular. 2,- La caracterización del patrón de expresión celular y tisular de la proteína DOR, tanto endógena como ectópica, ha permitido determinar mecanismos implicados en la localización y expresión de ésta, tales como la diferenciación miogénica, la actividad transcripcional, traduccional y proteasomal, la estabilidad del citoesqueto, el estado de fosforilación, así como el estado energético o del potencial redox celular.

Autor: PUJADAS PUIGDOMÈNECH LLUÍS.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA DE LA UNIVERSITAT DE BARCELONA.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA - FACULTAT DE BIOLOGÍA.

Autor: VALLS JORDANA ESTER.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGÍA.

Autor: MORENO GONÇALVES ANA BEATRIZ.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: IBMB-CSIC.
Centro de realización: IBMB-CSIC.

Resumen: Las plantas están constantemente sometidas a diferentes estreses ambientales. Los hongos causan un gran número de enfermedades en las plantas, siendo responsables de grandes pérdidas económicas. Actualmente, el control de estas enfermedades se realiza mediante la utilización de compuestos químicos, con el consiguiente impacto negativo en el medio ambiente y en la salud. Una alternativa al control químico es la obtención de plantas transgénicas resistentes a hongos. En un principio, la mayoría de los transgenes utilizados para este fin provenían delas propias plantas (genes PR). Actualmente, y dada la reducida efectividad de esta estrategia, se están trabajando en la identificación de genes de defensa que otros organismos, como son bacterias, insectos, animales e incluso otros hongos. En este trabajo, se ha evaluado la utilidad de la proteína AFP (antifungal protein), producida por el hongo del suelo Aspergillus gigantesus, para actuar como agente antifúngico frente a fitopatógenos de plantas, más concretamente geranio y arroz. La proteína AFP es una proteína pequeña con una estructura compacta y muy básica, que se secreta al espacio extracelular. Estudios anteriores habían demostrado su actividad antifúngica frente a diversos filopatógenos (La cadena et al, 1995; Vila et al 2001). Así, el primer objetivo de esta tesis fue estudiar la actividad antifúngica de esta proteína frente al hongo Botrytis cinerea. Este hongo es el responsable de la enfermedad podredumbre gris en muchas plantas, entre ellas ornamentales. Nuestros resultados revelan que la proteína AFP presenta una fuerte actividad antifúngica frente a diferentes cepas de Botrytis cinerea, inhibiendo tanto el desarrollo de las higas como la germinación de las esporas. Cuando se utiliza en combinación con la proteína cecropina A de lepidóptero, se observa un efecto antifúngico aditivo entre ambas, lo que puede ser útil para el desarrollo de una estrategia de expresión simultánea de ambos genes en plantas transgénicas. Además, la AFP inhibe el crecimiento de B.cinerea tanto in vitro como in vivo, en plantas de geranio. Por otra parte, el hongo Magnaporthe grisea es el responsable de la enfermedad conocida como piriculariosis en plantas de arroz. La actividad antifúngica de la proteína AFP frente a este fitopatógeno ya se había descrito anteriormente tanto in vitro como in vivo (Vila et al, 2001). En este trabajo se ha desarrollado una estrategia para expresar el gen afp de manera controlada e inducible, evitando así los posibles efectos negativos de una expresión constitutiva, tanto a nivel de gasto metabólico por parte de la planta, como de su aceptación por el consumidor final. Los resultados indicaron que el promotor de un gen PR de maíz, el gen ZmPR4, es funcional e inducible por el hongo M.grisea en plantas de arroz. Este promotor es capaz de controlar la expresión del gen afp y conferir resistencia a la infección por el hongo Magnaporthe grisea en plantas transgénicas. Su utilización tiene una ventaja adicional ya que este promotor no es activo en el endospermo de la semilla del arroz (órgano destinado al consumo), con lo que se evita que el producto del trangén se acumule en este tejido. Finalmente, dado el gran potencial del gen afp para aplicación biotecnológica, se hacía necesario determinar su mecanismo de acción frente a hongos, así como sus posibles efectos sobre células animales o vegetales. En la última parte de esta tesis se han realizado diferentes estudios empleando como modelo el hongo M.grisea. Mediante microscopía confocal utilizando diferentes sistemas de marcaje fluorescente, y microscopía electrónica de transmisión, se ha podido observar que la proteína AFP es capaz de forma poros en la membrana del hongo. La proteína AFP penetra en la célula del hongo y se acumula en el núcleo. Además, tiene la propiedad de interaccionar con ácidos nucleicos, ya sea DNA o RNA. Estos resultados llevan a pensar que el mecanismo de acción de esta proteína se basa en una combinación de actividades: formación de poros en la membrana e interacción con ácidos nucleicos, llevando a la muerte celular. Se realizaron también ensayos con células vegetales (protoplastos de arroz) y humanas (células HeLa), que h 8 an permi 3ae tido determinar que la proteína AFP no ejerce ningún efecto nocivo significativo en estas células. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo permiten concluir que el gen afp es un buen candidato para ser utilizado como transgén para la protección de plantas de geranio y de arroz frente a enfermedades producidas por los hongos Botrytis cinerea y Magnaporthe grisea, respectivamente. El promotor del gen ZmPR4 representa asimismo una buena opción para dirigir la expresión de genes antifúngicos en plantas transgénicas de arroz.

Autor: GAS PASCUAL ELISABET.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: CENTRO DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO (CSIC).
Centro de realización: LABORATORI DE GENÉTICA MOLECULAR VEGETAL - INSTITU DE BIOLOGÍA MOLECULAR DE BARCELONA - CONSORCI CSIC-IRTA.

Resumen: En la mayoría de cereales, las proteínas de reserva mayoritarias de la semilla reciben el nombre de prolaminas y se acumulan en el endospermo. Los genes que las codifican son específicos de tejido y presentan elevada eficiencia transcripcional, sugiriendo una estrecha regulación génica. En maíz, nuestra especie modelo, las prolaminas se denominan zeínas y se acumulan en unas vesículas derivadas del RE llamadas cuerpos proteicos, mientras que otras proteínas de reserva como globlulinas u oleosinas que acumulan en la aleurona y el embrión. El interés de nuestro grupos se centra en la gamma-zeína, una proteína de reserva específica de endospermo, que constituye el 15% del contenido proteíco del grano, a pesar de que su gen (gamma Z) se encuentra presente sólo en una o dos copias por genoma haploide. El objetivo de este trabajo era caracterizar nuevos factores de transcripción implacados en la expresión de proteínas de reserva específicas de semilla, ligadas al desarrollo del grano, especialmente aquellos involucrados en la expresión del gen gammaZ. Los objetivos concretos así como los resultados conseguidos se describen brevemente a continuación: 1,- Caracterización funcional de PBF como regulador positivo del gen gamma Z. PBF es un activador transcripcional, cuyo dominio activador se localiza en su región C-terminal. La actividad de PBF depende de su capacidad de unión al DNA. 2,- Nuevos factores de transcripción involucrados en la expresión del gen gammaZ: clonaje del gen GAMYB de maíz y estudios de inmunolcoalización. Caracterización de este factor como regulador transcripcional del gen gammaZ. ZmGAMYB codifica para un factor de transcripción de tipo Myb R2R3 que se une específicamente a la caja AACA del promotor gamma Z y activa la expresión del gen gammaZ a partir de su promotor. ZmGAMYB se expresa específicamente en endospermo de maíz en desarrollo, de forma similar a como lo hacen otros reguladores del gen gamma Z. El factor proteico se acumula en las capas más superficiales del endospermo (aleurona y subaleurona). 3,- Nuevos factores de transcripción relacionados con la expresión de proteínas de reserva de semilla: clonaje del gen FUSCA3 de maíz, estudios de inmunolocalización y caracterización de este factor. ZmFISCA3 codifica para un factor de transcripción de tipo B3 que se expresa mayoritáriamente en embrión en desarrollo. El factor proteico se acumula de forma masiva en la aleurona, así como en el embrión, sugiriendo un papel en la acumulación de sustancias de reserva en estos dos tejidos. FUSCA3 se une a los motivos RY-like del promotor gamma Z, de forma poco específica, y no es capaz de activar la expresión a partir de este promotor.

Autor: AGUILERA XIOL CRISTINA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: INSTITU DE RECERCA ONCOLOGICA -IDIBELL.

Resumen: El objetivo general planteado en esta tesis ha sido estudiar los mecanismos que regulan las vías de NFkB y de Notch y cómo estas dos vías se interrelacionan. En el primer capítulo se demuestra que las 14-3-3 regulan la vía clásica de NFkB favoreciendo el exporte nuclear de los complejos p65/IkB alfa después de la activación por TNF alfa. Demostramos que p65 contiene, al menos, dos dominios de unión a 14-3-3 que incluyen los aminoácidos 38-44 y 278-283, y mapamos el sitio de unión de IkB alfa a 14-3-3 en los aminoácidos 60-65. La mutación de estos dominios redistribuye p65 y IkB alfa al núcleo de las células sugiriendo que 14-3-3 participa en el exporte de estas proteínas del núcleo. El tratamiento con TNF alfa promueve el reclutamiento de 14-3-3 y de IkB alfa a los promotores de genes diana de NFkB así como la unión de p65 a las 14-3-3. Al inhibir la actividad NFkB con un dominante negativo de las 14-3-3, los complejos IkBalfa/p65 se acumulan en el núcleo de las células. En estas condiciones se observa una asociación constitutiva de p65 a sus genes diana que da lugar a una falta de respuesta de estos genes a la activación inducida por TNF alfa. Así demostramos que las 14-3-3 son necesarias para la correcta regulación de la vía de NFkB ya que facilita el exporte nuclear de los complejos IkBalfa/p65. En el segundo capítulo se demuestra como el inhibidor de la vía de NFkB, IkB alfa, juega un papel nuclear asociándose a la cromatina de genes diana de Notch como hes1 i herp2, siendo este un nuevo elemento en los mecanismos de interrelación entre la vía de Notch y la de NFkB. Proponemos que IkB alfa participa en la represión transcripcional reclutando elementos corepresores a promotores específicos. Mostramos como IkB alfa interacciona con elementos represores nucleares y HDACs. Por immunoprecipitaciones de cromatina se demuestra que IkBalfa se recluta en el promotor de hes1 juntamente con HDAC1 y HDAC5. IkBalfa se libera temporalmente del promotor de hes1 cuando se tratan las células con TNFalfa, esto correlaciona con un incremento en la acetilación de las histonas y la actividad transcripcional del gen. La liberación de IkBalfa de hes1 y su activación transcripcional coincide con el reclutamiento de IKKalfa y de IKKbeta en este promotor. Además, tanto la liberación de IkBalta de hes1 como el incremento en la acetilación de las histonas inducido por TNFalfa están afectadas en los fibroblastos deficientes de IKKalfa.

Autor: NAPAL BELMONTE LAURA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE FARMACIA.
Centro de realización: UNVIERSITAT DE BARCELONA.