GENETICA

Autor: FIDALGO MERINO MANUEL ÁNGEL.
Año: 2003.
Universidad: PABLO DE OLAVIDE [Más tesis de esta universidad] [www.upo.es].
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE MÁLAGA, CONVALIDADA.

Resumen: En la produción de vino fino, ciertas levaduras de la especie Saccharomyces cerevisiae (llamadas levaduras de flor)son las responsables de llevar a cabo una crianza biológica. En ella, y a través de su metabolismo transforman el vino joven (procedente de la fermentación del mosto)en vino fino. Las levaduras de flor productoras de vino fino son capaces de crecer en un medio con alcohol como única fuente de carbono.Para ello, desarrollan una película celular superficial(denominada flor o velo)en botas de roble que contienen vino joven. Esta película es de gran importancia para establecer las características organolépticas del vino durante la crianza biológica. Al mismo tiempo, esta estructura evita una oxidación perjudicial del vino durante la crianza biológica. Durante el periodo estival, el aumento de temperaturas provoca una pérdida de estabilidad de la flor.Esto trae como consecuencia una caída del velo al fondo de la bota, y conlleva un retraso en el envejecimiento del vino, potenciándose, además.La oxidaciónn del mismo. Este trabajo, hemos determinado el gen implicado en el desarrollo de la flor del vino por parte de estas levaduras, y hemos procedido a su caracterización molecular. Conocer los mecanismos moleculares que desembocan en el desarrollo de esta estructura permitirá abordar planes de mejora dirigida sobre el gen de estas levaduras para aumentar la estabilidad de la flor producida.

Autor: CAMACHO MARTINEZ MANUEL VICENTE.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: El Centeno (Secale cereales L.) es un cereal de amplio cultivo en regiones templadas utilizado para el consumo humano y animal. Debido a su capacidad para crecer en situaciones extremas ha sido sometido a procesos de selección para aumentar su productividad. De la misma manera también ha sido utilizado para transferir al trigo genes para incrementar su resistencia a condiciones extremas. El uso de técnicas moleculares facilita la identificación y transferencia de estos genes entre ambas especies. El aluminio es el metal más abundante en la corteza terrestre. Uno de los mayores problemas que sufren los suelos cultivables es la toxicidad debido al aluminio o la acidificación progresiva del mismo debido a la acción del hombre. El centeno es el cereal más tolerante a la toxicidad por aluminio, y en principio una buena fuente para localizar genes de Tolerancia al aluminio y ver su posible transferencia a otras especies como puede ser el trigo. Hasta ahora se han descrito tres genes de tolerancia al aluminio en centeno. Dentro de las diversas técnicas moleculares disponibles, se utilizó la amplificación de ISSR y RAPD en líneas de adición trigo-centeno para obtener el mayor número posible de marcadores moleculares distribuidos por los siete cromosomas del centeno. Mediante ambas técnicas se ha obtenido la localización de 104 marcadores moleculares. De la misma manera se buscaron microsatélites en una base de datos de EST que se expresaban en centeno bajo condiciones de estrés al aluminio. De esta manera se conseguirá obtener marcadores moleculares y a la vez intentaríamos ver si había alguna relación entre estas secuencias y los genes de tolerancia al aluminio descritos en centeno. Se han encontrado y obtenido su localización crómosica de 10 microsatélites nuevos. Lo que implica conocer la localización cromosómica de secuencia que se expresan bajo condiciones de estrés al aluminio en centeno. En un intento de cartografía el mayor número posible de marcadores moleculares posibles, se estudiaron en varias F2 la segregación de ISSR y microsatélites principalmente. Estas F2 provenían de un cruzamiento entre el cultivar tolerante "Ailés" y la línea consanguínea "Riodevia", que es sensible al aluminio. Posteriormente se realizó un análisis de ligamiento y se obtuvieron grupos de ligamiento correspondientes a los 7 cromosomas del centeno. En estas poblaciones. También se estudiaron las segregaciones de diferentes marcadores relacionados con genes de tolerancia al aluminio disponibles. Se han obtenido la secuencia de diferentes fragmentos de centeno con el objeto de diseñar cebadores específicos. De la misma manera se han buscado en las bases de datos posibles homologas de estas secuencias con otras previamente descritas.

Autor: VILAS SALLERES CARLOS.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA [Más tesis de esta universidad] [www.usc.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOXÍA.
Centro de realización: INSITUTO DE ACUICULTURA.

Resumen: Para estudiar la importancia relativa de la depresión endogámica y la pérdida de diversidad adaptativa en la determinación del riesgo de extinción de pequeflas poblaciones, llevamos a cabo un experimento en el que cruzamos y auto-fertilizamos plantas fundadoras de un única gran población de Silene littorea. Las semillas producidas por estas plantas las usamos para producir una serie de plántulas reintrodujimos en 18 nuevas localidades dentro del área de distribución de la especie. Las poblaciones reintroducidas fueron de tres clases: endogámicas y genéticamente homogéneas, cada una formada de semillas de origen autogámico de una única planta; endogámicas y mixtas, cada una formada de una mezcla de semillas de origen autogámico de todas las plantas fundadoras, y exogámicas y mixtas, cada una formada de una mezcla de semillas obtenidas en cruces exogámicos entre las fundadoras. Comparamos las poblaciones endogámicas homogéneas con las endogámicas mixtas para medir el efecto de la diversidad genética entre individuos y las endogámicas mixtas con las exogámicas para medir el efecto de la endogamia. El éxito en la reintroducción se vio seriamente limitado por la endogamia mientras que no se vio afectado por la diversidad genética. Esta observación, junto con la interacción familia por localidad no significativa para caracteres individuales de planta, sugirió que la fijación del conjunto de genes deletéreos responsables de la depresión endogámica son una amenaza más seria a corto plazo para la supervivencia de las poblaciones que la pérdida de genes implicados en interacciones genotipo ambiente y por tanto relacionadas con la diversidad adaptativa. Prevenir tal fijación podría ser la consideración más importante a plantearse en el manejo gen ética y la conservación de poblaciones de Silene littorea. Aprovechando este diseflo experimental, estudiamos el impacto del mecanismo genético de la determinación del sexo en la supervivencia de pequeñas poblaciones de Silene littorea. La pérdida de variación genética en las poblaciones puede tener otros efecto además de la depresión endogámica y la pérdida de potencial adaptativo. En el caso de numerosas especies de plantas ginodioicas que tienen sistemas citonucleares de determinación sexual con restauradores nucleares de la función masculina dominantes, una reducida variabilidad genética y una alta endogamia en las poblaciones incrementaria la frecuencia de plantas hembras homocigotas recesivas con flores femeninas. Esto podria tener efectos opuestos al riesgo de extinción, ya que una mayor frecuencia de flores femeninas en una población podria resultar en una limitación de polen y un reducido éxito en la fertilización, aunque también en una reducida depresión endogámica en la siguiente generación, ya que las flores femeninas no pueden auto-fertilizarse. Nosotros investigamos experimentalmente el balance de estos dos efectos en pequeflas poblaciones de Silene littorea reintroducidas en el campo, observando que la endogamia incrementó la proporción de flores femeninas y plantas hembras en la población. Este resultado es consistente con un sistema citonuclear de determinación sexual con restauradores nucleares dominantes de la función masculina. Mientras no encontramos ningún efecto positivo de incremento en el crecimiento de la población en el aflo siguiente, se detectaron efectos negativos que probablemente estuvieron relacionados con la limitación de polen. Las poblaciones que produjeron más flores femeninas en el primer aflo de estudio tuvieron un menor crecimiento poblacional en el segundo aflo. Nuestros resultados sugieren que los restauradores nucleares de la producción de polen dominantes aceleran la extinción de pequeflas poblaciones de Silene littorea, y que los mecanismos de determinación sexual podrian ser un importante factor a considerar en la conservación de numerosas especies de plantas.

Autor: MARSELLACH CASTELLVI FRANCESC XAVIER.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: INSTITUD DE BIOLOGÍA MOLECULAR DE BARCELONA.

Autor: CARIM TODD LAURA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA ,UB.

Autor: ROSANAS URGELL ANNA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPAR.GENÉTICA FAC,BIOLOGÍA UNI,BARCELONA.

Resumen: Los genes que forman el clusta para hox son factores de trancripción , que en el origen de los metazoos, se crificaron por amplicaciones de un gen ancestral comun homodaminio.En el origen de los vertebrados y por duplicaciones este cluster se duplico formando hasta 4 clusters .La hipótesis inical de trabajo era la existencia de uno a tres genes paralogaos a Paxl no identificados en el semana humano.La posterior sequenciación de este genoma, confirmo la no existencia de genes Paxl reconocibles en el genoma.Seguidamente se analizo la expresión de los genes para Hox en diferentes tejidos anetos de retón y se confirmo su expresión en diferentes tejidos adultos , no descritos anteriormente.También se confirmo su expresión en las células x del pancreas de ratón adulto , mediante las técnicas de hibridción in situ y immunolocalización.Además proponemos un proceso de regulación postransplinel/pretraduccional para Polx, mediante la retención de su MRNA a nucleo. Posteriormente se relazaron contransfecciones de los genes ParaHox clonadas en vector es de expresión , juntamente con el promotor de la insulina con el gen reporter de la lucijerosa en cultivos de células XTCI y BTCG, Así concluimos que los genes ParaHox , a diferentes concentraciones de glucosa, tienen actividad sobre el promotor de la insulina , de manera mucho más , evidente en el caso de CDX4

Autor: DALFÓ SIMÓ DIANA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE GENÉTICA , FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: RESUMEN;Un exceso o una deficiencia de acido retinoico (AR) provoca malformaciones graves en el desarrollo embrionario de los cordados, indicandoque la función de este metabólitodurante la embriogénesis es comuna en todo el filum.Sin embargo, el hecho que un metabólito concreto tenga una misma función en diferentes organismos, no implica necesariamente que sea metabolizado de la misma manera en todos ellos. Para estudiar la vía de sintesis del AR en los cefalocordados decidimos determinar el contenido de retinoides en el anfioxo, tanto en adultos como en huevos, y comparar los efectos que provocaban tratamientos con retinol y con AR durante el desarrollo embrionario. Los resultados demostraron la presencia de retinol,retinal y ARen los animales adultos a unas concentraciones equivalentes a las descritas en vertebrados. Además, el análisis del contenidode retinoidesen las gónadas en diferentesestadios de maduraciónsugería una progresivatransformacióndel retinola retinal,el cual quedaría como el único retinoide almacenado en el huevo. Por otra parte, los tratamientos con retinoly ARprovocaron malformaciones similares en los embriones de anfioxo.Todos estos resultados apuntaban que los anfioxos tendrían la capacidad de oxidar el retinol para producirARy por tanto, las actividades enzimáticas necesarias. La regulación de los niveles fisiológicosdel ARse consigue mediante los enzimas encargados de su producción, a partir de retinol,y de su eliminacióna formasbiológicamenteinactivas.En el procesode producción,el retinoles oxidadodos vecestransformándoseprimeroa retinal,y después a AR.En los vertebrados,aunque se han descritomúltiplesenzimasque pertenecena dos familiasdiferentes-las MDR-ADHy las SDRRDH- que puedencatalizarla oxidacióndel retinola retinalin vitro,no está clarocuál es el responsablein vivo.Por el contrario,hay un co"nsenso general sobre la identidad de los enzimas que oxidan el retinal a AR, los RALDH.A pesar de que en los vertebrados se han descrito al menos tres RALDHdiferentes con actividad retinal deshidrogenasa, se considera que la RALDH2es la responsable principal de la síntesis del AR durante el desarrollo embrionario. Para analizar el metabolismo de los retinoides en la base de los cordados e inferirsu evolución en el fílum, identificamoslos ortólogos correspondientes a algunos de los genes de vertebrados en el cefalocordado anfioxo. Por eso, mediante PCR con oligonucleótidos degenerados y el screening de genotecas pudimos aislar putativas RDHsen dos especies de anfioxo,B. lanceolatum y B. fIoridae.Además, a partirde la búsqueda en un banco de datos d'ESTs de anfioxo identificamos la secuencia de una probable RALDHque, dada su elevada similitudcon las secuenciasde losvertebradosy su patrónde expresiónduranteeldesarrollo,era un buencandidatoparala síntesisdelARdurantela determinación del eje anterior-posteriordel animal. A pesar que en estudios previos habíamos identificadodos putativas RDHs en I'anfioxoB. fIoridae,BfRDH1y BfRDH2,desconocíamos su localización subcelular y sus propiedades bioquímicas, es decir, si eran más eficientes oxidando el retinol o reduciendo el retinal, y cuál era su preferencia de cofactor. Hemos avanzado en esta caracterización y hemos demostrado que los dos enzimas se localizan en el reticulo endoplasmático, gracias esencialmente a su extremo N-terminal, que permitiría el ancoraje de la proteína a la membrana y determinaria su topologia general. Por otra parte, la caracterización bioquímicade los dos enzimas ha revelado que catalizan la reducción del retinal a retinolusando el NAD(H) como cofactor, una actividad bioquímica sorprendente para esta familia de enzimas. Si esta actividad es un reflejo de la situación ancestral de la familia RDH, las formas actuales de los vertebrados hubieran evolucionado a partir de una actividad retinal reductasa-NAD(H) dependiente.

Autor: NEGRE DE BOFARULL BÁRBARA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE CIÈNCIES.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: Los genes homeóticos (Hox) codifican factores de transcripción involucrados en la especificación de la identidad segmental a lo largo del eje anterior posterior en el embrión de los metazoos. Estos genes se presentan habitualmente agrupados y organizados en el mismo orden en el que se expresan a lo largo del eje anteroposterior del cuerpo. La conservación de esta organización genómica a lo largo de la filogenia ha sugerido la existencia de constricciones funcionales actuando sobre ella, pero la desestructuración del complejo en Caenorhabditis elegans y las tres roturas descritas en el género Drosophila ponen en cuestión que esta organización sea realmente necesaria para su correcto funcionamiento en algunos linajes. En este trabajo se han estudiado las consecuencias genómicas y funcionales de las dos reorganizaciones del complejo de genes Hox presentes en Drosophila buzzatti, especie perteneciente al grupo repleta. En la primera parte del trabajo se han clonado y secuenciado las regiones codificantes del gen labial (lab) en D.buzzatti y D.virilis. Se han comparado las secuencias de estas dos especies y la de D.melanogaster para comprobar si el cambio de posición del gen lab ocurrido en el linaje de B.buzzatti había producido algún cambio en la estructura del gen o en la evolución de su secuencia. Los resultados muestran una tasa de cambio heterogénea a lo largo del gen pero homogénea a lo largo de la filogenia. La tasa de cambio nucleotídico de lab se ha mantenido constante a pesar del cambio de posición. En la segunda parte del trabajo se han secuenciado dos regiones del genoma de D.buzzatti. Una contiene los genes lab y abdominal A (abdA) y la otra incluye el gen proboscipedia (pb), y se ha comparado su organización géncia con D.melanogaster y D.pseudoobscura para localizar con precisión los puntos de rotura. También se han comparado las secuencias no codificantes de estas regiones, se ha observado una elevada presencia de bloques conservados en los intrones y regiones adyacentes de los genes Hox. La comparación de los bloques conservados con las regiones reguladoras conocidas de los genes Hox (lab, pb y abdA) en D.melanogaster muestra que la posición y orientación de las regiones reguladoras está conservada entre las tres especies, con excepciones menores. Finalmente se analizó el patrón de expresión de los tres genes Hox en embriones y discos imaginales de D.buzzatii, D.repleta, D.virilis, y D.melanogaster, cuatro especies con diferentes organizaciones de los genes Hox. Las dos roturas estudiadas se produjeron mediante inversiones paracéntricas, con los puntos de rotura respetando las regiones reguladoras de ambos genes. De manera que las regiones reguladoras y patrones de expresión de los genes Hox adyacentes se han conservado a pesar de las organizaciones. En Drosophila el complejo parece tener una estructura formada por módulos (que incluyen los genes y las regiones reguladoras) independientes, cuya agrupación no es necesaria para su correcto funcionamiento. La organización de estos genes es modular y su agrupación parece ser el resultado de la inercia filogenética más que de la necesidad funcional. El descubrimiento de más reorganizaciones en otros linajes y la importancia de la colinealidad temporal en algunos organismos sugieren que la causa funcional de la conservación de la consecuencia de la pérdida de colinealidad temporal en organismos con desarrollo rápido por modificación de la embriogénesis.

Autor: ZAMORA PLANA LURDES.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE CIÉNCIES.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Autor: MANSILLA BARRADO SYLVIA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR DE BARCELONA (IBMB-CSIC).

Resumen: Nuestro grupo ha participado en el análisis de los mecanismos de acción dela Bisantraciclina WP631. Hemos comparado los efectos de la WP631 con los dos de la Daunorubicina en la línea Jurkat T (leucemia de linfocitos T), y con los de la Doxorubicina en las líneas MDA-MB-231 y MCF-7/VP (líneas de carcinoma mamario). Hemos demostrado que la WP631 es un agente antiproliferativo mucho más eficaz que la Daunorubicina y la Doxorubicina en las tres líneas tumorales analizadas, ya que inhibe el crecimiento celular a dosis muy reducidas (en el rango de nanomolar). En este trabajo se han analizado los mecanismos de muerte celular a través de los cuales las Antraciclinas ejercen su efecto antiproliferativo. Hemos demostrado que estas moléculas pueden inducir mecanismos distintos a la apoptosis dependiente de p53: senescencia y catástrofe mitótica, procesos que no dependen necesariamente de la funcionalidad del gen p53. Los efectos antiproliferativos de la Daunorubicina sobre las células leucémicas Jurkat T dependen de la dosis utilizada: apoptosis a dosis altas (IC75) y senescencia a dosis bajas/moderadas (IC50). La WP631 no induce apoptosis en la línea Jurkat T, sino catástrofe mitótica. El efecto antiproliferativo de la Doxorubicina y la WP631 en las líneas de carcinoma mamario MDA-MB-231 y MCF-7/VP, resistentes a la apoptosis, tiene lugar a través de la inducción de catástrofe mitótica. Nuestros resultados demuestran que la catástrofe mitótica se produce cuando las células tumorales resistentes a la apoptosis se tratan con genotóxicos, y puede ser un proceso tanto dependiente como independiente de la activación de la caspasa-2 y la caspasa-3. Mediante el uso de Macroarrays, hemos demostrado que existe una clara correlación entre las variaciones en los perfiles de transcripción genética y los efectos celulares observados en células Jurkat T tratadas con Daunorubicina o WP631. Confirmamos algunos de los cambios observados mediante RT-PCR semicuantitativa y Western blot. Comprobamos que la WP631 reduce la expresión de p53 en células Jurkat T, resultado que explica que la Bisantraciclina indujera catástrofe mitótica y no apoptosis en esta línea celular. Hemos confirmado que la WP631 compite con los factores de transcripción Sp1 y Sp3, e inhibe la transcripción dependiente de Sp1 in vivo (cultivos celulares), a las mismas concentraciones capaces de inducir la catástrofe mitótica en las células Jurkat T. Hemos demostrado que la dosis IC75 para la WP631 reduce la transcripción del gen mrp-1 en la línea celular MCF-7/VP, lo que se traduce en la reducción de la actividad de la proteína MRP-1. Este efecto podría estar mediado, también, por la interferencia d la WP631 con el factor de transcripción SP1, que regula positivamente la expresión del gen Dado que la sobreexpresión del gen mrp-1 está asociada a la resistencia múltiple a antitumorales, la WP631 es una molecular con interés clínico potencial en el tratamiento de tumores con fenotipo MDR (Multidrug Resistance). En definitiva, en este trabajo hemos demostrado las ventajas potenciales de la WP631 sobre la Daunorubicina y la Doxorubicina. Estas ventajas radican en sus propiedades de unión al DNA y en su capacidad de desplazar al factor de transcripción SP1. El análisis de las frecuencias de las dianas potenciales de unión para la WP631 en diferentes promotores humanos, nos indica que es factible diseñar racionalmente moléculas de bajo peso molecular con constantes de unión al DNA del mismo orden de magnitud que la de los factores de transcripción, pudiéndose obtener fármacos cada vez más eficaces. Por otro lado, consideramos que el análisis en profundidad de los mecanismos moleculares que regulan los procesos de senescencia y catástrofe mitótica ha de constituir una herramienta muy útil para poder incrementar la eficacia en determinados tratamientos antitumorales, ya que el gen p53 se encuentra frecuentemente inactivado en tumores de origen no hematológico.

Autor: VENDRELL SOLER ELISENDA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAT BIOLOGÍA, UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: En la presente tesis hemos estudiado 50 casos de cáncer colorectal esporádico en estadíos de Dukes B y C, mediante dos aproximaciones globales: La CGH (Comparative Genomic Hybridization) y el análisis por microarrays. A partir de los resultados de la CGH hemos definido cuatro grupos: el que presenta inestabilidad d microsatélites (6%), el grupo normal sin alteraciones cromosómicas (16%), el grupo de inestabilidad cromosómica "manosomic like" (44%) y el grupo de inestabilidad cromosómica restante (34%). Por otro lado, mediante el análisis de componentes principales de los 128 genes que presentan una mayor variabilidad hemos definido nuevas variables denominadas metagenes. En la expresión.

Autor: MARSAL TERÉS MARIA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: UNIVERSITAT DE BARCELONA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE GENÉTICA, FACULTAD DE BIOLOGÍA, UB.

Resumen: La comunicación entre células es esencial para integrar las órdenes necesarias para que un organismo pueda desarrollarse correctamente desde el estadio de una célula hasta le mantenimiento del estado adulto. El número de vías de señalización que las células necesitan para comunicarse es relativamente bajo y por ello dichas vías se reutilizan varias veces durante el desarrollo de los organismos. El organismo modelo empleado en este trabajo es la planaria de agua dulce Girardia tigrina. Las planarias son especialmente interesantes por su gran plasticidad morfológica y gran habilidad para regenerar las partes perdidas del cuerpo. Con esta tesis se intenta dilucidar el papel en la regeneración de una vía de proteínas señalizadoras en particular, la vía Wnt, que rige múltiples funciones durante el desarrollo normal de los organismos. En concreto se describe el aislamiento de un homólogo de la subfamilia Wnt-5 y del regulador negativo de la vía, la GSK-3. Asimismo se analiza el patrón de expresión de estos genes, hallándose un máximo en el sistema nervioso central. Además, se detallan experimentos de RNA de interferencia realizados por distintas metodologías para provocar fenotipos de pérdida de función. Dichas aproximaciones fueron exitosas para el gen GSK-3, con resultados corroborados con drogas inhibidoras para dicha quinasa. Los fenotipos de pérdida de función deGSK-3 indican un papel esencial para este gen en la regeneración de la parte más anterior del organismo y en la determinación cefálica.

Autor: TUSON SEGARRA MIQUEL.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: DEPT. GENÉTICA - FAC. BIOLOGÍA - UNIV. BARCELONA.

Resumen: La retinosis pigmentaria es la degeneración retinal hereditaria más prevalente y una de las causas principales de ceguera en humanos. Desde un punto de vista clínico se manifiesta como ceguera nocturna, progresa con la reducción del campo visual y en estadios avanzados conduce a la ceguera completa. Se caracteriza por la muerte apoptótica de las células fotoreceptoras de la retina como consecuencia de la alteración de uno de los 32 genes que, hasta la fecha, han sido identificados como causales de esta enfermedad. El objetivo principal de este trabajo de tesis doctoral ha sido la búsqueda de un nuevo gen de retinosis pigmentaria autosómica recesiva en el locus RP26. Este locus había sido definido previamente por nuestro grupo en el brazo largo del cromosoma 2, mediante un análisis de ligamiento. En el presente trabajo de tesis, se expone la caracterización funcional de un nuevo gen del locus RP26, el gen ORMDL1, identificado como presunto candidato, y la descripción de la familia génica a la que pertenece: una nueva familia de genes que codifican proteínas transmembrana del retículo endoplasmático, muy conservadas y presentes exclusivamente en ecuariotas. Mediante el análisis funcional realizado con la generación de cepas knockout de los genes ORM1 y ORM2 de levadura, se propone una implicación de estas proteínas en la respuesta del retículo endoplasmático a proteínas mal plegadas. En la segunda parte del trabajo, se exponen los resultados de la búsqueda del gen responsable de RP del locus RP26. Gracias a una aproximación que incluyó la determinación precisa de los límites del locus, el análisis de genes candidatos y un extenso mapaje de homocigosidad, realizado a lo largo de un intervalo de consagración de 12 Mb, pudimos definir una región candidata que contenía 9 genes descritos. Estos 9 genes fueron descartados por secuenciación como responsables de la enfermedad. La búsqueda in silico de nuevos genes nos condujo a la identificación de un nuevo gen, que denominamos CERKL (ceramide kinase-llike) porque codifica una proteína similar a ceramida quinasa. La secuenciación de la región codificante de CERKL en la familia RP26, nos permitió identificar una mutación puntual (R257X) en el exón 5 del gen, en homocigosis en los individuos afectos. Esta mutación produce el truncamiento prematuro de la proteína CERKL, en medio del dominio quinásico. El gen CERKL se expresa en la capa de células ganglionares y en los fotorreceptores de la retina. El descubrimiento de CERKL como gen RP26 relaciona por vez primera la apoptosis característica de la degeneración retinal con una alteración del metabolismo de los esfingolípidos, que ha sido implicado en varios procesos de supervivencia y muerte celular.

Autor: FERNÁNDEZ SÁNCHEZ M. ELENA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: La Epilepsia MioclóDÍca Progresiva tipo II (EMP2) o Enfermedad de Lafora es una patología autosómíca recesiva que se caracteriza por la presencia sistémica de unos cuerpos de inclusión intracelulares PAS positivos, similares al glucógeno o a la amilopeptina, denominados Cuerpos de Lafora. El cuadro clínico viene definido por ataques mioclónicos, epilepsia y un deterioro neurológico progresivo. Una vez detectados los primeros síntomas, la mayoría de los enfermos fallecen en un período inferior a diez años. Hasta la fecha. se han descrito dos genes implicados en la enfermedad, EPM2A que codifica para laforina, una proteína fosfatasa dual, y EM2BP o NHLRC1 que codifica para malina, una posible E3 ubicuitina ligasa. Sin embargo, aún se desconóce el papel que pueden tener ambas proteínas en el metabolismo celular. La presencia de los Cuerpos de Lafora en los -pacientes ha hecho siempre sospechar que se trata de una patología relacionada con las glucogenosi. Para intentar desentraftar los mecanismos fisiológicos involucrados en esta enfermedad, iniciamos. una búsqueda de proteínas reguladoras y/o substratos que interaccionan con laforina. Este estudio se abordó expe~enta1mente mediante el sistema de doble lúbrido en levaduras en el que se enfrentó la proteína laforina con una genoteca humana de cDNA de músculo esquelético y de cerebro. Como resultado de estos ensayos se han identificado siete proteínas que interaccionan in vitro con laforina. Estas proteínas son: la propia laforiDa, malina, RS, RanBPM, RFP, PIASy y Palsl. Los resultados de esta tesis, por tanto, establecen por primera vez una relación directa de laforina con el metabolismo del glucógeno a través de su ÍDteracción con RS, una proteína de anclaje de la enzima PPl y sus substratos sobre las partículas de glucógeno. Por otro lado, la interacción de laforina con malina, la segunda' proteína descrita como responsable de la enfermedad, sugiere que ambas forman un complejo y de esta forma participan conjuntamente en una misma ruta metabólica dentro de la célula 10 que explicaría que las mutaciones en una u otra de las proteínas ocasionen un fenotipo idéntico de enfermedad. También hemos confirmado que laforina interacciona con AMPK.,una quinasa que participa en el control del balance energético de la célula. Una de las funciones de AMPK, activada como respuesta al estrés, al ejercicio o a la falta de nutrientes, es la inhibición en la síntesis de glucógeno mediante la fosforilación de las enzimas clave. Nuestros resultados confirman que AMPK también es capaz de fosforilar in vitro a laforina y RS, estableciendo un nuevo nexo de unión de laforina tanto con el control del metaboliMO del glucógeno como con el balance energético celular, lo que podría explicar la sintomatología de la enfennedad qUe Cursa con Cuerpos de Lafora, epilepsia y degeneración neuronal. Las interacciones con el resto de proteínas, Rm1BPM, RFP, PIASy Y Pa1s1, sugieren la existencia de uno o varios complejos multiproteicos en los que laforina y malina podrian ejercer un papel regulador de distintos procesos celulares.

Autor: BALLESTEROS REDONDO ISABEL.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Mediante la técnica de RAPD se ha detectado una banda, denominada F13c, que variaba en el patrón de amplificación de todas las plantas regeneradas albinas no ocurriendo lo mismo en las plantas verdes regeneradas de la misma línea celular. El análisis de la secuencia de F13c indica que presenta similitud con secuencias relacionadas con retrotransposones. Al analizar, mediante PCR inversa, un fragmento de 7 Kb correspondiente a las regiones adyacentes a esta secuencia se comprueba que se trata de una secuencia mitocondrial. Se ha comprobado, empleando la técnica de PCR cuantitativa, el incremento del numero de copias de F13c y otras dos secuencias mitocondriales de centeno (coxIII y atpA) en plantas albinas y en callos, observándose que en estos casos existe un aumento general del número de moléculas de DNA mitocondrial. Hemos analizado la presencia de esta secuencia en genomas de especies relacionadas filogenéticamente con centeno. Se han usado especies de la familia Poaceae, estudiando preferentemente el grupo perteneciente a la tribu Triticeae. Este análisis parece indicar que este fragmento se integró en la mitocondria al principio de la evolución de la subfamilia podrían haber perdido esta secuencia. Al utilizar esta secuencia para inferir relaciones citoplásmicas dentro de la subfamilia Pooideae mediante tres métodos distintos (distancia, parsimonia e inferencia Bayesiana) se comprueba que la tasa de sustitución nucleótidica es muy baja y que, en este caso, las inserciones y deleciones en la secuencia F13c resultan informativa filogenéticamente. Se ha puesto de manifiesto la utilidad de secuencias mitocondriales no codificadoras para establecer relaciones evolutivas entre especies próximas. Además se ha detectado la presencia de heteroplasmia mitocondrial en las especies analizadas dentro de esta subfamilia.

Autor: RUBIO MOSCARDÓ FRANCISCA.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA [Más tesis de esta universidad] [www.uv.es].
Centro de lectura: Facultad de Matemáticas.
Centro de realización: HOSPITAL CLÍNICO UNIVERSITARIO DE VALENCIA.

Resumen: El linfoma de células del manto (LCM) es un tipo de linfomas no Hodgkin (LNH-B) causado por laproliferación neoplásica de linfocitos B procedentes de la zona del manto folicular del ganglio linfático, generalmente en un estadio previo al paso por el centro germinal. Ellinfoma del manto (LCM) representa entre el 5-10% de los LNH-B y se manifiesta generalmente en individuos de edad avanzada (edad media de 60 años) y predominantemente en varones. Los pacientes con linfoma del manto (LCM) pueden presentar una enfermedad nodal o leucémica. Los determinantes moleculares que conllevan a esta diferente presentación clínica no son bien conocidos. Por ello, con el fm de identificar un patrón de alteraciones genómicas característico del LCM e intentar correlacionarlo con las diferentes formas de presentación clínica de la enfermedad, se realizó un prímer estudio en el que comparamos el patrón de alteraciones genómicas en un grupo de 28 pacientes con LCM con la t(II;14)(qI3;q32) con presentación nodal o leucémica, utilizando las técnicas de hibridación genómica comparada (CGH) e hibridación con fluorescencia 'in situ' (FISH) para locus génicos específicos. Aunque ambas formas de presentación clínica de LCM, leucémicas y nodales, presentan un patrón genómico similar, la pérdida del brazo corto del cromosoma 8 fue más frecuente en pacientes con enfermedad leucémica (79% versus 11 %, p menor que 0.001). La pérdida genómica de 8p fue posteriormente descrita como una alteración frecuente en LCM. Sinembargo, la asociación de la pérdida de 8p con la leucemización del LCM no ha sido conf1rmada en estos trabajos. Estudios posteriores de pérdida de heterocigosidad (LOH) y, en menor medida, de hibridación genómica comparada (CGH), demuestran que la pérdida alélica en el brazo corto del cromo soma 8 (8p) no solo es frecuente en LCM sino que es una de las alteraciones más comunes en otros tipos de LNH-B y en diversos cánceres epiteliales. Esta alteración se ha descrito en un 30-60% de los carcinomas de próstata, mama, hígado, pulmón, cabeza y cuello, colo-rectal, ovario, vejiga y meduloblastoma. Clínicamente, la mayoría de estudios asocian esta pérdida cromosómica con tumores en estadio avanzado, progresión de enfermedad y enfermedad metastásica. Estos datos indican la posible presencia de un gen supresor de tumores en el cromosoma 8p, cuya deleción podría estar asociada con la diseminación leucémica y con un peor pronóstico en pacientes con LCM y con otras neoplasias. Con el fin de determinar un patrón genómico característico del LCM y perfilar las alteraciones gen éticas con mayor resolución se estudió el perfil genómico tumoral de una seríe de pacientes con LCM (n=68) así como de un conjunto de líneas celulares derivadas de LCM y de otros tipos de LNH-B (n=33) mediante un microarray de elevada resolución basado en hibridación genómica comparada (array-CGH)Este estudio nos permitió establecer un perfil genómico en el LCM distinto del resto de los LNH-B incluyendo las deleciones de lp21 y llq22.3 (ATM), la coincidente amplificación dellocus BMLl en 10p14 y la deleción en 10p14, así como la pérdida de 9q21-q22 no identificada previamente. Alteraciones específicas fueron asociadas con un subgrupo distinto de pacientes con LCM. Notablemente, 11 pacientes con LCM leucémico presentaban un perfil genómico diferente de los casos de LCM nodales, incluyendo la deleción de 8p21.3 donde se localiza el cluster de genes que codifican para los receptores de TRAIL (ligando inductor de apoptosis relacionado con el factor de necrosis tumoral)(55% v s 19% p=0.01) y la ganancia de 8q24.1-10cus (46% v s 14% p=0.015). Adicionalmente, LCM leucémicos presentan frecuentemente mutaciones de IGHV (64% v s 21% p=0.009) con un uso preferencial de VH4- 39 (36% v s 4% p=0.005) y seguían un curso clínico má 8 s indole d26 nte. En las variantes blastoides, el incremento en el número de ganancias y las deleciones de los genes PI6/INK4 y TP53 fue correlacionado con un peor pronóstico, mientras que la pérdida de lp21 fue asociada con una supervivencia prolongada (p=0.02). En un análisis multivariado, la deleción de 9q21-q22 fue el factor que mejor predijo una supervivencia más prolongada (HR:6, CI:2.3-15 .7). Este estudio da a conocer el perfil genómico como un predictor de la evolución clínica de los pacientes y sugiere que un "scanning genómico" de las regiones cromosómicas de lp21, 9q21-q22, 9p21.3-PI6/INK4a y 17pI3.1-TP53 podría ser clínicamente útil en el LCM. La delección del cromosoma 8p es un evento frecuente en el LCM y en otros subtipos de LNH-B, lo cual sugiere que en esta región podría albergar un gen supresor de tumores implicado en esta enfermedad. Con el fin de corroborar esta hipótesis caracterizamos estas deleciones en una serie de pacientes y líneas celulares derivadas de distintos subtipos de LNH-B mediante la combinación de array-CGH e hibrídación con fluorescencia "in situ" (FISH). El solapamiento de las regiones de deleción nos permitió delimitar una mínima región de deleción (MRD) de 600 Kb en 8p21.3, siendo una línea celular de LCM (Z-138) la que presentaba una deleción monoalélica de 650 Kb. La MRD se extiende desde el BAC RPII-382J24 más telomérico al RPl1-109B10 más centromérico e inclu e allocus de los enes ue codifican ara los secuenciación de la MRD de 650 Kb presente en la línea celular Z-138 no identificó ninguna mutación en el alelo no delecionado de los genes presentes en la región. No se identificaron mutaciones en los genes R- TRAIL en pacientes ni en líneas celulares derivadas de distintos LNH-B. El análisis de expresión génica utilizando un microchip de cDNA "Lymphochip" y RT -PCR cuantitativa mostró la baja expresión de los genes receptores de TRAIL, TRAIL-Rl y TRAIL-R2 , como un evento consistente en LNH-B con deleción de 8p21.3. La inactivación por mecanismos epigenéticos fue excluida al analizar la metilación de los promotores de estos genes. Estudios "in vitro" de las líneas celulares demuestran que la apoptosis inducida por TRAIL es dependiente de la dosis génica y proteica de TRAIL-Rl y TRAIL-R2 en muchos tumores. La resistencia a la apoptosis de las líneas celulares con una simple copia de 8p21.3 fue revertidamediante la restauración de la expresión de TRAIL-Rl y TRAIL-R2 mediante transfeción génica. Estos datos sugieren que TRAIL-Rl y TRAIL-R2 actúan como un gen supresor de tumores dependiente de la dosis génica de modo que la deleción monoalélica puede dañar la inducción de la apoptosis por TRAIL en LNH-B.

Autor: PINEDA TOMÁS DAVID.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE GENÉTICA. UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: En este trabajo se identificaron de los presuntos componentes de la red génica implicada en la regeneración de los ojos en planarias. Se aisló un fragmento del gen de la opsina, Gtops. Este gen se expresa en los cuerpos neuronales de las células fotoreceptoras. Se identificaron 2 genes de la familia Six/sineoculis en planarias: Gtsix 1 y Gtsix 3. El gen Gtsix 1 se expresa en los cuerpos neuronales de las células fotoreceptores de los ojos adultos de planarias. Este gen es necesario para el mantenimiento del estado diferenciado de las células fotoreceptoras y es esecial para la regeneración de los ojos de estos organismos. El gen Gtsix3 se expresa en un grupo de células envolviendo a los ganglios cefálicos que correspondería a la parte distal de las ramas cefálicas que conectarían los ganglios cefálicos con los distintos sensores distribuidos a lo largo de los márgenes de la cabeza. Finalmente, se han identificado dos genes de la familia Pax6; Pax6A y Pax6B, que estan altamente conservados en las dos especies de planaria Dujesia japonica y Girardia tigrina. Pax6A es mucho mas similar a otras proteinas Pax6 que Pax6B, que sería el gen Pax6 mas divergente conocido. Los homólogos de Pax6 de planarias no muestran una clara ortología con los genes duplicados de Drosophilia, eyeless y twin of eyeless, cosa que nos sugiere una duplicación independiente en algun tríclado o platihelminto ancestral. Pax6A se expresa en el Sistema Nervioso Central de las planarias intactas, marcando tanto células de los ganglios cefálicos como de los cordones nerviosos ventrales y su expresión se activa durante el procso de regenaración de la cabeza. Pax6B sigue un patrón de expresión muy similar pero con unos niveles de expresión mucho más bajos. Se detectan transcritos de Pax6A y Pax6B en las células visuales solo a nivel ultraestructural, debido problamente a la presencia de una cantidad muy limitada de estos transcritos en dichas células. La inactivación de Pax6A y Pax6B mediante la técnica de RNAi no permitió observar ninguna inhibición ni del mantenimiento del estado diferenciado de las células fotoreceptoras ni de la regeneración del ojo. Esto nos lleva a sugerir que los genes Pax6 de planarias no serían esenciales para el control de la regeneración de los ojos en planarias.

Autor: FRIGOLA MAS JORDI.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: AULA DE GRAUS.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA.

Resumen: Los dos principales objetivos de esta tesis son: 1) Realización de un estudio global. 2) Análisis y caracterización de alteraciones recurrentes. En los cambios genómica asociados al cáncer colorectal. Con la finalidad de conseguir dichos objetivos. Desarrollamos una nueva técnica de análisis de los cambios de metilación. Que llamamos Amplification of InterMethylated Sites (AIMS). A partir de esta técnica. Los resultados de esta tesis se dividen en dos grupos bien diferenciados. Un primer bloque de dos estudios globales (primer objetivo). Y un segundo bloque de análisis más especídicos (segundo objetivo). En el primer estudio global analizamos la contribución de las ganancias i las perdidas a lo largo del proceso tumoral. La principal conclusión de este trabajo fue la independencia entre estos cambios a nivel de características tumorales (fisiológicas y genéticas). Así como de pronóstico y contribución en la progresión tumoral. En el segundo estudio global. Nos centramoso en las pérdidas de metilación genómica y su relación con el daño genómico y mal pronóstico. Referente a los estudios. En un primer trabajo hemos descrito elsilenciamiento epigenético del gen síntasa de protaciclinas (PTGIS). Este silenciamiento se da en una elevada frecuencia en cáncer colorectal y se encuentra significativamente asociado con el grado de aneupliidia del tumor. Finalmente, en el segundo estudio específico, describimos el silenciamiento epigenético de toda una banda citogenética (2q14.2). Se describe la participación de la metilación genómica y las modificaciones post-transcipcionales.

Autor: PLANS CALAFELL VANESSA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA, FACULTAD DE BIOLOGÍA..

Autor: CRUZ RODRÍGUEZ FERNANDO.
Año: 2004.
Universidad: VIGO [Más tesis de esta universidad] [www.uvigo.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Seiscientas treinta y cinco secuencias de ADN procedentes de 35 especies de molusco s, se usaron como soporte taxonómico para investigar los patrones de distribución de polimononucleótidos (poli-(A/T) y poli-(G/C)) en regiones genómicas de distinta funcionalidad. Este estudio muestra que la distribución de los dos tipos de polimononucleótidos no se ajusta a lo esperado por azar en regiones no codificantes (intrones-UTR y ADN intergénico), mientras que sí lo hace en exones. Este hecho se explica por las restricciones selectivas que limitan la expansión y contracción de las repeticiones situadas en regiones codificantes. La distribución de las clases de tamaño del tándem se ajusta a una exponencial decreciente, a medida que aumenta el número de repeticiones. Este hecho permite descartar la existencia de un tamaño umbral para el patinazo de replicación, concepto muy extendido en los modelos de mutación, y apoya el comportamiento probabilístico del mismo. La densidad de repeticiones poli-(AlT) no está correlacionada con la cantidad de ADN de las especies estudiadas y podría estar más relacionada con la tasa de mutación de cada genoma y con su contenido A/T. El conocimiento de la distribución de microsatélites de motivos superiores a 1 pb en eucariotas, es fundamental para clarificar la abundancia diferencial de microsatélites bajo una perspectiva evolutiva. Utilizando datos de 3.165 secuencias de ADN de 326 especies de bivalvos, se han estudiado los patrones de distribución de microsatélites en distintas regiones genómicas. Algunos motivos microsatélites de bivalvos muestran las densidades genómicas más bajas observadas en eucariotas, lo cual podría estar relacionado con el exceso de polimononucleótidos observado en algunas especies. Se enuncia la paradoja de los microsatélites según la cual, especies cercanas con un tamaño del genoma similar, muestran diferencias notables de riqueza en microsatélites. Los datos demuestran la distribución no aleatoria de microsatélites, puesto que están sobrerrepresentados en intrones (245 10ci/Mb) respecto a su frecuencia en exones (85 loci/Mb). Dado que el polimorfismo de los microsatélites que mapean en regiones codificantes no se comportará neutralmente, resulta imprescindible comprobar la neutralidad de los marcadores utilizados en estudios aplicados. Estas investigaciones son relevantes para mejorar nuestro conocimiento sobre las fuerzas que moldean la distribución de microsatélites en moluscos, y para optimizar modelos de mutación y evolución propuestos para microsatélites.