GENETICA, 2

Autor: RODRIGUEZ MARTIN IVAN.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: EDIFICIO ANTIGUO DE LA UNIVERSIDAD DE SALAMANCA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Las propiedades medicinales y analgésicas de la planta Cannabis sativa y sus distintos ingredientes psicoactivos, principalmente el (-)-9?-THC, han sido utilizados por la humanidad a pesar de los efectos psicotrópicos que conducen a la tolerancia y a la dependencia a sus efectos. La mayoría del conocimiento actual sobre los receptores cannabinoides se ha obtenido a partir de estudios realizados principalmente en mamíferos aunque quedan aún muchos detalles por investigar sobre las características del sistema cannabinoide a partir de otras especies de organismos. En esta tesis, demostramos que existen sitios de unión para ligandos cannabinoides, estéreo específicos y saturables, en el cerebro del pez Cebra (Danio rerio). Además, hemos aislado y caracterizado molecularmente dos nuevos receptores cannabinoides putativos en el pez Cebra, que presentan elevada homología con los receptors cannabinoides CB1 y CB2, respectivamente. Cb1 de pez Cebra se expresa principalmente en el cerebro, en todas las subdivisiones principales y Cb2 de pez Cebra se expresa en la periferia, aunque también en el cerebro y en la hipófisis (RT-PCR e HIS). Nuestros resultados a partir de estudios de unión con los ligandos [3H]-CP55940 y [3H]-WIN55212-2 nos han permitido identificar un sitio específico de unión para ambos ligandos a partir de membranas procedentes de cerebro de pez Cebra y también de células HEK-293 transfectadas de manera estable con el receptor Cb1 de pez Cebra. En los estudios de competición encontramos que solamente el WIN55212-2 es capaz de desplazar significativamente al propio [3H]-WIN55212-2 siguiendo el modelo que se ajusta a la existencia de dos sitios de unión. Por otra parte, el WIN55212-2, además de la anandamida, fue capaz de activar el receptor, mediante la inhibición de la concentración intracelular de cAMP. Además, demostramos, por primera vez, que un receptor cannabinoide no mamífero puede también sufrir internalización, ya que el receptor Cb1 de pez Cebra, internaliza en presencia de WIN55212-2, en un proceso dependiente de PKC y no de PKA. El receptor Cb2 de pez Cebra no es capaz de unir ligandos cannabinoides ([3H]-CP55940 y [3H]-WIN55212-2), según nuestros experimentos a partir de membranas procedentes de células HEK-293 que lo expresan de manera estable Ambos receptores presentan características únicas que pueden proporcionar nuevas pistas para ayudar a entender el funcionamiento del sistema cannabinoide a lo largo de la evolución.

Autor: PASCUAL LUCAS MAYA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA DEL CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Muscleblind, abreviadamente mbl, es un gen esencial en el desarrollo de Drosophila melanogaste. En este trabajo identificamos y analizamos los genes mbl en el genoma humano encontrando que tienen una estructura genomica muy conservada y que por tanto se trata de genes paralogos. Los genes mbl humanos, genéricamente MBNL, están sujetos a un complejo patrón de procesado alternativo y tienen patrones de expresión diferentes 10 que sugiere que realizan funciones distintas. Existe un solo gen mbl en invertebrados que se caracteriza por codificar una proteína con un par de dedos de zinc del tipo CX7CX6CX3H, mientras que en vertebrados existen tres genes cada uno de los cuales codifica una proteína con dos pares de dedos de zinc del mismo tipo. El análisis de la secuencia de estos dedos de zinc sugiere que el segundo par de dedos de vertebrados ha surgido por duplicación de los dos que existen en invertebrados. Las proteínas Mbl humanas (MBLN) están implicadas en la ruta de patogenesis de la Distrofia miotonica (DM). En este trabajo, encontramos un polimorfismo en el gen mbl humano, MBNL 1, y analizamos su posible relevancia como modificador del fenotipo de la DM. Además, descartamos la presencia de mutaciones en la región codificante de MBNL 1 en pacientes con DM sin expansión en el gen DMPK y en pacientes con Retinitis pigmentosa, y en el gen MBNL 3, en pacientes con Ptosis congenita asociada al cromosoma X. Finalmente, desarrollamos dos aproximaciones para aportar datos sobre la función molecular de mbl en un organismo fácilmente manipulable como es Drosphila. En una aproximación genética realizamos un rastreo de modificaciones dominantes del fenotipo de sobreexpresión de mbl en ojos. Los genes que han interaccionado con mbl pertenecen, principalmente, a una de estas tres categorías: Metabolismo del RNA, factores de transcripción y Regulación de la apoptosis, 10 que significa que la función de mbl puede estar relacionada con todos estos aspectos. En una aproximación bioquímica, utilizamos la técnica dela coinmunoprecipitación para identificar proteínas que interaccionen físicamente con Mbllo que nos ha permitido identificar 6 bandas coinmunoprecipitadas específicamente, y descartar la presencia en el coinmunopecipitado de algunas proteínas candidatas como Jumu, Aly, Amos y NonA.

Autor: MUÑOZ FORCADA ICIAR.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: IATS-CSIC.

Resumen: Este trabajo abarca distintos aspectos de la metodología de la transferencia génica en lubina, tanto "in vitro" como "in vivo". Por una parte, se ha centrado en el estudio y evaluación de la transferencia génica somática como posible sustitución a la transgénesis estable en distintas aplicaciones. Por otra parte, se ha evaluado el sistema de regulación por tetraciclina para la regulación de genes exógenos en peces. Por último, se ha probado que una línea celular de lubina puede utilizarse como sistema de expresión de genes exógenos. Los resultados demuestran que la inyección de DNA plasmídico es eficiente para transferir genes exógenos a músculo de lubina. Por primera vez en peces se ha utilizado esta técnica para secretar a sangre una hormona gonadotropa recombinante de cadena única. En cuanto a la evaluación de diferentes versiones del sistema de regulación por tetraciclina en peces para el control de la expresión de genes exógenos, podemos concluir que la opción más eficiente es el uso del transactivador tTA bajo el control de un promotor estable. Además, se ha ideado una estrategia basada en el uso de un plásmido nuevo ptet-luc+-pur+/GFP que facilita la tarea de buscar clases con un funcionamiento óptimo del sistema. Por último, los resultados obtenidos con la línea celular SBL de lubina permiten señalar esta línea como un sistema de lubina apto para la expresión de genes exógenos y la realización de estudios de la función génica.

Autor: ARMENGOL DULCET LLUÍS.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: UNIVERSITAT DE BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: Las duplicaciones segmentarías (SDs) son bloques de secuencia de los genomas de tamaño superior a 1000 pares de nucleóticos (1 kb) y que se encuentran en más de una localización cromosomica, debido a un proceso de duplicación reciente a lo largo del proceso evolutivo. Los proyectos de secuenciación de los genomas han puesto de manifiesto la existencia de un número más elevado de estas estructuras del que se creía con anterioridad. Se ha observado la presencia de SDs en lugares donde se producen reordenamientos cromosómicos que dan lugar a las denominadas enfermedades genómicas y se ha demostrado su papel como causante de dichos reordenamientos. Asimismo, al comparar las secuencias de los genomas de distintas especies, se ha observado una gran cantidad de estas estructuras en los lugares cromosómicos en los que se han producido roturas del orden los cromosomas (sintenia) a lo largo de la evolución. El trabajo presentado en esta tesis hace referencia al uso de herramientas computacionales para demostrar la presencia y enriquecimiento de SDs en los lugares cromosómicos donde se han producido reordenamientos causantes de reordenamientos en enfermedades genómicas y de reordenamientso evolutivos entre los genomas del hombre, el ratón y la rata. Estos hallazgos permiten implicar a las SDs no sólo como causantes de enfermedades humanas, sinó también como responsables de reordenamientos cromosómicos que han estado implicados en le proceso de evolución.

Autor: GUTIERREZ DIEZ M. CRUZ.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El rechazo agudo del corazón trasplantado es un proceso multifactorial complejo en el que intervienen tanto moduladores ambientales como moleculares. En la última década está adquiriendo una especial importancia las citoquinas las cuales dependen de genes polimórficos. Las citoquinas son el código de señales que sirven para trasmitir información de forma rápida y directa entre las distintas células de la inflamación, inmunidad y hematopoyesis, modulando así la intensidad de la respuesta inflamatoria. Gran número de publicaciones otorgan especial importancia al Factor de Necrosis Tumoral (TNF-alfa) e interleuquina 10 (IL-10). La hipótesis de este trabajo se basa en la consideración de que ser portador de haplotipos TNF-alfa, relacionados con la sobreexpresión del mismo, en combinación con haplotipos relacionados con la infraexpresión IL-10, son alto factor de riesgo de rechazo agudo del injerto; mientras que en combinación con sobreexpresión o expresión media de IL-10 supone un riesgo moderado. El estudio se ha realizado en población relacionada directamente con el Hospital Universitario Marqués de Valdecilla que comprende 141 controles, donantes de sangre de este hospital, y 133 trasplantados cardiacos. Se han considerado como variables dependientes o susceptibles de controles, donantes de sangre de este hospital, y 133 trasplantados cardiacos. Se han considerado como variables dependientes o susceptibles de enfermedad, la manifestación clínica de rechazo agudo del injerto, y la cardiopatía isquémica como causa de necesidad del trasplante. Se han considerado como variables independientes o susceptibles de ser factor de riesgo, el ser portador de los haplotipos mencionados. Los resultados ponen de manifiesto que el análisis aislado del peso deTNF-alfa no es relevante, sin embargo cuando se considera IL-10 como factor modulador del perfil proinflamatorio de TNF-alfa, se demuestra que ser portador del perfil sobreexpresión TNT-alfa con sobreexpresión o expresión media de IL-10 supone riesgo de rechazo y concretamente en los que tienen antecedente de cardiopatía isquémica, mientras que con infraexpresión de IL-10, la prevalencia es inferior a la esperada en los trasplantados con respecto a los controles, con diferencias estadísticamente significativas y con una Odds Ratio inferior a la unidad. Ante este resulado se ha analizado el perfil genético TNF-alfa / IL-10 en los fallecidos durante el primer mes del trasplante y que en un principio fueron excluidos por la imposibilidad de ser catalogados en rechazadores y no rechazadores ; el 44% de los mismos son portadores de este perfil y su análisis con respecto al resto de los trasplantados, ponen de manifiesto una Odds Ratio de casi 8. El perfil de infraexpresión de TNF-alfa con IL-10, no se demuestran diferencias significativas.Esta Tesis Doctoral sugiere que la caracterización genética TNF-alfa / IL-10 podría ser de utilidad como ayuda diagnóstica de Rechazo Agudo del Corazón Trasplantdo y de la individualización del tratamiento de estos pacientes, bien el convencional o bien las nuevas tendencias basadas en los anticuerpos monoclonales de última generación anti TNF-alfa. Además se justifica la continuidad de esta línea de investigación, con el objetivo de ampliar la batería de pruebas diagnósticas tanto en el Trasplante Cardiaco como en la Cardiopatía Isquémica antes de llegar a la situación de muerte súbita o necesidad de trasplante.

Autor: TATO RODRIGO IRANTZU.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La conjunción bacteriana es un ejemplo de tráfico de macromoléculas entre células, basado en la translocación de DNA de cadena sencilla a través de membranas mediante un sistema de secreción tipo IV. TrwBAN70 constituye el dominio soluble de la proteína TrwB, una proteína de membrana esencial en la conjugación que acopla el relaxosoma (complejo de nucleoproteína) al sistema de transporte del DNA en la conjunción del plásmido R388. La estructura cristalográfica de TrwBAN70 revela un hexámero formado por seis subunidades idénticas y un canal central. En este trabajo se caracteriza la actividad ATPasa dependiente de DNA de la proteína TrwBAN70. La proteína presenta cooperatividad positiva para la hidrólisis de ATP con al menos tres sitios catalíticos implicados en la hidrólisis. La actividad es sensible al pH y la concentración de sal, siendo más activa a valores bajos de pH. La longitud efectiva de DNA necesaria para la activación de la actividad A TPasa se encuentra entre 40 y 45 bases y ésta misma longitud es necesaria para la formación de complejos TrwBAN70-DNA de elevado peso molecular, tal y como se observa mediante cromatografía de gel filtración. La mutación de un residuo de triptófano (W216A) situado en el canal central de la proteína origina una proteína defectiva en la hidrólisis de ATP. Por otro lado, este mutante ejerce un efecto dominante negativo tanto en la frecuencia de conjugación del plásmido R388 como en la hidrólidis de ATP, avalando el estado oligomérico de la proteína. La hidrólisis de ATP no se encuentra acoplada a una actividad helicasa en las condicones ensayadas. Por otro lado TrwBAN70 interactúa con el relaxosoma mediante la proteína TrwA, que se ha observado estimula la hidrólisis de ATP de TrwBAN70 mediante contactos proteína-proteína. Estos resultados, avalados además por la similitud estructural de TrwBAN70 con el complejo F1-ATPasa, nos llevan a proponer una función como transportador de DNA para la proteína TrwB.

Autor: MONTORO PONSODA TERESA M..
Año: 2005.
Universidad: MÁLAGA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE MÁLAGA.

Resumen: El odio causado por el hongo Podosphaera xanthii es una de las enfermedades más importantes y extendidas por todas las zonas de cultivo del melón. La mejora para resistencia a esta enfermedad presenta la dificultad de la gran variabilidad del patógeno, del que se han detectado numerosas razas fisiológicas que, en algunos casos, son difícilmente distinguibles basándose únicamente en el empleo de cultivares diferenciales. Esta tesis aborda el problema desde dos aproximaciones posibles: 1,- Buscando e identificando nuevos genes de resistencia. 2,- Caracterizando mediante marcadores de ADN, distintas razas fisiológicas del hongo.

Autor: DIAZ FONT ANNA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: DEPTO. GENÉTICA, FACULTAD DE BIOLOGÍA - UB.

Resumen: La enfermedad de Gaucher es una enfermedad de acumulo lisosomal causada por una deficiencia del enzima Glucocerebrosidasa o, en algunos casos, de su activador la Saposina C. En esta tesis hemos caracterizado mutaciones que se forman a partir de recombinaciones entre el gen GBA y el pseudogen GBA. También hemos descrito una mutación en el gen PSAP. En cuándo a la terapia génica, hemos utilizado dos aproximaciones. En primer lugar, el uso de quimeraplastos para corregir mutaciones en el gen GBA. En segundo lugar, el uso de técnicas de RNAi para inhibir o reducir la formación de Glucosilceramida, que es la que se acumula en la enfermedad.

Autor: COLL VALERA OLGA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA - FACULTAT DE BIOLOGÍA.

Resumen: El Glutation (GSH) juega un papel fundamental frente al estrés oxidativo generado en respuesta a diferentes estímulos que producen un aumento de ROS derivados del oxigeno desde la mitocondria. La disminución selectiva del GSH por debajo de unos niveles críticos comprometen la viabilidad celular. El defecto en el transporte de este tripeptido al interior mitocondrial ocasionado por la perturbación del entorno lípidico de las membranas mitocondriales debido a por ejemplo la intoxicación crónica de etanol, es de vital importancia, ya que la recuperación de este transporte restablece la viabilidad celular al recuperarse los niveles óptimos de 65 HM. El transportador de oxoglutarato se ha descrito en esta tesis como transportador de GSHm gracias a experimentos de expresión de su ANR en oocitos de Xenogous Laevis. Este transportador también se caracteriza por poseer su actividad defectuosa en condiciones de intoxicación crónica de etanol. El transportador de oxoglutarato posee características del componente de baja afinidad y comparte algunas particularidades descritas para el transportador de 65 Hm, siendo la más remarcable la sensibilidad a los cambios de fluidez de la membrana mitocondrial

Autor: PEREZ CARO Ma. JESUS.
Año: 2005.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: INST. DE BIOLO. MOLE. Y CELU. DEL CANCER.
Centro de realización: INSTITUTO BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DEL CANCER.

Autor: GARCIA ARANAGA MIREN ITXASO.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DEL PAIS VASCO.

Resumen: Los factores de transcripción E2Fi y E2F2 están implicados en la regulación de la proliferación, la apoptosis, la diferenciación, el metabolismo, la replicación el DNA y la tumorigénesis. La caracterización tímica de los ratones mutantes para E2F1 y E2F2 nos ha permitido determinar la importancia de estos genes en el desarrollo intratímico. El gen E2F1 es un importante inductor de la apoptosis durante la selección negativa en el timo, mientras que el gen E2F2 juega un papel esencial en la represión de la proliferación de los timocitos estimulados vía TCR. Ambos genes, E2F1 y E2F2, despeñan funciones importantes en la prevención del desarrollo de linfomas tímicos inducidos por radiación ionizante. El control del ciclo celular es un proceso esencial en la célula, y su alteración puede desencadenar la división celular incontrolada, origen de proceso como el cáncer y la autoinmunidad, o puede originar la muerte celular propia de procesos degenerativos. Se considera que los factores de transcripción de la familia E2F (E2F1-8) son elementos críticos del control del ciclo celular, al regular la expresión de numerosos genes diana implicados en la replicación del DNA y la entrada y progresión en el ciclo. Asimismo, se ha sugerido la implicación de los E2Fs en multitud de otros proceso biológicos conectados en mayor o menor medida con el ciclo celular, como son la proliferación, la apoptosis, la diferenciación y el desarrollo tumoral. Sin embargo, se desconoce el papel científico que cada uno de los miembros de la familia juega en el control de estos procesos, así como los mecanismos por los que cada uno de ellos llevan a cabo su función. En el presente trabajo se ha analizado el papel de dos miembros de la familia E2F, E2F1 y E2F2 en la diferenciación linfocitaria y el desarrollo de tumores linfocitarios, haciendo uso de ratones modificados genéticamente portando mutaciones inactivadotas de E2F1 y E2F2 (E2F1-/- y E2F2-/-) y la metodología de microarrays de DNA para el análisis genómico. Se ha encontrado que E2F1 y E2F2 juegan un papel crítico en la diferenciación intratímica, mediante mecanismos diferentes. E2F1 está implicado en la tolerancia central, al inducir la apoptosis de los timocitos autorreactivos durante el proceso de selección negativa. La activación de genes mediadores de la función proapoptótica de p53 sugiere que la vía de la apoptosis promovida por E2F1 tras la estimulación del TCR es dependiente de p53. Por su parte, E2F2 no está implicado en la selección negativa, pero su inactivación conlleva la hiperproliferación de los timocitos estimulados vía TCR, y la desregulación de numerosos genes implicados en el metabolismo celular, y en especial del DNA, así como la respuesta proliferatvia, sugiriendo que E2F2 es un represor de la proliferación celular. Por tanto, contrariamente a lo postulado por el modelo vigente de regulación del ciclo celular, nuestros resultados sugieren que ambos genes funciona como reguladores negativos durante la diferenciación linfocitaria, aunque por mecanismos diferentes. El efecto combinado de ambos factores es la maduración correcta de los linfocitos T. Al mismo tiempo se ha encontrado que la pérdida de E2F1 y E2F2 confiere una susceptibilidad al desarrollo de linfomas tímicos, sugiriendo un papel para estos factores de transcripción de supresor de tumores.

Autor: CAMPOS PARADA JOSÉ LUIS.
Año: 2005.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA. UNIVERSIDAD DE VIGO.

Resumen: En esta tesis se describe la variación genética en poblaciones españolas de salmón Atlántico (salmo salar) y de trucha común (Salmo trutta). Esta tesis se encuentra estructurada en cinco capítulos: 1,- Variación para microsatélites en el salmón Atlántico de Galicia (noroeste de España). 2,- Introgresión y estructura poblacional en las poblaciones de salmón Atlántico (Salmo salar L.) del norte de España utilizando DNA mitocondrial. 3,- Variación genética espacial y temporal de poblaciones de trucha marina del noroeste de España. 4,- Variación genética para el MHC, DNA mitocondrial y loci microsatélites en poblaciones aisladas de trucha común (Salmon trutta). 5,- Recombinación y selección para el MHC de salmón.

Autor: AMO IRIBARREN JOAQUIN DEL.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: A pesar de los avances en diagnóstico y terapia, el cáncer de páncreas (PDAC) continúa siendo el de pero pronóstico de todos los tumores sólidos malignos. Durante el trabajo realizado en esta tesis doctoral, se llevó a cabo un análisis global de expresión génica en biopsias de PDAC, páncreas normal y pancreatitis crónica mediante microarrays de oligonucleótidos. Se identificaron transcritos diferencialmente expresados usando herramientas bioinformáticas, entre los cuáles, se seleccionaron 116 genes sobre-expresados en PDAC. Esta lista de genes se ordenó bajo un sistema de propiedad, teniendo en cuenta datos experimentales y bibliográficos. La expresión de 34 de estos genes se analzómediante RE-PCR cuantitativa a tiempo real para validar el resultado del microarray. Se clonaron y expresaron 10 de las proteínas codificadas por los genes diana y se generaron anticuerpos policlonales contra dos de ellas. Cinco de las proteínas codificadas por los genes identificados y validados por Q-RT-PCR, se detectaron también a mayor nivel en biopsias de PDAC respecto a los controles, mediante western-blotting. Así mismo, se evaluó el interés de algunos de estos anticuerpos como marcadores de diagnóstico diferencial el PDAC mediante inmunohistoquímic. Mediante una colaboración, se desarrolló un modelo animal de adenocarcinoma ductal de páncreas que reprodujo en cuanto a anatomía e histología las características del PDAC humano. Además se confirmó que los tumores de páncreas desarrollados por xenotrasplante en ratón, expresaban algunas de las dianas identificadas en las biopsias de PDAC humano, lo que permitirá ensayar, in vivo, terapias dirigidas contra los genes y proteínas identificadas.

Autor: CORREDOR MOLGUERO EDUARDO.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC BIOLÓGICAS.

Resumen: Triticum aestivum (trigo blando o panadero) es una especie alohexaploide, con un comportamiento cromosómico en meiosis diploidizado y regulado por el gen Ph1. En plantas mutantes para dicho gen, cromosomas homólogos y homeólogos pueden recombinar entre sí. En el presente trabajo se ha llevado a cabo un análisis de la dinámica cromosómica relacionada con el reconocimiento y sinapsis de los homólogos durante las etapas iniciales de la meiosis. Para ello se han utilizado diferentes líneas de adición y translocación trigo-centeno así como híbridos trigo centeno y triticale cuyos cromosomas o ciertas regiones de los mismos pueden identificarse mediante hibridación in situ con fluorescencia (FISH). La identificación de la posición de los cromosomas de centeno en células somáticas de las líneas de adición ha revelado que los homólogos se encuentran preferentemente separados, y lo mismo en interfase premeiótica, independientemente de la presencia o ausencia o ausencia del locups Ph1. Cromosomas distintos presentaron una organización diferente de la cromatina a lo largo del ciclo celular y respondieron de diferente manera a la ausencia del gen Ph1. El cromosoma 5RL incrementó su longitud proporcionalmente más que el 7R en la profase mitótica y apreció con relativa frecuencia organizado en dominios en interfase somática en ausencia del gen Ph1. Se ha encontrado también un efecto del gen Ph1 en el desarrollo de la sinapsis del brazo 2RS de centeno fusionados con el brazo 2BL de trigo. En dichos brazos, la sinapsis producido en el fenotipo mutante debió interferir con la formación de los quiasmas. Paralelamente se observo la formación de varios agregados centroméricos y un despliegue de la cromatina que conduce a un alargamiento considerable de los cromosomas que se extiende por todo el núcleo siguiendo un trazado sinuoso. Posteriormente se produjo la sinapsis, la desorganización de los agregados centroméricos y la disolución del agrupamiento telomérico. Los agregados centroméricos están formados por centrómeros homólogos y no homólogas, y su formación no guarda relación con la existencia de homología entre los cromosomas implicados ni está regulada por el gen Ph1. La asociación de centrómeros homólogos no se incrementó demandar significativa hasta la desintegración de los agregados centroméricos, en los estadios de bouquet tardío y cigotena temprana, por lo que estos agregados no parecen jugar ningún papel directo en la búsqueda de homología. Por el contrario, centrómeros de cromosomas telocéntricos, que se incorporaban al agregado telomérico, se asociaron con su homólogo mucho antes delo que hacían cuando se situaban en el centro de los cromosomas donde no migraban. Asimismo la utilización de marcadores distales permitió demostrar que en los cromosomas metacéntricos las regiones subteloméricas inician la sinpasis antes que las centroméricas y que por tanto la sinapsis progresa de los extremos hacia el interior del cromosoma. En líneas de adición disómicas 5RL, aunque el nivel de sinapsis en paquitena fue bastante mayor que en la frecuencia de asociación homóloga en interfase premeiotica. De todo ello se concluye que el apareamiento cromosómico en trigo puede surgir como consecuencia de una asociación previa al comienzo de la meiosis, de contacto en regiones intersticiales del cromosoma al desplegarse la cromatina, y mayoritariamente como consecuencia del acercamiento de los extremos teloméricos durante el estadio de bouquet.

Autor: CASAS TINTÓ SERGIO.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD CC BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS.

Resumen: La familia de factores de trascripción Firk head incluye diversos miembros implicados la biología del desarrollo de Drosophila melanogaster. En nuestro trabajo hemos caracterizado dos nuevos miembros de esta familia en Drosophila que codifican para dos proteínas homólogas a FoxF y FoxK de vertebrados. Ambas proteínas tienen un dominio de unión a ADN y son capaces de unir secuencias específicas del genoma. El gen de Drosophila FoxF muestra una homología del 63% en su dominio Fork Head (FH) con FoxF de vertebrado, contiene 4 exones que codifican para una proteína de 663 aa. El ARNm de FoxF se expresa en todos los estadíos de desarrollo desde embriones sin fecundar hasta adulto. La proteína FoxF se detecta a partir de estadío embrionario 10 en grupos de células que darán lugar al mesodermo visceral adyacente al sistema digestivo del adulto. La expresión de FoxF en el mesodermo visceral embrionario depende de moléculas difusibles como decapentaplegic (dpp) y de factores de trascripción como bapipe (bap). El factor de transcripción Fork Head FoxK de Drosophila muestra una identidad de aminoácidos en los dominios FH y Fork Head associated domain FHA del 70% con las proteínas homólogas de vertebrados. El gen se estructura en 8 exones que codifican para dos isoformas generadas pro procesamiento alternativo del ARN que lugar a dos proteínas de 654 y 740 aa.respectivamente. Ambas isoformas son capaces unir secuencias en el ADN y promover actividad trascripcional. La expresión de las isoformas se alterna a lo largo del desarrollo. La proteína FoxK se expresa desde las primeras etapas embrionarias. A partir del estadío 14 se muestra un patrón de expresión restringido al endodermo del sistema digestivo y a los neruoblastos de la cuerda nerviosa ventral. La expresión de FoxK en larva coincide en los mismos tejidos que en embrión además de las glándulas salivares y los discos imaginales. Mutaciones en el gen FoxK en Droshophila provocan malformaciones en el sistema digestivo y en el sistema nervioso embrionario y detienen su desarrollo de estadíos embrionarios tardíos. La región promotora de FoxK contiene sitios de unión paa las proteínas sMAd (vía de señalización de dpp), las sobreexpresiones de dppo implica la sobreexpresión de FoK y mutaciones en rasheterocigosis de ambos genes, muestran un efecto sinergístico de letalidad. Experimentos preliminares muestran que FoxK es necesario pero no suficiente para la expresión del gen homeótico labial en el endodermo.

Autor: ANGULO PARERA MIREIA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Autor: PÉREZ BROCAL VICENTE.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE AGROQUÍMICA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: La secuenciación del genoma de auchnera aphidicola del pulgón Cinara cedri (BCc}, representa el cuarto proyecto de secuenciación de un genoma completo de una cepa de a. aphidicola, el endosimbionte primario de los pulgones. A partir de este objetivo inicial, este trabajo analiza en profundidad las modificaciones particulares experimentadas por esta cepa en comparación a las restantes cepas secuenciadas, para tratar de demostrar como los procesos que caracterizan el estilo de vida simbiotica (reduccion genómica, incremento del contenido A+ T, aceleración de su tasa evolutiva, etc.} han sido Ilevados a su extremo en BCc. Se intenta reconstruir el panorama funcional de dicha cepa a la luz de los genes conservados, y se trata de discutir las aportaciones que este genoma tan pequeño puede representar para el estudio de genomas mínimos en el contexto particular de bacterias simbiontes de insectos. Finalmente, se apunta la importancia de la presencia de un simbionte secundario en esta especie de pulgon en la modulacion de las interacciones actuales entre el hospedador y el simbionte primario así como entre ambos simbiontes, a través del caso concreto de los genes implicados en la síntesis del aminoácido esencial triptófano.

Autor: ESTELA BOLTA ANNA.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA DEL CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Las proteínas de Bacillus thuringiensis se han utilizado tradicionalmente como método para el control biológico de plagas. De entre ellas, las del grupo Cry1A han sido la base de numerosos formulados comerciales basados en B. thuringiensis y, posteriormente, los genes cry1A se han expresado en determinados cultivos, como en el algodón y en el maiz (plantas Bt) para obtener, de esta forma, una expresion continuada en el cultivo y ofrecer una protección mas duradera. El algodón Bt es el segundo cultivo Bt más importante, y una de las plagas que provoca mayores destrozos en este cultivo en España es el lepidoptero Helicoverpa armigera. Esta especie, junto con otra plaga minoritaria del algodón, Earias insulana, se han estudiado en este trabajo para proponer estrategias adecuadas para evitar la aparición de resistencia a las toxinas Cry en campo. Los resultados de toxicidad obtenidos en E. insulana mostraron que la proteína Cry1Ac, que es la que expresa el algodon Bt de primera generación, confiere una buena protección para el control de esta especie además de para H. armigera. Uno de los pasos más importantes en el mecanismo de acción de las toxinas Cry es de la unión y, las alteraciones en este paso se han relacionado con niveles elevados de resistencia y son la base de la resistencia cruzada o múltiple. Para proponer un modelo de sitios de unión en el intestino medio de ambas especies y poder diseiñar estrategias adecuadas para evitar la aparición de resistencia cruzada en campo se realizaron ensayos de unión y competencia con vesículas de membrana (BBMV) preparadas a partir de intestinos de larvas de H. armigera y E. insulana con algunas de las toxinas Cry activas más utilizadas para el control de especies. Los resultados obtenidos muestran que el algodón Bt de segunda generación, que expresa Cry1Ac y Cry2Ab, es una buena estrategia para el control de H. armigera, ya que ambas toxinas son activas para esta especie y no comparten sitios de unión en el intestino del insecto. Para conferir una protección más duradera contra E. insulana al cultivo se podran utilizar las toxinas Cry1 Ba, Cry11a y CrygCa solas o combinadas Con Cry1Ac ya que no comparten sitios de union con esta. Se comprobó, además, en un estudio con marcadores moleculares del tipo AFLP que las poblaciones de H. armigera de las áreas colindantes al cultivo del algodón plantado en Andalucia, podran servir coma refugios naturales para la provisión de insectossusceptibles en caso de que en un futuro se aprobara algun evento de algodon Bt en España. Para completar el estudio se determino el patrón de proteínas de las BBMV que unen las proteínas Cry1Aa, Cry1Ab y Cry1Ac en una cepa susceptible (ANGR) y una resistente a Cry1Ac (ISOC) de H. armigera con un mecanismo de resistencia asociado a la pérdida de unión al receptor. Aunque aparentemente las tres toxinas unieron a cinco proteínas con iguales pesos moleculares en las dos cepas, podrían haber pequeñas diferencias entre las bandas no detectadas con esta metodología y otras proteínas que no se determinaron por su baja expresion. Entre las proteínas detectadas se hallaron la HaAPN1 , HaAPN2 y la fosfatasa alcalina, todas ellas propuestas previamente coma receptores candidatos de las proteinas Cry, pero no aparecieron aisladas dado que podrian no haberse separado bien en el gel SDS-PAGE de una dimension. Otra via utilizada para determinar las bases de la resistencia en ISOC fue mediante la utilizacion de micromatrices de ADNc preparadas con ESTs de intestinos de larvas de la cepa ANGR. Los resultados obtenidos muestran la expresion diferericial de ESTs en ambas cepas. Tras agruparlos par sus funciones asociadas, se mostro que, aunque en la mayoría de ESTs no se conocia su función asociada, las diferencias dentro de los grupos mayoritarios se asociaron con procesos de proteolisis y peptidolisis, glicosilación y detoxificación y con el metabolismo de carbohidratos y 8 de lipi 367 dos. Por lo que la resistencia desarrollada en ISOC se debe principalmente a la alteración del lugar de unión así coma a la modificación de otros procesos básicos del insecto.

Autor: LUCAS LLEDÓ JOSÉ IGNACIO.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIBLIOTECA DEL CAMPUS DE BURJASSOT.
Centro de realización: DEPARTAMENT DE GENÈTICA - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: A pesar que la major part dels casos de la malaltia de Parkinson son idiopàtics, també existeixen casos familiars amb patrons d'herència mendeliana. El descobriment d'alguns dels gens portadors de mutacions patogèniques va encetar una nova era per a la investigació de la malaltia de Parkinson. Una de les opcions que la identificació d'aquests gens ha fet possible es l'aplicació d'una miriada de mètodes d'anàlisi bioinformàtica, que han estat dissenyats per predir la funció gènica a partir de la informació continguda en les bases de dades. Des d'aquest punt de vista, hem dirigit l'atenció fonamentalment a dos dels gens les mutacions dels quals provoquen formes familiars de la malaltia de Parkinson: parkin i DJ1. En primer lloc, hem aplicat mètodes d'anàlisi comparativa per tal de reconstruir la història evolutiva d'aquests gens. l'anàlisi comparativa ens ha dut a proposar la validesa del fong Schizosaccharomyces pombe com a model on estudiar la funció cel.lular de DJ1. A més, ens ha permés també identificar tots els dominis proteics codificats per membres de la familia a la qual pertany parkin. Hem representat totes les combinacions conegudes de dominis proteics produïdes al llarg de l'evolució en forma d'un 'graf de dominis'. Aquesta representació ha fet possible l'aplicació de nous mètodes d'anàlisi dirigits a identificar conjunts de dominis proteics funcionalment relacionats. Per últim, hem desenvolupat un enginyós procediment de comparació dels patrons d'expressió gènica de gens ortòlegs en humans i en ratolins. Utilitzant dades d'expressió de domini públic, demostrem que els gens SNCA (que codifica la proteïna a-sinucleïna), UCHL 1, PINK1, DJ1 i parkin, tots ells implicats en la malaltia de Parkinson, presenten patrons d'expressió relativament conservats en les dues especies. L'anàlisi funcional dels gens que han conservat la coexpressió amb cadascun d'aquests cinc en humans i en ratolins ens ha permes detectar algunes categories de procés biològic potencialment associades a aquests gens.

Autor: MARCO CASTILLO ANTONIO.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MATEMÁTICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: Las enfermedades neurodegenerativas tienen una alta incidencia en poblaciones de edad avanzada, como es el caso de la sociedad occidental. Estas enfermedades se caracterizan por la pérdida progresiva de células nerviosas y la degeneración del sistema nervioso, produciendo daños irreversibles que muchas veces llevan a la muerte. En esta tesis se integran diferentes estrategias al estudio y comprensión de las enfermedades neurodegenerativas, y con especial atención a la enfermedad de Parkinson. En la primera parte de la tesis se desarrolla el estudio evolutivo de los genes GDAP 1 y UCHLl, implicados en las enfermedades de Charcot- Marie- Tooth y Parkinson respectivamente. De estos análisis se derivan nuevas hipótesis acerca de la función de estos genes,así como información para el uso racional de organismos modelos. En la segunda parte, se ha estudiado la conservación de los patrones transcripcionales de UCHLl en ratón y humano. En la última parte de la tesis se desarrollan una serie de nuevas estrategias para el estudio de las redes de interacción entre proteínas. Estas estrategias se aplican a datos recientemente publicados para humanos, analizando el contextofuncional de los genes UCHLl y parkin ( otro gen asociado a Parkinson). La integración de los resultados obtenidos mediante las diferentes estrategias aplicadas durante la tesis, nos lleva a proponer nuevos modelos celulares acerca de la etiología de la enfermedad de Parkinson.