GENETICA, 3

Autor: CAROLINA ELVIRA CESAR.
Año: 2006.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La conjugación bacteriana es un proceso de transferencia lateral de ADN, por el cual ADN plasmídico es transferido de una bacteria donadora a una bacteria recipiente de una manera unidireccional. Este proceso de transferencia requiere de una maquinaria congujativa formada por una serie de proteínas y por una región específica de ADN e cis, denominada origen de transferencia, oriT, donde comienza y termina la transferencia de material génico. Este conjunto de proteínas y ADN se denomina relaxosoma. El componente proteico fundamental de la relaxosoma es la relaxasa, encargada de cortar el ADN de manera sitio-específica en un sitio de nic de corte de la molécula y de la posterior religación de los extremos libres formados, una vez estos son separados de la cadena. R388 es un plasmado conjugativo de amplio rango de huéspedes, aislado originalmente en cepas de E.coli denomina TrwC. TrwC es una proteína de 966 aminoácidos y 107, 5Kda. En este trabajo hemos construido un sistema que nos permite estudiar la recombinación sitio específico entre dos secuencias oriT de una manera eficiente a dos velocidades. Recombinación de alta frecuencia se obtiene en presencia de la proteína catalítica TrwC y también de la proteína accesoria TrwA. Relaxasas conjugativas similares a TrwC de otros sistemas cercanos a R388 como son Tral de F y Tral de pKM101, no muestran esta misma capacidad recombinativa. hemos mapeado el dominio TrwC responsable de esta reacción mediante la construcción de una serie de mutantes puntuales y delecciones de la proteína. Mutaciones que incapacitan TrwC en su actividad de corte y transferencia de cadenas, también muestran un efecto negativo en la actividad recombinasa; sin embargo un mutante estable que retiene la actividad relaxasa de la proteína, N293, no es capaz de promover recombinación. Presentamos un nuevo dominio, TrwC N600, con correspondiente con el dominio de la relaxasa ni helicasa de TrwC que muestra una actividad recombinasa eficiente. En este trabajo hemos realizado así mismo un estudio sobre el componente nucleico mínimo necesario pra la recombinación sitio específica catalizada por TrwC. Este análisis sobre los sitios de recombinación sugiere una reacción direccional en la cual el requerimiento de DNA en cada sitio de recombinación es diferente; uno de los sitios, el cual proponemos es el iniciador de la reacción, requiere menos de 30bP mientras que el segundo de los sitios precisa de la menos 191bp. Esta reacción muestra independencia de caminos de recombinación homologa de la célula huésped para su resolución, sin embargo no podemos descartar la participación de otros mecanismos celulares en la reacción, como la replicación.

Autor: CARRERAS CARBONELL JOSEP.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE BARCELONA - CENTRO DE ESTUDIOS AVANZADOS EN BLANES (CEAB-CSIC).

Resumen: El grado de diferenciación poblacional de las especies marinas parece estar altamente relacionado con su capacidad de dispersión. En este trabajos se ha realizado la comparación de los niveles de estructuración poblacional entre dos especies de peces mediterráneos con distintas capacidades de dispersión en su fase larvaria y con capacidades de movimiento del adulto similares. Con el objetivo de delimitar de forma correcta las áreas de distribución de ambas especies, evitando así la presencia de posibles especies crípticas y para esclarecer los procesos que las han originado se ha realizado una filogenia molecular para ambas especies. Se han utilizado loci microsatélites altamente polimórficos para inferior los niveles de diferenciación poblacional para cada especie, así pues dos genotecas enriquecidas se han llevado a cabo para cada especie. Como conclusión se ha observado un mayor grado de diferenciación poblacional para le especie con una capacidad de dispersión menor en su fase larvaria que para la que poseía una mayor capacidad de dispersión menor en su fase larvaria que para la que poseía una mayor capacidad de dispersión, corroborando la hipótesis inicial de esta tesis.

Autor: ANIDO FOLQUEIRA JUDIT.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BIOLOGÍA.

Autor: MORALES TORRES CRISTINA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de realización: INSTITUT DE RECERCA ONCOLÓGICA.

Resumen: Estudio de la dinámica de respuesta de células de cáncer colorrectal al tratamiento selectivo con concentraciones crecientes de metotrexato, caracterizando la formación de amplicón "de novo" de la DHFR en 5q14.1, delimitando los puntos de rotura del amplicón y los mecanismos responsables del proceso de formación del amplicón. Finalmente estudiamos la sensibilidad de células resistentes al metotrexato, al propio fármaco.

Autor: PERMANYER I UGARTEMENDIA JON.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA (UB).

Autor: BOSCH MARIMON MANEL.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Autor: CASTELLS CANELA ENRIC.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: IBMB-CSIC.
Centro de realización: IBMB - CSIC.

Resumen: La señalización mediante receptores proteína quinasa (RPK) es un proceso bien estudiado, que normalmente incluye la auto-fosforilación de los mismos y la trans-fosforilación de moléculas señalizadoras. Sin embargo, se ha descrito un sistema animales la existencia de RPKs atípicos, incapaces de fosforilar. Se ha descrito su participación en procesos de señalización como plataformas de anclaje de módulos señalizadores, así como también su participación activa mediante eventos independientes de fosforilación. Durante este trabajo se ha llevado a cabo la caracterización de 2 genes de maíz clonados en el laboratorio, que codifican para un receptor quinasa atípico (MARK), defectivo en actividad quinasa, y una quinasa del tipo MAP4K (MIK), expresados durante la embriogénesis y en los meristemos de la planta adulta. MARK presenta alterados 3 aminoácidos altamente conservados del dominio quinasa, descritos como indispensables para la actividad de las proteínas quinasa. Experimentalmente se ha comprobado que no presenta actividad quinasa in vitro, sugiriendo que es un receptor atípico que señaliza mediante mecanismos independientes de fosforilación. MARK y MIK interaccionan in vitro e in vivo, resultando dicha interacción en la activación de la actividad quinasa de la MAP4K. Así la interacción del dominio intracelular del receptor con el dominio regulador auto-inhibidor de la MAPK, resulta en la liberación de la auto-inhibición de la MAP4K. Estos resultados ilustran un nuevo mecanismo de señalización independiente de fosforilación en plantas, involucrado en el desarrollo de maíz (Llompart et al, 2003). Por otro lado se ha demostrado que la expresión de MIK, mediante splicing alternativo, genera al menos 4 polipéptidos que presentan diferentes características bioquímicas: Una isoforma inactiva que puede ser activada por el receptor MARK mediante interacción directa; 2 isoformas constitutivamente activas constituidas únicamente por el dominio quinasa; y una cuarta isoforma, que no presenta el dominado e interacción carboxi-terminal, inactiva y que no puede ser activada por el receptor. Estos resultados ponen de manifiesto por primera vez en plantas la regulación de la actividad quinasa de una MAPK mediante splicing alternativo (Castells et al, 2006).

Autor: SESÉ FAUSTINO MARTA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: UNIVERSITAT DE BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Autor: BOSCH COMAS ANNA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA - UNVIERSIDAD DE BARCELONA.

Autor: MARTINEZ ROCHA ANA LILIA.
Año: 2006.
Universidad: CÓRDOBA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici es un hongo patógeno que infecta plantas de tomate a través de su raíz. Durante este trabajo se caracterizó el fen ctf1 de F.oysporum. La proteína deducida de este gen contiene un motivo de unión al DNA del tipo Zn(II)2Cys6, tres señales de localización nuclear y varios sitios posibles de fosforilación, presenta un 88,9% de identidad con CTF1a de F.solani, que regula genes cutinasa y cuya anulación tiene como resultado la pérdida de virulencia, y un 57,5% con el factor de transcripción FarA de A.nidulans, implicado en la regulación de genes del metabolismo de ácidos grasos. Se crearon mutantes en el gen ctf1 con un alelo inactivo (Dctf1) y un alelo constitutivo bajo el promotor gpdA de A.nidulans (Ctf1C). Ambos mutantes mostraron diferencias de crecimiento en medio sólido con aceite de oliva. Se aisló el gen cut1, responsable de una cutinasa estructural, y se determinó su regulación transcripcional por CTF1. Se identificó la existencia de un gen lipasa, ortólogo a fgl1 responsable de una lipasa extracelular del hongo F.graminearum y se investigó su regulación por CTF1. Se compararon las actividades cutinasa y lipasa totales, encontrándose diferencias significativas. La anulación y la sobreexpresión del gen ctf1 no afectó a la virulencia de F.oxysporum sobre plantas y frutos de tomate, lo que sugiere que la regulación transcripcional de los genes del metabolismo de ácidos grasos juega un papel diferente en los patógenos foliares. Además, se estudió el papel de la proteína G de bajo peso molecular Rho1 en F.oxysporum. Se obtuvieron mutantes en el gen rho1, por anulación del alelo silvestre (Drho1) o por creación de una versión constitutivamente activa (Drho1+rho1G14V) de esta proteína. Se determinó el nivel de proteína Rho en estos mutantes y en la estirpe silvestre, observándose una banda de 22 kDa en todas las estirpes de estudio y la casi desaparición de la misma en el mutante Drho1, indicativo de que esta proteína es mayoritaria en relación a otras proteínas de la familia Rho. El mutante Drho1 resultó viable y ambos mutantes mostraron crecimiento restringido en medio sólido, mayor sensibilidad a Rojo Congo y lisis celular. En ambos mutantes mostraron crecimiento restringido en medio sólido, mayor sensibilidad a Rojo Congo y lisis celular. En ambos mutantes rho1 se comparó la transcripción de los genes chsV y fks, implicados en la síntesis de la pared celular, observándose una sobreexpresión de los mismo en comparación con el silvestre. Además se compararon las actividades b- 1,3-glucano sintasa y quitina sintasa, y se detectó que la actividad glucano sintasa disminuye en contraste con el aumento en la quitina sintasa en ambos mutantes. El mutante Drho1 mostró una supresión total de los síntomas de enfermedad en plántulas de tomate y una drástica reducción de la virulencia sobre frutos de tomate, mientras que Drho1+rho1G14V manifestó síntomas atenuados de virulencia. Estos resultados nos indican que la proteína Rho1 controla la síntesis de la pared celular, el crecimiento hifal y la virulencia en F.oxysporum.