INMUNOLOGIA

Autor: BRAZIS CAUBET PILAR.
Año: 2001.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: La dermatitis atópica canina es una enfermedad inflamatoria crónica de la piel que cursa con un incremento en la concentración sérica de IgE alérgeno-específica. Una de las poblaciones celulares más implicadas en el inicio y el desarrollo de esta enfermedad son los mastocitos cutáneos. Los mastocitos son activados en el organismo tras la interacción de los alérgenos con las IgE unidas a su membrana y el consiguiente entrecruzamiento de los receptores de alta afinidad para las IgE (Ec*RI). De esta forma, se induce la desgranulación de los mastocios y la liberación y síntesis de mediadores celulares que favorecen el desarrollo de la inflamación. En el nombre y en el ratón existen estudios que demuestran que las IgE tienen un papel regulador de la expresión de los receptores Fc*RI en membrana de los mastocitos. Así, una concentración elevada de IgE induce la sobreexpresión de los receptores FceRI, y provoca la liberación por parte de los mastociotos de concentraciones mayores de mediadores inflamtorios que contribuyen al desarrollo de los procesos alérgicos. Hasta el momento, en el perro no existían datos al respecto, y sin embargo es una especie que sufre procesos alérgicos con una alta incidencia. Por ello, el presente estudio pretende evaluar de qué forma influyen las modificaciones en el nivel de IgE del microambiente del mastocito canino sobre su capacidad de liberación y síntesis de mediadores inflamatorios, en concreto de la histamina y el factor de necrosis tumoal (TNF-alfa).

Autor: VICENTE ARROYO ANA BELÒâ°N.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÒâGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÒâGICAS.

Resumen: La quimioquina RANTES/CCL5 es un potente quimioatrayente para diversas poblaciones leucocitarias. Los fibroblastos actúan, al margen de su función estructural dentro de los tejidos, como moduladores de la respuesta inmune mediante la expresión de mediadores de la inflamación. Una regulación inapropiada en la producción de estos mediadores puede dar lugar a inflamación crónica y fibrosis. En este trabajo se ha estudiado cómo se regula la expresión de RANTES/CCL5 en fibroblastos dérmicos en cultivo estimulados con TNF-alfa y IFN-gamma como un modelo in vitro que mimetiza la función de fibroblastos durante el proceso inflamatorio. Así mismo se estudió el efecto de factores pro- y anti-inflamatorios (IL-17, IL-4, IL-10, IL-13 y ácido retinoico) sobre la expresión de RANTES/CCL5 inducida por TNF-alfa e IFN-gamma. Los resultados muestran que TNF-alfa e IFN-gamma aumentan de forma sinérgica la producción de la proteína y el mRNA y RANTES/CCL5 en fibroblastos. Esta regulación es ejercida a nivel transcripcional en el caso del TNF-alfa , y a nivel post-transcripcional en el caso de IFN-gamma. Las regiones implicadas en la regulación de la activación del promotor de RANTES/CCL5 son las regiones R(AB), que une la proteían p65/p65. La estimulación con TNF-alfa, la región R(D), que une IRF-2/3 de manera constitutiva y la región R(G) que une las proteínas c-Jun, Jun D y Jun D/CREM-1. La mutación de cada un de estas regiones llevadas la pérdida completa o parcial de la actividad del promotor en fibroblastos. La inducción de RANTES/CCL5 se inhibe principalmente por la IL-17, que actúa a nivel transcripcional a través de la región R(AB). Las IL-4, IL-10, IL-13 y el ácido retinoico inhiben el aumento de la producción de la proteína en respuesta al TNF-alfa. La inhibición producida por el ácido retinoico se ejerce a nivel transcripcional, aunque ninguna de las regiones estudiadas en este trabajo está implicado en dicha regulación.

Autor: VICENTE ARROYO ANA BELÉN.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Autor: GONZALO IBAÑEZ PILAR.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FAC. CC. BIOLOGICAS.
Centro de realización: FAC. CC. BIOLOGICAS.

Resumen: En la presente tesis se ha descrito los primeros procesos de diferenciación de células linfoide tipo B y NK-T/NK en el primer tercio de la gestación del ratón. La linfopoieis B se origina a partir de día 10 de gestación localizada en regiones intra-embrionarias como la Esplanchnopleura-Paraaortica (Ep-P/AGM), el Hígado Fetal (HF), y en menor medida en el Saco Vitelino (SV). Se describe aquí el primer progenitor unipotencial B, como una población CD117+AA4.1+CD19+CD45R-, PAX-5 dependiente. Estos progenitores son capaces de establecer líneas celulares B en cultivo, sobre la línea estromal ST2 en presencia de IL-7. Los cultivos sobreviven en estas condiciones in vitro durante largo tiempo, sin necesidad de ser transformadas. Estos datos muestran que la aparición de la linfopoiesis B es anterior (días 10-11) a lo hasta ahora descrito (día 14), y su aparición es próxima a la de las primeras HSC detectadas en el embrión (día 8). Utilizando estos mismos cultivos, con progenitores totales de SV , observamos la emergencia de líneas celulares de aspecto polarizado y fenotipo CD117+CD90+CD19-CD1b-. Estas líneas no B, se establecían igualmente en cultivo en presencia de IL-7 (4-6 meses), pero su crecimiento se incrementaba positivamente con IL-2. Estudios más amplios de su fenotipo nos han permitido caracterizarlas con NK-T/NK: NK1.1+CD49b+CD122+. Además se han detectado poblaciones CD3+alfa GalCerCD1d+, junto con la expresión de Valfa14 por RT-PCR, estas líneas NK-T/NK, se generan preferentemente a partir de progenitores localizados en el SV (día 9), y posteriormente en otros nichos como Ep-P/AGM e HF a días 10-11. En este trabajo se ha descrito una diferenciación NK-TNK, previa a lo hasta ahora aceptado (día 13 de gestación) cuyo origen fundamentalmente es el SV. Este trabajo caracteriza poblaciones progenitoras a tiempos tempranos en la ontogenia, así como la compartimentalización específica de la linfopoiesis B en Ep-P/AGM, (día 10 de gestación) y la NK, T/NK, en SV (día 9 de gestación).

Autor: CORREA ROCHA RAFAEL.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD CIENCIAS BIOLOGÍCAS.
Centro de realización: HOSPITAL GENERAL UNIV.GREGORIO MARAÑON.

Resumen: La principal consecuencisa de la infección por el VIH es una marcada depleción de linfocitos T CD4 que conduce a la inmunodeficiencia asociada a la enfermedad.Los tratamientos antirretroviales son capaces de disminuir de forma marcada la replicación vial y conducen a un incremento de linfocitos T CD4, sin embargo no consiguen recuaperarlas respuestas VIH-específicas ni consiguen erradicar el virus.Por ello seha centrado el interés en el sistema inmune del paciente como posible alternativa para erradicar el virus o al menos evitar la progresión de la enfermedad.El timo , como órgano responsable de la repoblación de los linfocitos T, podría juagar un papel clave en esta recuperación o reconstitución del sistema inmunológico.Por ello se estudió en niós, los cuales conservan la funcionalidad del timo, la reconstrución inmune y su posible beneficio en el contro l de la infección por el VIH. Los resultados demuestran el efecto inhibitorio del VIH sobre la función tímica y el papel clave que juega el timo en el mantenimiento dela población CD4 en niñós infectados.La disminución de carga viral tras la terapia antirretrovial conduce a una repoblación de linfocitos T CD4 que tienen mayotitariamente origen tímico y la IL-7 parece estar implicada en el mecanismo de homeostasis que activaría la producción tímica de estas células CD4.Esta repoblación tímica permitirá reconstruir el repertorio de especificidades de esta población y se asociaría con la preservación de distintos parámetros inmunológicos.La repoblación tímica de linfocitos T CD4 observada en niños, se asoción con una preservación de linfocitos memoria VIH-específicos que podrían conferir inmunidad protectivaa frente al VIH.Estos resultados permiten un mejor entendimiento de la infección por VIH en niñós y apoyan el uso de estrategias encamiandas a mejorar la función tímica como herramienta para alcanzar la reconstrución inmuni y el control eficaz de la infección

Autor: AGULLÓ ORTUÑO M. TERESA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA DE LA UCM.

Resumen: En este trabajo se presenta el estudio químico biodirigido del endemismo canario Senecio bollei Kunk & Sund. (Asteraceae). El extracto crudo se sometió a un fraccionamiento químico guiado por bioensayos frente a diferentes insectos, obteniéndose a un fraccionamiento químico guiado por bioensayos frente a diferentes insectos, obteniéndose un *5 esterol, beta-sitosterol (1); un triterpeno pentacíclico, lupeol (2); ocho sesquiterpenos, de los cuales los tres aislados de la parte aérea de la planta son del tipo eremofilanolida, 6beta-hidroxi-8alfa-etoxi-eremofil-1(10), 7(11)-dien-8beta, 12-odia (3), un compuesto con un metileno exocíclico en su anillo C (4) y 6beta-isobutanoiloxi-8alfa-hidroxi-eremofil-1(10), 7(11)-dien-8beta, 12-odia(5). Los cinco de las raíces transformadas son sesquiterpenos con esqueleto furanoeremofilano: 6beta-isobutanoiloxi-9-oxo-10betaH-furanoeremofilano (9), 6beta-(2-metilbutanoiloxi)-9-oxo-1 (10)-en-furanoeremofilano (11) y 6beta-isobutanoiloxi-9-oxo-1 (10)-en-furanoeremofilano (12). Además de tres compuestos fenólicos: ferulato de hexacosanilo (7), 4-hidroxibenzaldehido (10) y 3,6-dimetoxi-4-hidroxibenzaldehido (13) y un alcaloide pirrolizidínico, senecivernina (6). También se aislaron cinco mezclas de compuestos cuyos componentes principales eran ésteres del ácido ftálico junto con alcanos de diferente longitud de cadena. Estos productos se caracterizan sobre la base de sus propiedades físicas y espectroscópicas. Las fracciones que contenían los ésteres del ácido ftálico resultaron fagorrepelentes de L.decemlineata, como consecuencia de la presencia en las mezclas de los compuestos de PM 330 y 386 , de estructura desconocida. Los sesquiterpenos 5 (parte aérea) y 9 (raíces transformadas) mostraron actividad antialimentaria en L.decemlineata. El único sesquiterpeno que mostró actividad antialimentaria en larvas de S.littoralis fue el compuesto 9 de las raíces transformadas. En los sesquiterpenos de la parte aérea hemos podido comprobar que los sustituyentes en las posiciones C-6 y C-8 de la molécula son los que determinan la actividad antialimentaria. La posesión de un grupo alfa-metileno exocíclico en el anillo C de la molécula, por el contrario, no se ha correlacionado con el sustituyente en C-6 y la ausencia de insaturación C-1, C-10. La actividad alelopática de esta planta es atribuible a la presencia de compuestos fenólicos en la raíz, siendo el compuesto 10 el que presentó una mayor inhibición de la germinación, aunque el PA aislado de la parte aérea, senecivernina (6), también mostró una actividad alelopática moderada. Los compuestos de la parte aérea de S.bollei mostraron menor actividad citotóxica que los compuestos de las raíces transformadas, en las líneas tumorales de mamífero ensaydas, sienod SW480 la línea tumoral más afectadas por estos compuestos. Comparado con otros PAs relacionados estructuralmente, el alcaloide senecivernina (6) mostró la citotoxidad más alta en las líneas tumorales ensaydas. Después de realizados estos bieonesayos, podemos llegar a la conclusión de que el papel defensivo en S.bollei está asumido principalmente por la raíz, aunque con poca selectividad de acción. En cambio, en la parte aérea este papel está modulado por los herbívoros que la colonizan. Por otra parte, la actividad citotóxica mostrada en las líneas tumorales ensayadas, hace de estos compuestos buenos candidatos como "cabeza de serie" para posteriores estudios farmacológicos.

Autor: CORREA ROCHA RAFAEL.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLÓGICAS.
Centro de realización: HOSPITAL GENERAL UNIV. GREGORIO MARAÑÓN.

Resumen: La principal consecuencia de la infección por el VIH es una marcada depleción de linfocitos T CD4 que conduce a la inmunodeficiencia asociada a la enfermedad. Los tratamientos antirretrovirales son capaces de disminuir de forma marcada y la replicación viral y conducen a un incremento de linfocitos T CD4, sin embargo no consiguen recuperar las respuestas VIH-específicas ni consiguen erradicar el virus. Por ello se ha centrado el interés en el sistema inmune del paciente como posible alternativa para erradicar el virus o al menos evitar la progresión de la enfermedad. El timo, como órgano responsable de la repoblación de los linfocitos T, pordía jugar un papel clave en esta recuperación o reconstitución del sistema inmunológico. Por ello se estudió en niños, los cuales conservan la funcionalidad del timo, la reconstitución inmune y su posible beneficio en el control de la infección por el VIH. Los resultados demuestran el efecto inhibitorio del VIH sobre la función tímica y el papel clave que juega el timo en el mantenimiento de la población CD4 en niños infectados. La disminución de carga viral tras la terapia antirretroviral conduce a una repoblación de linfoctios T CD4 que tienen mayoritariamente origen tímico y la IL-7 parece estar implicada en el mecanismo de homeostasis que activaría la producción tímica de estas célula sCD4. Esta repoblación tímica permitiría reconsturir el repertorio de especificades de esta población y se asociaría con la preservación de distintos parámetros inmunológicos. La repoblación tímica de linfocitos T CD4 observada en niñós, se asoció con una preservación de linfocitos memoria VIH-específicos, que podrían conferir inmunidad protectiva frente al VIH. Estos resultados permiten un mejor entendimiento de la infección por VIH en niños y apoyan el uso de estrategias encaminadas a mejorar la función tímica como herramienta para alcanzar la reconstitución inmune y el control eficaz de la infección.

Autor: FLORES JIMÉNEZ NATALIA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLÓGICAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA (INSTITUTO DE SALUD CARLOS III).

Resumen: La encefalomielitis alérgica experimental (EAE) es una enfermedad inflamatoria del sistema nervioso central (SNC) y sirve como modelo animal de la esclerosis múltiple humana (EM). Se considera que tiene un origen autoinmune y que está mediada por células de subtipo 1 de linfocitos T cooperadores (Th1), caracterizadas por la secreción de citoquinas como interleuquina 2 (IL2) e interferón gamma (IFNgamma) entre otras. Se han estudiado procesos relacionados con la activación celular a través del receptor de la célula T (TCR) en líneas y clones Th1-Th2 reactivos a proteína básica de mielina (MBP); proliferación, producción de interleuquinas, activación del factor de transcripción NFkB y unión de los factores NFAT y Stat6 al elemento P1 del promotor de interleuquina 4. Por otro lado, se ha estudiado el efecto de IFNbeta in vivo sobre los síntomas de EAE, el número de infiltrados perivasculares en SNC y la inducción de factores nucleares en células de nódulos linfáticos (LNC). También se ha analizado el efecto de IFNbeta in vitro sobre la inducción de NFkB en la línea humana Jurkat. Por último, se realizó el estudio de la capacidad de unión de NFkB y AP1 en PBMC de individuos sanos y pacientes de esclerosis múltiple. Del conjunto del trabajo que se presenta se concluye que IFNbeta reduce significativamente los síntomas de EAE, este efecto está acompañado de una disminución de infiltrados perivasculares en el sistema nervioso central, de una disminución de la actividad de NFkB y de un aumento de la fosforilación de Stat6.

Autor: BERTRAN RODRÍGUEZ ESTHER.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA, UNIVERSIDAD DE BARCELONA.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN ONCOLÓGICA.

Resumen: La activación de las plaquetas como respuesta a una lesión vascular o a un proceso inflamatorio provoca la secreción de mediadores solubles capaces de modular las funciones de las células implicadas en la inflamación. El F4P (Factor 4 Plaquetar) es una proteína específica de las plaquetas y miembro de la superfamília de proteínas llamada quemoquinas. Ha estado ampliamente estudiada la capacidad del F4P por su efecto antiangiogénico y potenciador de la coagulación, pero se conocía poco sobre su implicación en la regulación de la inflamación. En este estudio se demuestra la capacidad del F4P de estimular las células "Natural Killer" (NK) a sintetizar citoquinas proinflamatorias como son la IL-8, IL-1beta, IL-6, INFgamma, TNFalfa y GM-CSF, así como de estimular la actividad citotóxica dependiente de anticuerpo (ADCC). Se demuestra que estos efectos se mantienen aunque el F4P esté unido a heparina, resultado importante ya que en condiciones fisiológicas el F4P se encuentra unido a los glicosaminoglicanos situados en las células del endotelio vascular. La estimulación de las células NK a través del receptor Fcgamma RIIIA incrementa de forma sinérgica el efecto del F4P. En cambio, el F4P no tiene ningún efecto sobre aquellas funciones estimuladas por la IL-2 en estas células. Se inició el estudio del mecanismo de transducción de señal que desencadena de estos efectos, varias evidencias indican que el F4P no induce este efecto a través de la activación de proteínas G, Gi y G0, ni se asocia a un incremento transitorio de CA2+ intracitoplasmático. Pero se ha podido asociar a la activación de la fosfatidilinositol 3-quinasa. En este estudio se demuestra, por lo tanto, la capacidad del F4P para potenciar la respuesta inflamatoria a través de las células NK. Una de las funciones menos conocidas de estas células.

Autor: SÁNCHEZ MUÑOZ BEGOÑA LAURA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL RAMÓN Y CAJAL.

Resumen: Desde el conocimiento de la estrecha interrelación existente entre el SI y el aparato digestivo, se ha producido un gran progreso en la comprensión de la inmunopatogenia de las enfermedades gastrointestinales. Gracias a la Citometría de Flujo se tiene un mejor conocimiento de las subpoblaciones linfoides intestinales y las alteraciones que caracterizan diversas condiciones patológicas, contribuyendo de esta forma tanto al diagnóstico como a profundiar en la inmunopatogenia de las mismas. Este trabajo se centra, en primer lugar, en el análisis de las características de las poblaciones linfoides intestinales tanto a nivel fenotípico como funcional, y en la determinación de las diferencias existentes entre los distintos tramos de mucosa intestinal normal. Teniendo en cuenta estos resultados se han analizado las características de los linfocitos de la mucosa de diversas enteropatías, centrándose en: 1,- La Enfermedad Celiaca, validando la determinación de las alteraciones de los LIE como prueba diagnóstica complementaria que permite el diagnóstico diferencial de otras enteropatías. 2,- La Enfermedad Inflamatoria Intestinal, describiendo las características fenotípicas y funcionales del infiltrado inflamatorio de la mucosa inflamada. 3,- El Trasplante Intestinal, determinando la evolución de las poblaciones linfoides de la mucosa en un caso de trasplante de intestino asilado, como prueba complementaria para el seguimiento y diagnóstico del rechazo del injerto.

Autor: MARTÍN FERNÁNDEZ JOSÉ M..
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La comprensión de la biología del linfocito T depende del grado de conocimiento de su receptor para antígeno o complejo TCR/CD3. El estudio de mutantes naturales humanos proporciona una ventana abierta al entendimiento sobre cómo actúan cada uno de los componentes de este receptor. La ausencia de la cadenas CD4 del complejo, causan un grupo de inmunodeficiencias caracterizadas bien por ausencia total de linfocitos T o bien llinfopenia agravada por un defecto de expresión del complejo en membrana e infecciones que pueden llegar a ser letales. Por otro lado, la terapia génica de linfocitos T maduros ha sido propuesta como opción terapéutica, para cáncer y SIDA, pero tamibén para desordenes congénitos de las células T. Este trabajo constituye una aproximación experimental a la terapia de las inmunodeficiencias de CD3, pero también aporta nuevos datos sobre la estructura y función del complejo TCR/CD3. Además de caracterizar al segundo paciente humano vivo de esta deficiencia y de analizar la biología de este receptor en modelos desarrollados in vitro (linfocitos T inmortalizados con Herpesvirus saimiri y HTLV-I). El trabajo confirma que la terapia génica de la deficiencia de la cadena CD3gamma mediante transducción retroviral es posible, aunque advierte sobre las complicaciones que surgen cuando las células son de origen postímico, sugiriendo la potencial utilización de progenitores como dianas. También advierte sobre la necesidad de una mayor investigación in vitro en los procesos de suplementación génica de linfocitos T maduros. Este trabajo plantea nuevos interrogantes en cuentao a la construcicón o ensamblaje del complejo TCRT/CD3 ante conceptos establecidos en trabajos previos sobre líneas T de origen tumoral. Se proporciona indicios que apuntan a un papel más importante al asignado hasta el momento a la zona transmembranal o intracelular de CD3gamma en la expresión del complejo en membrana, rol que históricamente recaía en la parte extramembranal de esta cadena.

Autor: BERMEJO MARTÍN JESÚS FRANCISCO.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La Nanotecnología es una disciplina de reciente aparición que estudia la aplicación de dispositivos en la escala nanoscópica a diferentes campos, incluido el la Biomedicina. Los dendrímeros son polímeros nanoscópicos de síntesis química que han recibido gran atención en los últimos años debido a su posible utilización en aplicaciones tan variadas como la catálisis a nanoescala, sensores químicos, micelas unimoleculares, imitación de la función de las enzimas, encapsulación de moléculas, reconocimiento molecular, agentes de diagnóstico y también como vehículos para el transporte de genes y fármacos. Por otra parte, la utilización d eoligonucleótidos se está evaluando en distintas áreas. Los oligonucleótidos antisentido son secuencias cortas (15-30 bases de longitud), sintéticas de DNA o análogos que son complementarias (o antisentido) a una secuencia diana (DNA o RNA); son diseñadas para interferir con un hecho biológico, tal como la transcripción, traducción o splicing. Los oligonucleótidos con secuencias CpG no metiladas presentan propiedades inmunomoduladoras al interaciconar con el receptor TLR-9 y están siendo evaluados para el tratamiento de enfermedades alérgicas, infecciosas o tumorales. Uno de los principales problemas de la terapia con oligonucleótidos es la de conseguir unos niveles adecuados para lograr el efecto terapéutico. Es necesario administrar grandes cantidades de oligonucleótidos para conseguir efecto biológico, debido a que éstos presentan gran afinidad a unirse a proteínas de plasma tales como albúmina. En Este trabajo se presentan nuevos dendrímeros de estructura carbosilano hidrosolubles con grupos catiónicos periféricos que han sido evaluados en cuanto a biocompatibilidad, unión a DNA, capacidad de transporte de oligonucleótidos y protección de los mismos frente a proteínas del suero. Estos dendrímeros estarían destinados a aumentar la vida media de dichos oligonucleótidos, su biodisponibilidad y a disminuir su dosis. Se aporta además evidencia acerca de la potencialidad de dichos dendrdímeros para interferir con el ciclo vital del VIH. Para todos estos trabajos se han utilizado células mononucleares de sangre periférica (CMSP) por tratarse de un buen modelo fisiológico. Se sientan además las bases para el desarrollo de futuras aplicaciones biomédicas con estos dendrímeros.

Autor: LÓPEZ VÁZQUEZ DE LA TORRE MÁRIA DE LA O.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La respuesta inmune de tipo celular juega un importante papel en el centro de las infecciones virales .Este tipo de respuesta es esencial para controlar la replicación viral durante la infección primaria por VIH.Sin embargo, el papel de dicha respuesta durante la infección crónicas es un tema controvertido.Se han propuesto varios mecanismos que podrían estar implicados en la incapacidad de dicha respuesta para controlar la forma satisfactoria la replicación del VIH y frenar la progresión de la inmunodeficiencia.Para estudiar los distintos mecanismos que podrían contribuir a la ineficacia de la respuesta CTL,en la presente tesis se analizan distintos aspectos cuantitativos y cualitativos de los linfocitos TCD8+ específicos frente a dos epítopos procedentes de las proteínas GAG y POL,respectivamente.Ademas , se esamina la influencia de factores virológicos (viremia plasmática y mutaciones de escape)e inmunológicos (nivel y respuesta linfoproliferativa de los linfocitos T CD4+)sobre la respuesta CTL en 61 pacientes con infeción crónica por VIH y sin tratamiento antirretroviral.Por último , se analiza el efecto de la terapia anti-VIH sobre los distintos aspectos de la respuesta CTL frente a ambos epítopos en 26 de dichos pacientes. Este trabajo demuestra que una proporción elevada de pacientes con infección crónica por VIH y sin tratamiento no presenta respuesta detectable de linfocitos T CD8+ frente a epítopos de dos proteínas distintas del virus.La presencia de mutaciones de escape se asocia con una ausencia de dicha respuesta.Además , se demuestra que las células CD8+ presentan alteraciones en el proceso de diferenciación, en la producción de citoquinas y en la capacidad de expansión.Por último, los niveles de viremia plasmática se asocian de forma inversa con la capacidad para producir IFN-Y por las células CD8+. Un hallazgo de interés ha sido la demostración de la aparición de novoo de células CD8+ específicas anti-VIH tras un control parcial de la replicación viral alcanzando con la terapia a corto plazo, aunque estas células parecen ser disfuncionales.

Autor: ROSA MANRIQUE DE LARA GONZALO DE LA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL GREGORIO MARAÑON.

Resumen: Las células dendríticas pertenecen al grupo de células presentadoras de antígeno (CPA), tan importantes para el establecimiento de una respuesta inmune adaptada, siendo seguramente el tipo con mayor capacidad de estimulación de linfocitos de todos los leucocitos. Esto es debido principalmente a una combinación de una gran movilidad con una gran capacidad de captación antigénica y de presentación.Así , uno de los objetivos de este trabajo ha sido el estudio de la respuesta migratoria de las células dendríticas que se encuentran en sangre periférica frente a distintos estímulos quimiotácticos y la capacidad de cambio en su patrón de migración cuando encuentran un estímulo activador que las dirija hacia tejidos linfoides; de los dos subtipos analizados , mieloides y linfoides, se observan claras diferencias en su capacidad de migración basal, en la respuesta hacia quimiocinas proinflamatorias, y en los estímulos que hacen cambien su patrón de migración en respuesta a quimiocinas producidas en nódulos linfáticos secundarios.La otra parte de este trabajo se ha centrado en el estudio de uno de los receptores que presentan algunas células dendríticas: DC-SIGN; éste se ha descrito como receptor de distintos tipos de antígenos, como son bacterias , virus y protozoos parasitarios.Hemos observado como la capacidad de fagocitios de partículas de levaduras (zimosán)de esta lectina es dependiente de algun mecanismo ajeno a la molécula; además , hemos observado cómo se regula su localización en membrana cuando entra en contacto con dichas partículas.

Autor: BLANCO MOLINA MARIA MAGDALENA.
Año: 2004.
Universidad: CÓRDOBA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Se entiende por planta medicinal toda aquella planta que contiene uno o varios principios activos, que son sustancias quimicas que ejercen una acción farmacológica sobre el organismo, capaces de evitar, aliviar o curar enfermedades. Los productos naturales con potencialidad farmacéutica están adquiriendo un renovado interés debido a la disponibilidad de nuevas tecnologías que generan nuevas técnicas reproducibles para evaluar las actividades biológicas de los mismos. Estas tecnologías y las técnicas que de ellas se derivan son especialmente importantes en la aplicación de programas para la búsqueda ge fármacos contra enfermedades tan complejascomo el cáncer, el SIDA y algunas enfermedades inflamatorias. Una de las necesidades principales para explorar la flora medicinal es la implantación de bioensayos rápidos y económicos que permitan evaluar los posibles efectos biológicos de los productos naturales derivados de plantas escogidas por su uso en la Medicina Tradicional. Así, en la actualidad, la industria farmacéutica ha adoptado como estrategia el redescubrimiento de las fuentes naturales, buscando prototipos químicos (cabezas de serie) que presenten actividad biológica, para ser utilizados, con o sin modificaciones químicas posteriores,como posibles agentes terapéuticos. Son de especial interés aquellos productos naturales que presenten activídad anti-inflamatoria y/o anti-tumoral, efectos sobre los cuales está ampliamenteinvolucradoel factor de transcripción NF-kB. El factor de transcripción NF-kB (Nuclear Factor Kappa B) es una familia de factores de transcripcíón diméricos compuesto por miembros pertenecientes a la familia Rel, caracterizada por su reconocimiento de una secuencia consenso en los promotores de un amplio número de genes.La activación del factor de transcripción NF-kB está también relacionada con múltiples aspectos de la oncogénesis, incluyendo el control de la apoptosis, del ciclo celular, la diferenciación y la migración celular. Como NF-kB se encuentra desregulado en muchos tipos de enfermedades inflamatorias y cáncer, su inhibición sería una terapia lógica para el tratamiento de los mismos.

Autor: SANCHO ZAPATERO ROCIO.
Año: 2004.
Universidad: CÓRDOBA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El sistema canabinoide está compuesto por mediadores lipídicos (endocanabinoides y endovanilloides),por enzimas que regulan su metabolismo, y por receptores que median sus acciones biológicas. Estos mediadores lipídicos ejercen sus múltiples acciones biológicas tanto por mecanismos dependientes como independientes de su unión a los receptores conocidos. La identificación de los componentes de este sistema y su posibilidad de manipulación farmacológica ha representando un importante avance en el campo de la neuroinmunología. La ocupación del TCR en las células T por antígeno da lugar a una cascada de activación de señales de transmisión intracelulares que culminan con la regulación de determinados factores de transcripción inducibles responsables de la reprogramación génica. Dentro de estos factores de transcripción se encuentra el factor nuclear kappa B (NF-?B). Este factor de transcripción pertenece a la familia NF-kB/Rel, la cual engloba a una familia de factores de transcripción que desempeñan un papel muy importante en la regulación de genes relacionados con el crecimiento y desarrollo celular, en la respuesta inmune e inflamatoria y en la replicación del VIH-1. En este trabajo hemos demostrado que: 1)el endocannabinoideanandamida inhibe la ruta canónica de activación de NF-?B inducida por TNFa. Esta inhibición tiene lugar a nivel del complejo IKK y más en concreto actuando sobre la subunidad IKKB, siendo el efecto independiente de los receptores de CB y TRPV1; 2)Los endovanilloides N-araquidonoil-dopaminay N-oleil-dopamina inhiben la proliferación de los linfocitos T inducida por antígeno mediante un mecanismo independiente de receptor y que implica un elemento común en la ruta de activación de NF-kB, NFAT Y AP-1; Y 3) N-araquidonoil-dopaminainhibe la replicación del VIH-1 a nivel transcripcional mediante un mecanismoque implica la activaciónde NF-?B Yque es independientede los receptoresCB1y CB2. Esto representa un gran avance práctico en el conocimiento de este novedoso sistema de canabinoides endógenos , que puede ser modulado con fines terapéuticos en enfermedades del sistema nervioso central que cursan con activaciónde NF-kB.

Autor: GONZALEZ ROJAS SANDRA JOVANNA.
Año: 2005.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Estudio previos en nuestro laboratorio han demostrado que la hiperexpresión de un transgén de la molécula antiapoptótica hBcl-2 en células B, ocasiona el desarrollo de un síndrome lúpìco (LES) en ratones (NZW x B6) F1-SV40-Eu-hBcl-2 (línea 1). Sin embargo, este mismo efecto no se observa con otra línea de ratón transgénico (Tg) (NZW x B6)F1-Ig-hBcl-2 (línea 2), que también hiperexpresa hBcl-2 en las células B. En la presente Tesis Doctoral, demostramos que el efecto inhibidor de LES observado en los ratones Tg de la línea 2, se aprecia también en un segundo modelo de enfermedad utoinmune: la artritis inducida tras inmunización de ratones susceptibles (DBA/1 Xb6) F1-hBcl-2 Tg de la línea 1 desarrollaron una artritis severa, no se apreciaron lesiones articulares importantes en los animales (DBA/1 x B6)F1-hBcl-2 Tg de la línea 2. Cuando estudiamos las dferencias entre la dos líneas de ratones Tg, la línea 2 mostró expresión del transgén en una subpoblación de células T CD4+ (7-15%) y CD8+ (20-35%) además de su experesión en las células B, mientras que los Tg de la línea 1 solo expresaba hBcl-2 en células B. La ausencia de CIA en ratones (DBA/1 x C3H)F1 que sobre-expresión hBcl-2 específicamente en los linfocitos T (C3H-LcK-hBcl-2; línea 3), indica que es la expresión aberrante del transgén de Bcl-2 en subpoblaciones linfocitarias T la causa de la protección frente al desarrollo de autoinmunidad observada en los ratones Tg de la línea 2. En estudios ulteriors demostrams que la sobre-expresión de hBcl-2 en linfocitos CD4+ promueve la expansión de células CD+CD25+ reguladores las cuales están directamente implicadas en la inhibición de la utounmunidad observada en los ratones Tg de las líneas 2 y 3. En conclusión, nuestros estudios indican que la inhibición de la apoptosis linfocitaria, secundaria a la sobre-expresión de Bc11-2, en linfocitos B, se favorecela aparición de autoinmunidad. Por el contrario, la sobre-expresión de Bcl-2 en linfocitos B, se favorece la aparición de autoinmunidad. Por el contrario, la sobre-expresión de Bcl-2 en linfocitos T CD4+, promueve la generación de células CD4+D25+ reguladoras que inhiben el desarrollo de enfermedades autoinmunes.

Autor: CRESPO MAULL MARTA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La leucemia linfática crónica (LLC), la más frecuente del mundo occidental, es una enfermedad producida por la proliferación y cúmulo de linfocitos B immuno-incompetentes. Aproximadamente un 50% de los casos presentan mutaciones en el gen de las imunoglobulinas (IgVH)5, hecho que indica que pueden haber pasado por el centro germinal. Además, los pacientes que no presentan mutaciones en IgVH tienen mayor probabilidad de presentar un peor pronóstico. Por estos motivos, actualmente se trabaja en conseguir marcadores que indiquen el estado mutacional de las immunoglobulinas y que sean más fáciles y rápidos de detectar. Recientemente se ha descrito la presencia del mRNA del gen ZAP-70 en células de LLC sin mutaciones en IgVH. También se ha descrito que la proteína ZAP-70, implicada en la transducción de señales a través del receptor de linfocitos T o TCR, resulta imprescindible para el correcto desarrollo de los linfocitos pro/preB de ratones. Este hallazgo significa la primera descripción de la participación de la proteína ZAP-70 en un linfocito de linaje B. La hipótesis de trabajo de la presente tesis doctoral es que la expresión de la proteína ZAP-70 en LLC podría estar relacionada con el estado mutacional de las immunoglobulinas y, por lo tanto, con el pronóstico de la enfermedad. Por otro lado, la proteína ZAP-70 podría estar expresada en linfocitos pro/pre-B normales humanos, así como en las leucemias agudas linfoblásticas B (LAL-B) derivadas de estos. De entre todas las poblaciones B normales analizadas por diversos métodos analíticos sólo se detectó expresión ZAP-70 en aquellos linfocitos con fenotipo pro/pre-B, mientras que ZAP-70 no se detectó en ninguna subpoblación de linfocitos B maduros de diferentes procedencias anatómicas. En linfocitos B neoplásicos, contrariamente, encontramos expresión de ZAP-70 en neoplasias tanto derivadas de linfocitos pro/pre-B (LAL-B) como de linfocitos B maduros (LLC y limfoma de Burkitt) en proporciones variables. En el caso de la LLc, además, la detección de la expresión de la proteína ZAP-70 mediante citometria de flujo constituye un método rápido y eficaz para la determinación del pronóstico de los pacientes con LLC de gran utilidad clínica.

Autor: ESPEJO RUIZ CARMEN.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad crónica, inflamatoria y desmielinizante del sistema nervioso central (SNC) siendo la principal causa de discapacidad en adultos jóvenes después de los traumatismos. Su prevalencia en nuestra área geográfica es aproximadamente 60-70 pacientes cada 100.000 habitantes. La causa de la enfermedad es aún desconocida y se han implicado tanto factores genéticos como ambientales. Se considera que es una enfermedad mediada por el sistema inmunitario, donde linfocitos T activados en periferia son capaces de reconocer antígenos de la mielina en el SNC y desencadenar el proceso autoinmune que culminará con la destrucción de la mielina, de forma que la conducción nerviosa puede afectarse y aparecer los signos y síntomas clínicos característicos de la enfermedad. Existen evidencias de que el estrés oxidativo tiene una función importante en el desarrollo de la lesión en el SNC. En este sentido, se ha observado que el estrés oxidativo puede causar daño axonal y que el daño axonal contribuye a la discapacidad neurológica que se produce en la EM. En el SNC de pacientes con EM se ha observado expresión de marcadores de estrés oxidativo, correlacionándose con el proceso inflamatorio y desmielinizante que se produce en la enfermedad. Por otro lado, los pacientes con EM tienen disminuidos, respecto a controles sanos, los niveles séricos de diferentes antioxidantes naturales como enzimas, vitaminas, ubicuinona, etc. Las metalotioneínas (MT) son unas proteínas para las que se han descrito propiedades antioxidantes, anti-inflamatorias y neuroprotectoras en situaciones donde se produce estrés oxidativo. En este contexto, nos planteamos estudiar la función de las MT en la patogenia de la esclerosis múltiple y sus posibles implicaciones terapéuticas, para ello utilizamos el modelo animal de esclerosis múltiple, la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Observamos que la expresión de MT está incluida en el SNC de ratones con EAE y que se correlaciona con la gravedad de la enfermedad. Los astrocitos y los macrófagos/microglía reactivos son la principal fuente de estas proteínas. El patrón de expresión de MT diverge del patrón de expresión de marcadores relacionados con procesos de neurodegeneración y, sin embargo, coincide con el de marcadores relacionados con procesos de reparación tisular. Por otro lado, la deficiencia en MT hace más susceptibles a los ratones a desarrollar la EAE potenciando la inflamación y los procesos de neurodegeneración en el SNC, mientras que los procesos de reparación tisular están disminuidos significativamente. Estos resultados se corroboran en la enfermedad humana, en lesiones de EM, donde se observó el mismo patrón de expresión que se había observado previamente en el modelo animal. Estos resultados sugieren que las MT tienen una función importante en la patogenia de la EAE y podrían tener un potencial terapéutico en el tratamiento de esta enfermedad, limitando los procesos de neurodegeneración y potenciando los mecanismos de reparación tisular endógenos.

Autor: BRUCET VINYALS MARINA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA (FACULTAD DE BIOLOGÍA) Y PARQUE CIENTÍFICO DE BARCELONA.

Resumen: El objetivo general de la tesis realizada ha sido la caracterización de la proteína Trex 1, una exonucleasa que parece desarrollar un papel importante en células de sistema inmunitario. Los estudios realizados con esta finalidad se pueden dividir en tres grandes bloques: 1,- Determinación de la estructura tridimensional de Trex 1. Se ha determinado la estructura tridimensional de Trex1. Se siguieron métodos cristalización y difracción de rayos-X para llevar a cabo este objetivo. Los resultados mostraron que esta proteína presenta una estructura homodimérica que posiciona los centros activos de cada monómero en extremos opuestos de la cara frontal del dímero, y que la organización del centro activo de Trex1 presenta elevada similitud con los centros activos de las exonucleasas de la familia DEDDh cuya estructura ha sido determinada. Además, la estructura de Trex1 ha sido determinada en presencia de un nucleótido deoxitimidina monofosfato en cada uno de los centros activos, en dos condiciones distintas: en presencia de iones de litio, y en presencia de iones de magnesio. Los iones de litio inhiben la actividad de Trex1 probablemente mediante la inhibición de la transferencia electrónica necesaria para la reacción. Además, provocan un ligero cambio de orientación de algunos residuos del centro activo. El análisis de la estructura ha permitido también identificar un posible nuevo residuo catalítico no identificado hasta el momento en las exonucleasas de la familia DEDDh, la histidina 124. Finalmente, se ha identificado un motivo poliprolina en Trex1 candidato a intervenir en la interacción con otras proteínas a través de dominios SH3. 2,- Interacción de Trex1 con el DNA. El objetivo fue determinar las secuencias de DNA para las que Trex1 presenta mayor afinidad, seleccionando aquellas que mejor se unían a la proteína. Para ello, se utilizó la técnica de selección de los sitios de unión. Se observó que Trex1 presenta diferente afinidad de unión a diferentes secuencias de Dna, y se determinaron cuáles son las secuencias de DNA a las que Trex1 se une con mayor afinidad. 3,- Localización subcelular. Mediante técnicas de microscopía confocal se determinó la localización subcelular de trex1 en respuesta a IFN-gamma. Se observó que Trex1 se localiza en el núcleo en los macrófagos tratados con IFN-gamma, y que la región responsable de su retención en el citoplasma es la región rica en leucinas del extremo C-terminal