MICROBIOLOGIA

Autor: SOLER FALGÁS LARA.
Año: 2003.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA I CIÈNCIES DE LA SALUT.

Resumen: El género Aeromonas está constituido por baceterias Gram-negativas aisladas frecuentemente en el agua, aunque adquieren relevancia por estar presentes en alimentos, y ser capaces de ocasionar cuadros diarreicos e infecciones extraintestinales en el hombre. En la presente tesis se ha demostrado que pueden ser las causantes de hasta el 2% de las diarreas del viajero. La taxonomía de Aeromonas es compleja, el género consta de 15 especies difíciles de identificar con métodos bioquímicos, motivo por el cual en la presente tesis se ha elaborado un protocolo basado en los patrones de restricción del gen 16S rRNA que permite identificar todas las especies aceptadas de Aeromonas. Además, la mayoría de laboratorios clínicos utilizan para la identificación de las especies métodos miniaturizados semiautomáticos u otras pruebas bioquímicas que, como se demuestra en la presente tesis, conducen a identificaciones erróneas tanto de las especies como del género, llegando a confundir a cepas de Aeromonas como pertenecientes a Vibrio. Para evitar esta confusión se ha diseñado una sonda molecular, basada en el gen que codifica para la glicerofosfolípido-colesterol aciltransferasa y que es capaz de identificar las colonias de Aeromonas en medios de aislamiento primario. La correcta delimitación e identificación de las especies que integran el complejo fenotípico "A.hydrophila" (A.hydrohila, A.bestiarum. A.salmonicida y A.popoffii) constituye uno de los problemas fundamentales de la taxonomía del género. Por ello se han investigado las características bioquímicas y genéticas de este grupo de especies, y se ha comprobado que las especies A.bestiarum y A.salmonicida no pueden diferenciarse mediante pruebas bioquímicas ni por métodos genéticos, lo que sugiere que se trata de una única especie. Otro objetivo ha sido el estudio de los patrones de resistencia de las especies d eAeromonas a los agentes antimicrobianos. Se ha demostrado que las cepas de origen clínico de las especies A.hydrophila, A.caviae y A.veronii son sensibles a las cefalosporinas, aminoglucósidos, y las fluoroquinolonas. Además, se ha evidenciado que las quinolonas o las cefalosporinas de tercera generación deben considerarse como el tratamiento de elección para el tratamiento de las diarreas del viajero causadas por Aeromonas. Para poder avanzar en el conocimiento de la epidemiología de Aeromonas es imprescindible disponer de métodos moleculares de tipado fiables. En eta tesis s ehan evaluado tres técnicas (RFLP del espaciador intergénico 16S-23S, ERIC-PCR y REP-PCR) para el tipado molecular de Aeromonas, habiéndose demostrado que todas ellas son rápidas y sencillas. La técnica de ERIC-PCR ha resultado ser la más discriminativa, aunque la combinación simultánea de dos de éstas técnicas mejora los resultados. La virulencia de Aeromonas es compleja y multifactorial, y se han descrito numerosos genes que codifican para diversos enzimas (hemolisina, lipasas, Dnasas, proteasas..) que han sido definidos como factores de virulencia, no obstante no existen estudios que investiguen simultáneamente la incidencia de todos ellos en cepas clínicas y ambientales de todas las especies del género. En esta tesis se ha investigado la distribución de los genes que codifican para estos factores de virulencia, así como la activiad enzimática que se les asocia, en cepas clínicas y ambientales de todas las especies del género. Se ha demostrado que éstos se encuentran ampliamente presentes en todas ellas. Tan solo se econtró una asociación estadísticamente significativa entre la presencia de genes que codifican para los factores de virulencia aerolisin/hemolisina y serina proteasas y la actividad beta-hemolítica, lo que sugiere, tal como han indicado otros autores, que la serian proteasa y la actividad beta-hemolítica, lo que sugiere, tal como han indicado otros autores, que la serina proteasa podría actuar como activador de la erolisina/hemolis 8 ina. Po 3e2 r útlimo, se ha considerado de interés el determinar si las especies de Aeromonas de mayor relevancia en clínica poseen el sistema de secreción tipo III (TTSS), descrito en otros microorganismos patógenos como Escherichia coli, Yersinia spp.y Salonella ssp., y cuya función principal consiste en hacer llegar toxinas directamente al citoplasma de la célula huésped. Se ha demostrado que dicho sistema se encuentra presente en la mayoría de cepas clínicas de A.veronii y A.hydrophila, lo cual demuestra que dichas cepas poseen un potencial virulento comparable al de los patógenos mencionados.

Autor: ESTEBAN MORENO JAIME.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: Caracterización microbiológica:Se incluyen un estudio sobre la utilidad de un sistema comercial convencional (API-CORYNE)para identificar estos aislamientos.La hipótesis inicial comtempla la posibilidad de que estos organismos puedan ser confundidos con bacilos grampositivos difteromorfors.De acueredo con el estudio realizado , el empleo del sistema podria dar lugar a confusiones, así como no resulta útil para carcterizar microbiológicamente las especies estudiadas.En esta misma parte incluye además la evaluación de una técnica de electroforesis de proteínas totales (SDS-PAGE)para identificar los aislamientos.Como concluye el estudio , la técnica es útil siempre que se incluyan cepas de referencia con las que comparar los electroforetogramas. Significado clínico:Se evalúan los casos de aislamiento de estas especies en muestras clinicas de pacientes de la FJD desde 1979.Se concluye que numerosas cepas poseen dicho significado (en particular las procedentes de piel y partes blandas),y que la retirada de cuerpos extraños y un tratamiento específico es fundamental para la buena evolución de los enfermos. Estudio de patogenicidad:Se evalúa la capacidad de penetración intracelular de los aislamientos disponibles (seleccionados en función de su significado clínico)mediante la técnica preiamente descrita de análisis de microcolonias en fibroblastos diploides humanos.De acuerdo con nuestro resultados,la capacidad de penetración no está relacionada con la capacidad de producir enfermedad en humanos , ya que sólo dos cepas (ambas procedentes de hemocultivos)poseían dicha capacidad. Sensibilidad antimicrobiana:En primer lugar,se realiza un estudio de sensibilidad de las cepas mediante la técnica de referencia frente a los antibioticos más empleados para trtar las infecciones causadas por estos organimos.En segundo lugar, se evalúa una técnica distinta(disco-placa)frente a la técnica de referencia,concluyendo que no es aplicable para la antibióticos bacteriostáticos (fundamentalmente los macrólidos).

Autor: GRANIZO MARTINEZ JUAN JOSE.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Desde 1990 se incrementa la resistencia a la eritromicina (E) en S.pyogenes y S.pneumoniae, y la resistencia a la penicilina (P) en la última especie, siendo invocado como causa el consumo de antibiótico, pero la resistencia a los antibióticos indicadores (P y E) no se traduce por resistencia a los fármacos de la familia, ni la resistencia medida como CMI sobre el punto de corte implica resistencia clínica. Los datos farmacodinámicos implican a los macrólidos (M) como seleccionadores de cepas resistentes, por lo que esta asociación entre consumo y resistencia no es tan simple como se apunta. OBJETIVOS 1,- Describir la evolución de la resistencia a la E.en S.pyogenes y S.pneumoniae y a la P.en S.pneumoniae de 1986 a 1999 en España. 2,- Describir el consumo de M y beta-lactámicos en el mismo periodo. 3,- Establecer la asociación estadística entre consumos y resistencias. 4,- Establecer la correlación geográfica de prevalencia de resistencia en la E en ambas especies. MATERIAL Y MÉTODOS La evolución de las resistencias se calculará por metanálisis de estudios observacionales. El consumo de antibióticos se tomará de IMS que evalúa ventas por encuesta. La asociación entre consumo y resistencia se establecerá mediante regresión lineal múltiple (modelo explicativo) y las correlaciones entre prevalencias se medirán con el coeficiente de Spearman. RESULTADOS Se observa un aumento lineal de la resistencia a la P y E en S.pneumoniae, en el periodo 1986/87 con una reducción en 1998/99. Las altas resistencias a la P (CMI mayor 2 ug/mL) tienen una tendencia creciente desde 1990, alcanzando un 35%, similar a la resistencia a la E (36%). La resistencia a la E en S.pyogenes crece exponencialemente con reducciones en 1998/99: 30% en 1997 y 21% en 1999. Los antibióticos más consumidos son los beta-lactámicos, dominando las aminopenicilinas (sobre todo por amoxicilina) seguidas de cefalosporinas, cuyas ventas son apreciables desde 1991. Las penicilinas de reducido espectro presentan ventas mínimas. Los M tienen ventas crecientes desde el lanzamiento de M de larga vida media (BID, como Claritromicina, en 1989 y OD, como Azitromicina, en 1993), a costa de una reducción de los tradicionales (TID, como Eritromicina). El análisis multivariado indica que las resistencias a la E en neumococo se correlacionan con M BID y OD y en S.pyogenes con M OD. La resistencia intermedia a la P en neumococo no presenta asociación con ningún fármaco, la alta resistencia con el consumo de cefalosporina sorales y la resistencia total con el consumo de aminopenicilinas orales. Hay correlaciones goegráficas en la resistencia a la E en ambas espjecies (r mayor 0,65). DISCUSIÓN Los largos periodos ventana selectores de cepas resistentes en M de largba vida media y cefalosproinas, la coselección de resistencias a P y E en nuemococo y la coresistencias a la E en ambas especies apuntan a mecanismos externos a las bacterias como selectores de cepas resistentes. CONCLUSIÓN La llegada al mercado de los M de larga vida media (BID) en 1989/90 coinciden con el aumento de resitencias a la E y P en S.pneumoniae y a la E en S.pyogenes.

Autor: MENDEZ MONTESINO JOSE RAMÓN.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: La presente Tesis esta basada en un estudio descriptivo de ámbito hospitalario, que permite observar y representar el consumo de antimicrobianos en el centro hospitalario y determinar si existen diferencias en el consumo en los diferentes servicios del hospital y las tendencias temporales desde 1993 a 2002 ambos inclusive. Esta tesis es sobre todo un intento de determinar las bases para establecer los indicadores que se deben usar para poder estudiar adecuadamente el uso de antibióticos, haciendo hincapié en las tendencias de uso de los mismos a lo largo del período estudiado. Los estudios de farmacovigilancia pueden servir como herramienta de gestión, ya que permite controlar la política de uso de antibióticos en los centros hospitalarios. La discrepancia entre la actividad sanitaria y consumo de antibióticos puesta de manifiesto en esta tesis debería de ser analizado en estudios posteriores.

Autor: PEREIRA ARMADA SUSANA.
Año: 2003.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: SALON DE CUADROS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE VIGO.

Resumen: En esta memoria se aborda el estudio de la viabilidad bacteriana en condiciones controladas de laboratorio, y en el medio marino. Para ello se han empleado diversas técnicas microscópicas, citométricas y de cultivo. 1,- Determinación del número de células totales: Tinción con naranja de acridina, utilización de cámaras de recuento y tinción con el Kit Live/Dead BacLight. 2,- Determinación de la biomasa viable; método de Kogure (medida de la incorporación de sustrato y división celular), reducción de INT o CTC (detección de actividad respiratoria), tinción con kit Live/Dead BacLight (existencia de permeabilidad selectiva de membrana) y siembra en medios de cultivo sólidos. Los estudios en el laboratorio han permitido caracterizar las respuestas de supervivencia de Listonella pelagia y Vibrio splendidus biotipo 1. Ambas especies presentan: 1,- Supervivencia a largo plazo (mayor de 3 meses) en los microcosmos con condiciones más próximas a las existentes en el agua de mar (bajas concentraciones de nutrientes y salinidad del 33 por mil); en este estado, L.pelagia disminuye significativamente su tamaño y se vuelve cocoide, aumentando una banda de proteína de membrana externa de 36 kDa. 2,- Estado viable no cultivable (VNC), inducido a salinidades menores 16 por mil y/o a una concentración de nutrientes de 17 g l-1. Las células VNC de L.pelagia son cocides, pudiendo producirse o no un aumento del biovolumen. No se producen variaciones en los perfiles de proteínas de membrana ni en los lipolisacáridos de la pared celular. L.pelagia se recuperó "in vitro" (tras la incubación con ampicilina a concentraciones bactericidas y penicilinasa) e "in vivo" (tras la inyección en dorada) en 2/19 casos. La ausencia de una secuencia de pérdida de actividades celulares previa a la muerte celular, apunta al estado VNC como estrategia de supervivencia en estas especies. Los estudios realizados con bacteriplancton de la Ría de Vigo han detectado la existencia de uan gran heterogeneidad fisiológica: 1,- Las bacterias totales mostraron abundancias típicas de la capa superficial marina iluminada (3,7 x 10 5 a 5,0 x 10 6 cls ml-1), estando constituídas, de media, por un 32,63% de poblaciones autotróficas (presuntivamente cianobacterias del género Prochlorococcus). 2,-Un 48,9% de la población total presentó una membrana intacta y un 12,68% actividad respiratoria, siendo cultivable un bajo porcentaje en AM (0,136%) o TCBS (0,013%). 3,- El número de bacterias totales, totales heterórtrofas, bacterias con membrana intacta y con actividad respiratoria fue máximo en Julio y Septiembre, mientras que los recuentos en agar marino fueron máximos en Noviembre. Una de las poblaciones de cianobacterias mostró un patrón temporal opuesto al que presentaron los recuentos de bacterias totales. 4,- No se detectaron variaciones en las abundancias entre las distintas estaciones de muestreo y profundidades estudiadas. Los recuentos de bacterias totales y bacterias con membrana intacta y actividad respiratoria se correlacionaron positivamente con el oxígeno disuelto y el pH.

Autor: URQUIA GRANDE MARIA LUISA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: POLICLINICA CGEA FACUTAD DE FARMACIA.

Resumen: La preocupación generalizada sobre los perjuicios del abuso de los antibióticos, se ha basado en la relación entre consumo y la aparición de bacterias patógenas resistentes pero los estreptococos de la flora oral, tambien han ido desarrollando formas de resistencia y pueden servir como indicador de la presión selectiva de los antimicrobianos.Los adultos jóvenes constituyen en segmento , es menor .Un 7,5% había consumido algún antibiótico en el último mes.Se observó un dencenso en el consumo a lo largo de los años,1991.1995 y 2002. Se obtuvieron las CMIs de los estreptococos orales, a tres antibióticos:penicilina, eritromicina y ciprofloxacino,representantes de los tres grupos de antibióticos mas consumidos por la población en general,B-lactámicos,macrólidos y quinolonas.El 26% de los estreptococos del grupo viridans de los 330 jóvenes sanos de edad 25+-5años son resistentes a penicilina (CMImayor menos 0,25 ugr/ml).El impacto del consumo individual de penicilina es notable , las CMIs a penicilina fueron significativamente mas altas en el grupo de jóvenes que habian tomado un B-lactámico en el último mes,que en el grupo que no los tomaron.No hemos encontrado correlaciones entre la resistencia mostrada por los estreptococos orales a los antibiotincos no relacionados como eritromicina, penilicina y ciprofloxacino. La transferencia de genes de resistencia a otras especies relacionadas,como S.pneumoniae, convierte a S.mitis,la especie mas abundante en la flora oral (60%) en potencial diseminadora de resistencia.

Autor: PÉREZ VÁZQUEZ M. DOLORES.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Antecedentes:Haemophilus influenzae es un patógeno comunitario que causa infecciones agudas y crónicas, invasivas y no invasivas en el ser humano.La resistencia a diversas familias de antibióticos es un problema común en cepas clínicas españolas de Haemophilus;la reciente aparición de cepas resistentes a fluorquinolonas, los antibióticos más potentes conocidos frente a Haemophilus y otros patógenos, plantea nuevos problemas desde el punto de vista clínico, epidemiológico y cientifico. Objetivo:Determinar los patrones de resitencia microbiológica y/o clínica fluorquinolonas y otras familias de antibióticos , la distribución poblacional de las cepas resistentes y los macanismos de resistencia(modificación de las dianas y otros)de cepas clínicas de Haemophilus influenzae procedentes de diferentes procesos patológicos , con sensibilidad disminuída a ciprofloxacina. Metodología:Estudio de laboratorio de cepas activamente estudiadas para descartar pérdida de sensibilidad a ciprofloxacina y/o ácido por el Laboratorio de Referencia de Haemophilus LRH del Centro Nacional de Microbiología en lo últimos 7 años.Las cepas de origen clínico , han sido bien caracterizadas por el LRH y proceden de diferentes hospitales colaboradores de toda la geografía española en general , US y en particular , del Hospital Ramón y Cajal de Madrid dentro de una línea de colaboración e investigación de patógenos en Fibrosis Quística.El grupo de cepas de estudio comprende 34 cepas resistentes a quinolonas mas un número equivalente de controles sensibles, seleccionados según la patología y la procedencia geográfica.Métodos utilizados:(a) Epidemiología molecular de todas las cepas mediante marcadores poblaciones PFGE,(b)fenotipos y patrones de resistencia a 12 quinolonas de diferentes generaciones mediante diluciones de los antibióticos y obtención de CMIs y análisis estadísticos © amplificación de las regiones asociadas a resistencias en gyrA,parC, gyrB y parE de acuerdo con la literatura y datos de la secuencia completa del genoma de Haemophilus (d) transformación genética con las secuencias modificadas (e) secuenciación automática de genes salvajes y transformantes y comparación y alineamiento informástico de los mismos (f) búsquedca de otros mecanismos posiblemente implicados (bombas de flujo modificadas)

Autor: RADA MARTÍNEZ RAMÓN.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: Se recogieron muestras de orina y exudado vaginal de mujeres embarazadas y no embarazadas del mismo rango de edad durante un período de veinte meses en un área de salud de Albacete. La investigación consta de tres etapas: 1º Estudio transversal de muestras de orina y exudado vaginal de mujeres embarazadas. 2º Estudio de casos y controles (embarazadas versus no embarazadas) de infección urinaria. 3º Estudio de casos y controles de infección genital. Se estudió la fiabilidad de la tira reactiva y del sedimento urinario con respecto al uro-cultivo (gold estándar) para el diagnóstico precoz de infección del tracto urinario en embarazadas. Se crearon dos modelos de regresión logística, uno a partir de las variables de la tira reactiva, y otro a partir del sedimento urinario, escogiéndose el creado a partir de las variables del sedimento urinario por su mejor poder de predicción de urocultivo positivo considerado de riesgo. Así mismo, con los datos obtenidos del citado modelo, se creó una escala clínica de riesgo y un algoritmo diagnóstico, con similar poder de predicción. Se estudió también la prevalencia de bacteriuria en las muestras de orina de embarazadas. Fueron estadísticamente significativas las diferencias en la prevalencia entre los dos grupos de muestras (orina de mujeres embarazadas versus orina de no embarazadas) de los aislamientos de E.coli, Klebsiella penumoniae, Streptococcus agalactiae beta hemolítico, Streptococcus agalactiae no hemolítico, E.faecalis y S.epidermidis. En los patrones de sensibilidad a antimicrobianos de los microorganismos más frecuentemente aislados como agentes etiológicos de infección en cultivos de orina de mujeres embarazadazas y en mujeres no embarazadas, se observó una diferencia estadísticamente significativas en los porcentajes de sensibilidad a quinolonas y a gentamicina de S.epidermis aislados en los urocultivos de ambos grupos de población. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los porcentajes de sensibilidad a los antimicrobianos testados frente a Streptococcus agalctiae beta hemolítico aislado en exudado vaginal de mujeres embarazadas (casos) y no embarazadas (controles).

Autor: HERRERA LEON LAURA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: La aparición y control de cepas multirresistentes de Mycobacterium tuberculosis es un tema de gran actualidad y suma importancia en Salud Pública.El laboratorio Nacional de Referencia de Microbacterias, realiza de forma continuada la vigilancia de estas cepas obteniendo unas cifras globales de resistencias del 7,5% y del 3,5% de cepas multirresistentes (cepas resistentes al menos a isonizida y rifampicina). Actualmente se cuenta con métodos moleculares para estudiar las bases genéticas de la resistencia, analizando la variabilidad de los genes implicados en la resistencia a Rifampicina (rpob)y la Isoniacida (katg,inha/maba, y oxyr-ahpc)con los que podemos detectar las mutaciones , podemos desarrollar métodos rápidos de detección de forma que el tiempo necesario para la detección de resistencia a estos dos fármacos se acorte, pudiendo instaurar una adecuada pauta de tratamiento evitando al mismo tiempo la diseminación de cepas resistentes.

Autor: HERRERA LEON SILVIA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Las bacterias del género Salmonella se clasifican tradicinalmente en serotipos que resultan de una particular asociación de antíganos somáticos "O" , codificados por el cluster rfb,y antígenos flagelares "H" , codificados por los genes fliC y fljB.Actualmente su determinación se lleva a cabo por aglutinación conuna necesariamente amplia colección de sueros.El conocimiento de las secuencias de estos genes permite conocer el polimorfismo genético de cada uno de los alelos que codificann para esos antígenos y por lo tanto posibilita el diseño de métodos basados en la reacción en cadena de la polimerasa que permiten realizar una serotipificación molecular de las bacterias de este género. Objetivos:contribuir al desarrollo de métodos rápidos de serotipificación de Salmonella. 1.Determinar las secuencias de los alelo fliCb, fliCd,fliCe,h,fliC g,m,fliC i,v,y fliCz10 del gen fliC y de los alelos fljB1,2fijB 1,5,fljB1,6,fljB1,7,fljB e,n,x,fljBe,n,z,15,y fljB i,w del gen fljB de Salmonella que codifican antígenos flagelares de 1ª y 2ª fase de los serotipos más frecuentes. 2.Determinar las secuencia consenso del dominio central de dichos alelos descritos para la definición del polimorfismo genético entre ellos. 3.Diseñar iniciadores específicos para PCR para la identificación de dichos alelos. 4.Comparar los resultados obtenidos con la serotipificación tradicional

Autor: ROMÁN ALONSO FEDERICO-EMILIO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: H.influenzae es uno de los primeros patógenos responsables de la morbilidad infecciosa de los enfermos de fibrosis quística (FQ). Nos propusimos contribuir a la mejora y al avance del conocimiento acerca del significado de H.influenzae en la FQ. Llevamos a cabo un estudio prospectivo de 30 pacientes de FQ durante un largo período de tiempo para determinar si estos pacientes mantenían las mismas cepas de H.influenzae o eran subsecuentamente colonizados por otras diferentes, para estudiar los perfiles de sensibilidad antimicrobiana en comparación con pacientes sin FQ, para discernir si la resistencia antimicrobiana y la persistencia se asociaban, para comprobar si existína altas proporciones de cepas hipermutables en los pacientes de FQ y secuenciar el gen mutS de las cepas hipermutables. Obtuvimos 188 aislamientos pertenecientes a 115 genotipos distintos de H.influenzae. Todas las cepas fueron no capsuladas excepto 4 que pertenecieron al serotipo F. Observamos variaciones de proteínas de membrana externa en 9 de esos genotipos. Demostramos la persistencia del mismo clon durante años en casi el 12% de los pacientes. La colonización crónica mantenida durante años se asocia a una mayor resistencia a los antibióticos. Las cepas de H.influenzae procedentes de enfermos de FQ son mucho más resistentes al os antibióticos que las cepas de los pacientes sin FQ. Al comienzo del trabajo detectamos y estudiamos los primeros casos de pacientes de FQ con cepas de H.influenzae resitentes a cirpofloxacina, y secuenciamos los genes gyrA y parC de dichas cepas. Las cepas de FQ mostraron una alta prevalencia de sensibilidad disminuída a ciprofloxacina, entre las más elevadas de la literatura (21,3%). Describimos por primera vez la existencia de una proporción significativa (14,5%) de cepas hipermutables de H.influenzae en pacientes de FQ. Las cepas hipermutables son más resistentes a los antibióticos. El análisis d elas ecuencias del gen mutS en 17 de las 19 cepas hipermutables de H.influenzae demostró la presencia de mutaciones y deleciones complejas.

Autor: PELAEZ ROS BEATRIZ.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: HIPÓTESIS Las nuevas tecnologías no consiguen la eficacia del óxido de etileno y el aumento de sus efectividad va unido a un aumento de los costes del producto estéril, por tanto, no constituyen una alternativa global a la esterilización por óxido de etileno. OBJETIVOS Determinar la eficaica microbiológica, coste/eficacia y coste/utilidad de las nuevas tecnologías de esterilización respecto al óxido de etileno. Diseño: Estudio Experimental in vitro de eficacia microbiológica. Estudio coste-eficacia y coste-efectividad. Ámbito del estudio: hospital Clínico San Carlos. Central de Esterilización y Laboratorio del S.de Medicina Preventiva. Equipos esterilizadores objeto del estudio: Óxido de etileno (OE), Vapor a baja temperatura y formaldehído (VBTF) y Sterrad 100S (S100S) MATERIAL Y MÉTODOS Se determinó la eficacia microbiológica (logaritmos 10 reducidos respecto a controles positivos en distintos modelos de instrumental) en presencia y ausencia de sustancias interfirientes.. Se calculó el coste por 100 l para cada método. Para el estudio coste-utilidad se analizó la relación coste/eficacia, valorando los costes indirectos en tiempo de disponibilidad del material estéril y los costes derivados de la toxicidad. RESULTADOS Ambos ciclos de VBTF mostraron mayor eficacia microbiológica que OE y S100S. En modelos experimentales sin lúmen y en condiciones limpias no se encontaron diferencias estadísticamente entre los métodos evaluados. En presencia de sangre el S100S resultó menos eficaz en modelos con lúmenes, evideciándose la afectación de los sistemas S100S y OE para la presencia de sal. El sistema de esterilización que menor coste por 100 l mostró fue el VBTF. El S100S resultó ser el método más caro. CONCLUSIONES El VBTF ha sido el método más eficiente, siendo el ciclo de 60ºC el método de esterilización de menor coste. Por tanto, constituye una alternativa válida global a la esterilización tradicional por óxido de etileno.

Autor: FERNANDEZ SESTELO ANA BELEN.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Este trabajo de investigación se ha estructurado en capítulos. Hay una introducción general sobre las proteasas y tres capitulos en los que se hace referencia al estudio de las mismas en los tres microorganismos por separado. Las proteasas son enzimas degradativos que catalizan la ruptura de los enlaces peptídicos de las proteinas. Aparecen en una amplia variedad de fuentes naturales tales como animales, plantas, microorganismos, protozoos y virus. El estudio de las proteasas microbianas está incrementando debido a su importancia en la aplicación industrial y biotecnológica. El objetivo general de este trabajo es la búsquedo de microorganismos productores de proteasas con potencial aplicación industrial. Basándonos en la capacidad de Candida caseinolytica de producir una proteasa de interés biotecnológico nos planteamos su purificación y caracterización, el estudio del crecimiento celular y optimización de su producción en un fermentador industrial y su aplicación en la digestión de restos de pescado. Tras la realización de los experimentos diseñados para tales fines, llegamos a las siguientes conclusiones: Candida caseinolytica produce una enzima con actividad caseinolitica de 35 kDa de peso molecular con una temperatura óptima de 30°C y un amplio rango de pH óptimo. Los resultados del escalado en un fermentador de 20 L de capacidad demostraron que su aplicación industrial es factible. Mediante el análisis por HPLC de las muestras obtenidas tras la digestión de restos proteicos de pescado con el concentrado enzimático se concluye que se trata de una endopeptidasa. Yarrowia lipolytica secreta altos niveles de enzimas extracelulares. La proteasa mejor estudiada es la proteasa alcalina extracelular (AEP) que esta codificada por el gen xpr2. El objetivo principal planteado en este capítulo fue la subclonación y sobreexpresión del gen xpr2 en Pichia pastoris. Asi se llegó a las siguientes conclusiones: El gen xpr2 de Yarrowia se expresó en la cepa GS115 de Pichia pastoris utilizando el vector pHIL-D2 Mediante Southern se comprueba que en el genoma del transformante de Pichia se ha insertado una copia del gen xpr2. Mediante Northern se comprobó que el ADN recombinante se transcribió correctamente a ARNm La proteasa recombinante difiere en cuanto al pH óptimo (pH 7,5) de la enzima nativa (pH 9). Cuando se cultiva la cepa transformada en medio de leche tienen lugar la producción de la proteasa en ausencia del inductor. La cepa USC de Bacillus licheniformis empleada en este trabajo ha sido aisalada y caracterizada en nuestro laboratorio tras una búsqueda de cepas con actividad coagulante en leche. La finalidad de este capítulo es la obtención de masas queseras empleando el enzima liberado por la cepa USC. Una vez desarrollados los experimentos se concluyó: Bacillus licheniformis USC muestra actividad coagulante sobre leche entera y desnatada. El concentrado enzimático es inhibido totalmente por PMSF lo que sugiere que su centro activo es rico en serinas. Al purificar el concentrado enzimático se distinguen dos actividades proteásicas; una de 62 kDa con un pH óptimo de 7,5, temperatura óptima de 37°C y pl de 9,2; y otra de 35 kDa con pH óptimo de 6,0 y temperatura óptima de 30°C. La cepa USC puede emplearse como una nueva fuente potencial de enzimas coagulantes con aplicación industrial en la elaboración de masas queseras. Un estudio preliminar de las masas queseras obtenidas revela que las propiedades físico-quimicas mejoran significativamente con respecto a las de las masas queseras elaboradas con cuajos comerciales

Autor: LASALA SÁNCHEZ FATIMA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FAC. MEDICINA U.C. DE MADRID.

Resumen: En este trabajo se describe un nuevo mecanismo patogénico en la infección por el Virus Ébola que consiste en la utilización de importantes receptores celulares, DC y L-SIGN, para la entrada del virus en la célula y su diseminación por el organismo. DC-SIGN es una molécula de membrana, exclusiva de células dendríticas que parece jugar un papel importante en el proceso de activación de los linfocitos T y que además presenta una gran afinidad por determinados patógenos, entre los cuales cabe mencionar el Virus dela Inmunodeficiencia Humana. Utilizando diferentes sistemas experimentales se demuestra la interacción entre la lectinas DC y L-SIGN y la glicoproteína del Virus Ébola, que sirve de base para la caracterizaicón del fenómeno y la evaluación de este mecanismo como diana terapéutica.

Autor: RODRÍGUEZ CAPRILES CLAUDIA IRENE.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UCM.

Resumen: JUSTIFICACIÓN La incidencia relativa de las infecciones fúngicas en pacientes trasplantados se ha incrementado en comparación a las de las infecciones bacterianas o virales, que se han reducido desde que se cuenta con medidas de profilaxis efectivas frente a ellas. Entre los pacientes con trasplante cardíaco, Aspergillus es el patógeno oportunista con la mayor mortalidad atribuible, sin embargo, la profilaxis ideal no ha sido definida. OBJETIVOS Identificar al grupo de pacientes que se beneficiarían de la profilaxis antifúngica dirigida y establecer la pauta de administración óptica para esta profilaxis. MÉTODOS Se analizaron los factores de reisgo para aspergilosis invasiva en los pacientes que recibieron un trasplante cardíaco en nuestro centro entre 1988 y 2002, así como el papel de la profilaxis con itraconazol oral, que fue administrado de forma universal a partir de 1995. Durante el período de estudio 307 pacientes recibieron un trasplante cardíaco, de los cuales 278 sobrevivieron más de una semana y fueron incluidos en el análisis. Hubo 24 casos de aspergilosis. RESULTADOS En el análisis univariables, los factores de riesgo para aspergilosis invasiva fueron: infección activa antes del trasplante (11% vs 16,7%, p=0,03), EPOC (5,5% vs 12,5%, p=0,02) hiperbilirrubinemia antes del trasplante (mayor 2 mg/dl) (40,2% vs 62,5%, p=0,3), transfusiones depsués del trasplante (66,5% vs 87,5%, p=0,03), ventilación mecánica prolongada (2,9 vs 5,4 días, p=0,05), el uso de OKT3 en la inducción (5,5% vs 16,7%, p=0,05), hemodiálisis (5,1% vs 20,8%, p=0,01), diabetes mellitus (25,6% vs 50%, p=0,01), mayor número de infecciones bacterianas en los tres primeros meses (0,6 vs 1,1, p=0,01), infecciones virales en los 3 primeros meses (46,9% vs 75%, p= 0,01), enfermedad por CMV en los 3 primeros meses (14,6% vs 45,8%, p=0,001), y la existencia de otro caso de aspergilosis que ocurriera en el área de trasplante caradíaco en los do smeses anteriores o posteriores a la fecha del trasplante (47,2% vs 75%, p=0,01). La profilaxis con itraconazol fue un factor protector (35,4% vs 8,3%. P=0,01). El análisis multivariable mostró que los factores de riesgo que independientemente produjeron aspergilosis invasiva fueron: re-operación (RR 5,8; 95%CI 1,8-18, p=0,002), y la existencia de otro episodio de aspergilosis invasiva 2 meses antes o después del trasplante (RR 4,6; 95%CI 1,5-14,4, p=0,007). La profilaxis con itraconazol tuvo un valor protector independiente (RR 0,2; 95%IC 0,07-0,9, p=0,03). El análisis de la curva de Cox mostró un aumento de la sobrevida en los pacientes que recibieron itraconazol (RR 0,5; 95% CI 0,3-0,8, p=0,01). Una vez establecidos los factores de riesgo, pudimos comprobar que 41% de nuestros pacientes no presentaba ninguno de ellos, y en consecuencia, no hubiesen necesitado profilaxis. De los 24 pacientes con aspergilosis invasiva, 23 presentaban por lo menos uno de los factores de riesgo. Los episodios de aspergilosis invasiva ocurrieron en un período de 0 a 44 días después del inicio de cualquiera de los factores de riesgo identificados y en aquellos pacientes en los que ocurrió después de la resolución de la condición predisponente, esta se diagnóstico en el período de los 30 días siguientes. CONCLUSIONES La profilaxis con itraconazol debe ofrecerse a los pacientes que presenten por lo menos uno de estos factores de riesgo, iniciandola tan pronto como se detecte y mantenerse mientras esté presente y por lo menos en el mes siguiente a su resolución.

Autor: VALER LÓPEZ-FANDO M. LUISA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Los Inhibidores de Proteasa (IP) en combinación con otros fármacos antirretrovirales han cambiado de forma significativa la historia natural de la infección por VIH. Debido a las pobres características farmacocinéticas de los IP, éstos deben administrarse junto con pequeñas dosis de ritonavir con el fin de incrementar los niveles plasmáticos de los mismos y así mejorar su actividad antiviral. Los tratamientos de rescate que incluyen IP potenciados constituyen una herramienta de elección tras uno o varios fracasos. Estas combinaciones han demostrado ser seguras y eficaces. La determinación de parámetros como el genotipo en la proteasa del paciente antes de iniciar el nuevo tratamiento y los niveles plasmáticos a las 12 semanas de tratamiento, tuvieron un valor predicitivo en la respuesta al mismo.

Autor: ANGULO BURGOS M. ALEJANDRA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: F. MEDICINA.

Resumen: La hipertensión portal (HP) secundaria a la obstrucción del flujo sanguíneo portal es una de las complicaciones desarrolladas en pacientes con enfermedades hepáticas crónicas, que son una causa importante de muerte en adultos a nivel mundial. Además, es la principal complicación de la cirrosis hepática y es responsable de sus consecuencias más graves: hemorragia por ruptura de varices esofagogástricas, ascitis y encefalopatía protosistémica. Un mejor conocimiento de los mecanismos fisiopatológicos de la HP, así como de sus complicaicones, permitiría el desarrollo de métodos efectivos de profilaxis y tratamiento para reducir la elevada morbimortalidad de esta patología. En este trabajo hemos estudiado la repercusión del aumento de la presión venosa portal en el eje hepato-intestinal tanto a corto como a largo plazo. Hemos encontrado que las alteraciones observadas desde un punto de vista cualitativo, son las mismas a corto y largo plazo, si bien difieren cuantitativamente sugiriendo que se trata de un proceso progresivo cuyo inicio parece ser intestinal. Los cambios intestinales comportan una repercusión hepática objetivada por un cambio del metabolismo hepático de lípidos. En conclusión, la hipertensión portal induce una alteración inflamatoria del eje hepato-intestinal, que evoluciona a largo plazo como un proceso de remodelación, al igual que ocurre en otras patologías inflamatorias crónicas.

Autor: MAZÓN BUSQUETS GERARD.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: El sistema SOS es una red multigénica que se induce ante la presencia de lesiones en el ADN. Está constituido por genes implicados en replicación, reparación, mutagénesis y control del ciclo celular. Esta red multigénica ha sido caracterizada en diferentes especies bacterianas, gram positivas y gram negativas, determinándose para todas ellas el motivo de unión de su represor, la proteína LexA. En el presente trabajo se describe la caracterización del motivo de unión de la proteína LexA en los microorganismo Xylella fastidiosa, Anabaena sp.y Fibrobacter succionogenes. Mediante la búsquedas con el programa TBLASTN, los genes lexA de estas especies bacterianas han sido identificados y clonados en los vectores necesarios para producir y purificar mediante columnas de afinidad las proteínas LexA que codifican. Con las proteínas purificadas se han realizado ensayos de mobilidad electroforética y de "footprinting" para determinar sus secuencias de unión para la proteína LexA, que han sido definidas cómo:TTAGN6TACTA para X.fastidiosa, RGTACNNDGTWCB para Anabaena y TGCNCN4GTGCA para F.succinogenes. Los motivos de unión caracterizados ha servido para definir la composición de los regulones LeX en estos microorganismos así como demostrar la presencia de genes inducibles ante el daño de laADN de manera independiente de LexA en X.fastidiosa. La comparación de los motivos de unión de LexA caracterizados en este trabajo con los previamente descritos en la biografía, el estudio mediante mutagénesis dirigida de los motivios y los análisis filogenéticos LexA y RecA, nos han permitido reconstruir la historia evolutiva del motivo de unión de LexA y determinar la presencia de una divergencia en el motivo de unión de las Proteobacterias Alfa, demostrando que su gen LexA ha sido incorporado mediante intercambio horizontal desde una bacteria relacionada con las cinobacterias.

Autor: OCHOA CASTILLO CAROLINA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD CIENCIAS BIOLOGICAS.
Centro de realización: LABORATORIO LETI S.L..

Resumen: La sensibilización alérgica frente a alergenos de ácaros domésticos es un problema cuya incidencia esta aumentando en la mayoría de los países industrial izados. Aunque la especie principal a nivel mundial es Dermatophagoides pteronyssinus, datos recientes sugieren la importancia alergologica de Blomia tropicalis, especialmente en países tropicales y subtrópicales dónde puede considerarse de igualo mayor importancia que D. pteronyssinus. Hasta la fecha han sido purificados y secuenciados varios alergenos de B. tropicalis, aunque normalmente procedentes de extractos de cuerpos. Sin embargo, y a pesar de que se ha reconocido la importancia alergénica de las excretas, no se ha estudiado en detalle la composición alergénica de los extractos fecales. Nuestros objetivo eran: caracterizar inmunoquimicamente los extractos somáticos y fecales de B. tropicalis, estudiando su composición antigénica, alergénica y la actividad enzimática; estudiar la reactividad cruzada entre el extracto somático y fecal de B. tropicalis con otras especies de ácaros causantes de alergia y con una especie de cucaracha; estudiar la cinética de liberación rápida usando diferentes solvente; purificar una proteína mediante tecnología convencional. Se han observado diferencias cualitativas y cuantitativas entre los dos extractos (somático y fecal) en cuanto al patrón proteínico y alergénico. Se detectaron 32 bandas que unían IgE en el extracto somático y 29 en el extracto fecal, situadas en un rango de 9,2 a 95,5 kDa. También se observaron diferencias en cuanto a la actividad enzimática entre ambos extractos Se detectó reactividad cruzada mínima con D. pteronyssinus, D. farinae y Euroglyphus maynei, siendo elevada con Tyrophagus putrescentiae y Lepidoglyphus destructor especialmente con el extracto fecal de B. tropicalis. Existe reactividad cruzada entre el extracto somático de B. tropicalis y la cucaracha Blatella germanica La cinética de liberación de alergenos mostró dinámicas similares utilizando distintos solventes (agua, PBS, NaCI 0,85%), demostrando la alta solubilidad de las proteínas, especialmente las de en tomo a 14 kDa de rápída aparición. Mediante fraccionamiento con sulfato amónico y cromatografia de interacción hidrofóbica, semipurificamos proteínas en torno a 14 kDa, con una frecuencia de reconocimiento por sueros de pacientes alérgicos de un 24,3%.

Autor: ROMERO FERNÁNDEZ PATRICIA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FAC. BIOLOGÍA (UCM).

Resumen: RESUMEN: Streptococcus pneumoniae es uno de los principales patógenos humanos. En niños es el principal responsable de otitis media y uno de los más importantes causantes de meningitis y neumonía. En adultos es el principal agente etiológico de la neumonía adquirida en la comunidad, asi como de sinusitis, meningitis y bacteriemia. Su nicho ecológico lo constituye el tracto respiratorio del ser humano y, por tanto se considera que cualquier individuo ha estado colonizado en algún momento de su vida. Streptococcus mitis es una especie con la que comparte su hábitat natural y que se encuentra muy próxima desde el punto de vista taxonómico. Una correcta identificación entre ellas es fundamental puesto que, determinar si un aislado es neumococo u otra especie del grupo mitis, condiciona el tratamiento a prescribir. La mayoría de los aislados clínicos de S. pneumoniae son lisogénicos lo que significa que portan fagos insertados en su genoma. La presencia de estos profagos podría estar contribuyendo de forma relevante a la virulencia de estos importantes patógenos humanos. En el trabajo desarrollado en esta Tesis se ha realizado la secuenciación completa del profago EJ-1 (perteneciente a la familia Myoviridae) aislado de una cepa clínica que, inicialmente, fue identificada como un neumococo atípico y que, finalmente, ha sido asignada a la especie S. mitis. EJ-1 es el primer fago de la familia Myoviridae que infecta a bacterias con bajo contenido en G+C que ha sido secuenciado en su totalidad. El estudio detallado de su genoma ha puesto de manifiesto una organización génica en mosaico ya que sólo los genes que codifican las proteínas responsables de la cola muestran un parecido significativo con homológos en fagos Myoviridae mientras que el resto de orf presentan semejanza con genes de fagos Siphoviridae. Además del profago EJ-1, en esta Tesis se han estudiado dos nuevas cepas lisógenas de S. mitis. Las cepas 86 y HER son dos aislados clínicos de S. mitis que portan fagos atemperados. Los fagos B6 y HER codifican en su genoma amidasas tipo LytA, un factor de virulencia típico de neumococo. Después del estudio pormenorizado de dichas enzimas, se descubrió que en la posición 317 poseen un residuo de Thr en lugar de Val que es lo que presentan las amidasas LytA tanto bacterianas como fágicas de neumococo estudiadas hasta el momento. La construcción y el estudio de una colección de 21 mutantes de la enzima LytA ha permitido demostrar que la Vab17 así como, en menor grado, los aa Tyr294 y Leu314 desempeñan un papel fundamental en el proceso de conversíón/dimerización de la amidasa necesario para conseguir la forma totalmente activa de la principal autolisina de neumococo.