RADIOBIOLOGIA

Autor: Rivero Gil María Teresa.
Año: 2004.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Universidad de A Coruña.

Resumen: Mediante el empleo de la técnica DBD-FISH se ha analizado la señal basal en las células de ratón, encontrándose que el ADN satélite principal es el responsable mayoritario de dicha señal basal, pudiendo ser debida a la presencia de abundantes lugares lábiles alcalinos constitutivos en esta secuencia. Además, la técnica DBD-FISH en cometas neutros permitió la estima simultánea y fácil de las roturas de cadena sencilla (ssb) y doble (dsb) en el mismo núcleo, célula a célula. Las ssb se relacionan con la intensidad de la señal de DBD-FISH y las dsb con la longitud de migración del cometa en la misma señal de DBD-FISH. Combinando la técnica de DBD-FISH con la electroforesis en gel en células individuales (SCGE), se realizó un estudio de los patrones de migración del ADN en electroforesis de células aisladas, incluídas en microgel en dos dimensiones. La migración del ADNcs tras la segunda electroforesis alcalina (Electroforesis neutra-desnaturalización alcalina-90º Electroforesis alcalina), se va haciendo progresivamente mayor y más homogénea, moviéndose desde la cabeza a la cola del cometa obtenido en la primera electroforesis. Debido a las condiciones desnaturalizantes, la longitud de ADNcs aumenta con el tiempo y estos tramos de ADNcs tienden a no interactuar entre ellos, facilitándose su movilidad. En el caso de la segunda electroforesis neutra (Electroforesis neutra-desnaturalización alcalina-90º Electroforesis neutra), la migración del ADNcs se va haciendo progresivamente menor y más homogénea, moviéndose desde la cabeza a la cola del cometa obtenido en la primera electroforesis. En este caso, las condiciones de PH permiten la renaturalización parcial del ADNcs generado durante el paso previo de desnaturalización. Por lo tanto, bajo estas condiciones, los fragmentos de renaturalización parcial del ADNcs se entrelazarían, dando lugar a una menor libertad de migración, que se va acentuando según nos acercamos a la cola. Cuando el ADN se moviliza sin ninguna desnaturalización (Electroforesis neutra-90º Electroforesis neutra), en su conformación de doble cadena, se observa que durante la segunda electroforesis, el DADN de la cabeza del cometa inicial no migra. Además, los cometas parecen estar formados por fibras de ADN, que tienden a doblarse en ángulos rectos desde un punto variable de la cola, reflejando probablemente el lugar dónde se encontraba el extremo de la fibra cuando se movió en dirección perpendicular. Finalmente, se analizó la estructura, radiosensibilidad y reparación de las secuencias teloméricas intersticiales (ITRS) en células de hámster chino, encontándose que los bloques de ITRS presentan una elevada sensibilidad a la desnaturalización alcalina, que correlaciona con la hipersensibilidad a la digestión "in situ" con la nucleasa mung bean. Posiblemente las ITRS poseen una estructura cromatínica particular, enriquecida en pequeños segmentos de ADN sin emparejar. Tras la exposición a rayos X las ssb y dsb fueron inducidas con densidad similar tanto en las ITRS como en el genoma total. La cinética de reparación de las ssb en las ITRS fue similar a la del genoma total. La ausencia de actividad ADN-PKcs no afecta a dicha cinética. Sin embargo, la tasa de reparación de dsb, estudiada por la longitud de migración relativa de la señal de DBD-FISH, fue inicialmente más lenta en las ITRS que en el genoma total, en las células control. La estructura diferencial de la cromatina podría dar lugar a una heterogeneidad intragenómica en la cinética de reparación de las dsb radioinducidas. En ausencia de actividad ADN-PKcs (mutantes XR-C1 y XR-C2), la tasa de reparación de dsb en el genoma total aparece más lenta que en las células control. Sin embargo, la tasa de reparación de dsb en las ITRS no se modificó con respecto al control. De este modo, la actividad ADN-PKcs parece no afectar a la cinética de reparación de dsb presentes en las ITRS. Este resultado indica que las vías de repararción de dsb pueden operar diferencialmente en regiones específicas del genoma.

Autor: GONZÁLEZ VELASCO JAVIER.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.

Resumen: La radioterapia (RT) es uno de los tratamientos básicos de los tumores de cabeza y cuello. La mucositis y la xerostomía son los principales efectos tóxicos derivados de la aplicación de la misma. La adición de quimioterapia concomitante, estrategia terapéutica habitual en estadios avanzados, así como la aplicación de fraccionamientos alterados, se corresponde con un incremento de los ya importantes efectos secundarios (mucositis) dando lugar a interrupciones del tratamiento, lo que reduce la eficacia del mismo y la calidad de vida del paciente. La utilización de agentes farmacológicos que, de forma simultánea, incrementen el efecto de la radiación sobre el tejido tumoral (radiosensibilización) y disminuyan la toxicidad sobre el tejido sano (radioprotección), puede suponer un importante avance en RT. El presente estudio in vitro analiza el efecto del tratamiento con oxotiazolidina-carboxilato (OTZ, un modulador de los niveles intracelulares de glutatión), y distintas dosis de irradiación (125-1000 cGy), aplicados tanto de forma aislada como conjunta sobre líneas celulares de queratinocitos sanos de mucosa oral (QSMO) y células de carinoma escamoso de lengua (SCC25). Se analiza igualmente la pauta más efectiva de aplicación de OTZ en combinación con RT, para finalmente analizar las diferencias derivadas de la aplicación de diversas pautas de fraccionamiento radioterápico: convencional (200 cGy/d) e hiperfraccionado (125 cGy dos veces al día), en ambos casos durante 5 días consecutivos. Las células se sometieron a RT con fotones de 6 Mev (Acelerador lineal, Primus-Siemens 18). El OTZ se administró a dosis de 0,5mM, 1 hora previa a cada fracción de RT, una vez haber sido determinada ésta como la pauta óptima de administración conjunta. Finalizado el tratamiento, se procedió al análisis de los índices de clonogenicidad (IC), obteniendo a partir de ellos los parámetros de fracción de supervivencia (FS), factor modificador de la radiorespuesta (FMR) e índice terapéutico (IT). Los resultados muestran que la exposición previa de OTZ a la irradiación con dosis única de RT produce un efecto radioprotector de los QSMO (FMR-0,8) y radiosensibilizador de las células tumorales SCC25 (FRM=1,4). El diferente resultado producido por el OTZ sobre la raidosensiblidad de las células sanas y tumorales, medido como la fracción de supervivencia a 2 Gy (FS2), permitió obtener un beneficio radiobiológico significativo, con un IT= 1,7. En combinación con hiperfraccionamiento, la pauta óptima de OTZ es la administración en ambas líneas celulares, 1h antes de cada dosis de RT . Las pautas de administración post-irradiación hacen disminuir la FS tanto en la línea celular sana como en la tumoral. La exposición previa de OTZ a cada una de las dosis de irradiación en fraccionamiento semanal produce un efecto radioprotector sobre los QSMO en todos los caso, dando lugar con la pauta de hiperraciconamiento a una FMR=0,85, similar a la obtenida con fraccionamiento estándar (FMR=0,81). Por el contrario, esta pauta da lugar a un efecto radiosensibilizador en las células tumorales (SCC25) en todos los casos, siendo 1,2 veces mayor con la pauta de hiperfraciconamiento (FMR=1,67) que con la de fraccionamiento estándar (FMR=1,38). Esto da lugar a un incremento significativo del índice terapéutico siendo éste superior con la pauta de hiperfraccionamiento radioterápico (1,96) que el obtenido con el fraccionamiento estándar (1,70). En conclusión, los resultados demuestran una modulación selectiva de la radiorrespuesta, protegiendo el tejido sano y sensiblizando simultáneamente el tumoral, lo que sugiere que esta estrategia terapéutica podría mejorar los resultados, en términos de control tumoral y de toxicidad, en la RT de tumores de cabeza y cuel 8 lo.