VIROLOGIA

Autor: MORILLA VAZQUEZ GABRIEL.
Año: 2003.
Universidad: MÁLAGA [Más tesis de esta universidad] [www.uma.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La enfermedad es producida por varias especies de begomovirus: virus de DNA de cadena sencilla transmitidos por la mosca blanca Bemisia tabaci Genn. En la cuenca mediterránea, dos especies causan la enfermedad: Tomato yellow leaf curl Sardinia virus (TYLCSV, y Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV-Mld). TYLCSV se describió por primera vez como agente causal de grandes pérdidas en el sur de España en los cultivos de tomate en 1992. La segunda especie virual, TYLCV, se detectó en 1997. En los cultivos frecuentemente se encuentran plantas de tomate que están infectadas por las dos estirpes de virus. Para analizar las posibles consecuencias de la ocexistencia de estos dos virus, se infectaron en el laboratorio plantas de tomate y de N.benthamiana con las dos estirpes. La cantidad de DNA viral que se acumula fue la misma que la que se produce en las infecciones sencillas. Mediante hibridación in-situ de los tejidos infectados se demostró, que los virus se localizan sólo en el floema en las dos especies de plantas. Esta distribución no varía cuando se inoculan los dos virus en la misma planta. El porcentaje de núcleos conteniendo DNA viral fue el mismo en las plantas infectadas con TYLCSV, TYLCV o con los dos. La hibridación de núcleos aislados de plantas infectadas con los dos virus, reveló que al menos un quinto de los núcleos contenían DNA de las dos especies virales. El alto número de núcleos coinfectados podría explicar porqué la recombinación entre distintas especies de geminivirus es tan frecuente. En una segunda parte del trabajo se ha encontrado que plantas de pimiento (Capsicum annuum) recogidas en cultivos comerciales de la provincia de Almería, están infectadas por dos estirpes de TYLCV: TYLCV-Mld (no descrita anteriormente en la Península Ibérica) y TYLCV. Se han obtenido clones infectivos de las dos estirpes de virus y se ha analizado la susceptibilidad de plantas de pimiento, N.benthamiana, judía y tomate a estos dos virus mediant. Los resultados indican que ambos aislados son capaces de infectar pimiento. En la última parte del trabajo hemos desarrollado un casete de expresión de GFP que contiene elementos de bengomovirus monopartito TYLCSV. Con esta construcción se obtuvieron plantas de N.benthamiana que contenían una sola copia del casete integrada de forma estable en su genoma. Cuando estas plantas transgénicas se infectan con TYLCSV, se producen copias extracromosomicas del transgén que se mantienen como episomas. La formación de episomas correlaciona también con un cambio en el patrón de expresión de GFP en estas plantas. Se observa un aumento de la fluorescencia verde en las venas de todas las hojas que se encuentran por encima de punto de inoculación, y en los tejidos de transporte de raíces y tallos. Por tanto, este sistema podría usarse para detectar la replicación de TYLCSV en la planta, e identificar proteínas celulares necesarias para que se produzca la infección. Para confirmar esta hipótesis hemos silenciado mediante VIGS PCNA (proliferating celular nuclear antigen). La inhibicón del PCNA impidió el cambio en la expresión de GFP, y redujo la acumulación de virus.

Autor: GUIX ARNAU SUSANA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA (ub).
Centro de realización: UNVIERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: Los astrovirus son unos virus icosaédricos de pequeño tamaño con un genoma ARN monocatenario de polaridad positiva y 3 pautas abiertas de lectura (ORF1a y ORF1b para las proteínas no estructurales, y ORF2 para las proteínas estructurales). Se consideran las tercera causa de gastroenteritis no bacteriana tanto en niños como en adultos. En esta tesis, se caracteriza una de las proteínas no estructurales del virus codificadas por el ORF1a, la proteína nsP1 a/4. La utilización de un anticuerpo policlonal de ratón, producido en el laboratorio contra un péptido sintético correspondiente a la región más hidrofílica de la proteína, permitió determinar que la proteína nsP1 a/4 tiene un peso molecular que oscila entre los 24 y 26 kDa, que se acumula en la región perinuclear colocalizando con el ARN vírico y con las membranas del retículo endoplasmático, y que puede sufrir múltiples modificaciones post-traduccionales por glicosilación y/o fosforilación. Además, se caracterizó también la variabilidad genética de una región hipervariable contenida en la proteína nsP1 a/4 y se asoció dicha variabilidad a diferentes capacidades replicativas del virus, así como también a diferentes títulos de partículas víricas en heces de niños infectados. Por todo ello, se estableció una relación indirecta entre a variabilidad de nsP1 a/4 y propiedades víricas potencialmente patogénicas. Las principales características de esta variabilidad genética fueron las presencia de numerosas inserciones y delecciones que conservan la pauta de lectura y una gran tolerancia a las substituciones de aminoácidos. Dada la importancia de esta relación entre la variabilidad de la proteína nsP1 a/4 y las propiedades potencialmente virulentas del virus, se desarrolló un sistema de diagnostico y tipado por RT-PCR y análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) para astrovirus y se aplicó dicho método en un estudio epidemiológico a gran escala durante 3 años sobre la población pediátrica de la región de Barcelona. La incidencia de astrovirus observada fue del 4,9% y del 3,6% para los genogrupos A y B respectivamente y la tasa de detección máxima se encontró en niños de entre los 2 y los 4 años. Se observó una distribución bianual y una mayor incidencia de las infecciones por astrovirus durante los meses de invierno. También se observó como las incidencias relativas de cada serotipo y de cada subgenotipo varían cada año, sugiriendo que no existe inmunidad cruzada entre diferentes serotipos. Finalmente, se estudiaron algunas de la relaciones que se producen entre el virus y la célula hospedadora utilizando la línea celular intestina humana CaCo-2 y se observó como las células desarrollaban una respuesta apoptótica tras la infección por astrovirus. La caracterización de esta respuesta apoptótica permitió afirmar que el porcentaje de células apoptóticas es directamente proporcional a la multiplicidad de infección utilizada y que existe una relación directa entre la expresión de las proteínas no estructurales del virus codificada por el ORF1a y las apoptosis. Se identifica un potencial dominio death domain (DD) en la proteína nsP 1a/4 del virus. Por último, se identifica la activación de la caspasa 8 en la inducción de la apoptosis y se presenta un modelo para explicar el significado biológico de esta inducción de apoptosis por el virus, sugiriendo que la apoptosis sería necesaria para una correcta maduración de las proteínas de la cápside.

Autor: TAPIA SECO NATALIA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
Centro de lectura: HOSPITAL UNIVERSITARI GERMANS TRIAS I PUJOL.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Autor: CARMONA HIDALGO ROCÍO.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: INSTITUTO DE SALUD CARLOS III.

Resumen: Esta tesis Doctoral demuestra por primera vez, la existencia y la frecuencia de resistencias naturales a los nuevos inhibidores de fusión en pacientes infectados por diferentes formas genéticas del VIH-1 , poniendo así de manifiesto la trascendencia de las cuasiespecies virales como reservorios de variantes implicados en la respuesta a la terapia con nuevos fámacos. Es también destacable la detección de nuevas mutaciones en HR2, además de las ya demostradas en HR1 y su relación con el fracaso virológico , lo que sugiere su posible papel con las resistencias al fármaco y planteando que para la optimización del tratamiento con inhibidores de fusión sería conveniente el estudio de resistencias del mismo modo que se hace actualmente en relación con los inhibidores de transcriptasa inversa y de proteasa.

Autor: CANO CEJAS IRENE.
Año: 2004.
Universidad: MÁLAGA [Más tesis de esta universidad] [www.uma.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE MÁLAGA.

Resumen: La enfermedad de linfocitis produce brotes epizoóticos en numerosas especies piscícolas cultivadas entre las que destaca la dorada (Sparus aurata, L.), una de las especies de mayor importancia económica en la Comunidad Autónoma Andaluza. El agente causal de esta enfermedad es el virus de la enfermedad de linfocsitis (LCDV), miembro del género Lymphocistivirus, uno de los cuatro géneros actualmente descritos en la familia Iridoviridae. La detección del LCDV se limita a las técnicas estándares de cultivo en líneas celulares, y posterior identificación viral mediante técnicas serológicas. Esta metodología sólo se ha aplicado para confirmar el diagnóstico en peces enfermos y parece tener una aplicabilidad limitada debido fundamentalmente a su baja sensibilidad. El objetivo del presente trabajo ha sido el desarrollo y evaluación de métodos de diagnóstico para la detección específica y sensible del LCDV en doradas cultivadas, así como la aplicación de dichos métodos en el estudio de la patogénesis de la enfermedad. Las técnicas de detección desarrolladas son adecuadas tanto para la identificación específica del LCDV en animales enfermos (inmunoblot e hibridación en blot), como para la detección del virus en portadores asintomáticos (nested-PCR seguida de hibridación en blot como confirmación del diagnóstico). Los resultados obtenidos en los estudios de patogénesis revelan el carácter persistente de la infección, así como la prevalencia de infecciones asintomáticas en las poblaciones de doradas cultivadas. Por otra parte, se ha determinado que el LCDV produce una infección sistémica en doradas, como se desprende de la detección del virus en los distintos órganos analizados.

Autor: ACOSTA GALLO BELÉN.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: El carbono de la biomasa vegetal es el soporte de la energía que la biosfera almacena continuamente. La preocupación social por la destrucción de bosques y la quema de combustibles fósiles tienen que ver con el agotamiento de esta energía y la liberación de carbono oxidado a la atmósfera. El carbono debe ser absorbido por los océanos y los continentes, pero la importancia relativa de cada uno de estos sumideros, tanto su distribución geográfica como los mecanismos implicados, no han sido fáciles de cuantificar por el momento. En este marco, los sistemas pastorales proporcionan datos novedosos de gran interés. La novedad de estudiar las interrelaciones comentadas en sistemas de pastizal mediterráneos es evidente, pudiendo compararse con otros sistemas homólogos, como los tropicales, para los que se ha sugerido ya un papel importante como sumideros de carbono. El presente estudio dedica buena parte de su atención a comparar la biomasa subterránea y aérea acumulada en los pastizales en diferentes condiciones ambientales. Se consideró un gradiente natural de disponibilidad hídrica, tanto altitudinal -variación de humedad y temperatura- como geomorfológica -zonas de exportación y acumulación en laderas situadas en el gradiente-. En las situaciones que se han contemplado el pasto es objeto de consumo tradicional por herbívoros y se ha simulado además el abandono inicial de éste por exclusión experimental del ganado en todas las posiciones altitudinales y geomorfológicas estudiadas. En los pastizales considerados en el presente estudio la biomasa acumulada aumenta con la disminución del estrés hídrico, llegándose a registrar más de 50 t/ha. La biomada subterránea representa la principal reserva del carbono acumulado en el comportamiento vegetal, llegando a constituir el 90% de la biomasa vegetal. Más del 80% de esta biomasa subterránea se encuentra en los primeros 10 centímetros del suelo.

Autor: SIERRA GARCÍA MARÍA.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El SIDA está causado por dos retrovirus pertenecientes a la subfamilia de los lentivirus, el VIH-1 y el VIH-2, de los cuales el VIH-1 presenta distribución mundial. El virión del VIH-1 contiene dos copias de ARN genómico asociadas a proteínas virales y rodeadas de una cápside y de una envuelta lipídica en la que se insertan glicoproteínas virales y de la célula huésped. La elevada variabilidad que presenta el VIH-1 se debe a la conjunción de diversos factores donde se puede resaltar la alta frecuencia de recombinación, que constituye una parte intrínseca del ciclo replicativo de los retrovirus debido a que cada virión contiene dos genomas virales que pueden servir alternativamente de molde para la TI durante la síntesis del ADN proviral. Su importancia en la pandemia de VIH-1 se aprecia cada vez más con la creciente detección de formas recombinantes en múltiples áreas geográficas. Se han definido nueve subtipos dentro del grupo M del VIH-1, cada uno de ellos tiene una distribución geográfica característica, aunque todos, excepto el B, se encuentran representados en África central. En áreas donde circulan diferentes subtipos del VIH-1, se pueden originar formas recombinantes intersubtipo en individuos infectados por dos o más virus de distinto subtipo, que se convierten en circulantes cuando se aíslan en tres individuos diferentes sin relación epidemiológica (CRFs). Teniendo en cuenta las implicaciones de la diversidad genética del VIH-1 en general, y de la recombinación en particular, los objetivos que se plantean en esta Tesis Doctoral son los siguientes: 1,- Análisis de las estructuras en mosaico de los genomas de virus recombinantes intersubtipo BF de Sudamérica (o de origen sudamericano) y BG de Cuba. 2,- Estudio de las posibles relaciones filogenéticas entre ellos y con otros recombinantes descritos en al literatura. 3,- Identificación de nuevas formas reconviertes circulantes. 4,- Estudio de la distribución de los puntos de recombinación a lo largo del genoma. 5,- Identificación de las cepas parentales de los recombinantes analizados. Se han analizado 37 muestras: 8 de Brasil, 5 de Argentina, 3 de Chile, 1 de Venezuela, 13 de Cuba y 7 de España. La metodología empleada se resume a continuación: extracción del ARN plasmático o del ADN de células mononucleares de sangre periférica, amplificación mediante PCr del genoma casi completo con 4 fragmentos solapantes y secuenciación. Análisis filogenético por el método de bootscanning y árboles filogenéticos mediante MEGA y Puzzle. Los análisis filogenéticos de los recombinantes BF brasileños indican un posible origen independiente de cada uno de ellos en individuos con dobles infecciones de subtipo B y F, y que no tienen relación con la CRF12_BF que circula en Argentina. Los recombinantes BF de Brasil presentan una frecuencia variable de puntos de recombinación intersubtipo a lo largo del genoma, observándose una mayor frecuencia de recombinación en el segmento 5' de pol y la menor en env. El resto de recombinantes BF, a excepción de P526, A068 y X1679, están relacionados filogenéticamente con la CRF12_BF como se demuestra por los puntos de recombinación en común, el agrupamiento en los árboles filogenéticos de representantes de subtipo F y la presencia de nucleótidos y aminoácidos característicos de esta forma. Dos de los recombinantes analizados, presentan una misma estructura recombinante, similar pero no idéntica a la CRF12_BF, y agrupan entre ellos en árboles filogenéticos de secuencias parciales, por lo que podrían representar una nueva CRF aunque sería necesario caracterizar un tercer recombinante con idéntica estructura para poder definirla. El examen de estructuras recombinantes y lso análisis filogenéticos, sugieren un modelo de generación de recombinantes BF (incluyendo la CRF12_BF) en Argentina y posiblemente en otros países de América Latina (excepto Brasil), mediante recombinaciones sucesivas con virus de subtipo B u 8 otros r 78b ecombinantes BF a lo largo de diversas líneas evolutivas a partir de un ancestro común, de probable origen brasileño. La epidemia del VIH-1 en Cuba se caracteriza por presentar una gran diversidad de variantes entre las que hay que destacar dos nuevas CRFs de origen africano (CRF18_cpx y CRF19_cpx) y un gran número de recombinantes únicos, además de cubanos B y G. Los resultados permiten identificar tres nuevas CRFs en Cuba, que se han expandido recientemente en homosexuales de la Habana, donde se han incrementado desde el 0% en infecciones diagnosticadas en 1999 al 31.4% en las diagnosticadas en el 2003. Estas tres nuevas CRFs son recombinantes entre el subtipo B (2 virus) y G (3 virus), las 3 presentan 5 puntos de recombinación en común y agrupan en los árboles filogenéticos de secuencias parciales, indicando un probable origen común. La alta diversidad genética del VIH-1 detectada en Cuba no tiene precedentes fuera de África Central, y hace de dicho país un lugar muy apropiado para el estudio de las implicaciones de la diversidad genética del VIH-1 incluyendo la recombinación, en patogenia, transmisión, respuestas inmunológicas protectivas y respuestas a terapias antirretrovirales.

Autor: RICO TORTOSA PATRICIA MARÍA.
Año: 2006.
Universidad: POLITÉCNICA DE VALENCIA [Más tesis de esta universidad] [www.upv.es].
Centro de lectura: Dep. Biotecnologia.
Centro de realización: Universidad Politécnica de Valencia.

Resumen: El objetivo general de esta tesis doctoral ha sido el análisis de relaciones estructura-función en el virus de la rotura del color de la flor del Pelargonium (Pelargonium flower break virus, PFBV), uno de los patógenos virales con mayor prevalencia en especies del género Pelargonium. Como primer paso para llevar a cabo este análisis se determinó la secuencia nucleotídica completa del RNA genómico (gRNA) viral, que está constituido por 3923 nucleótidos (nt) y contiene cinco pautas de lectura abiertas (ORFs). La ORF más próxima al extremo 5', ORF1, codifica una proteína de 27 kDa y termina con un codón ámbar cuya lectura a través permite continuar la traducción hasta el codón de terminación de la ORF2 dando lugar a una proteína de 86 kDa que contiene los motivos conservados de las RNA polimerasas RNA-dependientes virales (RdRps). Dos pequeñas ORFs, localizadas en la parte central del genoma viral, codifican polipéptidos de 7 (p7) y 12 kDa (p12), respectivamente, los cuales están presumiblemente implicados en el movimiento viral. Cabe destacar que la p12 presenta un motivo de cremallera de leucinas que no ha sido descrito previamente en proteínas relacionadas. La ORF 3'-proximal codifica la proteína de cubierta viral de 37 kDa (CP). El gen de la p12 se encuentra en la misma pauta de lectura que la ORF que da lugar a la p86, por lo que podría ocurrir un doble proceso de lectura a través que daría lugar a una proteína de 99 kDa (p99). Un análisis comparativo de secuencias mostró que la p86, la p7 y la p12 mostraban mayor homología con los productos equivalentes del virus del moteado del clavel (Carnation mottle virus) que con los de otros carmovirus, mientras que la p27 y la CP se asemejaban más a las proteínas correspondientes del virus del cactus Saguaro (Saguaro cactus virus). Los análisis filogenéticos resultantes confirman la adscripción definitiva del PFBV al género Carmovirus.

Autor: VEGA MARTIN LAUREANO DE LA.
Año: 2006.
Universidad: CÓRDOBA [Más tesis de esta universidad] [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En esta tesis hemos abordado el problema de la latencia viral, buscando nuevas proteínas celulares implicadas en el establecimiento y mantenimiento de la latencia. En este sentido presentamos la proteína de corte y oliadenilación CPSF3 como un nuevo represor transcripcional del VIH-1. Hemos descrito esta nueva actividad represora de la proteína y un nuevo sitio de interacción de CPSF3 con la región moduladora del promotor del VIH, que proponemos es el responsable de su actividad represora. Esta nueva actividad la encontramos tanto en transfecciones transitorias como en un modelo de latencia viral en el que el virus se encuentra establemente integrado e inactivo. Dado que está descrito que la proteína viral Tat aumenta la expresión de CPSF3, estudiamos la capacidad de Tat de regular esta nueva actividad, viendo que en presencia de Tat se perdía la represión mediada por CPSF3. También se estudia la interacción física entre CPSF3 y la proteína viral Tat. Así mismo presentamos la proteína HIVEP-3 y su papel como represor de la transcripción del VIH-1, independientemente de su conocida capacidad para unirse a los sitios B.