CITOLOGIA ANIMAL

Autor: OLIVA HERNÁNDEZ JORGE.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La capacitación espermática es un proceso necesario para que se desarrolle la reacción acrosómica y la fecundación en los mamíferos. Para adquirir la capacidad fecundante el epsermatozoide ha de experimentar la capacitación, este proceso se desarrolla en el tracto genital de la hembra donde el espermatozoide experimenta una serie de modificaciones que incluyen alteraciones en la fluidez de la membrana, retirada de colesterol e incremento intracelular de iones que provocan cambios en el potencial de membrana del espermatozoide, en los patrones de motilidad y en la reacción acrosómica. Estudios recientes señalan que la fosforilación de proteínas, especialmente en los residuos de tirosina, desempeñan un papel importante en la capacitación y en la reacción acrosómica. Varios estudios han revelado que el EGF y el TGFa inducen la fosforilazión de tirosinas a través de la activación del EGFr. El EGFr se ha identificado en los espermatozoides de distintas especies animales y se fosforila en presencia de EGF, induciendo la exocitosis del acrosoma en el toro y en el ratón. Sin embargo, el sistema EGF/TGFa aún no ha sido estudiado en el verraco. El objetivo de este estudio fue estudiar la distribución del EGF, TGFa y EGFr en el tracto genital del verraco, determinar la localización del EGFr en el espermatozoide de verraco, cuantificar el número de espermatozoides que poseen EGFr en los diferentes estados funcionales y estudiar los efectos del EGF sobre la capacitación, reacción acrosómica y conservación de los espermatozoides a través del tiempo. La utilización de anticuerpos específicos permitió localizar el EGF, TFGa y el EGFr en el testículo y en las glándulas sexuales anejas. Sin embargo, las glándulas bulbouretrales no mostraron inmunoreactividad. En el testículo, el EGF se expresó, con niveles similares de intensidad, en las células de Leydig, las células peritubulares, germinales y células de Sertoli. El TGFa se expresó en las células de Sertoli mientras que el EGFr lo hizo en las células germinales y en las células de Sertoli. El epidídimo, la próstata y las vesículas seminales también se tiñeron positivamente para EGF, TGFa y ECGr. Los niveles de intensidad más elevados se detectaron en las vesículas seminales. Para investigacr la localización del EGFr en el espermatozoide del verraco se fijaron las muestras, se marcaron con anticuerpos específicos y se examinaron con la ayuda de un microscopio confocal. Los espermatozoides que mostraban EGFr, se cuantificaron con la ayuda de un citómetro de flujo. Los espermatozoides en sus tres estados funcionales (sin capacitar, capacitados y sometidos a la reacción acrosómica) mostraron el EGFr en distintas regiones del espermatozoide incluyendo la cola, la pieza intermedia y en la cabeza. El análisis de los resultados obtenidos en el citómetro del flujo reveló que la proporción de espermatozoides que presentan el EGFr fue muy variable en función del individuo y no se encontró relacionada al estado funcional. Para estudiar los efectos del EGF sobre la capacitación, se capacitaron espermatozoides de verraco utilizando medio Tyrode (TALP-HEPES) suplementado con 0, 10 y 100 ng ML-1 de EGF. Los espermatozoides capacitados con cada una de las concentraciones se sometieron a la reacción acrosómica en presencia o ausencia de 10 .M de ionóforo A23187. Se tomaron nuestras depués de la capacitación y de la r eacción acrosómica y se valoraron la integridad de acrosoma, la integridad de la membrana y los patrones de motilidad. La aplicación de EGF, en concentraciones de 10 ó 100 ng ML-1 no altero (P mayor 0,05) la integridad del acrosoma, la integridad de la membrana, ni (P mayor 0,05) los patrones de motilidad cuando se evaluaron las muestras de la capacitación. Sin embargo 8 , la adi 686 ción al medio de capacitación de 100 ng mL-1 de EGF mejor la calidad de movimiento (P menor 0,001) después de aplicar un tratamiento para inducir la reacción acrosómica. El EGF no tuvo efectos sobre la reacción acrosómica ni sobre la viabilidad de los espermatozoides a lo largo del tiempo. En conjunto, estos resultados sugieren qu eel sistema EGF/TGFa puede desempeñar un papel importante en la regulación de la fisiología testicular del verraco y podría encontrarse implicado en la regulación de la espermatogénesis, la maduración de los espermatozoides en el epidídimo. Por otro lado, la presencia del EGF/TGFa en las glánculas sexuales anejas, así como la presencia del EGFr en el espermatozoide, sugieren su participación en la modulación de la función espermática. Por último, los resultados obtenidos sugieren que el EGF actúa durante la capacitación mejorando la calidad del movimiento después de aplicar un tratamiento para inducir la reacción acrosómica.

Autor: VIÑUELA SANCHEZ ANTONIO.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: LABORATORIO DE NEUROBIOLOGIA DE LA AUDICION. DPTO BIOLOGIA CELULAR Y PATOLOGIA.

Resumen: En esta Tesis Doctoral, demostramos la existencia de un núcleo inédito del cerebro de la rata. Se trata de un núcleo cilíndrico que recorre longitudinalmente el techo mesencefálico entre el borde rostral de la comisura del colículo superior y el borde caudal de la comisura del colículo inferior próximo a la línea media e inmediatamente superior a la columna dorsomedial de la sustancia gris periacueductal, con una longitud de 3.5-4 mm. con aproximadamente 10.000 neuronas. Al comparar la columna comisural tectal con los núcleos que la rodean la hacen diferente: a) Por su citoarquitectura. Sus neuronas tienen un tamaño diferente y con una mayor densidad neuronal que el colículo superior o la sustancia gris periacueductal. b) Por sus conexiones. Tras la inyección con el trazador retrógrado FluoroGold en el complejo olivar superior de la rata, se marcan numerosas neuronas en la columna comisural tectal ipsolateral, mientras que no se ve lo mismo en las regiones situadas alrededor de ella. Para el estudio de las principales fuentes de proyección inyectamos el trazador FluoroGold en la columna comisural tectal. Esto, nos permitió el análisis de la distribución de los somas marcados en el encéfalo. A pesar del enorme número de centros con somas marcados, los candidatos más probables como fuentes de inervación son; el núcleo parolivar superior, las subdivisiones del colículo inferior, el núcleo del brazo conjuntival del colículo inferior, el colículo superior, el núcleo precomisural y las áreas auditivas de la corteza cerebral. A fin de confirmar que estos centros son realmente fuente de proyección, hemos realizado inyecciones con trazadores anterógrados en estos centros a fin de analizar los campos terminales generados en la columna comisural tectal. De modo que hemos comprobado la inervación del núcleo parolivar superior y del las subdivisiones del colículo inferior, descritas extensamente en este trabajo de Tesis.

Autor: GOMEZ NIETO RICARDO JOSE.
Año: 2005.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: EDIFICIO HISTORICO.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El reflejo auditivo de sobresalto (RAS) es una reacción motora que tienen los organismos vivos ante la presencia de un estímulo auditivo inesperado y de gran intensidad. El circuito neuronal del RAS está formado por las neuronas de la raíz coclear (NsRC) que proyectan a las neuronas del núcleo reticular pontinocaudal (NRPC) que a su vez inervan las motoneuronas que contraen músculos, desencadenando el sobresalto. Una de las modulaciones del RAS más interesantes como medida de los mecanismos sensoriomotores del cerebro es la inhibición por estímulo previo (IEP) del RAS. La IEP es una drástica disminución de la respuesta de sobresalto cuando el estímulo auditivo es precedido por un pre-estímulo débil que no desencadena el sobresalto. El conocimiento del circuito neuronal que media la IEP puede ser usado para comprender la fisiopatología de enfermedades neuropsiquiátricas que cursan con alteración de este fenómeno, tales como la esquizofrenia y la enfermedad de Huntington. Sin embargo, este circuito aún no se conoce con exactitud. Si un pre-estímulo auditivo provoca este fenómeno inhibitorio, debe existir una conexión entre algún núcleo de la vía auditiva y alguno de los componentes del circuito del RAS, las NsRC o el NRPC. La mayoría de los autores consideran que la inhibición del RAS se produce a nivel del NRPC a través de un circuito largo que no explica particularidades de la IEP como que pueda suceder para intervalos entre los estímulos (ISI) menores de 50 ms. Nuestro estudio describe una proyección directa desde el núcleo ventral del cuerpo trapezoide (NVCT) a las NsRC, empleando técnicas inmunohistoquímicas y de trazado de las vías nerviosas para estudiar los terminales del NVCT a microscopia óptica, electrónica y confocal. Los contactos sinápticos sobre las NsRC son simétricos con vesículas pequeñas y redondas, contienen acetilcolina como neurotransmisor y proceden de neuronas no olivococleares del NVCT. Esta vía directa de inhibición hacia el circuito del RAS es consecuente con la fuerte inhibición de la respuesta de las NsRC ante la aplicación de pre-estímulos auditivos que hemos estudiado mediante técnicas de registro extracelular in vivo, siendo el ISI de 25 ms donde hemos observado la mayor inhibición. Nuestro estudio propone un circuito corto en el que los pre-estímulos auditivos inhiben la respuesta de las NsRC a través de la proyección colinérgica desde el NVCT, pudiendo ser un elemento importante del circuito neuronal que regula la IEP del RAS.

Autor: Sánchez Gea José Fermín.
Año: 2006.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Veterinaria.
Centro de realización: Facultad de Veterinaria.

Resumen: El género Zabrus plantea problemas taxonómicos, citogenéticos, filogenéticos y biogrográficos de interés. El objetivo de esta tesis ha sido la reconstrucción de su historia evolutiva y analizar las relaciones filogenéticas que existen esntre sus linajes. Se han utilizado dos enfoques uno citogenético y otro molecular. En el análsis citogenético se han localizado los loci ADNr mediante la técnica de hibridación in situ fluorescente (FISH) y en el molecular se han analizado secuencias de ADN mitocondrial (citocromo oxidasa) y nuclear (ITS-II y 28S), mediante métodos de distancia, parsimonia y verosimiltud. Los resultados muestran que los cromosomas portadores de loci ADNr varían de 2 hasta 12, y que el número de cistrones que forman estos loci es también variable. En cuanto al análisis de las secuencias de ADN los resultados muestran una serie de linajes y sublinajes que concuerdan en parte con la taxonomía y las relaciones filogenéticas ya conocidas del género, basadas en caracteres morfológicos, la genitalia femenina y los datos cromosómicos. El patrón de variabilidad encontrado en los genes ribosomales se ha descrtio por primera vez en insectos y no está asociado a la variación en el número cromosómico. Este caracter no ha resultado útil a la hora de obtener conclusiones filogenéticas. El análisis molecular corrobora alguna de las hipótesis previas sobre la taxonomia y filogenia de algunos de los taxones y asi mismo plantea nuevas hipótesis sobre la historia evolutiva de las especies que forman este género