GENETICA ANIMAL

Autor: MUÑOZ MARTÍN GLORIA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICA.
Centro de realización: INIA(INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACIÓN AGRARIA Y ALIMENTARIA).

Resumen: El objetivo principal planteado en este trabajo ha sido el estudio de cuatro genes candidatos, dos de ellos relacionados con caracteres reproductivos y otros dos con caracteres productivos. Estos genes son ESR1, ESR2, FASN y LEPR. Además de la aproximación del gen candidato para la cual se ha aplicado parte de la metodología más relevante que se utiliza en estos momentos, también se han realizado análisis para la detección de QTLsasociados con caracteres productivos para complementar el estudio de los genes FASNy LEPR.Elgen ESR1ha sido ampliamenteestudiado a partir de la detección del polimorfismode restricción Pvull,que según Rotschildet al. (1996) tiene un efecto de incremento del tamaño de camada. En este trabajo se ha genotipado este polimorfismo en 326 hembras y se ha realizado un estudio de asociación que no ha revelado resultados significativos. En segundo lugar se ha secuenciado la totalidad del ADNc de este gen y se han detectado 5 SNPs que se han genotipado en 292 hembras Tai zumu por PCR-RFLP y pirosecuenciación. Se realizaron análisis independientes de asociación con el tamaño de camada de los SNPs localizados en los exones 5 y 8. En el caso del SNP8 los resultados no son significativos, sin embargo para el SNP5 se observa un efecto aditivo significativo sobre el número de lechones nacidos totales. El gen ESR2 se ha localizado en el brazo largo del SSC1. Se ha realizado la secuenciación del ADNcde este gen y se han detectado dos SNPs. Para el SNP del exón 5 que produce un cambio en la secuencia aminoacídica de tipo M317V,se ha realizado el genotipado por PCR-RFLP de 326 cerdas de la línea Tai zumu y de 315 cerdas de la raza ibérica, y sus resultados se han empleado para realizar un análisis de asociación de este polimorfismo sobre el tamaño de camada en ambas poblaciones. Los resultados no son significativos en ningún caso. Para el gen FASN Se ha realizado la caracterización del ADNcpara la búsqueda de polimorfismos y se han detectado 10 SNPs. Se ha realizado únicamente el genotipado por PCR-RFLPdel SNP9 en el cruce Ibérico x Landrace y del SNP21 en 319 individuos Youli. En segundo lugar se ha realizado la localización de este gen en el extremo del brazo corto del SSC12, y en tercer lugar se ha realizado un estudio de detección de QTLs en SSC12. Los resultados sugieren la existencia de 2 QTLs significativos que confirman parcialmente resultados previos (Clop et al., 2003) y revelan resultados nuevos.Para el gen LEPR se ha realizado la secuenciación de parte de la región codificante de este gen y se han detectado cuatro SNPs que producen un cambio en la secuencia aminoacídica de la proteína. Estos polimorfismos se han genotipado por pirosecuenciación en las poblaciones F1y F2del cruce experimental Ibérico x Meishan. En segundo lugar, se ha localizado el gen LEPR en la posición 119.8 cM, mediante mapa de ligamiento del SSC6; y se ha realizado un análisis de detección de QTLs en dicho cromosoma para caracteres de engrasamiento y crecimiento. Los resultados han revelado la existencia de al menos 3 QTLs significativos para Peso (My P), GDMYGD P. En tercer lugar, debido a que el gen LEPR coincide en posición con el QTLs detectado en la posición 119- 127 cM, apoyando la hipótesis de gen candidato posicional, se ha realizado un análisis de asociación del SNP14 de dicho gen. Los resultados confirman evidencias significativas descritas previamente en relación a la asociación del gen LEPR con los caracteres de engrasamiento (Ovilo et al., 2005), y aportan evidencias nuevas que implican al polimorfismo del gen LEPR en la variabilidad de los caracteres de crecimiento. Estos resultados apoyan la hipótesis de la funcionalidad del polimorfismo analizado.

Autor: MOYANO BLÁZQUEZ EVA M..
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS.

Resumen: Para la realización de esta Tesis Doctoral nos planteamos un OBJETIVO GENERAL: IDENTIFICACIÓN DE NUEVOS GENES DE Plasmodium falciparum QUE CODIFICAN PROTEÍNAS ANTIGÉNICAS CON POSIBLE VALOR DIAGNÓSTICO, PROTECTOR Y/O TERAPÉUTICO. Para llevar a cabo este objetivo se construyó una genoteca de expresión a partir de los I estadios eritrocíticos del cIon resistente Dd2. Dicha genoteca fue cribada con una mezcla de sueros de pacientes con malaria. Todos los insertos de ADNc fueron aislados. donados y secuenciados. De los 35 cIones aislados,33 tenían secuenciasque codifica banproteína santigénicas I previamente caracterizadas, el 42% de los dones presentaba similitud con RESA (antígeno de superficie del eritrocito infectado con el estadio de anillo), 27% con CSP (proteína de superficie del circumesporozoíto), el 9% presentaban homología con; proteínas de las roptrias, otro 9% presentaron homología con MESA (antígeno desuperficie del eritrocito infectado con el parásito maduro) y el 6% tenían similitud con HSP (proteína de choque térmico) y LSA (antígeno de superficie del estadio de hígado). Los dos clones que no presentaban homología fueron denominados #3.5 y #3.11, dichos cIones fueron caracterizados. Estos cIones fueron expresados y se puriticaron las proteínas recombinantes. Se diseñaron péptidos en las regiones más antigénicas con el fin de evaluar las propiedades diagnósticas de estos péptidos y de las pruteínas recombinantes mediante ELISA. Estas dos proteínas fueron localizadas celular el intracelularmente mediante Inmunofluorescencia indirecta y mediante microscopía electrónica de Barrido y.Transmisión.

Autor: Eirín López José Ma..
Año: 2004.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Facultad de Ciencias.

Resumen: INTRODUCCIÓN Las histonas son un grupo de proteínas básicas de pequeño tamaño presentes en las células eucariotas, involucradas en el empaquetamiento del ADN formando la fibra de cromatina. Existen cinco familias que se clasifican en histonas del core (H2A, H2B, H3, H4) e histonas linker (H1). Su origen evolutivo parece remontarse a organismos procariotas, y aunque es obvio que la heterogeneidad funcional en eucariotas debe venir dictada por mecanismos complejos, hasta la fecha su evolución ha sido explicada como un proceso concertado. El conocimiento actual es limitado en cuanto a patrones de organización, expresión y evolución de estos genes en invertebrados, especialmente en el caso de genes H1. Para mejorar el conocimiento acerca de las histonas se han propuesto tres objetivos principales: Caracterizar la unidad repetitiva de histonas en el molusco bivalvo Mytilus galloprovincialis, estudiar las secuencias de ADN de los cinco genes de histonas en cuatro especies adicionales (M. californianus, M. chilensis, M. edulis y M. trossulus), y analizar los mecanismos involucrados en la evolución de los genes H1. RESULTADOS Se diseñaron primers para amplificar mediante PCR la refión codificante de cada una de las cinco histonas en especies del género Mytilus, los cuáles permitieron obtener sondas para buscar genes de histonas en una genoteca de M. galloprovincialis, caracterizándose la unidad repetitiva como H4 mayor que , menor que H2B, H2A mayor que , H3 mayor que , H1 mayor que , 5S mayor que , 5S mayor que . Las regiones promotoras mostraron la presencia de elementos reguladores típicos (cajas TATA, posiciones CAP y cajas CAAT). En el caso de H1 también se identificaron elementos H1 box-like y elementos H4 box, mientras que las regiones 3' terminales UTR mostraron secuencias tallo-bucle, seguidas por un elemento rico en purinas y al menos una señal de poli(A). La caracterización de la unidad en M. galloprovincialis permitió analizar estos genes en cuatro especies adicionales (M. californianus, M. chilensis, M. edulis, y M. trossulus). Las proteínas H1 fueron polimórficas, con 191 aminoácidos en todas las especies ssalvo M. chilensis (190) y M. californianus (189), siendo la variación nucleotídica sinónima. Los elementos reguladores también fueron caracterizados, además de las dos señales de terminación en regiones 3' UTR, revelando la funcionalidad de las señales de poliadenilación mediante RT-PCR y Northern blot. El número de copias por genoma promedio para genes H2A/H2B y H3/H4 fueron de aproximadamente 212 y 201 copias en cada caso. La localización cromosómica de estos genes fue analizada mediante hibridaciones FISH en M. galloprovincialis, observando los genes H1 agrupados en tres loci, dos de ellos cercanos a los telómeros. Las histonas del core se localizaron en dos loci junto a genes H1, uno de ellos en posición terminal y el otro en posición intersticial. El análisis evolutivo de genes H1 se realizó a partir de todas las secuencias no redundantes recopiladas en la base de datos NHGRI/NCBI. La diferenciación funcional fue evidente en el frupo de los vertebrados, con un origen monofilético para todas las proteínas H1 dependientes de replicación. En mamíferos, las proteínas H1 codificadas por genes ortólogos se agruparon en las filogenias según su tipo, y no en función de las especie a la que pertenecen, observando del mismo modo un origen monofilético para los subtipos específicos de diferenciación de vertebrados (H1º y H5) donde sorprendentemente se encuentran incluídas las proteínas H1 de Mytilus. A nivel nucletídico, los genes H1 parálogos de ratón son más similates a sus ortólogos humanos, siendo la variación sinónima singnificativamente mayor a la no sinónima. Las regiones promotoras de genes H1 independientes de repl 8 icación f03 mostraron elementos comunes entre vertebrados e invertebrados, además de observarse similaridades también en cuanto a sus refiones codificantes y respecto a su agrupación por tipo y no por especies en las filogenias. DISCUSIÓN La organización de genes de histonas descrita en este trabajo completa análisis previos en los cuáles se han identificado genes H1 solitarios y contrastan con los que identificaron unidades sin genes H1 en M. edulis. Las asociaciones de histonas con genes de ARNr 5S también fueron descritas en crustáceos, siendo probable una invasión de las unidades por parte de los genes 5S aunque sin un significado evolutivo. Los genes de histonas pueden ser dependientes de replicación (RD) o independientes de replicación (RI) según sus patrones de expresión. Los resultados revelaron la presencia de al menos una fracción de genes de histonas expresados de forma RI mediante trascritos poliadenilados en M. galloprovincialis. El número de copias estimado resultó coherente con las proporciones estequiométricas esperadas. Desde hace casi 30 años, la evolución de la familia génica de las histonas ha sido descrita mediante un prodceso de evolución concertada. En este caso los genes parálogos estarían sujetos a un proceso de homogenización incompatible con las filogenias obtenidas para proteínas y genes H1, observándose más similaridad intraespecífica que interespecífica. Siguiendo este argumento, las divergencias sinónima y no sinónima deberían ser equivalentes, sin embargo los resultados muestran una mayor variación sinónima. Estas observaciones, en lugar de indicar una evolución concertada, se ajustan al modelo birth-and-death en presencia de una fuerte selección negativa o purificadora. Las homologías observadas entre genes H1 de Mytilus y variantes RI de vertebrados, indican que los genes H1 "huérfanos" caracterizados representan isoformas RI con un origen común. El origen evolutivo "huérfano" de las histonas H1 RI debe ser revisado para adaptarlo al modelo birth-and-death. En este caso, la diferenciación de las isoformas de H1 vendría determinada por eventos de duplicación y delección o inactivación génica, encontrándose las proteínas H1 sujetas a una fuerte selección purificadora, mientras que los genes H1 divergirían extensivamente de forma silenciosa. El siguiente paso involucraría una transposición a posiciones solitarias en el genoma, convirtiéndose estos genes en "huérfanos". Parece que incluso familias génicas como la de las histonas, especializada en sintetizar una gran cantidad del mismo producto génico en un momento concreto, también han evolucionado mediante birth-and-death. Este modelo es capaz no sólo de explicar la generación y diversificación de las diferentes isoformas RD de H1, sino también el origen y la evolución a largo plazo de las variantes H1 RI "huérfanas". Sin embargo, para completar el conocimiento de la evolución de genes H1 RI serán necesarios estudios adicionales centrados en clarificar el proceso de diferenciación del subtipo H5, característico por su presencia exclusiva en eritrocitos nucleados de aves. La respuesta parece estar en las histonas de sus "vecinos" evolutivos, los reptiles.

Autor: CABELLO ROBLES ALEJANDRO.
Año: 2004.
Universidad: CÓRDOBA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Se estudia una muestra formada por 614 individuos de la raza Ibérica pertenecientes al núcleo de control de rendimientos de la Asociación Española de Criadores de Ganado Porcino Selecto del Tronco Ibérico (AECERIBER). Estos animales pertenecían a 28 ganaderías diferentes con adscripción previa a las principales variedades: Dorado Gaditano, Entrepelado, Lampiño, Mamellado, Manchado de Jabugo, Portugués, Retinto y Torbiscal. En estudio estadístico descriptivo se analizaron 16 variables morfológicas y 5 índices zoométricos. El estudio comparativo se estableció sólo entre el grupo de las hembras abarcando un total de 514 animales.Y en el análisis multivariado 507 animales utilizando 5 variables. Se calcularon los estadísticos descriptivos de todas las variables para la población total y por variedades. Asimismo se realizó un análisis de la varianza univariante acompañado de los correspondientes test de homogeneidad de medias "a posteriori". Seguidamente se llevó a cabo un análisis multivariante: análisis discriminante canónico, cálculo de las distancias de Mahalonobis,y diagramas cluster con el objetivo de establecer la caracterización morfológica de las variedades del cerdo Ibérico. De los resultados obtenidos concluimos la existencia de una clara diferenciación de todas las variedades que configuran el cerdo Ibérico , si bien las diferencias entre las poblaciones de Mamellado, Retinto y Entrepelado son menos acusadas. La variedad Portugués se confirma como un variedad independiente perfectamente diferenciada del resto debido al gran aislamiento respecto al resto de animales desde hace largo tiempo. Finalmente , los resultados obtenidos avalan la propuesta de la población de Manchado de Jabugo como raza independiente de la raza Ibérica.

Autor: MARTÍN HERNANDEZ JAVIER.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE AARTHUS DINAMARCA.

Autor: Soldevila Trepat Marta.
Año: 2004.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: Dep. Ciencias Experimentales y de la Salud.
Centro de realización: Departamento de Ciencias Experimentales y de la Salud.

Resumen: El estudio detallado del gen de la proteína priónica es un punto importante para entender las enfermedades provocadas por priones, como son, CJD, FFI, GSS en humanos y BSE en bovinos. La reciente aparición de la variante de CJD, vCJD, hace de vital importancia el estudio con detenimiento del gen PRNP. Nuestro trabajo ha consistido en el estudio de este gen en diferentes poblaciones representativas de la variación genética en humanos, especialmente para el polimorfismo en el codón 129, para tratar de comprender la variabilidad existente y relacionarla con posibles susceptibilidades a estas enfermedades. El análisis de todas estas poblaciones nos ha servido también para entender posibles diferencias en la patología y susceptibilidad, basándonos en las diferencias poblacionales que existen en las frecuencias de los diferentes alelos y sobre todo de los haplotipos. El gran esfuerzo de secuenciación nos ha proporcionado también información sobre el tipo de selección que está actuando en este gen PRNP. Hemos podido descartar completamente hipótesis previas que postulaban que la selección balanceadora era la fuerza decisiva en este gen, y negar así, que el canibalismo haya sido general y persistente en nuestra especie. El estudio a nivel de secuencia de pacientes con enfermedades priónicas ha sido también uno de los puntos de interés de nuestro trabajo. El estudio detallado del gen en los casos de CJD esporádico ha descartado el origen genético de esta enfermedad, que representa el 80% de los casos de prionopatías humanas y que aún no se conoce la causa. Otro punto importante ha sido el estudio del gen desde un punto de vista evolutivo, incluyendo así en el análisis otros primates, como el chimpancé, para ver qué diferencias existen en estas dos especies tan cercanas. Hemos estudiado en detalle ciertos polimorfismos que en humanos aumentan la susceptibilidad (o protegen) a estas enfermedades y hemos visto que en esta especie estas posiciones están fijadas (129 y 219) y que hay otras posiciones que podrían ser interesantes en relación con las enfermedades priónicas (codón 148).

Autor: PÉREZ DIZ ÁNGEL EDUARDO.
Año: 2004.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Los mejillones del género Mytilus han sido los organismos marinos más ampliamente estudiados en las últimas décadas. Los estudios de mayor interés son aquellos realizados sobre zonas híbridad de mejillón en las confluyen pares de especies del complejo Mytilus, M.galloprovincialis, M. Edulis y M.trossulus. El interés de estos estudios se debe a que son claves para conocer las características y el mantenimiento de las zonas híbridas, y los procesos de especiación incipiente. Otros estudios genéticos a nivel intraespecífico se han centrado en valorar la existencia de estructuración genética regional, y en la existencia de barreras filogeográficas, que son aspectos de especial relevancia en planes de conservación y explotación del mejillón. Estos aspectos mencionados han sido abordados en esta Tesis Doctoral mediante el análisis de marcadores microsatélites aislados en Mytilus galloprovincialis. A escala mundial, los microsatélites muestran buena señal filogenética interespecífica. Mediante la aplicación de algoritmos Bayesianos sobre genotipos multilocus, se han obtenido estimas elevadas de asignación de poblaciones a especie. Las estimas de migrantes de primera generación están de acuerdo con la constitución delos acervos génicos de las poblaciones, estimada con otros métodos. No obstante, se constata un mayor fluyo génico interespecífico, natural o artificial, que el puesto de manifiesto anteriormente en la costa atlántica europea. Por otro lado se ha constatado la existencia de una barrera al flujo génico en la frente Almería-Orán, caracterizada por cambios bruscos de las frecuencias génicas de algunos loci, tal como ha sido observado con otros marcadores genéticos en estudios previos. A escala local, se ha observado una homogeneidad genética del mejillón en las Rías Gallegas. La ligera divergencia de las frecuencias génicas de algunas poblaciones, principalmente de las Rías Altas, se discute en términos de confinamiento oceanográfico y de transplante de semilla para el cultivo. Es aconsejable la toma en consideración de los resultados obtenidos, en futuros planes de gestión y conservación del mejillón local.

Autor: MOSQUERA GÓMEZ ESTHER.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE ACUICULTURA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En el presente trabajo se han empleado técnicas proteómicas, fundamentalmente electroforesis bidimensional (2-DE), para realizar diferentes análisis genéticos en mejillones de la especie Mytilus gálloprovincialis Lmk. Las aplicaciones ,de la electroforesis bidimensionales son multiples, especialmente en los estudios de y roteómica de presión: En este trabajo se ha realizado un análisis de proteomíca de expresión con el fin de detectar posibles diferencias en los niveles de expresión proteica entre mejillones,de de cultivo y mejillones del intermareal. Se comparó la expresión de 92 polipéptidos separados mediante 2-DE encontrándose diferencias. estadísticamente significativas en 45 (48,9%) de ellos. Estas diferencias se discuten en conexión con los cambios moleculares implicados en la. adaptación de mejillones a diferentes condiciones ecológicas. Desde un punto de vista cualitativo, la 2-DE nos permite disponer de una gran cantidad de marcadores moleculares que nos permiten estudiar además un amplio espectro de loci y que se han aplicado para el estudio genético de poblaciones naturales de Mytilus galloprovincialis. Estos arcadores apenas se han aplicado a este tipo de estudios debido a que los primeros estudios detectaron unos niveles de variabilidad genética inferiores a los detectados mediante el estudio de otro tipo de marcadores moleculares, por ejemplo alozimas. No obstante la mayor parte de estos estudios están centrados en pocas especies de manera que la información de la que se dispone es redundante y sesgada como para obtener una visión adecuada de los niveles de variabilidad gen ética que este tipo de marcadores son capaces de detectar. Se requiere la obtención de estimas adicionales en otras especies. Así, se ha utilizado la 2-DE para medir el nivel de variabilidad genética de loci que codifican proteínas abundantes del mejillón marino Mytilus galloprovincialis, obteniéndose los niveles más elevados de heterozigosis media (0,101 0,018) detectados hasta la fecha en una espe-aie animal mediante 2-DE. Estos resultados ponen de manifiesto que es necesario un replanteamiento en torno a la cuestión de los niveles de variabilidad que la 2-DE es capaz de detectar. Por último, el conocimiento de los mecanismos mediante los cuales las poblaciones se diferencian genéticamente es central en genética evolutiva. En organismos marinos el peso relativo de las diferentes fuerzas que provocan esa diferenciación se desconoce en gran medida. Los lugares donde ocurren cambios genéticos abruptos son ideales para estudiar este tipo de procesos y suelen estar asociados a la presencia de barreras biogeográficas. Una de las barreras biogeográficas más interesantes es el frente oceanográfico Almería-Orán, en donde estudios de diferentes tipos de marcadores moleculares en varias especies de moluscos. crustáceos y peces han detectado la existencia de un cambio genético abrupto. Se estudió la estructura genética de poblaciones naturales de Mytilus galloprovincialis a partir de 8 muestras procedentes de las costas atlántica y mediterránea de la Península Ibérica, mediante el análisis de la variación genética existente en 38 loci polimórficos separados mediante 2-DE y su comparación con resultados precedentes obtenidos por otros autores mediante el estudio de alozimas. Se observó la existencia de una discontinuidad gen ética asociada al frente oceanográfico Almería - Orán y coincidente con la detectada en estudios previos mediante el análisis de marcadores de alozimas y DNA mitocondrial. El nivel de diferenciación genética detectado es más de tres veces superior al detectado mediante el análisis con alozimas. Se aportan nuevos datos acerca de las fuerzas evolutivas responsables de este patrón de estructura genética poblacional.

Autor: ZORRAQUINO LOZANO MIGUEL ANGEL.
Año: 2004.
Universidad: PÚBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE PRODUCCION AGRARIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DEL MEDIO NATURAL.

Resumen: La presencia de residuos de sustancias antimicrobianas en la leche además de suponer un riesgo de toxicidad para la salud pública, es una de las principales preocupaciones de la industria lechera, ya que pueden influir gravemente sobre las propiedades tecnológicas de la leche. Además, la información disponible sobre las características de termoestabilidad de dichos residuos, en concreto, en lo referente a los tratamientos térmicos utilizados en los laboratorios de control y en la industria láctea es muy escasa. Por ello se planteó el estudio del efecto de cinco tratamientos térmicos de la leche (40ºC 10 minutos, 60ºC 30 minutos, 83ºC 10 minutos, 120ºC 20 minutos y 140ºC 10 segundos) sobre la presencia de 29 sustancias antimicrobianas pertenecientes al grupo de los betalactámicos, aminoglucósidos, macrólidos, quinolonas, tetraciclinas y sulfamidas. Los antibióticos se han ensayado utilizando tres concentraciones diferentes. Las muestras de leche con antibióticos, tras ser tratadas térmicamente, se han analizado mediante un "Sistema Microbiológico Multiplaca" (SMMP), utilizando el microorganismo-sensor, medio de cultivo, y condiciones especificas (pH, temperatura y tiempo de incubación) optimizadas para la detección de cada grupo de antibióticos objeto de estudio. De los resultados obtenidos en el trabajo se concluye que el calentamiento de las muestras de leche a 40ºC durante 10 minutos, no ocasiona inactivación térmica en la mayoría de los antibióticos ensayados. El tratamiento a 83ºC durante 10 minutos produce una pérdida de actividad superior al 20% en algunas cefalosporinas, tetraciclinas y sulfametazina. La pasteurización baja (60ºC-30 min.) causa una leve inactivación sobre los antibióticos betalactámicos, eritromicina, espiramicina y sulfamidas (6-25%), resultando algo más elevada en las tetraciclinas (18-31%). La esterilización convencional (120ºC-20 min.) origina inactivaciones elevadas sobre las moléculas más termolábiles como los antibióticos betalactámicos, aminoglucósidos y tetraciclinas, superando en todos los casos el 50% de pérdida de actividad antimicrobiana, a excepción de la lincomicina que no presenta apenas inactivación (5%), mientras que las quinolonas y sulfamidas presentan inactivaciones moderadas (17-42%). El tratamiento térmico de 140ºC-10 seg. (tratamiento UHT) produce pérdidas de actividad antimicrobiana leve en las moléculas de betalactámicos, quinolonas, lincomicina y tilosina, mientras que aminoglucósidos, algunos macrólidos (eritromicina y espiramicina), tetraciclinas y sulfamidas presentan una inactivación intermedia (10-44%). De todo ello, se puede resumir que únicamente la esterilización clásica produce una mayor pérdida de actividad de los antimicrobianos presentes en la leche en comparación con el resto de tratamientos, aunque no llega a garantizar una completa inactivación. No obstante sería conveniente realizar más estudios sobre los cambios moleculares debidos a los tratamientos térmicos y a los posibles efectos toxicológicos de sus metabolitos.

Autor: MUÑOZ DE LA PASCUA LUIS.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: LABORATORIO DE NEUROBIOLOGIA DE LA AUDICION. DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR Y PATOLOGIA.

Resumen: La epilepsia es una enfermedad crónica del sistema nervioso que afecta a entre el 0,5-1 % de la población mundial. Su estudio depende del uso de modelos experimentales no humanos por consideraciones éticas obvias. En éste trabajo hemos recuperado el patrimonio genético de susceptibilidad convulsiva audiógena presente en una línea de hámsters sirios surgida en la Universidad de Valladolid y que estaba en peligro de extinguirse, creando una nueva línea denominada GASH/Sal (genetic audiogenic seizure hamster) con propensión a padecer crisis convulsivas audiógenas y que puede ser un valioso recurso en el estudio de ésta enfermedad y también, para probar nuevas terapias farmacológicas o genéticas. En nuestros resultados se ha determinado un patrón de transmisión hereditario autosómico recesivo para la susceptibilidad convulsiva audiógena, la relación de dicha susceptibilidad con la edad, así como determinadas alteraciones neuromorfológicas y neuroquímicas que pueden contribuir a la manifestación de las crisis convulsivas. Ésta línea de hámsters GASH/Sal, ha sido establecida en el S.E.A de la Universidad de Salamanca, siendo un modelo nuevo que puede contribuir de forma importante en la investigación de la fisiopatología y las bases moleculares de los desórdenes convulsivos. Además, éstos nuevos animales pueden ser de interés como posible modelo de oncogénesis, puesto que se ven afectados por una neoplasia linfoide con una prevalencia cercana al 25%.

Autor: GRADILLA CASTELLANOS ANA CITLALI.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR "SEVERO OCHOA".
Centro de realización: INSTITUTO CAJAL.

Resumen: La subfamilia de proteínas Ariadne, pertenece a la familia de proteínas RBR (RING finger-In Between RING Fingers-RING Finger) que funcionan como enzimas ligasa de ubiqutina E3 mediante su interacción con enzimas E2. En Drosophila melanogaster existen tres, Adriadne-1a, 1b y 2. En este trabajo, estudiamos el papel de Ariadne-1a como enzima E3 en el contexto del organismo; finalizando con un primer acercamiento a las relaciones funcionales entre esta proteína y los otros miembros de la subfamilia Ariadne. Anteriormente, se definió que la falta de función de Ariadne-1a es letal durante la pupación; nosotros encontramos que este fenómeno se repite en el caso del exceso de función, indicando que la estequiometría de esta proteína es primordial. En el estadio de pupa se da lugar a la metamorfosis y este proceso está regulado por la vía de señalización de la Ecdisona. La Ecdisona regula la expresión de genes durante el desarrollo mediante su unión a sus receptores nucleares, principalmente el heterodímero formado por el Receptor de Ecdisona y el receptor nuclear Ultraspiracles. Existen tres isoformas del Receptor de Ecdisona, las cuales mediante su expresión diferencial confieren especificidad temporal y espacial a la señalización hormonal. Durante el desarrollo de esta tesis, hemos encontrado que Araiadne-1a está involucrada en la vía de la ecdisona regulando a la isoforma A del Receptor de Ecdisona. Por otro lado, comprobamos que el fenotipo de reducción de retículo endoplásmico descrito para mutantes puntuales de ariadne-1a también se produce en mutaciones nulas, corroborando la importancia funcional de los motivos estructurales RING finger, además, analizamos este fenotipo en el exceso de función y curiosamente se produce un incrementos en el tamaño de este orgánulo al aumentar la cantidad de producto. Finalmente, describimos que la deficiencia de aridane-1a reduce la resistencia al estrés oxidativo producido por metales pesados y el estrés celular provocado por la inanición, y tiene un efecto neuro-protector en procesos neurodegenerativos durante el envejecimiento; quizá como consecuencia de las funciones de Ariadne-1a en la vía de la Ecdisona y en el retículo endoplásmico. En cuanto a otros miembros de este grupo de proteínas, la sobre-expresión de Ariadne-1b también produce fenotipos relacionados con la ruta de la Ecdisona, por lo que estas dos proteínas posiblemente están relacionadas funcionalmente en la regulación de esta vía de señalización.

Autor: Cánovas García Fernando.
Año: 2005.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Veterinaria.
Centro de realización: Facultad de Veterinaria.

Resumen: Los trabajos sobre la abeja de la miel (Apis mellifera L.) basados en marcadores morfométricos y genéticos, sugieren la existencia de cinco linajes evolutivos. La Península Ibérica es la zona de contacto entre dos de estos linajes y se reconoce la presencia de una subespecie particular: Apis mellifera iberiensis (Engel, 1999). Se le atribuye un origen híbrido entre las subespecies A. m. intermissa perteneciente al linaje evolutivo A, del norte de África, y A. m. mellifera, perteneciente al linaje evolutivo M, presente en la zona sur-occidental europea. Conforme a la hipótesis planteada, dicha subespecie presenta características híbridas en la composición del ADN mitocondrial, mostrando un gradiente de mezcla con dirección sudoeste-noreste. La zona noroeste peninsular revela una brusca transición entre linajes que se produce en unos pocos kilómetros, a diferencia de lo que sucede en la zona Mediterránea, donde la transición se presenta en varios cientos de kilómetros. Los resultados indican que la distribución geográfica de los haplotipos mitocondriales es compleja y refleja una vía de dispersión del linaje africano A por el oeste peninsular. Por su parte, el patrón de distribución del linaje europeo M parece estar relacionado con la existencia de uno o más refugios en la Península Ibérica durante el último periodo glacial. El uso de los modelos utilizados para la predicción de distribuciones de especies, basados en las preferencias ambientales de las mismas, muestran una gran tolerancia ambiental del linaje A y una relación con ambientes frecuentes en las costas del Atlántico, las zonas centro y sur de la Península Ibérica y la zona sur del Levante. El linaje mitocondrial M muestra preferencias por ambientes más fríos y húmedos, propios de zonas más septentrionales y continentales de la Península Ibérica. Para este proceso se elaboró información climática óptima, obtenida mediante diferentes métodos de interpolación a partir de una red de estaciones meteorológicas. El análisis de los microsatélites también muestra diferencias entre las poblaciones africanas y europeas de la especie. Este efecto está posiblemente causado por una reducción del tamaño efectivo poblacional debido a las oleadas de colonización y a los cambios climáticos durante el Pleistoceno. Los microsatélites tienen una estructura geográfica a gran escala, desde África hasta Europa. Esta estructura se pierde en la Península, aunque se reconoce un patrón espacial influido por los flujos poblacionales posiblemente derivados de las prácticas humanas (compra-venta de enjambres o trashumancia).

Autor: MERCADÉ CARCELLER ANNA M..
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE VETERINÀRIA.
Centro de realización: FACULTAT DE VETERINÀRIA. UNIVERSITAT AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Resumen: El objetivo principal de los proyectos IBMAP-2 (MCYT AGF99-0284-CO2) y de su continuación (INIA CPE03-010-C3) en los que se engloba el presente trabajo, es el refinamiento de la posición de los principales quantitative trait loci (QTL) detectados previamente en el cruce IBMAP relacionados con caracteres de calidad de la canal, de la carne y metabolismo lipídico. Para llevar a cabo este objetivo se ha incrementado el número de marcadores dentro de la región de los QTL y también se ha aumentado el número de meiosis informativas al añadir una generación F3 y un retrocruce. En los cromosomas 4, 8 y X se ha reducido el intervalo de confianza de la mayoría de QTL descritos previamente y además, se han detectado QTL nuevos en los tres cromosomas. Asimismo, la metodología estadística aplicada ha permitido determinar la presencia de al menos dos QTL para los caracteres estudiados en los cromosomas 4 y X. Paralelamente, otro objetivo de estos proyectos era el análisis de genes candidatos posicionales para los QTL de los cromosomas 4, 8 y X relacionados con el metabolismo lipídico. En el presente trabajo se han estudiado los genes FABP4, DGAT1, ACSL4, CDS1 y CDS2. Tres de ellos, el ACSL4, el CDS1 y el CDS2 han sido aislados y secuenciados por primera vez en porcino. Se han identificado polimorfismos en todos los genes mediante secuenciación. Sin embargo, la mayoría de polimorfismos se localizan en intrones o en regiones no codificantes. Únicamente se han detectado dos polimorfismos en el gen CDS1 que implican cambio aminoacídico. Además, para estos genes se ha analizado la distribución de las frecuencias alélicas en diferentes razas. También se ha determinado la localización cromosómica de los genes DGAT1, ACSL4, CDS1 y CDS2 mediante el panel de células somáticas híbridas irradiadas IMpRH. Se ha analizado el patrón de expresión de los genes ACSL4 y CDS1 y se ha caracterizado un procesamiento alternativo en el ARNm del gen ACSL4. Finalmente, con los polimorfismos de los genes FABP4 y ACSL4 se han realizado estudios de asociación para determinar el efecto de estas variantes genéticas. Se han encontrado asociaciones significativas con la deposición de grasa dorsal y con el contenido de ácido oleico para el FABP4 y ACSL4, respectivamente. Sin embargo, no podemos concluir que estos polimorfismos sean la mutación causal, únicamente se puede afirmar que esta se encuentra en un locus próximo.

Autor: CÉSPEDES VIGOYA WALKIRIA JANNETH.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: UNVIERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Resumen: Se ha analizado en la especie de Drosophila subobscura el polimorfismo cromosómico y el tamaño corporal en poblaciones experimentales, sometiendo una población experimental a distintos regímenes térmicos para detectar cambios genéticos (Cromosómicos y morfológicos). Los resultados obtenidos muestran unos cambios rápidos y consistentes en las frecuencias de las ordenaciones cormosómicas en respuesta a las distintas temperaturas estudiadas (13, 18 y 23 grados centigrados), indicando que la temperatura es un factor selectivo eficaz. Sin embargo, el análisis de dichos cambios revela un patrón complejo de respuesta a la temperatura, a menudo no consistente con las tendencias observadas en las clinas latitudinales naturales. Por tanto, la temperatura es una gente selectivo importante pero no explica por si misma las tendencias observadas de las clinas naturales del polimorfismo y el tamaño corporal. Igualmente se realizó un experimento para analizar la robustez fenotípica frente a cambios genéticos (inersiones9 y ambientales (temperatura); los resalados indican que la canalización y la estabilidad del desarrollo (términos que describen la capacidad amortiguadora de los organismos a las perturbaciones genéticas y ambientales) no están controlados por los mismos mecanismos subyacentes.

Autor: LÓPEZ GIRÁLDEZ FRANCESC.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: DEPARTAMENT DE GENÉTICA I MICROBIOLOGÍA.
Centro de realización: INSTITUT DE RECERCA I TECNOLOGÍA AGROALIMENTÁRIES (IRTA) UNIVERSITAT POMPEU FABRA.

Resumen: El objetivo global de mi tesis doctoral es el estudio de la variación genética en el ADN repetitivo de carnívoros para resolver cuestiones evolutivas de estas especies y por las posibles aplicaciones en genética de la conservación. La tesis se divide en cuatro partes: La primera consiste en el estudio de patrones de evolución de microsatélites en especies de la familia Mustelidae (orden Carnívora) porque presentan abundantes imperfecciones y patrones evolutivos anormales. El objetivo de este apartado es determinar la adaptación de estos microsatélites al modelo mutacional "step-wise", que es el que más comúnmente se asume en genética de poblaciones, y determinar el origen de la variabilidad que no puede ser detectada a través de procedimientos estándar de genotipado. Este trabajo se encuentra en revisión por la revista Journal of Heredity. En la segunda parte hemos aprovechado la conservación en carnívoros de la región flanqueante de un microsatélite compuesto complejo para analizar su origen y diversificación. Además, hemos utilizado la región flanqueante de este microsatélite para estudiar la información filogenética que aporta y compararla con las controversias actuales en filogenias de carnívoros. Este trabajo está aceptado para ser publicado en la revista Genetical Research. La tercera parte ha consistido en caracterizar la coevolución de los SINEs (Short Interspersed Elements) i los microsastélites en carnívoros. Con este trabajo hemos querido conocer en qué proporción son responsables los SINEs de la formación de microsatélites. También nos interesa conocer si, una vez el retroposón está insertado en el genoma, sus regiones repetitivas evolucionan de la misma forma que los patrones de evolución descritos por los microsatélites y qué tipo de repetición generan las regiones repetitivas de un SINE. Este trabajo se ha enviado a la revista BMC Genomics. El cuarto trabajo conssite en el diseño de un marcador genético específico de especie para su uso con muestras obtenidas de forma no invasiva. Gracias a la presencia de un SINE hemos podido crear un marcador que nos permite diferenciar 3 especies de mustélidos difíciles de diferenciar sin capturar y con prioridades de gestión muy diferentes: el visón americano, que es una especie invasora sobre la cual se está aplicando un programa de erradicación, y dos especies protegidas, el hurón y el visón europeo, una de las especies de carnívoros más amenazadas de extinción en Europa. Este trabajo se encuentra publicado en la revista Jorunal of Zoology.

Autor: DOMÍNGUEZ MACÍAS JORGE NICOLÁS.
Año: 2005.
Universidad: JAÉN.
Centro de lectura: UNIVERSIDAD DE JAEN.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Resumen: El proyecto de Tesis realizado por el candidato para optar al grado de Doctor, con tema provisional "Estudio de los patrones de expresión de los canales de sodio durante el desarrollo cardiaco de mus musculus. Análisis de los niveles de expresión de canales iónicos en el modelo transgénico -MHC-KvLQT-iso2-T7", y que se ha plasmado, a través de los objetivos señalados en dicho proyecto, en la Memoria de Tesis cuyo título se indica en el encabezado, constituye un trabajo de excelente calidad, aportando datos de relevancia para el entendimiento de la configuración electrofisiológica del corazón durante la morfogénesis; así como para el esclarecimiento de los mecanismos moleculares que subyacen en las alteraciones electrofisiológicas asociadas a cardiomiopatía dilatada. Así se pueden destacar los siguientes aspectos de esta Memoria: 1.- Carácter innovador del Tema: La temática general del a Tesis se enmarca en el ámbito del a Biología del Desarrollo y de las bases moleculares que sustentan la electrofisiología cardiaca. Durante el desarrollo embrionario del corazón se producen importantes modulaciones en la expresión de diversos genes que juegan un papel importante en la formación del órgano adulto. Diversos estudios electrofisiológicas han revelado que la correcta contracción sincrónica de las diferentes cámaras cardiacas, en el corazón adulto, se configura durante el desarrollo embrionario. Sin embargo, no se conocen qué genes están implicados en la configuración electrofisiológica definitiva del corazón adulto. El análisis de los patrones de expresión de los canales de sodio, responsables de la fase de despolarización del potencial de acción cardiaco, ha revelado que pueden estar implicados en la configuración electrofisiológica definitiva de las diferentes cámaras cardiacas durante la cardiogénesis. La relevancia de estos resultados queda avalada por el hecho de que, gran parte de los mismos, han sido publicados en revistas internacionales con alto índice de impacto (ej: Cardiovascular Research, que ocupa la tercera posición en el ranking de Cardiología en el SCI). Así mismo, es de destacar que estos resultados se han obtenido en colaboración con el Doctor Robert Thompson de la Medical University of South Carolina USA). Por otro lado, el análisis morfológico y de patrones de expresión para canales iónicos en un modelo transgénico de un tipo de arritmia cardiaca (Síndrome QT largo) han aportado interesantes datos para esclarecer las bases moleculares que sustentan las alteraciones electrofisiológicas asociadas a cardiomiopatía dilatada. 2.- Enfoque metodológico del a Tesis: La combinación de técnicas inmunohistoquímicas y técnicas de Biología Molecular que se han utilizado en este trabajo han permitido obtener datos de una alta fiabilidad. Una prueba de ello es que una de las publicaciones derivadas de esta Tesis Doctoral ha sido incluida en una Base de Datos internacional de expresión génica en ratón (Gene Expression Database (GXD)). Así mismo, el uso de animales transgénicos que recapitulan enfermedades análogas al los humanos, nos permite extrapolar estos resultados.

Autor: CARMONA LÓPEZ FRANCISCO DAVID.
Año: 2006.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Los procesos de determinación y diferenciación del sexo en mamíferos han adquirido un alto interés científico en los últimos tiempos. En mamíferos, la diferenciación sexual es un proceso que ocurre en dos etapas. En la primera de ellas, los primordios gonadales, presentes en ambos sexos, se desarrollan como testículos u ovarios en función de la dotación cromosómica del individuo. El camino elegido dependerá de la presencia o ausencia del cromosoma Y en el embrión. En este cromosoma se localiza el gen SRY, el cual inicia en los machos la diferenciación testicular del primordio gonadal en el momento crucial de la determinación del sexo. La ausencia de SRY en las hembras permite que, poco tiempo después, comience el desarrollo ovárico. En la segunda etapa, la producción de hormonas por parte de las gónadas provocará el desarrollo de las características sexuales secundarias del individuo, dando lugar al fenotipo masculino o femenino en función de si éste presenta testículos o no.