PARASITOLOGIA ANIMAL

Autor: VITUTIA GARCÍA M. MAR.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El suborden Ixodida está constituido por un grupo heterogéneo de parásitos hematógrafos (garrapatas).En este trabajo se han utilizado ocho especies representativas de las dos familias mayoritarias del taxón , que fueron seleccionadas por ser vectores comprobados o potenciales de agentes productores de enfermedades que afectan al hombre o animales.Uno de los objetivos fundamentales del trabajo ha sido estudiar en profundidad las relaciones evolutivas entre los distintos taxa del suborden, a partir de seis secuencias nucleotídicas mitocondriales. Para ello se secuenció el área de control y regiones adyacentes del ADN mitocondrial de las especies incluidas y se analizaron estructuralmente los genes identificados.Con los datos moleculares obtenidos se realizaron reconstruciones filogenéticas por distintos métodos y se evaluaron las hipótesis obtenidas. Los resultados detectan que el orden de genes de la sección Prostriata es mantenido por el género Árgas y confirman la organización genómica mitocondríal particular del grupo Metastriata.Las hipótesis filogenéticas generales proporcionaron agrupaciones conincidentes con la organización taxonómica clásica dividida en las dos familias Argasidae e Ixodidae.Las secuencias de la región de control de las especies analizadas proporcionan un elevado poder analítico para posteriores estudios poblaciones y epidemiológicos.

Autor: SAN MARTÍN OUTEIRAL SARA.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se ha realizado un estudio parasitológico analizando 956 anguilas, capturadas en las rías de Arousa (n=477) y Ferrol (n=479) entre enero de 1995 y diciembre de 1996. Las especies encontradas han sido: a) el monogéneo Pseudodactylogyrus anguillae; b) los digéneos Bucephalus anguillae, Lecithochirium musculus, L. rufoviride, L. furcolabiatum, Lecithaster gibbosus, Derogenes varicus, Deropristis inflata, Helicometra fasciata y Podocotyle angulata; c) los cestodos Grillotia sp. plerocercoide, Tetraphyllidea fam, gen sp" Bothriocephalus claviceps y Proteocephalus macrocephalus; d) los nematodos Cucullanus heterochrous, Contracaecum sp. larvae, Cystidicolidae gen, sp, larvae, Spinitectus inermis y Capillariinae gen. sp,; y e) los acantocéfalos Acanthocephaloides propinquus y Acanthocephalus clavula. Las especies más importantes en cuanto a su prevalencia, abundancia media e intensidad media fueron D. inflata, H. fasciata, L. musculus y p, angulata. Se llevaron a cabo estudios estadísticos comparativos según la ría de muestreo, la talla y peso del hospedador, la estación del año y la zona concreta de localización en el tracto digestivo. Además se han establecido correlaciones entre la presencia y la intensidad de las diferentes especies de helmintos. Las especies A. propinquus y L. furcolabiatum tienen más probabilidad de estar presentes en anguilas provenientes de la ría de Arousa que en las provenientes de Ferrol. Por otro lado, existen diferencias estadísticamente significativas de la intensidad entre ambas rias para las especies D. inflata, P. angulata, B. anguillae, L. musculus y H. fasciata. Tras analizar la influencia de la talla y el peso del hospedador en la parasitación, se ha observado que el riesgo de que un hospedador esté parasitado por las especies L. musculus y H. fasciata es proporcional al aumento de su talla. De la mísma forma, existe una correlación positiva entre la talla del hospedador y la intensidad de parasitación para las especies L. furcolabiatum y P. angulata; la intensidad de esta última especie también muestra correlación positiva con el peso del hospedador. Se ha deteminado la existencia de diferencias significativas entre las estaciones del año para algunos digéneos, si bien las estaciones en las que presentan su máxima intensidad varia con la especie. Las especies encontradas en el estómago muestran preferencia por la zona del ciego estomacal. Las especies intestinales D. inflata, H. fasciata y P. angulata manifiestan tendencia a localizarse en zonas concretas del intestino, presentando además diferencias significativas entre todas las zonas. Finalmente, existe una correlación positiva de presencia e intensidad entre determinados digéneos, como L. musculus y H. fasciata, y por otra parte, entre el acantocéfalo A. propinquus y los digéneos L. rufoviride, L. musculus, H. fasciata y B. anguillae.

Autor: MEDINA VOLTES MANUEL.
Año: 2004.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se estudia el parasitismo de peces marinos, de la Superfamilia Bucephaloidea, con la redescripcion de trece especies de Helmintos, localizados en un total de 2204 peces examinados que han sido muestreados en aguas del Archipielago Canario, aportando siete nuevas especies para la helmintofauna española, y tres nuevas especies de peces como nuevos hospedadores definitivos. Asi mismo se confirma la validez de Folliculovarium gimnotoraci, Bucehalopsis callicotile, y Labratrema minimus. Se realiza un estudio comparativo entre la parasitofauna de las Isla Hawai y la Islas Canarias. La subfamilia Bucephalinae esta representada por seis especies en los peces marinos de las Islas Canarias La subfamilia Prosorhynchinae por cuatro especies y la subfamilia Dolichoenterinae por dos especies y Folliculovarinae por una especie. Se acompaña un estudio de la zona de muestreo aportando los aspectos biologicos de las fases larvarias y de los ciclos biologicos conocidos, asi como los aspectos ecologicos y sistematicos de las especies estudiadas.

Autor: ALCAIDE ALONSO MARÍA.
Año: 2004.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La metastrongylosis es una de las parasitosis que en mayor medida afecta al ganado porcino criado en extensivo. Esta nematodosis pulmonar, durante muchos años ha sido olvidada por las connotaciones de su ciclo biológico, y es que la necesidad de la presencia de lombrices de tierra para su transmisión, no concordaban con las tecnificadas instalaciones requeridas para la explotación de las razas porcinas precoces. Pero el resurgimiento, con más vigor que nunca, de la cria tradicional del porcino Ibérico ha provocado que esta parasitosis esté en primera línea del panorama sanitario de las explotaciones ganaderas de porcino. Con el desarrollo de esta experiencia, pretendemos conocer en profundidad la repercusión a nivel multiorgánico de la metastrongylosis en el ganado porcino, especialmente en la valoración de la respuesta inmune celular y humoral que desarrollaron los porcinos frente al parásito, con objeto de evaluar el grado de resistencia frente a los diferentes tratamientos seguidos en el experimento. Para tal fin, se utilizaron 48 cerdos de raza Ibérica divididos en cinco grupos, a los que se les aplicaron diversas pautas de infección con Metastrongylus apri. Se trató de reproducir experimentalmente, diferentes situaciones de infección que pudieran darse en la naturaleza, desde infecciones simples, con 3000 L3 (Lote 1) y 1000 L3 (Lote 2), hasta infecciones con pequeñas dosis sucesivas (200+400+800 L3) y posterior reto con 1000 L3 (Lote 3). El lote 4 incluyó animales que fueron inmunizados con diferentes extractos antigénicos del parásito e igualmente, retados con 1000 L3. Finalmente, el lote 5 estaba constituido por un grupo de animales utilizados como control no infectados. Tres animales de cada grupo fueron sacrificados en los dias O, 14, 35 Y 84 post-infección..Se realizó un estudio comparativo entre los diferentes grupos experimentales, de los sintomas, de las lesiones macroscópicas en los pulmones e higados, de la histopatología en pulmones, hígados y ganglios, del número de larvas y adultos presentes, de su morfologia y localización en el pulmón, del número de huevos eliminados con las heces y del recuento diferencial de los eosinófilos en sangre. Para completar este análisis, fueron utilizadas técnicas como el ELlSA y la citometría de flujo, para poder evaluar la respuesta inmunológica humoral y celular, tanto a nivel sistémico como local. Los primeros signos clínicos, tos, respiración abdominal o disnea, fueron registrados entre los dias 10 y 12 post-infección. La intensidad y frecuencia con la que se produjeron, principalmente la tos, se correlacionó positivamente con la dosis infectiva aplicada. Asi mismo, se evidenció que las reinfecciones progresivas con pequeñas dosis y la inmunización con inócu!os elaborados a partir de larvas y adultos del parásito, redujeron en gran medida la gravedad de la sintomatología causada por éste parásito. Las lesiones descritas a nivel pulmonar, como enfisema, atelectasia, neumonia o granulomas, fueron significativamente más leves en los animales reinfectados. En conjunto, las lesiones pulmonares causadas por M. apri, se pueden encuadrar dentro de una típica neumonia parasitaria con tendencia a la cronicidad. En los ganglios torácico-pulmonares, en todos los grupos experimentales, se observó un proceso caracterizado por la hiperplasia e hipertrofia de los folículos linfoides, los cuales presentaron un centro germinativo muy desarrollado y una escasa corona folicular, propios de folículos muy activos. Las lesiones hepáticas más relevantes fueron las manchas de leche, que son un mecanismo de reacción del organismo frente a la migración errática de los estados larvarios. El parásito poseyó una alta capacidad de desarrollo en el tejido pulmonar de los porcinos, especialmente en los grupos primoinfectados, en los que la tasa de rec 8 uperació ad6 n osciló entre el 18-20%. En el lote de animales reinfectados, no se superó el1 %, lo cual evidenció la importante resistencia adquirida por estos, tras el contacto previo con dosis sucesivas de M. apri. Respecto al grupo de inmunizados, se observaron resultados muy similares a los detectados en los lotes 1 y 2, aunque al día 84 tras la infección, se observó una reducción del 50% de la población de vermes presentes en el pulmón. Se comprobó que la intensidad de los signos clinicos, las lesiones anatomopatológicas pulmonares y la intensidad de parasitación fueron dosis-dependiente. La proporción hembra/macho fue significativamente superior en los animales reinfectados respecto a los primoinfectados, mostrando que el sexo predominante en los procesos parasitarios con escaso número de individuos fue el femenino. Este fenómeno señaló la importante capacidad de supervivencia de la especie parásita en condiciones adversas. La longitud de las hembras adultas de M. apri, estuvo estrechamente relacionada con su capacidad de albergar huevos, puesto que se registró una correlación positiva entre la longitud media de las hembras y la concentración de los huevos en las heces. Los valores medios de la concentración de huevos en las heces en los animales infectados con una dosis alta de L3, fueron los más elevados de todos los registrados en el resto de grupos, seguidos por los animales de los lotes 2, 4 Y por último, del 3. Además, se detectaron correlaciones positivas significativas entre el número de adultos presentes y la carga de huevos en heces. Las lesiones más caracteristicas observadas en el parénquima pulmonar fueron la presencia de áreas atelectásicas, áreas enfisematosas compensatorias y un importante infiltrado de células fagociticas desde el 14 dpi. En las fases intermedias y finales del estudios se apreció la presencia de granulomas parasitarios, por ello el cuadro lesional definido en los pulmones de los animales infectados se encuadraron dentro de un proceso neumónico típico parasitario con tendencia a la cronicidad. Todos los grupos experimentales presentaron el mayor número de lesiones hepáticas al día 35 tras la infección. La presentación de las manchas de leche en el hígado atiende al desarrollo de resistencia frente al parásito. Esta relación entre la capacidad de respuesta y la patogénesis hepática, se hace.

Autor: ANDRADE MARIA DO AMPARO.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: DFACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La infección provocada por organismos parásitos provoca cambios en la fisiología del hospedador, que pueden favorecer o perjudicar al mismo. Uno de estos cambios se refleja en la producción de óxido nítrico (ON) por macrófagos del hospedador, como respuesta a ciertos estímulos parasitarios. El objetivo general de este proyecto doctoral fue evaluar el efecto sobre la producción de ON por macrófagos alveolares que ejercen diversos antígenos (crudos o moléculas purificadas), obtenidos de seis géneros de helmintos (Echinococcus, Paragonimus, Schistosoma, Trichinella, Dirofilaria y Ascaris) implicados en la lesión de diferentes estructuras del aparato respiratorio Conclusiones obtenidas: Tanto los antígenos procedentes de pared quística (PQ) de E. multilocularis y E. granulosus como los antígenos derivados de la capa laminar (CL) de E. multilocularis inhiben la producción estimulada de ON por los macrófagos alveolares de rata. La proteína recombinante 14-3-3 de E. multilocularis es uno de los componentes responsables del efecto supresor observado por los antígenos procedentes de la CL y PQ del parásito. .Los antígenos excretores/secretores (E/S) procedentes de los trematodos P. mexicanus y S. bovis modulan de forma diferente la producción de ON, siendo únicamente los derivados de P. mexicanus los que estimulan la producción de ON. -Existen diferencias entre las especies quísticas y no quísticas de Trichinella en su capacidad para estimular la producción de ON. -Una molécula de 35,3 kDa, aislada del antígeno somático de adultos de D. immitis y perteneciente a la superfamilia de inmunoglobulinas, estimula la liberación de ON. -Los antígenos E/S obtenidos tanto de estadios larvarios como de fases adultas de A. suum son capaces de estimular la producción de ON. Específicamente, una fracción de PM comprendida entre 37-46 kDa, del antígeno E/S de adulto de A. suum, está involucrada en su producción.

Autor: CASANUEVA GOMEZ PATRICIA.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Este trabajo plantea disponer de una vacuna efectiva contra la fasciolosis, enfermedad animal y humana causada por el trematodo Fasciola hepatica. Probamos la utilización de proteínas unidas a ácidos grasos (FABP) y péptidos recombinantes derivados de estas, en nuevos sistemas de adaptación-adyuvados, y medimos si aumentan los niveles de protección obtenidos con anteriores sistemas utilizados. Los pasos que se siguieron en el desarrollo de este trabajo fueron: obtención y purificación de moléculas recombinantes unidas a ácidos grasos procedentes de Fasciola hepatica; diseño y expresión de péptidos reconocidos por linfocitos T derivados de la molécula recombinante Fh15; se ensayaron estas moléculas con nuevos productos adyuvados incorporando inmunomoduladores no tóxicos; Posteriormente se realizó una evaluación de la protección con diferentes protocolos de inmunización e infección, utilizando distintos modelos experimentales (conejo, cordero y ratón); y por último se estudió la respuesta inmunológica desencadenada por la aplicación de la vacuna analizando su balance Th1-Th2 y su evolución a lo largo de los experimentos realizados. Una vez realizados los experimentos, observamos que se obtuvo un alto grado de protección en conejos inmunizados con Fh15, efecto que se potencia al aumentar el intervalo de tiempo entre la vacunación y la infección; Los efectos positivos obtenidos en la vacunación con Fh15 en modelo ovino consisten en deficiencias en el desarrollo físico y biológico de los vermes, tanto disminución del tamaño del parásito como retraso en su maduración y disminución en el número de huevos producidos. Los experimentos utilizando un péptido recombinante derivado de Fh15, fusionado con glutation -S- transferasa muestran adecuados niveles de protección, similares en tres modelos experimentales diferentes. Los altos niveles de IgG2a detectados en ratones supervivientes vacunados tanto con Fh15 como con el péptido recombinate T51-62 sugieren que los mecanismos de protección inducidos por esta vacuna se deben al predominio de respuestas Th1.

Autor: MARTIN JUAN EMILIO.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: En el presente estudio se ha llevado a cabo el análisis helmintofaunístico de 8 especies y subespecies de hospedadores pertenecientes al género Gallotia (Sauria: Lacertidae) de las Islas Canarias, en concreto: G. stehlini (Gran Canaria), G. caesaris caesaris (El Hierro), G. c. gomerae (La Gomera), G. galloti galloti (Tenerife), G. g. palmae (La Palma), G. atlantica atlantica (Lanzarote), G. a. laurae (Lanzarote) y G. a. mahoratae (Fuerteventura). En total, se han encontrado 23 especies de helmintos: 1 Digenea (Pseudoparadistomum yaizaensis), 5 Cestoda (Mesocestoides sp., Dipylidium sp., Diplopylidium acanthotetra, Oochoristica agamae y Nematotaenia tarentolae), 16 Nematoda (Thelandros filiformis, Thelandros galloti, Thelandros tinerfensis, Alaeuris numidica canariensis, Tachygonetria dentata, Tachygonetria macrolaimus, Tachygonetria conica, Tachygonetria numidica, Parapharyngodon micipsae, Parapharyngodon echinatus, Parapharyngodon bulbosus, Spauligodon atlanticus, Skrjabinelazia pyrenaica, Skrjabinelazia hoffmanni, Skrjabinodon medinae y Spirurida gen. sp.), y 1 Acanthocephala (Centrorhynchus sp.). El análisis efectuado revela diferencias en la estructura y composición de las comunidades helmintianas de estos lagartos canarios, tanto entre sí, como en relación a otros lacértidos insulares y continentales. Estas diferencias están principalmente relacionadas con: (i) la existencia de especies endémicas de helmintos; (ii) la presencia de nematodos Pharyngodonidae típicos de reptiles herbívoros, en todos los hospedadores excepto en los de las islas más orientales (G. atlantica) y, en mayor medida, en los lagartos de mayor tamaño (G. stehlini); (iii) la existencia de comunidades helmintianas con tendencia hacia una elevada diversidad en términos de riqueza y abundancia de especies, principalmente en los hospedadores de mayor tamaño y en los de mayor contenido de materia vegetal en sus tractos digestivos (G. stehlini y G. galloti palmae).

Autor: REDONDO GAMERO MARIA JOSE.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA (UNIVERSITAT DE VALENCIA ESTUDI GENERAL).

Resumen: Enteromyxum scophthalmi parasita el tracto digestivo del rodaballo produciendo una grave enfermedad emaciativa conocida como "síndrome de la cabeza hundida", causante de elevada mortalidad, con la consiguiente repercusión en el cultivo de esta especie. Para una adecuada prevención de la enteromixosis, es necesario el conocimiento de la epidemiología, ciclo vital y transmisión del parásito, aspectos que se abordan en el presente trabajo. Aunque no se pudo lograr el cultivo continuo in vitro de E. scophthtalmi, se comprobó que los estadios pueden permanecer viables hasta 12 días en medio M199 y 24 horas en agua de mar. Se demostró la transmisión experimental por cohabitación de peces infectados y sanos, mediante efluente contaminado por estadios del parásito y por vía oral, y se obtuvieron datos epidemiológicos en el seguimiento de infecciones naturales en las granjas. El estudio de los peces natural o experimentalmente infectados, así como la utilización de un modelo in vitro en presencia de explantes de tejido intestinal, permitió obtener información detallada sobre la transmisión y desarrollo del mixosporidio. Los estadios presentes en las distintas etapas de infección se clasificaron en estadios iniciales y proliferativos (ST1, ST2 y ST3) y estadios esporogónicos (ST4 y ST5), que se caracterizaron morfológicamente (microscopía óptica y electrónica), y mediante técnicas histoquímicas, incluyendo hibridación in situ. Con estos resultados se estableció un modelo tentativo del ciclo de vida y transmisión del parásito, y se identificaron los principales factores de riesgo de enteromixosis en cultivo de rodaballo. Los datos obtenidos sobre la entrada y dispersión de los estadios infectivos, son útiles para arbitrar medidas de prevención y control que eviten la introducción y diseminación del mixosporidio en las granjas de cultivo, y su dispersión en el medio natural.

Autor: RIBAS SALVADOR ALEXIS.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.

Autor: LORENZO MORALES JACOB.
Año: 2005.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA, ECOLOGIA Y GENÉTICA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LA LAGUNA.

Resumen: En este trabajo se presenta un estudio epidemiológico y molecular del género acathamoeba en ambientes subtropicales (Canarias) y tropicales (Jamaica). Se analizaron muestras de agua de uso doméstico, aguas de mar, aguas de ríos y suelos, en zonas relacionadas con actividades humanas. Las ambebaas aisladas fueron cultivadas para su caracterización, identificándose su especie/genotipo. Para la correcta identificación de los aislados obtenidos, se realizaron una serie de pruebas moleculares basadas en la reacción en cadena de la polimerasas (PCR). En primer lugar, los aislados obtenidos se sometieron a PCR empleando cebadores genéricos para el género acanthamoeba. Posteriormente los aislados que dieron amplificación positiva, se sometieron a PCr empleando cebadores específicos para las especies A.Astronyxis, A.Divionensis y A. Polyphaga. Todos los aislados clasificados como pertenecientes al género Ãcanthamoeba, fueron caracterizados desde el punto de vista de su capacidad patogénica y virulencia, para lo que se emplearon cebadores que amplifican un fragmento que solo presentan las amebas patógenas, y cebadores de serin-proteadas extracelulares. Finalmente, todos los aislados fueron genotipados, empleando la región diagnostica DF3 de la subunidad pequeña del ARN Ribosom la (ssurRNA), que permite agrupar a los aislados en los denominados Grupos T, desde T1 a T15. Los resultados obtenidos permitieron concluir que las amebas relacionadas con zonas de estrés osmotico y térmico presentaban un mayor grado de patogenicidad y virulencia. Tras la puesta a punto de las técnicas moleculares para la identificación de especies de Acanthamoeba en la universtiy of the west indies, Kingston, se describe el primer caso diagnosticado se Queratitis por Acanthamoeba en Jamaica, siendo la especie A.Polyphaga, la responsable de la infección, lo que demuestra que Acanthamoeba es un patogeno emergente que puede causar patologías en las zonas tropicales. Dentro de los factores de Virulencia de Acanthamoeba, se estudio el papel del as serin-proteasas extracelulares de estas amebas, para ello se empleo ARN de interferencia como herramienta para el silenciamiento del dominio catalítico de estas proteasas. Para comprobar la eficacia del silenciamiento se estudiaron las actividades de estas proteasas mediante zimogramas de proteasas, medición delas actividades proteasas delos sobrenadantes de los cultivos, y se realizaron los ensayos de citotoxicidad y análisis de los niveles de ARN mensajero (ARNm) de Serin-Proteasas y extracelulares, tanto de amebas no tratadas como e aquellas tratadas con RNAi, procedentes de muestras clínicas y ambientales de diversa virulencia. Tras el tratamiento se observó un descenso en los niveles de proteasas extracelulares, de la citotoxicidad y delos niveles de ARNm en las cepas patógenas y moderadamente patogenas. Demostrando que las serin-proteasas extracelulares estan directamente involucradas en la patogenesis y virulencia de acanthomoeba.

Autor: PEREZ JIMENEZ EVA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DDE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El término leishmaniosis engloba un grupo de enfermedades parasitarias causadas por diferentes especies de protozoos del género Leishmania. La enfermedad es endémica en las regiones tropicales y subtropicales en 88 países diferentes de Asia, África, Europa y América, 72 de los cuales son países en vías de desarrollo. Según la Organización Mundial de la Salud, 350 millones de personas están expuestas a contraer la enfermedad. Se estima que la prevalencia mundial es de 12 millones de personas afectadas. A pesar de que existe un tratamiento con drogas, la aparición de variantes del parásito resistentes a las mismas es cada vez más común. El hecho de que tras una infecicón natural con Leishmania spp., se adquiera inmunidad frente a sucesivas infecciones, sugiere que la inmunización profiláctica es factible. Sin embargo, aún no existe una vacuna efectiva. El desarrollo de una vacuna capaz de conferir inmunidad a largo plazo frente al parásito es un factor crucial para el control de la leishmaniosis. Una vacuna óptima debe inducir tanto células T CD4+ y T CD8+ específicas para el parásito. En este trabajo, hemos analizado diferentes estrategias para modular la respuesta inmune inducida utilizando la proteína LACK de L,infantum como antígeno, así como la eficacia para conferir protección frente a las formas cutánea y visceral de la enfermedad en el modelo murino. Los protocolos de inmunización basados en una primera dosis con un vector de ADN que expresa la proteína LACK (ADN-LACK) seguido de una segunda dosis con un virus vaccinia (VV) que expresa la misma proteína, han demostrado conferir protección parcial frente a la infección con L.major. Para mejorar este protocolo de inmunización, en primer lugar estudiamos si las interleuquinas 12 (IL-12) e IL-18 podían mejorar la protección obtenida. Encontramos que la inmunización con una primera dosis con ADN-LACK junto con dos vectores de ADN que codifican para las citoquinas IL-12 e IL-18, seguido de una segunda dosis con un virus vaccinia recombinante que expresa LACK, inducía una respuesta inmune de tipo Th1 y confería un alto nivel de protección frente a la infección con L.major. Debido a los problemas de seguridad derivados del uso de vacunas vivas basadas en virus replicativos, el siguiente objetivo que nos propusimos fue generar un virus vaccinia recombinante basado en la cepa altamente atenuada MVA que expresase la proteína LACK de L.infantum (MVA-LACK). En este trabajo hemos demostrado que la inmunización basada en una primera dosis con ADN-LACK seguida de una dosis con MVA-LACK induce un mayor número de células T CD8+ secretoras de IFN-gamma así como mayores niveles de IFN-gamma en los sobrenadantes de los esplenocitos restimulados con la proteína LCAK en comparación con la inmunización con el virus replicativo VV-LACK. Además, la protección obtenida frente a la infecicón por L.major fue significativamente superior en los animales inmunizados con AD-LACK/MVA-LACK al ser inmunizados con la misma dosis viral. Esta protección se mantiene a lo largo del tiempo durante al menos 17 semanas y se correlaciona a su vez con mayores niveles de células T CD8+ específicas secretoras de IFN-gamma y TNF-alpha. Para determinar si nuestro protocolo de inmunización podía inducir protección frente a diferentes formas de la enfermedad evaluamos la eficacia de este protocolo de inmunización frente a la leishmaniosis visceral producida por L.infantum. Un mes después de la infección con el parásito, los animales vacunados con el protocolo de inmunización heterólogo ADN-LACK/Virus vaccinia recombinante, mostraron altos niveles de protección, que fueron comparables en los animales inmunizados tanto con MVA-LACK como con VV-LACK, lo que apoya el empleo del virus atenuado MVA-LACK como vacuna frente a la enfermedad. Nuestros datos muestran la clara ventaja del virus MVA-LACK empleado en inmunizaciones heterólogas sobre el virus replicativo VV-LACK como vector vacunal. Por lo tanto, MVA-LACK es un candidato vacunal prometedor para su uso en el control de la lesihamniosis.

Autor: KLISIOWICZ DEBORA DO ROCIO.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La enfermedad de Chagas o Tripanosomosis Americana es una patología de elevada importancia en la mayoría de los países Americanos siendo la eliminación de los vectores la única forma eficaz de intentar interrumpir el ciclo de esta enfermedad. El presente trabajo tiene como objetivo, mediante la secuenciación de la región intergénica del ADN ribosomal nuclear (ITS-1, 5.8S e ITS-2) y del gen mitocondrial NADH desidrogenase 1 (ND1) estudiar el subcomplejo infestans con la finalidad de entender el proceso de expansión y domiciliación de estas especies y aportar herramientas que puedan auxiliar en la sistemática, epidemiología y control de este grupo de insectos. Para este estudio fueron analizados 95 ejemplares del referido subcomplejo, incluyendo Triatoma infestans (77), Triatoma melanosoma (2), Triatoma platensis (4) y Triatoma delpontei (12). Los marcadores ITS-1 e ITS-2 permiten la distinción entre especies y poblaciones del subcomplejo infestans. Es la primera vez que se describe un gen mitocondrial (ND1) completo para las especies del subcomplejo infestans presentando este gen una variabilidad nucleotídica mayor que la región intergénica. Los dos marcadores utilizados en este estudio se mostraron como excelentes marcadores moleculares para el subcomplejo infestans y separan las poblaciones ¨andinas¨ de T. infestans de las ¨no andinas¨. Estos marcadores también confirman que los insectos denominados como T. melanosoma y la variante cromática ¨dark-morph¨ de T. infestans deben ser considerados dentro de la especie T. infestans. Los análisis filogenéticos con marcadores ribosomales separan claramente las distintas especies del subcomplejo infestans mientras que, con el mitocondrial evidencian una topología no coincidente con la región intergénica señalando que en la historia evolutiva de las especies de este subcomplejo hubo hibridización.

Autor: Díaz de la Guardia Quiles Rafael.
Año: 2006.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Facultad de Ciencias.

Resumen: Giardia es un protozoo flagelado que infecta el tracto superior del intestino delgado de muchas especies de vertebrados, entre las que se encuentra el hombre, siendo la causa más frecuente de infección gastrointestinal humana producida por protozoos parásitos. En este trabajo, hemos caracterizado algunas de las propiedades que presenta una proteína de Giardia lamblia, aislada en nuestro laboratorio, que posee características similares a una FABP, tales como: * Su peso molecular exacto. * Su capacidad para ligar ácidos grasos, junto con la cinética de desplazamiento de estos y la constante de desplazamiento. * El rendimiento en su purificación. * La capacidad que tiene de formar agregados proteicos, junto con la pérdida de funcionalidad cuando ocurre esto y su posible significado biológico. * La proporción de aminoácidos que componen un fragmento de esta proteína, poseyendo el extremo N-terminal bloqueado. También hemos conocido la secuencia de nucleótidos que la codifica, mediante la realización de diversos acercamientos genéticos tales como: * La amplificación del gen que codifica para esta proteína mediante la utilización de DNA genómico, y dos cebadores diseñados de una secuencia consenso de nucleótidos de la secuencia de esta misma proteína pero de otros organismos. * La realización de una reacción 3 prima RACE a partir de mRNA y un cebador específico de la secuencia consenso junto con dos inespecíficos creados de modo artificial. * La realización de una genoteca de expresión, la cual hemos rastreado, obtenido un clon positivo, cuya secuencia ha sido analizada, encontrando además en su interior un intrón, provocando que se discuta la idea actualmente aceptada de que los intrones entraron en el genoma de los eucariotas a través de las mitocondrias.

Autor: VARA DEL RIO MARÍA DEL PILAR.
Año: 2006.
Universidad: LEÓN.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La producción ovina en Castilla y León ha tenido y mantiene una gran relevancia dentro de las producciones ganaderas. La fasciolosis es una enfermedad parasitaria producida por trematodos del género Fauciola, destacando F. hepática como una de la especies más comunes y de distribución cumopolita, siendo el ganado ovino de las especies más afectadas y estando su presencia ligada a condiciones ambientales que condicionan tanto el desarrollo de sus estadios intermedios como del hospedador intermedio. La administración de fasciolicidas y la técnica más frecuente de lucha de la enfermedad y ya se han descrito las primeras de resistencia frente a los tratamientos más frecuentes: albendazol, triclabendazol y clorsulón. Los objetivos del trabajo son determinar la prevalencia de la fasciolosis en la Comunidad asi como su posible presencia de resistencia y poner a punto técnicas para su detección, tanto de tipo molecular como enzimáticos u otras. Se ha realizado un seguimiento de la presencia de huevos en heces y de la evaluación de diferentes parámetros enzimáticos, hemóticos y bioquimicos. Se han diseñado un modelo de muestreo de rebaños basados enla desparasitación incial y toma de muestras que se repiten los dias +5,+15,+30 La prevalencia de la Comunidad ha sido e 26,6% de rebaños (superior a estudios previos). En un 50 % de la explotaciones algún fármaco no fue eficaz en 3 de ellas 2 no lo fueron y en 1 última ninguno fue elicaz. La infección hospedadores intemedios y definitivos demuestran menos adaptación. Se han encontrado diferencias a nivel del gen que codifica para la subunidad 285 ribosumal y de la B-tubulina.