GENETICA CLINICA

Autor: RODRIGUEZ-REVENGA BODI LAIA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGҍA-UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El síndrome de Williams (SW) es un trastorno del desarrollo caracterizado por rasgos faciales característicos, retraso mental con un determinado y único perfil cognitivo y de personalidad, hipercalcemia infantil y anomalías en el tejido conectivo que incluyen arteriopatías, las más características es la estenosis supravalvular aórtica (SVAS). Es por tanto, un desorden multsistémico que se presenta con una incidencia de 1/20.000 nacidos vivos y que es da con igual frecuencia entre hombres y mujeres. Aunque la mayoría de casos de 3W son esporádicos se han documentado varias familias en las que el síndrome se presenta siguiendo un patrón de herencia autosómico dominante. La alteración molecular implicada en el SW es una deleción hemicigota de aproximadamente 1,5 Mb en el cromosoma 7 que concretamente afecta la región 7q11.23. Es por tanto, uno de los síndromes de genes contiguos ya que la deleción afecta a varios genes localizados en la región implicada. El mecanismo causal en el SW parecer ser la haploinsufiencia génica de algunos de los genes que se encuentran en la región delecionada. De todas formas, tampoco se descartan otros mecanismos como: 1,- Que la deleción ponga al descubrimiento una mutación recesiva en el otro alelo del gen. 2,- Que la deleción pueda afectar a genes sometidos a imprinting, es decir, que normalmente se expresan desde uno de los alelos dependiendo de su origen parental. 3,- Que la deleción de alguno de estos genes afecte a la expresión de otros ubicados en otra zona del genoma. Hasta el momento, se han descrito 20 genes con locus en esta región, uno de los cuales es el que codifica para la proteína de la elastina (ELN). Este es el único gen con el que se ha podido establecer una correlación genotipo-fenotipo, ya que alteraciones en sus secuencia dan las características manifestaciones cardíacas y vasculares presentes en el SW. Mientras que el SW es el resultado de la haploinsuficiencia del gen ELN y de otros genes situados cerca, mutaciones en este mismo gen dan lugar a los desordenes autosómicos dominantes distintos: la estenosis supravalvular aórtica (SVAS) y la cutis laxa. Los estudios genéticos utilizando hibridación ins itu fluorescentes (FISH) y análisis de pérdidas de heterocigosidad con marcadores de la región 7q11.23 evidencian la pérdidad de material genético y posibilitan el diagnólstico del SW. Estos estudios permiten acotar las delecciones, establecer una correlación genotipo-fenotipo y estudiar el origen parental y su repercusión en el fenotipo. El hecho de utilizar conjuntamente las técnicas moleculares y de FISH no sólo permite caracterizar las distintas deleciones que presentan los pacientes. El presente trabajo intenta profundizar en el conocimiento del SW a través de la caracterización de los pacientes afectos que el Servicio de Genética del Hospital Clínico ha recogido en los últimos siete años.Igualmente, también pretende realizar un estudio mutacional del gen ELN en aquellos pacientes a los que no se ha demostrado una deleción del mismo gen pero que fenotípicamente presentan algún tipo de afectación cardiovascular, y caracterizar molecularmente el síndrome de cutis laxa. Se han analizado 200 pacientes con sospecha clínica de SW y mediante algunas de las dos técnicas utilizadas, se ha puesto de manifiesto una hemicigosidad de la región crítica en 70 casos. Esto representa que sólo un 35% de los casos recibidos son sospecha clínica de SW realmente presenten la delección. En 5 de estos, el estudio molecular no ha sido informativo mientras que en los 65 restantes, se ha podido estudiar y determinar el origen parental de la deleción. Se ha realizado el estudio mutacional del gen ELN en un total de 28 individuos que presentaban en su fenotipo alguna afectación cardiaca o rasgos distintivos de cutis laxa. Este estudio 8 ha permi 442 tido identificar un total de once cambios de los cuales tres ya habían sido descritos con anterioridad. Nueve son polimorfismos y los otros dos son cambios missense en los exones 22 y 26. Entre los polimorfismos, sies son intrónicos y tres se expresan al ser exónicos. Respeto a la cutis laxa, en la literatura sólo existían 3 casos des critos en los que la mutación cauante estuviera descrita. El presente estudio también ha permitido identificar una cuarta mutación relacionada con este desorden. A parte de las implicaciones científicas, este trabajo de investigación pone de manifiesto una vez más la utilidad del análisis genético como herramienta diagnóstica para este síndrome.

Autor: ROS MACHO-QUEVEDO RAQUEL.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: BANCO DE TEJIDOS PARA INVESTIGACIÓN NEUROLÓGICA.F.MEDICINA.UCM.

Resumen: Este trabajo ha consistido en la búsqueda de las posibles lesiones genéticas responsables de la taupatías,enfermedades que constituyen después de la enfermedad de Alzheimer y Parkinson el grupo emergente más importante de enfermedades neurodegenerativas.En especial nos hemos centrado en el estudio de la parálisis supranuclear progresiva, tanto esporádica como familiar y en las demencias frontotemporales. Nuestros análisis han permitido en el caso de la PSP: . La localización de un locus en una gran familia española , con confirmación patológica en el probando, en el cromosoma 1 en la región 1q31. . La identificación como factores de riesgo , tanto enlos casos esporádicos como familiares, de polimorfismos situados en los genes TAU,STH Y PARK2. . Una nueva mutación en el gen TAU en una familia con diagnóstico clínico y patolófico de PSP. Respecto a otras demencias degenerativas no Alzheimer, el análisis del gen TAU en los 33 casos estudiados nos ha permitido la identificación de tres mutaciones en el gen TAU, dos ya reportadas, en dos pacientes con demencia frontotemporal y una nueva,en un caso de afasia progresiva primaria.

Autor: QUINTEIRO GARCÍA CELSA.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE COMPOSTELA.

Resumen: La talla baja afecta al 2 ó 3% de la población general y en menos de un 1% se identifica la causa de la alteración del crecimiento, su diagnóstico es taIla baja idiopática (TBI) y muchos casos probablemente están provocados por defectos sutiles en elementos implicados en la respuesta a la GH. El estudio de la secuencia del ADN ha aumentado el conocimiento de otras causas de hipocrecimiento como la DCHH, el déficit aislado de GH, el síndrome de Laron y el síndrome de insensibilidad parcial a la GH. Las bases moleculares de las alteraciones que IIevan a la taIla baja se han desarroIlado por la localización y caracterización de los genes que codifican las proteínas implicadas en el crecimiento. Objetivos: 1.Estudiar en el grupo de deficiencia de GH asociada a deficiencia de otras hormonas hipofisarias los genes PROPI y POUIFI, en el grupo de pacientes con deficiencia aislada de GH, el gen GHl yen los casos de insensibilidad a la GH, el gen RGH y en pacientes con discondrosteosis el gen SHOX. 2. En pacientes con TBI analizamos los genes GHI y RGH intentando aumentar el espectro mutacional del los genes GHI y RGH. 3.Estudiar la fTecuenciade los polimorfismos de estos genes, comparando distintos grupos diagnósticos entre sí, y en algunos casos con población control. Conclusiones: l. La confirmación de la base genética de las alteraciones del crecimiento necesita la demostración de las mutaciones en los genes implicados, por lo que hemos puesto a punto las técnicas de análisis molecular de los genes PROPl, POUIFl, GHl, RGH Y SHOX mediante la secuenciación completa de los mismos. 2. Se encontraron en 14 pacientes (28% de los casos) con DCHH, mutaciones en PROPl y en POUIFl. Las mutaciones encontradas son las más frecuentes en todas las series publicadas. 3. En GHl hemos identificado 31 cambios nucleotídicos, de éstos 20 no han sido previamente descritos. En la secuencia codificante encontramos 9 mutaciones. El gen GHl presenta una variabilidad elevada, con dos zonas "calientes", una en la región 5' y la otra en el intrón IV. Algunas de estas variantes pueden ser originadas por un mecanismo de conversión, consecuencia de la estructura multigénica dellocus GH. El espectro más amplio de variantes se encontró en los pacientes con taIla baja familiar y en ningún caso se encontraron grandes deleciones. 4. En el gen RGH encontramos 4 mutaciones en 5 pacientes, describiéndose por primera vez una mutación en el exón 2 de este gen (M 1L) Y demostrando así que el análisis de la región codificante de la proteína madura es insuficiente para la identificación de todas las mutaciones. Se encontró en el único paciente con síndrome de Laron. Mutaciones en RGH pueden jugar un papel importante en la patogenia de la talla baja cuando se presenta formando parte de otros síndromes, como en el síndrome de Costello. 5. Encontramos un 43% de casos con haploinsuficiencia del gen SHOX, la mitad de ellos por pérdida de un alelo y la otra mitad por mutaciones puntuales. Se ha descrito tres nuevas mutaciones, una de ellas en la regiól1 OAR, donde nunca se habían encontrado. El análisis mediante secuenciación del exón 5b ha revelado un polimorfismo de nucleótido único, útil para establecer la existencia o no de la deleción de un ale lo. 6.En los pacientes con TBI se identificaron mutaciones en heterocigosis en los genes GHI y RGH, ninguna de nava, lo que apoya la presentación familiar del cuadro. Estos resultados concuerdan con otros trabajos, en los que cuadros más leves se asocian con mutaciones en un solo ale lo, mientras que en los más severos están afectados ambos. 7. El desarrollo de los conocimientos moleculares permite un diagnóstico cada vez más preciso de las alteraciones 8 del crec 2a2 imiento, no sólo en los casos de déficits hormonales sino en la clarificación etiológica de ese "cajón de sastre" que es la TBI y en consecuencia, conducirá al tratamiento correcto en aquellos individuos en quienes sea factible, y a realizar un consejo genético adecuado.

Autor: FÉRNANDEZ GARCÍA RAQUEL M..
Año: 2004.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: HOSPITALES UNIVERSITARIO VIRGEN DEL ROCIO.
Centro de realización: UNIDAD CLÍNICA DE GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN, HHUU VIRGEN DEL ROCIO.

Resumen: A. HIPOTESIS DE TRABAJO: Diversos estudios funcionales han puesto de manifiesto que el proto-oncogén RET se asocia, po mecanismos contrarios, tanto a la aparición de enfermedad de Hirschsprung (HSCR) como de cáncer medular de tiroides (MfC). Así, hoy día se sabe que mutaciones germinales de RET que conducen a una ganancia de función del receptor originan formas familiares de MfC (síndromes MEN 2), mientras que otras mutaciones que producen una pérdida de función son causantes de HSCR. Nuestro grupo tiene evidencias muy significativas de la asociación de la variante A45A, localizada en el exón 2 de RET, con el fenotipo HSCR. Todos los resultados publicados previamente por nuestro grupo sugieren la existencia de un locus ancestral asociado a los haplotipos que contienen A45A, ubicado en 5' respecto a esta variante y en un intervalo de 0-20Kb (región que se corresponde con el intrón 1de RET). El principal objetivo del presente proyecto de tesis es la identificación y caracterización molecular de ese locus de susceptibilidad para HSCR. En concreto, dicho locus podria estar asociado a un dominio implicado en la regulación de la expresión de RET. La consecución de estos objetivos contribuiria así al esclarecimiento de la base genética de esta enfermedad. Asimismo, dada la naturaleza poligénica de HSCR, hemos pretendido desarrollar una evaluación sistemática de otros genes candidatos, con el fin de identificar factores de susceptibilidad asociados a su aparición. Por otra parte, el conocimiento sobre la etiología del cáncer medular de tiroides esporádico es bastante escaso. No obstante, puesto que mutaciones activadoras de RET son responsables de las formas familiares de MfC, y que la mutación somática M918T se ha encontrado en lma proporción importante de tumores esporádicos, este gen pasa a ser el principal candidato como gen de susceptibilidad para las formas MfC esporádicas. Esta hipótesis es apoyada por el hecho de que en el punto de partida del presente trabajo, el único factor de susceptibilidad descrito para MTC esporádico en una serie de casos alemana era el polimorfismo S836S, localizado en el exón 14 de RET. Por consiguiente, nos planteamos la posibilidad de que cambios de secuencia de los genes que participan en la cascada metabólica de RET, tales como el propio receptor, sus ligandos o coreceptores, puedan jugar un papel en la patogénesis de MTC. Partiendo de esta idea, hemos iniciado una búsqueda de factores de susceptibilidad genéticos para esta patología en esos genes candidatos. B OBJETIVOS PLANTEADOS l. Identificación y caracterización molecular de un nuevo locus HSCR, ligado a los haplotipos que contienen el polimorfismo A45A del gen RET. 2. Análisis de mutaciones y polimorfismos en otros genes candidatos para HSCR. Evaluación de su implicación en la aparición de la enfemledad. 3. Búsqueda de factores de susceptibilidad genéticos para el MfC esporádico en genes candidatos para dicha patología. C CONCLUSIONES l. Se ha caracterizado una nueva mutación en el proto-oncogén RET, c.2304G menor T (E768D), en una paciente con cáncer medular de tiroides. La ausencia de otros rasgos clínicos o historia familiar de MEN 2A parece indicar que esta mutación se asocia con el fenotipo FMTC. 2. El fenómeno de asociación de las variantes -193C menor Gy 537Tmenor C del gen GFRAl a las formas esporádicas de MfC en la población alemana no es reproducible en la población española. Ninguna de las variantes de los genes GFRAl-3 parecen ser factores de susceptibilidad para el desarrollo de la enfermedad en nuestra población. 3. Tanto el análisis mutacional como la evaluación de los polimorfismos en los genes GFRAl, GFRA2, GFRA3 y GFRA4 como factores de susceptibilidad para HSCR, descartan estos genes como responsables en la patogénesis de la enfermedad. 4. Se han identificado dos variantes de secuencia en el proto-oncogén RET sobre-representadas en nuestra serie MfC, S836S e IVSl-126G menor T. Estos hallazgos sug 8 ieren la 4c1 existencia de un locus de susceptibilidad de baja penetrancia para MTC, ligado a ambas variantes, que podria localizarse en dirección 5'. 5. Hemos identificado un alelo específico del proto-oncogén RET, asociado a las formas esporádicas de la enfermedad de Hirschsprung. Los estudios funcionales in vitro parecen indicar que dicho alelo provoca una disminución del nivel de nivel expresión del gen RET. Estos resultados sostienen que este alelo, probablemente en conjunción con otros factores de susceptibilidad, es causante de la aparición de HSCR esporádico. 6. La mutación C620S del proto-oncogén RET es la causante del cuadro MEN 2A, pero no de la enfermedad de HSCR en una familia en la que cosegregan ambos fenotipos, descartándose por tanto el efecto dual propuesto por otros autores para dicha mutación.

Autor: CORNO CAPARROS ANDRES.
Año: 2004.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: ANALISIS GENETICOS ANCOR.

Resumen: El cáncer colorrectal (CCR) es una patología muy prevalente. Está asociado a factores genéticos, entre otros. La susceptibilidad individual al CCR puede ser debida a variaciones en la capacidad de activar y detoxificar endógenos y exógenos y de reparar el daño que estos provocan en el ADN. Determinados polimorfismos en genes, pueden dar lugar a variaciones en las actividades detoxificadoras y reparadoras y así aumentar el riesgo individual de padecerlo. Se estudian las frecuencias del polimorfismo nulo en los genes de detoxiviación GSTM1 y GSTT1, las frecuencias del polimorfismo de corte MSp I (T6235C) y lle462Val 8C4889G) en el gen CYP1A1 de activación metabólica y las frecuencias del polimorfismo Ala677Val (C677T) en el gen MTHFR del metabolismo de los folatos que participa en los mecanismos de síntesis, reparación y metilación del ADN. MATERIAL Y MÉTODO Estudio observacional de casos y controles incidentes, en caucásicos residentes en la misma área geográfica (Vega Baja Alicante). Muestra de casos: 93 pacientes con diagnóstico confirmado de adenocarcinoma colorrectal (anatomía patológica) y controles, 117 pacientes hospitalarios con patología no neoplásica (herniorrafias y colecistectomías). Se empleó kit de Qiagen para extraer y purificar el ADN a partir de sangre total. Los polimorfismos nulos en GST;1 y GSTT21 se analizaron mediante una múltiplex, siguiendo método descrito por Arand. Los polimorfismos en CYP1A1 se determinaron con el método descrito por Drakoulis 1994, por amplificación y corte con Msp I CYP1A1*2, y por ASO CYP1A1*3 para el polimorfismo A4889G. El polimorfismo C677T en el gen MTHFR por el método de Frosst por PCr y posterior digestión del amplificado con Hinf.I. Se recogieron las variables: edad, género, peso, talla, índice de masa corporal, hábito de ingesta alcohol, hábito tabáquico, localización tumoral, estadiaje de Dukes y tipo histológico del tumor. En el análisis de resultados, se ha utilizado un modelo estadístico de regresión lineal, cálculo de odds ratio y valor de P. Se ha realizado un análisis individualizado de cada variable frente a riesgo de patología y análisis de asociaciones entre genotipos y las variables clínicas y epidemiológicas. RESULTADOS En nuestra serie se asocian significativamente a riesgo de CCR los portadores de los polimorfismos: GSTM1*1 OR=1,90 (IC 95% 1.52-2.28) Pmenor 0.05, GSTT1*0 OR=3.09 (IC 95% 2.34-3.85) P menor 0.05 y MTHFR*2 OR= 3.08( IC 95% 1.81-4.36= P menor 0.05. El genotipo nulo en GSTM1*0 OR= 0.7 (IC95% 0.48-0.92) P menor 0.05 está asociado significativamente a protección. Se obtuvo un valor significativo de P menor 0.05 en la localización distal en relación al genero, siendo más frecuente en hombres 64% frente a mujeres 36%. En el análisis de los genotipos de riesgo en función a los grupos de edad: 15-44 años, 45-64 años y mayor 65 años se obtuvieron valores significativos de asociación a riesgo y d eP en los polimorfismos siguientes: GSTM1*1 OR=1.57 (IC95% 1.45-1.69) P menor 0.001, GSITT1*0 OR= 3.98 (IC95% 3.88-4.1) P menor 0.001 y MTHFR*2 OR=5.49 (IC95% 5.35-5.63) P menor 0.001 en el grupo de edad de mayores de 65 años. Las personas con un mayor riesgo son las portadoras de las siguientes combinaciones de polimorfismos, en el grupo de edad de mayores de 65 años. GSTM1*1 + GSTT1*0 OR=3.99 (IC95% 3.9-4.1) P menor 0.001 GSTM1*1 + MTHFR*2 OR=5.49 (IC95% 5.3-5.6) P menor 0.001 GSTT1*0+MTHFR*2 OR=7.17 (IC95% 7.02-7.3) P menor 0.001 GSTM1*1+GSTT1*0+MTHFR*2 OR=13.9 (IC95% 13.8-14.0) P menor 0.001 También fueron significativos en el grupo de edad 45-64 años las asociaciones GSTT1*0 + MTHFR*2 OR= 1.53 (IC 95% 1.2-1.8) P menor 0.01 y GSTM1*1+GSTT1*0+MTHFR*2 OR=2.98 (IC95% 2.8-3.2) P menor 0.001. CONCLUSIONES Se han identificado factores genéticos asociados significativamente a riesgo fren 8 te a ade 667 nocarcinomas colorrectales esporádicos en nuestras serie. Su análisis puede contribuir a la identificación de grupos de riesgo y la elucidación de factores implicados en la carcinogénesis colónica. Los resultados en GSTM1 nulo son contrarios a la hipótesis de partida de asociación de riesgo. En nuestra serie del genotipo nulo se asocia significativamente a protección y es el genotipo salvaje el que se asocia a riesgo significativo. Los polimorfismos en CYP1A1, CYP1A1*2 y *3 se asocian a reisgo pero con valores no significativos. La metilen tetrahidrofolato reductasa de menor actividad MTHFR*2, confiere un mayor riesgo frente a l CCR, en la población estudiada. La asociación de dos o más genotipos de riesgo, de una forma especial GSTM1*1-GSTT1*0 y MTHFR*2 confiere un riesgo elevado en especial en el grupo de edad de más de 65 años, lo que plantea la conveniencia de investigar el potencial preventivo de suplementos dietarios con alimentos ricos en folatos.

Autor: GIMÉNEZ BACHS JOSÉ MIGUEL.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: INTRODUCCIÓN En la etiología del cáncer renal de células renales (CCR) se han implicado diversos factores, entre ellos los genéticos. Dentro de éstos, la alteración del brazo corto del cromosoma 3 es un hecho muy frecuente. En dicha localización se encuentra el gen vhl, gen supresor tumoral, relacionado con la enfermedad de von Hippel-Lindau, de transmisión familiar. Dicho gen puede presentar alteraciones en el CCR de aparición esporádica, de manera que se producen alteraciones que impiden una correcta ejecución de la función supresora de la proteína resultante. OBJETIVOS Determinar la existencia de mutaciones en el gen vhl en tejido renal tumoral de pacientes con carcinoma renal esporádico. Analizar el tipo y localización de mutaciones encontradas, así como el cambio que produce en la proteína y si éste asienta en lugares importantes desde el punto de vista funcional. Además, relacionar la presencia de mutaciones con factores pronósticos como el estadio tumoral, tipo histopatológico, grado nuclear, etc., analizando también la estructura secundaria de la proteína mutada. SUJETOS, MATERIAL Y MÉTODO Estudio descriptivo observacional y analítico sobre 86 pacientes diagnosticados de CCR y tratados quirúrgica mente en el Servicio de Urología del Complejo Hospitalario Universitario de Albacete, entre Agosto de 2000 y Mayo de 2004. Se obtuvieron muestras de tejido tumoral de los especimenes quirúrgicos así como de tejido renal sano que se utílizaron como control. De dichas muestras se extrajo ADN para la amplificación de cada uno de los 3 exones que conforman el gen vhl, mediante la técnica de PCR. El producto amplificado se sometió a secuenciación automática, con el objeto de detectar mutaciones en las regiones codíficantes del gen. Asimismo se realizó la caracterización de las mutaciones encontradas, analizando los cambios de aminoácido producidos en la proteina y una predicción de la estructura secundaria de la misma. La variable dependiente considerada fue la existencia de mutaciones en el gen vhl, realizándose análisis descriptivo con medidas de tendencia central y dispersión de cada una de las variables independientes; análisis bivariante para estudiar la asociación entre dos variables; y se aplicó un modelo multivariante de regresión logistica para estudiar la relación entre las variables independientes analizadas y la dependiente. RESULTADOS La edad media de los pacientes fue de 63,1 años, con una distribución por sexos de 58 hombres (67,4%) y 28 mujeres. Los pacientes fueron sometidos a cirugía radical en el 66,3% de los casos, y en un 30,2% a nefrectomía conservadora de parénquima. El hallazgo incidental de los tumores fue la causa más frecuente de consulta (52,3%). Se produjeron complicaciones derivadas de la cirugía en el 25,6% de los pacientes, bien en el momento de la íntervención quirúrgica o en el postoperatorio. El tamaño tumoral fue en un 45,3% entre 4 y 7 cm, y en un 29,1% mayor de 7cm. El tipo histopatológico más frecuente fue el de células claras con un 62,8%, seguido del papilar (14%) y el cromófobo (10,4%). En un 55,8% de los casos el grado nuclear de Fuhrman fue 2 y en el 23,2% fue 3. Un 59,2% de los pacientes tenían un estadio pT1a ó pT1 b al diagnóstico y tan solo el 4,7% fueron estadio pT4. La evaluación de la afectación ganglionar se realizó en 22 casos, de los cuales 16 presentaron adenopatias tumorales. El 16,3% de los casos presentaron metástasis a distancia en el rr.omento del diagnóstico. Se detectaron un total de 20 mutaciones el gen vhl en el tejido tumoral renal de 19 pacientes (22,1 %), no hallándose mutaciones en las muestras control. La edad media de los pacientes con mutación fue de 74,2 años 8 y se hal 9d8 laron mutaciones en un 17,8% de mujeres frente a un 24,1% en hombres. Las mutaciones presentaron asociación estadística únicamente con el subtipo histopatológico, de modo que el 78,9% acontecieron en carcinomas de células claras. Un 45% de las mutaciones se localizaron en el exón 2, un 35% en e11, un 5% en el 3 y el resto en localización intrónica. El 65% de las mutaciones fueron puntuales, un 30% deleciones y un 5% inserciones. 7 de las mutaciones exónicas originaron una proteína truncada. En total se consideró que de las 17 mutaciones exónicas, un 70,6% generaban cambios relevantes para la función de la proteína, bien por dar lugar a una proteína truncada, por las características fisico-quimicas de los aminoácidos mutados o por el grado de conservación de los aminoácidos a lo largo de la evolución, mientras que el 41,2% generaron cambios importantes en la estructura secundaria de la proteína según la predicción realizada. De las 3 mutaciones intrónicas, 2 generaron cambios que podrían afectar a la función de la proteína. En el análisis multivariante aplicado la única variable independiente que permaneció en el modelo fue el estudio anatomopatológico del tumor, de modo que la existencia de mutaciones en el gen vhl es 8,33 veces mayor en el subtipo de células claras que en el resto de las variantes patológicas. CONCLUSIONES El gen vhl presenta mutaciones en el carcinoma de células renales de aparición esporádica, siendo éstas más frecuentes en el subtipo de células claras. Dichas mutaciones no presentan asociación con distintos parámetros clínico-patológicos como estadio tumaral, tamaño y grado nuclear. Las mutaciones asientan en su mayoría en lugares importantes desde el punto de vista funcional, lugares conservados a lo largo de la evolución y donde se localizan los dominios de unión a otras proteínas mediante las que ejerce su función supresora. Por lo tanto, las mutaciones del gen vhl representan un evento implicado en la génesís del cáncer renal, que ayuda a su comprensión y al enfoque de nuevas armas diagnósticas y terapéuticas para el abordaje clínico de esta enfermedad.

Autor: CORRAL GUDINO LUIS.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Introducción La Enfermedad Ósea de Paget (EOP) es una enfermedad crónica y focal del esqueleto cuya alteración inicial está localizada en los osteoclastos. Las citocinas IL-1 e IL-6 desempeñan un importante papel en el remodelado óseo, modulando la diferenciación y actividad osteoclástica, por lo que su estudio podría aportar datos a la etiopatogenia de la EOP. Objetivos - Establecer las características clínicas de la EOP en un foco de alta prevalencia. - Describir la respuesta al tratamiento en una cohorte histórica. - Valorar la relación entre distintos polimorfismos de IL1 e IL6 y la EOP. Material y Método Se estudiaron 211 pacientes (35% procedentes del foco de alta prevalencia correspondiente al partido judicial de Vitigudino [Salamanca]). Se obtuvó muestra de sangre periférica de 126 de estos pacientes para posterior estudio del DNA mediante PCR-RFLP. Se seleccionó como grupo control a 122 individuos sin enfermedad metabólica ósea conocida. Resultados y Conclusiones - Los pacientes pertenecientes al foco de alta prevalencia de Vitigudino tienen formas clínicas más graves de EOP, son diagnosticados más tempranamente y presentan un mayor porcentaje de hombres que los pacientes del resto de la provincia de Salamanca. - La eficacia del tratamiento con calcitonina es inferior a la de cualquier bifosfonato y existe una tendencia a una mejor respuesta de la EOP al tratamiento con bifosfonatos nitrogenados. - La presencia del alelo A2 del polimorfismo -511 C/T en la región promotora del gen de la IL-1B se asocia a una mejor respuesta al tratamiento con bifosfonatos. - No encontramos relación entre los polimorfismos +3953 T/C en el exón 5 del gen de la IL-1B, VNTR en el intrón 2 del gen del IL1-RN, en la región 5´UTR del gen del IL-1 R1 y el -174 G/C en la región promotora del gen de la IL-6 y la EOP.

Autor: CRUZ GONZALEZ IGNACIO.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La HIPERTENSIÓN ARTERIAL REFRACTARIA (HTA-R) se define como aquellas situaciones en las que no es posible alcanzar el objetivo de presión arterial en pacientes que han realizado modificaciones en el estilo de vida y están tomando las dosis adecuadas de una terapia farmacológica de 3 medicamentos incluyendo un diurético. Hasta el momento esta entidad ha sido abordada como una falta de cumplimiento o mala praxis, sin embargo parte de esta resistencia podría determinarse a nivel genético Estudiamos en 50 pacientes HTA-R, 234 hipertensos controlados y 112 sujetos sin hipertensión los polimorfismos genéticos -786C mayor que T NOS3, 984G mayor que T, 35G mayor que C PPARG, 8473C mayor que T PTGS2, 825C mayor que T GNB, 1947G mayor que A COMT, GSTM1, GSTT1, 313A mayor que G GSTP1. Encontramos diferencias entre HTA-R e hipertensos controlados, el alelo C de -786C mayor que T NOS3 es más frecuente en HTA-R con respecto a los controlados (p = 0,014 OR 2,32 (1,17-4,63)), el alelo T de 825C mayor que T GNB3 se asocia a hipertensión con respecto a sujetos control (p = 0,016 OR 1,4 (1,04-1.91)), y a hipertensión controlado con respecto a HTA-R (p = 0,035 OR 0.6 (0.38-0.96), el alelo nulo de GSTM aumenta la susceptibilidad de desarrollar HTA-R con respecto a hipertensión controlada (p = 0,025 OR 2,029 (1,08-3,78)), y la presencia de GSTT se relaciona con hipertensión con respecto a los controles (p = 0,040 OR= 1,68 (1,021-2,77)) Por tanto existen diferencias en la distribución de los genotipos de los genes seleccionados en este trabajo entre pacientes con hipertensión arterial refractaria, hipertensión controlada y sujetos no hipertensos, lo que sugiere que el origen de la hipertensión arterial y su respuesta al tratamiento se encuentran, al menos en parte, condicionadas a nivel genético.

Autor: ESTEBAN CARDEÑOSA EVA Ma..
Año: 2004.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FAC. MEDICINA.

Resumen: Se estima que aproximadamente el 5% de los cánceres de mama son hereditarios. Haste el momento se ha descrito dos genes de alta susceptibilidad a cáncer de mama y de ovario, denominados BRCA1 (Miki et al. 1994) y BRCA2 (Wooster et al. 1995). Se han descrito más de 3000 mutaciones extendidas a lo largo de los dos genes de susceptibilidad descritos (BIC). Los portadores de una mutación patogénica en alguno de ellos tienen un riesgo muy alto de desarrollar la enfermedad a lo largo de su vida. El análisis genético a través de técnicas de biología molecular que determinana las mutaciones en ambos genes permite identificar las familias con cáncer de mama u ovario hereditarios, posibilatando la puesta en marcha de protocolos de seguimiento y tratamiento específicos para los individuos, sanos o enfermos, en los que se detecta una mutación patogénica. Estos procesos son muy laboriosos, pues se trata del rastreo de dos genes grandes en los que se han descrito mutaciones en todos sus exones. En la mayoría de los estudios, el procedimeinto de detección de mutaciones se basa en el uso de técnicas de pre-rastreo (SSCP, DGGE, CSGE, PTT...), y posteriormente se estudian por secuenciación las muestras sospechosas de portar una mutación (Easton et al. 1995). Por estos motivos, el resultado de los test genéticos de los BRCAs, por otra parte, casda vez más demandados, tarda varios mese en recibirse. El objetivo principal de la tesis es la detección de mutaciones en los genes de BRCA1 y BRCA2 entre familias pertenecientes a Castilla y León y la evaluación de su efecto patogénico; así como la identificación de las familias que portan esas mutaciones patogénicas, a las cuales se les puede aplicar medidas de prevención y tratamientoespecífico del cáncer de mama y ovario hereditarios. Para facilitar esta labor de búsqueda de mutaciones se pretende poner a punto un nuevo método de detección de mutaciones rápido y sensible basado en la electroforesis capilar en un secuenciador automático. Se quiere conocer también si en las familias sin mutación en los genes N¿BRCAs está presente el alelo de baja penetrancia c.1100delC del gen CHEK2. Se seleccionana 280 familias castellano-leonesas con historia familiar y/o pesonal de cáncer de mama y ovario, se recoge muestra de sangre periférica de ellas y se procede a su análisis mutacional utilizando diferentes técnicas. (PTT y análisis de heterodúplex por CSGE). Además se pone a punto un nuevo método, el Análisis de Heterodúplex por Electroforesis Capilar (AHEC), de mayor rendimiento en el análisis y mayor sensibilidad que los anteriormente nombrados. Con el nuevo método se pueden analizar dos pacientes en una sola carrera electroforética de hora y media de duración. Tras el análissi molecular en las 280 familias seleccionadas, se han detectado 101 mutaciones diferentes en los dos genes analizados, 30 de ellas son descritas por primera vez a nivel mundial en nuestro estudio. Venticuatro son mutaciones patogénicas, esto es, que se relacionana con la aparición del cáncer de mama y ovario en esas familias. Dos de ellas son grandes reordenamientos génicos que representan los primeros casos descritos en población española de este tipo de mutacioens en los gernes BRCAs. Se han identificado 44 familias no relacionadas que presentan m,utación patogénica en alguno de los dos genes de alta susceptibilidad y, por tanto, el cáncer de mama y ovario en ellas es hereditario. La tasa de mutación más alta se encontró en familias con casos de cáncer de mama y ovario a la vez. La variante c.1100delC del gen CHEK2 está ausente en nuestra muestra poblacional. Por tanto, CHEK2 no es un gen de susceptibilidad a cáncer de mama en la población estudiada. Se descarta, pues, su rastreo mutacional rutinario en nuestra población de moderado-alto riesgo de cáncer de mama y ovario. La no identificación de mutaciones deletéreas en 8 los gen 3cc es de alta susceptibilidad a cáncer de mama, BRCA1 y BRCA2 sugiere la existencia de más genes de alta susceptibilidad al cáncer de mama hereditario, o bien la existencia de un modelo alternativo de herencia (modelo poligénico) en una proporción significativa de lo que conocemos como cáncer de mama familiar.

Autor: BLANCO VICTOR MARTIN.
Año: 2004.
Universidad: PABLO DE OLAVIDE.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Resumen: Se estudian los efectos del par conjugado NH3/NH4+ (amoníaco/amonio) sobre el volu-men celular acuoso (VCA) y el pH intracelular (pHi) en células de neuroblastoma N1E-115 in vitro. El VCA y el pHi se miden simultáneamente, en células aisladas, a partir de los cambios en la fluorescencia del indicador BCECF, tras la incorporación de éste a las células. Para los registros se utilizó una técnica de microscopía de fluorescencia cuanti-tativa desarrollada y validada en nuestro laboratorio. Se demuestra que la exposición transitoria de las células a soluciones isosmóticas conteniendo NH3/NH4+ (NH4Cl: 0,5-30 mM) produce, además de los cambios esperados en el pHi, cambios en el VCA, en los que se distinguen 4 fases: 1) un aumento rápido; 2) una disminución reguladora del volumen (DRVi); y tras la eliminación del pulso de NH4Cl: 3) un encogimiento rápido, seguido de 4) un aumento regulador del volumen (ARVi). La ocurrencia de cambios en el volumen celular ante la exposición a sales de amonio, aunque predicha desde hace más de 80 años (H. M. Jacobs, 1940), no había sido demostrada hasta el presente. A partir de la caracterización de estos cambios, se investigan los mecanismos subyacentes a los mismos. Se concluye que una parte importante del aumento inicial del VCA se de-be a la acumulación intracelular de NH4+ y un hipotético anión acompañante, aún no identificado, que sería necesario para preservar la electroneutralidad macroscópica del interior celular. El modelo presentado tiene su correlato fisiopatológico en el edema cerebral asociado con las hiperamonemias agudas en el hombre, y constituye una herramienta útil para el estudio de los mecanismos patogénicos de estas últimas.

Autor: Camprubí Sánchez Cristina.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Facultat de Ciències.
Centro de realización: Escola de Postgrau.

Autor: GARCIA HOYOS MARIA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Autor: SANTIAGO ALVAREZ JOSE LUIS.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE SALAMANCA.

Resumen: La Diabetes Tipo 1 (T1D) es una enfermedad autoinmune multifactorial mediada por Linfocitos T resultado de la destrucción selectiva en los islotes pancreáticos de las células productoras de insulina. El riesgo a sufrir T1D está determinado por una compleja interacción entre multiples genes y determinados factores ambientales. A pesar de que la enfermedad se encuentra fuertemente asociada al complejo principal de histocompatibilidad (MHC), hay más de 18 potenciales loci identificados hasta la fecha. Se analizaron marcadores genéticos el MHC en un estudio caso-control con 302 pacientes T1D y 529 controles. La frecuencia fenotípica de DR3-TNFa1b5 fue más alta en pacientes heterocigotos T1D DR3-positivos que en controles DR3 heterocigotos DR3-positivos. Estos datos se confirmaron analizando las frecuencias alélicas y mediante el uso del programa Arlequin para revisar los haplotipos DR3-positivos. Estos datos se confirmaron analizando las frecuencias alélicas y mediante el uso del programa Arlequin para revisar los haplotipos DR3-positivos. Nuestros resultados apoyan de forma inequívoca la existencia de una segunda región de susceptibilidad en el haplotipo ancestral 18.2 en la población española. Además, nuestros resultados sugieren que existen en el MHC haplotipos de susceptibilidad y/o protección adicionales a DR3-DQ2, DR4-DQ8 y DR2-DQ6. Está claramente establecido que el MHC es responsable de cerca de la mitad de la susceptibilidad a la T1D. Sin embargo, se ha señalado que cambios en el balance de las respuestas Th1/Th2 parecen jugar un importante papel en el desarrollo de la diabetes autoinmune, de hecho la enfermedad se correlaciona con la producción de citocinas tipo 1, mientras que la protección para la enfermedad se asocia con las citocinas tipo 2. Para tener una visión de conjunto decidimos hacer una selección de citocinas de ambos grupos. Así dentro del primer grupo hemos estudiado interleucina-12 (IL-12) e interferón (IFN ) y del segundo grupo IL-10 e IL-4. En el gen de la IL-10 hemos analizado 3 polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs) en la región promotora y 2 microsatélites (IL-10G e IL-10R) en las proximidades del gen. Encontramos una asociación positiva de los alelos IL-10G*12 e IL-10G*14 con la enfermedad, asociación previamente observada con otras enfermedades Th1 como son la esclerosis múltiple y la artritis reumatoide en el caso de IL-10G*12 y con la enfermedad de Crohn para el alelo IL-10G*14. En el caso de la otra citocina Th2 estudiada (IL-4) ninguno de los marcadores analizados se encontró asociado con la T1D. Por lo que respecta a los polimorfismos en las regiones donde se localizan los genes de las citocinas Th1 (IL12B y IFNG), estimamos las frecuencias haplotipicas mediante el programa Arlequin. De todos los haplotipos analizados encontramos dos que se asocian significativamente a la enfermedad, uno en la región IL12B y otro incluyendo al gen IFNG. Además, encontramos un haplotipo IL12B protector.

Autor: FERNÁNDEZ NÚÑEZ JUAN M..
Año: 2004.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD MEDICINA (BADAJOZ).

Resumen: La hipercolesterolemia familiar (HF) sumo de los trastornos mogénicos más frecuentes en la patología humana. Ocurre en 1/500 personas para heterocigotas y 1/1,000,000 para --. Los pacientes tienen un elevado riesgo coronario en edades jóvenes dela vida. La alteración bioquímica es una mutación en el gen del receptor de CD. Se han estudiado 100 pacientes con diagnóstico clínico de HF en Extremadura. Se presentan los datos del estudio clínico, la prevalencia de enfermedad cardiovascular precoz en los pacientes y en familiares de primer grado, así como los factores predictos del riesgo cardiovascular en esta población. Así mismo se estudian las imitaciones del gen del R-LDL encontrados. Se realizan comparaciones con los estudios más importantes nacionales e internacionales.

Autor: CORDOBÉS LÓPEZ JESÚS.
Año: 2004.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIDAD DE INVESTIGACIÓN. ÁREA SANITARIA DE OSUNA - SEVILLA.

Resumen: INTRODUCCIÓN La diabetes tipo 2 representa una importante causa de morbi-mortalidad y de incapacidad permanente en los países desarrollados. La asociación con otros factores de riesgo cardiovascular, sobre todo con hipertensión arterial, dislipemia y consumo de tabaco, incrementa la probabilidad de que el diabético presente un evento vascular. En la actualidad existe el consenso de realizar un tratamiento intensivo de dichos factores de riesgo cardiovascular en la población diabética. El tratamiento hipolipemiante con inhibidores de la HMG-CoA reductasa (estatinas) ha demostrado una disminución de la mortalidad por los eventos cardiovasculares, pero existen pocos estudios que evalúen la disminución en la incidencia de patología cardiovascular en pacientes con diabetes tipo 2. La arterosclerosis es un proceso multifactorial, en el que intervienen tanto factores genéticos como ambientales: cada vez es más conocido la relación entre determinados polimorfismos genéticos, la alteración del metabolismo lipoproteico que condicionan y la modulación del riesgo vascular que provocan. Uno de los polimorfismos más relacionados con la alteración del metabolismo lipoproteico y la enfermedad cardiovascular es el gen de la apolipoproteína C-III. No se conoce la posible influencia del polimorfismo genético de la apo C-III sobre la modulación del metabolismo lipoproteico de la semivastatina en diabéticos tipo 2 con dislipemia. OBJETIVOS Evaluar el grado de control de los diferentes factores de riesgo cardiovascular en diabéticos tipo 2 con dislipemia, después de 6 meses de seguimiento, así como determinar la respuesta terapéutica de simvastatina durante dicho período. Determinar la frecuencia y la influencia del polimorfismo de la apolipoproteína C-III sobre el control metabólico, su relación con los factores de riesgo cardiovascular y con la presencia o no de macroangiopatía diabética. DISEÑO Estudio quasiexperimental de intervención terapéutica con simvastatina, longitudinal y prospectivo, realizado sobre una población de diabéticos tipo 2 con hipercolesterolemia, seguidos durante 6 meses, elegidos al azar de las consultas de Medicina de Familia y de Medicina Interna del Área Sanitaria de Osuna, divididos en dos grupos, de forma no aleatoria, sin macroangiopatía diabética (sMD) y con macroangiopatía diabética (sMD). MATERIAL Y MÉTODO Pacientes diabéticos tipo 2 con hipercolesterolemia con edad entre 40-80 años, se les realizó un seguimiento durante 6 meses, divididos en 3 consultas (basal, 3 meses y final), en el que se determinó los datos antropométricos y los diferentes metabolismos implicados. Se determinaron los polimorfismos genéticos de la apolipoproteína C-III, de la apolipoproteína E, de la glucógeno sintetasa y del receptor beta-3-andrenérigco. RESULTADOS Con un tamaño muestras de 101 pacientes (45 hombres y 56 mujeres) con una edad media de 66 años, la distribución por grupos fue similar (sMD: 35,6% y cMD: 46,5%). La simvastatina a dosis de 20 mg al día produjo una reducción del 23,5% de colesterol total y del 31% de c-LD: y a dosis de 40 mg al día de dicha estatina el descenso fue del 31% de colesterol total y del 41% de c-LDL. El descenso del riesgo coronario en pacientes diabéticos tipo 2 con hipercolesterolemia y no fumador fue del 32% en hombres y del 36% en mujeres. La distribución del polimorfismo genético de nuestra serie fue del 85% con el genotipo S1S1 y del 15% del genotipo S1S2, no se apreció relación con la presencia de la enfermedad cardiovascular. Los pacientes con el alelo raro S2 y el haplotipo más frecuente (TT, A1A1 y E3E3) tuvieron una reducción superior con 20 mg de simvastatina al día en el colesterol total (-22% vs -32%), en c-LDL (-30% vs -44%) que aquellas personas con el genotipo S1S1. CONCLUSIONES La intervención terapéutica en diabéticos tipo 2 con hipercolestolemia durante 8 6 meses 54e consiguió una disminución del riesgo vascular al aumentar la actividad física y al disminuir los niveles plasmásticos de c-LDL y de microalbumunuria. La obesidad tuvo una alta prevalencia y la determinación del perímetro de la cintura fue la variable que más se relacionó con la enfermedad vascular. El polimorfismo de la apo C-III no moduló los factores de riesgo caridovascular de nuestros pacientes diabéticos tipo 2 con hipercolesterolemia, así como no se relacionó con la presencia o no de macroangiopatía diabética. Los pacientes con el genotipo S1S2 y el haplotipo más frecuente son hiperespondedores al tratamiento con 20 mg e simvastatina respecto al genotipo S1S1.

Autor: Relaño Reyes Eva.
Año: 2004.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Ciencias.

Resumen: El cáncer de mama es el tumor más frecuente en la mujer, representando el 32% de las enfermedades neoplásicas, y la mayor causa de mortalidad femenina en los países industrializados. Uno de los principales problemas de las enfermedades neoplásicas es la falta de respuesta al tratamiento o la resistencia desarrollado al mismo por algunas pacientes, así como la diferente evolución de enfermas con las mismas característica clínicas iniciales, lo que haría suponer en un principio un comportamiento similar. p53 está implicado en la parada del ciclo celular, apoptosis y reparación del ADN, estando mutado con frecuencia en distintos tipos de cáncer. Sin embargo, el papel exacto que juega p53 en la evolución del cáncer de mama y la respuesta al tratamiento está por definir. Por lo tanto, nuestros objetivos fueron: 1. Determinar la prevalencia de las mutaciones en p53 en tejido tumoral de cáncer de mama localmente avanzado. 2. Identificar la posible relación entre la presencia de mutaciones en p53 y otras variables de valor pronóstico en el cáncer de mama. 3. Evaluar el posible papel de la presencia de mutaciones en p53 en tejido tumoral como factor predictivo de respuesta en enfermas con cáncer de mama localmente avanzado tratadas con terapia neoadyuvante con antraciclinas. 4. Evaluar el posible papel de la presencia de mutaciones en p53 en tejido tumoral como factor pronóstico en enfermas con cáncer de mama localmente avanzado tratadas con terapia neoadyuvante con antraciclinas. Para ello se procedió a la secuenciación de los exones del 5 al 9 de p53 mediante el médodo de dideoxinucleótidos trifosfato marcados en 100 pacientes con cáncer de mama localmente avanzado tratadas con quimioterapia neoadyuvante con antraciclinas. Asimismo, se analizó mediante el modelo mutacional por sistema informático Swiss-Pdb Viewer 3.4., el posible efecto de las mutaciones encontradas en la proteína TP53. Se determinaron 16 mutaciones de diferente sentido, 7 del mismo sentido, 2 deleciones, 1 inserción, 1 mutación de ayuste y 1 mutación sin sentido en 25 pacientes, ya que tres enfermas presentaron dos mutaciones. A estas tres pacientes se les detectó una mutación del mismo sentido y, a dos de ellas además una mutación de diferente sentido, mientras que a la tercera la inserción. Por razones de tamaño de la muestra, se dividió a las enfermas en la clase A (enfermas sin mutaciones o con mutaciones posiblemente de carácter recesivo: las mutaciones del mismo sentido, la inserción, las deleciones, la mutación sin sentido y la mutación de ayuste) y la clase B (pacientes con mutaciones de diferente sentido) La presencia de mutaciones en p53 de diferente sentido en tejido tumoral fue independiente del estadio menopáusico de las enfermas en el momento del diagnóstico, el grado histológico del tumor, la expresión del gen Her2/neu y la expresión de los receptores de estrógenos y progesterona. Aunque la presencia de mutaciones de diferente sentido fue independiente del estadio clínico del tumor, al desglosar el estadío clínico en estadío tumoral y ganglionar, se comprobó que está relacionada con el estadio del tumor primario, no así con el estadio ganglionar. Por último, la presencia de mutaciones también está relacionada con el tamaño tumoral y el tipo histológico. En cuanto al valor de la presencia de mutaciones de diferente sentido en p53 como factor predictivo de respuesta, aunque las pacientes con respuesta completa al tratamiento no presentaron este tipo de mutación, la diferencia no fue estadísticamente significativa. Para finalizar, la presencia de mutaciones de diferente sentido en p53 está relacionada con la supervivencia global de la paciente así como con el fallecimiento por cáncer de mama. No sucede lo mismo en el caso de la recidiva y la supervivencia libre de enfermedad, ya que aunque las enfermas con mutaciones de diferente sentido padecen recidiva en una mayor frecuencia y presentan una supervivencia libre de e 8 nfermeda 2cd d menor, la diferencia entre ambos grupos no es estadísticamente significativa.

Autor: CHICA DÍAZ ROSA ANA DE LA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: UNIDAD BIOLOGÍA CELULAR Y GENÉTICA MÉDICA.

Resumen: El TABACO incrementa el riesgo de contraer distintas patologías : problemas de coagulación, enfermedades obstructivas pulmonares cronicas, cáncer y efectos adversos sobre el embarazo. Recientemente, diversos autores han detectado la presencia de metabolitos específicos del tabaco en la orina de recién nacidos y en líquido amniotico de gestantes fumadoras, lo que sugiere un posible efecto genotóxico en etapas tempranas del desarrollo embrionario. Actualmente los datos encaminados a detectar el posible efecto transplacental del tabaco durante la gestación son controvertidos. Existen únicamente dos estudios indirectos que utilizan vellosidades coriales. Los objetivos de este trabajo han sido: 1) Puesta a punto de la técnica uniforme-bandas G a partir de extensiones de amniocitos obtenidas previamente con fines diagnósticos. 2) Análisis de la inestabilidad cromosómica y de anomalías cromosómicas en células del líquido amniótico 3) Análisis de los puntos de rotura implicados en las lesiones y anomalías cromosómicas En este estudio prospectivo se han analizado un total de 50 muestras distintas de líquido amniótico procedentes de mujeres subdivididas en dos grupos 25 gestantes fumadoras de 10-20 cigarrillos al día al menos durante 10 años y que continuaban fumando durante el embarazo y 25 gestantes no fumadoras y no expuestas ahumo de cigarrillos ni en su hogar ni en el lugar de trabajo (no fumadoras pasivas). Para ello se requirieron 800 encuestas. La inestabilidad cromosómica se analizó con tinción uniforme-bandas G. La comparación de los datos citogenéticos entre gestantes fumadoras y no fumadoras mostró importantes diferencias entre la proporción de anomalías cromosómicas estructurales (P=0.002) y en menor grado en la proporción de metafases con inestabilidad cromosómica; (P=0.04),y la proporción de lesiones cromosómicas (P=0.045) El análisis estadístico de los 689 puntos de rotura mostró que la banda 11q23, la cual esta más implicada en enfermedades oncohematológicas , fue la región cromosómica más afectada por el tabaco. Nuestros resultados muestran las siguientes conclusiones: 1.- El habito de fumar en mujeres en cantidades de 10 o más cigarrillos al día, durante un largo periodo (10 años o más) y especialmente durante el embarazo influye en el incremento de inestabilidad cromosómica detectada en amniocitos. 2.- La edad de las madres, aunque significativamente más alta en el grupo de fumadoras que en el control(3 años de diferencia), no influye en el incremento de inestabilidad cromosómica detectada en amniocitos. 3.- Al comparar los resultados citogenéticos obtenidos en fetos expuestos al tabaco in utero (F) y controles (C) se observan diferencias importantes en la proporción de anomalías cromosómicas estructurales [P=0.002; F:12,1% (96/793) y C:3,5 % (26/752)] y en menor grado en la proporción de metafases con inestabilidad cromosómica [P=0.04; F:10,5%(262/2492) y C:8,0%(210/2637)] y en la proporción de lesiones cromosómicas [P = 0.045; F:15,7%(8391/2492) y C:10,1%(267/2637)] 4- La distribución de 689 puntos de rotura implicados en lesiones y alteraciones estructurales, en ambos grupos no es al azar y se observa una localización preferencial con bandas donde se han descrito lugares frágiles (P menor que 0.01). 5.- La banda 3p14.2, donde se ubica el lugar frágil FRA3B más frecuentemente expresado, sólo se ha encontrado afectada en el grupo de fumadoras, indicando que la expresión de FRA3B esta directamente relacionada con el tabaco. 6.- Se han identificado tres bandas cromosómicas especialmente afectadas por la exposición al tabaco: la 5q31, la 17q21 y sobretodo la 11q23 7.- La banda 11q23, que hemos identificado como especialmente sensible a los componentes del tabaco, esta fuertemente implicada en las neoplasias hematológicas pediátricas. Las otras dos bandas, 5q31 y 17q21, se hallan también implicadas con procesos leucémicos infantiles aunq 8 ue en mu 3ea cho menor grado 8.- Nuestros resultados apoyan la hipótesis de que, en el feto, la exposición a los componentes del tabaco que atraviesan la placenta podría estar asociada a procesos oncohematológicos pediátricos, aunque serán necesarios estudios epidemiológicos para establecer la asociación entre fumar y aumento del riesgo de aparición de cáncer hematológico en los niños.

Autor: PRAT PEDROLA ESTER.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE MEDICINA..
Centro de realización: UNITAT DE BIOLOGIA, FACULTAT DE MEDICINA.

Resumen: El cáncer es un conjunto de màs de 100 enfermedades que se caracterizan por la acumulación de multiples alteraciones genéticas. De la diversas enfermedades que se incluyen en esta terminología, nosotros nos hemos centrado en el estudio de tres tipos de tumores sólidos epiteliales: tumores esporádicos de vejiga, tumores hereditarios o familiares de cáncer colorectal y de cáncer de riñón. Para realizar los estudios que componen esta tesis doctoral, la técnica que se ha utilizado de manera más habitual ha sido de Hibridación Genómica Comparada (CGH). El análisis global del genoma que permite hacer esta técnica, nos proporciona información sobre los desquilibrios, ya sean ganacias o pérdidas; que se producen de manera más frequente y por lo tanto que regiones serían susceptibles de contener genes supresores de tumores o oncogenes; además también permite llevar a cabo estudios de clonalidad y detectar diferrentes patrones convergentes o divergentes de evolución cromosómica. En lo referente a los tumores de vejiga, estos son muy heterogeneos tanto morfológicamente como clínicamente, es por este motivo que uno de los objetivos que nos planteamos, fue el hecho de aportar nuevos datos sobre desequilibrios genómicos de estos tumores. En nuestros estudios observamos que los tumores de células transicionales (TCC) de vejiga, el daño genómico aumentaba con el estadio y el grado tumoral, siendo los desequilibrios más frequentes, los correspondientes a las pérdidas de 9q, 9p, 5q, 8p y las ganancias de 1q, Xq, 17q, 8q i 20q. Sin embargo, hay una serie de alteraciones que presentan diferencias significativas entre los diferentes estadios tumorales. Las alteraciones que presentan diferencias significativas entre los estadios pTa y pT1 son las pérdidas de 5q, 9p, 9q, 10q, 8p, 11q, 18q y las ganancias de 8q, 10p. Mientras que entre tumores pT1 i pT2-T4, las que presentan diferencias significativas son las ganancias de 5p, 7p, 3p, 10p y la pérdida de 6q. Como un elevado numero de tumores (TCC) estudiados eran tumores superficiales o mínimamente infiltrantes, también classificamos estos tumores en base a los patrones de desequilibrios genómicos observados, de modo que se puso de manifiesto la existéncia de tres subgrupos: el primero caracterizado por la predominancia de ganancias, siendo las más frecuentes las de: 1q, 1p, 17q y 19p, el segundo caracterizado por pérdidas que afectan principalmente a las siguientes regiones cromosómicas: 9q, 9p, 11q, 8p, 5q, 11p, y un tercer grupo caracterizado por la presencia de un pequeño número de desequilibrios. El hecho de encontrar dos subgrupos con cariotipos complejos podría sugerir que la evolución de estos tumores se produciría como mínimo por dos vías, una caracterizada por ganancias y otra por pérdidas. Por otro lado, el 30% de los tumores uroteliales presentan multifocalidad o multiplicidad de lesiones, hecho que convierte estos tumores en un modelo excepcional para el análisis de las relaciones entre tumores esporádicos sincrónicos. El estudio de estos tumores sincrónicos de un mismo paciente nos confirmaron su origen monoclonal y nos permitieron trazar vias de evolución a partir de un único tumor original. Por lo que a estudios de tumores sincrónicos familiares se refiere, hicimos dos estudios, uno de ellos con tumores de pacientes afectados de Cancer Renal Papilar Hereditario (HPRC), y otro con tumores de pacientes afectados de Poliposis Adenomatosa Familiar (FAP); el estudio de estos tumores proporciona un modelo natural excelente para estudiar las alteraciones presentes en estadios iniciales de la evolución tumoral y proporcionar al mismo tiempo importante información sobre el dinamismo de formación de las alteraciones en estos tumores. Por lo que al estudio de HPRC se refiere se obs 8 ervaron 790 la presencia de alteraciones cromosómicas estructurales idénticas en diferentes tumores de un mismo paciente hecho que sugiere un origen embrionario común, o que la predisposición genetica puede condicionar la adquisición de alteraciones en regiones cromosómicas específicas. Además, también se estudió en estos pacientes el comportamiento de MET (los pacientes que padecen esta enfermedad se caracterizan por presentar una mutación de este proto-oncogen en la linea germinal, hecho que predispone a las familias que presentan esta mutación a HPRC); en este estudio observamos, que la duplicación del gen MET portador de la mutación germinal, va asociada a la trisomia 7. En aquellos tumores con tetrasomia 7 se observó la duplicación tanto del alelo mutado como del alelo normal. Por lo que al estudio de patrones de evolución en cancer colorectal se refiere, este se realizó a partir de los desequilibrios presentes en adenomas y carcinomas procedentes de tumores de pacientes afectados de FAP; observamos que los diferentes adenomas de un mismo paciente mostraban una clara relación genética, indicando un patrón de evolución común. Este hecho sugiere de nuevo, que la predisposición genética puede condicionar la adquisición de alteraciones genómicas en subregiones cromosómicas específicas.

Autor: GORDILLO URBANO RAFAEL MANUEL.
Año: 2005.
Universidad: CÓRDOBA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus de distribución mundial cuya infección tiene una prevalencia que varía según los distintos países pero que se estima entre 150 y 200 millones de personas. Es un virus ARN de polaridad positiva con aproximadamente 9,5 Kb y un tamaño que oscila entre 55 y 65 nm. Una de las características más destacadas del virus de la Hepatitis C es su capacidad de cambio que se produce fundamentalmente por incorporaciones erróneas de nucleótidos, por recombinaciones homólogas entre virus con secuencias parecidas o por recombinaciones no homólogas entre virus de secuencias diferentes. Esto da lugar a diferentes genotipos, subtipos y cuasiespecies según su grado de homología. Además de su importancia como marcador epidemiológico, la determinación del genotipo viral en el caso del VHC, posee interés desde el punto de vista pronóstico y terapéutico. Con este trabajo nos proponemos determinar la distribución de genoptipos del virus de la hepatitis C en pacientes infectados por virus C de la provincia de Córdoba; establecer la relación existente entre el genotipo del VHC y el modo de adquisición de la infección; comprobar qué relación hay entre el genotipo del virus C y la alteración existente entre diferentes parámetros bioquímicos e histológicos; determinar la importancia del genotipo viral en la respuesta al tratamiento en los pacientes que lo reciben. Para ello se ha realizado la determinación del genotipo viral a 511 pacientes con infección crónica por VHC procedentes de diferentes servicios y se ha estudiado de manera retrospectiva las historias clínicas de 138 pacientes procedentes de la unidad de hepatología. El genotipo más frecuente entre todos los enfermos a los que se le ha determinado es el 1b. Hemos encontrado relación entre el modo de adquisición de la enfermedad y el genotipo infectante. Encontramos una carga viral significativamente mayor entre los pacientes infectados por genotipo 1. Los pacientes en tratamiento con inteferón pegilado en combinación con ribavirina tienen una mayor tasa de respuesta que aquellos que reciben interferón estándar y ribavirina.

Autor: FERNÁNDEZ MATA IGNACIO.
Año: 2005.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD DE OVIEDO.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Resumen: En los últimos años, el mayor avance en el conocimiento de la etiología de la enfermedad de Parkinson (EP) ha sido la identificación de varios genes involucrados en las formas familiares. En este estudio hemos realizado un análisis del espectro mutacional de cuatro de estos genes, SNCA, PRKN, PINK1 y LRRK2, en 411 pacientes del Principado de Asturias. Estos genes fueron seleccionados por su importancia en el desarrollo de la EP, tanto por una elevada tasa de mutaciones en pacientes como por la importancia funcional de la proteína que codifican. Para el estudio molecular empleamos técnicas como amplificación del ADN (PCR), detección indirecta de cambios secuenciales (SSCA), secuenciación directa, análisis de dosis génicas, genotipado mediante PCR-RFLP o Tagman, entre otras. Los resultados que obtuvimos muestran que las mutaciones en los genes PRKN y LRRK2 podrían ser halladas en alrededor del 10% de los pacientes, una frecuencia hasta ahora no hallada en otras poblaciones. Aunque son necesarios estudios adicionales para evaluar la importancia de éstas variantes génicas en el origen y la progresión de este proceso neurodegenerativo, el conocimiento de la base molecular de la enfermedad podría tener una aplicación en la clínica, tanto para facilitar el diagnóstico y consejo genéticos, como para los estudios de respuesta a las terapias (farmacogenética/farmacogenómica).