MECANISMOS DE ACCION DE LOS FARMACOS

Autor: LÓPEZ FANDO SANTAFÉ ALMUDENA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Las proteínas RGS o reguladoras de la señalización mediante proteínas G (Regulators of g-protein Signaling)participan en la modulación de los efectos opioides.El análisis mediante RT-PCR (transcripción reversa-reacción en cadena de la polimerasa)ha evidenciado una distribución generalizada del mensajero de las proteínas RGS en el SNC del ratón .Los estudios realizados mediante la generación de animales Knockdown frente a determinadas RGS así como los ensayos de unión de GTPyS 35 y de hidrólisis de GTPYP32 nos han permitido determinar el mecanismo molecular de actuación de algunas subfamilias de RGS. En este sentido , la subfamilia C/R7 de RGS (formada por las RGS6,RGS7,RGS9 y RGS11)así como la subunidad GB7 a la que se unen específicamente todos los miembros , de esta subfamilia parecen tener un mecanismo similar.Éstas proteínas participan en el secuestro de subunidades Ga favoreciendo el empobrecimiento de proteínas G en el entorno del receptor susceptibles de ser reguladas por el mismo y originario la aparición de tolerancia aguda.Por otro lado. La disminución en la expresión (animales knockosow)de las RGSZ1 Y RGS4 prosuce un incremento en la anlgesia morfínica sin que se modifique la tolerancia aguda al alcaloide.El mecanismo molecular de actuación de la RGSZ1 se deriva de su capacidad para unir subunidades Ga en estado GTP , impidiendo que una fracción de las Gaz-GTP activadas por opioides lleguen a unirse al efectro.Los resultados obtenidos indican una regulación preferencial d la subunidades Gai/o sobre las Gaz por la RGS4.Como estudio complementario se ha analizado la plasticidad en la expresión del mRNA de las RGS frente a diferentes tratamientos (agudos y crónicos )con morfina.La morfina , a dosis capaces de producir tolerancia aguda en ratones, induce variaciones en la expresión del Mrna de las RGS C/R7 durante las dos primeras horas post-inyección .El tratamiento crónico con morfina promueve cambios específicos de región y dependientes del tiempo en los niveles del Mrna de las RGS C/R7 y GB5, sin embartgo , solo se han encontrado incrementos en los niveles de proteínas de las RGS C/R7 cuando aumentan los niveles de Mrna y proteína de la subunidad GB5 en respuesta a una administración crónica de morfina.Por lo tanto , la formación del complejo heterodimérico RGS C/R7-GB5 es requerido para la estabilización de las porteínas sintetizadas impidiendo su rápida degradación por la vía del proteosoma dependiente de ubiquitina.

Autor: GARCÍA CARRASCAL LUIS.
Año: 2004.
Universidad: MÁLAGA [www.uma.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La diabetes es una de las patologías de mayor prevalencia en Atención Primaria y un componente del síndrome metabólico que presenta con gran frecuencia complicaciones crónicas en su evolución. Los objetivos fueron determinar la prevalencia de las complicaciones neurológicas y de los factores asociados con estas complicaciones en pacientes diabéticos tipos 2 con Síndrome Metabólico y cuantificar la calidad de vida de los pacientes. Se ha realizado un estudio prospectivo en 111 pacientes diabéticos tipo 2 de un Centro de Atención Primaria reclutados durante 1 año. Los criterios de inclusión fueron pacientes con diabetes Tipo 2 según los criterios de la Asociación Americana de Diabetes del año 1997, refrendados por la Organización Mundial de la salud un año después, utilizándose para el diagnóstico de Síndrome Metabólico los de la Organización Mundial de la Salud del año 1998. Y los criterios de inclusión fueron pacientes con diabetes Tipo 2 según los criterios de la Asociación Americana de Diabetes del año 1997, refrendados por la Organización Mundial de la salud del año 1998. Y los criterios de exclusión fueron excluidos del estudio aquellos sujetos cuyos valores glucémicos fueran menores de los establecidos, cuyo segundo test diagnóstico no confirmara el diagnóstico, con un solo criterio de Síndrome Metabólico y por último, aquellos cuya esperanza de vida prevista fuera menor de 1 año. Para la recogida de datos se creó una ficha multiparamétrica. Se aplicaron también las escalas de Yesevage, de Pfeiffer de Barhel y se confeccionó una ficha para la recogida de datos sobre neuropatía, aplicándose la Escala de Young y Boulton para el diagnóstico de PNSD. El síndrome metabólico es muy prevalente (71,17%) en nuestros pacientes diabéticos tipo 2, presentando un elevado número de complicaciones. La polineuropatía se presenta en una cuarta parte (26,92%) y la autonómica en más de la mitad (58,97%) de los pacientes diabéticos tipo 2 con Síndrome metabólico. Las complicaciones crónica más frecuentemente halladas son las microvasculares (26,58%), y de éstas, las neuropatías (67,94%). La prevalencia de depresión establecida en la mujer es casi el doble (10%) que en el hombre (5,3%), siendo a su vez, la existencia de trastornos del ánimo más frecuente en la mujer (32,5%). No se han obtenido diferencias significativas entre deterioro cognitivo y sexo, si bien, el deterioro cognitivo es más frecuente en sujetos analfabetos o hasta estudios primarios (90%) que en aquellos con estudios superiores (10%). Una cuarta parte de los sujetos diabéticos tipo 2 con Síndrome metabólico que presentan polineuropatía son asintomático s(28,57%), siendo las mujeres las más sintomáticas y los hombres los que presentan los síntomas más severos. Los síntomas suelen localizarse en los pies, agravarse por la noche y aliviarse con la deambulación. Los hombres con polineuropatía presentan una mayor intensidad de los signos, sobre todo alteración del reflejo aquíleo, en el caso de las mujeres la afectación se detecta en la vibración, el dolor al pinchazo y el frío. Existe una escasa utilización de las Biguanidas (7,59%) e insulina (15,98%) a pesar de las frecuentes complicaciones crónicas presentes en estos pacientes. Estos pacientes presentan un elevado número de procesos crónicos asociados, presentando más de 4 procesos el 77,21% de la muestra, dificultando su control y seguimiento, deteriorando por tanto, su calidad de vida. La prevención y diagnóstico precoz de las complicaciones de este Síndrome dará lugar a una mejor calidad de vida y una disminución de los costes sanitarios de estos pacientes.

Autor: RODRÍGUEZ MUÑOZ MARÍA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La desensibilización de GPCRs que conduce a la reducción de la señal iniciada por los agonistas ha sido el proceso de regulación más estudiado. Este fenómeno se ha caracterizado principalmente a nivel de la molécula del receptor, describiendose mecanismos que opera a nivel transcripcional, y/o translacional, o que implican modificaciones covalentes de los receptores (fosforilación y glicosilaciones) así como regulación de su asociación con otras proteínas. Sin embargo, son cada vez más frecuentes los estudios que indican la pérdida de señalización de receptores G puede también producirse sin el concurso de fosforilación, internalización y reactivación. En este sentido, la presente tesis doctoral hace un análisis sobre la importancia del sistema de transducción en la calidad de la analgesia inducida por los opioides en el Sistema Nervioso Central del ratón. En el estudio se ha observado que la tolerancia aguda inducida por morfina no se acompaña por reducción de receptores u ni tampoco afecta su asociación con los *, lo que surgiere la participación de mecanismos post-receptor en este proceso de desensibilización. En este sentido en sustancia gris priacueductal se ha observado la asociación de receptores opioides u con proteínas reguladoras Gi/o/z, ciertas RGS de la subfamilias R4, R7, R12 y RZ, y también a proteínas tipo fosducina (PhLpL), interacciones moduladas por el tratamiento agudo con morfina lo que les confiere relevancia funcional. La morfina reduce la asociación proteínas Gi/o/z con el receptor opioide u, recuperándose pocas horas después de cesar los efectos de dosis d morfina que no producen tolerancia aguda. Sin embargo, que interrumpida durante días si la dosis de morfina induce desenssibilización del receptor. La RGS9-2 juega un papel clave en la génesis de este fenómeno al retener a largo plazo subunidades Galfai/z activadas por el receptor. Los efectos opioides de cierta magnitud estabilizan la unión de subunidades Galfa a la proteína RGS9-2, mediante la fosforlización en serina de su dominio RGS y la posterior unión de la 14-3-3. Se ha detectado que la administración de morfina promueve la asociación de RGSZ2 con la RGS9-2. La coprecipitación dependiente de morfina de subunidades Galfa con ambas RGS indica que forman parte de un mismo complejo de regulación del receptor opioide u. En este sentido, las subunidades Galfaz-GTP son necesarias para que tenga lugar la fosforilación en serina de la RGS9-2 y así facilitar el secuestro de Galfa. En este mecanismo la RGSZ2 modula la fosforialción de la RGS9-2 y así facilitar el secuestro de Galfa. Este operativo funcional RGS9-2, RGSZ2, Galfaz-GTP, 14-3-3 y fosforilación en serina es absolutamente novedoso y puede explicar no sólo la desensibilización del receptor u sino también la de otros GPCRs en el SNC. La RGSZ2 es crucial para el control de la familia Galfaz, no sólo en su actividad sobre la fosforilación de la RGS9-2 sino también en su regulación de efectores. La Gz muestra una alta capacidad para desensibilizar efectores, así la reducción en su principal regulador la RGSZ2 conduce a la rápida aparición de tolerancia heteróloga.

Autor: NAIM ABU-NABAH SORIANO YAFA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA [www.uv.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA (UNIVERSIDAD DE VALENCIA).

Resumen: Hoy en día es bien conocida la relación directa que existe entre presión arterial y la incidencia de patologías cardiovasculares como el infarto cerebral o el infarto de miocardio. En un primer estudio hemos demostrado por primera vez que Ang II induce acumulación de neutrófilos in vivo la cual es precedida por la generación de las quimocinas CXC, CINC/KC y MIP-2. Asimismo, hemos observado que estas respuestas son casi totalmente inhibidas cuando se bloquea el receptor CXCR2. In vitro hemos comprobado que Ang II produce la síntesis y liberación de IL-8, tanto de células endoteliales como de músculo liso vascular siguiendo mecanismos tanto transcripcionales como post-translacionales. Estas respuestas parecen estar mediadas a través de la interacción de Ang II con su receptor AT1. En un segundo estudio hemos comprobado que cuando los animales son pretratados con un antagonista del receptor CXCR2, tanto la infiltración de células mononucleares hacia la cavidad peritoneal como la adhesión de estas células al endotelio arteriolar inducida por Ang-II son reducidas significativamente. Además, también hemos observado que este antagonismo es capaz de atenuar la síntesis y liberación de diferentes quimiocinas CC, implicadas directamente en la infiltración de leucocitos mononucleares. In vitro, hemos demostrado que Ang II también induce la secreción de IL-8 en HUAECs mediante interacción con su receptor AT1 y, el bloqueo combinado de los receptores CXCR1 y CXCR2, conduce a la inhibición de la síntesis de las quimiocinas CC inducida por esta hormona peptídica. En un tercer estudio, hemos hallado leucocitos adheridos a las arteriolas mesentéricas de rata a las 4 h de la administración intraperitoneal de L-NAME. Mientras que los leucocitos adheridos al endotelio venular resultaron ser neutrófilos, en el endotelio arteriolar fueron mononucleares. Finalmente, hemos hallado que el bloqueo del receptor AT1 de Ang II era capaz de inhibir claramente tanto las interacciones leucocito-endotelio en vénulas post-capilares como la adhesión arteriolar provocada por L-NAME u ODQ.

Autor: PULIDO DUARTE MIVIS MILDREY.
Año: 2005.
Universidad: LEÓN [www.unileon.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LEÓN.

Resumen: La importancia de los residuos de fármacos en leche y su control, se manifiesta en la actuación de la Agencia Europea de Medicamentos, que recoge en su normativa los límites máximos de residuos permitidos para fármacos usados tanto en la prevención como en el tratamiento de diversas parasitosis o infecciones (antes y/o durante la lactación), en el ganado ovino y bovino. Los transportadores ABC son proteínas que actúan como bombas exportadoras dependientes de ATP que sacan activamente hacia el exterior de la célula tanto fármacos, como metabolitos endógenos y xenotoxinas, estando involucrados en el fenómeno de multirresistencia de fármacos. Se ha descrito la presencia de estas proteínas en diferentes órganos entre los que se encuentran hígado, cerebro, riñón, intestino y la glándula mamaria. La transferencia de fármacos hacia la leche ocurre fundamentalmente por difusión pasiva pero determinados fármacos, en los que se han descrito elevados niveles en leche (valores por encima de los esperados en procesos únicamente mediados por mecanismos pasivos), pueden depender, de sistemas activos de transporte hacia la leche. Teniendo en cuenta estas premisas, determinamos la expresión funcional de la BCRP, una proteína de tipo ABC, que exporta fármacos, en diferentes tejidos de rumiantes, sobre todo en glándula mamaria en distintos estadios de lactación, tanto en ovejas como en vacas. Realizamos estudios in vitro con líneas celulares establecidas para determinar la implicación de la BCRP en el transporte de Albendazol sulfóxido, Enrofloxacina y Moxidectina (todos ellos fármacos de amplio uso en Veterinaria) y se estudió la correlación entre los experimentos in vitro e in vivo, mediante estudios fármacocinéticos, en presencia de diferentes moduladores del transporte mediado por la proteína BCRP. Los estudios inmunohistoquímicos y por western blot realizados demostraron la expresión diferencial de la BCRP en la glándula mamaria de ovejas y vacas lactantes con altos niveles de expresión cuando se compararon con animales no lactantes. Dicha proteína también se expresa en intestino, riñón, cerebro e hígado de ovejas. La determinación de la actividad ATPasa en homogenado de glándula mamaria de vacas lactantes demostró la funcionalidad del homólogo de la BCRP en esta especie, al ser inducida por sustratos específicos de la proteína como la mitoxantrona y el prazosin, e inhibida por compuestos tales como el Ko143 y el verapamilo, inhibidores funcionales de BCRP. Adicionalmente, los flavonoides: genisteína y quercitina revierten la actividad ATPasa inducida por la mitoxantrona. Los estudios de transporte realizado en células MDCKII parentales y transfectadas demostraron que el Albendazol sulfóxido y la Enrofloxacina son transportados activamente por la BCRP y que inhibidores como el Ko143 y los flavonoides genisteina, daidzeina y quercitina a revierten el transporte preferencial apical mediado por BCRP. Este tipo de estudios en el caso de la Moxidectina, no mostraron resultados concluyentes de la interaccion de la BCRP con esta lactona. Los estudios farmacocinéticos realizados con ovejas Merinas y Assaf en lactación demostraron que el Albendazol sulfóxido es excretado a leche (AUC leche/AUCplasma > 1), sin embargo no se observa la implicación directa de la BCRP en dicha excreción. En el caso de la enrofloxacina los resultados mostraron niveles del fármaco en plasma y leche similares, pero con diferencias significativas en los niveles de enrofloxacina en leche en los grupos tratados con inhibidores del transportador en algunos tiempos de muestreo. Por último, los niveles plamáticos de moxidectina fueron similares en todos los grupos, mientras que los niveles encontrados en leche fueron significativamente más bajos en los grupos tratados con nitrofurantoína y quercitina, con los correspondientes ratios AUCleche/AUCplasma significativamente menores que los obtenidos en el grupo co 8 ntrol in 324 dicando una posible implicación y modulación a traves de la BCRP, en la excreción de este fármaco hacia la leche.

Autor: TUR ESCRIVÁ REMEDIOS.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA [www.uv.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Dentro de los receptores à adrenérgicos, el subtipo 3 es el mas recientemente clonado y caracterizado, pero todavía no están completamente definidos los modelos experimentales que permiten el estudio de su funcionalidad y, en tejido nativo, no se han caracterizado completamente las propiedades de los agonistas y antagonistas à para unirse a este receptor. Es por ello que el primer objetivo de la presente Tesis Doctoral es la validación de nuevos modelos experimentales, adecuados para el estudio de los adrenoceptores Ã3 nativos. Dada la complejidad de los estudios funcionales que se emplean para caracterizar una población de receptores en un tejido, nos proponemos validar una metodología más sencilla, que facilite el análisis de la interacción fármaco-receptor y optimice la obtención de resultados utilizando el menor número de animales posible. Para ello, empleamos el colon e íleon de rata como tejidos ricos en adrenoceptores Ã3 y determinamos la potencia de los distintos agonistas y antagonistas à mediante el método de Schild y la comparamos con la obtenida en la nueva metodología, donde se añade el antagonista después de dejar actuar el agonista, basándonos en la posibilidad de que el antagonista sea capaz de revertir el efecto relajante del agonista y recuperar el tono contráctil inicial. Las potencias antagonistas obtenidas por ambas metodologías fueron similares, y se correlacionan significativamente, validando con ello la nueva metodología. También se ha caracterizado farmacológicamente, mediante técnicas de unión de radioligandos, la población de adrenoceptores Ã1, Ã2 y Ã3 presentes en corazón, pulmón y colon de rata, respectivamente, pudiéndose utilizar dicha metodología para determinar la afinidad de diferentes compuestos por estos receptores en territorios nativos. La caracterización funcional y por técnicas de unión de radioligandos de la población de receptores à en colon de rata, evidencia una presencia mayoritaria del subtipo Ã3 y sugiere la existencia de dos estados de afinidad para dicho subtipo. El segundo objetivo es la búsqueda de nuevos compuestos con actividad y selectividad por los adrenoceptores Ã3. Para ello, analizamos la acción agonista y/o antagonista de una serie de alcaloides con estructura benciltetrahidroisoquinoleínica sobre los adrenoceptores Ã3 presentes en colon e íleon de rata, mediante la nueva metodología y, también estudiamos su selectividad por cada subtipo Ã, mediante técnicas de unión de radioligandos en corazón (Ã1), pulmón (Ã2) y colon (Ã3) de rata. Los resultados ponen de manifiesto la importancia que tiene la presencia de grupos hidroxilos libres tanto en el anillo tetrahidroisoquinoleínico como bencílico, determinando la selectividad por uno u otro subtipo Ã. Así, la tetrahidropapaverolina con grupos hidroxilos en 6,7,3´y 4´ se comporta como un agonista selectivo Ã3, la higenamina con hidroxilos en posición 6, 7 y 4´, también posee acciones agonistas Ã3 pero pierde su selectividad por este subtipo y tiene más afinidad Ã1, mientras que la coclaurina con un metoxilo en posición 6 en lugar de un hidroxilo, presenta una afinidad similar por los tres subtipos y pierde la capacidad para activar los adrenoceptores Ã3 actuando como un antagonista de los mismos. Además, los resultados obtenidos con tetrahidropapaverolina e higenamina en los estudios de unión de radioligandos, corroboran la existencia de dos estados de afinidad para el subtipo Ã3 en colon de rata.

Autor: DOMINGO DOMÈNECH JOSEP MARIA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD DE BARCELONA.