FARMACOLOGIA EXPERIMENTAL

Autor: SEGURA AGULLO MIREIA.
Año: 2003.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: La 3,4-metilenedioximetamfetamina (MDMA, éxtasis) es una droga de síntesis que se consume habitualmente entre los jóvenes de forma recreativa, en la presente tesis se ha profundizado en el metabolismo de la MDMA en humanos. Concretamente, en la vía metabólica que da lugar, a través mayoritariamente del CYP2D6, al metabolito catecol 3,4-dihidroximetamfetamina (HHMA). La presente tesis también se ha focalizado a estudiar la contribución del CYP2D6 en la depuración global de la MDMA. Así, se ha realizado un ensayo clínico en voluntarios sanos los cuales se les ha administrado tres dosis de paroxetina, fármaco antidepresivo que es a la vez sustrato e inhibidor del CYP2D6, antes de la administración de la MDM, con la finalidad de inhibir la actividad de esta enzima. Para evaluar esta inhibición y la correspondiente interacción farmacológica entre la MDMA y la paroxetina se han desarrollado y validado las técnicas analíticas para la determinación de los diferentes compuestos en fluidos biológicos a la vez que se ha sintetizado químicamente la paroxetina, sus metabolitos y el HHMA. El análisis de las muestras de plasma y origina ha mostrado que el metabólico HHMA es relevante desde un punto de vista cuantitativo en la depuración metabólica de la MDAM dando lugar a concentraciones plasmáticas (Cmax 154ug/L) y urinarias (18% de la dosis) cuantitativamente parecidas a la propia MDMA. La correspondiente evaluación de los parámetros farmacocinéticos así como la recuperación urinaria de la MDAM y de sus principales metabólitos indican que la MDAM ve afectada su depuración metabólica cuando se administra conjuntamente con la proxetina. La inhibición del metabolismo oxidativo, in vivo del a MDMA se traduce en un incremento de las concentraciones plasmáticas de la MDAM del 30% que sería la contribución del CYP2D6, in vivo, en la O-demetilenación de la MDMA. Así pues, otras isoenzimas podrían contribuir de forma significativa en la depuración metabólica global de la MDMA.

Autor: LAFUENTE LOPEZ NURIA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las complicaciones vasculares suponen la principal causa de morbimortalidad asociada a la diabetes mellitus de larga duración. En los últimos años, la vasculopatía diabética se ha relacionado con un proceso inflamatorio crónico de la pared vascular, asociado con un incremento de los niveles circulantes de citoquinas inflamatorias y otros marcadores de inflamación. La sintasa de óxido nítrico inducible (iNOS) es una de las enzimas proinflamatorias más relevantes de la pared vascular, ya que una vez inducida por diversos factores, genera óxido nítrico (NO) en grandes cantidades y de manera escasamente regulada. Además de su implicación en otros estados inflamatorios de la pared vascular como la aterosclerosis, algunos trabajos han descrito un aumento de la actividad iNOS en el sistema cardiovascular en relacíón con la diabetes mellitus. Por otra parte, está plenamente aceptado en la actualidad que la hiperglucemia está en la base de los procesos celulares, incluidos los inflamatorios, que conducen al desarrollo y progresión del daño vascular asociado a la diabetes. En el presente trabajo, se quiso analizar el papel de la citoquina interleuquina-1beta (IL-1beta) y de la glucosa, solas o en combinación, sobre la expresión y actividad de la enzima iNOS, utilizando cultivos de músculo liso de aorta humana. En primer lugar, se analizó el efecto de IL-1 beta (0,1, 0,5, 1, 5 Y 10 ng/ml) añadida a un medio de cultivo que contenía 5,5 mM de O-glucosa, observándose un aumento de las niveles de la enzima a partir de la concentración de 5 ng/ml. El incremento máximo en los niveles de iNOS observado con 10 ng/ml de IL-1beta, se acompañó de unRumento de la liberación de nitritos, utilizados como marcadores de la síntesis de NO. En contraste con el efecto de la IL-1beta, la O-glucosa a concentraciones crecientes (5,5,8,11 Y 22 mM) fue incapaz de índucir la síntesis de iNOS en las CMLAH.Sin embargo, cuando se íncubó la concentración más elevada de O-glucosa (22 mM) junto a IL-1 beta (10 ng/ml), se observó un claro aumento-de la síntesis de iNOS, en relación con los niveles obtenidos en presencía de IL-1 beta junto con 5,5 mM de O-glucosa, a partir de las 10 horas de incubación. Este efecto potenciador sobre los niveles de iNOS fue directamente proporcional a la concentración de O-glucosa utilizada, y se acompañó de un aumento paralelo de la producción de nitritos. Se descartó un posible efecto de la hiperosmolaridad utilizando L-glucosa, que no reprodujo los resultados obtenidos con O-glucosa. Además, se observó que este aumento de los niveles de proteína ¡NOS se correlacionaba con un aumento del ARN mensajero correspondiente a la enzima. Además, se observó que este efecto potenciador de la O-glucosa, estaba relacionado con un aumento de la actividad del factor de transcripción relacionado con fenómenos de inflamación NF-kappaB. Aunque se ha sugerido que gran parte de los efectos de la O-glucosa a altas concentraciones está mediado por la generación de estrés oxidatívo, en el presente trabajo la interferencia farmacológica con diferentes antioxidantes, no permitió revertir el efecto potenciador de la O-glucosa sobre las acciones de la IL-1 beta. Por el contrario, el efecto potencíador de la O-glucosa se vio inhibido en presencia de un inhibidor de la actividad de la iNOS (1400W), sugiriendo una implicación del propio óxido nitrico generado por la propia iNOS. Por otra parte, se observó, mediante la cuantificación de residuos de nitrotirosina, que la combinación de 22 mM de glucosa e IL-1beta incrementaba la generación de peroxinitrito en comparación con la IL-1beta junto con 5,5 mM de glucosa. En conclusión, estos resultados sugieren que la elevación de los niveles de glucosa potencia fenómenos inflamatorios en el músculo liso inducidos por citoquinas y en particular, por IL-1 beta. El posible mecanismo implicado supone un aum 8 ento de 1ee la actividad NF-kappaB, que podría estar mediado por el incremento de NO y de peroxinitrito.

Autor: MATESANZ PARELLADA NURIA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las enfermedades cardiovasculares suponen una de las primeras causas mundiales de morbimortalidad. Así, en situaciones como la hipertensión, la aterosclerosis o la vasculopatía diabética, entre otros, aparecen alteraciones de la función vascular que a menudo se acompañan de cambios en la estructura del vaso a medida que progresa la enfermedad. Dichos cambios estructurales, generalmente de carácter irreversible, conocidos como remodelado vascular, se asocian con un peor pronóstico de la enfermedad vascular y vienen fundamentalmente determinados por modificaciones en la tasa de migración, crecimiento y/o muerte del músculo liso vascular. El estrés oxidativo juega un importante papel en las enfermedades vasculares. Entre las fuentes de estrés oxidativo vascular, se encuentra la enzima xantina oxidasa, que transforma xantina en ácido úrico mediante reacciones que generan aniones superóxido (02.-). La XO parece participar en la disfunción endotelial, aunque poco se sabe sobre su posible implicación en el remodelado vascular. Por ello, en este trabajo se quiso analizar el posible papel de la XO sobre el crecimiento de células cultivadas de músculo liso de aorta humana. En primer lugar, se comprobó la capacidad de laXO (25-500 UU/ml) para generar O2.-, tanto en un sistema-acelular como en presencia de las células cultivadas objeto de este estudio. Asimismo se comprobó, mediante la medida de los niveles intracelulares del antioxidante glutation, que a las concentraciones empleadas, la XO carecía de efectos tóxicos para este tipo celular. En cuanto a una posible influencia de la XO sobre el crecimiento de las CMLAH, la enzima no indujo proliferación celular, pero sí produjo un aumento significativo del tamaño celular acompañado de un aumento de la sintesis proteica, indicando la capacidad de la XO para producir hipertrofia celular. Este proceso fue consecuencia de la generación extracelular de O2.-, ya que se abolió en presencia de la enzima impermeable a la membrana plasmática superóxido dismutasa (SOD: 200 U/ml). Para identificar posibles vías de señalización intracelular sensibles a estrés oxidativo implicadas en el efecto hipertrófico, se analizó inicialmente el papel del factor de transcripción asociado a crecimiento celular AP-1. La XO (50 ¡.¡U/ml) fue capaz de aumentar los niveles celulares de c-Jun, uno de los principales componentes de AP-1, así como la actividad transcripcional de este factor. Además, la XO fue capaz de para activar a diferentes proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK). La XO no afectó a las quinasas ERK1/2 yAkt/PKB, pero sí estimuló la actividad de las quinasas asociadas a estrés JNK y p38. Mientras que JNK presentó un pico de activación a los 10 minutos, seguido de un rápido retorno a los niveles basales, la estimulación de p38 ocurrió de manera paulatina, con un máximo de actividad a los 30 minutos que se mantuvo a los 60 minutos. Tanto la activación de AP-1 como de JNK y p38 se abolió en presencia de 800. Mediante el uso de 8P600125 (10 UM) Y 8B203580 (5 UM), inhibidores específicos de la JNK y p38, respectivamente, se comprobó la implicación de ambas quinasas en el aumento de la actividad de AP-1 inducido por la XO, aunque sólo p38 estaba implicada en el aumento de los niveles de c-Jun, así corno en el efecto hipertrófico inducido por XO. En conclusión, la XO produce hipertrofia en células de músculo liso vascular humano a través de un mecanismo dependiente de estrés oxidativo. Un mayor conocimiento de las vías de señalización implicadas en dicho efecto, podría permitir ideritificar nuevas dianas terapéuticas para prevenir el remodelado asociado con las enfermedades vasculares.

Autor: PERNAS SUEIRAS OCTAVIO.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Los mastocitos tienen una importancia fundamental en procesos inflamatorios e inmunitarios del tipo de alergias, urticarias, así como en enfermedades autoinmunes. Para su estudio, se han venido empleando habitualmente mastocitos de rata, mastocitos obtenidos mediante el cultivo de células precursoras hematopoyéticas, así como diversas líneas celulares. De entre estas últimas, la línea HMC-1 es la mejor conocida y más ampliamente utilizadas, siendo su origen humano una gran ventaja a la hora de poder extrapolar los datos que se obtengan de su estudio al conocimiento de los mastocitos humanos. El objetivo de esta tesis es caracterizar el proceso de activación de la línea HMC-1, que es aún poco conocido. Para ello, se utiliza el parámetro de liberación de histamina. Además, se quiere estudiar la posible influencia sobre dicho proceso de dos importantes rutas metabólicas, que participan en la regulación de numerosos procesos celulares: * La señal de calcio, un segundo mensajero universalmente reconocido. * El pH intracelular, un parámetro físico-química que en estudios previos apunta un posible papel como nueva señal de transducción. Las conclusiones de este trabajo son: 1,- Una alcalinización intracelular es, por sí sola, una señal suficiente para desencadenar la exocitosis en células HMC-1. 2,- En células HMC-1, un incremento de calcio citosólico no es una señal suficiente para inducir liberación de histamina. 3,- Las células HMC-1 presentan reservorios intracelulares de calcio modulables por diversos fármacos, cuyo vaciado induce una entrada de calcio a través de canales SOC. 4,- En células HMC-1, una alcalinización intracelular activa la salida de calcio a través de la ATPasa de calcio de la membrana plasmática. 5,- La estimulación de la PKC incrementa la alcalinización intracelular y la liberación de histamina inducidas por el cloruro amónico en células HMC-1. 6,- En células HMC-1, el incremento de los niveles de AMPc potencia la alcalinización intracelular y la liberación de histamina inducidas por cloruro amónico.

Autor: SOLÍS GARRIDO LUISA MARÍA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En 1991, Shirvan y colaboradores identificaron una nueva población "atípica" de receptores colinérgicos acoplados a la secreción de catecolaminas en células cromafines bovinas. Estos receptores, a los que denominaron "muscatínicos" poseían la sorprendente propiedad de presentar una farmacología a medio camino entre la correspondiente al receptor nicotínico y el muscarínico. Sin embargo, transcurridos 15 años de su identificación inicial, aún permanece sin resolver la naturaleza molecular de este receptor "atípico". Las receptores nicotínicos neuronales para la acetilcolina (nAChRs) son complejos proteicos pentaméricos construidos por la combinación de diversas subunidades de las cuales, hasta la fecha, han sido identificadas y clonadas doce (alfa2-alfa10, beta2-beta4). Curiosamente, el nAChR constituido por las subunidades alfa9 y alfa10, las dos últimas en ser identificadas y clonadas en epitelio olfatorio y cóclea de rata, posee propiedades farmacológicas que recuerdan a las descritas para el receptor muscatínico de la célula cromafín. Por todo ello, el objetivo central de esta tesis ha sido estudiar si este receptor atípico es también expresado por las células cromafines de rata y si el mismo corresponde al nAChR del subtipo alfa9alfa10. En este estudio se han combinado una serie de abordajes experimentales que incluyen técnicas moleculares, western blot, inmunocitoquímica y microscopía confocal, farmacológicas y electrofisiológicas. El análisis de nuestros datos de RT-PCR en célula única indica que el 54% y el 78% de las células cromafines examinadas expresan los mRNAS para las subunidades nicotínicas alfa3 y alfa7, respectivamente; mientras tanto, la práctica totalidad de ellas expresan los transcritos alfa9 y alfa10. Más aún, empleando técnicas inmunocitoquímicas se constata que estos últimos transcritos son traducidos a las correspondientes proteínas. Ambas subunidades a parecen combinarse para formar un receptor nativo funcional en la célula croamfín, como se deduce de los registros electrofisiológicos de patch-clamp en la configuración de células entera mostrando cómo la oxotremorina-M (Oxo-M) genera una corriente nicotínica la cual es reversiblemente bloqueada por alfa-bungarotoxina (alfa-Bgtx). Tras obtener por PCR los cDNAs correspondientes a las subunidades alfa9 y alfa10 de la célula cromafín de rata, estos se secuenciaron y clonaron en pGEMHE. Se identificaron dos variantes alfa10 de célula cromafín, una idéntica a suhomónima de cóclea, junto a una segunda isoforma alfa10 "corta" que carece del dominio amino-terminal. Por su parte, la subunidad alfa9 de cromafín sólo difería en dos residuos a la clonada a partir de epitelio olfatorio (V157M y A458T). La inyección del mRNA transcrito in vitro a partir del cDNA de la variante alfa10 "larga" en ovocitos de Xenopus no produjo receptores funcionales pero sí potenció unas 100 veces las corrientes alfa9 activadas por ACh en ovocitos que coexpresan ambas subunidades. Las características biofísicas y farmacológicas del nAChR alfa9alfa10 de célula cromafín expresado en ovocitos reproducían, en gran medida, las descritas para el receptor de cóclea. En conjunto, nuestros datos sugieren que las células cromafines expresan un receptor colinérgico atípico que corresponde al nAChR del subtipo alfa9 alfa10 identificado previamente en cóclea.

Autor: LÓPEZ PEÑA RAFAEL.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGÍA - SECCIÓN DEPARTAMENTAL DE MEDICINA - UNIVERSIDAD DE VALENCIA.

Resumen: INTRODUCCIÓN AL PROBLEMA OBJETO DEL ESTUDIO: Las células del músculo liso, en las paredes de muchos órganos, son vitales para muchas funciones orgánicas y su alteración contribuye a un gran número de enfermedades. La expulsión del neonato del útero, la disnea del asma y el espasmo de las arterias coronarias son el resultado de la contracción de las células musculares lisas que forman la parte principal de las paredes del útero, vasos sanguíneos, vías aéreas, estómago, vejiga urinaria e intestino (Somlyo & Somlyo, 1994). La contracción del músculo liso, aunque basada en un mecanismo filamento - oscilante similar al del músculo estriado, su función está regulada tanto por mecanismos de acoplamiento electromecánicos como por mecanismos de acoplamiento farmacomecánicos. La contracción del músculo liso está regulada primariamente por variaciones en la concentración intracelular del Ca2+ libre. Incrementos en la concentración del Ca2+ intracelular provocan la contracción mientras que su disminución causa relajación del músculo liso. El complejo Ca2+-calmomodulina estimula a la quinasa de las cadenas ligeras de la miosina y la subsiguiente fosforilación de las cadenas ligeras reguladoras de la miosina que provoca la contracción del músculo liso (1994, Kamm et al., 1989, Somlyo, A.P. & Somlyo, A.V., 1994). Se ha descubierto que las proteínas tirosina quinasa tienen un rol destacado en la movilización del Ca2+ intracelular y en la contracción del músculo liso, se ha observado, en diferentes tipos celulares, que varios factores de crecimiento mitogénicos como el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y el factor de crecimiento plaquetar (PDGF) aumentan la concentración del Ca2+ libre intracelular y tienen efectos contráctiles en diferentes variedades de músculos lisos (Berk et al., 1985, Hollemberg, 1994). La utilización de fármacos que inhiben las proteínas tirosina quinasas atenúan la contracción del músculo liso inducida tanto por factores de crecimiento como por péptidos vasoactivos lo que invoca una participación de la fosforilación de las proteínas tirosina quinasas en los mecanismos de transmisión de señal de la contracción del músculo liso (Di Salvo et al., 1993, Savineau et al., 1996). Se ha demostrado que algunos agonistas de receptores proteína G acoplados pueden estimular, mediante un mecanismo de transactivación, receptores tirosina quinasa y la vía ERK/MAPK (vía de señal quinasa regulada extracelular/proteína quinasa activada por mitógeno) y que la transmisión, hacia delante, de esta vía mitogénica, activada por un receptor proteína G acoplada concreto no funciona de forma aislada y que las diferentes vías de señal están conectadas en redes de proteínas intracelulares, en las que existen múltiples cruces de caminos entre las vías individuales (Liebmann, 2001, Reinhard Wetzker and Frank-D Bomer, 2003). El problema objeto de estudio es investigar el rol que desempeña la fosforilación por las proteína quinasas en el mecanismo de contracción de arterias y venas pulmonares humanas. El establecimiento de esta relación causal entre la fosforilación de la tirosina activada por el receptor y los subsiguientes incrementos en la concentración de Ca2+ receptor activado puede tener implicaciones fisiopatológicas significativas (Di Salvo et al., 1997): 1.- Alteraciones de la regulación a contracorriente de uno o más sitios en las vías de señal, evocadas por la activación del receptor pueden producir incrementos indeseables en la concentración del Ca2+ intracelular, que puede causar espasmo vascular que quizás culmine en Infarto de Miocardio o Hemorragia Cerebral. También puede ser un factor que contribuya a ciertas formas de Hipertensión progresiva. 2.- Alteraciones en la regulación anterógrad 8 a de las 1ff8 vías de señal puede contribuir a fallo en la vasoconstricción periférica favoreciendo la presentación de Shock o limitar la regulación neurohumoral de la tensión arterial. 3.- Arterioesclerosis o enfermedad vascular periférica asociada a enfermedades como Diabetes Mellitus (Schwartz et al., 1990, Ross, 1995), debido a que la fosforilación de la tirosina proteica es un mecanismo importante de regulación de crecimiento celular y determinados agentes neurohumorales vasoactivos como adrenalina, serotonina, angiotensina II, endotelina 1 y peptido atrial vasoactivo pueden modular el crecimiento de las células del músculo liso vascular. 4.- Remodelación y reestenosis vascular después de angioplastia de balón (Pyles et al, 1997) por alteración en la regulación de las MAPK. Por todo ello, la identificación de las alteraciones en las vías de señal puede ser una valiosa ayuda para el desarrollo de nuevos fármacos encaminados a corregir dichas alteraciones, por ejemplo, por sus efectos de transactivación, agonistas o antagonistas de receptores proteína G acoplados, muy utilizados en la clínica, pueden presentar un riesgo carcinogénico o al contrario, tener efectos beneficiosos en el tratamiento del cáncer (Asuka et al., 2002, Gschwind et al., 2002). OBJETIVOSLa circulación menor del organismo presenta características que la diferencian de la circulación general, como por ejemplo, que los vasos pulmonares reaccionan a algunas situaciones como la hipoxia de forma opuesta a como lo hacen los vasos sistémicos. Otra característica no menos llamativa de la circulación menor es que soporta presiones mucho más bajas. Esto tiene una traducción morfológica en arterias pulmonares, que tienen una pared mucho más fina, con una capa muscular muy inferior a la de arterias de la circulación general, hasta el punto en que, una vez aisladas del organismo, puede resultar dificultoso distinguir una arteria de una vena pulmonar humana. Sin duda, la patología más importante a nivel de la circulación menor es la hipertensión pulmonar. No sabemos si es la causa o la consecuencia, pero en casos de hipertensión pulmonar, las arterias pulmonares sufren unos cambios drásticos, aumentan de calibre y la pared muscular se engrosa hasta el punto de adquirir una morfología comparable a la de cualquier arteria sistémica. La cuestión es si todos estos cambios pudieran ser consecuencia de una estimulación excesiva y prolongada de la contracción vascular pulmonar. Tal vez las repercusiones intracelulares de la estimulación de un receptor adrenérgico, no se limiten simplemente a la contracción, sino que se pongan en marcha de forma paralela fenómenos de remodelado vascular, con procesos de hiperplasia o hipertrofia celular. Clásicamente se ha asociado los fenómenos de proliferación celular con la actividad tirosina quinasa y con la estimulación de receptores con actividad tirosina quinasa. Por otra parte, algunos autores han descrito que la estimulación de la familia de receptores acoplados a proteínas G puede conllevar la estimulación de actividad tirosina quinasa. Pero también, se ha descrito que la estimulación de algunos receptores con actividad tirosina quinasa puede conllevar la contracción de vasos sanguíneos. Todo esto nos sugiere una interesante imbricación de las dos vías de transducción intracelular, que nos plantea varias preguntas: ¿Qué sucede en humanos?, ¿Acaso un estímulo fisiológico como noradrenalina es capaz de poner en marcha la vía tirosina quinasa?, ¿La actividad tirosina quinasa, se limita a participar en la proliferación celular como clásicamente se le ha asociado, o participa en la contracción?, ¿Qué ocurre con la quinasa activada por mitógeno (MAPK)?. Estas preguntas, y seguramente muchas otras que podríamos formular, son incógnitas todavía, y por ello nos planteamos explorar la participación de las tirosina quinasas y de las MAPK en la estimulación producida por noradrenalina en los vasos. Ahora bien, de todos los enfoques que podía adquirir el trabajo: proliferación celular, modificación de la apoptosis, neovascularización, etc..., dada la extensión que podía adquirir el trabajo, nosotros decidimos limitarnos a un estudio farmacomécanico, centrándonos en estudiar la participación de estas quinasas en la contracción. Todo ello en arterias y venas pulmonares, con el fin de observar si existían diferencias en la contracción y en los mecanismos responsables de ella entre los dos tipos vasculares. Por ello, nos propusimos los siguientes objetivos: 1. Estudiar los efectos de la criopreservación de arterias y venas pulmonares humanas y estudiar la viabilidad de la conservación de muestras válidas para ulteriores estudios farmacomecánicos. 2. Estudio de la participación de las proteína tirosina quinasas en la contracción provocada por noradrenalina mediante la utilización de fármacos inhibidores inespecíficos como genisteína y tirfostina. 3. Estudio de la participación de las proteína tirosina fosfatasas en la contracción provocada por noradrenalina mediante la utilización de fármacos inhibidores como óxido de fenilarsina, vanadato sódico y pervanadato. 4. Estudio del papel del calcio en la contracción por noradrenalina en arterias y venas pulmonares dilucidando si existen diferencias entre arterias y venas, y en que forma la proteína tirosina quinasa modula la homeostasis celular del calcio en estos vasos. 5. Utilización de fármacos inhibidores específicos de diferentes proteína tirosina quinasas y de MAPK que podrían estar implicadas en la contracción por estimulación adrenérgica de arterias y venas pulmonares humanas. CONCLUSIONES:1. La criopreservación de arterias y venas pulmonares humanas no modifica de forma significativa las respuestas contráctiles a noradrenalina y cloruro potásico, por lo que este procedimiento resulta factible en la conservación de muestras válidas para ulteriores estudios farmacomecánicos. 2. En arterias y venas pulmonares humanas, no existe correlación significativa entre las respuestas contráctiles iniciales evocadas por cloruro potásico y las obtenidas posteriormente a noradrenalina. Por el contrario, sí existe una correlación significativa entre las respuestas contráctiles obtenidas en dos curvas concentración-respuesta a noradrenalina construidas de manera consecutiva en el mismo preparado vascular. En consecuencia, la normalización de la respuesta a noradrenalina como porcentaje de la contracción inicial a cloruro potásico no está justificada, razón por la que nuestros resultados con noradrenalina han sido presentados en forma de gramos-fuerza o como porcentaje de la primera curva control a este agonista. 3. Los inhibidores de tirosina quinasas, genisteína y tirfostina A23, inhiben, de forma concentración-dependiente, las respuestas contráctiles a noradrenalina obtenidas en arteria y vena pulmonar humana, careciendo los correspondientes análogos inactivos, daidzeína y tirfostina A1, de actividad biológica en estos preparados. Los inhibidores de tirosina fosfatasas estudiados, óxido de fenilarsina, vanadato y pervanadato, no modificaron de forma significativa las curvas concentración-respuesta a noradrenalina en arteria y vena pulmonar humana. 4. El bloqueo farmacológico de la entrada de calcio por canales operados por voltaje de tipo L mediante el verapamilo, redujo de forma significativa la respuesta contráctil a noradrenalina en la arteria pulmonar humana, pero no en la vena. El bloqueo farmacológico de los depósitos intracelulares de calcio mediante fármacos con distintos mecanismos de acción como dantroleno, tapsigargina y SKF96365, no modificó de forma significativa la respuesta contráctil a noradrenalina en la arteria pulmonar humana, pero redujo marcadamente la contracción producida por este agonista en la vena pulmonar humana. La entrada de calcio capacitativo no induce una respuesta contráctil en la arteria pulmonar humana mientras, por el contrario, provoca una robusta respuesta contráctil en la vena pulmonar que es suprimida por SKF96365. El conjunto de estos resultados nos permite afirmar que el manejo de calcio activador es completamente diferente en los vasos pulmonares humanos de la 8 s vertie b5e ntes arterial y venosa. 5. La inhibición de tirosina quinasa por genisteína no resulta en una potenciación de los efectos de los fármacos moduladores de la señal de calcio utilizados en nuestro estudio sobre la respuesta contráctil a noradrenalina en arteria y vena pulmonar humana. Sin embargo, la genisteína inhibe la contracción producida por calcio capacitativo en vena pulmonar. En su conjunto, estos resultados sugieren que las tirosina quinasas podrían tener algún papel sobre la generación de calcio activador en estos preparados. 6. Los fármacos inhibidores específicos de Src quinasas (PP2), de fosfatidil-inositol 3-quinasa (LY294002) y de la NADPH oxidasa (apocianina) no producen modificaciones significativas sobre la curva concentración-respuesta a noradrenalina en arteria y vena pulmonar humana. La inhibición específica de ERK1/2 mediante PD98059 y U0126, y la de p38-MAPK por SB202190 produce una tendencia a incrementar la contracción a noradrenalina en arteria y vena pulmonar lo que sugiere una participación de esta vía de MAPK en los mecanismos involucrados en la respuesta contráctil a noradrenalina en vasos pulmonares humanos. Finalmente, la depresión de la contracción producida por noradrenalina en arteria y vena pulmonar humana tras la incubación con AG1478, un inhibidor específico de la actividad de tirosina quinasa del receptor para el factor de crecimiento epidérmico, y con GM6001, un inhibidor de metaloproteasas que impide la liberación de un ligando endógeno de este receptor, demuestran que la transactivación del receptor para el factor de crecimiento epidérmico está implicada en los mecanismos de la respuesta contráctil a noradrenalina. 7. En síntesis, el conjunto de los resultados aportados en este trabajo, presenta evidencia experimental de la implicación genérica de tirosina quinasas, así como de algunas quinasas específicas, en la respuesta evocada tras la activación del adrenoceptor-a por el neurotransmisor adrenérgico noradrenalina en vasos pulmonares humanos. Estos mecanismos podrían tener interés potencial no sólo en la vasoconstricción pulmonar sino también para la comprensión de los mecanismos subyacentes a la angiogénesis y remodelado de los vasos pulmonares humanos que se producen en circunstancias patológicas.

Autor: BOVAIRA GARCÍA MARÍA JOSÉ DEL ROSARIO.
Año: 2006.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.