PATOLOGIA

Autor: COLOMER OFERIL JAUME.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: PEDIATRIA-FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: A,- HIPOTESIS El conocimiento del grado de expresión proteica e interacción entre las diversas proteínas estructurales de membrana y enzimáticas, responsables de la mayor parte de las distrofias musculares, pueden ayudar en el diagnóstico clínico y genético, aportando a la vez información sobre la patogenia de las distintas entidades. La identificación de los patrones de interacción proteica, especialmente en aquellas enfermedades en que los defectos proteicos primarios forman parte de otros complejos proteicos. (Dystrophin Associated Gluycoprotein, DAG), constituirán una prioridad en esta tesis. B,- OBJETIVOS OBJETIVO 1,- Estudiar la expresión e interaccion de la distrofina y glicoproteínas asociadas a la distrofina -Dystrophin Associated Glicproteins -(DAG) en 17 pacientes afectados de una distrofia muscular de Becker (DMB) y en 15 de Diciembre (DMD). OBJETIVO 2,- Estudiar la expresión e interacción de la distrofina y glicoproteínas asociadas a la distrofina Dystrophin Associated Glicporteins- (DAG) en 11 pacientes afectos de una distrofia muscular por déficit primario de sarcoglicanos. OBJETIVO 3,- Valorar mediante Western blot la expresión de la Calpaína 3 en 4 pacientes con diferentes mutaciones en el gen CALPN 3. OBJETIVO 4,- Caracterización fenotípica y expresión proteica en un grupo heterogéneo de pacientes con déficits proteicos a nivel de la matriz extracelular, lámina basal y nucleoproteínas. CONCLUSIONES 1,- El grado de expresión de la distrofina se correlaciona bien con los fenotipos distrofia muscular de Duchenne/Becker, aunque en este último grupo no se ha podido objetivar una clara correlación entre el grado de expresión proteica y el fenotipo observado. El déficit de distrofina condicionó una interacción con todos los componentes del complejo sarcoglicano con especial reducción del gamma-sarcoglicano y beta-distroglicano. La interacción con la merosina fue muy discreta y nula con la caveolina 3. La utrofina fue sobreexpresada en todos los pacientes. 2,- La expresión proteica en la déficits primarios de alguno de los componentes del complejo sarcoglicano osciló entre un déficit total y parcial sin relación con los fenotipos observados. La interacción con el resto de componentes del complejo sarcoglicano y beta-distroglicano fue variable. No se objetivó interacción con la distrofina ni con la merosina. Todos los pacientes con independencia de la mutación mostraron una sobreexpresión de la utrofina. 3,- La expresión de la calpaina 3, fue reducida o ausente con los anticuerpos de 30 y 60 kD, siendo su análisis por tanto muy útil para el diagnóstico. No se pudo establecer una correlación genotipo/fenotipo. 4,- El estudio ha contribuido a reforzar la caracterización de los distintos fenotipos clínicos dentro del concepto de distrofia muscular congénita y nucleoproteínas facilitando su reconocimiento clínico y a la vez su identificación genética.

Autor: DORADO MARTÍN JUAN JOSÉ.
Año: 2002.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Hemos realizado el estudio de las patologías crónicas más frecuentes de la población de 40 años o más (557 personas) de la lista de población adscrita a un médico del Centro de Salud de San Fernando de la ciudad de Badajoz y su relación con las clases sociales, estableciendo la relación existente entre el Índice de Masa Corporal (IMC) de toda la población, las patologías crónicas mas prevalentes (Obesidad, HTA, Diabetes, Hipercolesterolemia, Hipertrigliceridemia, Cardiopatía Isquémica, Enfermedad Cerebrovascular, Fibrilación auricular, Nefrolitiasis, Varices en Miembros Inferiores, Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica, Artrosis en general, Gonartrosis, Coxartrosis, Espondiloartrosis, Osteoporosis), y la condición de persona sana, con los determinantes sociales más importantes (nivel de instrucción, renta per capita, clase social, habito tabáquico, consumo de alcohol, propiedad de vivienda y propiedad de vehículo. El grupo de edad de mayor población es el de 40-49 años, con un 34% del total. El 26,9% de la población estudiada es analfabeta y el 18% tiene estudios secundarios o superiores. La mayoría de la población pertenece a las clases trabajadoras (68%). El 13% de la población pertenece a las clases I y II (Directivos y profesionales fundamentalmente). El 43% de la población tiene ingresos netos al año por persona entre 3000 y 6000 euros. Siendo un 26% los que tiene ingresos por encima de 6000 euros/año. El IMC se asocia de forma estadísticamente muy significativa con el Nivel de Instrucción, disminuyendo 1,16 Kg/m2 por cada incremento en la escala del Nivel de instrucción (analfabetos, sin estudios, estudios primarios y estudios secundarios o superiores). El IMC de las mujeres se asocia, además de al Nivel de instrucción, al renta per capita de forma inversa. Las mujeres tienen 1,41 kg/m2 más de peso de promedio que los hombres. Las mujeres analfabetas tienen un IMC de 31,9 y las que tienen estudios secundarios o superiores de 24,6. Con el IMC se asocian con una p menor 0,001 las siguientes patologías (Gonartrosis, HTA, diabetes, Hipercolesterolemia, Hipertrigliceridemia y las varices en las piernas) y con una p menor 0,05 la artrosis y la espondiloartrosis dorsal y lumbar. La HTA se asocia de forma inversa con la renta per capita, y de forma directa con el IMC, la diabetes, la hipercolesterolemia y la edad. Las personas sanas se asocian de forma directa con la renta per capita, los hombres son más sanos que la mujeres y los hombres que nunca han fumado son más sanos que los que han fumado más de 20 años. Además, la artrosis se asocia a la clase social y es más frecuente en la mujeres, la Hipertrigliceridemia se asocia al consumo excesivo de alcohol, y la EPOC y la cardiopatía Isquémica con el tabaquismo, asociándose esta última también con la HTA y la hipercolesterolemia. La fibrilación auricular se asocia con la HTA y con la cardiopatía Isquémica; y la enfermedad Cerebrovascular se asocia con la HTA. De las conclusiones de nuestro estudio se pueden destacar: 1,- El nivel de Instrucción es la variable socioeconómica que mejor se asocia con la morbilidad crónica de la población. 2,- La elevación del nivel de instrucción de la población mejoraría la salud de la misma. 3,- Las poblaciones con nivel de instrucción bajo deberían disponer de más recursos sanitarios que las de nivel de instrucción más elevado, ya que tiene mayor morbilidad. 4,- Tanto el nivel de instrucción como el IMC podrían ser dos parámetros útiles para valorar las necesidades de recursos tanto sociales como sanitarios además de los ya existentes basados en la edad de la población.

Autor: GIMENEZ LLORT ANTONIO.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL SANT JOAN DE DEU.

Resumen: INTRODUCCIÃâN La enfermedad de Schönlein-Henoch es una enfermedad multisitémica que afecta principalmente a vasos de pequeño calibre de la piel, articulaciones, sistema digestivo y riñón. MOTIVO Y JUSTIFICACIÃâN DE LA TESIS El estrés oxidativo puede ser determinante en la aparición del síndrome de Schönlein-Henoch, en su evolución o en lapresentación de la nefropatí. Los radicales libres en exceso o un déficit de los mecanismos antioxidantes podría favorecer la aparición de la enfermedad. OBJETIVOS 1,- Estudiar el papel del daño oxidativo en la patogénesis y desarrollo de la púrpura de Schönlein-Henoch. 2,- Estudiar la implicación de los agentes antioxidantes (glutation peroxidasa, glutation reductasa, superóxido dismutasa, catalasa, ubiquinona, coenzima Q, malondialdehido, vitaminas A, C y E) en el desarrollo de la púrpura de Schönlein-Henoch en sus fases de actividad y remisión. 3,- Estudiar la implicación de los agentes antioxidantes en la nefropatía del Schönlein-Henoch. MATERIAL Y MÃâ°TODOS Se estudian 23 niños afectos de púrpura de Schönlein-Henoch. Se han dividido endos grupos según su afectación renal. El grupo A comprende 12 pacientes con complicación renal y el grupo B 11 sin complicación renal. A todos ellos se les efectúa determinación de enzimas antioxidantes, sustancias antioxidantes y marcador de la peroxidación lipídica. RESULTADOS En la glutation reductasa se han obtenido valores significativamente inferiores en los niños que presentan enfermedad activa comparados con el grupo control (p menor 0,05). No hemos encontrado diferencias en el resto de agentes antioxidantes estudiados. CONCLUSIONES 1,- Los pacientes que tenían a púrpura de Schölein-Henoch en actividad presentaban valores de glutation reductasa significativamente más bajos que el grupo control. 2,- Los enximas antioxidantes estudiados: glutation peroxidasa, glutation reductasas, catalasa y superóxido dismutasa, no presentaron diferencias estadísticamente significativas entre el grupo control y los pacientes con púrpura de Schönlein-Henoch en actividad, en remisión o los que presentaron nefropatía. 3,- Las sustancias antioxidantes estudiadas: ubiquinona, coenzima Q, y vitaminas A, C y E, no presentaron diferencias estadísticamente significativas entre el grupo control y los pacientes con púrpura de Schönlein-Henoch en actividad, en remisión o los que pesentaron nefropatía. 4,- La peroxidación lipídica estudiada mediante la determinación de malondialdehido no ha mostrado diferencias significativas entre el grupo control y los pacientes con púrpura de Schönlein-Henoch en actividad, en remisión o los que presentaron nefropatía.

Autor: CRESPO ASENSIO JAVIER.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN CARDIOVASCULAR (HOSPITAL DE SANT PAU).

Resumen: NOR-1 (Neuron-derived orphan recetor-1)es un receptor nuclear huérfano involucrado en la proliferación y migración de las células musculares lisas (CML) inducidas con suero. En la aterosclerosis es clave la activación de las células vasculares (CML y células endoteliales) por lipoproteínas de baja densidad (LDL) y mitógenos. Los mecanismos moleculares a través de los cuales se produce esta activación se conocen sólo parcialmente. El objetivo de esta tesis es estudiar si NOR-1 está activación de las células vasculares inducida por LDL y el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), y si la expresión de este gen puede ser regulada por fármacos antiateroscleróticos. Utilizando técnicas de RT-PCR semi y cuantitativa (PCR en tiempo real) observamos que la expresión de NOR-1 es inducida por LDL en CML y en pared arterial de cerdos hipercolesterolémicos y que los inhibidores de la HMG-GoA reductasa (estatinas) son capaces de inhibir esta inducción. El efecto de las estatinas enlas células es revertido por el geranilgeraniel, pero no por el farnesol. Al inhibir RhoA con simvastatina, exotoxina C3 y toxina B o al inhibir la actividad de Rho Kinase (ROCK, un efecto de RhoA)con Y-27632, se inhibe la expresión de NOR-1 inducida pro LDL. En el mismo sentido en experimentos de transfección de CML de rata la activación del promotor de NOR-1 inducida por LDL es inhibida por la simvastatina y también al contransfectar las células con un dominante negativo de RhoA (RhoAT19N). El análisis por Westerm blot de la proteína de CML inducidas con LDL muestra que un factor de transcripción que regula la actividad del promotor de NOR-1 (CREB) se activa (fosforilación en serina 133), y que dicho efecto es inhibido por simvastatina, exotoxina C3 e Y-27632. También observamos que un promotor formado por cuatro elementos CRE consenso es activado por LDL, efecto que es inhibido al cotrasfectar las células con RhoAT19N. Además las LDL son capaces de activar a Smenb, gen regulado por elementos CRE y la simvastatina de inhilbe este efecto. Por otro lado, en estudios con células endoteliales de vena del cordón umbilical humanas(HUVEC), VEGF induce la expresión de NOR-1. La inhibición de la expresión de NOR-1 con oligonucleótidos antisentido dirigidos contra el inicio de traducción de NOR-1, disminuye el efecto proliferativo y migratorio del VEGF en estas células. Estos resultados muestran que NOR-1 es inducido en CML por LDL a través de un mecanismo dependiente de la activación de CREB y de la vía de RhoA/ROCK. Además NOR-1 participa en la migración y proliferación inducida por VEGF en células endoteliales. NOR-1 podría ser clave en el papel antiaterogénico que desempeñan las estatinas, y podría ser una potencial diana terapéutica para regular la aterosclerosis y la angiogénesis.

Autor: MOLINA CASADO M. PLÁCIDA.
Año: 2004.
Universidad: MÁLAGA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: DELEGACIÓN PROVINCIAL DE SALUD/FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La Terapéutica Anticoagulante Oral supone en estos momentos un problema de Salud Pública. La incidencia en población general se cifra entre el 0,9-1,3%, aumentando alrededor de un 15% anual, ligado a la inclusión en el tratamiento de los pacientes con F.A. En el año 2001, por la acción coordinada en los Servicios de Hematología, Dirección de AP y la Unidad de Calidad de la Delegación Provincial de Salud se eligió, en aras de aumentar la calidad de la asistencia, el seguimiento de estos pacientes por parte de sus métodos de A.P., bajo la supervisión de los Servicios de Hematología. La tesis evalúa los resultados de esta decisión en el año 2004. Una vez excluidos del estudio los Centros del Distrito Costa del Sol, salvo los 3 correspondientes a Torremolinos-Benalmádena, por haber seguido un modelo distinto, se comprueba que a 31 de Diciembre de 2003, el 63% de los Centros de Salud participaban y el 95% de los profesionales de dichos Centros. El tiempo medio de formación recibida por los profesionales fue de 6 horas. Se estudian los métodos de punción, el consumo de tiras y los tiempos de demora en la obtención del resultados, y sus diferencias por Distrito Sanitario. Para ver la efectividad del tratamiento estudiamos el nº de pacientes que se encontraron en rango, medido por la determinación del INR y el tiempo que permanecen. Para el estudio de la Seguridad, se utilizan las complicaciones en nº y grado, mayores y menores. Los resultados hablan de las dificultades de implantación y las buenas cifras obtenidas en efectividad y seguridad, lo que posibilitala posible implantación de esta metodología en otras áreas. El estudio es pionero en España y Europa, abriendo caminos para el mejor seguimiento de estos pacientes, desde la calidad asistencial.

Autor: MARTÍNEZ GARRIGA BLANCA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA.
Centro de realización: UNIDAD DE MICROBIOLOGÍA, CAMPUS DE BELLVITGE.

Resumen: Este trabajo estudia los principales mecanismos de resistencia a fluroquinolonas en cepas clínicas de Streptococcus pneumoniae S. Pneumoniae es una bacteria Gram positiva caracterizada por la severidad de las infecciones que produce en la especie humana. La emergencia de cepas de S.pneumoniae resistentes a antibióticos como la penicilina y otros beta-lactámicos, ha llevado a la utilización de nuevos agentes antimicrobianos como las fluoroquinolonas, entre las cuales se encuentran la ciprofloxacina. Este trabajo pone de manifiesto el posible papel de otros estreptococos orales en la eventual transferencia de genes de resistencia a quinolonas en S.pneumoniae. Por otra parte, describe los mecanismos implicados en la resistencia a ciprofloxacina en cepas clínicas de S.pneumoniae, haciendo especial incidencia en los mecanismos de reflujo. El trabajo muestra que la resistencia de la mayoría de cepas clínicas se be principalmente a mutaciones en las principales dianas del antibiótico de estudio. Sin embargo, también demuestra la posible implicación de un mecanismo de reflujo en la destacada resistencia a ciprofloxacina de dos de las cepas clínicas de S.pneumoniae. La inactivación del gen pmrA, gen que codifica para la única proteína de reflujo descrita hasta el momento en S.pneumoniae, parece señalar la presencia de un mecanismo de reflujo independiente del PmrA. El análisis comparativo de secuencias entre el genoma de R6 y distintas proteínas de reflujo ya descritas en otras bacterias Gram positivas ponen de manifiesto la posible existencia de al menos otra bomba de reflujo en S.pneumoniae. Analizados los dos mecanismos principales de resistencias, se aplicó una metodología basada en la técnica de microarrays, que mostró el potencial de esta herramienta en la determinación de nuevos genes involucrados en la resistencia a fluoroquinolonas en S.pneumoniae.

Autor: IYÚ ESPINOSA DAVID.
Año: 2005.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Estudios previos de nuestro laboratorio han demostrado un aumento del óxido nítrico (NO) en ratas cirróticas por ligadura del conducto biliar (LCS), mediante la utilización de inhibidores de su síntesis (Ramírez, 1995). En esta misma línea nuestro laboratorio dispone de muchos datos que indican que el NO interfiere de forma muy importante con los mecanismos de regulación de la concentración de Ca2+ intracelular en la pared vascular. Así, en experimentos en los que se utilizó el lecho arterial mesentérico, aislado y perfundido, de ratas sometidas a LCS, se comprobó que tanto la entrada de Ca2+, a través de diversos canales, como la liberación de este desde los depósitos intemos era menor en las ratas sometidas a LCS (Nadal y cols., 2002). Para profundizar más en estas alteraciones, nuestro laboratorio ha realizado estudios con células musculares lisas, aisladas de la aorta abdominal, de ratas sometidas a LCS, confirmando que tanto la entrada de Ca2+ extracelular, como la liberación desde los depósitos es menor en las células musculares de las ratas LCS (Atucha y cols., 2003). En ambos casos, el uso de inhibidores de la sintasa de NO mejoró la respuesta del Ca2+, confirmando el papel del NO en la regulación de sus niveles y el origen muscular, además, de endotelial de la producción del NO. En muchos estudios cardiovasculares se han utilizado las plaquetas como un modelo fácilmente obtenible que sirve para analizar de forma comparativa algunas de las propiedades de las células musculares lisas. Asi, se han relacionado los aumentos del Ca2+ en las plaquetas con la hipertensión (Eme y cols., 1984). En nuestro modelo de ratas LCS, al igual que en otros tipos de cirrosis, existe una circulación hiperdinámica, con vasodilatación generalizada; de este modo, sería interesante estudiar la señal celular del Ca2+ en las plaquetas, al objeto de comprobar si ocurren las mismas alteraciones que las descritas para las células musculares lisas y para ver el papel que juega el NO en estas células. Por otro lado, es conocida la tendencia a sangrar que presentan los pacientes con cirrosis hepática. Entre las distintas causas que se barajan como responsables de este sangrado está una disminución de la función plaquetaria (Sosch y cols., 2005). El estudio de la señal celular de Ca2+, esencial para la activación de las plaquetas, en las plaquetas procedentes de ratas sometidas a LCS, nos puede ayudar a comprender el posible papel que tienen las plaquetas en las alteraciones hemostáticas que sufren los pacientes con cirrosis hepática. Por ello, en este trabajo nos propusimos los siguientes objetivos: 1.Analizar los mecanismos de entrada y de liberación intracelular de calcio en plaquetas de animales con cirrosis biliar.2.Estudiar el papel del óxido nítrico en la homeostasis del calcio de las plaquetas de animales con cirrosis biliar.3.Determinar la expresión de proteínas de unión al calcio en plaquetas de animales con cirrosis biliar. Los resultados han sido los siguientes: 1. Las plaquetas de ambos grupos experimentales presentan la misma concentración citosólica de Ca2+, en condiciones basales, tanto en ausencia como en presencia de Ca2+ extracelular.2. La estimulación con trombina produce un aumento de la concentración citosólica de Ca2+ que es mayor en las plaquetas de las ratas cirróticas, tanto en ausencia como en presencia de Ca2+ extracelular. Este resultado no se ve influído por la incubación de las plaquetas en su propio plasma (activado o inactivado). 3. Los niveles totales de Ca2+, almacenado en los depósitos intracelulares, de las plaquetas de las ratas cirróticas s 8 on mayor aa8 es que en las controles. En esta linea la actividad ATPasa de la SERCA es también mayor en las plaquetas de las ratas cirróticas. 4. La entrada capacitativa de calcio en respuesta a tapsigargina es significativamente inferior en las plaquetas de las ratas LCS que en las de las controles. 5. Las plaquetas de ambos grupos experimentales presentan la misma liberación de NO, en condiciones basales, tanto en ausencia como en presencia de Ca2+ extracelular. 6. La estimulación con trombina, en presencia de Ca2+ extracelular, produce un aumento de la liberación de NO, que es mayor en las plaquetas de las ratas cirróticas. Del mismo modo, la estimulación con tapsigargina, en presencia de Ca2+ extracelular, también produce un aumento de la liberación de NO, que es también mayor en las plaquetas de ratas cirróticas. 7. La liberación de NO, en presencia de Ca2+ extracelular, en respuesta a trombina es disminuída al incubar las plaquetas con L-NAME 100 u.1M,sin embargo, la señal celular de Ca2+ no se ve alterada por el L-NAME 100 u.1M,ni en ausencia ni en presencia de Ca2+ extracelular, tras stimular las plaquetas con trombina y tapsigargina. 8. El nivel de expresión de las proteínas SERCA, Calreticulina y Calpaína es el mismo en los dos grupos experimentales, en cambio, el de Calmodulina y PMCA es mayor en las plaquetas de las ratas cirróticas. Las conclusiones han sido las siguientes: 1.Las plaquetas de animales con cirrosis biliar presentan alteraciones de la movilización del calcio compatibles con una mayor capacidad de almacenamiento secundaria a la mayor actividad de los mecanismos de recaptación. 2.A pesar de que el agonista trombina produce una mayor liberación de óxido nítrico en las plaquetas de las ratas con cirrosis biliar, la inhibición de su síntesis no se acompaña de una normalización de las alteraciones del calcio intraplaquetario yello sugiere que el óxido nítrico no es responsable de dichas anormalidades. 3.Las plaquetas de los animales con cirrosis biliar muestran una diferente expresión de las proteínas de unión al calcio.

Autor: TORO DE MENDEZ MORELVA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGIA.

Resumen: Se llevó a cabo un estudio inmunohistoquímico incluyendo un panel de 18 biomarcadores y un estudio molecular en 81 biopsias de cáncer de cuello uterino (59 carcinomas epidermoides y 19 adenocarcinomas cervicales) diagnosticados en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital Clínico universitario de Valencia, con la finalidad de realizar la caracterización inmunohistoquímica de esta neoplasia invasora y determinar la presencia de ADN-HPV asociado. El estudio inmunohistoquímico se realizó, en tumores cervicales y tejido cervical benigno como control, mediante la técnica de avidina-biotina, interpretado siguiendo una escala semicuantitativa. Se determinó la presencia y genotipificación de ADN-HPV, en las muestras neoplásicas, utilizando el método PCR-SPF10/LiPA. El tipo histológico más frecuente fue el carcinoma epidermoide moderadamente diferenciado (43.5%) y el adenocarcinoma endocervical (42.1%). La edad promedio de las pacientes fue 50.67 más o menos 13.62 años. Los hallazgos inmunohistoquímicos fueron los siguientes: los carcinomas cervicales mostraron un índice proliferativo (Ki-67/MIB-1) entre moderado y alto; presentaron inmunoreactividad positiva para las proteínas celulares reguladoras ciclina D1, pRb, p16, p21, p27 y ciclina E igual a 32.1%, 30%, 79.5%, 52.5%, 53.2% y 7.7% respectivamente. Respecto a las proteínas apoptóticas, la reactividad ante el anticuerpo contra p53 fue de 3.9%, MDM-2 (100%), Bax (67.5%) y BcI-2 (3.7%). Las moléculas de adhesión celular cadherina-E, CD44s y CD44v3 estaban sobrexpresadas con localización preferentemente citoplasmática en el 76.6%, 90.9% y 97.5%. La inmunorespuesta para la ubicuitina fue de 98.7%, citoqueratinas (AE1/AE3) 97,5%, CEA 89.7% y telomerasa 52.6%. Se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la inmunoreactividad de los tumores en comparación con los controles a excepción de la reactividad de p53, Bcl-2 y CEA; tambien en cuanto a la reactividad de p27, MDM-2, citoqueratinas, localización celular de la cadherina-E y CD44v3 en los carcinomas de diferentes grados de maduración y en el caso de los subtipos histológicas de adenocarcinoma cervical para Bax, telomerasa y CD44v3. Hallamos correlación en la inmunoexpresión de 1) Ki-67 con p16, p21, p27, telomerasa y ubicuitina. 2) pRb y ciclina D1, CEA y CD44s; p53 con ciclina D1 y CEA. 3) p16/p21, p16/p27, p21/p27, p27/Bax, p27/Bcl-2 y p16/MDM-2. 4) ciclina D1 con p21, CEA y Cadherina-E. 5) Cadherina-E con CD44s, CD44v3, con MDM-2 y ubicuitina; CD44s/CD44v3; CD44v3 y p16, ubicuitina, telomerasa y citoqueratinas. 6) Citoqueratinas con p27, MDM-2, CD44v3 y Ki.67. En cuanto a la presencia de ADN-HPV en las muestras neoplásicas, el 96.3% (78/81) fueron positivas; de estos, el 59% (46/78) presentó infección única y el 41% (32/78) infección múltiple. El tipo viral específico más frecuente fue el HPV16 (55.13%) seguido de los HPV18, HPV58 y HPV X, en igual porcentaje (1.28%), así mismo el HPV16 fue el tipo viral más frecuente tanto en carcinomas epidermoides (55.9%) como en adenocarcinomas cervicales (52.6%). No encontramos diferencias estadísticamente significativas en la inmunoexpresión del panel de biomarcadores estudiados entre la infección única y múltiple. El cáncer de cuello uterino asociado a infección por HPV oncogénico se caracteriza porque muestra inmunoreactividad alterada en las principales vías reguladoras del ciclo celular, modulación de las proteínas apoptóticas, inmunolocalización celular anormal de las moléculas de adhesión celular, así colmo sobrexpresión de CEA y citoqueratinas, intensa degradación de proteínas y activación de la telomerasa. Los tipos histológicas de cáncer de cuello uterino comparten un proceso de carcinogénesis multifactorial en el que está involucrada, comúnmente, la presencia del HPV oncogénico como agente causal necesario para el desarrollo de esta neoplasia.

Autor: LÓPEZ MORENO SONIA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La presente Tesis Doctoral comprende ocho estudios científicos que investigan la genética y el funcionalismo mitocondrial en las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de diferentes grupos de pacientes infectados por el VIH. El objetivo de estos estudios es determinar los efectos tóxicos que los antirretrovirales (ARVs) y la propia infección por el VIH pueden ejercer in vivo sobre las mitocondrias de este tipo cellar. En la introducción se refleja la capacidad destructora del VIH sobre las células del sistema inmunológico, y la capacidad supresora de los ARVs sobre el VIH. Igualmente, se hace constatar la importancia de la biología mitocondrial para la viabilidad de cualquier tipo celular con metabolismo oxidativo, el significado y la repercusión clínica que una alteración mitocondrial puede suponer en el organismo humano. La interacción de estos tres factores (VIH, ARVs y mitocondrias) puede comprometer la función mitocondrial y magnificar la susceptiblidad de estos orgánulos generadores de energía de sufrir cualquier tipo de alteración que, en último término, se puede manifestar clínicamente. Durante los últimos 10 años la terapia antirretroviral de gran actividad (TARGA) contra la infección por el VIH ha aportado grandes beneficios a los individuos infectados, pero la administración crónica del TARGA, ha generado la aparición de una serie de efectos adversos graves, como por ejemplo miopatía, polineuropatía, pancreatitis, hiperlactatemia, acidosis láctica y lipodistrofia (LD), los cuales se han relacionado con un origen patogénico asociado a una disfunción mitocondrial. Las graves consecuencias q2ue pueden tener estos efectos adversos pueden motivar el abandono del tratamiento ARV y conducir al fracaso terapéutico. De aquí deriva la importancia vital de determinar los posibles mecanismos fisiopatológicos de estas alteraciones, que permiten el control de los efectos secundarios asociados al TARGA. De los estudios presentados derivan las siguientes conclusiones: 1,- Los pacientes en tratamiento ARV que han desarrollado LD presentan alteraciones mitocontriales en las CMSP, que se expresan principalmente como depleción del ADN mitocondrial (ADNmt) y disminución de la actividad enzimática de los complejos proteicos del sistema de fosforilación oxidativa (sistema OXPHOS) que están parcialmente codificados por el ADNmt. 2,- Las alteraciones mitocondriales en las CMSP de los pacientes VIH positivos con LD no implica disminución importante de la capacidad oxidativa mitocondrial en este tipo celular. 3,- La toxicidad mitocondrial de los ARVs es detectable en las CMSP de los pacientes VIH positivos que reciben TARGA en una fase asimptomática, antes de que aparezcan manifestaciones clínica de algún efecto secundario grave asociado al TARGA. 4,- La afectación mitocondrial de las CMSP por los ARVs se manifiesta de manera diferente y con intensidad variable según la combinación de ARVs administrada. 5,- La depleción de ADNmt presente en las CMSP de pacientes asimptomáticos que reciben TARGA no es utilizable como único marcador de detección precoz de los efectos secundarios, ya que no siempre implica alteración de la función oxidativa mitocondrial. 6,- Existen mecanismos celulares compensatorios previos al desarrollo de la sintomatología clínica de la toxicidad mitocondrial, que permiten que los pacientes asimptomáticos puedan mantener un contenido normal de las subunidades proteicas que conforman los complejos enximáticos del sistema OXPHOS y conservar la función oxidativo mitocondrial inalterada a pesar de presentar cierta depleción del ADNmt. 7,- La propia infección por el VIH produce una alteración mitoconddrial generalizada en las CMSP, probablemente mediada por mecanismos apoptóticos. 8,- La propia infección por el VIH induce la activación de mecanismos apoptóticos al músculo esquelético, los cuales en este tejido no se ven incrementados adicionalmente por la administración del TARGA ni por el desarrollo de la LD.

Autor: CONDE GALLEGO ESTHER.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: En la presente tesis doctoral se han estudiado mediante matrices tisulares lo niveles de expresión de múltiples proteínas relacionadas con importantes procesos celulares, en una serie de pacientes diagnosticados de carcinoma broncogénico no microcítico (CRNM) en estudios iniciales (IA-IIBp). Gracias a un abordaje multidisciplinar de integración de datos clínico, anatomopatológicos y moleculares, se han identificado marcadores moleculares con fines diagnósticos, pronósticos y predictivos en el CBNM. En relación a estos últimos, se ha realizado un detallado estudio del contexto genético y molecular en el que tienen lugar las mutaciones del gen EGFR en una serie independiente de pacientes diagnosticados de adenocarcinoma de pulmón. Entre otras conclusiones, cabe destacar la relación entre la sobre-expresión de la proteína S6p y la presencia de mutaciones en dicho gen, proponiendo la determinación inmunohistoquímica de la proteína S6p como un método indirecto para conocer el estado mutacional del gen EGFR.

Autor: ÁLVAREZ FLORES MARIA BETRIZ.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GETAFE.

Resumen: La leucemia linfática (LLC-B) es el síndrome linfoproliferativo más frecuente del adulto y se caracteriza por la acumulación progresiva de linfocitos B inmunológicamente incompetentes que generalmente sobreexpresan el antígeno CD5. Esta acumulación de linfocitos se debe principalmente a una inhibición de la muerte celular programada o apoptosis, permaneciendo las células en fase G0 del ciclo celular. La causa de dicha alteración es desconocida. Clínicamente los pacientes con LLC-B presentan un comportamiento y una respuesta al tratamiento heterogéneo. Estudios sobre apoptosis aplicados a la LLC-B, muestran un aumento en la expresión de la proteína antiapoptótica -bcl-2, con aumento en el ratio bcl-2/bax (proteína proapoptótica) frente a los linfocitos B normales y aunque dicho ratio se ha correlacionado con el estadio clínico de los pacientes existe en este momento controversia sobre su relación con la respuesta clínica al tratamiento. Es poco conocido el papel de otras proteínas implicadas en apoptosis en los pacientes con LLC-B, pero miembros de la familia de Bcl-2 como Bax, Bcl-X y Mcl-1 podrían jugar un papel importante en este proceso. El análisis in vitro de apoptosis en LLC-B, ha ofrecido igualmente resultados controvertidos sobre la correlación entre apoptosis inducida in vitro por diferentes fármacos (Fludarabina, 2-CDA, Clorambucil, Flavopirinol, Teofilina) y la respuesta clínica al mismo. Igualmente los resultados ha sido contradictorios entre la relación o no de quimiosensibilidad in vitro y los niveles de las diferentes proteínas implicadas en apoptosis. En el tratamiento de la LLC-B, existen nuevas y distintas tendencias terapéuticas tras la aparición de un nuevo grupo de agentes citotóxicos, los análogos de purinas, cuyos representantes más conocidos y empleados como eje del tratamiento de la LLC-B son la Fludarbina y la Claridibina. Actualmente, parece que el tratamiento de la LLC-B se orienta hacia la utilización de tres tipos de fármacos; análogos de purinas, alquilantes y antraciclínicos, cuyos resultados óptimos empleados bien en monoterapia o en distintas formas de tratamiento combinado están aún por definir. En este trabajo se ha evaluado la inducción de apoptosis in vitro en las poblaciones de linfocitos B tumoral y T normal de pacientes con LLC-B tras la exposición a diferentes combinación de 3 fármacos antineoplásicos con reconocida actividad citotóxica en esta entidad (Fludarabina, Mafosfamida y Mitoxantrona). Además, se ha caracterizado la expresión ex vivo de Cspasa 3 activa, Fas y de las proteínas pertenecientes a la familia de Bcl-2: Bcl-2, Bax, Bcl-X y Mcl-1 en los linfocitos B y T de LLC-B. De igual modo se han evaluado los cambios de expresión de las mismas tras los distintos tratamientos quimioterápicos in vitro.

Autor: CARRILLO MOLINA JORGE.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: LABORATORIO DE INMUNOBIOLOGIA PARA LA INVESTIGACIÓN Y LAS APLICACIONES DIAGNÓSTICAS (LIRAD-BST).

Resumen: La diabetes mellitus tipo 1 es una enfermedad autoinmunitaria caracterizada por la destrucción de las células beta, productoras de insulina, a cargo del propio sistema inmune. Aunque se ha podido determinar que son los linfocitos T los principales responsables de la destrucción de las células beta, en este proceso es necesaria la participación de otros tipos celulares, como son las células dendríticas, los macrófagos y los linfocitos B. Los linfocitos B pueden ser destacados por varios motivos: 1,- La presencia de autoanticuerpos en el suero de pacientes, incluso en la fase preclínica, con un marcado carácter pronóstico. 2,- Eliminación de la población de linfocitos B en el modelo NOD, previene la aparición de la enfermedad . Trabajos realizados con el modelo NOD han determinado que los linfocitos B podrían participar en el proceso diabetogénico como una población de células presentadoras de antígeno, con un marcado carácter diabetogénico. Este papel requeriría que estas células reconocieran de forma específica autoantígenos relevantes en la enfermedad (GAD65, insulina…) Otro dato interesantes es que los linfocitos B infiltran los islotes pancreáticos de forma similar a como lo hacen los linfocitos T, llegando constituir el 50% del infiltrado in situ, y se localizan en íntimo contacto con los linfocitos T. Pese a esto, en el estudio de los linfocitos B se ha centrado en periferia, no abordando la población de linfocitos B que infiltra los islotes pancreáticos. La principal línea de investigación de nuestro grupo se ha centrado en la caracterización fenotípica, funcional y antigénica de esta población celular. Esta tesis doctoral se centra en este último punto y plantea como objetivo principal caracterizar la especificidad antigéncia de los linfocitos B infiltrantes en islotes pancreáticos en modelos animales que muestran susceptibilidad a desarrollar la enfermedad (NOD y 8.3-NOD) y en modelos que muestran una moderada resistencia al proceso (F1(NODxNOR) y 8.3-F1(NODxNOR)). Para esto se han generado hibridomas fusionando la población de linfocitos B infiltrantes en islotes con la línea de mieloma NS-1. El estudio de estos hibridomas ha permitido determinar que un alto porcentaje de estas células reconocen estructures del sistema nervioso periférico. El análisis molecular de las inmunoglobulinas expresadas pro estas células, ha mostrado que esta reactividad puede ser fruto de un proceso de selección positiva vía antígeno. Estos datos apoyan la hipótesis de que el ataque autoinmune dirigido contra las células beta está acompañado, o precedido, de la destrucción del sistema nervioso periférico que inversa los islotes pancreáticos.

Autor: PIJUAN ANDÚJAR LARA.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: UNIDAD DOCENTE HOSPITAL DEL MAR.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Resumen: El linfoma folicular constituye el 35-45 % de todos los linfomas no Hodgkin y el 75-80 % de los linfomas de bajo grado. Muchos de los pacientes con linfoma folicular responden al tratamiento inicial, pero la mayoría recaen siendo el porcentaje anual de recaídas del 5-10 %. De un 30 al 60 % de los casos, con el tiempo pueden transformarse a un linfoma difuso de células grandes B más agresivo. Desde el punto de vista patogénico el linfoma folicular es una neoplasia de células maduras B que tiene como contrapartida normal los linfocitos del centro germinal de los folículos linfoides secundarios. Contiene principalmente 2 tipos celulares, los centrocitos y centroblastos. Morfológicamente la mayoría de los casos de linfoma folicular presentan un patrón predominantemente folicular. En lo referente a la citogenética, el linfoma folicular se caracteriza por la translocación t(14,18)(q32;q21). De este modo el gen bcl-2 del cromosoma 18 se yuxtapone con el gen que codifica para la cadena pesada de las inmunoglobulinas (IgH) del cromosoma 14 dando lugar a la sobreexpresión de la proteína Bcl-2, cuyo principal efecto es la inhibición de la muerte celular programada o apoptosis celular. A pesar de esto, aún no se conocen del todo que otras alteraciones genéticas o factores del huésped son las que junto con la translocación t(14,18)(q32;q21) hacen que se establezca un fenotipo maligno definitivo y se produzca una expansión clonal incontrolable en el centro germinal. Es de destacar que la translocación t(14,18)(q32;q21) se da en el 85 % de los casos y que existen algunas variantes menos frecuentes de la misma, como la la t(2;18) o la t(18;22) que también resultan en la sobreexpresión de Bcl-2. En un 15 % de los casos están implicadas translocaciones de otros genes como bcl-6, especialmente en los linfomas de más alto grado. El diagnostico de linfoma folicular se establece mediante el estudio anatomo-patológico de la biopsia de un ganglio linfático afecto, complementado con el estudio inmunofenotípico y molecular. Para el estadio clínico del linfoma folicular es necesario el estudio de la medula ósea ya que su estado, a parte de determinar el estadio de la enfermedad, es lo que determinará el manejo clínico del paciente, siendo útil también para la monitorización del tratamiento. La medula ósea se encuentra afectada entre el 40 y 70 % de los casos. En esta Tesis Doctoral nos centramos por una parte en el estudio molecular de todos los ganglios con linfoma folicular de los pacientes incluidos en el estudio y por otra parte de la biopsia de la medula ósea y creamos la hipótesis de que el estudio morfológico e inmunohistoquímico de las biopsias de medula ósea en estos pacientes no es suficiente para predecir si existe o no afectación residual y que creemos que con estudios moleculares de las mismas podríamos detectar la presencia de afectación sin que se haya observado morfológicamente la presencia de infiltrados linfoides en la medula ósea. Los resultados que aporta la Tesis han podido demostrar que a través de técnicas moleculares se pone en evidencia la afectación de la medula ósea por linfoma folicular en pacientes en que la biopsia realizada y estudiada histológica e inmunohistoquímicamente no lo objetivaban. Además se ha podido demostrar esta infiltración gracias al estudio de las características moleculares de los ganglios afectos en el momento del diagnóstico. Estos inquietantes datos indican un camino a seguir ya que indican de la necesidad de incorporar las técnicas de diagnóstico molecular como parte de la rutina de los laboratorios de patología.