PATOLOGIA EXPERIMENTAL

Autor: Jiménez-Prada de Miguel Marta.
Año: 2004.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: En los trasplantes, el órgano a injertar queda sometido inevitablemente a un periodo de isquemia. En el caso del pulmón, el tiempo que las células pulmonares tardan en morir después de la parada circulatoria, no está determinado con exactitud. Siendo así que resulta de interés profundizar en el conocimiento de los procesos que acontecen, tanto durante la isquemia como durante la reperfusión secuente al restablecimiento circulatorio. Para la investigación de estos procesos, se requiere la estandarización de los modelos experimentales y una mejor coordinación entre los equipos investigadores. El conocimiento de los fenómenos que determinan el fin de la viabilidad pulmonar permitirá mejorar las técnicas de preservación y aumentar así la posibilidad de trasplante, haciendo posible la utilización órganos procedentes de donantes lejanos y de otros considerados hasta hace poco inapropiados, como son los de cadaver "no latiente". Este estudio experimental, llevado a cabo en conejos, analiza las alteraciones que tienen lugar en el pulmón durante la isquemia-reperfusión, intentando valorar las lesiones morfológicas y sus consecuencias funcionales. Asimismo, pretende evaluar la posible viabilidad pulmonar post-mortem y validar el método experimental utilizado. El modelo, adaptado de los de otros autores, desarrolla dos tipos de experimento: EXPERIMENTO A) Consistente en someter al pulmón a un periodo de isquemia normotérmica "in situ" de 60 minutos de duración, seguido de periodos de reperfusión de 60,120 o 180 minutos en los subgrupos 1,2 y 3 respectivamente. La isquemia se consigue mediante ligadura en bloque del hilio pulmonar izquierdo durante una hora. Una vez liberada la ligadura, se trata de igual forma el hilio contralateral, mediando un periodo de 5-10 minutos de estabilización hemodinámica, previo a considerar el tiempo de reperfusión. El subgrupo 4 (control) fué sometido al mismo protocolo quirúrgico pero no a los "clampajes", a fin de descartar la posible influencia de la técnica en los resultados. Cada 30 minutos se realizaron mediciones de frecuencia cardiaca, presión arterial sistólica, presión venosa central, presión de la vía aérea y temperatura. Se toman también muestras de sangre arterial para la determinación de pH, PaO2, PaCO2 y saturación de O2. Las muestras pulmonares obtenidas, estudiadas bajo microscopia óptica, revelaron alteraciones histógicas inespecíficas, sólo significativas en la comparación con el control, sobre todo en los subgrupos que tuvieron más largos periodos de reperfusión. La infiltración macrofágica fué la nota de mayor relieve. Entre las determinaciones funcionales, la PaO2 resultó de mayor utilidad para valorar los cambios inducidos tanto por la isquemia como por la reperfusión. EXPERIMENTO B) Consistente en un estudio post-mortem practicado a los 60 minutos del sacrificio del animal, sometido previamente, o no, a una hipovolemia severa (subgrupos 3 y 1, respectivamente). Dicha hipovolemia se realizó mediante extracción de un 30% del volúmen circulatorio total a través de la cánula yugular. La toma de muestras para el estudio fué inmediata tras la muerte del animal en los subgrupos 2(sometido a hipovolemia pre-mortem) y 4 (control). Las muestras pulmonares permitieron valorar el contenido de agua del tejido (calculando la diferencia entre peso seco y peso húmedo), la reserva energética (expresada como nivel de ATP) y la viabilildad celular (determinada mediante tinción vital con Azul Trypan). Respecto del contenido de agua tisular, no se encontraron diferencias entre los distintos subgrupos ni con el subgrupo control. Los niveles de ATP tampoco revelaron diferencias significativas entre los subgrupos, aunque observamos una tasa ligeramente superior en el subgrupo 3, que pudiera dar lugar a especulaciones sobre el fenómeno de "precondicionamiento isquémico". La tinción con Azul Trypan presentó diferencias significativas entr 8 e los su 573 bgrupos y entre ellos y el control, revelando un descenso del número de células viables que podría relacionarse con las alteraciones funcionales ocurridas. En definitiva, el modelo experimental diseñado es sencillo y útil para el estudio de los procesos de isquemia-reperfusión. La viabilidad pulmonar se reduce progresivamente en el periodo post-mortem, aunque 1 hora después del cese circulatorio subsiste todavía un porcentaje estimable de células viables. El fenómeno de "precondicionamiento isquémico", cuyo mecanismo último está por dilucidar, parece mejorar la resistencia del tejido a la isquemia, hecho a tener en cuenta con vistas a la utilización de órganos procedentes de cadaver "no latiente" y en ciertas situaciones clínicas.

Autor: DIEZ ORTEGO IRENE.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En esta tesis hemos estudiado el efecto modulador que ejerce la PGE2 sobre el reclutamiento de leucocitos en la inflamación sinovial. Los objetivos fueron 1) estudiar el efecto de la inhibición de la PGE2 sobre el reclutamiento celular en un modelo experimental agudo de artritis inducida por antígeno (AIA) en conejos, 2) estudiar el efecto de la PGE2 sobre la síntesis y expresión del gen de MCP-1 y el efecto de su inhibición, en células sinoviales en cultivo estimuladas con IL-1 , y 3) estudiar el papel de los distintos tipos de receptores de PGE2 sobre la expresión del gen de MCP-1 en células sinoviales en cultivo estimuladas con IL-1 , y la participación del factor de transcripción NF- B. En el modelo experimental de AIA en conejos, los AINEs meloxicam (MXC) y diclofenaco (DCF) produjeron una disminución significativa del nivel de PGE2 en el líquido sinovial (LS) respecto a los animales no tratados que medimos por ELISA. También observamos con ambos tratamientos, una disminución en el volumen de LS y en el número de células polimorfonucleares, tanto en el LS como en la membrana, que sólo fueron significativas en el caso de MXC. Sin embargo, con ninguno de dichos AINEs observamos una disminución en el número de monocitos, que más bien mostró una tendencia a elevarse. Estos resultados se correlacionaron con el posterior análisis mediante inmunohistoquímica y RT-PCR de la presencia y expresión de IL-8 y MCP-1 en la membrana sinovial inflamada: observamos una disminución de IL-8 en el tejido sinovial con ambos tratamientos, pero no de MCP-1 respecto a los animales no tratados. Al estudiar el efecto de la PGE2 sobre MCP-1 en células sinoviales en cultivo estimuladas con IL-1 , observamos que la PGE2 disminuye de forma tiempo y dosis-dependiente la expresión de MCP-1 en células de conejo por RT-PCR y en células humanas por inmunocitoquímica. La inhibición de la síntesis de PGE2 mediada por MXC y DCF, condujo a un aumento significativo en la expresión del gen de MCP-1 tanto en células de conejo por RT-PCR como en células humanas por Northern-blot estimuladas con IL-1 . Además, el aumento en la expresión de MCP-1 se revirtió mediante la adición de PGE2 exógena. Los agonistas selectivos de los receptores EP2/EP4, 11-deoxi-PGE1, y EP2, butaprost, reprodujeron el efecto inhibitorio de PGE2 sobre la expresión de MCP-1 en células sinoviales de conejo en cultivo estimuladas con IL-1 . Sin embargo, el agonista selectivo de los receptores EP1/EP3, sulprostone, no produjo este efecto por RT-PCR. En células sinoviales humanas en cultivo la PGE2 produjo una inhibición de la activación celular del factor de transcripción NF- B mediada por IL-1 , al igual que el agonista selectivo de los receptores EP2/EP4, 11-deoxi-PGE1. En conclusión, nuestros resultados muestran que la activación de los receptores EP2/EP4 podría regular el reclutamiento de leucocitos al tejido sinovial inflamado, y por tanto, los fármacos que bloquean la síntesis de PGE2 podrían interferir con el efecto antiinflamatorio de este mecanismo autorregulatorio.

Autor: MANSILLA APARICIO ALICIA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACUILTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En estudios previos hemos demostrado expresión de proinsulina extrapancreática en el embrión de pollo desde gastrulación a organogénesis temprana, así como en la retina durante neurogénesis. En estos estadios el precursor de la insulina, la proinsulina, se mantiene sin procesar y actúa como factor de supervivencia, independientemente de la clásica función de la insulina en el mantenimiento de la homeostasis de la glucosa. Al caracterizar el mRNA para proinsulina en el embrión prepancreático hemos encontrado un transcrito que tiene la misma región codificante que el pancreático pero presenta una extensión de 32 nucleótidos en la región 5' no traducida, al que denominamos Pro1B. En experimentos de traducción en células en cultivo y en un sistema de reticulocitos hemos comprobado que el transcrito embrionario tiene muy reducida la traducción de proinsulina respecto al transcrito pancreático, por la presencia de dos upstream AUGs en la región 5' extendida. Cuando se mutan estos AUG a AAG, se recuperan los niveles de traducción igualandose a los del mRNA pancreático. En el embrión de ratón y en el de pollo en estadios tempranos, existe además del mensajero Pro1B otro mensajero de proinsulina que no ha realizado el procesamiento del primer intrón (al que denominamos Pro1B1). Al menos en el caso del embrión de pollo, este mensajero se comporta como un mensajero maduro y no es retenido en el núcleo, aunque según los experimentos de traducción en células en cultivo y en reticulocitos de conejo, hemos comprobado que su capacidad de traducción a proinsulina está prácticamente bloqueada. La expresión del transcrito con intrón retenido esta regulada temporalmente, aumentando la expresión con el avance del desarrollo, y espacialmente; en la organogénesis temprana apenas se expresa en la vesícula óptica pero es el mayoritario en el corazón y la región presomítica. La presencia de dos mensajeros sugiere la existencia de dos niveles de regulación, que evidencia la necesidad de mantener unos niveles de proinsulina bajos en el embrión, para comprobar esta hipótesis hemos añadido proinsulina a embriones in ovo y hemos observado como esta proinsulina, disminuye la muerte celular programada y provoca una serie de anormalidades especialmente en el sistema nervioso. La muerte celular programada es un proceso imprescindible para un correcto desarrollo morfogenético, y por ello es necesario permitir cierto nivel de muerte, manteniendo los niveles de factores de supervivencia como la proinsulina finamente regulados. Además la administración de proinsulina en la zona de ámbito precardiogénico, mediante implantación de bolitas acrílicas en estadios HH4-5, pero no en estadios posteriores, es capaz de inducir tejido cardiaco de forma ectópica. La capacidad inductora parece decaer cuando el transcrito que tiene bloqueada la traducción (Pro1B1) empieza a ser mayoritario, estableciéndose un paralelismo temporal entre la acción inductora de la proinsulina y la expresión del transcrito que mejor se traduce.

Autor: Esteban Vázquez Vanesa.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Medicina de la UAM (La Pagoda).
Centro de realización: Facultad de Medicina (Fundación Jiménez Díaz) UAM.

Resumen: La Angiotensina II (AngII) es el principal péptido del sistema renina angiotensina (SRA). Mediante la activación del receptor AT1 contribuye a la patogenia de enfermedades cardiovasculares y renales. Algunas datos sugieren que el receptor AT2 participa en la respuesta inflamatoria renal. Además de la AngII, existen otros péptidos del SRA biológicamente activos, como Ang1-7 y AngIV, que actuan mediante su unión a receptores específicos (Mas e IRAP/AT4). El primer objetivo de esta tesis fue evaluar el tipo de receptor de AngII implicado en la respuesta inflamatoria renal. Para ello hemos investigado la ruta NF- B y los genes asociados, utilizando modelos experimentales de daño renal, estrategias terapéuticas y ratones modificados genéticamente. Nuestros resultados demuestran que para inhibir la respuesta inflamatoria renal es necesario el bloqueo de ambos receptores AT1 y AT2. En distintos modelos experimentales y en pacientes con nefropatía diabética, la expresión del receptor AT2 aumenta durante el daño renal, demostrando el importante papel de este receptor en la patología del riñón. Nuestro siguiente objetivo ha sido determinar el papel del eje Ang(1-7)/Mas/ECA2 en el daño renal. En situaciones patológicas existe un aumento de la ECA2 renal. Utilizando ratones deficientes en el gen de receptor Mas (Mas-/-) hemos observado que se previene el daño renal causado por obstrucción unilateral de ureter. La Ang(1-7), vía receptor Mas, causa la presencia de células inflamatorias en el riñón, por un mecanismo mediado por la activación de NF- B e inducción de genes proinflamatorios (in vivo e in vitro). Finalmente evaluamos si AngIV presenta propiedades proinflamatorias. En células en cultivo (renales y vasculares), AngIV vía receptor AT4/IRAP activa la ruta NF- B y aumenta factores proinflamatorios. En conjunto, estos resultados demuestran que los péptidos de Ang (AngII, Ang1-7 y AngIV), actuando cada uno mediante su unión a receptores específicos (AT1, AT2, Mas e IRAP/AT4) presentan propiedades proinflamatorias y participan en la patogenia de enfermedades renales y cardiovasculares. El bloqueo selectivo de cada uno de estos receptores ofrece nuevas estrategias terapéuticas con importantes implicaciones en estas patologías.

Autor: PEREDA CERVERA JAVIER.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA,.

Resumen: Introducción: La pancreatitis aguda es una enfermedad de gran importancia debido a su frecuencia relativamente alta y a una incidencia creciente en nuestros días asociada a litiasis biliar y alcoholismo. Además, la pancreatitis grave presenta un porcentaje elevado de mortalidad. Los mecanismos moleculares que provocan una pancreatitis así como los que producen complicaciones locales y sistémicas que desencadenan una pancreatitis grave no están del todo esclarecidos. El glutatión, que es un antioxidante intracelular de gran importancia, se depleciona en el páncreas durante la pancreatitis aguda. Esta depleción influye en la mortalidad celular y en el pronóstico de la pancreatitis inducida experimentalmente. Además, la reposición mediante glutatión éster previene gran parte de los efectos perjudiciales de la enfermedad. Objetivos: Nuestro objetivo ha sido determinar los mecanismos responsables de la depleción de glutatión en el páncreas en la pancreatitis aguda experimental. Para ello, hemos estudiado el papel de la -glutamil cisteína sintetasa (GCS), enzima limitante de la síntesis de glutatión a partir de cisteína, la relación entre la depleción de glutatión y el TNF- , así como el papel de las proteasas y las proteín quinasas activadas por mitógenos (MAP quinasas). Además hemos estudiado la relación entre la depleción de glutatión y la mortalidad celular en células AR42J, que es una línea celular proveniente de páncreas exocrino de rata. Material y métodos: Para llevar a cabo estos objetivos, hemos utilizado un modelo in vivo de pancreatitis aguda experimental necrótico utilizando una perfusión retrógrada de taurocolato al 3,5% en el conducto biliopancreático, y un modelo edematoso de pancreatitis aguda experimental inducido con ceruleína en ratas. Asimismo, hemos empleado un modelo en ratones utilizando ceruleína. En cuanto a los modelos in vitro empleados para el estudio del mecanismo de depleción de glutatión, hemos utilizado acinos pancreáticos aislados de páncreas de rata y también células AR42J. Hemos medido el glutatión reducido mediante técnicas de espectofotometría y la expresión de los genes de la GCS mediante real time RT-PCR. Además hemos estudiado la regulación transcripcional de dichos genes mediante técnicas de inmunoprecipitación de la cromatina. Mediante Western blot hemos estudiado la fosforilación de las MAP quinasas así como la expresión de la proteína GCS. Estos estudios se han complementado mediante técnicas de microscopía confocal utilizando fluorocromos específicos para el estudio del glutatión y del tipo de mortalidad celular. Resultados y conclusiones: Confirmamos una depleción precoz y severa de glutatión reducido en la pancreatitis aguda necrótica experimental en ratas. Esta depleción es mantenida incluso 9 horas post-inducción. Se produce también una intensa depleción de glutatión en el modelo de pancreatitis aguda edematosa tras el tratamiento con ceruleína en ratas. Se observa una inducción ineficaz de la -glutamil cisteína sintetasa en páncreas durante la pancreatitis aguda severa que podría contribuir a la depleción mantenida de glutatión. En la pancreatitis aguda necrótica inducida con taurocolato no aumenta la expresión de las subunidades de la -glutamil cisteína sintetasa durante las primeras horas, a pesar de la unión de la ARN polimerasa II tanto a los promotores como a los exones de los genes que codifican las subunidades de esta enzima. Sin embargo, en la pancreatitis aguda edematosa inducida en ratas con ceruleína se produce de forma precoz un gran aumento en la expresión de la subunidad catalítica de la -glutamil cisteína sintetasa. Esta marcada inducción se debe principalmente a la unión de los factores de transcripción NF- B, SP-1 y c-Myc al promotor. En la pancreatitis aguda experimental inducida con taurocolato se produce de forma temprana un aumento en la fosforilación de las qu 8 inasas E 970 RK 1/2, JNK y p38 en el páncreas. Posteriormente, desciende progresivamente la fosforilación de las mismas hasta alcanzar niveles semejantes al control a las seis horas tras la inducción. El tratamiento con pentoxifilina previene la fosforilación de ERK 1/2 y de JNK, mientras que el oxipurinol previene la fosforilación de p38. El tratamiento combinado con pentoxifilina y oxipurinol previene simultáneamente la fosforilación de las tres principales familias de MAP quinasas. El TNF-alfa no tiene un papel significativo en la depleción de glutatión en la pancreatitis aguda dado que la depleción de glutatión asociada a la pancreatitis aguda inducida por ceruleína se produce tanto en ratones control wild type como en ratones knockout de TNF-alfa o de los receptores de TNF-alfa . La inhibición de la vía de ERK previene la depleción de glutatión inducida con taurocolato in vitro tanto en células acinares como en células AR42J. No obstante, JNK y p38 no influyen significativamente en esta depleción de glutatión. El inhibidor de proteasas AEBSF previene la depleción de glutatión inducida por taurocolato en células AR42J. Sin embargo, las proteasas lisosomales, el proteasoma, el calcio y la -glutamil transpeptidasa no juegan un papel significativo en la depleción de glutatión. El AEBSF, inhibidor de la depleción de glutatión, disminuye la necrosis inducida por taurocolato en células AR42J, aumentando la muerte celular por apoptosis. En base a estas resultados, nuestros resultados sugieren que la depleción de glutatión en páncreas en la pancreatitis aguda se debe a una proteasa o peptidasa no lisosomal dependiente de MAP quinasas, no dependiente de calcio e inhibible por AEBSF.

Autor: SANDOVAL MARTINEZ NIDIA RAQUEL.
Año: 2005.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: CENTROS DE INVESTIGACIONES TROPICALES.

Resumen: La esquistosomosis representa un problema creciente en áreas no endémicas debido al aumento del número de inmigrantes y de turistas que contraen esta enfermedad. La esquistosomosis aguda no es diagnosticada de forma temprana debido a la falta de herramientas diagnósticas que sean lo suficientemente sensibles para detectar el parásito durante las primeras semanas de infección. Los métodos actualmente disponibles para el diagnóstico de la esquistosomosis humana presentan problemas de especificidad y sensibilidad. Recientemente, varios autores han desarrollado métodos diagnósticos más específicos y sensibles, principalmente basados en la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Sin embargo, estas nuevas aproximaciones se han aplicado sólo para el diagnóstico de una de las cinco especies que afectan al hombre (Schistosoma mansoni). Además, la aplicación de esta PCR específica solo se ha demostrado en muestras de sangre y heces. En este trabajo, presentamos el desarrollo de una PCR altamente sensible, que permite la amplificación género- y especie-específica de las cuatro especies de Schistosoma que principalmente causan enfermedad en el hombre. Además, aplicamos con éxito esta técnica para la detección de ADN parasitario en muestras de orina fáciles de obtener y manejar, de pacientes con esquistosomosis. Con estas muestras, encontramos un 94,4% de sensibilidad y un 99,9% de especificidad al aplicar los primers género(Schistosoma ssp.)-específicos, y un 100% de sensibilidad y un 98,9% de especificidad en la PCR especie(S. mansoni)-específica. Igualmente hemos desarrollado una aproximación diagnóstica basada en la detección de ADN parasitario por la PCR en orina, comparando la utilidad de esta nueva aproximación con aquella de las dos herramientas más comúnmente utilizadas en el diagnostico de la esquistosomosis (Kato-Katz y ELISA), así como con la PCR en heces. Esta comparación se hizo en un modelo experimental murino de Schistosoma mansoni, el cual permite el seguimiento el parásito desde la fase aguda hasta la crónica de la infección. Nuestros resultados sugieren que esta nueva PCR podría ser útil para la detección de la esquistosomosis aguda en muestras clínicas fáciles de obtener y manipular, como la orina. También extendimos estos estudios, aplicando la PCR a muestras tanto de inmigrantes (n=109) como viajeros (n=35) procedentes de áreas endémicas, comparando su utilidad con la de métodos diagnósticos parasitológicos y serológicos (AWA Sb ELISA). Nuestros resultados muestran que esta PCR podría ser útil para (i) descartar falsos positivos en ELISA y (ii) obtener una mayor sensibilidad que con los métodos serológicos en el diagnóstico tanto de pacientes con esquistosomosis crónica como aguda.

Autor: ESTEBAN VÁZQUEZ VANESA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA (FUNDACIÓN JIMÉNEZ DÍAZ) UAM.

Resumen: La Angiotensina II (AngII) es el principal péptido del sistema renina angiotensina (SRA). Mediante la activación del receptor AT1 contribuye ala patogenia de enfermedades cardiovasculares y renales. Algunos datos sugieren que el receptor AT2 participa en la respuesta inflamatoria renal. Además, de la AngII, existen otros péptidos del SRA biológicamente activos, como Ang1-7 y AngIV, que actúan mediante su unión a receptores específicos (Mas e IRAP/AT4). El primer objetivo de esta tesis fue evaluar el tipo de receptor de AngII implicado en la respuesta inflamatoria renal. Para ello hemos investigado la ruta NF-B y los genes asociados, utilizando modelos experimentales de daño renal, estrategias terapéuticas y ratones modificados genéticamente. Nuestros resultados demuestran que para inhibir la respuesta inflamatoria renal es necesario el bloqueo de ambos receptores AT1 y AT2. En distintos modelos experimentales y en pacientes con nefropatía diabética, la expresión del receptor AT2 aumenta durante el daño renal, demostrando el importante papel de este receptor en la patología del riñón. Nuestro siguiente objetivo ha sido determinan el papel del eje Ang(1-7)/Mas/ECA2 en el daño renal. En situaciones patológicas existe un aumento de la ECA2 renal. Utilizando ratones deficientes en el gen de receptor Mas (Mas-/-) hemos observado que se previene el daño renal causado por obstrucción unilateral de uréter. La Ang(1-7), vía receptor Mas, causa la presencia de células inflamatorias en el riñón, por un mecanismo mediado por la activación de NF-B e inducción de genes proinflamatorios (in vivo e in vitro). Finalmente evaluamos si AngIV presenta propiedades proinflamatorias. En células en cultivo (renales y vasculares), AngIV vía receptor AT4/IRAP activa la ruta NF-B aumenta factores proinflamatorios. En conjunto, estos resultados demuestran que los péptidos de Ang (AngII, Ang1-7 y AngIV), actuando cada uno mediante su unión a receptores específicos (AT1, AT2, Mas e IRAP/AT4) presentan propiedades proinflamatorias y participan en la patogenia de enfermedades renales y cardiovasculares. El bloqueo selectivo de cada uno de estos receptores ofrece nuevas estrategias terapéuticas con importantes implicaciones en estas patologías.

Autor: DURÁN FRAGUAS MAXIMINA CRISTINA.
Año: 2006.
Universidad: LEÓN.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES..
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La hepatocarcinogénesis inducida en la rata se ha puesto de manifiesto por la existencia de alteraciones histopatológicas características del hepatocarcinoma y el incremento de la expresión de la glutatión S-transferasa placentaria en el tejido hepático. El tratamiento con TNP-470 previene el daño en el tejido hepático y disminuye la expresión de la glutatión S-transferasa placentaria. Todo ello indica la capacidad del fármaco para inhibir el crecimiento tumoral en nuestro modelo de hepatocarcinoma. El hepatocarcinoma produce en la rata un incremento del peso hepático y de la relación hepatosomática y menor ganancia de peso corporal. El tratamiento con TNP-470 disminuye el peso hepático y la relación hepatosomática en el grupo de animales con hepatocarcinoma y produce una pérdida de peso en todos los animales tratados. Indicando que a pesar de su efecto beneficioso el tratamiento con TNP-470 muestra una ligera toxicidad. El hepatocarcinoma incrementa la concentración plasmática del factor de crecimiento angiogénico VEGF y la expresión hepática del factor de crecimiento angiogénico HGF . La administración de TNP-470 al grupo de animales con hepatocarcinoma previene estos incrementos, confirmando en este modelo un efecto antiangiogénico. El hepatocarcinoma implica cambios en las defensas antioxidantes con reducción de la actividad hepática de las enzimas catalasa, glutatión peroxidasa tanto citosólica como mitocondrial y de la superóxido dismutasa citosólica (SOD-Cu/Zn); así como incremento en la actividad hepática de la enzima superóxido dismutasa mitocondrial (SOD-Mn). Estos cambios se acompañan de un acentuado incremento en la expresión hepática de la SOD-Mn y sin cambios en la expresión hepática de las otras enzimas. El tratamiento con TNP-470 mantiene la actividad de las enzimas y previene el incremento de la expresión de la SOD-Mn, lo que indica un claro efecto antioxidante del fármaco. El hepatocarcinoma se asocia con incremento de la expresión hepática de las ciclinas D y E y sus quinasas asociadas CDK4 y CDK2. La administración del antiangiogénico TNP-470 disminuye la expresión tanto de las ciclinas como de las quinasas, lo que muestra una reducción de la progresión del ciclo celular. El hepatocarcinoma induce un descenso en la expresión nuclear hepática de la proteína p53, así como en la expresión hepática de la proteína p21. La administración de TNP-470 previene el descenso indicando que la inhibición del ciclo celular por el antiangiogénico es mediada, al menos en parte, por activación de p21WAF1/CIP1 debido a un mecanismo dependiente de p53.

Autor: DE SOUSA RESENDES ANA ROSA.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAT DE VETERINARIA.
Centro de realización: U.D. HISTOLOGIA I ANATOMIA PATOLOGICA.