TOXICOLOGIA

Autor: ISEA FERNÁNDEZ GERARDO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La fluoroquinolona de segunda generación pefloxacina, es un derivado del ácido piperazino, carboxílico, desarrollado incialmente en medicina humana para uso oral y parenteral y con potencial uso en medicina veterinaria Presenta buena actividad frente a bacterias Gram-negativas, incluyendo la mayoría de las especies de enterobacterias y los géneros Haemophilus, Neisseria y Legionella, y también considerablemente más activa que otras fluoroquinolonas frente a bacterias Gram-positivas como Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis. En el hombre, la pefloxacina presenta buena absorción con alta biodisponibilidad y semivida plasmática de eliminación prolongada; baja unión a proteínas plasmáticas; elevado volumen de distribución con excelente distribución tisular y penetración en fluidos corporales. Este antimicrobiano es ampliamente metabolizado, siendo sus principales metabolitos la N-demetil-pefloxacina o norfloxacina y la N-oxido-pefloxacina. La información disponible sobre la farmacocinética de la pefloxacina en especies animales es escasa, y no está descrito en la literatura el comportamiento farmacocinético de la perfloxacina en pollos de engorde, por ello el objetivo de éste trabajo abarca: 1,- El estudio del comportamiento farmacocinético de la pefloxacina tras administración oral e intravenosa de 10 mg pefloxacina/kg p.v. 2,- El estudio del comportamiento farmacocinético del metabolito N-demetil-pefloxacina (norfloxacina) tras administración oral e intravenosa de 10 mg pefloxacina/kg p.v. DISEÑO EXPERIMENTAL Se utilizan 16 pollos de engorde Ross de 2,5 kg p.v., clínicamente sanos, divididos en dos grupos. Tras tratamiento, se tomaron muestras sanguíneas a los 10,20 y 30 minutos, y a las 1,2,4,6,8,12 y 24 horas. En cada animal se determinó la concentración del compuesto pefloxacina y su metabolito norfloxacina, siguiendo, con pequeñas modificaciones, la metodología analítica de cromatografía líquida con detección por fluorimetría previamente descrita por Montay y Tassel (1985), método analítico validado en el laboratorio con los criterios de linealidad, resproductibilidad, repetibilidad, limites de detección y cuantificación. RESULTADOS Y CONCLUSIONES Las concentraciones plasmáticas de pefloxacina encontradas experimentalmente en pollos de engorde tras administración intravenosa y oral de 10 mg/kg p.v., se ajustaron adecuadamente a un modelo abierto bicompartimental. Tras administración intravenosa la pefloxacina se elimina lentamente del plasma (t1/2beta = 8,44 h; MRT = 7,94h; CL 0,19L/h/kg), y posee una amplia distribución [K12/K21 = 1,58 Vd(área) = 2,36 L/kg; Vd(ss) = 1,54 L/kg]. El metabolito N-demetil-pefloxacina se elimina también lentamente del plasma (t1/2beta = 8,02h; MRT = 7,54h), y posee una amplia distribución (K12/K21 = 2,84). Tras administración oral, la pefloxacina es rápidamente y ampliamente absorbida (t1/2alfa = 0,87h; F=70%; MAT = 5,63h), se elimina lentamente del plasma (t1/2beta = 13,18h; CL = 0,19 L/h/kg; MRT = 13,57 h), y posee amplia distribución tisular [K12/K21 = 1,51; Vd(área) = 3,55 L/kg]. La fluoroquinolona pefloxacina se biotransforma en el organismo, detectándose el metabolito N-demetil-pefloxacina, que tras administración oral presetó un 5% de las concentraciones plasmáticas del compuesto inalterado. En pollos de engorde, la dosis oral de 10mg pefloxacina/kg p.v., proporciona altas concentraciones plasmáticas terapéuticas frente a los principales microorganismos patógenos que causan infecciones comunes en aves. La Cmax plasmática alcanzada fue 4,02 ug/ml, en un Tmax=2,01h, concentraciones plasmáticas superiores a 0,81 ug/ml y 0,36 ug/ml persitieron a las 12h y 24h post-tratamiento. La dosis oral de 10 mg pjefloxacina/kg p.v., proporciona claramente valores de los índices PK/PD, Cmax/ CMI mayor 10 y AUC24/CMI mayor 125, valores calculados tomando un valor de CMI 90 8 de 0,3 u 2a6 g/ml, valor que incluye los patógenos bacterianos comunes en aves. Se sugiere que un régimen de dosificación oral de 10 mg pefloxacina/kg p.v., cada 24 horas durante 3-4 días, podría ser de valor terapéutico frente a la mayoría de las infecciones comunes en pollos de engorde.

Autor: OROPESA JIMÉNEZ ANA LOURDES.
Año: 2003.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FAC. VETERINARIA.

Resumen: Ante las repercusiones que tuvo y sigue teniendo el hallazgo de residuos del herbicida triazínico simazina en aguas naturales y potables de diversas localidades de la provincia de Badajoz (Extremadura), se ha realizado un estudio sobre el impacto que dicho herbicida ha originado en la piscifauna autóctona, eligiendo como especie bioindicadora la carpa común (Cyprinus carpio). Para tal fin se ha determinado una batería de biomarcadores de biotransformación de tóxicos (EROD), de regulación de la actividad del sistema nervioso (AChE), de metabolismo energético (ATP, glucógeno, glucosa, lactato, proteínas y LDH) tanto a nivel tisular como plasmático o sanguíneo, parámetros hematológicos (hermatocrito, hemoglobina, CHCM) así como un estudio anatomopatológico complementario. Todo ello llevado a cabo por medio de un ensayo de campo (toma de muestras de peces de dos embalses contaminados y uno control) y una experiencia laboratorio de 90 días de duración en la que las carpas fueron expuestas a una concentración de simazina de 45 ug/L (10 veces superior a la detectada en el medio acuático natural). Contrastando los hallazgos en carpas que habitaban en los pantanos contaminados con los resultados obtenidos en la experiencia de laboratorio, podemos concluir que los niveles de simazina presentes en las aguas naturales en el episodio de contaminación ocurrido a finales de 1997 no ha originado alteraciones fisiológicas ni bioquímicas importantes en las carpas expuestas. Los cambios anatomopatológicos observados en carpas expuestas han sido considerados como inespecíficos y poco relevantes en cuanto a su gravedad, no afectando seriamente la funcionalidad del hepatopáncreas, riñón ni branquias, ya que tienden a remitir al final del periodo de exposición.

Autor: QUINTELA JORGE OSCAR.
Año: 2004.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las benzodiacepinas constituyen un numeroso grupo de psicofármacos, ampliamente utilizados por sus versátiles aplicaciones clínicas (tratamiento del insomnio y ansiedad, anticonvulsivantes, relajantes musculares, antidepresivos, ataques de pánico, etc) y por su amplio margen de seguridad, que ha detenminado que hayan sustituido a los barbitúricos en muchas de sus aplicaciones clásicas. La importancia toxicológica de las benzodiacepinas deriva de varios factores:1).-Por una parte, la amplia prescripción de las mismas unida al perfil psicológico de los pacientes que habitualmente las consumen determina que sean las sustancias más comúnmente implicadas en intoxicaciones clínicas en nuestro medio, después del alcohol etílico. Aunque estas intoxicaciones no suelen revestir gravedad, en aquellos casos en que se asocian a otras drogas depresoras del SNC, como el alcohol, la situación clínica puede llegar a ser muy comprometida. 2).-En segundo lugar las benzodiacepinas afectan en cierto grado a ciertas habilidades motoras y determinan que aquellos sujetos que manejan vehículos a motor tengan un riesgo añadido de accidentes debido a esta afectación; esto ha determinado que dentro de las sustancias que en este momento se están investigado por su implicación en el tráfico rodado se encuentren además del alcohol y las drogas estos fármacos de prescripción médica. En este momento existe un proyecto a nivel europeo (ROSITA) que evalúa distintos dispositivos para la detección de drogas y benzodiacepinas en saliva de conductores. 3).- Finalmente, el uso de las benzodiacepinas desde el punto de vista toxicológico está tomando nuevas dimensiones con la aplicación de las mismas a lo que podríamos denominar fines "criminales", en el sentido de que la amnesia anterógrada que causan está siendo aprovechada por ciertos individuos para cometer agresiones sexuales sobre sus víctimas de una forma impune, fenómeno que también se ha denominado "sumisión química". Debido, pues, a la evidente importancia toxicológica de estas sustancias y a la necesidad de efectuar la determinación de las mismas en medios biológicos como la saliva, o en circunstancias en que las concentraciones plasmáticas esperadas pueden ser muy bajas (el caso de la sumisión química) es necesario disponer de un método analítico suficientemente sensible, así como fiable para la determinación de las mismas. El trabajo experimental se ha orientado, precisamente a lograr estos objetivos y se puede resumir del siguiente modo: 1.- Se ha puesto a punto un método analítico para la determinación de 9 benzodiacepinas en plasma y fluido oral: Las benzodiacepinas analizadas han sido: Midazolam, Tetrazepam, Bromazepam, Alprazolam, Triazolam, Lorazepam, Flunitrazepam, Diazepam, y Lormetazepam. Las muestras biológicas (0.5 mL) han sido sometidas a una extracción líquido líquido con Eter Dietilico, previamente a su análisis. La instrumentación utilizada para el análisis estaba compuesta por: Cromatógrafo de líquidos Alliance THT, Waters 2795 y Espectrómetro de Masas ZMD 2000 (Waters-Micromass), utilizando una interfase de ionizaci6n a presión atmosférica mediante electrospray. Los parámetros de validación del método (selectividad, exactitud, precisión, recuperación y curva de calibración) han estado dentro de los criterios establecidos por la FDA para todas las benzodiacepinas analizadas. Los límites de detección obtenidos han sido de 0.5 ng/mL para plasma y 0,1 ng/mL para fluido oral, lo que corrobora la sensibilidad de la técnica. 2.- El método validado ha sido aplicado a casos reales (73) de plasma procedentes de pacientes con intoxicación aguda por benzodiacepinas, o de casos forenses en los que estos fármacos estaban presentes. Cabe destacar de este estudio que la benzodiacepina más frecuentemente encontrada en las muestras analizadas ha sido el alprazolam, observándose en un al 8 to porce 64a ntaje de casos la asociación de dos o incluso tres benzodicacepinas en la misma muestra. El método también fue aplicado a muestras procedentes de un estudio cinético realizado en pacientes sometidos a tratamiento crónico con benzodiacepinas, pacientes sometidos a tratamiento con midazolam a dosis única (cirugía) o en perfusión continua y voluntarios sanos a los que se les administraba una dosis única de una benzodiacepina. El objetivo de este ensayo era efectuar el estudio de las correlaciones entre las concentraciones plasmáticas y fluido oral, si bien el limitado número de casos, así como la ausencia de un protocolo rigido de toma de muestras, han imposibilitado la obtención de datos concluyentes. 3.- Finalmente, se ha aplicado a cromatografía de líquidos acoplada a la espectrometría de masas en tandem para el diagnóstico de la sumisión quimica por benzodiacepinas. Este trabajo ha sido realizado en Francia, concretamente en el Service de Pharmacologie du Centre Hospitaleur Universitaire de Limoges, bajo la dirección del profesor Marquet. En este caso el método analítico se ha aplicado a muestras de orina, alcanzando límites de detección de los 20 pg/mL, y a muestras de cabello.

Autor: BARTOLOMÉ CAMACHO M. CARMEN.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Se ha valorado el riesgo toxicológico ambiental que supone la presencia de diferentes biocidas, utilizados en la limpieza desinfeción de torres de refrigeración, en vertidos procedentes de canalizaciones de saneamiento sobre ambientes de estuario. Para ello, se ha utilizado como organismo biosensor a la Artemia franciscana, crustáceo de ambientes acuáticos de alta salinidad, que consitutye un elemento esencial en la cadena trófica de los ecosistemas de estuario. El presente trabajo de investigación ha sido planteado atendiendo a la consecución de diferentes objetivos, como son la optimización del modelo de análisis estadístico a utilizar en el tratameinto de los resultados obtenidos, la valoración de la toxicidad aguda de los desinfectantes seleccionados sobre larvas de Artemia de 24, 48 Y72 horas de vida, el estudio de la inhibición de la capacidad fototáctica que pudieran provocar estos compuestos sobre larvas de Artemia de 24 horas de vidad, y finalmente la valoración de la posible bioacumulación de estos compuestos o aquellos dervidados de su transformación en el medio acuático en los tejidos de estos organismos. Los compuestos seleccionados fueron el cloruro de tetrakis (hidroximetil) fosfonio, ácido tricloroisocianúrico, cloruro de benzalconio y bromuro sódico. Respecto al análisis comparativo entre los métodos estadísticos Probit y Crecimiento Exponencial, los resultados evidenciaron la conveniencia de utilización de éste último en los ensayos de toxicidad, ya que aunque los resultados no presentaron diferencias estadísticamente significativas, el mejor ajuste de los datos a la distribución de respuesta obtenida mediante el método de Crecimiento Exponencial hace aconsejable su utilización. Los resultados obtenidos en los estudios de toxicidad aguda demostraron que tanto el cloruro de tetrakis (hidroximetil) fosofonio como el ácido tricloroisocianúrico y el cloruro de benzalconio se comportan como extremadamente tóxicos sobre larvas de Artemia de 24, 48 Y72 horas de edad, cuando son evaluados mediante ensayos de toxicidad aguda. El bromuro sódico ha resultado ser un compuesto atóxico, cuando se practicaron los ensayos de toxicidad aguda frente a larvas de Artemia de 24 horas de edad. Sin embargo, a estadios larvarios de Artemia de 48 y 72 horas de vida, estos mismos ensayos de toxicidad revelaron que el bromuro sódico se comporta como elemento muy tóxico. El estudio comparativo, acerca de los efectos tóxicos de tipo agudo producidos sobre los distintos estadios larvarios, frente a los cuatro compuestos biocidas ensayados, revela que existe un incremento de sensibilidad de las larvas de Artemia conforme aumenta su tiempo de vida, siendo más sensibles las larvas de 72 horas de edad que las de 48 horas, y éstas a su vez más sensibles que las de 24 horas de vida. Sin embargo, no aparecen diferencias estadística mente significativas entre larvas de 24 y 48 horas de edad cuando son expuestas a cloruro de tetrakis (hidroximetil) fosofonio. Respecto alos ensayos de subletalidad, los cuatro compuestos biocidas ensayados tienen la facultad de inhibir la capacidad fototáctica de las larvas de Artemia de 24 horas de edad, cuando éstas son expuestas a concentraciones subletales de cada uno de los compuestos ensayados. Dicho efecto ha sido obtenido a concentraciones entre 1/30 y 1/60 de la CLso, dependiendo del compuesto biocida ensayado. Finalmente, los estudios de bioconcentración revelaron que los valores de acumulación sobre larvas de Artemia, bien se 8 a de com 38e puesto parental o de los principales metabolitos, tanto de cloruro de tetrakis (hidroximetil) fofonio como de ácido tricloroisocianúrico o bromuro sódico, en ninguno de los tres compuestos supone un riesgo ambiental en cuanto al fenómeno de bioacumulación. Sin embargo, es necesario tener en cuenta el valor de FBC = 93.75 obtenido para exposiciones frente a cloruro de tetrakis (hidroximetil) fosfonio, ya que se encuentramuypróximoal valor límite de 100 considerado como mínimo potencialmente peligroso.

Autor: PITA PITA RENÉ.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: DPTO. DE TOXICOLOGÍA, FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El fipronil es un plaguicida de descubrimiento y comercialización relativamente reciente que actúa como un potente bloqueante de los receptores GABAérgicos asociados a canales de iones cloruro, con más selectividad sobre los receptores de insectos que sobre los receptores de mamíferos. Sin embargo, la posible existencia de otros mecanismos de acción neurotóxicos del fipronil en mamíferos no ha sido estudiada. Los signos de intoxicación por fipronil en mamíferos incluyen anorexia, letargo y convulsiones clónico-tónicas. Es difícil explicar todo el espectro de la actividad neurotóxica del fipronil simplemente en términos de un mecanismo GABAérgico. Puesto que muchas observaciones evidencian que los sistemas catecolaminérgico y serotoninérgico están implicados en los procesos convulsivos, el presente trabajo de investigación tiene como objetivo el estudio de las posibles alteraciones en estos sistemas de neurotransmisores monoaminérgicos en regiones del SNC de ratas Wistar expuestas a dosis múltiples de fipronil (5; 10 y 15 mg/kg p.c./día, durante 5 días). El fipronil alteró en el SNC los niveles de serotonina (5-HT) y de su metabolito el ácido 5-hidroxi-3-indolacético (5-HIAA), así como los niveles de dopamina (DA) y de sus metabolitos el ácido 3,4-dihidroxifenilacético (DOPAC) y el ácido homovanílico (HVA).

Autor: ANTÓN LEZCANO ROSARIO M..
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA , UCM..

Resumen: La fluoroquinolona Fleroxacina es un medicamento de amplio espectro de actividad antimicrobiana frente a especies Gram negativas, Gram positivas y microorganismos anaerobios. Las fluoroquinolonas en general se consideran antimicrobianos bactericidas concentración dependientes. La fleroxacina es el ácido 6,8 difluoro-l(2-fluoroetil)-1,4 dihidro-quinoleincarboxílico. La acción antibacteriana de la fl,eroxacina, es el resultado de cuatro etapas consecutivas a nivel bacteriano: a) Paso de la molécula a través de la pared celular bacteriana hasta alcanzar el citoplasma; b) Inhibición de la enzima ADN girasa; c) Inhibición de la síntesis de ADN y d) Inducción de respuesta SOS a nivel de la célula bacteriana. La fleroxacina podría ser un agente eficaz para el tratamiento de infecciones tipo colibacilosis y salmonelosis de las aves. La fleroxacina tras administración oral sufre un amplio metabolismo, los metabolitos N-demetil fleroxacina y N-óxido fleroxacina aparecen rápidamente en plasma. El objetivo del trabajo ha sido doble: 1) el estudio farmacocinético de fleroxacina tras administración de dosis única intravenosa y oral de 4mglkg p.v. en pollos de engorde y 2°) el estudio de distribución y deplección tisular de fleroxacina y sus principales metabolitos tras tratamiento oral de 4mglkg p.v. durante 4 días en pollos de engorde. Diseño experimental: Se utilizaron 34 pollos de engorde Ross de 2- 2,5 Kg de peso corporal, divididos en 3 grupos para realizar: A. Estudio farmacocinético tras dosis única intravenosa de 4mglkg p.v. de fleroxacina B. Estudio farmacocinético tras dosis única oral de 4 mg/kg. p.v. de fleroxacina. C. Estudio de depleción tisular tras administración oral de 4mglkgldía de fleroxacina durante 4 días Tras el tratamiento, a diferentes periodos de tiempo, se tomaron muestras sanguíneas y de tejidos diana: higado, riñón, músculo y piel + grasa, en cada animal y se determino la concentración de fleroxacina y sus metabolitos en las muestras recogidas siguiendo una metodología analítica de cromatografia liquida con detección fluorimétrica descrita previamente por Heizmann et al., (1990). Resultados y conclusioues: Los resultados demuestran que las curvas de los niveles plasmáticos y tisulares frente al tiempo se ajustan a un modelo abierto bicompartimental. Los parámetros plasmáticos toxicocinéticos que describen las fases de absorción, distribución y eliminación de fleroxacina demuestran que tras administración oral se absorbe amplia y rápidamente (tI/2a=0,32 h), se distribuye y se elimina más lentamente (tIl2=7,45htras administración oral y 5,63h tras administración intravenosa). El aclaramiento plasmático corporal total fue (CL=0,28 L/h/kg). La fleroxacina se absorbe amplia y rápidamente tras administración oral, Cmax=1,33 Ilglml en un Tmax= 0,9Ih. La biodisponibilidad oral fue de un 45%. El estudio de distribución tisular demuestra que la fleroxacina se distribuye ampliamente en el organismo encontrándose concentraciones eficaces en un rango entre 66,94 y 281,28 Ilg/kg en los tejidos (en orden creciente piel+grasa, músculo, higado y riñón tras un día de retirada. Estas concentraciones tisulares declinaron lentamente tras 3 y 6 días de espera o de retirada. Al igual que el compuesto inalterado fleroxacina, los metabolitos N-demetil fleroxacina y N-óxido fleroxacina declinaron más rápidamente tras la retirada del tratamiento. Por lo que se debería considerar a los metabolitos junto con el compuesto inalterado como residuo marcador.

Autor: RÍOS INSUA ALBA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El florfenicol es un compuesto antimicrobiano sintético perteneciente a la familia de los fenicoles. Es un derivado fluorado del tianfenicol, con un perfil farmacológico similar al de los otros dos compuestos de la misma familia cloranfenicol y tianfenicol. Sus diferencias estructurales con estos compuestos análogos le confieren dos características fundamentales. Por un lado, no produce discrasias sanguíneas graves y por otro no es susceptible frente a la cloranfenicol acetil transferasa, así, mejora su eficacia y la mantiene frente a todos aquellos microorganismos resistentes al cloranfenicol (Enterobacterias, Haemophillus spp., Pasteurella spp.). Su mecanismo de acción se basa en la inhibición de la biosíntesis de proteínas del microorganismo. El florfenicol es un antibiótico sintético de amplio espectro, con un comportamiento bacteriostático frente a la mayoría de bacterias Gram-positivas y Gramnegativas (aerobias y anaerobias) aisladas en animales domésticos. Con el fin de ocupar el vacío creado por la retirada del cloranfenicol y por su espectro de actividad, el florfenicol se enfocó desde su desarrollo al ámbito veterinario. La primera especie animal para la que se registró el florfenicol fue la bovina. En procesos respiratorios presenta buena absorción con alta biodisponibilidad y semivida plasmática de eliminación prolongada; elevado volumen de distribución con excelente distribución tisular y penetración en fluidos corporales. Este antimicrobiano es ampliamente metabolizado, siendo su principal metabolito la florfenicol amina. Existe información sobre la farmacocinética del florfenicol en otras especies animales: caprina, ovina, equina, peces y aviar. Respecto a pollos de engorde o broiler la información existente es limitada, y no está descrito en la literatura la depleción tisular de residuos de florfenicol. Por ello el objetivo de éste trabajo abarca: 1) El estudio del comportamiento farmacocinético del florfenicol tras administración oral e intravenosa de una dosis única de 20 mg florfenicollkg p.v. 2) El estudio de distribución y depleción tisular del florfenicol y su principal metabolito florfenicol amina tras administración oral de 20 mg florfenicol/kg p.v. durante tres días. Diseño experimental: Se utilizaron 34 pollos de engorde Ross de 1,8-2,0 kg p.v. Clínicamente sanos, divididos en tres grupos. Tras tratamiento, se tomaron muestras sanguíneas a los 10, 20 Y 30 minutos, ya las 1,2,4,6,8, 12Y24 horas. En cada animal se determinó la concentración del compuesto florfenicol y su metabolito florfenicol amina, siguiendo la metodología analítica de cromatografia líquida de alta resolución con detección UV previamente descrito por ADAMS et al. (1987), y con las condiciones cromatográficas de acuerdo con VARMA et al. (1986), método analítico validado en el laboratorio con los criterios de linealidad, reproductibilidad, repetibilidad, limites de detección y cuantificación. Resultados y conclusiones: Las concentraciones plasmáticas-tiempo de florfenicol encontradas experimentalmenteen pollos de engorde tras administración intravenosa y oral de 20 mg/kg p.v., se ajustaron adecuadamente a un modelo abierto bicompartimental. Tras administración intravenosa el florfenicol se elimina lentamente del plasma (t1/2beta= 5,36 h; MRT = 5,29 h; CL 0,46 L/h/kg), Y posee una amplia distribución [K12/K21= 8,86 Vd(área)= 3,39Llkg;Vd(ss)= 2,34Llkg].Tras administración oral el florfenicol es rápida y ampliamente absorbido (t1/2a= 016 h; F = 78 %), se elimina lentamente del plasma (tI/Z~= 8,17 h; CL = 0,42 Llhlkg; MRT = 8,26 h), Yposee amplia distribución tisular [K12/K211= 2,49; Vd(área)= 4,99 Llkg]. El florfenicolse biotransformaen pollos siendo el principal metabolito florfenicol amina el cual se elimina también lentamente del plasma, (t1/2 beta= 9,04 h; MRT = 9,15 h), Yposee una amplia distribución (K12/K21= 2,26). En el tercer grupo con 18 pollos se estudió la distribución y la depleción tisular del florfenicol y su metabo 8 lito flo 7f6 rfenicol amina, tras administración oral de 20 mg florfenicol/kg p.V. Durante tres días. Los intervalos de tiempo estudiados tras la administración de la última dosis fueron 1, 5 Y7 días. Los tejidos analizados fueron músculo, piel+grasa, hígado y riñón. Para el florfenicol, el día 1 tras la última dosis todos las concentraciones de los tejidos dieron niveles superiores a los límites máximos de residuos (LMR) fijados para el florfenicol en aves. A los 5 días tras el último tratamiento, estas concentraciones declinaron significativamente, y estuvieron por debajo de los LMRs fijados. Para el metabolito florfenicol amina, el día 1 se detectaron niveles de todos los tejidos. El qja 5 tras la última dosis ya no se detectaron niveles en músculo. A los 7 días tras el último tratamiento estas concentraciones declinaron significativamente, y no se detectaron en músculo ni en piel+grasa. El tiempo de espera, tras aplicar el análisis estadístico de regresión lineal, para florfenicol y su metabolito florfenicol amina (aconsejado por la Agencia Europea del Medicamento) es de 3,02 días para hígado, 5,6 días para riñón, 7,56 días para músculo y 8,36 piel+grasa. Se sugiere que un régimen de dosificación oral de 20 mg florfenicol/kg p.v. cada 24 horas durante 3 días, podría ser de valor terapéutico frente a la mayoría de las infecciones comunes en pollos de engorde. Y que un periodo de retirada, como parámetro de seguridad alimentaria, de 9 días aseguraría que las concentraciones de residuos (florfenicol + florfenicol amina) en todos los tejidos fueran inferiores a los LMRs establecidos ara esta especie en la Unión Europea.

Autor: MOLINA LOPEZ ANA M..
Año: 2004.
Universidad: CÓRDOBA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Ante la preocupación por los datos sobre la creciente contaminación medioambiental debido a la industrialización de la sociedad actual, y ante la alarma sanitaria y social por los riesgos que conlleva la exposición al cadmio (contaminantes medioambientalesy alimentarios, puestos de trabajo, tabaco, etc.), decidimos realizar este estudio, para determinar la posible repercusión a nivel testicular del CI2Cd administradoa bajas dosis durante un largo periodode tiempo. Para ello se utilizaron 48 ratones Swiss OF-1 macho de doce semanas de edad, a los que se les administró durante 12 meses 15 mg/l de CI2Cd en agua de bebida. Los sacrificios se realizaron tras 1, 3, 6 Y 12 meses de exposi.ción; la capacidad de recuperación del testículo se consideró en dos grupos que tras ser expuestos al cadmio durante 3 y 6 meses de"forma continua, les fue retirado durante otros 3 y 6 meses, respectivamente. Tras el sacrificio mediante dislocación cervical, los testículos fueron pesados y medidos, y posteriormentese tomaronmuestras para el análisis toxicológico,e histopatológico(estructural y ultraestructural). Los resultados mostraron que la concentración de cadmio testicular aumentó progresivamente de forma lineal al tiempo de exposición. De la misma forma, los efectos del metal sobre el testículo mostraron un fuerte carácter dosis-dependiente de tal forma que fueron cada vez mayores a medida que la exposición se prolongó. En los animales expuestos al cadmio se apreció: atrofia testicular, lesiones vasculares que produjeron cambios de coloración externa, disminución de la fracción tisular ocupada por el epitelio germinal y, un consecuente aumento de las luces tubulares, degeneración de la arquitectura de los túbulos seminíferos con degeneración y pérdida de las células componentes del mismo, existiendo por tanto una disminución de la producción espermática. Además a nivel del intersticio se observó una fuerte hialinización de las paredes vasculares, llegando a producir edemas, trombos y hemorragias intersticiales. Los efectos en las células de Leydig fueron también muy severos: se observó hipertrofia y anaplasia con abundantes imágenes preneoplásicas que acabaron en dos casos en tumores intersticiales (tras 6 y 12 meses de exposición, respectivamente). Si bien los parámetros morfométricos y estereológicos mostraron una cierta capacidad de recuperación de los tejidos afectados tras la retirada del cadmio, las alteraciones degenerativas y de forma nuclear se mostraron bastante persistentes, lo que sugiere que el riesgo carcinogénicose mantuvoaúntras la retirada del cadmio

Autor: GARCIA PEREZ ADOLFO GINES.
Año: 2004.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE.
Centro de lectura: BIOLOGÍA APLICADA.
Centro de realización: BIOLOGÍA APLICADA.

Resumen: Las fenilvalerato esterasas de suero de gallina preinhibidas con paraoxon se reactivan completamente, al eliminar el inhibidor del medio al igual que ocurría con las de fracción soluble de nervio periférico. Dicha reactivación es espontánea y progresiva con el tiempo, descartando cualquier tipo de inhibición de tipo reversible. Tras la aplicación de diferentes modelos cinéticos que consideraban un proceso de inhibición y reactivación simultánea, se comprobó que toda la actividad fenilvalerato esterasa de suero se reactivaba como un único componente, siendo kr = 0.010 min-1 prácticamente idéntica a la obtenida en fracción soluble de nervio para uno de sus componentes. Las fenilvalerato esterasas de suero de gallina, son inhibidas de forma irreversible y permanente por rr¡jpafox, no encontrándose recuperación de la actividad tras eliminar el inhibidor del medio. Al aplicar un modelo de ajuste tridimensional a las cinéticas de inhibición con mipafox, se encontró que el 80% de la actividad fenilvalerato esterasa de suero se inhibía dentro de un único componente sensible, cuya ki = 0.005 nM-1 min-1 deduciéndose un valor de IC50 (30 min, 37°C) = 4.4 nM, tres órdenes de magnitud más bajo que para la inhibición de NTE por este mismo compuesto. Debido a la rápida reactivación espontánea de las fenilvalerato esterasas de suero tras la inhibición con paraoxon y a la sensibilidad a la inhibición permanente por mipafox, se puede concluir la existencia de una actividad del tipo NTE en suero, resistente a la inhibición permanente por paraoxon y sensible a mipafox. El fenómeno de inhibición transitoria por paraoxon de las fenilvalerato esterasas de fracción soluble de nervio periférico observado in vítro, se confirmó por la baja inhibición que dicho compuesto producía in vivo, así como por la protección parcial que la dosificación previa con paraoxon produce sobre la inhibición por DFP de estas esterasas solubles. El paraoxon no es una herramienta útil para la discriminación de esterasas diana de neurotoxicidad y/o promoción de axonopatías en nervio periférico ni de sus posibles biomarcadores en suero. Se propone y aplica un nuevo ensayo de actividad fenilvalerato esterasa en fracción soluble de nervio y suero, basado en la sensibilidad diferencial al OP neuropático modelo mipafox, definiendo las siguientes actividades y condiciones: actividad A, en ausencia de mipafox y que representa la actividad fenilvalerato esterasa total; actividad M1, resistente a 30 nM de mipafox; actividad M2, resistente a 1 !-1Mde mipafox y, actividad M3, resistente a 1 mM de mipafox. Junto a las medidas de las citadas actividades se definen, así mismo, los componentes obtenidos a partir de sus respectivas diferencias: A-M1, M1-M2, M2-M3 YA-M2. El PMSF, compuesto promotor modelo, es capaz de inhibir tanto in vitro como in vivo más del 70% de la actividad fenilvalerato esterasa resistente al compuesto inductor mipafox (M2 y M3) de fracción soluble de nervio. Por el contrario el DFP, compuesto neuropático modelo, administrado a una dosis promocionable (0.5 mg/Kg s.c.) no es en absoluto capaz de inhibir dicha actividad fenilvalerato esterasa resistente a mipafox de fracción soluble de nervio periférico. Dosis débilmente promotoras de PMSF (1 y 10 mg/Kg s.c.) sólo son capaces en ambos casos de inhibir un 40% de la actividad fenilvalerato esterasa resistente a mipafox (M2) de fracción soluble de nervio, mientras que a la dosis promotora estándar (120 mg/Kg s.c.) es capaz de inhibir en más de un 70% a esta actividad. La gran sensibilidad al compuesto neuropático modelo DFP de las actividades fenilvalerato esterasa solubles de nervio queda reflejada en los valores que presentan animales a los que se administró una dosis neuropática de 0.5 mg/Kg s.c., y se sacrificó sólo 10 min tras la dosificación, los cuales, prese 8 ntan una 87b total inhibición de la actividad fenilvalerato esterasa sensible a mípafox (A-M2) mientras que, para estos mismos animales, la actividad NTE de fracción particulada del mismo tejido no se encuentra inhibida, presentándose tan sólo un 40% de inhibición en la actividad NTE de cerebro. El sulfonil fluoruro PSF, administrado tras una dosis promocionable de DFP y antes de una dosis promotora de PMSF, no es capaz de proteger del fenómeno de promoción. Por ello, las fenilvalerato esterasas más sensibles a mipafox (A-M1 y M1-M2), totalmente inhibidas por PSF, pueden ser excluidas como diana del fenómeno de promoción de neuropatía. Se ha encontrado una correlación lineal moderada entre las actividades fenilvalerato esterasa A, M1 YM2 de la fracción soluble de nervio periférico y la actividad fenilvalerato esterasa M1 de suero con un valor del coeficiente de correlación (r2) de alrededor de 0.5 y una alta significación bilateral para la relación lineal (P MENOR 0.001). El método de ensayo propuesto en la presente Memoria ha revelado la existencia en sistema nervioso periférico de actividades carboxitesterasa solubles, hasta el momento consideradas irrelevantes por su sensibilidad al compuesto no neuropático paraoxon, extremadamente sensibles tanto a compuestos inductores como promotores de neuropatía. El posible papel toxicológico de dichas esterasas en los efectos adversos derivados de exposiciones prolongadas a dosis aparentemente subneuropáticas de compuestos organofosfarados , así como la identificación precisa de la diana molecular de la promoción requerirá adicionales estudios in vivo con diferentes niveles de dosis tanto de inductores como de promotores y abordajes moleculares sobre las fracciones esterásicas toxicológicamente relevantes.

Autor: PIZARRO LOZANO MARIA NIEVES.
Año: 2004.
Universidad: POMPEU FABRA.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: La MDMA es cabeza de serie de los entactógenos. Su consumo está asociado a episodios de toxicidad aguda y a efectos tóxicos nuerodegenerativos sobre el sistema nervioso central a medio/largo plazo. Se postula que su bioinactivación metabólica podría tener un papel muy importante en el desarrollo de la neurotoxicidad. La molécula de MDAM tiene un centro estereogénico (conservado en sus metabólitos), que hace que exista como una pareja de enantiómeros (R,S). Se consume como racemato, pero los enantiómeros tienen efectos farmacológicos y perfiles farmacocinéticos diferenciados. Respecto a la farmacocinética, está influenciada por la depuración metabólica enantioselectiva (vía CYP2D6) y autoinhibible. En la presente tesis se estudia la enantioselectividad de la depuración metabólica de la MDMA en consumidores recreativos participantes de un ensayo clínico (dosis: 100 mg). El estudio incluye la determinación de los enantiómeros de la MDMA y de sus metabolitos en fluidos biológicos. Fue necesaria la síntesis de material de referencia enantioméricamente enriquecido (MDAMa y metabolitos) y el desarrollo de metodología para el análisis enantioselectivo y diastereoselectivo de los compuestos. Se estudió la enantioselectividad del metabolismo de la MDMA hasta 48h después de su administración, obteniéndose relaciones (R)-MDMA mayor 1 y en aumento, mientras que las relaciones de los metabolitos mayoritarios fueron prácticamente constantes y próximas a 1. Este hecho estaría ligado a la inhibición metabólica del CYP2D6 y a la participación de otros enzimas no enantioselectivos.

Autor: GONZÁLEZ CARRACEDO ANIOAL.
Año: 2004.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS OURENSE.
Centro de realización: AREA TOXICOLOGÍA FACULTAD DE CIENCIAS OURENSE.

Resumen: El cadmio es un perturbador neuroendocrino. Además, al igual que otros muchos xenobióticos, presenta una cronotoxicidad importante. Por otro lado, las funciones fisiológicas se rigen según patrones cricadianos y circaestacionales, por lo que el cadmio podría ejercer su toxicidad a través de modificaciones en la actividad del reloj circadiano endógeno de los sistemas monoaminérgicos cerebrales y del eje hipofisario-testicular. Asimismo, estos cambios serían distintos según la época del año y la cepa o raza del animal de experimentación, y su edad. El objetivo de este trabajo es evaluar las alteraciones que induce el cadmio en el eje hipotalámico-hipofisario-testicular y en estriado, en rata macho envejecida de la cepa Wistar, desde el punto de vista cronobiológico. Para la consecución de este objetivo se ha estudiado el ritmo circadiano de la concentración de norepinefrina, dopamina y serotonina, y el metabolismo de estas dos últimas monoaminas en hipotálamo, hipófisis y testículo. En este trabajo se han utilizado 288 ratas macho de la cepa Wistar; 114 ratas adultas jóvenes, de dos meses de vida, y 144 ratas envejecida, de 18 meses. El cadmio se ha administrado a un grupo de 72 ratas adultas y 72 ratas envejecidas, en forma de cloruro cadmio (CdCl2) disuelto en el agua de bebida, a una dosis de 25 ppm de CdCl2 durante 30 días. A otras 144 ratas (72 adultas y 72 envejecidas) se ha administrado agua potable procedente del suministro de la Facultad, y se utilización como controles del experimento. Los animales fueron sacrificados al final del tratamiento en subgrupos de doce ratas cada 4 horas a lo largo del día. Se han determinado por HPLC con detección electroquímica las monoaminas y sus metabolitos. Los niveles plasmáticos de LH y testorerona se han determinado por radioinmunoanálisis, y la acumulación del metal se ha determinado por espectrometría de absorción atómica. A la vista de los resultados obtenidos se puede concluir que el cadmio es un perturbador neuroendocrino que presenta una cronotoxicidad circadiana a nivel neuroquímico y en el eje reproductor, toxicidad diferente en rata adulta y envejecida, dependiente de la cepa animal y de la estación anual, y que no puede ser explicada por el grado de retención del metal.

Autor: LÓPEZ GUARNIDO OLGA.
Año: 2004.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Diversos estudios experimentales y epidemiológicos han encontrado resultados contradictorios en cuanto al comportamiento de diversas enzimas antioxidantes implicados en el estrés oxidativo generado por la exposición a diferentes tipos de plaguicidas. En este trabajo se han estudiado las actividades enzimáticas superóxido-dismutasa (SOD), catalasa (CAT), glutation-peroxidasa (GPx), glutation-reductasa (GR), glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (G6PDH), así como las estersas séricas paraoxonasa (PON1) utilizando 3 sustratos diferentes (paraoxón, fenilacetato y diazoxón) y colinesterasas (BChE y AChE) en 135 aplicadores de plaguicidas que desempeñan su actividad de forma regular en agricultura intensiva bajo plástico en la costa de Almería y Granada así como en 55 individuos de la misma zona pero que no estaban expuestos y que actuaron como controles. Tras ajustar los niveles enzimáticos por sexo, edad, IMC, exposición a plaguicidas, consumo de tabaco y alcohol, fenotipo sérico de colinesterasa (usual frente a inusual) y de paraoxonasa (isoformas RR y QR frente a QQ) se observó que la exposición a plaguicidas predice de forma independiente una menor actividad GR, SOD y colinesterasas. Estos resultados confirman que la exposición crónica a plaguicidas en un entorno de agricultura intensiva origina estrés oxidativo que se manifiesta mediante un descenso de las actividades GR y SOD, lo que apoya la implicación del mismo en el mecanismo de acción tóxico de los plaguicidas. Estos significa que ambas actividades podrían constituir biomarcadores de efecto en el contexto de la exposición crónica a plaguicididas. Por otro lado, de los diferentes sustratos utilizados para determinar la PON1, sólo el diazoxón (actividad diazoxonasa) ha mostrado una asociaciones significativa con la exposición a plaguicidas, de manera que los individuos expuestos presentan una menor actividad enzimática lo cual apunta a su posible utilidad como biomarcador de exposición y/o efecto.

Autor: VICENTE SANCHEZ CESAREO.
Año: 2004.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA Y FARMACOLOGIA.

Resumen: El incremento en la producción anual de cadmio (Cd) ha favorecido que la incidencia pro intoxicación crónica a este elemento haya aumentado. El estrés oxidativo es uno de los mecanismos implicados en la generación del efecto tóxico, manifestándose por una lesión renal. La quercetina (Q) es un potente antioxidante, un buen quelante de metales y se han referenciado, también, propiedades antiinflamatorias. El objetivo de nuestro trabajo fue estudiar el posible efecto protector de la Q en la nefrotoxicidad inducida por Cd. Los experimentos se realizaron con ratas Wistar, dividiéndose en cuatro grupos: a) Grupo Control. 2) Grupo Cd: al que se administró Cd (1,2 mg/kg/día, s.c.) durante 9 semanas, 3) Grupo Q: al que se administró Q (50 mg/kg/día, i.p.) durante 5 semanas, 4) Grupo Cd+Q: al que se administró Cd durante 9 semanas y Q durante 5 semanas, comenzando la administración a la cuarta semana de comenzar con Cd. Se obtuvieron muestras de orina de 24 horas, sangre, riñón e hígado antes de iniciar los tratamiento, a las tres, a las seis semanas y al final del estudio. Para valorar la toxicidad renal se analizó la función renal, marcadores enzimáticos de daño renal y alteraciones de las células tubulares renales. Concentración de TBARS, antioxidantes totales plasmáticos y enzimas antioxidantes se midieron para estudiar el estrés oxidativo. La implicación de las metalotioneínas (MTs) sobre el efecto protector de Q y su actividad antiinflamatoria se analizaron midiendo la expresión de MTs, eNOS y COX-2 por Western blot y la expresión de ARNm de MTs y eNOS por Northern blot. La administración crónica de Cd produce daño renal por un incremento en el estrés oxidativo y en la inflamación. El tratamiento con Q previene de este daño, probablemente, por sus propiedades antioxidante y antiinflamatoria y por el incremento de la expresión de MTs.

Autor: Martínez López Emma.
Año: 2005.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Veterinaria.
Centro de realización: Facultad de Veterinaria.

Autor: LINARES VIDAL VICTORIA.
Año: 2005.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: FACULTAT DE MEDICINA I CIÈNCIES DE LA SALUT.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA I CIÈNCIES DE LA SALUT.

Autor: QUESADA PAREDES MARIA ENCARNACION.
Año: 2005.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE.
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE BIOLOGA APLICADA.
Centro de realización: MIGUEL HERNANDEZ.

Resumen: La "neuropatía retardada inducida por compuestos organofosforados" (OPIDN) es un síndrome neurodegenerativo que se inicia con la inhibición y modificación específica ("aging") de la esterasa diana de neuropatía (NTE). El cerebro de gallina es una fuente muy importante de NTE y por ello es este tejido el modelo más habitual para el estudio de la enzima. Sin embargo, estudios previos realizados en nuestro laboratorio han demostrado que la médula adrenal bovina posee los niveles de NTE más altos descritos hasta la fecha. En el presente trabajo se ha realizado una caracterización de la NTE y de otras esterasas relacionadas en homogenizado y fracciones soluble y particulada de médula adrenal de varias especies animales (bovina, porcina, caprina, equina y ovina). La actividad fenilvalerato esterasa (PV esterasa) total y también la NTE fue mayor en fracción particulada (P) que en fracción soluble (S) en todas las especies. La especie que mostró mayor actividad NTE en P fue la especie bovina (4260±720 mU/g tejido) seguida de porcina, ovina, caprina y equina. El porcentaje de NTE frente a la actividad PV esterasa total fue mayor en la especie bovina (70%) seguida de la porcina (57%) Una vez elegida la especie bovina como modelo más apropiado, se procedió a la caracterización de las actividades PV esterasas en células cromafines bovinas. La actividad PV esterasa total y NTE encontrada en este sistema fue de 22±3 y 12±2 mU/106 células respectivamente, con lo cual la NTE representó un 55% de la actividad total. Las células cromafines mostraron una cinética de inhibición por paraoxon y mipafox muy similar a la que mostró el homogenizado de médula adrenal bovina. Se ha demostrado, que la actividad NTE inhibida por OPs neuropáticos como el mipafox o el HDCP se recupera total o parcialmente a las 120 horas de la inhibición durante 60 min. También se ha llevado a cabo la construcción de un adenovirus que contiene el gen de la actividad NTE humana (Ad-NTEh) con el que se ha conseguido sobreexpresar controladamente la actividad NTE en células cromafines bovinas en cultivo. Cuando las células se infectaron con 16 µl de Ad-NTEh la actividad NTE aumentó más de cuatro veces con respecto a la actividad NTE control. Mediante este sistema se pretende analizar el papel que juega la NTE en la fisiología de la célula cromafin. Los resultados presentados en este trabajo apoyan firmemente el uso del cultivo primario de células cromafines como un modelo in vitro alternativo y apropiado para estudios de neurotoxicidad inducida por organofosforados (OPs).

Autor: MIÑAMBRES HERRÁIZ REBECA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: FUNDACIÓN VALENCIANA DE INVESTIGACIONES MÉDICAS-CENTRO DE INV. PRINCIPE FELIPE.

Resumen: Las células astrogiales son una diana de los efectos del etanol durante el desarrollo del cerebro, ya que altera tanto las funciones como la supervivencia de los astrocitos. Este trabajo demuestra que el etanol altera la vía de señalización de las proteínas Rho, afectando la organización del citoesqueleto de actina y las adhesiones focales. En concreto la vía de señalización de RhoA/ROCK-I/MLCpp está implicada en la apoptosis inducida por el etanol en astrocitos.

Autor: BABOT RIERA ZOILA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El glutamato y el GABA son, respectivamente, el principal neurotransmisor excitador e inhbidiro del sistema nervioso central. Un balance incorrecto entre estos dos sistemas de neurotransmisores resulta en estados patológicos. Un exceso de glutamato, produce neurotoxicitat por un mecanismo dependiente de la entrada de Ca2+ a través del receptor NMDA de glutamato. Este proceso se conoce con el nombre de exitotoxicidad. El papel del neurotransmisor GABA en el proceso de exitotoxicidad no es claro. Si bien algunos trabajos describen que el incremento de neurotransmissión GABAérgica resulta protectora de la excitotoxicidad, otros describen el caso contrario. La exposición aguda al pesticida organoclorado dieldrín produce, en humanos y en animales de experimentación, síndrome de hiperexcitabilidad, produciendo convulsiones que pueden causar la muerte. Este efecto se explica por la acción antagonista del dieldrín en el receptor GABA-A. Este pesticida ya no se utiliza en los países desarrollados. Sin embargo, debido a su elevada persistencia y bioacumulación, a su uso en países subdesarrollados y a su capacidad por viajar largas distancias, actualmente la población general de todo el mundo continúa expuesta a este pesticida. Así, hoy en día, el dieldrín se considera un "contaminante orgánico persistente" (COP). Si bien se conocen los efectos agudos de la exposición a dieldrín, no están claros los efectos adversos sobre el sistema nervioso central que podría producir la exposición prolongada a bajas concentraciones de dieldrín. En esta tesis se desarrolla un modelo de excitotoxicidad en cultivos primarios de células granulares de cerebelo, basado en la liberación de glutamato engógeno. En este modelo se estudia la implicación del receptor GABA-A y de otros canales de cloruro en la muerte excitotóxica. Se describe que la entrada de cloruro a través del receptor GABA-A y de canales de cloruro dependientes de ácido inflúmico incrementa la exitotoxicidad. Además, se estudian los efectos de concentraciones subcitotóxicas de dieldrín sobre los sistemas GABAérgico y glutamatérgico en cultivos de células granulares de cerebelo expuestos durante períodos prolongados. Se describe que el bloqueo parcial del receptor GABAA inducido por el dieldrín, produce una respuesta compensatoria en los receptores NMDA de glutamato (disminución), de manera que cuando se exponen los cultivos al estímulo excitotóxico previamente descrito, no se produce excitotoxicidad.

Autor: GALLARDO ALBA MARIA EUGENIA.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Los organofosforados han sido, desde su descubrimiento en 1854, el grupo de pesticidas más usado, y han supuesto una alternativa al resto de biocidas. Su baja persistencia en el medio ambiente ha constituido el elemento fundamental de su enorme potencial de uso. Aunque las intoxicaciones por estos compuestos no constituyen un problema sanitario de primera magnitud si se comparan con las que se producen con otras sustancias químicas, existen importantes motivos que justifican la necesidad de disponer de una metodología clara y precisa para su detección y determinación. En esta memoria se propone un método analítico basado en la Microextracción en Fase Sólida en modalidad de inmersión directa (SPME-DI) acoplada a la Cromatografía de Gases/Espectrometría de Masas para la determinación de dimetoato, diazinón, paratión, quinalfos, azinfos metil, clorpirifos, clorfenvinfos y paraoxón en muestras de sangre y orina. Como patrón interno se utilizó etión. Para la realización de este trabajo, se evaluaron dos tipos de fibra: polidimetilsiloxano y carbowax TM/divinilbenzeno de 100 y 65 um de espesor respectivamente. Los mejores resultados se obtuvieron con esta última. Fueron optimizados los principales parámetros que influyen en la SPME: volumen de muestra, precipitación de proteínas, tiempos de extracción y desorción, temperatura, agitación de la muestra, modificación de pH y adición de sales. Tras la optimización, las condiciones finales de extracción fueron: en un tubo de vidrio se pipetearon 100 uL de muestra (sangre u orina) a los que se añadieron 10 uL de patrón interno de concentración 100 ug/mL y agua Milli-Q hasta completar un volumen final de 1mL. Después de agitar vigorosamente la muestra, la fibra se puso en contacto con ésta. Tras 60 minutos de extracción a 60ºC (sangre) o 90ºC (orina), la fibra fue recogida para su posterior desorción en el inyector del cromatógrafo de gases a 240ºC durante 1 minuto. La metodología descrita fue validada de acuerdo con parámetros de validación regulados por organizaciones internacionales. Estos parámetros fueron: selectividad, curva de calibración, precisión y exactitud, límites de detección y cuantificación, recuperación, dilución de las muestras y estabilidad. El método se mostró selectivo ya que no se detectaron interferencia en los tiempos de retención e iones seleccionados para cada uno de los analitos de estudio. Se obtuvo linealidad dentro de los rangos estudiados: 0,05-50,0 y 0,01-50,0 ug/mL para el quinalfos y paratión en sangre y orina respectivamente y 0,5-50,0 y 0,1-40,0 ug/mL para el dimetoato en sangre y orina respectivamente. Los valores obtenidos para la precisión y exactitud, expresados como coeficientes de variación y vías respiratorias, fueron inferiores al 15% para todas las concentraciones estudiadas en ambas matrices, de acuerdo con los criterios de validación adoptados. Los límites de detección obtenidos en orina oscilaron entre 2n/mL para el quinalfos y dizainón y 50 ng/mL para el dimetoato. En sangre, estos valores oscilaron entre 4ng/mL para el clorfenvinfos y diazinón y 250 ng/mL para el azinfos metil. Los límites de cuantificación obtenidos en orina oscilaron entre 10ng/mL para el quinalfos y paration y 100 ng/mL para el dimetoato. En sangre, estos valores oscilaron entre 50 ng/mL para el quinalfos y paratión y 500 ng/mL para el dimetoato. La recuperación para el dimetoato fue de 1,25% en orina y 0,50 en sangre para el paratión, 35,06% en orina y 6,58% en sangre, y para el quinalfos 26,26% en orina y 14,19% en sangre. Finalmente, el método fue aplicado a 99 muestras reales procedentes de autopsiasmedico-legales y hospitales. Esta metodología constituye una alternativa a los métodos de extracción convencionales, como la extracción líquido-líquido o sólido-líquido, para la determinación de pesticidas organofosforados en medios biológicos en el ámbito de la Toxicología Clínica y Forense.

Autor: ALDONZA TORRES MARTA.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En los últimos años se observó una clara expansión de la cocaína, fundamentalmente entre la población más joven. Aunque el número de muertes debidas exclusivamente al abuso de la cocaína es pequeño, su consumo produce muchas intoxicaciones agudas y crónicas, con el consiguiente aumento en las urgencias clínicas y en la demanda de apoyo terapéutico, constituyendo un grave problema sociosanitario. El diagnóstico de las sobredosis por cocaína se basa sobre todo en los test de laboratorio, que tienen que ser sensibles y específicos a la hora de garantizar una correcta determinación de la droga en diferentes fluidos biológicos. En esta memoria diseñamos un método de Cromatografía de Gases empleando un detector de ionización de lama y otro de Cromatografía Liquida de Alta Resolución con detector ultravioleta para la determinación simultánea de cocaína y sus principales metabolitos (benzoilecgonina y ecgonian metil éser) en dos fluidos biológicos no habituales en los análisis toxicológicos como son el humor vítreo y la bilis. Estos dos tipos de muestras pueden ser de mucha utilidad en aquellos casos en los que no se disponga de sangre u orina o cuando el cadáver está en malas condiciones (grandes quemados, embalsamados, etc). Tras varios ensayos se empleó un procedimiento de extracción sólido-líquido con el que conseguimos un rendimiento superior al 70% para todas las sustancias analizadas. Elaboramos las rectas de calibrado en el rango de 0,1-4ug/mL en Cromatografía de Gases y de 0,125-5ug/mL en Cromatografía de Líquidos demostrando una buena linealidad en dos tipos de muestras. Los límites de detección siempre fueron adecuados para los análisis de muestras forenses y el estudio de la precisión de la exactitud resultó también satisfactorio. Estos métodos fueron aplicados a muestras de pacientes fallecidos por intoxicación cocaína, asociada en la mayoría de los casos a la coexistencia de otras drogas, lo que podría haber influido en la gran variabilidad de los resultados obtenidos. En las muestras de humor vítreo suelen aparecer concentraciones mayores de cocaína que de sus metabolitos, aunque en las muestras de bilis suele haber mayores niveles de metabolitos. Se compararon una buena correlación entre las dos técnicas. Sin embargo, no se encontró una correlación significativa entre las concentraciones de cocaína y sus metabolitos en muestras de humor vítreo y bilis pertenecientes al mismo sujeto.