BIOTECNOLOGIA

Autor: SERRA HARTMANN XAVIER.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: El herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) es un alphaherpesvirus que está considerado el agente etiológico más importante del cuadro de enfermedades respiratorias bovinas responsables de elevadas pérdidas económicas en la industria ganadera. La vacunación contra el BoHV-1, aunque reduce la infección y los signos clínicos derivados de la misma, no evita la infección post-vacunación por BoHV-1 del animal. En consecuencia, estos animales pueden convertirse en un foco latente de infección. El control del BoHV-1 pasa por el desarrollo de programas de erradicación basados en la identificación serológica y el sacrificio de los animales infectados. Para aplicar estos programas se administran vacunas marcadoras defectivas en uno o más genes que generan una respuesta inmunitaria distinta a la que se produce tras la infección por el BoHV-1 wt. Conjuntamente, se ensaya un test serológico diferencial que detecta la presencia de anticuerpos dirigidos contra la/s glicoproteína/s ausente/s en la vacuna marcadora en los animales infectados por el BoHV-1 wt. Nuestro grupo de investigación llevó a cabo el desarrollo de una vacuna viva marcadora contra el BoHV-1 defectiva en la glicoproteían E (gE) (BoHV-1 gE). Paralelamente a la construcción del BoHV-1 gE-, se abordó la expresión recombinante de Escherichia coli de la gE del BoHV-1. La expresión de la gE era necesaria tanto para la caracterización definitiva del virus defectivo, como para el futuro desarrollo de un test que pemitiera la diferenciación serológica entre los animales vacunados con el virus BoHV-1 gE- y los animales infectados con cepas BoHV-1 era tóxica para E.coli. En la presente tesis se ha determinado que la secuencia de aminoácidos TRAPP de la gE del BoHV-1 es la responsable de la toxicidad asociada a la expresión del dominio extracelular de dicha glicoproteína en E.coli. La supresión parcial de TRAPP es condición suficiente para restablecer el crecimiento normal del cultivo y la acumulación de la proteína expresada. Se ha determinado, asimismo, que la secuencia TRAPP también es tóxica cuando se expresa integrada en proteínas nativas de E.coli. La toxicidad de TRAPP se debe a la propia naturaleza de la secuencia, y no responde a un uso de codón ajeno al de E.coli y tampoco a la activación de las princpales proteasas de la bacteria. Por otro lado, la toxicidad dela secuencia TRAPP se correlaciona con la ausencia de dicha secuencia en los polipéptidos propios que codifica E.coli. La determinación de TRAPP ha llevado a identificar muchos otros péptidos igualmente poco presentes entre las proteínas de E.coli, y a considerar este hecho de posible relevancia para la expresión heterológa de proteínas en dicha bacteria. Asimismo, mediante técnicas de recombinación homóloga, se ha obtenido una cepa de BoHV-1 defectiva para la secuencia RAPPR de la gE (BoHV-1 RAPPR-). Los resultados obtenidos indican que la secuencia TRAPP no es esencial para la función de la gE, esto es, la transmisión directa entre células del BoHV-1. La substitución dela secuencia RAPPR, por el contrario, sí conlleva un pequeño cambio supuestamente en el patrón de interacción del virus con componentes de la membrana celular o de la matriz extracelular. Finalmente, en este trabajo y experimental también se ha obtenido un panel de anticuerpos monoclonales contra la gE del BoHV-1 para utilizarlos en un test serológico diferencial de aplicación conjunta a la vacunación con el BoHV-1 gE. El test diseñado, un ELISA de bloqueo, resulta sensible y específico para la detección de anticuerpos contra 8 la gE de 333 l BoHV-1, y se revela como un intento prometedor para afrontar el desarrollo de un test definitivo.

Autor: BETANCOR DUTRENIT LORENA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE CATÁLISIS , CSIC..

Resumen: Las oxidasas tienen un alto interés biotecnológico ya que son capaces de catalizar oxidaciones muy específicas de compuestos orgánicos, bajo condiciones suaves de reacción y utilizando oxígeno molecular como agente oxidante. Sin embargo, estas enzimas son bastante inestables dado que podrían sufrir inactivación por disociación de subunidades, distorsión de su estructura tridimensional, disociación de cofactores o modificación química causada por el peróxido de hidrógeno producido como subproducto de la reacción de oxidación. El objetivo principal de esta tesis es la optimización de biotransformaciones catalizada por oxidasas mediante la preparación de derivados inmovilizados altamente estabilizados. Para alcanzar este objetivo intentamos dos estrategias complementarias: la inmovilización covalente multipuntual y multisubunidades (para evitar distorsiones de la molécula de enzima o disociación de subunidades) y la coinmovilización de oxidas as con catalasas para eliminar in situ el peróxido de hidrógeno formado. Las biotrasnformaciones estudiadas fueron: la preparación del ácido cetoadipiI7-aminocefalosporanico. A partir de Cefalosporina C utilizando una preparación de D-aminoácido oxidasa y catalasa coinmovilizadas, la preparación del ácido glucónico utilizando un derivado de glucosa oxidasa y catalasa coinmovilizadas y la preparación de fructooligosacátidos a partir de sacarosa utilizando una fructosiltransferasa (FST) inmovilizada, en la que la presencia de glucosa oxidasa se requiere para eliminar la glucosa formada como subproducto de la reacción ya que esta tienen un efeto inhibidor sobre la FST. Se prepararon una amplia gama de derivados inmovilizados de catalasas de diferentes orígenes (de hígado bovino (BLC), Aspergillus niger, Micrococcus Iysodeikticus, y Thermus thermophilus) utilizando diferentes estrategías fisicoquímicas. En todos los casos estas enzimas se estabilizaron por inmovilización (con factores de estabilización de 13, 30, 3 Y 50 veces más estables que la enzima soluble. Además, la DAAO de Trigonopsis variabilis y la glucosa oxidas a de Aspergillus niger también se inmovilizaron y estabilizaron por adsorción a matrices aminadas y posterior entrecruzamiento con glutaraldehído. La preparación inmovilizada de DAAO fue 6800 veces más estable que la enzima soluble mientras que el factor de estabilización alcanzado para la GOX (una enzima muy robusta) fue de 96 con respecto a la enzima soluble. Se preparó también un derivado de FST estabilizado y optimizado por adsorción a matrices aminadas y posterior entrecruzamiento con glutaraldehído. En todas las biotransforrflaciones estudiadas, se probó la eficiencia de del acoplamiento oxidasa/catalasa por diferentes estrategias: por desaparición de un subproducto formado por el peróxido de hidrógeno (como en el caso de la preparación del ácido cetoadipil 7-aminocefalosporanico), por desaparición del efecto inhibidor de la glucosa sobre la acción de la FST en la preparación de los Fructoologosacáridos, por la capacidad de la GOX de oxidar completamente una solución de glucosa 100 mM que en ausencia de catalasa no era posible realizar dada la inactivación por peróxido sufrida por la GOX.

Autor: CARRASCO CABEZAS BEGOÑA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA.

Resumen: Caracterización de la fase post-sináptica de la recombinación homóloga en Bacillus subtilis. La recombinación homóloga es el proceso por el que se intercambia el material genético entre moléculas de ADN cuya secuencia muestra homología. Los cortes en la doble cadena de ADN en bacterias se reparan fundamentalmente por recombinación homóloga mientras que ésta juega un papel menor en eucariotas que son reparados por unión de extremos no homólogos. En este proceso se pueden diferenciar tres fases: pre-sinapsis, donde se procesa el ADN para generar el sustrato de ADNcs sobre el que filamenta la proteína RecA; sinapsis, donde RecA produce la búsqueda de homología y el intercambio de cadenas y post-sinapsis donde se produce la migración de cadenas y la formación y resolución de las estructuras de Holliday formadas. En Bacillus subtilis, los genes implicados en recombinación distintos de recA fueron clasificados en grupos epistáticos : (recF, recL, recO, recR, recN), (addA addB), (recP, recH), (recU ruvA, ruvB, recD), (recS, recQ, recJ) y (recG) con distinta sensibilidad a los agentes que dañan el ADN y se sitúa el gen recA en el centro relacionado con todos los grupos por codificar la proteína más importante en recombinación. Los genes incluidos en los grupos epistáticos , y codifican proteínas que participan en la etapa pre-sináptica de la recombinación mientras que las codificadas por los genes de los grupos y participan en la post-sináptica. En condiciones normales de crecimiento los mutantes en los genes clasificados en los grupos epistáticos y presentan problemas en la segregación de los cromosomas con un 3-7 % de células anucleadas, gran cantidad de células con los nucleoides condensados y largos espacios de citoplasma libre de ADN. El complejo RuvAB junto con la helicasa RecG lleva a cabo la migración de la horquilla de replicación cuando se produce un daño para formar estructuras de Holliday y la proteína RecU se ha caracterizado en este trabajo como la resolvasa que corta estas estructuras. Se piensa que en ausencia de las proteínas procesadoras de los intermediarios formados durante el proceso de recombinación la resolución de las estructuras de Holliday se dirige hacia la formación moléculas recombinantes (dímeros en cromosomas circulares) o alternativamente no se produce esta resolución y quedan cromosomas agrupados. Se han aislado supresores de estas mutaciones que se localizan en los genes sms y subA. La proteína Sms tiene homología con RecA y Lon proteasas aunque no ha sido aún caracterizada. La proteína SubA no tiene homólogo en E. coli y hasta el momento se desconoce su función. En ausencia de los genes sms y subA se suprime parcialmente el fenotipo de reparación y segregación observado en mutantes de los grupos y . Las proteínas Sms y SubA podrían participar en la estabilización de los intermediarios ramificados producidos durante la recombinación. En ausencia de la proteína RecA se suprime el defecto de la segregación pero no suprime el defecto de la reparación de el ADN de los mutantes recU1 y recG. RecA lleva a cabo la invasión de cadenas con lo que en ausencia de esta proteína no se forman las estructuras de Holliday que son el sustrato de RecU y RecG y la resolución no se dirige hacia la formación de dímeros.En B. subtilis no existe el homólogo de secuencia de la proteína RuvC de E. coli y se desconoce el análogo que lleva a cabo la resolución de las estructuras de Holliday. Se ha caracterizado la proteína RecU como la reswolvasa mayoritaria de estructuras de Holliday de B. subtilis. RecU une ADN de cadena sencilla (ADNcs) y cadena doble (ADNcd) en un proceso independiente de ATP y dependiente de magnesio. Además une con mayor eficacia estructuras ramificadas de tres y cuatro ramas (estructuras de Holliday) construidas por la hibridación de oligonucleótidos y la eficiencia de unión disminuye 40 veces en el caso de horquillas de replicación sintéticas. RecU corta estas es 8 tructura 33d s de Holliday en una secuencia determinada pero no es capaz de cortar ADN lineal o superenrollado con este sitio de reconocimiento. El corte se produce en la misma posición en cadenas con la misma polaridad.

Autor: LOPEZ COBOLLO ROSA MARIA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Las plantas responden de distinta manera a las temperaturas bajas. Una de estas respuesta es el proceso de aclimatación a las temperaturas bajas, el cual es un proceso adaptativo que las permite aumentar o desarrollar una mayor tolerancia a las temperaturas de congelación después de estar sometidas previamente a temperaturas bajas propiamente dichas. Este proceso adaptativo, denominado aclimatación a las temperaturas bajas es muy complejo y conlleva numerosos cambios fisiológicos y bioquímicos, la mayoría de ellos controlados por variaciones en la expresión génica. Todavía no se conoce muy bien como las plantas perciben el descenso en la bajada de las temperaturas y como esta señal se transmite para que tenga lugar la respuesta adaptativa. De ahí la importancia de identificar y caracterizar nuevos intermediarios en la respuesta a las temperaturas bajas. En nuestro laboratorio se aislaron una serie de genes cuya expresión aumenta por exposición a 4ºC a niveles bajos en la planta modelo Arabidopsis thaliana. Uno de ellos, RCI1A, codifica una proteína de la familia de las 14-3-3, las cuales han sido implicadas en la regulación de numerosos procesos biológicos. Otro de ellos, RCI5, codifica una monooxigenasa de la familia FMO, de las cuales no se conoce ninguna función relacionada con la tolerancia a estrés en plantas. En esta tesis nos planteamos conocer con más detalle la participación de ambos genes en el proceso de aclimatación a las temperaturas bajas. En nuestro laboratorio se había descrito que RCI1A aumenta su expresión en respuesta a temperaturas bajas manteniéndose mientras permanece el estímulo. Codifica la isoforma ? de la familia de proteínas 14-3-3. En esta tesis, en primer lugar, llevamos a cabo una fusión traducional entre el promotor de RCI1A y el gen delator GUS, lo cual nos permitió demostrar que la expresión de este gen tiene lugar desde estados muy tempranos del desarrollo y en todos los órganos, aumentando únicamente en repuesta a frío, y que está regulada al nivel transcripcional. Para analizar la función de RCI1A en la respuesta a las temperaturas bajas aislamos un mutante nulo en la expresión de RCI1A. Este mutante, rci1a-1, que presenta un tamaño reducido, debido a un menor tamaño celular y, que florece tempranamente respecto al genotipo silvestre, sugiere que RCI1A tiene un papel importante en el control del tamaño celular y del tiempo de floración de Arabidopsis. Al mismo tiempo, es más tolerante a las temperaturas de congelación tanto en condiciones control como de aclimatación. El análisis molecular del mutante ha demostrado que RCI1A regula parte de la expresión génica que se activa en respuesta a las temperaturas bajas, concretamente modulando negativamente la expresión de CBF1 y CBF3. Puesto que este gen no está regulado por ABA ni los factores CBFs, es una buena herramienta para buscar intermediarios en la ruta de señalización mediada por las temperaturas bajas. Por ello, hemos aislado y caracterizado 7 mutantes afectados en la expresión de RCI1A en respuesta a 4ºC (drx). Los resultados obtenidos sugieren que podrían corresponder a puntos de conexión en la respuesta a distintos estreses relacionados con la respuesta de aclimatación. En esta tesis también hemos caracterizado la expresión génica de RCI5, un nuevo gen de Arabidopsis, inducible por temperaturas bajas y estrés salino. Un análisis detallado de su expresión, mediante la fusión traducional del promotor de RCI5 con el gen delator GUS, ha demostrado que se induce preferentemente en el tejido vascular de hojas y flores en respuesta a ambos estreses. RCI5 codifica una proteína de la familia FMO. En peces se ha definido que las FMOs están implicadas en la síntesis de TMAO, un potente osmoprotector. Mediante la purificación de la proteína hemos comprobado que RCI5 tiene función monooxigenasa in vitro. Y plantas transgénicas sobreexpresando el gen nos han permitido demostrar que RCI5 también es funcional in vivo. Las plantas 35S::RCI5 presentan mayor tolerancia a las temperaturas de congelación, tanto en condiciones control como de aclimatación, y en respuesta al estrés salino, lo cual implica una función de RCI5 en la respuesta a ambos estreses. RCI5 regula positivamente 8 la expr 458 esión de genes que forman parte del regulón CBF/DREB1 y genes implicados en la eliminación de ROS. Hemos demostrado la existencia de TMAO en Arabidopsis, y que los niveles de esta molécula se acumulan en respuesta a 4ºC y NaCl. Los resultados obtenidos en esta tesis han permitido demostrar que el TMAO, se debe al menos en parte a RCI5, y que es una nueva molécula señalizadora que activa parte de la expresión génica que se induce en respuesta a las temperaturas bajas y al estrés salino.

Autor: Guinea Gutiérrez Bárbara.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Centro Nacional de Biotecnología.
Centro de realización: Centro Nacional de Biotecnología.

Resumen: PKL12 es una Ser/Thr quinasa que se localiza principalmente en el aparato de Golgi. Sin embargo, tras tratamientos farmacológicos, como brefeldina A y nocodazol, PKL12 se trasloca al núcleo. En este compartimento subcelular PKL12 actúa como su propio autorregulador transcripcional, así como co-factor de genes como VEGF. Parece que su actividad quinasa es independiente de su capacidad de traslocación al núcleo. Asimismo, PKL12 es capaz de cooperar con oncogenes como v-Src y su sobreexpresión en células NIH/3T3 hace que sea capaz de formar mayor número de focos de transformación. Por otra parte, hemos aislado una nueva proteína, inmunorelacionada con PKL12, a la que hemos denominado como PKL12-big brother (PKL12-BB) y que se encuentra sobreexpresada en líneas tumorales como TMC, así como en leucemias infantiles y carciomas adultos humanos. Finalmente, hemos generado modelos murinos para el estudio de la función biológica de PKL12 in vivo.

Autor: Punzón Gau Ma. Isabel.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Centro Nacional de Biotecnología.
Centro de realización: Centro Nacional de Biotecnología.

Resumen: Puesta a punto de un método de transgénesis subzonal en embriones mediante la utilización de vectores lentivirales en cepa pura de ratón, C57BL/6. Caracterización de los ratones transgénicos así como de la segregación lentiviral. Utilización de la técnica para la obtención de ratones transgénicos inmunodeficientes NOD/scid como modelo de xenotrasplante humano/morino, ya que expresan proteínas humanas biológicamente activas.

Autor: Mateos Gil Álvaro.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Príncipe Felipe.

Resumen: En esta tesis de título "Estudio y aplicación de métodos supervisados para el análisis de patrones de expresión génica" se ha realizado un estudio sobre la aplicación de métodos de aprendizaje supervisado para el análisis de datos de expresión génica a escala genómica. Los patrones de expresión génica se obtienen mediante la técnica de los microarrays y consisten en los valores de expresión de la mayor parte, o todos, los genes de un genoma, a nivel de la transcripción. Los métodos de aprendizaje supervisado son una serie de técnicas del campo del aprendizaje estadístico e inteligencia artificial. Mediante este tipo de métodos se pueden clasificar conjuntos de datos multivariante. La característica que define a estos métodos es que utilizan información definida de manera independiente a los propios datos, por ello el nombre de "supervisados". Típicamente, dicha información puede ser la pertenencia a diversas clases de los diferentes elementos presentes en el conjunto de datos. Mediante un proceso de aprendizaje a partir de ejemplos cuya clase es conocida, este tipo de métodos ajustan funciones de decisión que pueden ser utilizadas para la clasificación de elementos de clase desconocida. En esta tesis se han estudiado los métodos de aprendizaje supervisados perceptrón y perceptrón multicapa (dos conocidos tipos de red neuronal) y las máquinas de vectores de soporte (SVM). Cuando fue necesario se combinaron el perceptrón y las SVM con un método no supervisado de clustering llamado SOTA, para reducir la dimensionalidad de los datos originales. Aplicando los métodos supervisados mencionados a conjuntos de datos de expresión génica, se ha llevado a cabo un estudio de predicción de función en genes de la levadura Saccharomyces cerevisiae. También se han aplicado a la predicción de clase fenotípica de muestras tumorales y sanas. Por último, se ha utilizado un método de bi-clustering supervisado, conocido como "algoritmo de firma" para el estudio de la estructura modular de la transcripción en distintos tipos de cáncer.

Autor: ESTRUCH LORENDEAU MARIA ILONA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID.
Centro de lectura: INST. DE CERAM.Y VIDRIO, CSIC..
Centro de realización: INST. DE CATAL. Y PETROL. CSIC,.

Autor: Vidal Conde Luis.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: Escuela Técnica Superior de Ingeniería (ETSE).
Centro de realización: Ingeniería Química.

Resumen: La utilización de aldolasas como biocatalizadores para la formación de enlaces C-C con estereoquímica definida depende esencialmente del descubrimiento de nuevas aldolaas y de la capacidad de disponerlas en el mercado para poder desmostrar su poder en la síntesis de sintones quirales El presente trabajo es una aportación al campo de las síntesis asimétricas basadas en el uso de enzimas a través de la clonación de nuevas aldolasas naturales, así como al desarrollo de procesos de obtención de aldolasas recombinantes dependientes de DHAP, de glicina y de acetaldehído para su utilización en la síntesis de compuestos complejos con dos nuevos centros quirales de estereoquímica definida y complementaria. Las enzimas objetivo de este trabajo son las cuatro aldolasas dependientes de DHAP (ramnulosa 1-fosfato aldolasa, fuculosa 1-fosfato aldolasa, fructosa 1,6 bifosfato aldolasa, tagatosa 1,6 bifosfato aldolasa), dos aldolasas dependientes de glicina (treonina aldolasas) y aldolasas dependientes de acetaldehído (desoxiribosa 1-fosfato aldolasa). En concreto, este trabajo se resume en cinco puntos básicos: Primero, se han clonado siete aldolasas procariotas de diversas fuentes microbianas, principalmente de E. coli, en una plataforma homogénea, sencilla y versátil que permite la sobreexpresión soluble intracelular de estas enzimas como proteínas de fusión a una cola de histidinas. Segundo, se ha desarrollado una estrategia general de purificación que permite obtener el producto funcional en un mínimo número de etapas con un alto rendimiento y estabilidad. Tercero, se han puesto a punto las metodologías necesarias para la determinación de las actividades aldolásicas específicas en base a ensayos enzimáticos espectrofotométricos fundamentados en la reacción con el sustrato natural de cada una. Cuarto, se ha seleccionado el sistema de producción de ramnulosa 1-fosfato aldolasa (RhuA) como modelo para definir un proceso reproducible a escala productiva, optimizando los aspectos básicos que condicionan la sobreexpresión de proteínas recombinantes en E. coli. Quinto, se ha trabajado en el desarrollo de una estrategia de cultivo semicontinuo adecuado para la obtención de cultivos de alta densidad celular, optimizando los criterios de inducción de la expresión de la proteína recombinante para maximizar la producción y productividad de RhuA. Finalmente, utilizando técnicas de biología molecular, se ha trabajado en la mejora de la plataforma de expresión para prescindir del uso de antibióticos como marcadores de selección, siempre pensando en su aplicación a escala industrial. En concreto, se ha desarrolado un plásmido de complementación de una auxotrofía para glicina que permite el crecimiento de una E. coli mutante en medios definidos sin necesidad del uso de antibióticos. Este nuevo sistema permitirá diseñar futuras estrategias de cultivo más económicas para la producción de proteínas recombinantes con un menor impacto ambiental

Autor: ESNAOLA CAMPOS URKO.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO.
Centro de lectura: FACULTAD DE INFORMÁTICA.
Centro de realización: FACULTAD DE INFORMÁTICA.

Resumen: Esta tesis presenta una manera novedosa de interacción máquina-persona, máquina-máquina, basada en un lenguaje musical, que se ha llamado 'Lenguaje Musical MiReLa'. Dicho lenguaje se puede generar mediante la mayoría de instrumentos musicales, teléfonos móviles y PDAs. También puede ser silvado. Se ha puesto especial empeño para diseñar un lenguaje en el que sus frases musicales sean fáciles de ser silvadas. Esta tesis también presenta un revisión de una architectura distribuida que permite integrar fácilmente los diferentes aspectos a tener en cuenta en la operación de un robot móvil. Se le ha nombrado 'Asociación de Agentes'. Propone una manera de crear redes de agentes. Cada agente añade una nueva capacidad al robot. Para ello utiliza las capacidades ya añadidas de los agentes antes implementados en la red. La comunicación entre agentes es simple.

Autor: Mir Llorente Mònica.
Año: 2006.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: Escuela Técnica Superior de Ingeniería Química.
Centro de realización: Escuela Técnica Superior de Ingeniería Química.

Resumen: El trabajo hecho en esta tesis describe el desarrollo de nuevas plataformas de biosensores electroquímicos para conseguir sistemas que permitan una detección sencilla del analito, por tanto que nos sea necesario un marcaje previo de este o bien tener que añadir reactivos para su detección. Esta plataforma biosensórica también ha de permitir la detección de una amplia gama de analitos en el mismo equipo a un bajo coste. Para evitar el marcaje de muestras de ADN se desarrollo un sistema de desplazamiento. Este método libre de marcaje se basa en el desplazamiento de moléculas de oligonucleótido mutado y marcado, el cual aunque contenga mutaciones es capaz de hibridar con la sonda de reconocimiento inmovilizada en el biosensor, i por tanto cuando esta se encuentra en presencia del analito, debido a que la sonda tiene mayor afinidad por el analito que por la molécula mutada, el analito desplaza el oligonucleótido mutado y marcado, diminuyendo así la señal del biosensor, la cual es proporcional a la concentración del analito. También se llevaron a cabo diferentes estrategias para desarrollar un biosensor electroquímico basado en oligonucleótidos (aptámeros) para la detección de proteína sin un previo marcaje de este analito. Obteniendo así un sistema genérico basado en oligonucleótidos, que puede detectar tanto ácidos nucleicos como proteínas. Se demostraron cinco configuraciones de biosensores electroquímicos basados en aptámeros para la detección de trombina no marcada.