BIOQUIMICA

Autor: MOLINA JIMENEZ M. FRANCISCA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En los últimos años, las enfermedades neurodegenerativas, entre ellas la enfermedad de Parkinson, han cobrado gran relevancia debido al aumento de la esperanza de vida en los países desarrollados. Las causas y mecanismos por lo que se produce la degeneración neuronal de las sustancia negra de enfermos de Parkinson es aun desconocida, aunque en este estudio se pone de manifiesto la implicación del estrés oxidativo y de los mecanismos de apoptosis. Los objetivos de este trabajo fueron caracterizar un modelo in vitro que permita establecer la relación entre la enfermedad de Parkinson, el estrés oxidativo y la muerte neuronal por apoptosis. Se empleó rotenona, inhibidor del complejo I de la cadena de transporte electrónico mitocondrial, para inducir la toxicidad y se comprobó la capacidad neuroprotectora de tres sustancias antioxidantes: fraxetrol, miricetina y N-acetilcisteína. La rotenona provocó estrés oxidativo en las célula sdopaminérgicas de neuroblastoma humana SH-SY5Y, incrementando la producción de ERO, ocasionando peroxidación lipídica, disminuyendo los niveles de GSH, y alterando la actividad y los niveles de la sprincipales enzimas antioxidantes. Todas estas alteraciones del estado redox celular condujeron a la muerte neuronal por apoptosis en células dopaminérgicas de neuroblastoma humano SH-SY5Y que se comprobó por cambios morfológicos característicos, activación de caspasa 3, proteolisis de poli-ADPribosa polimerasa (PARP) y fragmentación internucleosomal de DNA. El fraxetol fuez capaz de revertir esta situación de toxicidad frenando el estrés oxidativo gracias a su capacidad captadora de ERO, evitando la apoptosis por inhibir la proteolisis de PARP y la fragmentación de DNA, e incrementando las defensas celulares por inducir la expresión génica de HSP70. Además inhibió la COX-2, mediadora en el proceso de inflamación implicado en la muerte neuronal de GSH y la actividad de GPx inhibiendo también la fragementación del DNA, mientras que la miricetina, pese a su efecto antioxidante, no fue capaz de evitar la muerte neuronal. De todo ello se concluye que el modelo in vitro de enfermedad de Parkinson desarrollado en este trabajo, puede resultar útil en la evaluación de posibles terapias antioxidantes ensayadas en esta enfermedad.

Autor: ADAME NAVARRETE M. YOLANDA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de realización: FACULTAD DE CC. QUҍMICAS.

Resumen: En la luz intestinal se originan cantidades elevadas de agentes oxidantes. La alta reactividad de estas moléculas hace peligrar la integridad de la mucosa, pudiendo generar alteraciones a nivel de las funciones normales del intestino. Es por ello que este órgano debe disponer de un potente mecanismo enzimático de protección frente a agentes altamente nocivos. Así, los objetivos planteados para el estudio se dirigen a evaluar el efecto que ejerce un angente oxidanate fisiológico, el H2O2, sobre la función de secreción y la función de barrera tras entrar en contacto con el colon a través de la superficie luminal. Además, se propone valorar la participación de las enzimas antioxidantes endógenas, y específicas para el H2O2, como son la catalasa y la glutation peroxidasa (GPx). Las conclusiones que se obtienen del estudio, realizado en colon distal de rata Sprague-Dawley, son: 1,- Los oxidantes luminales producen un aumento de la secreción de Cl- probablemente en respuesta a la activación del sistema nervioso entérico y alteran la permeabilidad intestinal. 2,- El colon distal de la rata presenta un mecanismo enzimático de protección frente al H2O2 luminal en el que la catalasa desempeña un papel crítico.

Autor: BARDERAS MANCHADO RODRIGO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD CIENCIAS QUҍMICAS.
Centro de realización: FAC. CC. QUҍMICAS DPTO. BIOQUҍMICA Y BIOLOGҍA MOLECULAR I..

Resumen: Los trabajos de investigación que da forma a la Tesis Doctoral presentada por Rodrigo Barderas, están enfocados hacia la identificación y aislamiento de alergenos relevantes en pólenes responsables de inducir alergias, su producción recombinante y su posible utilización en la diagnosis y profilaxis de este desorden inmunológico que cada vez posee una mayor incidencia en los países desarrollados. La investigación se ha centrado en el estudio de cuatro alergenos de dos fuentes polínicas poco estudiadas hasta el momento, el cenizo blanco y el fresno. L primero porque hasta los últimos años no ha constituido un polen significativo a tener en cuenta entre los posibles que sensibilizan a pacientes, y el segundo porque únicamente abunda en regiones de Norte y Centro de Europa pero está relacionado estructural e inmunológicamente con especies vegetales importantes en España como el olivo. Así, se han caracterizado, clonado y secuenciado para conocer sus estructuras primarias completas y se han producido como proteínas recombinantes los alergenos Che a 1, Che a 2 y Che a 3 de cenizo blanco y Fra e 1 de fresno, determinándose su prevalencia y su implicación en reactividad cruzada con otras fuentes alergénicas. Igualmente, y como prueba esencial para su utilización se han validado, estableciendo la equivalencia estructural e inmunológica entre los alergenos aislados de sus fuentes naturales y los expresados en los dos sistemas de producción recombinante empleados, Escherichia coli (Che a 2 y Che a 3) y Pichia pastoris (Che a 1 y Fra e 1). La expresión recombinante de estos alergenos permite disponer de proteínas en grandes cantidades y correctamente plegadas que conducirán a corto plazo a una diagnosis y tratamiento más eficaz de la enfermedad alérgica en pacientes sensibilizados a dichos alergenos.

Autor: MATUS DE LA PARRA VALENZUELA ANA MARÍA.
Año: 2003.
Universidad: VIGO [Más tesis de esta universidad] [www.uvigo.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Francia es el primer país productor de esta especie en Europa , con una producción anual de 135000 toneladas métricas ;dicha producción depende casi de forma integra de la captación natural de semillas, pero, la iregularidad en los reclutamientos sumado a la elevada demanda de juveniles en los últimos años, ha estimulado la necesidad de un papel más activo de los criaderos que abastecen a esta industria .Entre las iniciativas emprendidas enel estudio del éxito reproductivo de esta especie, se encuentra la relacionada con la calidad de los gametos, por éste uno de los puntos cruciales en la producción de semilla en criaderos.El presente estudio intenta contribuir al conocimiento de la acumulación y utilización de las reservas energéticas de diversos tejidos durante le ciclo reproductivo de Crassostrea gigas, analizando dichos proceso en función del sexo y de las diferentes etapas que marcan su desarrollo gametogénico. Ostras provenientes del banco ostrícola de Ronce en la Bahía de Marenens-Olerón (La Tremblade, Francia)fueron colectadas quincenalmente entre marzo de 1997 y febrero de 1998.Se tomaron muestra de cada uno de los órganos principales que conforman las partes blandas del animal (gónada,múlculo aductor,papol labiales, manto y glándula digestiva).La variación estacional y por estadios de madurez de la composición bioquímica y clases lipídas se realizó en tres de éstos organos:glándula digestiva, palpos labiales y gónada , en este último tejido además se realizó el análisis histológico y la determinación de las distintas clases lipídicas y la composición en ácidos grasos de la fosfatidilcolina.Además se realizaron dos tipos de índicees de condición:uno general y otro de los distintos tejidos somáticos , a fin de conocer el estado fisiológico de los individuos en estudio. El crecimiento de Crassostrea gigas está estrechamente relacionado con la disponibilidad de nutrientes y con la temperatura.En primavera-verano,las temperaturas y los afloramientos estivales detemiann el desarrollo de la gónada.En otoño , la caída de la temperatura y la elevada disponibilidad de microalgas se ralacionan con el crecimiento somático en talla y en peso.Las reservas acumuladas en los tejidos somáticos son utilizadas en invierno, cuando la disponibilidd de alimento cae sus mínimos. El ciclo gametogénico de Crasostrea gigas se inicia a finales de verano, con un período de restauración del tejido de reserva y una ausencia total de células germinales (estadio 0)Posteriormente, comienzan la formación, proliferación y propagación de las gonias y la formación de los foliculos gonadales , donde se observan células indiferenciadas, intercaladas con ovogonias y espermatogonias (estadio I).En la gran mayoría de estos individuos, no diferenciados sexualmente , el desarrollo de ovocitos previtelogénicos es más rápido y evidente.Durante la etapa invernal o etapa de hibernación de la ostra, las células que llegan a diferenciarse sufren de una constante atresia.En primavera, cuando la temperatura del agua aumenta, la la gametogénesis se reactiva y se produce la diferenciación de los machos , con una rápida extentión y ramificación de los folículos (estadio II).Aunque las hembras también sufren un rápido aumento y desarrollo de los ovocitos previtelogénicos , estos siguen mostrando un elevado grado de atresia.En abril , los machos alcanzan un estadio IIIA1 que se caracteriza por un aumento considerabgle del volumen folicular hasta ocupar caso la totalidad del espacio.De abril a junio. Momento en los machos alcanzan un estadio IIIA2 presentan pequeñas y sucesicas emisiones de gametos(pulso de puesta), mientras que las hembras siguen presentando una evedente atresia en los gametos formados , que sólo disminuyen tras los pulsos de puesta de los machos .A partir de este momento las hembreas alcanzan un estadio IIIA1 , en el que son evidentes los ovocitos vitelogénicos anclados en la pard del folículo.Posteriormente , las hembras maduran rápidamente , alcanzando el estadio IIIA2, al igual que n machos, son capaces de emitir algunos ovocitos maduros.A partir de este momento, el desarrollo de ambos sexos continúa sincrónicamente, ocn un rápido período de restauración gon 8 adal (es 130a tadio IIIC), tras el cual comienza el período de desove de ambos sexos durante el mes de julio (IIIB).A mediados de agosto, y tras la puesta, lo individuos sufren degradación hemocitaria de las células germinales residuales, así como delos folículos (estadio IIID)y comienza de nuevo a formarse el tejido de reserva que da inicia a un nuevo ciclo gametogénico (estadio 0).El carácter intersexual de la gónada de Crassostrea gigas es corroborado por la aparición de una pequeña proproción de "hemafroditas funcionales" en el momento de la reanudación de la gametogénesis , después del período de hibernación . Momento que considerameo sde diferenciación sexual. El índice de condición general propuesto para C. Gigas está relacionado directamente con el crecimiento somático e inversamente con el desarrollo gonadal.La evolución inversa del índice de condición dela glándula digestiva respecto alos índices de condición del manto, músculo aductor y palpos labiales, en los momentos de afloramiento de clorofila a y sestón total, indican el papel intermediario de la glándula digestiva en la transferencia de alimento ingerido y su acumulación como reserva enlos otros tejidos somáticos. La principal reserva energética de Crassostrea gigas la constituyen el glucógeno, que experimenta una marcada variación estacional en todos los tejidos estudiados:aumenta en glándula digestiva durante los afloramientos fitoplanctónicos de finales de verano-principios de otoño y es rápidamente transferido yñ acumulado en palpos labiales y gónada (estadio IA)y se consume caso totalmente a principios de primavera , con la reactivación de la gametogénesis,coincidiendo con un importante aumento de lípidos y con el estadio II de machos y IIIA1 de hembras . Esto parece indicar la utilización de las reservas glucídicas en la síntesis de lípidos en este momento ,así como de una elevada demanda energética en las etapas de división de células germinales y de activa vitelogénesis en machos y en hembras,respectivamente. La glándula digestiva , además de un papel intermediario también en la tranferencia a otros órganos de los lípidos , ingeridos , parece constituir un importante órgano de reserva de este componente, movilizándose en invierno hacia palpos y gónada durante el crecimiento somático y el principio del ciclo gonadal y en primavera-verano durante el desarrollo gametogénico. El más lento consumo de las reservas glucídicas de palpos labiales, junto con el aumento de su contenido en lípidos totales a principios de primavera y su posterior diminución , paralela a su aumento en gónada durante los últimos estadio de maduración gonadal, hace que podamos considerar los palpos labiales como órgano de reserva para sustentar los estadios más avanzados de maduración gonadal , principalmente los de vitelogénesis y restauración y sugiere la importancia de los lípidos de este órgano en momentos claves del ciclo gonadal de Crassostrea. Los ésteres de colesteros de gónada y palpos labiales podrían entervenir en la regulación del ciclo gonadal de Crassotrea cmo posibles precursores hormonales, dados sus puntuales y significativos aumentos,coincidiendo ocn el inicio del ciclo gametogénico (estadio 0 y AI),con la reactivación primaveral de la gametogénesis y la diferenciación sexual (estadio II) y con la disminución de la atresia y comienzo de la vitelogénesis en embras (estadio IIIA1). La elevada proporción como componentes de los fosfolípidos de la gónada de fosfatidilinositol,fosfaditilsrina y fosfatidiletanolamina en el estadio IIID , fosfatidilinositol en el estadio II de machos y de fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolinay plasmalógnos en eltadio IIIA1 de hembras, podrían también suponeer señales moleculares para la terminación de un ciclo gametogénico y el comienzo de otro,para la reactivación de la gametogénesis y determinación sexual y para la desaparición de la artresia, respectivamente. La commposición en ácidos grasos de la fracción de fosfatidilcolina, el fosfolípido más abundante en la gónada de Crassostres gigas, revela un aumento de ácidos grasos saturados en momentos de abundancia de nutrientes , una posibler restauración de los lípidos de membrana con la caída de la temperatura en invierno, marcada por la disminución de los ácidos grasos saturados y el aumento de los monoinsaturados, y un aumento de ácidos grasos poliinsaturados durant ela maduración de los gametos, paralelo disminución de los ácidos grasos monoinsaturados.

Autor: CAMPANERO RHODES M. ASUNCIÓN.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE QUÍMICA FISICA "ROCASOLANO".

Resumen: Las epsermadhesinas son una familia de proteínas presentes en el plasma seminal de diversas especies de mamíferos que recubren la superficie de los espermatozoides en la eyaculación. Son proteínas multivalentes, con capacidad de unir diversos tipos de ligandos aunque aún no se conoce su función, se cree que están implicads en más de una etapa del proceso de la fecundación. PSP-I y PSP-II son las espermadhesinas porcinas más abundantes que, en el plasma seminal, se hallan formando un heterodímero no convalente cuyas características estructurales se han estudiado extensivamente. Sin embargo, se sabe muy poco acerca de las subunidades PSP-I y PSP-II aisladas, existiendo, además, controversia en cuanto a sus capacidades de unión a ligandos. En esta Tesis Doctroal se ha llevado a cabo un estudio de la organización estructural, estabilidad y estado de agregación e PSP-I y PSP-II y se han delimitado sus capacidades de unión a ligandos así como la interdependencia de las distintas interacciones. Así mismo, se ha explorado en ambas proteínas un posible sitio de unión a inhibidores de proteasas y la zona de unión a heparina en PSP-II y en PDC-109, la proteína mayoritaria del plasma seminal bovino compatibles con la Inter-relación observada entre las distintas capacidades de unión a ligandos de estas proteínas. Por último, se ha estudiado el efecto del Zn2+, un cation muy abundante en plasma seminal, sobre la organización estructural y reconocimiento de ligandos del heterodímero y de ambas subunidades, demostrándose un papel regulador de dicho catión sobre el estado de agregación y capacidad de unión a heparina de PSP-I. Además, aunque no se han encontrado ligandos para el heterodímero PSP-I/PSP-II, se ha comprobado que en determinadas condiciones fisiológicas (baja concentración de proteínas y pH ácido o presencia de Zn2+) se produce su disociación, permitiendo de este modo la funcionalidad de las capacidades de unión de las subunidades aisladas.

Autor: RUIZ MACÍAS SERGIO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: En el trabajo desarrollado en esta Tesis Doctoral se ha tratado de determinar el papel que los miembros de la familia de retinoblastoma tienen en los procesos de proliferación, diferenciación, morfogénesis y carcinogénesis de la piel de ratón. Para ello, se ha realizado un exhaustivo análisis de la piel de varias líneas de ratones deficientes, de tipo convencional o de tipo condicional, en uno o en varios de los diferentes miembros de la familia de retinoblastoma. Los animales deficientes en p107 o p130 carecen de fenotipo epidérmico. Sin embargo, los animales p107-/-; p130-/- tienen alteraciones en la diferenciación terminal así como en el desarrollo folicular. Las alteraciones en el folículo piloso parecen ser debidas a una disminución en la expresión del morfógeno BMP4. Además, estas alteraciones se revierten mediante el trasplante de piel deficiente en p107 y p130 a una dermis normal en animales NOD/SCID, demostrando la importancia del componente mesenquimal en el desarrollo fenotípico de los animales p107-/-; p130-/-. Por otro lado, se demostró que la pérdida conjunta de p107 y p130 conducía a la acumulación nuclear de beta-catenina en los queratinocitos basales de la epidermis. Esto era debido a la sobreexpresión de Frat una proteína bloqueante de la quinasa GSK3beta la cuál, se encarga de la degradación de beta-catenina. Este fenotipo también se restauró mediante la utilización de los trasplantes antes mencionados. La pérdida de pRb en la epidermis, mediante el sistema Cre/LoxP, produce alteraciones graves en la proliferación y diferenciación epidérmicas. Estas alteraciones se agravan de forma dosis-dependietne por la pérdida sucesiva de alelos de p107 lo que demuestra el papel compensador de esta proteína en ausencia de pRb. Los animales deficientes en pRb y p107 también tienen un fenotipo drástico en el folículo piloso que conlleva la pérdida del pelo. Además, se ha demostrado que pRb tiene un papel dual en la diferenciación ya que, por un lado, regula la salida de ciclo previa al proceso de diferenciación mientras que por otro, participa en el mantenimiento del estado postmitótico del queratinocito diferenciado. Por útlimo, se analizó la implicación de pRb durante el proceso de carcinogénesis química DMBA/TPA de piel de ratón. Se observó que, en ausencia de pRb, aparecían menos tumores y de menor tamaño que en los animales controles. A pesar de ello, los tumores deficientes en pRb eran más malignos y presentaban una mayor tasa apoptótica, dependiente de la estabilización de p53, en comparación con los tumores control.

Autor: MASIP ORDÓÑEZ MANUEL.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FAC. DE CC. QUÍMICAS.

Resumen: La alfa-sarcina es la ribotoxina mejor caracterizada de las proteínas citotóxicas secretadas por hongos filamentosos del género Aspergillus. La alfa-sarcina, que es producida por el hongo Aspergillus giganteus MDH 18894, fue encontrada durante un programa de investigación, llevado a cabo por el Departamento de Salud de Michigan, en busca de antibióticos y agentes antitumorales que pudiesen acabar con el cáncer. Esta proteína resultó muy eficaz en la inhibición del crecimiento de diferentes tumores animales como el sarcoma 180 y el carcinoma 755. Precisamente su nombre (alfa-sarcina) se debe a su actividad anti-sarcoma (Olson y Goerner, 1965; Olson et al., 1965). En esta Tesis Doctoral se ha continuado con la caracterización de la alfa-sarcina. Esencialmente, se han diseñado, preparado y purificado toda una serie de mutantes en los que diversas localizaciones de la ribotoxina han sido alteradas o delecionadas. En concreto, las proteínas mutantes que han sido objeto de estudio en esta Tesis Doctoral, son el resultado de modificaciones en la Arg121 (mutantes R121K y R131Q), la Leu145 (mutante L145F), la Asn54 (mutantes N54D y N54Q), la región 122-129 (mutante alfaS-M), parte de la región N-terminal mutante (7-18), y l asustitución del bucle 2 de la alfa-sarcina por el equivalente de la RNasaU2 (mutantes alfaS loopU2, alfaS (53-93) y alfaS loopU2/C132S/'C76S'). Este trabajo ha permitido profundizar en el conocimiento de las relaciones estructura-función de esta citotoxina. Se han evaluado con detalle de qué manera afectan las mutaciones planteadas al plegamiento y estabilidad de la proteína. Se ha estudiado el mecanismo catalítico de la alfa-sarcina a través de la caracterización de la actividad enzimática de estos mutantes sobre diferentes sustratos, analizando de qué manera se ve afectada la capacidad ribonucleolítica dela enzima en cada uno de los casos. Además, se ha valorado la importancia del anómalo pKa de la His137, ya que se ha estudiado la influencia del pH sobre el mecanismos catalítico de la alfa-sarcina. Finalmente, también se ha evaluado con detalle la influencia de estas mutaciones en la interacción de la alfa-sarcina sobre vesículas fosfolipídicas, establecièndose la importancia de la Arg-121 en dicha interacción.

Autor: ZULUAGA RODRÍGUEZ SUSANA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La p38alfa MAPK es una serina/treonina quinasa de la superfamilia de las MAPKs. Las p38 MAPKs clásicamente se han relacionado con procesos de respuesta a estrés. Sin embargo, datos más recientes indican que se pueden activar en respuesta a otras muchas señales regulando diversas funciones celulares incluida la apoptosis y supervivencia celular. Dado que existen cuatro isoformas de p38 MAPKs, distintas isoformas podrían jugar funciones diferentes. Nuestro trabajo se ha centrado en el estudio del papel que juega la isoforma alfa en el balance apoptosis/supervivencia, utilizando para ello células deficientes en dicha quinasa. Los resultados presentados en esta Memoria demuestran que las p38alfa sensibiliza a los cardiomioctos y fibroblastos embrionarios de ratón frente a la apoptosis activadas por diversos estímulos a través de diferentes mecanismos. Por una parte, la p38alfa induce un aumento en los niveles de proteínas pro-apoptóticas como Bax y Fas, probablemente a través de la disminución de la forma activa del factor de transcripción STAT3 (fosfo-Ser727-Stat3). Por otro lado, la p38alfa MAPK regula negativamente la ruta de supervivencia de las ERK MAPKs y de la PI3K/Akt. En concreto, la p38alfa MAPK mediaría la desfosforilación e inactivación de la Akt a través de la activación de la serina/treonina fosfatasa PP21A. Esta estimulación del a actividad de la PP2A ocurre en regiones caveolares de membrana, donde la subunidad catalítica de la PP2A (PP2Ac) permanece unida a caveolina-1 y Rac-1 formando un complejo. La formación de este complejo es dependiente de adhesión celular, por lo que podría depender de la activación de integrinas y/o cadherinas. A su vez, la interacción entre la caveolina-1, la PP2Ac y Rac-1 depende de la activación de tirosina quinasas.

Autor: SÁNCHEZ BARRENA M. JOSÉ.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE QUÍMICA-FÍSICA ROCASOLANO (CSIC).

Resumen: El exceso de sal en los suelos inhibe el crecimiento de las plantas y causa grandes pérdidas en la producción agrícola mundial. La ruta Salt Overly Sensitivie (SOS) juega un papel determinante en la tolerancia salina en plantas y el mantenimiento de concentraciones bajas de ión sodio (Na+) en el citosol, de ahí que el establecimiento de las bases estructurales de dicho proceso sea de gran importancia para entender la función molecular del sistema y para poder en un futuro darle una aplicación biotecnológica. El sensor de Ca2+ SIS3 es una proteína clave en la ruta SOS, ya que se encarga iniciar la respuesta para la tolerancia salina. SOS3 es capaz de sentir la señal citosólica del Ca2+ provocada por el estrés salino, para posteriormente activar a la quinasa SOS2. Con el fin de entender cómo SIS3 une el Ca2+ y regula la actividad de SIS2, y comprender en última instancia cómo funciona específicamente mediando la señal proveniente del estrés salino y no de otros tipos de estreses que pueden también provocar cambios en la concentración citosólica de Ca2+, se ha abordado el estudio estructural de esta proteína. Se ha determinado la estructura tridimensional mediante difracción de rayos X de los complejos SOS3 Ca2+ y SOS3 N2+ Ca2+, se han realizado esperimentos de ultracentrifugación analítica para caracterizar el estado de asociación de la proteína en función de diversos cationes fisiológicamente relevantes, se han realizado experimentos de desnaturalización térmica registrada por dicrósmo circular para caracterizar la unión de dichos metales, se han llevado a cabo experimentos de cromatografía de interacción hidrofóbica para estudiar el carácter hidrofóbico de SOS3 y por último, se ha compardo estructuralmente SOS3 con sus proteínas homólogas para poner de manifiesto los determinantes estructurales asociados a sus propiedades. La integración de todos los resultados han permitido proponer un mecanismo de respuesta al Ca2+ e interacción con SIS2 según el cual la unión del Ca2+ a SOS3 provoca un cambio conformacional que induce la dimerización de la proteína y un aumento del carácter hidrofóbico de la misma. Esto permite la interacción de SOS3 con el motivo hidrofóbico FISL de SOS2 y la activación de la función quinasa de la misma.

Autor: ZEINI MORENO MIRIAM.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOQUÍMICA. CENTRO MIXTO CSIC-UCM. FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Tras la resección quirúrgica del 70% de la masa hepática mediante hepatectomía parcial (PH), el hígado desencadena una cascada de señales, que inician la recuperación de una masa hepática adecuada a las demandas metabólicas del organismo. Entre las señales que participan en el proceso regenerativo se encuentran la expresión de las proteínas inducibles, NOS-2 y COX-2. El óxido nítrico (NO) y prostaglandinas (PGs) liberados por estas enzimas son enzimas con capaces de regular el proceso de generación. En este trabajo, se ha analizado el papel del NO y las PGs y su interrelación en la regulación del proceso regenerativo. Para ello, se analizó el papel de la liberación de PGs en un modelo animal carente de NOS-2 (NOS-2 KO): * La deficiencia simultánea de NO y PGs durante el proceso de regeneración hepática tras la PH conlleva una apoptosis masiva de los hepatocitos e incapacidad proliferativa, que determinan una alta tasa de mortalidad de los animales tras la operación. Este proceso es dependiente de la activación de caspasas, puesto que el tratamiento en el inhibidor z-VAD protegió a los animales del daño hepático tras la PH. Aunque el NO y las PGs no son imprescindibles para la recuperación del tejido hepático, modulan el proceso regenerativo y el NO coopera con metabolitos derivados de COX-2 para completar el proceso de recuperación tras la PH. Puesto que el NO ha mostrado ser hepatoprotector y protege a los hepatocitos de la apoptosis por diferentes daños y del daño mediado por citoquinas tras la PH, se analizó el efecto de la liberación de NO de manera previa a la PH usando un modelo animal transgénico que expresaba NOS-2 en hígado y un modelo de expresión de NOS-2 en hígado por inyección hidrodinámica: * La liberación de NO en hígado de manera previa a la PH causa un retraso en el proceso de regeneración por la deficiente activación de NF-kB y Stat-3 y una menor liberación de TNF-alfa e IL-6. Además, se observa un retraso en la síntesis de DNA y proliferación de los hepatocitos. La masa hepática regenerada es menor en los animales que expresan NOS-2 en hígado frente a sus controles. * Sin embargo, la liberación de NO en hígado protege a los hepatocitos frente al daño apoptótico mediado por un anticuerpo anti-Fas, debido a la inhibición de la activación de caspasas. Tanto la deficiencia como la liberación previa de NO retrasan el proceso de regeneración tras la PH. El NO coopera con metabolitos derivados de COX-2 para la recuperación de una masa hepática adecuada y ejerce un efecto hepatoprotector frente al daño apoptótico mediado por Fas en el hígado.

Autor: BARRAL CATOIRA PATRICIA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICAS / DPTO. DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR I.

Resumen: El polen de olivo es una de las principales causas de alergía en los países del área mediterránea, como España, Italia, Grecia o Israel. La identificación, aislamiento y caracterización de alergenos es uno de los principales objetivos en el área de investigación de la alergia resultando de gran utilidad tanto para dignosis como para terapia. En la presente Tesis Doctoral se ha llevado a cabo el aislamiento, caracterización molecular e inmunológica, y expresión recombinante de un nuevo alergeno del polen de Olivo, Ole e 10. Desde un punto de vista bioquímico, Ole e 10 representa el primer miembro de una nueva familia de proteínas de plantas, que interacciona con 1,3-beta-glucanos y define un nuevo grupo de módulos de unión de carbohidratos. Desde un punto de vista clínico, Ole e 10 es un alergeno principal del polen, que muestra reactividad cruzada tanto con proteínas del polen del olivo como de otras fuentes biológicas. Por último se ha llevado a cabo el diseño y optimización de un protocolo para la expresión recombinante de Ole e 10 empleando dos sistemas de expresión ecuariota: la levadura P.pastori y cultivos de células de insecto infectadas con baculovirus.

Autor: LAINEZ MAS BEGOÑA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: El factor de la necrosis tumoral, TNF-a, es una citocina pleiotrópica implicada en un amplio espectro de respuestas inflamatorias y del sistema inmune. El efecto biológico del TNF-a está mediado por dos receptores de membrana, el receptor 1 de TNF, TNFR1 Y el receptor 2 de TNF, TNFR2. Estos dos receptores se pueden presentar como receptores solubles formados a partir del procesamiento proteolítico de la región extracelular del receptor de membrana. Se han descrito concentraciones elevadas de receptor soluble de TNFR2 en el suero de múltiples patologías inflamatorias. En este trabajo, describimos por primera vez una ísoforma de RNAm de TNFR2 humano, producida por splicing alternativo, a la que le faltan los exones 7 y 8 que codifican la mayor parte de la región citoplasmática y parte del domininio intracitoplasmático de la proteina. El splicing alternativo de los dos exones produjo un cambio en la pauta de lectura, lo que llevó a la aparición de un nuevo codón de parada tras 6 nuevos aminoácidos. Se obtenía de este modo, un cONA que codificaba una proteína de TNFR2 formada por la misma región extracelular y los mismos 5 primeros aminoácidos del dominio transmembrana, que el TNFR2 nativo, seguidos de 6 nuevos aminoácidos como único extremo carboxilo terminal. El estudio de la expresión de la proteína en células tranfectadas con el cONA de esta isoforma, mostró la naturaleza soluble de esta proteína. La proteína poseía un peso molecular de aproximadamente 42 KOa. En un ensayo de citotoxicidad inducida por TNF-a, se mostró que esta isoforma podía bloquear la apoptosis inducida por TNF-a, lo que sugiere su función reguladora de la acción del TNF como antagonista de su función biológica. Se desarrolló un ELlSA que cuantifica el receptor soluble generado por splicing alternativo. Y se determinaron las concentraciones de receptor soluble producido por splicing altemativo en el suero de individuos sanos y en pacientes de diferentes patologías inflamatorias. Nuestros datos muestran que el receptor soluble producido por splicing alternativo está presente en el suero de individuos sanos a bajas concentraciones y a concentraciones elevadas en sujetos con sepsis y artritis reumatoide. Se determinó que existe una asociación negativa entre el receptor soluble producido por splicing alternativo y varios componentes del síndrome metabólico y también con la resistencia a la insulina. Por otro lado, se observó que los pacientes de artritis reumatoíde con valores muy elevados de isoforma, presentaban, probablemente una mejor respuesta a la terapia con anticuerpos anti-TNF-a.

Autor: GASOL ESCUER EMMA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA DE LA UNIV.DE BARCELONA.

Resumen: La familia de transportadores heteroméricos de aminoácidos pose la característica única de estar compuestos por dos subunidades: una subunidad pesada y una subunidad ligera unidas por un puente disulfuro. Mutaciones en alguno de sus miembros son responsables de aminoacidurias hereditarias, como la lisinuria con intolerancia a proteínas (LPI) o la cistinuria. Al inicio de esta tesis, nos propusimos identificar alguna nueva subunidad ligera humana de esta familia. Mediante búsqueda por homología de secuencia se donó el cDNA correspondiente a una nueva proteína altamente homóloga a una proteína de ratón asociada al sistema de transporte xc-. La caracterización funcional confirmó que xCT humano, en combinación con 4F2hc, induce una actividad de transporte de cistina y glutamato, con sodio-independencia (sistema xc-). Los perfiles de captación de los sustratos en función del pH del medio de transporte indican que tanto el L-glutamato como la L-cistina son transportados de forma aniónica, cada uno con una carga negativa neta. Por experimentos de salida de sustrato se determinó el carácter intercambiador de este transportador, con una estequiometría de 1:1.El patrón de expresión de xCT humano por Northem blot muestra una ligera banda presente únicamente en cerebro. Experimentos de RT-PCR también resultaron positivos para los islotes pancreáticos y líneas celulares correspondientes a línias epiteliales y tumorales, mientras riñón e hígado no mostraron ninguna señal. El papel fisiológico de xCT parece estar implicado en la captación de cistina para la síntesis de glutatión y su mantenimiento, dándole un papel relevante en situaciones de estrés oxidativo. A continuación se abordó la determinación de la topología de xCT como modelo de subunidad ligera. Experimentos de inmunodetección evidencian la localización intracelular de los dos extremos de la proteína. Utilizando la estrategia de introducir cisteínas individuales en los distintos loops y testar su accesibilidad a reactivos tiol-específicos, la topología de xCT es compatible con un modelo de 12 dominios transmembrana. Los resultados obtenidos en la zona IL2-3, con dos residuos de accesibilidad exterior (el 110Y 112) flanqueados por residuos de accesibilidad interior (el 102, 109 Y116) en un rango de 15 aminoácidos nos hacen pensar en una estructura de reentrant loop, con el residuo HIlO como ápice. El hecho que estas estructuras suelen ser zonas asociadas a la ruta de paso del sustrato del transportador, nos llevó a estudiar la implicación del residuo H 110. En resumen, los resultados muestran que i) la biotinilación del residuo HII0C se bloquea por los sustratos y el inhibidor no transportable 4SCPG; ii) la inactivación provocada por MTSES en el transporte de hllOc también es protegida por los sustratos con una ICso similar a la Km para cada sustrato; iii) esta protección es independiente de temperatura, y por tanto no implica grandes cambios conforrnacionales; y iv) aunque los mutantes Hll0C y Hll0D no alteraron la Km del transportador ni su especificidad de sustrato, la sustitución por una lisina inactiva totalmente la función de xCT. Por tanto, tenemos evidencias de que HIlO se encuentra cercano al lugar de unión al sustrato o ruta de paso del mismo. Estos resultados pueden encontrarse en las publicaciones siguientes: J Biol Chem (2004) vol. 279,31228-36, J Biol Chem (2004) vol. 279, 11214-21, y Pflugers Arch. (2001) vol. 442 (2) 286-296.

Autor: FIGUERAS POLO M. TERESA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Durante ciertas situaciones catabólicas, como el cáncer o la sepsis, entre otras, sucede un hecho común que es la pérdida de masa muscular. Nuestro grupo de investigación ha estudiado en profundidad el desgaste muscular asociado al síndrome de la caquexia. Se ha identificado el sistema proteolítico dependiente de ATP Y ubiquitina como un mecanismo que participa en la activación de la proteolisis muscular. Además, se han identificado determinadas citoquinas, particularmente el TNF-cx, como elementos promotores del desarrollo del síndrome de la caquexia cancerosa. El objetivo de esta tesis doctoral fue profundizar en el conocimiento de los mecanismos responsables de la pérdida de masa muscular en diferentes estados patológicos. En concreto, el papel del TNF-cxen la caquexia cancerosa, sepsis i EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica) i el posible potencial terapéutico de la citoquina anabólica IL-15. La aproximaciones experimentales atizadas ha sido las siguientes: para el estudio de la caquexia cancerosa utilizamos el modelo tumoral del hematoma ascítico Yoshida AH-130 en rata i biopsias musculares de pacientes con cáncer de páncreas. Por otro lado, también utilitzamos biopsias musculares de pacientes EPOC. Además se utilizó un modelo de sepsis en rata. Las conclusiones de este estudio son las siguientes: 1. En el síndrome de la caquexia se observa una pérdida de proteína muscular a la vez que un proceso apoptótico activo valorado como fragmentación del DNA. Este último hecho se ha demostrado en dos situaciones patológicas en las que se manifiesta este síndrome: cáncer (modelo del hepatoma Yohida AH-130 y en cáncer de páncreas humano) y en sepsis. 2. El TNF-cxestá implicado en la inducción de la apoptosis en músculo esquelético dado que el tratamiento con rolipram revierte parcialmente la fragmentación del DNA observada en ratas sépticas. 3. El aumento de la expresión muscular de los receptores de TNF-cxasí como el incremento de la relación Bax/Bcl-2 (detectado en cáncer experimental) serían mecanismos implicados en la inducción de la aopotosis e indicarían una mayor sensibilidad del músculo esquelético a las acciones catabólicas del TNF-a. 4. En el modelo experimental de caquexia cancerosa se observa un incremento de la carbonización de proteína muscular, así como un aumento en el contenido de iNOS y de las UCPs. Estos hechos ponen de manifiesto que el músculo esquelético está sometido a estrés oxidativo durante la caquexia. 5. Los pacientes EPOC presentan unos niveles musculares de glutatión reducido (GSH) inferiores a los individuos sanos, hecho que es más acusado a medida que disminuye el índice de masa corporal. En estos pacientes se observa un aumento de la expresión muscular de yGCS que podria actuar como mecanismo compensatorio de los bajos niveles de GSH. El estrés oxidativo muscular detectado en los pacientes EPOC podria ser el responsable del aumento de la expresión génica de TNF-cxobservada en músculo esquelético. 6. En individuos sanos, el programa de entrenamiento mejora su estado rédox mientras que en los pacientes EPOC no se mejora sinó que el estrés oxidativo muscular es mucho más acusado. 7. La IL-15 se comporta como una citoquina claramente anabólica a nivel del músculo esquelético ejerciendo las siguientes acciones: revierte la degradación proteica y bloquea la apoptosis. 8. Los mecanismos asociados a las acciones terapéuticas de la IL-15 se podrían explicar a nivel de la normalización de la expresión de los receptores de TNF-cxy a la inhibición de la activación del sistema proteolítico dependiente de ATP Y ubquitina en músculo esquelético a la vez que disminuye la proteína iNOS y aumenta la expresión de UCP2 y UCP3 contrarrestando el estrés oxidativo en este tejido.

Autor: GARCIA ALVAREZ GISELA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMÁCIA.
Centro de realización: BIOQUIMICA I BIOLOGÍA MOLECULAR -FARMACIA UB..

Resumen: La decisión de una célula de iniciar el ciclo celular, ir hacia apoptosis o sobrevivir es consecuencia de la integración de diferentes señales extrace1u1ares. Los factores de crecimiento, los contactos entre células, así como diversos inductores de apoptosis regulan un complejo sistema de vías de transducción de señales que inducen la activación de un gran número de genes implicados en la respuesta celular de los procesos mencionados anterionnente. Una de las proteínas claves en la regulación del ciclo celular y/o de la entrada en apoptosis es el factor de transcripción E2Fl. Se ha sugerido que los niveles de actividad E2F 1 pudieran actuar como sensores de la entrada o parada del ciclo celular y apoptosis. En estas decisiones no sólo la actividad transcripcional es importante sino también la sincronización de E2F 1 con vías de transducción específicas. Es en este contexto en el cual se ha sugerido que la activación de la vía de la fosfatidi1inosito1 3-quinasa (PI 3-quinasa) inhibe el efecto apoptótico causado por la sobreexpresión de E2Fl. Debido a que la glicógeno sintasa quinasa-3-betá (GSK3B) es uno de los substratos fisiológicos más importantes de esta vía, se realizaron experimentos con el fin de analizar la existencia de una interacción entre estas dos proteínas. Los resultados obtenidos en esta Tesis demuestran que GSK3B fosfori1a al factor detranscripción E2F1 humano in vitro en las posiciones serina 403 y treonina 433. Estos residuos ya han sido descritos anterionnente como substratos de la fosforilación por parte del complejo quinasa TFIIH, concretamente por uno de sus miembros: cdk7. A pesar de que no podemos detectar fosfori1ación in vivo, experimentos de immunoprecipitación confinnan la existencia de una unión in vivo entre las proteínas GSK3B y E2Fl. Mediante transfecciones transitorias, 'RNA interference (RNAi)', y la utilización de inhibidores específicos de PI 3-quinasa y GSK3B, demostramos que GSK3B regula la actividad de E2Fl a través de la interacción con su dominiotransactivador y que la actividad quinasa de GSK3B no es requerida para esta Por tanto, nuestros resultados se integrarían en un modelo en el que la trans10cación de GSK3 al núcleo modularía la actividad E2FI y, en consecuencia, la decisión de una célula de entrar en el ciclo celular o dirigirse hacia la apoptosis. Históricamente, E2FI se ha relacionado exclusivamente con su función como factor de transcripción esencial para la transición Gl/S. Resultados de los últimos años han cambiado esta visión, involucrando a E2F 1 en otros procesos celulares como la parada del ciclo celular y la apoptosis. Se ha sugerido que los niveles de esta proteína pudieran ser el sensor biológico que determinaría el proceso a realizarse. También se ha comprobado la necesidad de otros efectores de transducción de señales para definir los procesos celulares. La activación de la vía de la PI 3-quinasa ha demostrado ser determinante en las decisiones celulares en las cuales E2FI participa. La activación de esta vía inhibe el efecto apoptótico de la sobreexpresión de E2Fl. GSK3~ es uno de los substratos fisiológicosde esta vía y se ha visto que participa en diferentesprocesos apoptóticos. Considerando 10 expuesto anteriormente, nuestra hipótesis de trabajo es que GSK3B es la señal, o una de las señales, que regula la actividad de E2FI y, en consecuencia, la división celular. Por tanto, los objetivos de esta Tesis son los siguientes: -1. Análisis de la fosforilación in vitro e in vivo de E2Fl por parte de GSK3(3. -2. Estudio de la interacción in vitro e in vivo entre GSK3(3 y E2Fl. -3. Estudio de la regulación del factor de transcripción E2Fl por parte de GSK3(3.

Autor: ALONSO CEREZO M. CONCEPCIÓN.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: RESUMEN: Introducción: En los últimos años se ha documentado la existencia de variabilidad en la práctica clínica. La variabilidad es un fenómeno que puede deteriorar tanto la calidad asistencial como su coste cuando se debe a un uso inadecuado de los procesos o de los recursos. Objetivo: Se plantea como objetivo general del estudio conocer las causas que determinan la variabilidad en la utilización de las pruebas bioquímicas en pacientes dislipémicos en Atención Primaria. Material y métodos: Se comparan aquellas guías de carácter internacional, que son la referencia bibliográfica de las guías españolas, y las GPC nacionales. Se trata de un estudio transversal descriptivo de la opinión de los MAPy de los coordinadores en la utilización de las pruebas de laboratorio en dislipemias del área 2 de Madrid. Se realiza un estudio longitudinal de tipo cohorte retrospectivo sobre la utilización de las pruebas de lipídicas en AP del área 2 de Madrid mediante el análisis de los registros de los pacientes. Resultados: Las recomendaciones en la valoración del riesgo cardiovascular que realizan las guías de práctica cínica analizadas no son homogéneas. Las opiniones de los médicos de Atención Primaria sobre la utilización de las pruebas de laboratorio en el cribado, diagnóstico y seguimiento de las dislipemias no son uniformes, y son más dispares cuando existe controversia entre las guías. Existe una infrautilización o sobreutilización de las pruebas de laboratorio en las dislipemias en el área 2 de Madrid en Atención Primaria. Conclusiones Las causas de la variabilidad en la utilización de las pruebas de laboratorio en la dislipemia pueden ser debidas a: primero, la ausencia de una guía unificada, adaptada y actualizada en los equipos de atención primaria del área 2 de Madrid. Segundo, la opinión de los médicos de Atención Primaria en la utilización de las pruebas de laboratorio en las dislipemias no es homogénea ni tiene un criterio único. Tercero, el paciente puede añadir pruebas no solicitadas en el volante de solicitud analítica o bien no acudir a la asistencia sanitaria. Cuarto, la solicitud de las determinaciones de laboratorio utilizando perfiles analíticos produce la realización de pruebas inapropiadas. Quinto, la dirección sanitaria del área 2 de Madrid no ha facilitado durante estos años la realización de un programa de atención clínica en prevención de riesgo cardiovascular.

Autor: FERNÁNDEZ LÓPEZ LUCENDO M. ILUMINADA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIÓN (C.S.I.C.).

Resumen: Las galectinas constituyen una familia de proteínas extremadamente conservada a través de la evolución, que son capaces de reconocer composiciones específicas de carbohidratos con la estructura canónica (GalBl-GlcNAc)n a través de un dominio de reconocimiento de carbohidratos (CRD), altamente conservado desde los invertebrados inferiores a los mamíferos. En los últimos años se han caracterizado estructuralmente diferentes galectinas. La galectina-l humana (hGal-l) y las galectinas de organismos inferiores como son las isoformas Cgl-l y Cgl-2 del hongo Coprinus cinereus permanecen aún sin caracterizar a este nivel. Este trabajo se ha dirigido fundamentalmente a la determinación de las estructuras tridimensionales de tres galectinas de este conjunto con el fin de identificar las diferencias en el plegamiento y la adaptación evolutiva de los diversos elementos de la estructura secundaria que determinan la estructura cuaternaria. En el plegamiento general de hGal-l y CG-14, once hebras B adoptan el motivo topológico de tipo "Jelly-roll", como consecuencia de una fuerte asociación cara a cara entre dos hojas B con una disposición de S hebras (Fl-FS) y 6 hebras (Sl-S6) en conformación antiparalela. Se ha demostrado que h-Gall existe como dímero en disolución mediante análisis de filtración en gel y espectrometría de masas. La estructura tridimensional muestra que la estabilización del dímero en hGal-l, se produce principalmente a través de un entramado de puentes de hidrógeno entre las hebras SI (N terminal) y Fl (C-terminal) de ambos monómeros. Esta red de puentes de hidrógeno se refuerza con la participación de las cadenas laterales de varios residuos hidrofóbicos de las hebras SI y Fl que se extienden hacia el interior de la molécula creando un núcleo hidrofóbico. En pollo se han identificado dos galectinas del tipo "proto" (CG-14 y CG-16), cuya expresión varía dependiendo del tejido y de la etapa de desarrollo. Estas proteínas presentan diferencias notables en cuanto a la especificidad de unión de oligosacáridos y regulación específica del tejido. Una característica importante de la galectina CG-14 es que, a diferencia de la h-Gall y CG-16, se encuentra en forma monomérica en disolución, a pesar de que las galectinas forman generalmente dímeros y oligómeros. Estos estados de asociación son necesarios para que tengan lugar los fenómenos de hemoaglutinación y el entrecruzamiento de ligandos dado que la mayoría de las galectinas contiene un único sitio de reconocimiento de carbohidratos (CRD) por subunidad. El entrecruzamiento con diferentes oligosacáridos desencadena diversas vías de señalización celular. Una comparación detallada de la secuencia de aminoácidos de CG-14 con galectinas típicamente diméricas, nos indica la existencia de dos residuos de cisteína en las posiciones 2 y 7, que no están conservados en hGal-l o en CG-16. En CG14, la interacción entre las dos subunidades se ve reforzada por la formación adicional de un puente disulfuro intermolecular entre los residuos de Cys7 de la hebra Sl. A pesar de que en la estructura cristalográfica la región N-terminal no está definida para los dos primeros residuos (Serl-Cys2), hemos llevado a cabo el diseño de esta región. Los modelos obtenidos apuntan que es posible la formación de un puente disulfuro intramolecular entre los residuos de cisteina 2 y 7, con valores energéticos favorables. En base a estos datos, podríamos proponer un mecanismo de regulación que permita el desplazamiento del equilibrio monómero I dimero, dependiendo de las condiciones fisiológicas del medio. Basándose en su arquitectura molecular, las galectinas rungicas de Coprinus cinereus pueden incluirse dentro de la familia de las galectinas tipo "proto" con una organización cuaternaria peculiar. Ambas comparten un plegamiento en Jelly Rol! pero con sutiles diferencias, en las regiones N- y C-terminal, que van a regular la disposición espacial de los diferentes oligómeros. La inserción de 6 residuos en el extremo amino da lugar a una nueva hebra B(FO),aumentando el número de hebras de la lámina a seis (FO-FS)disponiéndose en la interfase del dimero. Como consecuencia de ello, impide que la dimerizaci 8 ón se pr 5dd oduzca como en h-Gall, CG-14. Sin embargo, la dimerización en Cgl-l (-2) se produce a través del extremo C-terminal (His14l-AlalSO) a modo de enganche entre dos brazos, con una conformación en random coi!, que se envuelven manteniendo contactos de naturaleza fundamentalmente hidrofóbica. La escasa homología en secuencia observada entre las galectinas animales y rungicas(MAYOR12 %) no se traslada a los residuos del dominio de unión a carbohidratos, dónde se refleja una estricta conservación de los mismos. Como consecuencia de esta conservación tan selectiva, la arquitectura global del dominio CRD en hGal-l, CG-14, Cgl-l y Cgl-2 es muy similar. Los residuos conservados se localizan todos ellos en las hebras B S4, SS Y S6, sobre una de las caras cóncavas del par de láminas B.

Autor: BARRETINA GINESTA JORDI.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
Centro de lectura: HOSPITAL UNIVERSTIARI GERMANS TRIAS I PUJOL.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Autor: XIFRÓ COLLSAMATA FRANCESC XAVIER.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: Las neuronas granulares de cerebelo (CGCs) necesitan la aportación continua de estimulaciones excitadoras para sobrevivir durante el proceso postnatal de migración desde la capa granular externa hasta la capa granular interna. Si las CGCs no reciben estas estimulaciones, mueren por apoptosis. En cultivo, las CGCs mueren por apoptosis en presencia de concentraciones fisiológicas de potasio (5mM; K5) pero sobreviven en presencia de concentraciones desporalizantes de potasio (25mM; K25) o del agonista glutamatérgico N-metil-D-aspártico (NMDA). Con estos antecedentes, nosotros observamos que la adición del NMDA o de K25 durante solo 24 horas en las CGCs inmaduras (a 2 días in vitro; DIV) promueve la supervivencia de las CGCs a lo largo de los DIVs (hasta 8 DIV). Este efecto neuroprotector se produciría, al menos en parte, a través de una inhibición de la caspasa-3 (una proteasa clave en el desencadenamiento de la apoptosis). Utilizando inhibidores farmacológicos, observamos que la inhibición de la caspasa-3 por el NMDA es dependiente de la vía PI3K/Akt y de las tirosinas quinasas; mientras que la inhibición por K25 seria dependiente de la PI3K/Akt y de la CamKII. Parte de la inhibición de la caspasa-3 por NMDA o K25 se produciría por una inhibición de la vía intrínseca de la apoptosis, también llamada vía mitocondrial. NMDA o K25 son capaces de inhibir diferentes elementos proapoptóticos relacionados con la vía mitocondrial, como son: disminución del potencial transmembrana mitocondrial, activación de proteínas propapotóticas de la familia Bcl-2 y liberación de proteínas proapoptóticas mitocondriales. Además, son capaces de activar proteínas antiapoptóticas de la familia Bcl-2. El conjunto de estos procesos contribuiría en la inhibición de la caspasa-3 que observamos en presencia de NMDA o K25. Observamos también que, en K25, la vía mitocondrial seria regulada, al menos en parte, por la vía JNK. NMDA o K25 son capaces de inhibir temporalmente esta vía en una cinética anterior a las acciones sobre los diferentes elementos de la vía mitocondrial, indicando que su efecto sobre la vía intrínseca se podría dar a través de la inhibición de la vía JNK. Finalmente hemos estudiado el posible papel de la vía PI3K/Akt en los efectos neuroprotectores del NMDA o K25. Esta vía se ha revelado como clave en múltiples procesos antipoptóticos. NMDA o K25 no solo son capaces de activar esta vía, sino que su cinética de activación está acorde con la inhibición de ciertos parámetros proapoptóticos, como la inhibición de la caspasa-3. Con todos estos resultados proponemos que solo la presencia del NMDA o de K25 durante solo 24 horas es necesaria para la supervivencia, a largo tiempo, de las CGCs. Este efecto protector se daría a través de una inhibición de la caspasa-3. Esta inhibición se produciría por una parte a través de la inhibición de la vía intrínseca de la apoptosis, y por otra parte, a través de la activación de la vía de supervivencia PI3K/Akt.

Autor: ALÍA MORAL MARIO.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS.

Resumen: Los antioxidantes de la dieta se considera beneficioso para la salud debido a su potencial efecto protector frente a estrés oxidativo , el cual se haya involucrado en la patogénesis de múltiples enfermedades tales como cáncer, enfermedades coronarias y aterosclerosis.Varios estudios epidemiológicos han mostrado que dietas en las que predominan frutas, verduras u hortalizas , con altos contenidos en antioxidantes naturales , contribuyen a reducir la mortalidad en enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares, aunque sus efectos de protección frente al riesgo de cáncer son menos concluyentes.Las frutas son ricas en antioxidantes naturales como es el caso de los compuestos polifenólicos.El potencial efecto antioxidante de ciertos polifenoles de la fruta o de extractos concentrados de las mismas ha sido investigado ex vivo en cultivos celulares , e in vivo en animales de experimentación y en humanos. El objetivo general de este trabajo es la caracterización ex vivo e in vivo de la respuesta antioxidante generadora por compuestos polifenólicos de la dieta evaluada por medición de distintos biomarcadores del estado redox en condiciones basales y tras la inducción de estrés oxidativo.