BIOQUIMICA (2)

Autor: CHAIB OUKADOUR IMANE.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: Las neurotoxinas clostridiales (CNTs) producen patologías graves como el tétanos y el botulismo. En ambas patologías la muerte se produce en un porcentaje elevado y generalmente por colapso respiratorio y asfixia. Esta capacidad de causar la muerte en organismos superiores es responsabilidad de la actividad metaloproteásica dependiente de zinc que tienen estas toxinas en el dominio catalítico. Sin embargo, además de la actividad metaloproteásica también se han descubierto otras acciones farmacológicas de las neurotoxinas. Las neurotoxinas son estructuras proteicas complejas que han adquirido la capacidad de actuar en distintos sistemas a través de diferentes mecanismos de acción, como son el bloqueo de la captación de algunos neurotransmisores o bien de algunos de sus precursores. Asimismo, la toxina tetánica (TeTx) sintetizada por Cl.tetani, además de producir parálisis espástica, tiene otros efectos sobre diversos enzimas, no explicables por esta acción proteásica. En la presente tesis se describe la activación de vías de señalización en tejido nervioso por toxina tetánica (TeTx) como por su dominio C-terminal de 50 kDa de la cadena pesada (Hc). Estas vías de señalización incluyen la fosforilación del receptor TrkA y de la fosfolipasa Cgamma-1 (PLCgamma-1), la translocación de las isoformas clásicas y nuevas de la proteína cinasa C (PKC) y la fosforilación de cinasas reguladas por señales extracelulares (ERK-1/2) en sinaptosomas de encéfalo de rata (Trabajo 1). Experimentos similares en cultivos primarios de neuronas corticales demuestran la activación de las vías Akt y ERK1/2 (trabajo 2). Se presentan también trabajos que apuntan hacia una neuroprotección ejercida por el fragmento NO TÓXICO Hc frente a la muerte apoptótica de las neuronas granulares de cerebelo (CGN) en concentraciones bajas de potasio. Creemos que esta neuroprotección puede ser debida a la interacción del fragmento Hc con el receptor TrkB, receptor del factor de crecimiento BDNF, produciendo la activación de al menos tres vía de señalización: fostatidilinositol-3-quinasa (PI-3K)/proteína quinasa B, Ras/ERK and PLCgamma/PKC, tal como lo hace el BDNF. También caracterizamos la acción de bloqueo de la caspasa-3 en los mecanismos de protección celular (trabajo 3). Por último, y en el mismo modelo anteriormente mencionado, CGN, demostramos también el efecto neuroprotector del fragmento Hc-TeTX frente a la muerte apoptótica inducida por el MPP+, disminuyendo la muerte celular y la condensación de cromatina. En el proceso apoptótico inducido por el MPP+ se produce la translocación de Bax de la fracción citosólica a la fracción mitocondrial, la liberación de citocromo c en el citoplasma así como la activación de la pro-caspasa-3. Este proceso apoptótico es inhibido por el fragmento Hc-TeTx (Trabajo 4). El conjunto de estos trabajos apunta a que el fragmento Hc-TeTx podría utilizarse como una neutrofina (NGB, BDNF, NT/3,..) y producir acciones anti-apoptóticas terapéuticamente dirigidas.

Autor: VILADEVALL MASBERNAT LAIA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Autor: TRIGO GALVÁN M. VICTORIA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD C. BIOLOGICAS (UCM).

Resumen: Las aportaciones originales del estudio se pueden resumir en lo siguiente: 1.Que en el adipocito de la rata normal, el GLP-1, como la insulina, estimula la actividad de ciertas quinasas, de las cuales, las MAPKS y alguna isoforma de la PKC podrían ser determinadas en su acción lipolíticas; y que a diferencia con la insulina, un incremento en la activación de la PI3K,MAPKS, pero no p70s6k,sería esencial en su efecto lipogénico. 2.Que los péptidos homólogos del GLP-1, EX -4 y Ex9, ambos son miméticos del mismo en cuanto a su acción lipogénica, la cual requiere un incremento en la actividad no sólo de las mismas quinasas, sino también de la p70s6k.Y que de las dos exendinas, sólo la Ex -4 es lipolítica, pero a diferencia del GLP-1 , en su acción no participa la p70s6k. 3.Que en el adipocito de un modelo experimental de diabetes Tipo 2 en la rata,no sólo la actividad basal de la PI3K es mayor que en el animal normal, sino también el nivel incducido por GLP-1.Además , a diferencia con la rata normal, el GLP-1 estimula la actividad PKB, pero no modifica la de la p70s6k ni , al igual que la insulina, la de las MAPKs .Y que el efecto lipolítico del GLP-1 y de la Ex -4 está mantenido pero, a diferencia con la insulina, las células son insensibles a ambos con relación a la lipogénesis

Autor: GAVETE LOZANO LUCÍA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La subnutrición mantiene una elevada prevalencia en el mundo. Constituye, por tanto, un problema sanitario muy significativo. La subnutrición establecida durante etapas de inmadurez repercute negativamente sobre muchos procesos fisiológicos y metabólicos que implican a diferentes sistemas del organismo: inrnunitario, nervioso, cardiovascular, etc. Como consecuencia, la subnutrición puede favorecer, o incluso provocar directamente, el desarrollo de una amplia variedad de patologías, como por ejemplo la diabetes de tipo 2. En este trabajo, hemos aplicado un modelo de subnutrición que resulta de especial interés para el estudio de la subnutrición a la que actualmente están sometidos millones de personas en países no desarrollados y en muchas sociedades marginadas, ya que se trata de un modelo que se ajusta más a las características de estos individuos: se trata de una restricción completa, es decir, proteico-calórica, que se inicia en la etapa más sensible del desarrollo, la gestación y se prolonga a lo largo de toda su vida. Las ratas subnutridas son normotolerantes a la glucosa, a pesar de que presentan hipoinsulinemia; por tanto, nos encontramos con un cuadro de hipersensibilidad a la insulina. Hemos realizado un estudio en los músculos esquelético y cardíaco de las ratas adultas para analizar los posibles cambios moleculares que explicasen este aumento de su respuesta a la insulina y además hemos querido investigar si la hipersensibilidad que presentan las ratas subnutridas cuando son adultas, ya se encuentra establecida durante su lactancia, concretamente a los 10 ddV, en el músculo esquelético y el hígado. Así encontramos que: - La subnutrición aumenta el estímulo de la insulina sobre la translocación de los transportadores de glucosa en el músculo de la rata adulta: en el músculo esquelético se incrementa la translocación del GLUT-4 y esto parece relacionado con un incremento de su contenido en receptores de insulina y en el músculo cardíaco, se incrementa la translocación del GLUT-I, probablemente como consecuencia de un aumento de la actividad de la PI 3-kinasa y de la Akt. - Las ratas lactantes que se han subnutrido desde el último tercio de la gestación son normotolerantes a la glucosa a pesar de su escasa respuesta insulino-secretora. Ello se debe, al menos en parte, a un incremento de su capacidad de respuesta a la insulina sobre la translocación del GLUT-4, lo cual está ligado a un aumento del número de receptores de la hormona así como de varias etapas de su vía de señales posteriores al receptor. - La subnutrición establecida desde el último tercio de la gestación conduce a un aumento de GLUT-2 y GLUT-I en el hígado de la rata lactante, así como de algunas señales de la vía insulínica. Es posible que ello tenga como consecuencia una hipersensibilidad frente a algunas de las respuestas hepáticas hormonales.

Autor: BUSTAMANTE RODRÍGUEZ LEYLA YOLANDA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGÍCAS.

Resumen: Plasmadium falciparun es el agente causante de la forma más grave de malaria en humanos.A pesar de la cantidad de información que pasemos acerca del parásito y el vector que la produce, esta enfermedad causa por año entre 300 y 600 millones de enfermos nuevos y entre 1 y 3 millones de muertes.Por esta razón son cada vez más necesarias los estudios dirigidas o comprender las bases moleculares que soportan la compleja biología del parasito. En el presente trabajo se ha desarrollado una técnica de PCE cuantitativo en tiempo real implementando el uso de sondas tallo-bucle (molecular beacons)para la detección y cuantificación de la expresión del ARNm en P.Falciporum.Por medio de esta metodología se han determinado los perfiles de transcripción de los genes de la cascada anti-oxidante del parasito para evaluar su función dentro del ciclo intraeritrocítoc.Así mismo se ha estudiado el efecto de la transcripción de estos genes con el fin de conocer las diferencias existentes en la regulación genica de la cascada antioxidante entre una estirpe P.Falciporum resistente al fármaco y una sensible.Los resultados indican que las estirpes regulan su ambiente reductor de manera distinta , lo que sugiere que el control transcripcional de la cascada antioxidante puede explicar las diferentes susceptibilidades de P.falciparum a cloroquina.

Autor: SÁNCHEZ MARTÍN LORENA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE FARMACOLOGÍA Y TOXICOLOGÍA.

Resumen: La integrina LFA-1 (alfaLbeta2, CD11a/CD18) es una molécula clave en la migración linfocitaria y en la presentación antigénica. Estos procesos llevan asociados además una polarización de la morfología del linfocito inducida por señales mediadas por LFA-1. En este contexto, la reorganización del citoesqueleto celular desempeña un papel regulador tanto de la actividad de LFA-1 como en los cambios morfológicos que media. Así las GTPasas Rho y Rac, debido al control que ejercen sobre la organización citoesquelética, son buenos candidatos reguladores de la actividad de LFA-1 y de las señales mediadas por esta integrina. Los resultados presentados en esta Tesis demuestran que la inhibición de la GTPasa Rho, de su efecto ROCK o de la GTPasa Rac induce la despolimierización parcial de los filamentos de actina, permitiendo la activación de LFA-1 por agregación en la membrana sin inducirse incrementos en la afinidad por su ligando. Además la inhibición de Rho y ROCK, induce un incremento en la adhesión a ICAM-1 y los cambios en la morfología mediados por LFA-1. La inhibición de Rho, ROCK o Rac induce la activación de la tirosina quinasa PYK2 mediada por la interacción de LFA-1 activa con su ICAM-1 y no de forma directa. Estos estudios aportan además datos sobre la señalización de LFA-1 hacia el citoesqueleto. Así LFA-1 induce la activación transitoria de la GTPasa Rac, necesaria para la inducción de cambios morfológicos. En esta señalización hacia Rac, LFA-1 modula la actividad de Rac a través de dos vías diferenciadas; una induce la activación de Rac a través de la fosforilación y activación del GEF Vav, mientras que la activación más tardía del eje PI3K/Akt inducida también por LFA-1, inactiva a Rac.

Autor: TORRES BACETE JESÚS.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UCM.

Resumen: En este trabajo de investigación se describe el proceso de clonación y caracterización de los genes pva y aac que codifican las enzimas penicilina V acilasa de S.lavendulae (S/PVA) y aculeacina A acilasa de A.utahensis (AuAAC) respectivamente. Así mismo, se describe la expresión de ambos genes en Streptomyces lividans y la caracterización funcional, como biocatalizadores en las reacciones de hidrólisis de penicilinas naturales, de las enzimas S/PVA y AuAAC . Finalmente se propone un método de purificación para ambas enzimas y se realiza une estudio de caracterización extructural tanto de la S/PVA recombinante como de la AuAAC recombinante.

Autor: MARTINEZ ALFARO BIENVENIDA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La hormona tiroidea juega un papel fundamental en desarrollo cerebral, sin embargo, la implicación de la mitocondria en la acción de esta hormona en el cerebro ha sido muy discutida y durante mucho tiempo se ha considerado este órgano como negativo. Nuestro laboratorio ha demostrado con anterioridad que en el cerebro de los animales hipo tiro ideo s la expresión del genoma mitocondrial está disminuida durante el desarrollo. Nuestro objetivo en este trabajo ha sido realizar un estudio detallado del efecto de la hormona tiroide sobre la actividad mitocondrial en diferentes áreas cerebrales. Nuestros resultados muestran claramente que la hormona tiro idea regula la actividad de las mitocondrias libres solo en dos áreas del cerebro: corteza cerebral y estriado. Así solo hemos observado en neonatos hipotiroideos una disminución de la capacidad de fosforilación oxidativa, actividad del complejo 1 y expresión del genoma mitocondrial en estas dos áreas, no observándose cambio alguno en el hipocampo, cerebelo, tálamo, mesencéfalo y tallo cerebral. En contraste con estos resultados no se han observado cambios en las mitocondrias sinápticas de la corteza cerebral. El estudio de la incorporación de 13C desde la- glucosa a diversos metabolitos en el cerebro mediante resonancia magnética nuclear (RMN), sugieren un menor consumo de oxígeno por parte de las neurona s de la corteza cerebral. Estos resultados ponen de manifiesto una acción diferencial de T3 sobre las mitocondrias de los terminales sinápticos y lo de los cuerpos neuronales. Finalmente todos nuestros resultados son compatibles con la idea de que T3 regula la actividad mitocondrial, al menos en parte, a través de la regulación de la expresión del genoma mitocondrial.

Autor: FONT LLITJÓN MARIONA.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: CGMM-INSTITUT DE RECESCA ONCOLÓGICA.

Autor: GUZMÁN ARÁNGUEZ ANA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD CC. QUÍMICAS.
Centro de realización: FAC. CC QUÍMICAS DPTO. BIOQUIMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR I.

Resumen: Las anexinas son una famiba de proteínas caracterizadas por su capacidad para unirse a membranas biológicas en presencia de calcio con núcleo proteico conservado y una región N-terminal muy variable en secuencia y longitud. Aunque in vitro se les han asignado una gran variedad de funciones, todavía se desconoce cual es el papel fisiológico concreto de cada anexina. Uno de los miembros más abundantes de esta familia es la anexina A5. Con objeto de profundizar en el conocimiento de esta proteína se ha llevado a cabo la expresión y caracterización estructuralde la anexina A5 humana, la anexina A5 de pollo, un mutante de ésta que carece de 8 residuos en la región N-terminal, así como una proteína quimérica constituida por el extremo N-terminal de la anexina A5 de pollo y el núcleo proteico de la anexinaA5 humana. Cabe resaltar el cambio conformacional que.se induce tras la unión a calcio y a pH ligeramente ácido en el dominio III de las anexinas recombinantes y que se traduce en una mayor exposición del Trp 187. Dicho cambio se produce igualmente tras la unión a vesículas de fosfatidilserina en presencia de calcio, teniendo en cuenta que esta capacidad de unión a vesículas es la principal característica de las anexinas, se ha determinado el valor de Kcty el número promedio de fosfolípidos afectados por la interacción y se ha analizado la influencia de la concentración de calcio en el proceso. AdicionahnenÚ;se ha estudiado iacapacidad de estas proteínas de inducir la agregación devesículas, observándose que a diferencia de la anexina A.5humana,laanexina A5 de pollo es capaz de agregar vesículas a través de un mecanismo mediado por interacciones proteína-proteína, donde el extremo N-terminal desempeña un papel fundamental. Por otra parte, se ha abordado el estudio de uno de los aspectos funcionales menos conocidos de las anexinas, su relación con procesos de proliferación, diferenciación y transformación maligna. Para ello se han empleado como sistema I modelo varias líneas celulares de adenocarcinoma de colon, induciéndose su diferenciación a través de distintas vías, lo que ha permitidoestableceruna relaciónentrela diferenciacióncelulary el incrementode la expresiónlas anexinas analizadas (Al, A2, A5 y A13). Junto con los cambios en la expresión de estas proteínas se ha analizado su localización subcelular, la cual se modifica tras la exposición a butirato adquiriendo las anexinas una tinción citoplasmática asociada a gránulos y estructuras membranosas, incrementándose además la secreción de estas proteínas.

Autor: MARTÍN LORENZO DIANA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA , UCM..

Resumen: El virus respiratorio sincitial humano (VRSH)es el principal agente causante de infecciones graves del tracto respiratorio inferior en niños de corta edad, en adultos inmunodeprimidos y en ancianos, produciendo bronquiolitis y neumonias. El VRSHpertenece a la familia Paramyxoviridae y al género Pneumovirus. El genoma del VRSHestá constituido por una única molécula de RNAde polaridad negativa, no segmentada que codifica 11 proteínas vírales. La protelna F del virus respiratorio sincitial humano media la fusión de las membranas viral y celular. Es una glicoproteina tipo I que se sintetiza como un precursor inactivo (FO)que, posteriormente, experimenta un doble corte proteolitico dando lugar a dos cadenas (F1 y F2) unidas por puentes disulfuro. Preparaciones de proteinas F y FTM- (carece de la región transmembrana) vistas al microscopio electrónico, presentan dos tipos de conformaciones: conos y varillas con cabeza globular. En el caso de la proteína FTM-, los conos son formas no agregadas y las varillas con cabeza globular son agregados en forma de rosetas. El tratamiento de esta proteína con tripslna, hace que únicamente aparezcan rosetas formadas por varillas con cabeza globular. Este cambio estructural se debe al doble procesamiento del precursor que no ocurre eficentemente en el interior de la célula. La agregación de la proteína FTM-probablemente ocurre por ínteracciones entre los péptídos de fusíón de moléculas FTM-que son expuestos tras el completo procesamiento proteolítico. Debido a que la exposición del péptido de fusión es un evento clave en el proceso de fusión de membranas, los cambios asociados con el procesamiento de FTM-serian un buen reflejo de lo que ocurriria en la proteina F tras su activación para la fusión de membranas. Con el fin de estudiar en detalle los requerimientos del péptido de fusión para ios cambios asociados al procesamiento de la proteína Fm- y la fusión de membranas, se introdujeron una serie de mutaciones en esta parte de la molécula. Cuando las mutaciones introducidas fueron delecciones o sustituciones de aminoácidos que alteran el carácter quimico de residuos especificos del péptido de fusión, se inhibió la agregación de la proteina FTM-tras el procesamiento proteolítico sin modificar significativamente la hidrofobicidad del péptido de fusión. Además, estas mutaciones impidieron el cambio conformacional en la proteina después del completo procesamiento, permeneciendo en forma de conos individuales no agregados. Estos resultados indicaron que se requiere un péptido de fusión activo para que exista cambio conformacional en la proteina FTM- tras su activación pordoble procesamiento proteolitico. Cuando las mismas mutaciones se introdujeron en la proteína F y se ensayaron mediante experimentos de formación de síncitlos, solamente las mutaciones que impidíeron el cambio conformacional tras el doble corte de FTM- inhíbieron la formación de síncitios. Estos resultados indícan que, además de la hldrofoblcidad, existen requerimientos de secuencia en el péptido de fusión para la actívación de la proteina F del VRSH.Esto concuerda con la alta conservación de secuencia del péptido de fusión de los distintos pneumovirus comparado con otras regiones hidrofóbicas de la proteina F

Autor: GARCIA DIEZ MARTA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS.

Resumen: La angiogénesis es un proceso de generación de nuevos capilares sanguíneos.En el adulto, el nivel de proliferación de las céluclas endoteliales es muy bajo comparado con el de otros tipos celulares presentes en el organismo.Una excepción fisiologíca a esta regla,esla cicatrización de heridas.La angiogénesis, es un evento crítico en el proceso de reparación cutánea, ya que el deterioro de la capacidad de respuesta angiogénica es un factor determinante para el fracaso de la cicatrización en su conjunto.Por otro lado, el crecimiento tumoral y la formación de metástasis son procesos patológicos, que al igual que la cicatrización, dependen fuertemente del éxito con el que se establezca la angiogénesis para su evolución.Así , la existencia de una extensa red de capilares que proporcione al tumor nutrientes y oxígeno, es fundamental para su crecimiento. En el presente trabajo, se ha explorado la posibilidad de modular , a través , de estrategias de transferencias génica, el proceso de angiogénesis, estimulándo en el contexto de cicatrización o reprimiéndolo durante el desarrollo tumoral.

Autor: GONZÁLEZ IZQUIERDO JOSÉ MANUEL.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS CSIC MADRID..

Resumen: En esta Memoria de Tesis Doctoral se han empleado condiciones experimentales que simulan la osmolaridad y el aglomerado ambiente del citoplasma bacteriano para el estudio del ensamblaje de la proteína esencial de división celular de E.Coli FtsZ. FtsZ (40 Kda), en presencia de GDP , tiene una débil tendencia a oligomerizar en disoluciones diluidas que contienen concentraciones apropiadas de osmolitos fisiológicos.Sin embargo en presencia de GTP, FtsZ ensambla de manera cooperativa para formar filamentos dinámicos finos relativamente pequeños (1-2 10-6Da). La aglomeración macromolecular favorece el ensamblaje GTP-dependiente de FtsZ en polímeros bidimensionales dinámicos que desensamblan después de agotado el GTP.Las imágenes de microscopía de fuerzas atómicas revelan que estos polímeros adoptan la estructura de cintas de una subunidad de alto . Comparadas conlos filamentos de FtsZ observados in vitro en ausencia de aglomeraciónn macromolecular, las cintas presentan un retraso y disminución de la actividad GTP asa y una disminución en el intercambio de GTP dentro del polímero. Proponemos que, en el aglomerado citoplasma bacteriano y en condiciones que promueven el ensamblaje, los filamentos de FtsZ tienden a alinearse espontáneamente formado las cintas dinámicas.Estas estructuras podrían formar parte del anillo Z que se forma en el septo bacteriano en el momento de la división celular bacteriana, sin necesidad de interacciones específicas adicionales. Postulamos que , en células en reposo (no-división), deben existir mecanismos de regulación que eviten el ensamblaje de las cintas de FtsZ (y del anillo Z), lo que evitaría la formación del septo a destiempo durante el ciclo de división.

Autor: JIMÉNEZ VIDAL MAITE.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: CGMM - INSTITUT RECERCA ONCOLÓGICA DEPTO. BIOQUIM Y BIOL. MOLECULAR - UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: Los transportadores heteroméricos de aminoácidos (HAT) están formados por una subunidad ligera (LSHAT) y una subunidad pesada (HSHAT) unidas entre ellas mediante un puente disulfuro. Se han descrito dos HSHAT; rBAT y 4F2hc. Son glicoproteínas de membrana de tipo II, con un extremo N-terminal intracelular, un único dominio trans-membrana y un extremo C-terminal extracelular homólogo a las alfa-amilasas. Hasta el momento se han identificado 9 LSHATS: 6 se unen a 4F2hc para dar lugar al transportador funcional (LAT-1, LAT-2, y+LAT-1 y y+LAT-2, asc-1, xCT) una se une a rBAT (bo+ AT) y existen dos miembros "huérfanos" (asc-2, AGT-1), que no interaccionan con las HSHATs descritas y que quizás se unen a HSHATs todavía por identificar. Las diferentes LSHAT presentan las siguientes características estructurales y funcionales comunes: 1,- Son proteínas altamente hidrofóbicas no glicosiladas. 2,- Presentan una predicción de estructura de 12 segmentos trans-membrana, con extremos N y C-terminal intracelulares. Esta topología se ha demostrado para la subunidad ligera xCT, que presenta además un reentrant-loop, entre los segmentos trans-membrana 2 y 3, con evidencias funcionales de su proximidad a la vía de translocación de sustrato. 3,- El residuo de cisteina conservado que interviene en la formación del puente disulfuro se encuentra localizado en el dominio extracelular putativo II. 4,- Necesitan la coexpresión de la HSHAT para alcanzar la membrana plasmática en un sistema de expresión heterólogo. 5,- Confieren la especificidad de transporte al complejo heteromérico, representando una gran diversidad de sustratos y acoplamiento a iones: aminoácidos neutros de tamaño grande (LAT-1, LAT-2), pequeño (asc-1, LAT-2), cargados negativamente (xCT) y aminoácidos básicos y neutros (y+LAT-1, y+LAT-2 y bo,+AT). 6,- Se comportan como intercambiadores obligatorios con una estequiometría 1:1 y con una afinidad intracelular aparente por el sustrato mucho menor que la extracelular, excepto para el caso asc-1/4F2hc, y quizás asc-2, que se comporta como un intercambiador no obligatorio. 7,- La LSHAT es capaz de mediar el transporte en ausencia de la subunidad pesada cuando se consigue expresarla en superficies, como ocurre en un sistema reconstituido. rBAT (codificada por el gen SLC3A1) y bo,+AT (codificada por el gen SLC7A9) forman el sistema bo,+, que transporta aminoácidos neutros y básicos. Defectos en este sistema de transporte causan cistinuria. La cistinuria (OMIN 220100) e una enfermedad hereditaria, autosómica recesiva, causada por el defecto en la absorción intestinal y la reabasorción renal de aminoácidos básicos (lisina, arginina, ornitina) y cistina. Debido a su baja solubilidad, la cistina precipita formando cálculos a lo largo del sistema urinario. Los cálculos causan obstrucción, infecciones y, en último término, insuficiencia renal. Mutaciones en SLC3A1 causan cistinuria tipo I (recesiva completa: los heterozigotos no presentan hiperexcreción de aminoácidos) y mutaciones en SLC7A9 causan cistinuria tipo no I (recesiva incompleta: los heterozigotos hiperexcretan los cuatro aminoácidos en menor medida que los homozigotos cistinúricos y raramente llegan a desarrollar cálculos). En esta tesis se ha realizado un análisis mutacional de rBAT (SLC3A1) en familias cistinúricas, y estudios de relación estructura-función con las LSHATS bo,+AT y xCT. Debido al solapamiento de fenotipos encontrado en los portadores con mutaciones en SLC3A1 o SLC7A9, se ha establecido una nueva clasificación de la cistinuria, basada en datos genéticos. Los estudios de relación estructura-función han dado lugar a la identificación de un residuo en xCT (C327) próximo al lugar de unión y/o translocación de sustrato, y al determinación de la unidad funcional mínima en xCT y bo,+AT, 8 formada 293 por una única subunidad ligera. Con estos resultados, y con los conocimientos que tenemos de esta familia de transportadores, proponemos que en una subunidad ligera coexisten dos vías de translocación asimétricas, una para el influjo, y otra para el flujo.

Autor: MORÁN BERMEJO MARÍA.
Año: 2004.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA UCM..

Resumen: RESUMEN:La realización de ejercicio físico de manera regular induce una serie de adaptaciones del corazón que llevan a que los individuos que son fisicamente activos presentan una menor incidencia de enfermedades cardiovasculares y una menor mortalidad por este tipo de patologías. Las bases moleculares de la cardioprotección por el ejercicio no se conocen con claridad. Modificacioners de diversos sistemas celulares han sido implicados en dicha cardioprotección: aumentos de la capacidad antioxidante del miocardio, incrementos en los niveles de expresión de las proteínas de choque térmico (HSP), y adaptaciones de los sistemas reguladores del calcio. Por otro lado, algunos autores han propuesto que la realización de ejercicio exhaustivo puede ocasionar daño cardíaco. Por lo que la realización de ejercicio en eventos de resistencia, fenómeno que se ha ido generalizando entre deportistas recreacionales en los últimos años, puede tener una repercusión negativa sobre el corazón de los atletas populares. En la presente tesis se ha abordado el estudio de las adaptaciones moleculares que expeñmenta el miocardio de rata entrenada en tapiz rodante, y su papel en el fenómeno de cardioprotección frente al proceso de isquemialreperfusión. Asimismo, se abordó el análisis del posible de daño cardiaco empeñmentado por corredores del Maratón popular de Madñd en los años 1997 y 1998. Los resultados obtenidos mostraron adaptaciones de algunos elementos reguladores del calcio y del sistema de defensa antioxidante en el miocardio de ratas entrenadas durante 24 semanas. Asimismo, se encontró una mejor recuperación metabólica de los corazones de ratas entrenadas sometidos a isquemia/reperfusión. Los resultados obtenidos en los estudios de daño cadiaco en humanos mostraron que la realización de ejercicio exhaustivo por parte de deportitas jóvenes y mayores sanos, no ocasiona daño cardiaco alguno.

Autor: PINO OSUNA CARMEN MARIA.
Año: 2004.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La bacteria fototrófia Rhodobacter capsulatus E1F1 posee un sistema de reducción del nitrato de tipo asimilador, que se induce en presencia de nitrato/nitrico y se regula negativamente por amonio.Mediante la utilización de tipo asimilador, que se induce en presencia de nitrato/nitrito y se regula negativamente por amonio. Mediante la utilización de oligonucleótidos degenerados se ha amplificado por PCR un fragmento de 0,4 Kb del gen nasA de R. Capsulatus, que ha sido utilizado como sonda para escrutinio de una librería genómica, lo que ha permitido la identificación de dos cósmidos que contienen la región nas. Las secuenciación y el análisis de aproximadamente 17kb correspondientes al DNA exógeno de uno de estos cósmicos ha revelado la presencia de 14 genes , la mayoría relacionados con la asimilación del nitrato y nitrito. La región nas secuenciada comprende los genes reguladores nasT , nasS y nsrR. Tres genes estarían implicados en el transporte de nitrato/nitrito: nasF codificaría el componenete los genes periplásmico, nasE el componente integral de membrana y nasD la subunidad citoplásmatica con actividad ATPasa. Tras estos genes se localizan los genes estructurales nasA, nasB y nirD que codifican las enzimas nitrato y nitrito. El gen cysG implicado en la síntesis de sirohemo y el gen moaD que participa en la síntesis del cofactor de molibdopterina y guanina también se localizan en esta regién. El gen chrA codificaría una proteína homóloga a un transportador de cromato y el gen nnrS una proteína de menbrana que problamemente participa en la taxis hacia el nitrato. Por último , en esta región también se localiza el gen hcp que codifica una posible proteína de centro híbrido .La función fisiológica de esta proteína ha sido un enigma hasta que recientemente se ha demostrado que la proteína HCP de E.coli posee actividad hidroxilamina reductasa. Mediante RT-PCR e hibridación Northerm se ha demostrado que los genes estructurales de las enzimas nitrato reductasa y nitrito reductasa, los genes del sistema de transporte de nitrato y el gen cysG se contranscriben , en determinadas condiciones metabólicas, junto a los genes reguladores nsrRnasTS. Por el contrario, los genes hcp,chrA y nnrS son monocistrónicos.

Autor: PASCUAL MARTINEZ ROBERTO.
Año: 2004.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE [www.umh.es].
Centro de lectura: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR.

Resumen: El objetivo fundamental de este trabajo es conocer las interacciones moleculares que tienen lugar entre distintos componentes de las biomembranas y más específicamente , entre diferentes proteínas y paptidos consistemas modelo de membrana. Los paptidos seleccionados para su estudio han sido tres fragmentos paptidicos de la glicoproteína Gp41 , una proteína de fusión que se encuentra en al envuelta del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y un fragmento de la proteína prion PrPc. La Tesis se ha dividido en dos capitulos claramente independientes , unos de ellos centrado el papel de los diferentes fragmentos de Gp41 durante el proceso de fusión del virus y el otro en el estudio del fragmento peptidico de la PrPc y suposible implicación en el mecanismo de toxicidad. Para el estudio de ambos sistemas se ha utilizado una metodología similar. En todos los casos se ha caracterizado el grado de interacción del peptido con la membrana lipídica y la perturbación de la misma utilizando diferentes técnicas biofísicas , como la espectroscopía infrarroja, la espectroscopía de fluorescencia y la calorimetría diferencial de barrio. La utilización de todas estas metoldologías ha permitido el distinguir las características moleculares del efecto de los diferentes péptidos sobre la organización y estabilidad de la bicapa lipída , así cmo su correlación con los posibles cambios estructurales ocurridos en al proteína. Los resultados muestran que los fragmentos peptídicos de Gp41 interaccionan preferentemente con lípidos aniónicos y que dicha interacción induce un cambio conformmacional en los péptidos y desestabiliza la membrana. Estos resultados apoyan la hipótesis de que estas regiones de la proteína parcipan de forma activa en el mecanismo de fusión de las membranas viral y celular. Respecto al fracmento peptídico de la PrPc los resultados indican que el paptido muestra una gran afinidad por todo tipo de membranas localizándose preferentemente cerca de la superficie y modificando su conformación.

Autor: GONZÁLEZ GACIO GLORIA.
Año: 2004.
Universidad: VIGO [www.uvigo.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Autor: ASENCIO SALCEDO CLAUDIO.
Año: 2004.
Universidad: PABLO DE OLAVIDE [www.upo.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Resumen: El coenzima Q es un lípido isoprenoide implicado en el transoporte de electrones en la cadena respiratoria mitocondrial. Este lípido actúa en la defensa frente el estrés oxidativo así como en el control de la proliferación celular.La síntesis de ubiquinona ha sido objeto de estudio en organismos procariotras como Escherichia coli y en eucariotas unicelulares, tales como Saccharomyces cerevisiae. El trabajo realizado ha estudiado la regulación de la síntesis de coenzima Q en un modelo animal, en concreto el nematodo Caenorhabditis elegans. A lo largo del estudio realizado se han identificado los genes implicados en la síntesis de coenzima Q en el nematodo, así como su influencia en el estrés oxidativo y el envejecimiento.Se ha estudiado la función de estos genes mediante complementación funcional de mutantes en la síntesis de coenzima Q en la levadura S. cerevisiae. Por otro lado, se ha estudiado la regulación de la expresión de los genes de síntesis de coenzima Q mediante el empleo de fusiones de los genes de síntesis de Q con la GFP (green fluorescent protein). Esta herramienta ha permitido conocer el patrón de expresión de estos genes a lo largo del desarrollo y el envejecimiento de C. elegans y deducir su posible modo de regulación.Igualmente, se ha caracterizado el mutante coq-8 (ok840) de C. elegans, el cual es deficiente en la síntesis de ubiquinona.Como consecuencia de estos estudios se establece un modelo de regulación de la síntesis de ubiquinona en el desarrollo y el envejecimiento de C. elegans.

Autor: FERRER COSTA CARLES.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE BIOLOGIA DE LA UNIVERSITAT DE BARCELONA.
Centro de realización: DEPARTAMENT DE BIOQUÍMICA I BIOLOGÍA MOLECULAR.

Resumen: La publicación del genoma humano lleva asociada la aparición de una gran cantidad de datos. Entre estos cabe destacar las relaciones con la variabilidad intraespecífica, en particular las variaciónes puntuales o SNPs (single nucleotide polimorphism). Esta variabilidad es la base de la transmisión de enfermedades monogénicas, así com la susceptibilidad a padecer enfermedades poligénicas. Una comprensión profunda de la relación entre patología y mutaciones puntuales tiene que provenir de la compresión del impacto a nivel molecular que tienen estas mutaciones. Con este objetivo se construyó una base de datos de mutaciones puntuales patològicas en proteínas humanas y se estableció un modelo de mutación neutra derevado del análisis de los alineamientos múltiples de secuencia. Con los grupos se hizo un análisis comparativo de las distribuciones de hasta 23 parámetros distintos que se agrupan tres bloques distintos, parámetros estructurales, evolutivos y basados en propiedades de los aminoácidos. La observación y el análisis de estas distribuciones muestra que hay un claro comportamiento diferencial de entre las mutaciones neutras y patológicas. A la vista de estos resultados, el siguiente paso fue probar parámetros para la anotación o predicción de mutaciones puntuales. Se usaron redes neuronales, con tal de combinar todos los parámetros usados en la caracterización de las mutaciones puntuales. Con la red mas optimizada se consigue un acierto total de 87% y un enriquecimiento de la predicción sobre el azar del 73%. En comparación con los otros métodos se ve una mejora en las prediciones que se ve una mejora en las prediciones que es seguramente atribuible a la bondad en el comportamiento de las redes neuronales. Hacer accesible el uso de esta metodología mediante el diseño de un servidor web fue siguiente paso a abordar en esta tesis. El servidor se llama Pmut es accesible vía internet en la dirección http://mmb2.pcb.ub.es:8080/Pmut. Posteriormente al proyecto Genoma humano se inicio la secuenciación de otras espécies, especialmente animales modelos. El estudio de cuantransferibles pueden ser las herramientas derivadas para la anotación de mutaciones puntuales humanas en la anotación de mutaciones en animales fue el siguiente paso abordado en la tesis. De esta manera se generó una base de datos de mutaciones patologícas en otras especies y se derivaron las neutras correspondientes. De estas mutaciones la mayoría corresponden a ratón. Como modelo humano se usó la base de datos de mutaciones puntuales humanas. Se procedió a hacer uso de las redes neuronales par poner a punto procedimientos de predición. Se usaron los datos humanos para entrar la red para predecir los datos de ratón y los resultados aunque son inferiores que en humanos son buenos, ya que obtenemos un acierto total de 86% y un enriquecimiento sobre el azar del 53%. La última que nos hemos formulado en esta tesis es, cuando una mutación que es patológica en una proteína humana lo seguira siendo en proteínas homólogas?. Esta cuestion aparece con mas fuerza cuando analizamos los alineamientos múltiples de secuencia y el residuo que es patológico en humanos aparece como neutro en la misma posición en otras proteínas. Estas mutaciones se llaman CPDs (compensated pathogenic deviations). Los estudios recientes explican la existencia de estas mutaciones por la presencia de otras mutaciones compensatorias en posiciones cercanas a la CPD, pero nos planteamos si existen otras razones que expliquen este hecho. Así nos decidimos a explorar este fenómeno en nuestra base de datos de mutaciones puntuales patológicas humanas. Con las CPDs derivadas se hicieron distintos análisis a nivel se secuencia y de patológicas o que se encuentran en zonas menos lesivas para la estructura.