BIOQUIMICA (3)

Autor: VILLAR GAREA ANA.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA [www.uv.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUIMICA.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE INVESTIGACIÓN ONCOLÓGICAS C.N.I.O. MADRID.

Resumen: Las alteraciones genélicas y la desregulaclón de tos mecanismos epigenéticos colaboran en la Iniciación y progresión del cáncer. Los defectos epigenéticos son potencialmente reversibles, lo que ha suscitado la búsqueda de fármacos que selectivamente causen cambios en los patrones epigtmélicos de las células tumareles, oon la consiguiente diferenciación, muerte y/o parada de crecimiento de las mismas. Se han estudiado especialmente inhibidores de metillransferasas deDNA (DNMT) e inhibidores de desacetilasas de histonas (HDAC) dependientes de Zn(II). Los inhibidores de DNMTs posibilitan la reactivación de ganessilonciados mediante hipermetilación de la Isla CpG de su promotor y los inhibidores de HDAC. de ganes silancfados vla hipoacetilación de las histonas élsociadas a su promotor. Apesar de sus prometedores efectos en cultivos celulares, muchas de estas sustancias presentan inconvenientes que limitan su aplicación en quimioterapia. Por ello. en esta tesis: 1. Se han determinadolos afectos de procaina en la melitacion de DNA yen la proliferación de la linea celular MCF7. procaina reduce la cantidad de 5-meltilcitosina en DNA genómico, reactiva geneS silenciados por hipermetilaCión (RARb2) e induce parada del ciclo celular en mitosis. 2. Se han comparado siete inhibidores de HDACs dependientes da Zn(II) ácido butanoico ácido valproico. MS.275. tricostatina A(TSA),SAHA, PXD101 y NVP-LAQ824. Existe una relación astructura-actividad para los efectos de eslas sustancias en ensayos in Vitro y en el crecimiento de MCF7.Además, eunque estos inhibidores inducen cambios similares en acetilación global de histonas, no todos reaclivan los mismos genes. los niveles expresión de CDKN1A y GADD45b parecen determinar los efectos de estas sustanciasen el ciclo celular. En los promotores de los seis genes estudiados. la Inhibición de HDACs aumenta la acetilación de H4 y la dimetilación de la tisina 4 de H3, mientras disminuye la dimetilación de lisina 9 de H3 y la presencia de HDAC1 y HDAC2.

Autor: POSTIGO MARISCAL FERNANDO.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: En el trabajo se establecen en primer lugar diferentes rutas sintéticas para la obtención de fotosensibilidad útiles en terapia fotodinámica. Todos ellos se basan en la estructura del metilpirofeofórbido a y se obtienen en el laboratorio a partir de la clorofila a. En una segunda etapa se establecen los requísitos estructurales necesarios para una eficiente incorporación de fotosensibilizadores hodrofóbicos en liposomas. Se estandarizan y optimizan los procesos de obtención de vesículas lipídicas estables. Esta parte del trabajo se realiza utilizando porfirinas comerciales y las clorinas sintetizadas anteriormente. Posteriormente se estudia el efecto de la incorporación de los fotosensibilizadores en liposomas en las propiedades ópticas y de fluorescencia, así como en la eficiencia de generación de oxígeno singlete. Más adelante se describe la inmovilización de los liposomas que contienen fotosensibilizador en matrices sólidas con el fin de obtener sistemas útiles para la esterilidad fotodinámica de la sangre. En este sentido se evalua el efecto inactivador de diferentes fotosensibilizadores en solución, incorporados en liposomas y inmovilizados en matrices sólidas mediante la utilización de liposomas. Los modelos víricos utilizados son el ECMV y el BVDV, ejemplos de virus sin y con envoltura respectivamente. Finalmente se realizan ensayos de fototoxicidad y proliferación celular in vitro sobre fibroblastos de piel humana, células Hela y otras líneas celulares. En este sentido , se evalua la toxicidad de los fotosensibilizadores en ausencia de luz y la fotocitoxicidad del tratamiento fotodinámico después d irradiar con longitud de onda adecuada. Además se realizan ensayos para la determinación del proceso de muerte celular que se produce después de la irradiación. Todo ello se realiza para estudiar la posible aplicación al tratamiento fotodinámico del cáncer de las clorinas derívadas de la clorofilia a sintetizadas y que han sído incorporadas eficientemente en liposomas.

Autor: UBER GARCÍA GENOVEVA.
Año: 2005.
Universidad: VALENCIA [www.uv.es].
Centro de lectura: INST. AGROQUÍMICA Y TECNOLOGÍA ALIMENTOS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El aroma de los vinos es una de las características organolépticas más importantes en la valoración de su calidad vino, y muy importante en la valoracion de su calidad. Su naturaleza química es muy compleja y dificil de caracterizar. Sin embargo, atendiendo a su origen de procedencia, se puede calsificar en tres grandes grupos: i) el aroma procedente de la variedad de uva, o aroma primario, ii) el aroma producido por la levadura a lo largo de la fermentación, y que por tanto, deriva de su metabolismo, o aroma secundario, iii) el aroma terciario, o "bouquet" producido por la transformación del aroma durante el envejecimiento del vino, y que depende de las condiciones ambientales y físico-químicas en que haya sido almacenado. En el presente proyecto se aborda el incremento del aroma secundario originado por la levadura como metabolitos celulares (alcoholes secundarios y ésteres) durante la fermentación alcohólica. Para ello se diseñaron distintos tipos de estrategias de ingenieria metabolica: 1.1 Interrupción y sobreexpresión regulada de las alcohol acetiltransferasas los codificadas por los genes ATF1 y ATF2 en levadura industrial T73 y en cepas de laboratorio. 1.2 Interrupción de la éster hidrolasa codificada por el gen IAH1 en levaduras industriales y en cepas de laboratorio. 1.3 Incremento de la producción de alcoholes primarios, en concreto el alcohol isoamílico, por: i) Sobreexpresión de la α-cetoácido descarboxilasa codificada por el gen THI3. ii) Incremento del flujo metabólico para la síntesis de leucina por deleción de las permeasas de aminoácidos en combinación con la sobreexpresión del gen THI3 y/o ATF1. De entre todas las estrategias ensayadas, la sobreexpresión controlada del gen ATF1, resultó ser la más eficaz para conseguir una mayor acumulación de estos compuestos aromáticos.

Autor: NOVÁS MASEDA ANA.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA [www.usc.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA CAMPUS LUGO.
Centro de realización: FACULTADE DE VETERINARIA CAMPUS DE LUGO.

Resumen: El molusco bivalvo Mytilus galloprovincialis Lmk. presenta un solo tipo de inmunidad, denominada innata, la cual es exclusivamente celular y filogenéticamente más antigua que la adquirida, siendo los hemocitos las poblaciones celulares presentes en hemolinfa de este molusco, las encargadas de la defensa de estos organismos. La respuesta inmune es regulada por múltiples y complejas interacciones entre moléculas como LPS, TNF, IL-2, PDGF, TGF, NO, etc. y también por proteínas implicadas en las rutas de transducción de señales de la respuesta inmunitaria. Este trabajo permitió estudiar la influencia dellipopolisacárido (LPS) y algunas citoquinas (TNF, IL-2, PDGF YTGF) en la resuesta de hemocitos de Mytilus galloprovincialis Lmk. Para ello y entre otras, se cuantificó la producción de óxido nítrico (NO) y la expresión proteica de hemocitos de mejillón. En primer lugar, fue necesario adaptar un medio de cultivo, el ALS suplementado, que permitiese mantener la viabilidad celular y al ser incolor, no interfiriese con los reactivos del método colorimétrico de Griess empleado para la cuantificación del NO. De todos los inductores empleados (LPS, TNF, IL-2, PDGF YTGF), solamente la IL-2 provoca notables incrementos de la producción de NO; sorprendentemente, el LPS, conocido estimulador de esta síntesis en vertebrados, en hemocitos no provoca dicha inducción. Durante el desarrollo del trabajo experimental, se valoró la proporción de los tipos celulares detectados en hemolinfa de Mytilus galloprovincialis, células SH y células RH, apreciando que la proporción de SH es menor durante el verano, época en la que se observa una mayor producción basal de NO. A su vez, el análisis de las rutas de señalización implicadas en la síntesis de NO mediante el empleo de inhibidores de PKA (H89) Y de PKC (bisindolilmaleimida), sugiere la implicación de PKA en la ruta de señalización empleada por la IL-2 para la síntesis de NO; sin embargo, la implicación de PKC parece estar condicionada por factores ambientales. En hemocitos, se detectaron dos proteínas, reconocidas por anticuerpos monoclonales anti-iNOS humana y anti-eNOS bovina, siendo la producción de NO independiente de cambios en la expresión de ambas isoformas. A su vez, la isoforma endotelial y a diferencia de los observado en células de vertebrados, sólo se detecta en citosol, nunca en membrana. En años posteriores a uno de los mayores desastres ecológicos ocurridos en las costas gallegas, es decir, durante los años 2003 y 2004, la pauta de comportamiento de hemocitos, se interumpió por causas desconocidas. Durante este bienio, no se apreció síntesis de NO, confirmada a su vez, por la ausencia de las dos isoformas (iNOS y eNOS), detectadas previamente. También se aprecia durante este periodo de cambios, una reducción en la expresión proteica, que afecta tanto a proteinas citosólicas como de membrana y es durante estos años (2003 y 2004) Y no en años anteriores, cuando es posible inducir apoptosis al ser los hemocitos incubados con cicloheximida, TNF y TGF.

Autor: SANCHEZ MAS JESÚS MANUEL.
Año: 2005.
Universidad: MURCIA [www.um.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: Laos melanocitos son células altamente especializadas cuya principal función conocida en la piel es la producción y distribución de las melaninas por la piel, y por lo tanto la pigmentación humana. Las melanocortinas, y más específicamente la hormona estimulante del melanocito (MSH), juegan un papel central en la regulación de dichos procesos, tanto en condiciones basales como tras la exposición a radiación UV. El efecto estimulador de MSH en el melanocitos se produce por unión a un receptor específico perteneciente a la superfamilia de los receptores acoplados a proteínas G (GPCRs), el receptor de melanocortinas 1 (MC1R). Dicha unión activa la cascada del AMPc que a su vez provoca la activación de la biosíntesis de melaninas. Además, una alteración en alguno de estos pasos puede provocar trastornos que originen patologías de gravedad diferente, que van desde desórdenes pigmentarlos hasta diversos tipos de cáncer de piel, como es el caso del melanoma. Por tanto, uno de los aspectos esenciales en la regulación de la melanogénesis y en la biología del melanocito es la funcionalidad del MC1R. De esta manera los objetivos de nuestra investigación se centraron en el estudio de los mecanismos de regulación que modulan la señalización del receptor de melanocortinas 1 en melanocitos y en células de melanoma humano (MC1R) y murino (Mc1r). Dicha modulación puede ejercerse a varios niveles que regulen la expresión del receptor en la membrana plasmáticas del melanocitos, así como su capacidad de señalización. Las conclusiones más importantes de este estudio han sido. 1,- En células de melanoma y en melanocitos normales la cantidad de moléculas de MC1R expresadas en membrana determina el nivel de la respuesta al agonista, lo que identifica al receptor como el factor limitante en la ruta de transducción de señales en estas células. 2,- La nueva variante natural L93R e MC1R encontrada en una línea de células de melanoma humano, corresponde a una proteína con pérdida de función total por incapacidad de unir agonistas. 3,- El MC1R presenta actividad constitutiva independiente de agonista. El Mc1r también es constitutivamente activo, aunque en menor mediante que el receptor humano. Mutaciones de MC1R que disminuyen la señalización inducida por agonistas (R151C, I40T, V92M, V122M, L93R y R162P) también disminuyen la actividad constitutiva. 4,- El pentapéptido carboxilo-terminal participa en la expresión de moléculas de MC1R en la membrana plasmática. Dentro de este pentapéptido, la acitación del residuo Cys315 podría contribuir al tráfico y/o a la estabilidad de la proteína. 5,- El MC1R dimeriza constitutivamente en sistemas heterólogos que sobre-expresan el receptor. Esta dismerización tiene lugar en el retículo endoplasmático y se produce mediante intercambio de dominios. 6,- Algunos alelos mutantes del MCR1R, como L93R, R162P y una delección del pentapétido carboxilo-terminal, ejercen un efecto dominante negativo sobre la expresión del receptor silvestre en la membrana plasmática. La existencia de este efecto dominante negativo junto con el elevado polimorfismo observado en MC1R, podría ayudar a comprender el amplio abanico de fototipos descritos hasta el momento. 7,- MC1R y Mc1r sufren desensibilización homóloga en respuesta a ligandos naturales o sintéticos. Dicha desensibilización es independiente de PKA, MAPK, PKC y de la movilización de Ca2+. 8,- Las quinasas GRK2 y GRK6 se expresan en melanocitos y células de melanoma, y son capaces de inhibir la señalización por MC1R y MC1r inducida por agonistas. Además, GRK6 inhibe la señalización basal constitutiva.

Autor: TOUS MÁRQUEZ MÓNICA.
Año: 2005.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI [www.urv.cat].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA I CIENCIAS DE LA SALUD.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: La arteriosclerosis es una enfermedad inflamatoria. Se ha demostrado que una inflamación crónica, tal como la enfermedad periodontal, el lupus eritomatoso, la artritis reumatoide o la bronquitis crónica contribuyen a una mayor mortalidad y morbilidad por enfermedad cardiovascular. A pesar de estos acontecimientos, no se dispone de ningún dato que demuestre los efectos a largo plazo de un proceso inflamatorio crónico así como qué papel podrían tener determinados agentes anti-inflamatorios en el desarrollo y progresión de la arteriosclerosis. Diversos estudios sugieren que el uso de determinados agentes anti-inflamatorios en el desarrollo y progresión de la arteriosclerosis. Diversos estudios sugieren que el uso de determinados fármacos anti-inflamatorios podría constituir una herramienta eficaz para el tratamiento de la arteriosclerosis. Estudios previos han demostrado que la administración de altas dosis de aspirina tiene un efecto beneficioso en la aterogénesis a corto plazo en el ratón deficiente en apolipoproteina (apo) E. A pesar de estos resultados, no existe ningún dato que evidencie los efectos de la administración de altas dosis de aspirina en el ratón apo E-deficiente. Los resultados que se exponen en esta tesis doctoral demuestran que la administración de altas dosis de aspirina no tienen ningún efecto significativo a largo plazo sobre la aterogénesis en el ratón deficiente en apo E. Se observa que el tamaño de las lesiones arterioscleróticas evaluadas en el seno aórtico de estos animales está significativamente correlacionado con las concentraciones plásmaticas de colesterol, sugiriendo que la administración continuada de aspirina facilita la aterogénesis. Nosotros sugerimos que este efecto observado no es debido a la administración a la aspirina "per se", sino que podría ser debido a la presencia de uno o varios factores presentes en nuestro modelo, que no hemos sido capaces de identificar y que nos está afectando nuestros resultados. Tenemos que concluir que nuestro modelo no está libre de artefactos y proponemos que la dieta con la que los ratones se han alimentado podría constituir un factor que complica la interpretación de los resultados obtenidos en este modelo animal. En el estudio 2 de esta tesis doctoral, hemos demostrado que los ratones apo E-deficientes alimentados con una dieta rica en grasas y colesterol, desarrollan alteraciones hepáticas graves que consisten en la acumulación de grasa, la proliferación de macrófagos y la presencia de células inflamatorias. También hemos observado la existencia de una relación cronológica y cuantitativa entre el tamaño de las lesiones arterioscleróticas y el grado de alteración hepática. Estos resultados parecen indicar que el colesterol de la dieta puede producir alteraciones significativas en el hígado de estos animales, dificultándonos así la interpretación de los resultados. Además, consideramos que los ratones apo E-deficients pueden constituir un buen modelo animal para el estudio de la esteatohepatitis no alcohólica. Finalmente, hemos encontrado que la administración continuada de un agente pro-inflamatorio, tal como la turpentina, produce una respuesta inflamatoria muy similar a la que tiene lugar en determinados procesos inflamatorios crónicos y parece ser que no está afectada por la administración de aspirina. Los ratones tratados con rupentina presentaron una disminución significativa de las concentraciones plasmáticas de colesterol, del tamaño de las lesiones arterioscleróticas así como de la expresión hepática del gen múltiple-drug resistance (mdr1b) en reacción a los ratones control. Nosotros sugerimos que mdr1b puede jugar un papel muy importante en la regulación de las concentraciones plasmáticas de colesterol y/o en la progresión de la arteriosclerosis.

Autor: Sidrach de Cardona Paniagua Lara.
Año: 2005.
Universidad: MURCIA [www.um.es].
Centro de lectura: Universidad de Murcia.
Centro de realización: Universidad de Murcia.

Resumen: INTRODUCCIÓNLa alcachofa es una planta perenne ampliamente distribuida en las regiones del Mediterráneo. La Cuenca Mediterránea produce el 90% de la producción mundial. Algunos países donde su producción y consumo es tradicional como Italia, Francia y España producen el 80%. España es el segundo productor mundial. A modo de ejemplo, el 70% en peso de la flor de la alcachofa corresponde a desechos no destinados al consumo humano. Estos desechos se utilizan para la alimentación animal, sin embargo en la búsqueda de nuevas aplicaciones para los desechos se ha encontrado, sorprendentemente, que esos subproductos poseen una elevada concentración de proteasas, peroxidasas y polifenoloxidasas.De esta forma hemos centrado este trabajo en el estudio del uso de estos residuos como materia prima para la obtención de sustancias de alto valor añadido, como son las enzimas, mediante el desarrollo de tecnologías de procesado eficaces y escalables industrialmente.Las proteasas participan en la ruptura de uniones peptídicas mediante proteolisis, que constituye una de las modificaciones enzimáticas más frecuentes e importantes de las proteínas. Las proteasas aspárticas (APs) están ampliamente distribuidas, encontrándose en vertebrados, hongos, plantas, protozoos y retrovirus. Son todas endoproteasas y se caracterizan por presentar un pH óptimo ácido y por ser específicamente inhibidas por pepstatina A. Entre las posibles aplicaciones de las proteasas se encuentra la fabricación de quesos mediante la coagulación enzimática de la leche. Las peroxidasas son enzimas que participan en el sistema enzimático de protección de las células consistente en la eliminación de especies dañinas que se producen durante el proceso de reducción de O2 hasta H2O, tales como el anión superóxido (O2"-), el peróxido de hidrógeno (H2O2) y el radical hidroxilo (HO"). Las peroxidasas son enzimas que catalizan la oxidación de una gran variedad de compuestos orgánicos e inorgánicos usando el poder oxidante del H2O2 u otros hidroperóxidos (Dunford y Stillman, 1976).Recientemente, nuestro grupo de investigación ha purificado una peroxidasa de alcachofa (AKP-C) (López-Molina et al., 2003). A partir de flor de alcachofa se ha purificado a homogeneidad la AKP-C usando FPLC. Se han observado cambios en la actividad de AKP-C con peróxido de hidrógeno, dependientes de calcio.La enzima tirosinasa o polifenoloxidasa (PPO) (monofenol, o-difenol: oxígeno óxido-reductasa, EC 1.14.18.1) se encuentra ampliamente distribuida en toda la escala filogenético. Esta cuproproteína cataliza dos tipos de reacciones acopladas en las que interviene oxígeno molecular, (a) hidroxilación de monofenoles a o-difenoles (actividad monofenolasa) y (b) oxidación de o-difenoles a o-quinonas (actividad difenolasa).Esta Tesis Doctoral se planteó con un Objetivo General consistente en la Purificación y caracterización de proteasas, peroxidasas y polifenoloxidasas a partir de residuos agroindustriales de alcachofa (Cynara scolymus L.). Purificación. Se ha conseguido la purificación de proteasas y polifenoloxidasas de residuos agroindustriales de alcachofa (Cynara scolymus L., variedad Blanca) obtenidos de la elaboración en conserva de esta hortaliza, especialmente abundante en Murcia.Propiedades moleculares. Se ha realizado la caracterización molecular de las proteasas y polifenoloxidasas de alcachofa, determinando las masas moleculares y los puntos isoeléctricos de las isoenzimas aisladas.Caracterización cinética. La caracterización cinética de proteasas, peroxidasas y polifenoloxidasas de alcachofa ha permitido conocer el comportamiento de estas enzimas con sus respectivos sustratos, así como la regulación de su actividad modificando las condiciones 8 de ensa 5bf yo. El estudio de moduladores e inhibidores de las proteasas, peroxidasas y polifenoloxidasas de alcachofa, ha permitido un rendimiento óptimo en la regulación de su actividad catalítica, lo cual favorecerá la posterior aplicación de estas enzimas en la industria.Estabilidad. Considerando la importancia de la estabilidad de las enzimas para su aplicación industrial se ha estudiado el efecto de diferentes factores sobre la actividad de las enzimas, consiguiendo determinar las condiciones óptimas de actuación de las enzimas para diferentes aplicaciones industriales.Aplicaciones biotecnológicas. Basándose en los anteriores estudios, se han establecido las principales aplicaciones potenciales de proteasas, peroxidasas y polifenoloxidasas de residuos agroindustriales, que comprende diversos sectores: sanitario, agroalimentario e industrial.

Autor: GARCIA MANSO DIEGO.
Año: 2005.
Universidad: OVIEDO [www.uniovi.es].
Centro de lectura: DPTO.DE BIOQ. Y BIOL. MOLEC. FAC.DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Este trabajo de Tesis ha supuesto la constatación de que las particulares características cinéticas de apertura y cierre del canal HERG, que son esenciales para sus importantes papeles fisiopatológicos, se deben a la presencia combinada en su extremo amino terminal de dos dominios funcionalmente distintos: el dominio eag y el dominio proximal. El trabajo demuestra por un lado, la existencia de interacciones entre el dominio eag del extremo amino y el lazo intracelular S4-S5 del cuerpo central del canal, y que sirve como elemento de conexión entre el sensor de voltaje y la maquinaria de apertura del poro iónico del canal, interacciones que son determinantes para las particulares características cinéticas funcionales de HERG. Puesto que para el entendimiento de estas interacciones es esencial conocer las distancias entre algunos de los dominios intracelulares del canal, así como otros aspectos de su organización estructural, que son inabordables mediante los estudios clásicos de relaciones estructura-función, también se ha estudiado mediante un novedoso abordaje experimental la arquitectura molecular de los dominios intracelulares de HERG que posibilita la existencia de las citadas interacciones. Para ello, se han analizado mediante la técnica de FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) las distancias moleculares entre diferentes dominios intracelulares de la proteína del canal in vivo, utilizando para ello la expresión funcional de colecciones de canales HERG fluorescentes en los que los fluoróforos YFP y CFP fueron insertados a todo lo largo de la secuencia polipeptídica de HERG utilizando el comportamiento al azar de transposones recombinantes e hiperactivos mediante reacciones de transposición in vitro. La arquitectura molecular de HERG responde a un esquema en el cual los extremos amino terminales del canal tetramérico funcional se encuentran empaquetados, próximos al lazo S4-S5 y en una posición cercana a la superficie interna de la membrana, en tanto que los extremos carboxilo del tetrámero se encuentran más alejados de la cara intracelular de la membrana.

Autor: SÁNCHEZ HIDALGO MARY CRUZ.
Año: 2005.
Universidad: SEVILLA [www.us.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA DE LA UNIVERSIDAD DE SEVILLA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: EN LA TESIS TITULADA " ESTUDIO DE LOS EFECTOS PRODUCIDOS POR LA ADMINISTRACIÓN CRÓNICA DE MANGANESO: IMPLICACIÓN DE LA INGESTA DE HIERRO " SE HA EVALUADO EL EFECTO TÓXICO QUE EL MANGANESO, CONSIDERADO UN OLIGOELEMENTO, PUEDE LLEVAR A CABO EN EL SNC, SOBRE TODO EN EL SISTEMA DOPAMINÉRGICO NIGRO-ESTRIADO, ASÍ COMO EN DIVERSOS ÓRGANOS PERIFÉRICOS. DICHA ADMINISTRACIÓN CRÓNICA SE REALIZÓ EN RATAS WISTAR EMPLEANDO MnCl2 POR VÍA INTRAPERITONEAL. ASIMISMO, TAMBIÉN SE ABORDÓ EL PAPEL QUE EL MANGANESO Y EL HIERRO PODRÍAN TENER EN EL PROCESO DE NEURODEGENERACIÓN Y AFECTACIÓN DE ÓRGANOS PERIFÉRICOS, PARA LO QUE SE DISEÑÓ UN EXPERIMENTO EN EL QUE SE EMPLEARON DIETAS SINTÉTICAS CON DOSIS NORMAL DE HIERRO Y CARENCIA DEL MISMO. ASÍ PUES, SE ESTUDIÓ LA RESPUESTA GLIAL, INDICATIVA DE DAÑOS A NIVEL CEREBRAL, SE VALORARON PARÁMETROS DE ESTRÉS OXIDATIVO Y SE EFECTUARON DIVERSAS TINCIONES INMUNOCITOQUÍMICAS ASÍ COMO HIBRIDACIÓN IN SITU. DE ESTA FORMA, NUESTRO ESTUDIO REFLEJA QUE LA TOXICIDAD DEL MANGANESO EN EL SNC SE BASA EN EL AUMENTO DEL ESTRÉS OXIDATIVO PRODUCIÉNDOSE UN MAYOR EFECTO DEL MANGANESO EN EL SISTEMA DOPAMINÉRGICO NIGRO-ESTRIADO, SI BIEN NO ACTÚA DE FORMA SELECTIVA PUESTO QUE TODAS LAS ESTRUCTURAS CEREBRALES ESTUDIADAS MUESTRAN ESTRÉS OXIDATIVO. ASIMISMO, TAMBIÉN PRODUCE UN AUMENTO DE ESTRÉS OXIDATIVO EN ÓRGANOS SISTÉMICOS, ENTRE LOS QUE DESTACA EL HIGADO, PUDIÉNDOSE ESPECULAR CON LA POSIBILIDAD DE LA DISFUNCIÓN DE ESTE ÓRGANO Y EL DESARROLLO DE ENCEFALOPATIA HEPÁTICA. TAMBIÉN ES IMPORTANTE DESTACAR QUE LA DEFICIENCIA DE HIERRO Y ELEVADOS NIVELES DE MANGANESO EN EL SNC PRESENTAN UN EFECTO TÓXICO SINÉRGICO DESENCADENANDO UNA GRAN RESPUESTA GLIAL ASÍ COMO AFECTACIÓN VASCULAR Y PARÉNQUIMA CEREBRAL QUE PRESUPONE FENÓMENOS DE NECROSIS Y APOPTOSIS CONCLUYENDO CON LA MUERTE CEREBRAL.

Autor: HENRÍQUEZ HERNÁNDEZ LUIS ALBERTO.
Año: 2005.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA [www.ulpgc.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Analisis de patrones de expresion genico hepaticos hormono-dependientes: aplicacion de la tecnologia de DNA microarrays. La tecnologia de DNAmicroarrays ha supuesto una revolucion en el campo de la genomica. La comprobacion de hipotesis enriquecida con perfiles de expresion esta permitiendo acelerar el descubrimiento de mecanismos de accion hormonal. En esta Tesis Doctoral se ha empleado esta tecnologia para caracterizar la respuesta del higado a las acciones de estrogenos, hormona de crecimiento (GH) y hormonas tiroideas (TH). Los estudios realizados hasta ahora se concentran en el analisis de las acciones de una unica hormona y existen pocos ejemplos que intenten usar una compilacion de diferentes perfiles de expresion regulados por hormonas. En esta Tesis se ilustra como el meta-analisis de multiples perfiles de expresion obtenidos de el higado, puede ser usado para evaluar hipotesis endocrinas. Se construyo una Base de Datos denomina EndoGED (www.cmm.ki.se/EndoGED) que recoge un conjunto de perfiles de expresion generados a partir del tratamiento con GH, T3 y 17Æ¿-ethinylestradiol (EE) en diferentes modelos experimentales. El analisis del conjunto de los resultados demostro que la administracion continua de GH o de estrogenos gfeminizanh el patron de expresion genico hepatico. El EE ha sido utilizado para dilucidar los mecanismos moleculares involucrados en la patogenia de la colestasis inducida por estrogenos. Se aplico DNA microarray en ratas machos comparando los efectos del EE en presencia o en ausencia de hormonas hipofisarias. Se identifico un numero de nuevos genes regulados por EE y multiples mecanismos que aportan nuevas areas de investigacion de la patogenesis de esta enfermedad. GH y TH tienen un papel critico en el metabolismo de lipidos y acidos biliares. Nuestros resultados indican que estas hormonas regulan la expresion de genes involucrados en la sintesis de acidos biliares o en la transcripcion de los mismos. Algunas acciones de la GH son opuestas a las de T3. En ausencia de hipofisis, el higado sigue siendo extremadamente sensible a dosis farmacologicas de estrogenos. Exploramos el perfil de expresion genico inducido por EE en hepatocitos primarios cultivados sobre Matrigel, identificando una serie de genes regulados de forma directa en este modelo. La privacion, o exposicion elevada, a hormonas tiroideas durante el periodo neonatal provoca cambios en la fisiologia de algunos organos que perduran durante la vida adulta del individuo. Hemos estudiado la respuesta hepatica a T3 en individuos adultos nacidos o no con hipotiroidismo congenito con el proposito de identificar si el ambiente endocrino que rodea al recien nacido puede provocar cambios metabolicos en la fisiologia hepatica durante su vida adulta. Los resultados obtenidos corroboran nuestra hipotesis.DOCUMENTACION ADJUNTA AL TD-2

Autor: Cabrera Heredia Jorge rubén.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Centro de lectura: Centro Nacional de Biotecnología.
Centro de realización: Centro Nacional de Biotecnología.

Autor: Matías Román Salomón.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: La metaloproteinasa de matriz de membrana MT1-MMP está implicada en la migración de células endoteliales y tumorales, pero su posible papel en migración leucocitaria aún no ha sido bien caracterizado. Aquí demostramos que el anticuerpo monoclonal anti-MT1-MMP afecta a la migración de monocitos humanos estimulada con MCP-1 sobre fibronectina, VCAM-1 e ICAM-1. Además, la transmigración de monocitos a través de endotelio activado con TNF- es también inhibida por el anticuerpo anti-MT1-MMP. Por esto, decidimos investigar la regulación de MT1-MMP en monocitos aislados de sangre periférica. Primero, pudimos observar cúmulos de MT1-MMP en protrusiones de membrana asociadas a motilidad en monocitos estimulados con MCP-1 migrando sobre fibronectina, VCAM-1 o ICAM-1, y en el frente de avance, colocalizando con profilina, en monocitos transmigrando a través de células endoteliales activadas. Además, también observamos una inducción en la expresión de MT1-MMP en monocitos humanos tras su adhesión a fibronectina de una manera dependiente de las integrinas 4 1 y 5 1. La unión de monocitos a células endoteliales activadas con TNF- así como a VCAM-1 o ICAM-1 también inducía la expresión de MT1-MMP. Estos datos correlacionan con el aumento en la actividad fibrinolítica observado en monocitos unidos a fibronectina, VCAM-1 o ICAM-1. Nuestros datos muestran cómo se requiere MT1-MMP durante la migración de monocitos humanos y durante su transmigración endotelial, además de la regulación de su localización, expresión y actividad en monocitos en contacto con fibronectina o los ligandos endoteliales, poniendo de manifiesto el papel relevante que MT1-MMP puede desempeñar en el reclutamiento monocítico durante un proceso inflamatorio.

Autor: Prados Pinto Belén.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Centro de lectura: Facultad de Medicina (Dpto. Bioquímica).
Centro de realización: Facultad de Medicina (Universidad Autónoma de Madrid).

Resumen: La O-manosilacion es una modificación post-traduccional importente en eucariotas. El gen que codifica la proteína O-manosil transferasa 1 en humanos es POMT1. El alfa-distroglicano, componente del complejo glicoproteico de distrofina en músculo y neuronas, es O-manosilado por POMT1. Existen varias enfermedades neuromusculares cuyos pacientes presentan déficit en la glicosilación del alfa-distroglicano. El Síndrome de Walker-Warburg (WWS) es una distrofia muscular congénita asociada a malformaciones oculares y cerebrales graves, causada por mutaciones en proteínas implicadas en la glicosilación del alfa-distroglicano, como POMT1. Durante la embriogénesis del ratón, Pomt1 se expresa en los tejidos más afectados en pacientes con WWS. En el ratón adulto, Pomt1 se localiza en el R.E. de células musculares y en el acrosoma de las células germinales masculinas. En este estudio, hemos generado un animal knockout para estudiar la función de la O-manosilación en el ratón, que ha resultado ser letal embrionario debido a defectos en la formación de la membrana de Reichert . Para evitar la letalidad embrionaria, hemos producido quimeras mediante el uso de células ES Pomt1-/-, y estamos generando un ratón knockout condicional basado en el sistema CRE-loxP, que permita inactivar el gen Pomt1 espacio-temporalmente mediante el uso de promotores iducibles o específicos de tejido.

Autor: GIRALDO RAMOS ESTHER.
Año: 2005.
Universidad: EXTREMADURA [www.unex.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La higuera (Ficus carica) junto con el olivo y la vid, es uno de los tres frutales clásicos asociados con el comienzo de la horticultura en la cuenca mediterránea, remontándose su cultivo a hace más de 6000 años. La conservación y el estudio de los recursos genéticos de higuera, al igual que en el resto de las especies frutales, implican el establecimiento de colecciones en campo. El centro de investigación Final "La Orden" de Extremadura junto con otras Comunidades Autónomas inición, en 1985, una prospección de variedades cultivadas de higuera. Como resultado de dicha prospección se ha conseguido reunir 215 accesiones en un banco de germoplasma representando un porcentaje muy elevado de la variabilidad existente de higuera en España. El principal problema del mantenimiento en situ de las colecciones vegetales es la correcta identificación del material existente, así como de las nuevas entradas. La antigüedad del cultivo de la higuera junto con la facilidad de su propagación vegetativa ha permitido un gran intercambio del material vegetal entre diferentes regiones a lo largo de la historia, dando como resultado la presencia de sinonimias y momonimias. La evaluación y caracterización de la diversidad existente en especies cultivadas es de gran importancia para preservar tanto variedades en vías de desaparición, como alelos con interés agronómico actual o futuro. En este trabajo se han utilizado un grupo de 81 variables cuantitativas y 132 variables cualitativas del descriptor de higuera publicado en 2003, para caracterizar morfológicamente 35 variedades conservadas en el banco de germoplasma, elegidas en función a su edad, homogeneidad de los árboles y representación de los diferentes tipos de higueras. Mediante distintos análisis estadísticos se han llevado a cabo un análisis UPGMA revelando diferentes perfiles morfológicos. Los resultados indican que las variables morgológicas que explican la mayor parte de variabilidad de higueras, son las que hacen referencia al tipo de producción y morfología del fruto (Brevas e higos). Los dos primeros capítulos de este trabajo están dedicados al desarrollo de este objetivo. Sin embargo, la caracterización tradicional basada en el fenotipo puede presentar problemas debido a la influencia de factores ambientales. Por ello, esta caracterización se ha complementado con una aproximación molecular. Así se ha desarrollado una batería de marcadores microsatélites en higuera que se han utilizado para caracterizar y estudiar la diversidad genética de 207 genotipos conservados en el banco de germoplasma. La construcción de una matriz de similitud y un análisis UPGMA ha permitido clasificar las accesiones en grandes grupos con características comunes. Estos resultados en conjunción a la bibliografía existente han permitido la selección de 100 genotipos de referencia. Por otro lado, los marcadores moleculares han puesto de manifiesto el bajo polimorfismo genético en la higuera y el algo contenido de sinonimias y homonimias. Estos trabajos se describen en los capítulos 3 y 4. En el capítulo 5 se comparan los resultados obtenidos sobre 35 variedades de higuera mediante marcadores SSR y mediante marcadores morfológicos para determinar si ambas caracterizaciones son complementarias y si están correlacionadas entre sí. Los análisis estadísticos de Mantel y el coeficiente de Person y Spearman revelaron una baja correlación entre las matrices de similitud obtenidas, al igual que ocurre en otras especies. Sin embargo, los agrupamientos de variedades obtenidos con ambos tipos de caracterizaciones son muy similares. Un banco de germoplasma deber de ser dinámico, lo que implica la introducción de nuevo material vegetal. Así, para optimizar la introducción de nuevos genotipos se ha valorado la utilidad de los microsatélites con accesiones procedentes de prospecciones en Canarias y Aragón. Los resultados manifestaron un bajo polimorfismo y una estructura poblacional similar, indica 8 ndo un o 22c rigen común de estos genotipos y seleccionándose tan sólo un 27% del material prospectado para incluirlo en el banco. El capítulo 6 responde a este punto.

Autor: BONILLA VALVERDE DANIEL.
Año: 2005.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Doñana, reserva de la Biosfera por su variedad de especies y ecosistemas, se ve afectada por actividades agrícolas, industriales y mineras, que suponen un riesgo. En su entorno se realizan varios cultivos: arroz, fresa y cultivos de "nueva agricultura". A todo se unen los vertidos al río Guadiamar de industrias aceiteras o vinícolas. Otra fuente potencial de contaminación se sitúa en Los Polos Industriales de Huelva. Al N de Doñana, se encuentran las minas de pirita de Aznalcóllar, cuyos subproductos se almacenaban en una bolsa de stériles. En Abril de 1998, la balsa de Azanlcóllar liberó al os ríos Agrio y Guadiamar 4 Hm3 de agua ácida y 2Hm3 de lodo con metales tóxicos. La medición de diversos biomarcadores de contaminación (Enzimas antioxidativas, enzimas biotransformadoras y niveles de glutatión) sensibles a metales y compuestos orgánicos, en dos especies bioindicadoras abundantes y no protegidas: un mamífero, el ratón moruno (Mus spretus), y un ave, el gorrión común (Passer domesticus), ha servido para evaluar los efectos biológicos del vertido de Aznalcóllar y evaluar la contaminación del entorno de Doñana en ecosistemas terrestres. Las nuevas técnicas proteómicas se han utilizado parala búsqueda de nuevos biomarcadores de contaminación específicos y sensibles en ratón moruno y gorrión común del entorno de Doñana.

Autor: ROMERO RUIZ ANTONIO.
Año: 2005.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El tema principal es el estudio y seguimiento de la situación ambiental de Doñana tras el vertido de lodos tóxicos ocurrido en Abril de 1998 mediante biomarcadores de contaminación ambiental. Para ello se ha utilizado la coquina de fango (Scrobicularia plana) como especie bioindicadora de contaminación en ambiente esturáicos donde se han determinado una serie de parámetros bioquímicos como herramientas para el seguimiento y recuperación de la zona afectada. En el segundo capítulo de este trabajo se ha desarrollado un nuevo método para cuantificar un parámetro fisiológico (metalotioneínas) muy importante como biomarcador de contaminación por metales. Este método supera en especificidad y sensibilidad a los utilizados hasta ahora en este tipo de programas de monitorización ambiental. En el tercer capítulo se utilizan las técnicas más innovadoras en el campo de la proteómica, donde se han identificado por secuenciación de novo proteínas alteradas en puntos de muestreo con diferente contaminación por metales en la orilla de Doñana del Gudalquivir (con la dificultad que conlleva que el genoma del organismo utilizado no esté presente en la base de datos), lo que ha permitido desarrollar una metodología eficaz en la descripción de biomarcadores moleculares de última generación. Fruto de los resultados obtenidos son los cuatro trabajos científicos publicados en revistas de prestigio científico así como dos capítulos de libros y un elevado número de contribuciones a congresos.

Autor: JEREZ CABELLO MARÍA JOSÉ.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CC QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.

Resumen: La fosfodiesterasa 7 ha sido validada como diana terapéutica para el tratamiento de enfermedades inflamatorias como la esclarosis múltiple o la artritis reumatoide, puesto que su inhibición en linfocitos T produce la disminución de interleuquinas inflamatorias y de factores de transcripción NFAT y NFkB relacionados con dichas enfermedades. Por tanto, en este trabajo se desarrollan los siguientes puntos: 1,- Determinación de un farmacóforo de PDE7. Dentro de este contexto de diseño indirecto, se plantea la determinación mediante los programas DISCO y Catalyst de un modelo de farmacóforo a partir de inhibidores conocidos de PDE7, que permita la búsqueda de nuevos cabezas de serie. Posteriormente, los resultados de dicha búsqueda serán refinados mediante el programa Volsurf, para seleccionar sólo aquellos con las propiedades farmacocinéticas más adecuadas, y mediante el progrma MetaSiete, para analizar los átomos más susceptibles de ser metabolizados. 2,- Validación de nuevas herramientas para el cribado virtual basado en eligando: CODES y FALP. Esta primera validación se llevará a cabo de manera experimental mediante la síntesis y evaluación biológica de nuevos derivados. Aquellos que resulten activos serán sometidos a estudios biológicos celulares que permitan analizar la capacidad de estos compuestos para el tratamiento de patologías inflamatorias. 3,- Desarrollo de un método de predicción de toxicidad. De manera complementaria a la selección de candidatos llevada a cabo en los puntos anteriores, se plantea el desarrollo de un método eficaz de predicción de mutaggenicidad, puesto que actualmente los modelos comerciales disponibles no ofrecen una capacidad predictiva suficiente como para considerarlos fiables.

Autor: MARTÍNEZ CALATRAVA M. JOSÉ.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA U.C.M.

Resumen: En la actualidad, la principal causa de morbi - mortalidad en España es la enfermedad cardiovascular. Los trabajos genéticos realizados hasta ahora en población española, se han centrado en el análisis de polimorfismos en genes candidatos para componentes clásicos del Síndrome Metabólico (SM): obesidad, hipertensión, dislipemia. La importancia de estas alteraciones desde un punto de vista cardiovascular está bien establecida. Sin embargo existen otros componentes del S; que también confieren riesgo cardiovascular (hipofibrinolisis, disfunción endotelial, inflamación) y dos que no disponemos de estudios que nos revelen en qué medida los genes involucrados en estas alteraciones se asocian con el fenotipo patológico en nuestra población. Por este motivo nosotros hemos analizado polimorfismos en los genes que codifican para PAI-1, enzima convertidora de angiotensina (ECA), óxido nítrico sintasa endotelila (eNOS), proteína C - reactiva (PCR), TNF- alpha, adiponectina. Para llevar a cabo estos estudios, se analizó población general extraída mediante nuestro aleatorio estratificado de un estudio transversal realizado en la provincia de Segovia. Nuestros resultados indican que el genotipo 4G/4G del polimorfismo 4G/5G de PAI-1 podría asociarse con el desarrollo de una alteración de la fibrinolisis, caracterizada por la presencia de niveles circulantes d ePAI-1 elevados y, en consecuencia, con un mayor riesgo de enfermedad cardiovascular. No se ha encontrado evidencia de que el consumo de tabaco tenga un efecto sobre la fibrinolisis dependiente del genotipo del polimorfismo 4G/5G de PAI-1. Asimismo el genotipo 4G/4G de PAI-1 se asocia con una mayor prevalencia de hipertensión arterial en aquellos sujetos que no muestran indicios de presentar alteración de la fibrinolisis. Esta asociación s independiente de otros factores metabólicos de riesgo para hipertensión arterial, así como con el genotipo de polimorfismo I/D de la ECA. Respecto al gen de la eNOS, en los hombres de la población analizada, el alelo C del SNP rs3800787 del gen de la eNOS se asocia con una mayor prevalencia de niveles bajos de colesterol HDL independientemente de otras variables relacionadas con los niveles circulantes de colesterol HDL. El mecanismo molecular por que el se produce dicha asociación debe ser todavía escarificado. Por otra parte, nuestros resultados indican que factores genéticos, metabólicos y de estilo de vida se asocian con los niveles circulantes de PCR. De forma que el genotipo GG del polimorfismo 1059 G/C, la circunferencia de la cintura, los niveles de leptina, y el consumo de tabaco están positivamente asociados con los niveles serios de este marcador de inflamación. Por último, nuestros resultados ponen de manifiesto la existencia de una interacción gen - gen de los genes que codifican para el TNF-alpha y la adiponectina, de forma que ambos genes podrían intervenir en la regulación de los niveles serios de adiponectina y en su impacto sobre la homeostasis de la glucosa. En resumen, los polimorfismos analizados de los genes que codifican para el PAI-1, la ECA, la eNOS, la PCR, el TNF -alpha y la adiponectina, se asocian con diferentes componentes del SM (alteración de la fibrinolisis, hipertensión arterial, dislipemia, inflamación e hiperglucemia), por lo que deben ser tenidos en cuenta como marcadores de riesgo para SM y enfermedad caridovascular.

Autor: SANTOS ETXEPARE MIKEL.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: Candida albicans es un microorganismo comensal cuyo habitat natural son las mucosas, el tracto gastrointestinal y la piel de los seres humanos. En individuos inmunocomprometidos, C.albicans se comporta como un agente patógeno capaz de causar infecciones diseminadas que en muchas ocasiones tienen un desenlace fatal. La búsqueda de combinaciones farmacológicas más potentes para el tratamiento de las micosis invasoras causadas por C.albicans condujo a la identificación de las fosfatasa calcineurina como una nueva diana terapéutica. Clacineurina es un componente de una vía de transducción de señales que desempeña una función esencial en la virulencia de C.albicans y contribuye de modo significativo a la tolerancia a drogas antifúngicas de la familia delos azoles. La información disponible sobre otros componentes de esta vía y el funcionamiento de la ruta dependiente de clacineurina en C.albicans era muy reducida, por lo que esta tesis ha contribuido a incrementar el conocimiento sobre esta vía de transacción mediante el aislamiento y la caracterización de una diana de calcineurina que estaba todavía sin identificar: el efecto CaZrz1 que actúa como un factor de transcripción regulado por calcineurina durante la transucción de la señal de calcio. El análisis genético ha revelado que el efecto CaCrz1 tiene una función importante en la regulación de la homeostasis de calcio y la respuesta a agentes que causan estrés de membrana. Además, la carencia del efecto CaCrz1 aumenta la sensibilidad de C.albicans a los azoles. Sin embargo, la ausencia del efector CaCrz1 no afecta a la virulencia de Candida ablicans en un modelo murino de infección fúngica diseminada.

Autor: FERNÁNDEZ CANCIO MÓNICA.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: HOSPITAL VALL'HEBRÓN.
Centro de realización: HOSPITAL VALL D'HEBRÓN.