BIOQUIMICA (4)

Autor: DIAZ HERNANDEZ JUAN IGNACIO.
Año: 2005.
Universidad: SALAMANCA [www.usal.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR E INICYL.

Resumen: En el presente trabajo modulamos la biosíntesis de glutatión (GSH) en cultivos primarios de neuronas, disminuyendo la concentración de GSH mediante la generacion de RNA de interferencia contra la enzima limitante en su biosíntesis, la glutamato cisteína ligasa (GCL), e incrementando la síntesis de GSH mediante la sobreexpresión de dicha enzima Mediante estas técnicas, realizamos la modulación independiente de las dos subunidades de la GCL, observando disminución en la actividad de la GCL y en el contenido de GSH celular al silenciar la GCL mediante RNAs de interferencia contra ambas subunidades y un incremento en la actividad de la enzima y el contenido de glutatión en el caso de sobreexpresión de la subunidad moduladora de la GCL.

Autor: GUIL LÓPEZ SARA.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Se estudian las vías de procesamiento y presentación de antígenos por MHC de clase I de la proteína de la envuelta del virus de la inmunodeficiencia humana y de la nucleoproteína del virus de la gripe. En el caso del procesamiento del epítopo R10I (Residuos 318-327) de la proteína de la envuelta presentado por Dd, están implicados el proteasoma y una metaloproteasas. El producto del procesamiento de ambas proteasas no requiere recorte. En el caso del epítopo NPO147-155 de la nucleoproteína del virus de la gripe presentado por Kd, se estudian las cepas A/PR/8/34 u A/NT/60/68. En el estudio se emplean las núcleo proteínas nativas de ambas cepas así como proteínas quimera de la proteína de la cápsida del virus de la hepatitis B con diferentes insertos de epítopo NP147-155. Se había postulado que una o varias de las actividades del proteasoma sensibles al inhibidor lactacistina están implicadas en la destrucción del epítopo. Se determina ahora que el epítopo en sí, tanto en su contexto natural como en otro diferente, porta la información para ser destruido en células infectadas. Hay tres factores que influyen en la eficiencia de generación del epítopo NP147-155 del virus de la gripe: 1,- Secuencia más distal que los 4 aa flaqueantes a cada lado del epítopo de la nucleoproteína de la cepa A/PR/8/34 favorece la eficiencia de procesamiento y generación del epítopo NP147-155 respecto de la cepa A/NT/60/68. 2,- La 4 aa que flanquean el epítopo NO147-155 por cada lado, y en particular en el residuo inmediatamente en amino, causan ligeras diferencias en la eficiencia de generación del epítopo entre ambas cepas. 3,- Las secuencias naturales flanqueasteis del epítopo NP147-155 de ambas cepas favorecen su generación cuando es presentado en un contexto proteico diferente al suyo natural. En la generación del epítopo NP147-155 del virus de la gripe, tanto a partir del contexto nativo como de otro diferente, y tanto en células murinas como en humanas, está implicada la proteasas citosólica tripeptidil peptidasa II. Los productos del procesamiento de esta proteasa requieren recorte por, al menos, la mainopeptidasa del retículo endoplásmico ERRAP.-

Autor: MARTÍN SAAVEDRA FRANCISCO MANUEL.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Actualmente se considera que la esclerosis múltiple (EM) surge, principalmente, como consecuencia de una respuesta autoinmune a autoantígenos de mielina del sistema nervioso central en un individuo susceptible. La patogenia de la enfermedad está mediada, al menos en parte, por linfocitos T, y es desencadenada pro factores ambientales desconocidos, existiendo una base genética que confiere distintos grados de susceptiblidad. La encefalomielitis alérgica experimental (EAE) es un modelo animal que reproduce adecuadamente la EM en humanos, y que puede inducirse de forma activa o pasiva. Entre las principales estrategias terapéuticas para la EM destacan aquellas dirigidas a inmunorregular la respuesta de los linfocitos T a través de la administración de citoquinas inmunorreguladoras, inmunosupresores o inmunomoduladores como anticuerpos monoclonales anti- VLA-4 o estatinas. Entre las citoquinas inmunorreguladoras sobresale el interferón beta (IFNbeta) que se encuentra disponible comercialmente para su uso clínico como proteína recombinante producida en bacterias (Betaferón) o en células CHO (Avonex, Rebif). Aunque la mayoría de pacientes presentan una respuesta óptima al IFNbeta, algunos pacientes no responden al tratamiento y otros lo hacen sólo parcialmente, Dado que los mecanismo por lo que IFNbeta ejerce sus efectos terapéuticos en EM son desconocidos, resulta de trascendental importancia al estudio realizado en esta tesis sobre las distintas vías de señalización del IFNbeta en linfocitos T in vitro y en el modelo animal de EAE. El presente trabajo pone de manifiesto que existen varios mecanismos que, independientemente o de manera conjunta, puede contribuir al efecto terapéutico de IFNbeta en el tratamiento de la EM. En primer lugar, se demuestra que le tratamiento in vitro con IFNbeta induce la expresión de IL4, e IL10, CD25 y Foxp3, inhibe la expresión de Ifngamma, y muestra un efecto anti-proliferativo diferencial sobre las Células CD4+, afectando así a la polarización de los fenotipos T1/T2. En segundo lugar, se observa que el aumento de expresión de IL4 e IL10 mediada in vitro por IFNbeta correlaciona con la estabilización del ARNm de ambas citoquinas en la célula Th2. En tercer lugar, estos mecanismos reguladores del IFNbeta observados in vitro se correlacionan con el efecto terapéutico observado in vivo en EAE por la atenuación sintomática de la enfermedad y disminución de lesiones, y concuerda con el aumento de citoquinas anti-inflamatroias IL4 e IL10. Adicionalmente, se han estudiado otros mecanismos de regulación de la expresión de IL4 o su receptor IL4Ralfa. En el caso de IL4, se ha demostrado que STat6 interfiere en la actividad transcripciones dirigida por NFAT sobre el elemento P1 del promotor de IL4, y que este mecanismo no es funcional en las primeras etapas de definicón del fenotipo T2, ni es afectado por IFNbeta. El promotor de IL4Ralfa que es regulado por un caja GT del tipo TAT-less, tampoco ve alterada su actividad por la presencia de IFNbeta.

Autor: MAYÁN SANTOS MARÍA DOLORES.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS (CIB-CSIC). FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UCM.

Resumen: Existen diferencias significativas en la naturaleza y regulación del supernrollamiento procesos fundamentales como la reclinación y la transcripción, utilizando como modelo de procariontes células de Scherichia coli y como modelo de eucariontes células de Sacchromyces cervisiae. También hemos estudiado la función del bloqueo de las horquillas de replicación en procesos de recombinación en el DNA ribosómico (rDNA) de S.cerevisiae. De los resultados obtenidos podemos concluir que en E.coli el DNA está más negativamente superenrollado que en S.cerevisiae y una reducción del superenrollamiento negativo en células de E.coli afecta tanto a la viabilidad celular como al número de copias plasmídicas. A diferencia de lo que ocurre en el caso de plácidos parcialmente replicados en E.coli, los minicromosomas de S.cerevisiae son capaces de adquirir superenrollamiento positivo. Esto indica que en las horquillas detenidas en el complejo RFB/Fob1p de S.cerevisiae, el superenrollamiento positivo no es capaz de generar la formación de horquillas en retroceso. Además en los microsomas de S.cerevisiae parcialmente replicados no se forman nudos entre cromátidas hermanas detrás de las horquillas. Finalmente, la integración de DNA extracromosómico en el rDNA cromosómico de S.cerevisiae no obedece exclusivamente a un bloque de las horquillas ya que en ausencia de Fob1p ocurre tanto en la región 3' del fragmento que codifica para el 35S del rRNA cromosómico, debido al a colisión frontal de las maquinarias de replicación y transcripción, como en la región en la que habría una barrera en presencia de Fob1p.

Autor: CARRACEDO PÉREZ ARKAITZ.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: Los cannabinoides son los derivados de la planta de la marihuana, Cannabis sativa L., que actúan sobre el organismo de mamíferos y otros animales a través de la interacción con un sistema pleiotrópico denominado sistema endocannabinoide. El estudio de las aplicaciones terapéuticas de la modulación de este sistema ha sido sujeto de estudio durante las últimas décadas. Una de las aplicaciones que más interés ha suscitado es el posible papel antitumoral de estos compuestos en células tumorales de diferente origen. Los resultados presentados en esta tesis doctoral muestran que los cannabinoides modulan la expresión de una serie de genes proapoptóticos de un modo dependiente de la acumulación de ceramida. Entre estos genes se encuentra el que codifica para la proteína de estrés p8, encargado de inducir ATF4, CHOP y TRIB3 para desencadenar la apoptosis. Además, la familia de genes modulada pro cannabionoides se encuentra implicada en un fenómeno denominado estrés de retículo endoplásmico. Nuestros resultados muestran que la activación del estrés de retículo es un evento selectivo de células transformadas sensibles a cannabionoides. Este hecho no se detecta en células no transformadas ni en células tumorales resistentes a cannbinoides, lo que lo sitúa como un marcador de la efectividad antitumoral de estos compuestos. Por último, la utilización conjunta de agentes inductores de estrés de retículo endoplásmico junto con cannabinoides ejerce una acción sinérgica sobre la apoptosis de células tanto sensibles como resistentes a cannabinoides. Los resultados mostrado en esta tesis doctoral podrían contribuir al mayor conocimiento de la potencialidad antitumoral de los cannabinoides.

Autor: MIGUEL LASOBRAS EVA MARÍA.
Año: 2005.
Universidad: EXTREMADURA [www.unex.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Autor: GUARINO ALMEIDA ESTRELLA.
Año: 2005.
Universidad: EXTREMADURA [www.unex.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS, UNIVERSIDAD DE EXTREMADURA.

Resumen: En Escherichia coli, la reducción de los ribonucleótidos utilizados en la síntesis de DAN a sus de soxiribonucleótidos (dNTPs) correspondientes se lleva a cabo por la Ribonucleótido Difosfato Reductasas (NDPreductasa) que es esencial para la replicación del cromosoma. La mutación nrdA101 da lugar a una NDPreductasa termosensible. La incubación a 42ºC de extractos crudos o preparaciones puras de la enzima mutante destruye su actividad en dos minutos; sin embargo, al incubar a 42ºC una bacteria mutante termosensible nrdA101, no se detiene la replicación hasta transcurridos 40-50 minutos después del cambio de temperatura. Esto sugiere que la NDP reductasa mutada podría estar protegida de la inactivación térmica por alguna hiperestructura, ya que el fenotipo de esta estirpe no es el característico de un mutante de elongación. En este trabajo se ha analizado la progresión de las horquillas de reclinación en una estirpe nrdA101, observándose que en este mutante las horquillas de replicación sufren más paradas que en una estirpe isogénica silvestre para el elelo nrdA. Además, este aumento de horquillas paradas no se debe a un menor suministro de nucleótidos generado por un actividad parcial de la enzima mutada incluso a temperatura permisiva y las horquillas detenidas se reanudan mediante reversiones (siguiendo el modelo del RFR), al igual que ocurre al detener la replicación alterando enzimas que forman parte del replisoma. También se ha demostrado que la síntesis residual de DNA que se produce al incubar el mutante a 42ºC procede sin necesidad de la acción de enzimas de recriminación ni de la proteína PriA, señalando que durante el tiempo que la NDP reductasa permanece protegida no se produce un desensamblaje de la maquinaria de replicación. Se detectó también que la capacidad de sufrir una reversión de las horquillas paradas en el mutante nrdA101 variada dependiendo de la estrategia empleada para inactivar la NDP reductasa -inactivación química de la enzima por adición de hidroxiurea a los cultivos o mediante incubación de la estirpe a 42ºC C-, ya que en esta segunda condición horquilla detenida era protegida de algún modo, posiblemente por la propia maquinaria de replicación, impidiéndose la generación de una cola de NDA de doble cadena en el cromosoma. Por último, se observó que, aunque el mutante era incapaz de reanudar la replicación a 30ºC tras haber sido incubado previamente a 42ºC, la capacidad de reanudar la replicación tras la eliminación de la hidroxiurea requería las proteínas de recombinación RecA y RecB sólo si la NDP reductasa presente era la codificada por el alelo nrdA101, señalando que tenían que existir diferencias entre las horquillas de replicación de una estirpe silvestre y las del mutante analizado. Con este trabajo por tanto, se aportan evidencias de las implicaciones de esta enzima de biosíntesis de dNTPs en la progresión de las horquillas de replicación a lo largo del cromosoma, señalando que el complejo de biosíntesis de nucleódios y el de replicación están asociados en una hiperestructura de replicación.

Autor: VIDAL AROCA FAUSTINO.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: El activador transcripcional sigma54-dependiente TouR regula la expresión del operón tou de Pseudomonas stutzeri OX1 en respuesta a metil-fenoles. TouR pertenece a la familia de reguladores NtrC. Estos reguladores sigma54-dependientes presentan una estructura organizada en varios dominios: 1,- Un dominio central C, altamente conservado, que lleva a cabo las funciones fundamentales para la activación de la transcripción, tales como la unión e hidrólisis del ATP, la multimerización y la interacción con la sigma54-ARNpolimerasa. 2,- Un dominio A N-terminal, característico de cada subgrupo de la familia que está involucrado en la respuesta a señales medioambientales (en el caso de TouR, respuesta a metil-fenoles). 3,- Un dominio D C-terminal responsable de la unión al ADN promotor. 4,- Un dominio-B que aparentemente juega un papel de regulación como conector estructural entre los dominios A y C. La arquitectura molecular de TouR y la respuesta conformacional debida a la unión del metil-fenol están todavía por caracterizar. El objetivo de esta tesis ha sido el de obtener una huella estructural de TouR mediante dicroísmo circular, espectroscopía de fluorescencia y modernización de la estructura tridimensional. Además, para analizar los distintos sub-dominios funcionales, fue generada una colección de variantes de TouR mediante mutagénesis insercional de pentapéptidos a lo largo de toda la molécula, cuya capacidad para activar la transcripción fue evaluada.

Autor: LAGARTERA ORTIZ LAURA.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS.

Resumen: En la presente Tesis se ha caracterizado, a nivel funcional y estructural, la enzima fosforilcolin esterasa de Streptococcus pneumoniae (Pce) responsable de la hidrólisis de los residuos de fosforilcolina de la pared celular de dicho patógeno. Los estudios de actividad enzimática y de estabilidad, así como la determinación de su estructura tridimensional han permitido demostrar que ésta es una enzima dependiente de cinc y proponer un mecanismo catalítico de hidrólisis. Además, la caracterización estructural a alta resolución y la construcción del modelo Pce: teicóico han demostrado por qué la enzima es solamente capaz de degrada una determinada cantidad (30%) de los residuos de fosforilcolina de la pared celular. Por último, se ha identificado un nuevo sustrato para Pce, como es el factor de activación plaquetario (PAF), de gran relevancia fisiológica. Todos estos datos sugieren una importante función de Pce en el proceso de infección y en la patogenicidad de la bacteria.

Autor: BRICEÑO POLACRE OLGA MARIA.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: INTRODUCCIÓN Las alfa talasemias constituyen un grupo de enfermedades de origen genético, causadas por una disminución o ausencia en la síntesis de la cadena alfa de globina. En la mayoría de los casos esta alteración en la síntesis es debido a delecciones que afectan a uno o a los dos genes, alfa, siendo poco frecuente los casos debidos a mutaciones puntuales, inserciones o delaciones de pocos pares de bases, los cuales se han denominado alfa talasemias no delección. OBJETIVO En esta investigación se plantea el objetivo de determinar la incidencia de la alfa talasemia no deleción en los pacientes con alfa talasemia, utilizando técnicas de biología molecular. MATERIAL Se han estudiado 517 individuos en el período comprendido entre Enero del 2001 a Diciembre del 2003, pacientes que presentaban microcitosis para el diagnóstico de alfa talasemia en los que previamente se había descartado feropenia y presentaba Hb A2, Hb F y EEF de Hbs normales. MÉTODOS Se han estudiado los 2 tipos de alta talasemia no deleción mas frecuentemente descritos en el Mediterráneo: 1,- alfaHph debida a la delección de 5bp en el IVS I 2,- AlfaNco debida a un cambio en el codón de iniciación del gen. Para su análisis se amplifica de forma selectiva el gen alfa2 y el gen alfa1 por PCR y luego se realiza una digestión con al enzima de restricción específica, Hph I para la mutación alfaHph y Nco I para alfaNco. El estudio de la alfa talasemia delección se hizo por Southern Blot con las enzimas de restricción Bam HI y BgI LL y las sondas alfa y en el caso de las alfa+, completándose el estudio con diversas enzimas y sondas en los casos restantes resultaron positivos para la alfaNco del gen alfa2, 10 heterocigotos, 1 homocigoto y 1 doble heterocigoto asociado a la deleción 4,2 kb. CONCLUSIÓN La alfa talasemia no deleción representa mayor 8% de los casos de alfa talasemia en nuestro medio. La alfaHph es el tipo de alfa talasemia no deleción más frecuente y cuyas anormalidades hematológicas son más manifiestas que las presentadas en los casos de alfaNco. Los individuos con estas mutaciones presentan una microcitosis algo mayor a la hallada en individuos con pérdidas de un gen alfa pro delección de 3,7kb. Esto se explica porque la expresión del gen alfa2 afectado es tres veces superior al del gen alfa1.

Autor: RIVERO GUÉDEZ DAMARIZ.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Centro de lectura: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR SEVERO OCHOA.
Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR SERVERO OCHOA.

Resumen: La elF2 quinasas regulan la síntesis de proteínas de células eucarióticas, en respuesta a diversas situaciones de estrés, fosforilando la subunidad alpha del factor de iniciación 2 en el residuo Ser-51. En Saccharomyces cerevisiae existe una única elF2 alpha quinasa, el producto del gen GCN2, cuya actividad es necesaria para la supervivencia de la levadura en condiciones de privación de algún aminoácido. Sin embargo, en Schizosaccharomyces pombe existen tres genes distintos que codifican proteínas quinasas de la misma familia: el homólogo del GCN2 y otros dos, estructuralmente relacionados, que hemos llamado SEK1 y SEK2. Empleando mutantes de deleción de cada uno de estos genes, hemos estudiado el efecto que producen algunas situaciones de estrés como el choque térmico, el estrés oxidativo, la presencia de metales pesados y la privación de nitrógeno sobre la fosforilación del elF2 alpha. Nuestros resultados permiten asignar a cada elF2 alpha quinasa una respuesta diferencial a los distintos tratamientos. Así, la SEK2 se activa preferentemente tras el choque térmico, mientras que la GCN2 responde mejor al estrés oxidativo; la presencia de CdCl2, fundamentalmente promueve la activación de SEK2 y GNC2 y, finalmente, la privación de nitrógeno parece activar por igual todas las elF2 alpha quinasas de S.pombe. Los resultados obtenidos en este trabajo indican que la regulación de la traducción es una diana fundamental en respuesta a distintas formas de estrés, siendo la fosforilación del elF2 alpha por su quinasas específicas un fenómeno básico en dicha regulación: sin embargo, el aumento de los niveles de elF2 alpha P parece ser un efecto temprano que no tiene consecuencias detectables a tiempos más largos sobre el crecimiento celular. La elF2 alpha quinasas de S.pombe participan en las rutas de señalización de respuesta a estrés de forma específica, y en el caso del estrés oxidativo, parecen estar reguladas por la MAPK Sty.

Autor: ADÁN ROVIRA CRISTINA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las mitocondrias constituyen la principal fuente de energía para las células eucariotas. La biogénesis mitocondrial es un proceso que implica la generación de nuevas mitocondrias y la maduración de las ya existentes, con el objetivo de garantizar que cada célula contenga el número adecuado de estos orgánulos para poder desempeñar correctamente su función. Puesto que las mitocondrias contienen su propio genoma que codifica subunidades OXPHOS, la función mitocondrial depende estrictamente de la expresión del ADNmt y del número de copias de esta molécula en cada célula. A pesar de la relevancia de la biogénesis mitocondrial dentro de la fisiología celular, todavía no se conoce con claridad cómo se regula este proceso ni se han identificado todas las proteínas que participan en la regulación y en la transcripción del genoma mitocondrial. En este contexto, como objetivo de esta tesis doctora, nos propusimos analizar la función de algunos genes relacionados con el metabolismo del ADNmt utilizando D.melanogaster como sistema modelo. Por una parte, hemos caracterizado las regiones promotoras de los genes que codifican los factores de transcripción mitocondriales tipo B (d-mtTFB1 y d-mtTFB2), una helicasa mitocondrial (d-mthelicasa) y el factor mitocondrial de terminación de la transcripción (DmTTF). Por otra, hemos analizado la función in vivo de los factores de transcripción mitocondriales tipo B mediante interferencia de ARN (RNAi). Los resutlados del análisis de las regiones promotoras de estos genes han demostrado que, al menos en células en cultivo, el sistema DRE/DREF regula la expresión de los genes d-mtTFB2, d-mthelicasa y DmTTF per no la del gen d-mtTFB1. Inicialmente se había descrito que el factor de transcripción DREF participaba en la expresión de genes relacionados con la replicación del ADNn y la proliferación celular. Más tarde, los trabajos de caracterización sistemática de los promotores de los genes implicados en biogénesis mitocondrial realizados por nuestro grupo demostraron que DREF también regulaba la expresión de genes que intervienen en la replicación del ADNmt, como d-polg-b y d-mtSSB. Al identificarse en este trabajo que DREF regula, además, la expresión de los genes d-mtTB2, d-mthelicasa y DmTTF, este factor de transcripción es un sólido candidato en Drosophila a coordinar in vivo los procesos de replicación del ADNmt y del ADNn cuando la biogénesis mitocondrial está asociada al ciclo celular. El silenciamiento de la expresión del gen d-mtTFB2 provoca letalida larvaria y afecta a la transcripción mitocondrial, ala capacidad mitocondrial de síntesis de ATP por parte del sistema OXPHOS y a la proliferación celular. Las larvas RNAi-B2 no sufren defectos ni en la morfogénesis ni en el crecimiento celular y consiguen sobrevivir como tales a expensas de incrementar el flujo glucolítico con la consiguiente acumulación de lactato. La proteína d-mtTFB2 parece funcionar como un auténtico factor de transcripción mitocondrial, esencial para la viabilidad del organismo, que no puede ser reemplazado por d-mtTFB1, lo cual significa que ambas proteínas no ejercen funciones redundantes in vivo. El silenciamiento de la expresión del gen d-mtTFB1 aparentemente no tiene ninguna consecuencia fenotípica. Dada la homología de los factores mtTFB1 con las ARN-metiltransferasas bacterianas, falta por demostrar la implicación de esta proteína en la modificación de ARN in vivo, ya que los estudios in vitro indican que h-mtTFB1 es capaz de metilar ARNr. Los resultados de la RNAi de d-mtTFB1 en células en cultivo sugiere que mtTFB1 no funcionaría in vivo como un factor de transcripción mitocondrial sino como una proteína implicada en traducción mitocondrial.

Autor: QUINTERO BERNABEU MARIAROSA.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: UNIVERSITAT AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSITAT AUTÒNOMA DE BARCELONA.

Resumen: Los lípidos móviles visibles por RMN (ML) resonando a 1,28 y 0,9ppm han sido descritos en el patrón espectral de tumores cerebrales agresivos y en varios tipos celulares en cultivo. Los ML provienen principalmente de triacilgliceroles (TAG) contenidos en gotícuaes lipídicas (1-10 micrómetros diámetro) y han sido relacionados con procesos de necrosi y hipóxia en tumores, y a la velocidad de proliferación en cultivos celulares. Entender el origen bioquímico y biofísico de los ML puede ser de ayuda a la MRS de tumores cerebrales humanos en el diagnóstico, pronóstico y planificación de la terapia. Las señales de lípidos visibles por RMN (ML) de las células C6 han sido monitorizadas a 9,4 y 11,7 T (pulso y adquisición y 136 ms tiempo de eco) en sedimentos celulares por espectroscopia de 1H NMR. Se ha encontrado un comportamiento reproducible con el crecimiento. Los ML aumentan de fase log (día 4 de cultivo) a fase postconfluente (día 7 de cultivo). Este comportamiento se corresponde con el porcentaje de células que contiene gotículas citosólicas detectables por tincióe con Nile Red y epifluorescencia (rango 23% -60% de células). El número de células positivas aumenta tras la siembra (día 0-1), disminuye en fase log (día 2-4), aumenta de nuevo con la confluencia (día 5) y todavía más en post-confluencia (día 7). La parada de la proliferación inducida por deprivación de factores de crecimiento induce una mayor acumulación de gotículas citosólicas (hasta 100%) y un mayor aumento en los ML ( hasta 29,5 veces respecto de las céllulas de fase log de día 4 de cultivo). La cuantificación del lípidos neutros en extractos lipídicos totales de células C6 por cromatografia en capa fina (TLC) muestra que no hay cambios significativos con el crecimiento o la parada de proliferación en los principales tipos de lípidos neutros presentes (triacilglicerols, TAG; diacilglicerols, DAG; ésters de colesterol, ChoEst) excepto para los DAG, los cuales decrecen en células de día 7 . La cuantificación por 1H-13C HMQC de los extractos de células C6 (cèls. día 4, fase log, n=3; y día 7, post-confluentes, n=3) y con {1}-13C-glucosa enriquecida 99% (cèls. día 4, , n=3, incubación 24h; y día 7, n=3, incubación 48h) mostró que no había diferencias significativas en el contenido de TAG entre céllulas de día 4 y de día 7. La distribución del marcaje obtenida sugiere una compartimentalización de la síntesis de PL y TAG a partir de DAG, y un origen diferente de glucosa para la síntesis de TAG en las condiciones experimentales. La aparente discrepancia entre los resultantes de RMN, microscopía óptica y TLC puede ser explicada si se tienen en cuenta cambios biofísicos en el pool de lípidos neutros y los resultantes de marcaje. Se proporciona una explicación celular para los resultados obtenidos: la hipótesis de la lanzadora de TAG.

Autor: JUÁREZ GÓMEZ PAULA.
Año: 2006.
Universidad: VALENCIA [www.uv.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE PSICOLOGÍA - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA.

Resumen: Serpientes y lagartos forman el orden de los reptiles escamosos (Squamata). Los venenos de las especies venenosas se formaron por reclutamiento y evolución acelerada de protéinas ordinarias. Los proteomas de Ias ~serpientes Viperinae caracterizados hasta la fecha están constituidos por isoformas de unas pocas (típicamente 10-12) familias de proteínas, cuya abundancia relativa presenta gran variación interespecífica. Las proteínas mayoritarias de los venenos de las Víboras y serpientes de cascabel se agrupan en enzimas (proteasas dependientes de serina, metaloproteasas dependientes de Zn2+ del grupo de las reprolisinas, isoenzimas del grupo II de fosfolipasas A2, L-amino acido oxidasa) y proteínas sin actividad enzimática (proteínas similares a lectinas dependientes de Ca2+ y disintegrinas). Las metaloproteasas dependientes de Zn+2 (SVMP) son toxinas modulares y se clasifican en PI-PIV en función de los dominios que las forman. Las disintegrinas (40-100 AAs) son liberadas al veneno por procesamiento proteolítico de las metaloproteasas PII y actúan inhibiendo la adhesión de las integrinas a sus ligandos. Se clasifican en función de su longitud y número de enlaces disulfuro en monoméricas largas (-90 AAs, 7 SS), medias (-70 AAs, 6 SS) y cortas (- 40 AAs, 4 SS) y diméricas (subunidades de -63 AAs, 2 SS Inter.- y 4 SS intracatenarios). La composición proteíca del veneno crudo de Sistrurus m. barbouri, Echis ocellatus y Bitis arietans se analizó mediante RP-HPLC, espectrometria de masas y secuenciación N-terminal. Asi pudimos adjudicar cada pico obtenido tras la separación a ramilias de proteínas conocidas. Mediante combinación de tecnicas de Quimica de Proteínas y Proteómica hemos establecido una rota evolutiva para las disintegrinas basada en la pérdida sucesiva de enlaces disulfuro y el procesamiento proteolítico del extremo N-terminal. Analizando librerias de ADNc de glándulas de venenos de Bitis arietans y Echis oce//atus hemos descrito la existencia de precursores evolutivos de las disintegrinas bitistatina (larga) y ocellatusina (corta) que nos ban permitido proponer mecanismos moleculares para la emergencia de estos grupos de disintegrinas. La existencia de mensajeros que codifican para disintegrina no expresados en el veneno podria indicar la existencia de "fondos de reserva genómicos" de eventual relevancia para la adaptación a ecosistemas cambiantes. Además, mediante el análisis de la organización genómica de disintegrinas de las diferentes familias estructurales, hemos demostrado que la pérdida sucesiva de intrones forma parte de un mecanismo evolutivo de diversificación de las disintegrinas que conlleva una evolución acelerada y una minimización de las estructuras génica y proteíca.

Autor: Canda Sánchez Ana.
Año: 2006.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA [www.usc.es].
Centro de lectura: Facultade de Bioloxía.
Centro de realización: Facultade de Bioloxía.

Resumen: La transducción de la señal es el mecanismo por el que las células son capaces de responder a un estímulo; para ello son capaces de activar una serie de proteínas que, como una cascada, llevan la información desde la membrana plasmática hasta el núcleo. Dentro de la membrana plasmática podemos distinguir la existencia de unas regiones de membrana denominadas raft lipídicos, con unas características de fluidez y composición diferenciadas de la zona circundante. La presencia/ausencia de una determinada molécula en ellos es capaz también, de regular la respuesta celular. CD26 y CD45R0 son proteínas transmembrana implicadas en la regulación de la transducción de la señal durante la formación de la sinapsis inmunológica en los linfocitos T. Estudios previos han demostrado que IL-12 es capaz de aumentar los niveles de expresión de CD26, e induce su asociación con CD45R0, lo que empuja a esta fosfatasa a desplazarse fuera de zona raft. Se ha postulado que este desplazamiento es responsable de la "desactivación" de la señalización por IL-12. Esta interleukina tiene importantes funciones en el sistema inmune: induce la producción de IFNg, TNFa; promueve la proliferación celular; y coordina la respuesta inmune celular mediante la diferenciación hacia un fenotipo tipo Th1 y el aumento de la actividad citotóxica. En este trabajo se pretende aclarar la posición relativa del receptor de IL-12 respecto los rafts lipídicos y como ésta influye en la en la transducción de señal, así como estudiar qué moléculas pudieran estar implicadas en la proliferación inducida por IL-12.

Autor: GUTIÉRREZ ALCALÁ GLORIA.
Año: 2006.
Universidad: SEVILLA [www.us.es].
Centro de lectura: CENTRO DE INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES CINETÍFICAS IASLA DE LA CARTUJA. CSIC-USE.

Resumen: En Arabidopsis thaliana, los tricomas son estructuras unicelulares presentes en la superficie de hojas y tallos. Existen evidencias del importante papel de los tricomas en respuesta a distintos estreses bióticos y abióticos. Por otro lado, se ha demostrado que en la ruta de asimilación del azufre, el gen OASA1, involucrado en la biosíntesis de L-cisteína, se encuentra fuertemente expresado en los tricomas de Arabidopsis. Este aminoácido esencial es precursor de otros metabolitos azufrados necesarios para el crecimiento y desarrollo de la planta. En este trabajo de Tesis se ha realizado un estudio del papel del tricoma de Arabidopsis thaliana en la ruta de asimilación de azufre y su relevancia en situaciones de estrés abiótico. Además, se ha aislado y caracterizado la secuencia promotora del gen OASA1.

Autor: TEJERA CONCEPCION ALICIA CRISTINA.
Año: 2006.
Universidad: LA LAGUNA [www.ull.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD DE LA LAGUNA.

Resumen: Se estudia la gravedad y el valor pronóstico de la neumonía

Autor: SERNA JORGE BERNARDINO DE LA.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: El surfactante pulmonar es una compleja mezcla lipoprotéica que recubre los alvéolos en los mamíferos y permite la respiración, disminuyendo hasta 0 N/m la tensión superficial, evitando el colapso alveolar. En la presente tesis se ha estudiado la peculiar distribución estructural, su capacidad dinámica y funcional debida al compleja composición de la mezcla nativa del surfactante pulmonar porcino y sus fracciones aisladas a partir de la misma.

Autor: GONZÁLEZ RODRÍGUEZ JAVIER.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de realización: INSTITUTO DE SALUD CARLOS III CENTRO NACIONAL DE SANIDAD AMBIENTAL.

Resumen: El estudio de ejemplares de Mytilus edulis tratados con concentraciones conocidas de cadmio durante 72 horas facilita el aumento de las concentraciones de metalotioneína en el tejido de éstos, en respuesta a dicho tóxico, realizando estos análisis mediante electroforesis capilar, técnica que fue puesta a punto para la obtención de resultados de forma rápida, sencilla y que requiriera poca cantidad de muestra, para dichos análisis. Asimismo, el estudio de las actividades enzimáticas de los complejos de la cadena respiratoria, mediante técnica espectroscópicas, revelan una disminución en dichas actividades, principalmente en los complejos I y III. De este modo, ambas técnicas, junto con el análisis de la concentración real de cadmio en el tejido, mediante ICP-OES, proporcionan que el empleo de estos bivalvos en el monitorizado medioambiental sea sencillo y de gran utilidad, así como para determinar la calidad de los mismos con miras al consumidor.

Autor: MARTÍNEZ MORENO MÓNICA.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.

Resumen: Se ha llevado a cabo el estudio de la interacción de la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS) con la caveolina-1, con el fin de determinar los dominios de ambas proteínas implicadas en la interacción. Además se ha estudiado la interacción del dominio reductasa de la eNOS con proteínas de un lisado de células endoteliales. De esta forma se ha demostrado que la eNOS interacciona con un canal de calcio localizado en el retículo endo/sarcoplásmico, el receptor de rianodina (RyR). Por último se ha demostrado que el óxido nítrico es capaz de inducir una disminución de los niveles de caveolina-3 en células de músculo esquelético y cardiaco. Además este efecto tiene lugar por modificación covalente del factor de transcripción miogenina, responsable de la activación transcripcional del gen de la caveolina-3.