BIOQUIMICA (5)

Autor: SANCHEZ MARTINEZ SILVIA.
Año: 2006.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Autor: GOYTIA PASQUÍN M. ELISA.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Esta Tesis Doctoral aborda el estudio de varios aspectos del mecanismo de transmisión de potyvirus por pulgones con especial atención a la búsqueda de posibles sistemas de interferir con el mecanismo y así facilitar nuevos modos de protección de cultivos frente a potyvirus. También se ha profundizado en el estudio de los mecanismos moleculares que operan en este fenómeno y su implicación en la diseminación del virus. Se ha analizado la posible causa para la pérdida de la capacidad de transmisión por pulgones de una serie de variantes del potyvirus TEV con modificaciones puntuales en la región codificaste del factor ayudante HC-Pro. Para ello se han utilizado dos técnicas para el estudio de interacción de proteínas: Far Western blot y dos híbridos de levaduras. Se ha detectado una modificación puntual en la región codificante de la proteína de la cápsida (CP) de este virus que afecta al dominio conservado DAG implicado en la transmisión por pulgones pudiendo ser ésta la causa para la pérdida de función de esta colección de mutantes. Asimismo se ha observado que la capacidad de interacción de los distintos factores HC-Pro procedentes tanto de variantes transmisibles como no transmisibles por pulgón se mantiene, si bien parece ser algo más débil en el caso de las variantes no transmisibles desconociéndose la implicaciones biológicas que este hecho pueda tener. En la búsqueda de estrategias para interferir con la transmisión de potyvirus por pulgones se ha empleado el virus del Sharka, PPPv. Se ha desarrollado un sistema de expresión transitoria de la proteína HC-Pro de PPV basado en Agrobacterium tumefciens que permite expresar la proteína fuera del contexto de la inyección viral. Del mismo modo se han expresado también proteínas HC-Pro aleradas y no funcionales en transmisión. La expresión de proteína fue analizada en dos huéspedes distintos: N.benthamiana y N.tabacum siendo detectada únicamente en el primero de ellos. Los niveles de expresión de proteína en este sistema fueron tanto o más elevado que los producidos por una infección sistémica de PPV en este huésped. Para estudiar la actividad en transmisión de esta proteína expresada transitoriamente se generaron tres clones completos infecciosos de PPV no transmisibles por pulgones introduciendo distintas modificaciones en la región codificante de la proteína CP así como del factor HC.Pro. Gracias a estos clones se ha podido demostrar la actividad en transmisión de la proteína expresada fuera del contexto de la inyección viral mediante dos aproximaciones distintas. En ensayos de alimentación secuencial de pulgones la proteína HC-Pro de PPV expresada transitoriamente produjo valores de transmisión comparables a los generadores en ensayos con proteína HC-Pro procedente de una infección viral. Sin embargo, en ensayos de transmisión de planta a planta de mutantes complementados con la proteína activa en transmisión, los valores obtenidos fueron inferiores a los de controles de virus PPV transmisible por pulgones. Se ha empleando este sistema para producir proteína HC-Pro de PPV no funcional en transmisión y se ha ensayado la capacidad de la misma para interferir en el proceso sin observar una reducción significativa de los valores de transmisión pro nigua de las estrategias ensayadas. Asimismo se ha probado a interferir la transmisión de virus activo mediante infecicón mixtas con virus no transmisible sin obtener de nuevo una reducicón signficativa de la tasa de transmisión.

Autor: RICO RODRÍGUEZ DANIEL.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD CC BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD CC BIOLÓGICAS UCM.

Resumen: El análisis genómico la regulación génica del Receptor X de Retinoides (RXR) en macrófagos ha revelado que los ligandos de RXR provocan la expresión diferencial en un número moderado de genes, los cuales están implicados en funciones de respuesta defensiva, quimiotaxis, complemento y metabolismo lipídico. Además, los macrófagos KO para RXR-alfa pierden casi totalmente la capacidad de respuesta, lo que indica que esta isoforma es limitante en este tipo celular. En estos estudios se observó que RXR induce un aumento transcripcional de las quimioquinas CCL6 y CCL9 y, posteriormente, se demostró que el mecanismo de inducción implica la unión de RXR y ARNpol-ii a los promotores proximales. En modelos murinos de peritonitis, los ratones KO para RXR-alfa acumulan un menor número de granulocitos y monocitos en el foco de inflamación, fenómeno correlacionado con un déficit en la producción de CCL6 y CCL9 en los ratones KO.

Autor: SÁNCHEZ GARCÍA OLGA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNVIERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El estrés, en biomedicina, se entiende como todas aquellas situaciones en las cuales una determinada experiencia produce un aumento de glucocorticoides y de catecolaminas. Este aumento es fruto de la estimulación del eje hipotálamo-pituitaria-adrenal (HPA) y del sistema simpático medulo-adrenal (SMA). En el ratón, las glándulas salivares submaxilares (SMG) son el principal lugar de síntesis y almacenamiento del Factor de Crecimiento Epidérmico (EGF). Las cat ecolaminas, segregadas durante el estrés, estimulan una rápida secreción del EGF desde las SMG hacia la sangre y la saliva. A posteriori este EGF interfiere en las principales acciones metabólicas inducidas por las catecolaminas y en las lesiones provocadas por estas hormonas a más largo plazo. Aunque el sentido de esta interferencia a nivel metabólico no sea fácil de entender, es obvio que la interferencia en la generación de lesiones tisulares resulta un efecto beneficioso para el organismo. Esta acción protectora del EGF se ha descrito en el sistema gastrointestinal y cardiovascular. Por este motivo, el principal objetivo de esta tesis ha sido analizar si el EGF ejerce esta misma protección en otro tejido diana de las catecolaminas como es el hígado. Para conseguir este objetivo estudiamos el efecto del EGF en dos modelos de estrés diferente, en un modelo de estrés social (paradigma intruso-residente) y en un modelo de estrés físico -inmune (administración de endoteoxina bacteriana o LPS). El conjutno de nuestros resultados nos llevan a concluir que el EGF no ejerce una actividad hepatoprotectora de forma aguda, ni durante el estrés generado por la confrontación entre ratones, ni durante la respuesta inflamatoria desarrollada por el LPS. A pesar de lo anterior detectamos que los ratones ni SMG, sialoadenectomiados (SIALO), desarrollan unas lesiones hepáticas más graves y sufren una mayor mortalidad en respuesta al LPS. Pensamos que este efecto es debido a que las alteraciones en la estructura hepática, fruto de una falta transitoria de EGF después de la sialoadenectomia, afectan al balance entre factores por inflamatorios (TNF-alfa y IL-6) y anti inflamatorios (IL-10 y corticosterona).

Autor: RAMÍREZ BAJO M. JOSÉ.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El trabajo de esta tesis se centra en la caracterización genética, enzimática, estructural, enzimática y metabólica de un déficit de fosfoglicerato quinasa que cursa con anemia hemolítica. Para ello se secuenció todo el gen de la PGK-1 encontrándose una única mutación en el exón 3 (46Ile - Asn). Al tratarse de un niño de corta edad y debido a la escasez de muestra, se procedió al clonaje de la enzima normal y mutada. Una vez conocida la mutación, se hizo el modelaje estructural, concluyéndose que sólo se veía alterada la estabilidad del enzima. La caracterización enzimática se centró en estudios de valores de Km, pH óptimos, efectos inhibitorios, termoestabilidad y movilidad electroforética de hemolizados y clones, concluyéndose que todas estas características sólo se observaba una disminución de la estabilidad del enzima mutado, siendo el resto normal. A nivel de alteración metabólica se determinaron los niveles de los intermediarios metabólicos de la glucólisis y delos nucleótidos adenílicos, observándose sólo un aumento de los niveles de 2,3 BPG y una disminución de los de ATP. Como conclusión general de la tesis, la deficiencia enzimática es debida a una única mutación (46Ile-Asn) que disminuye la estabilidad del enzima bajando los niveles de actividad y causando un aumento de 2,3 BPG y una disminución de ATP eritrocitaria, que darían lugar a la hemólisis causante de la anemia.

Autor: MIGUEL TURU MARTA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de realización: DEPARTAMENT NEUROLOGIA BELLVITSE.

Autor: OTAEGUI GARCÍA GAIZKA.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS (CSIC). FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS (UCM).

Resumen: El control de la neurogénesis en el SNC implica regular múltiples procesos celulares, como la proliferación del os precursores y células madre neurales, la diferenciación y la apoptosis. Así, las células madre neurales del bulbo olfatorio (CMBO) dependen de la (pro)insulina o del IGF-I para suproliferación en cultivo. El IGF-I además promueve la diferenciación de las CMBO a neuronas y lía, tanto en cultivo como in vivo. Con objeto de estudiar la posible implicación de las rutas bioquímicas PI3/Akt y MAP kinasas en la señalización por factores de la familia de la insulina, las CMBO se trataron durante 30 minutos con IGF-I. Hemos visto que esta proteína estimula notablemente la fosforilación de Akt tanto en la fase de proliferación como de diferenciación de las CMBO, mientras que no activa significativamente ERK1/ERK2. La importancia de la ruta bioquímica de PI3K/Akt se comprobó mediante la sobreexpresión, utilizando construcciones retrovirales, en estas células de la fosfatasa PTEN, un inhibidor de dicha ruta. El aumento de PTEN provocó una disminución en los niveles basales de PAKT/AKT y además una reducción del número de neuronas y astrocitos derivados de las CMBO, pero no alteró su proliferación. Finalmente, para comprobar el efecto de la ausencia del IGF-I endógeno sobre la activación de Akt, hemos cuantificado esta proteína en BO de embriones knockout para IGF-I a diferentes edades. Nuestros datos muestran una disminución significativa delos niveles de PAKT/AKT en el BO de ratones nulos para IGF-1 a la edad de E16,5-E18,5. Por tanto, durante la neurogénesis del bulbo olfatorio, IGF-I activa la ruta de señalización de PI3K/Akt, siendo PTEN una molécula clave para la regulación de la diferenciación celular.

Autor: MUÑIZ PELLO ÓSCAR.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA. UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: El trabajo experimental realizado versa sobre la regulación de la señalización de la quimioquina CXCL12 a través de su receptor CXCR4. Las quimioquinas son pequeñas moléculas proinflamatorias, claves en el posicionamiento de las células del sistema inmune en tiempo y lugar adecuados. De hecho, se profundiza en el hecho de que los receptores de quimioquinas, miembros de la familia de GPCr forman heterodímeros con otros receptores de la misma familia, y en concreto, en esta tesis se describe como el receptor de quimioquinas CXCR4 es capaz de heterodimerizar con el receptor opiáceo en células del sistema inmunológico, lo que resulta en un nuevo receptor que es incapaz de señalizar en presencia de los correspondientes ligandos añadidos simultáneamente. Este resultado permite bloquear la respuesta celular a CXCL12, así como bloquear las funciones CXCR4 y de los receptores de opioides. Además, durante el desarrollo de esta primera parte, se observó que los opioides eran capaces de inducir la adhesión de monocitos a fibronectina y se procedió a caracterizar la ruta de señalización correspondiente, y a que el efecto de los opioides, actuando directamente como reguladores de la respuesta inmunológica, es todavía bastante desconocida. Por otro lado el trabajo define la importancia fisiológica que tiene la activación de la ruta JAK/STAT por quimioquinas y demuestra como la expresión de supresores de la señalización por citoquina s(SOCS) bloquea la señalización del par CXCL12/CXCR4, implicado en la retención de células madre hematopoyéticas de la médula ósea, provocando la rápida movilización de esta población celular a la circulación periférica.

Autor: RODRÍGUEZ RODRÍGUEZ M. DEL MAR.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: El virus de la Hepatitis C (HCV) es la principal causa de hepatitis aguda y enfermedad hepática crónica, incluyendo cirrosis y cáncer hepático. Este virus ha sido clasificado como perteneciente al nuevo género Hepacivirus perteneciente a la familia Flaviviridae. Dada la trascendencia sanitaria de la hepatitis C, resulta necesaria la búsqueda de nuevas terapias así como de una vacuna efectiva para la prevención de la enfermedad. Los actuales datos controvertidos relativos a la forma de entrada en la célula del virus resultan inquietantes, siendo necesario profundizar en los procesos que median la unión viral, así como en la entrada y fusión de las membranas viral y celular, con el fin de contribuir al conocimiento de la virología molecular de la hepatitis C. Los bajos niveles de partículas virales en el suero de pacientes infectados y la falta de un sistema de replicación in vitro del virus han impedido un análisis directo de las proteínas de la envoltura del HCV, y en concreto, de la proteína E2. Por ello, en primer lugar se han realizado diversas pruebas de expresión con el fin de encontrar un sistema de expresión para la proteína E2, que permitiese obtener suficiente cantidad de proteína soluble tras su purificación para poder llevar a cabo la posterior caracterización estructural mediante técnicas espectroscópicas. Además, con la proteína en una conformación nativa, se ha realizado la caracterización antigéncia así como los estudios dirigidos a conocer el estado de oligomerización y el patrón de glicosilación. A continuación, se han determinado las propiedades fusogénicas de E2, planteando diversos ensayos como la agregación de vesículas, la mezcla de lípidos y la pérdida de l contenido intravesicular, con distintas especies fosfolipídicas, así como en distintas condiciones de pH y presencia/ausencia de colesterol. Estas interacciones inducen cambios en los fosfolípidos que se han estudiado mediante medidas de polarización de fluoresencia. Con el fin de conocer cómo puede afectar la eliminación de la región amino terminal de E2 a las propiedades fusogénicas de E2, se ha expresado la proteína E2 430 (aminoácidos 430-661) para, posteriormente llevar a cabo su caracterización estructural y el estudio de sus propiedades fusogénicas. Finalmente, considerando que la región que exhibe el mayor grado de heterogeneidad genética se encuentra en el segmento N-terminal de E2 la región hipervariable 1 (HVR1), y que varios autores la han propuesto como determinante en la unión viral, se han obtenido cuatro mutantes HVR1 con el fin de caracterizar sus propiedades fusogénicas y de desestabilización de membranas. Además, estos estudios resultan de gran importancia en el diseño de una vacuna, puesto que se ha demostrado que algunos de los mecanismos de evasión inmunitaria residen en esta región. En conclusión, los resultados obtenidos en la presente tesis doctoral aportan datos y herramientas que permiten avanzar en el diseño de nuevas moléculas recombinantes que podrían ser utilizadas con fines preventivos en la infección pro el virus de la hepatitis C.

Autor: CORROCHANO SÁNCHEZ SILVIA.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS (CIB-CSIC), FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UCM.

Resumen: Las enfermedades heredo-degenerativas de la retina suponen una de las principales causas de ceguera en el mundo. Existe una hipótesis que presupone que los mecanismos que operan durante el desarrollo podrían ser reactivados y efectivos en condiciones de daño traumático o degenerativo del tejido. El tipo de muerte celular que ocurre durante el desarrollado el Sistema Nervioso, más concretamente de la reina neural, sucede de una forma fisiológica y en nuestro laboratorio se ha visto el papel anti-apoptotico que ejerce la proinsulina sobre la muerte natural en el desarrollo. En esta Tesis Doctoral se ha encontrado expresión de proinsulina durante el desarrollo dela retina neural de ratón, así como en la retina adulta normal y la que sufre un de proceso degenerativo. El principal objetivo de esta Tesis Doctoral era testar el efecto neuroprotector de la proinsulina sobre las enfermedades heredo-degenerativas de la retina. Para este estudio se ha seleccionado los modelos de ratón con retinosis pigementaria rd1 y rd10, en los que los bastones de la retina degeneran por un proceso de muerte celular programada. El aporte de proinsulina exógena a la retina que sufre degeneración se realizó en cultivos de explantes de estas, también con inyecciones subcutáneas diarias a lo largo de la degeneración y con inyecciones puntuales intravítreas. Con ninguno de estos abordajes se consiguió ver un efecto neuroprotector de la proinsulina sobre la degeneración de bastones. Cuando el aporte de proinsulina se realizo de forma endógena y constitutiva, a través de la generación de ratones rd10 y productores de proinsulina humana en el músculo estriado, se pudo observar un efecto atenuador de la proinsulina sobre el proceso degenerativo de la retina.

Autor: GONZÁLEZ HORTA AZUCENA DEL CARMEN.
Año: 2006.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: El surfactante pulmonar es una compleja mezcla lipoproteica que desarrolla dos funciones vitales. Primero el surfactante reduce la tensión superficial en los alvéolos disminuyendo el trabajo respiratorio y previniendo el colapso alveolar gracias a la interacción entre los fosfolípidos, lípidos neutros y las dos proteínas hidrofóbicas SP-B y SP-C. Estas proteínas promueven la formación de una película funcional de surfactante aumentado la adsorción y extensión en la interfase aire-líquido respiratoria de las moléculas tensoactivas. Segundo, el surfactante desarrolla funciones importantes asociadas al sistema inmune innato. La mayoría de estas actividades se han asignado a las proteínas hidrofilicas SP-A y SP-D, las cuales interaccionan directamente con patógenos y alerfenos y estimulan células del sistema inmune. Una interacción directa entre la SP-C y lipopolisacárido bacteriano ha sugerido la participación de esta proteína en los mecanismos de defensa del pulmón. El trabajo de investigación desarrollada en la presente tesis ha tratado de caracterizar a nivel molecular el papel que el segmento N-terminal de la SP-C desempeña en estas dos funciones empleando para ello peptidos sintéticos que podrían potencialmente útiles como aditivos en nuevas preparaciones de surfactante clínico.

Autor: VILLAESCUSA RAMIREZ JUAN CARLOS.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y DE BIOMEDICINA.
Centro de realización: DIBIT (Milan), CEINGE (Napoles), IFOM (Milan).