ACIDOS NUCLEICOS

Autor: CASALS FALCÓ JOAN.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA DE LA UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: Se han diseñado y sintetizado conjugados acridina-oligonucleótido que puedan actuar como inhibidores de la telomerasa a través de la estabilidad de estructuras de cuádruplex de guaninas (G) formadas en los extremos teloméricos de las células humanas. Los intermedios clave en la ruta sintética que ha permitido obtener los conjugados deseados son derivados acridínicos asimétricamente disustituidos, ocn un grupo carboxílico en uno de los extremos, que se han hecho reaccionar con 5'-amino-oligonucleótidos. El método sintético desarrollado ha permitido obtener una pequeña biblioteca de conjugados acridina-oligonucleótido que introduce deviesidad a nivel de derivado acridínico, de secuencia oligonucleotídica y de linker de unión entre ambos componentes. Los conjugados obtenidos se han evaluado, en primer lugar, como estabilizadores de estructuras de cuádruplex de G formadas por la secuencia telomérica humana, mediante la técnica fret (fluorescence resonance energy transfer). Posteriormente, se ha evaluado su capacidad de inhibición dela telomerasa mediante ensayos trap (Telomeric repeat amplification protocol). Seha puesto de manifiesto que los conjugados obtenidos estabilizan, aunque menos que las acridinas de contienen, los cuádruplex de G formados por la secuencia telomérica humana, y que inhiben la telomerasa, además, se ha observado una correlación aceptable entre los resultados obtenidos en ambos experimentos. Por otro lado, se han sintetizado varios oligonucleótidos cícliros ricos en guaninas potencialmente formadores de cuádruplex de G y se ha estudiado se estructura utilizado las técnicas de espectroscopia ultravioleta (UV), dicroísmo circular (DC) y resonancia magnética nuclear (RMN). En particular, se ha observado que el dodecámero cíclico d mayor Pttagggttaggg menor forma una estructura bien definida de duádruplex bimolecular tipo cesta en presencia de sodio, por último, se ha estudiado la interacción de estos oligonucleótidos cíclicos con ciertas acridinas, observándose que estabilizan las estructuras de cuádruplex de G y que, en le caso del oligonucleótido d mayor Pttggttgg menor, inducen su estructuración.

Autor: TERRAZAS MARTÍNEZ MONTSERRAT.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAT DE QUÍMICA - UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: En la presente Tesis se ha intentado desarrollar nuevas metodologías que permitan modificar las bases purínicas de los nucleósidos, con dos intenciones claramente diferenciadas: por un lado, su marcaje con 15N, para facilitar el análisis estructural de ácidos nucleicos; por el otro, la búsqueda de nuevas especies antivíricas. En los capítulos 1 y 2 de esta memoria se ha estudiado la reactividad de una amplia gama de 1-sulfonilinosinas con aminas. El objetivo final era comprobar si estos sustratos podrían experimentar ataques nucleófilos sobre a posición electrófila C2 por aminas para dar lugar a un intermedio abierto, cuya ciclación debería llevar a inosinas modificadas en el N1. De las diferentes vías de sulfonilación ensayadas (N1-tosilo, N1-triisopropilbencenosulfonilo, N1-pentafluorobencenosulfonilo, N1-4-nitrobencenosulfonili, N1-2,4-dinitrobencenosulfonilo, N1 -2-nitrobencenosulfonilo, N1-mesilo y N1-triflilo), la que dio mejores resultados en la reacción con aminíaco marcado fue la correspondiente al grupo 2-nitrobencensulfonilo. De esta manera se llegó con buen rendimiento a 2'-desoxiinosinas totalmente marcadas en el N1. Por otro lado, en la reacción con alquilaminas, los grupos 2-nitrobencenosulfonilo y 2,4-dinitrobencenosulfonilo fueron los candidatos más adecuados para alquilar la posición N1 del anillo de purina. De esta manera se creó también una nueva ruta de acceso hacia 1-alquil-2'-desoxiinosinas. En el tercer capítulo se presenta y se discute un nuevo mecanismo de transposición de nucleobases purínicas que permite transformar directamente inosinas en adenosinas N1-alquiladas y en [1- 15N]adenosinas a partir de 1-(2,4-dinitrobencenosulfonil)inosinas. En el capítulo 4 hemos desarrollado un nuevo método de marcaje con 15N de los grupos amino exocíclicos de purinas. Nuestra idea inicial de introducir directamente 15NH3 sobre especies purínicas activadas de manera suave no ha sido posible. En cambio, el acoplamiento catalizado por Pd(0) de 6-bromopurinas y 2-bromoinosinas con cantidades estequiométricas de [15N]benzamida fue muy efectivo. Además, este protocolo, juntamente con el desarrollo para el marcaje del N1 de 2'-desoxiinosinas, nos ha permitido describir una nueva ruta de acceso a las [N-1- 15N2]adenosinas. Por último, hemos aplicado los procedimientos desarrollados para la modificación de nucleobases purínicas a la preparación de nuevas especies nucleosídicas dirigidas a la inhibición de la encima transcriptasa inversa (RT) del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1). Así, en el quinto nos hemos centrado en el diseño, la síntesis y la evaluación de la actividad anti-VIH de especies diméricas. Este estudio nos ha llevado al descubrimiento de un compuesto de moderada actividad inhibitoria y de baja citotoxicidad.

Autor: HERNANDEZ SANTOS DAVID.
Año: 2005.
Universidad: OVIEDO [www.uniovi.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA.

Resumen: Los métodos de detección de ADN han experimentado un gran desarrollo durante los últimos años debido a las posibilidades que ofrecen para obtener valiosa información acerca de multitud de enfermedades genéticas, riesgos de contaminación medioambiental o agroalimentaria, o, por ejemplo, en investigaciones forenses. De entre todos los métodos, hoy en día se están poniendo a punto un gran número de sensores electroquímicos para la detección de ADN (generalmente llamados genosensores electroquímicos); la elevada sensibilidad de los transductores electroquímicos unida a la posibilidad de miniaturización y microfabricación de los dispositivos y al bajo coste de los mismos hace de estos sistemas una novedosa alternativa para la detección de ADN. En este trabajo se describe la construcción de novedosos genosensores electroquímicos de pequeño tamaño y un solo uso en los que la detección se lleva a cabo de manera sencilla utilizando hebras de ADN doblemente marcadas, lo que permite comparar las características analíticas de dos sistemas de detección y proponer las condiciones de utilización más adecuadas para cada uno dependiendo de las necesidades del ensayo. Inicialmente se desarrollan dos estrategias de detección electroquímica de marcas metálicas fundamentadas en dos reacciones electroctalíticas (la electrodeposición catalítica de plata y la reacción de evolución catalítica de hidrógeno), aplicando dichas metodologías a la detección de oro coloidal y de diferentes complejos metálicos, susceptibles de ser utilizados como marca de AND, al mismo tiempo que se evalúa el uso de electrodos de pasta y carbono y de electrodos serigrafiados de carbono para llevar a cabo las detecciones electroquímicas y para su posterior utilización como transductores en la construcción de genosensores. Tras la elección del electrodo serigrafiado como transductor electroquímico, de la reacción de evolución catalítica de hidrógeno como método de detección y del empleo del método de marcaje ULS (que utiliza un complejo de platino para marcar hebras de ADN, en este caso con fluoresceína), se describe la construcción de genosensores electroquímicos en los que la fase sensora de inmoviliza a través de la interacción estreptavidina-biotina utilizando hebras sonda biotiniladas, y en los que es posible llevar a cabo la detección cronoamperométrica directa de platino a través de la reacción de evolución catalítica de hidrógeno o la detección voltamperométrica indirecta enzimática de la florecerína mediante el uso de anticuerpos anti-fluoresceína marcados con fosfatasa alcalina y de 3-indoxil fosfato como sustrato. Los genosensores se desarrollan utilizando secuencias específicas del patógeno Streptococcus pneumoniae, y posteriormente se aplican a muestras reales mediante la detección de productos PCR del gen TNFRSF21. Los dos modelos de genosensor construidos son dispositivos sensibles, estables y reproducibles, capaces de detectar una mutación en una secuencia de bases si se emplean las condiciones de hibridación adecuadas, si bien los genosensores basados en una detección enzimática son más reproducibles y sensibles, los basados en la detección del platino permiten realizar el análisis en menos de la mitad de tiempo, de un modo más sencillo y con la utilización de un menor número de reactivos, con la consiguiente disminución del coste por análisis.

Autor: Roca Subirà Ignasi.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Facultad de Ciencias.