HORMONAS

Autor: RABANO AZURMENDI MARIA ANGELES.
Año: 2004.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGIA.

Resumen: La biosíntesis de glucocorticoides está regulada principalmente por las hormonas ACTH, adrenalina y angiotensina-II (AT-II). Aunque está bien establecido que la activación de la adenilato ciclasa es un mecanismo común a la acción de la ACTH y de la adrenalina, el mecanismo por el cual la AT-II estimula la secreción de cortisol es menos conocido. En el presente trabajo se ha demostrado que la AT-II regula la secreción de cortisol vía estimulación de diferentes rutas de señalización celular tales como la fosfolipasa D (PLD)/ fosfatidato fosfohidrolasa (PAP), las quinasas estimuladas por mitógenos (MAPK) de la familia ERK y la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) / proteína quinasa B (PKB). Por otra parte, uno de los hallazgos más importantes en esta tesis doctoral ha sido el descubrimiento de un nuevo regulador de la secreción de cortisol: la esfingosina-1-fosfato (Sph-1-P). Se sabe que este fosfoesfingolípido es capaz de regular importantes funciones celulares, tales como la apoptosis, la proliferación, la diferenciación celular o la angiogénesis. En este trabajo hemos demostrado que la Sph-1-P es tan potente como la adrenalina en inducir la secreción de cortisol en células de fasciculada. Sin embargo, al contrario que la adrenalina y la ACTH, la Sph-1-P no ejerce este efecto vía estimulación de la producción de AMPc. El mecanismo por el cual la Sph-1-P estimula la secreción de cortisol se asemeja más al de la AT-II ya que implica la estimulación de las actividades PLD/PAP, MAPK (ERK1-2) y PI3-K/PKB.

Autor: ZUAZUA VILLAR PEDRO.
Año: 2005.
Universidad: OVIEDO [www.uniovi.es].
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La unión del receptor de estrógenos (RE) alfa a la calmodulina constituye una característica diferencial respecto al receptor de estrógenos beta. Esta interacción hace que el RE tenga una actividad transcripcional basal y que su degradación sea más lenta, además de permitir la regulación de la actividad transcripcional del mismo por los antagonistas de la calmodulina y la melatonina. Esta unión están implicados los residuos de la región bisagra del receptor de estrógenos alfa: isoleucina 298-lisina y lisinas 302-303. Los resultados obtenidos en este trabajo con diferentes receptores mutados demuestran que la calmodulina no es necesaria para la actividad transcripcional del receptor inducida por el estradiol. La lisina 303 del RE alfa también se encuentra implicada en procesos de acetilación y ha sido identificada su mutación a arginina en un gran número de lesiones premalignas de mama. Las células en las que se sobreexpresa este receptor mutado (RE K303R) proliferan en respuesta a concentraciones más bajas de estradiol que las células normales. Nuestro resultados demuestran que este efecto se corresponde con una mayor actividad transcripcional tanto de los homodímeros (RE K303R/RE K303R) como los heterodímeros con el receptor alfa silvestre (RE K303R/RE alfa) en promotores que contiene elementos de respuesta a estrógenos. El receptor RE K303R tiene la particularidad de que une calmodulina y sin embargo no es sensible a la acción de los antagonistas de la misma. Además, la actividad transcripcional sobre promotores que contienen sitios de unión a AP-1 es inhibida por acción del estradiol. Esta respuesta no se encuentran condicionadas por el cambio de lisina a arginina sino asociadas a la desaparición de la lisina 303 como se deduce del hecho de que el mutante en esta lisina por alanina (RE K303A) tiene un comportamiento análogo al RE K303R. En este trabajo hemos estudiado también los mecanismos desencadenados por el estradiol que conducen a la expresión génica en la línea Celular MCF7, observando que afectan a la redistribución del receptor dentro del núcleo celular y a su degradación. Nuestro resultados sugieren que la actividad transcripcional del RE alfa conlleva la localización del receptor en una fracción nuclear distinta (identificada por su solubilización con detergentes) y su posterior degradación. El antiestrógeno ICI 182, 780 tiene este mismo efecto, aún en ausencia de transcripción.

Autor: HIDALGO BARRERA ANTONIO.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA.

Resumen: La adiponectina es una dipoquina cuyos mecanismos de actuación no se conocen todavía con exactitud. Niveles plasmáticos bajos de adiponectina se han correlacionado con la obesidad y con la resistencia a insulina y la hiperinsulinemia incluso en individuos no obesos. La adiponectina promueve la sensibilidad a insulina y protege de la obesidad y, por tanto, se ha sugerido que podría ser utilizada para mejorar la sensibilidad a insulina en pacientes diabéticos y obesos. El incremento de la oxidación de lípidos en músculo esquelético mediado por la adiponectina se ha considerado como uno de los principales factores que conduce a la mejora en la señalización y la sensibilidad a insulina a nivel sistémico. Estos datos sugerían que la expresión constitutiva de adiponectina en músculo esquelético y sus efectos en este tejido podrían proteger de la resistencia a insulina y la obesidad inducida por una dieta alta en lípidos. En la primera parte del presente estudio, se analizaron los efectos de la expresión de adiponectina en músculo esquelético en la sensibilidad a insulina y la obesidad. Con este fin, se generaron ratones transgénicos que expresaban adiponectina localmente en músculo esquelético. Estos animales se alimentaron con una dieta alta en lípidos. De la misma manera, se expresó adiponectina en músculo esquelético en ratones mediante la utilización de vectores virales. Posteriormente, estos animales también se alimentaron con dieta alta en lípidos para valorar el efecto de la expresión de adiponectina en la sensiblidad a insulina y la obesidad. Se observó que la adiponectina actuaba a nivel local en el músculo esquelético aumentando la sensibilidad a insulina en condiciones estándar de alimentación a la vez que inducía una mayor predisposición a oxidar ácidos grasos en este tejido. Sin embargo, este efecto de la adiponectina exclusivamente en músculo esquelético no era suficiente para contrarrestarla resistencia a insulina inducida por una dieta alta en lípidos. La segunda parte del presente estudio se centró en analizar los efectos de la expresión de adiponectina en músculo en un modelo de resistencia primaria a la insulina. En este caso, la resistencia a insulina no era debida a la lipotoxidad inducida por la ingesta de dieta alta en lípidos sino a un defecto en la señalización de insulina. Para ello, se utilizaron animales genosuprimidos IRS-1-/-. En primer lugar, los animales IRS-1-/- presentan resistencia severa a insulina y alteración en la tolerancia a la glucosa pero no presentan obesidad. En segundo lugar, este modelo no presenta resistencia a la insulina en hígado, ya que IRS-2 compensa funcionalmente en ese tejido la falta de IRS-1 (Yamauchi et al.,1996; Previs et al., 2000). Además, la utilización de este modelo permitió estudiar si los efectos de la adiponectina como sensibiizador de la insulina tenían lugar independientemente de la presencia de IRS-1, el principal sustrato del receptor del a insulina en músculo esquelético. Tras la electrotrasnferencia del gen de la adiponectina en músculo esquelético de ratones IRS-1-/- se observó que la expresión de adiponectina mejoraba la sensibilidad a insulina. Ello era debido a una normalización en el metabolismo de la glucosa y no a un aumento en la oxidación de ácidos grasos en estos animales.

Autor: PEÑA RUIZ ANA.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: La vasopresina es una hormona neuroendocrina implicada en diversas funciones fisiológicas como el control del equilibrio hidromineral, la regulación de la presión arterial y el control adenohipofisario de la secreción de ACTH. Estas acciones están mediadas por la interacción de la hormona con tres subtipos de receptores membranares bien diferenciados, V1a, V1b, V2, que pertenecen a la gran familia de receptores acoplados a proteínas G. De todos los receptores del subtipo V1b, que controla la secreción hipofisaria de ACTH y ciertas funciones del comportamiento como el estrés y la ansiedad, ha sido siempre el menos estudiado por la falta de ligandos selectivos de esta isoforma durante mucho tiempo. El objetivo del presente estudio ha consistido en sintetizar y caracterizar nuevos ligandos selectivos y en definir los determinantes moleculares del receptor V1b, que sustentan su especificidad farmacológica. A lo largo de este trabajo las modificaciones en la estructura de la hormona natural a nivel de las posiciones 1, 4 y 8 han permitido generar los primeros agonistas selectivos del receptor V1b, humano y de rata. Gracias al estudio de modernización molecular y de mutagénesis dirigida se ha demostrado el papel fundamental de: * La tronina 203 y la metionina 324 en la especificidad de interacción del receptor V1b con el antagonista selectivo SSR149415. * La valina en posición 169 y la prolina en posición 196 en la interacción del receptor V1b con el agonista selectivo d[Cha4]AVP. * El glutamato en posición 37 y el aspartato en posición 95 como responsables de la interacción con la hormona natural. Esta investigación ha permitido ampliar los datos moleculares concernientes al receptor V1b así como la caracterización de nuevas herramientas farmacológicas. La relación de la AVP con los fenómenos de ansiedad y depresión incita a la continuación de este estudio en la perspectiva de desarrollar nuevos compuestos con potencial terapéutico. Además, los resultados obtenidos a lo largo de esta tesis permitirán un mejor conocimiento de los aspectos fisiológicos y/o fisiopatológicos asociados a este subtipo de receptor.

Autor: GARCÍA MARCOS MIKEL.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA UPV/EHU.

Resumen: La glándula submandibular constituye un buen modelo para el estudio del acoplamiento estímulo-respuesta y los mecanismos de señalización celular. En este tejido se expresan diversos tipos de receptores como los adrenérgicos, muscarínicos y purinérgicos. Por otro lado, en los últimos años se ha propuesto que la membrana plasmática de la célula no es una estructura homogénea, sino que existen dominios discretos (rafts) con una composición y características físicas distintas al resto de la membrana. Además, existe una relación entre estos microdominios de membrana y procesos de señalización y tráfico celular. En el presente trabajo se ha caracterizado tanto la respuesta purinérgica al ATP observada en la glándula submandibular, así como el papel de los microdominios de membrana en las rutas de señalización acopladas a distintos receptores expresados en este tipo celular. Mediante la utilización tanto de herramientas farmacológicas como de ratones modificados genéticamente que no expresan un receptor purinérigoc P2X7 funcional, se ha podido caracterizar que este receptor es el principal responsable de la señalización purinérgica observada en respuesta al ATP. Además, este receptor está implicado en algunos aspectos de la secreción salival in vivo. Por otro lado se han aislado y caracterizado microdominios de membrana purificados por dos métodos distritos, con y sin detergente. En ambos casos se puede aislar una fracción de membrana con propiedades análogas a los 'rafts' lipídicos: alto contenido en colesterol, ácidos grasos saturados, vaeolina-1, gangliósidos GM1, así como una mayor rigidez respecto al resto de la membrana. La disgregación de estos dominios bloque efectivamente la movilización de calcio de los depósitos intracelulares de calcio por agonistas muscarínicos, adrenérgicos y peptidérgicos, pero no a la entrada capacitativa de calcio. Por otro lado, el receptor proapoptótico P2X7 se distribuye en dos poblaciones, una, en la fracción fluida de la membrana que se acopla a la formación de un conducto inespecífico de cationes, y otra, en los 'rafts', acoplada a la activación de una esfingomielinasa neutra y la consiguiente producción de cerámido.

Autor: MONTERO PEDRAZUELA ANA.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Centro de lectura: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS.

Resumen: Las alteraciones hormonales están implicadas en muchas patologías asociadas con la edad como las enfermedades neurodegenerativas y los trastornos psiquiátricos. En el adulto, las alteraciones del estado tiroideo cursan con frecuencia con cambios psicológicos y trastornos del estado del ánimo como la depresión. Se ha demostrado que en los mamíferos adultos, incluido el hombre, continúa generándose neuronas a partir de células madre en el giro dentado GD, de la formación del hipocampo. Las neuronas generadas se integran funcionalmente y podrían estar implicadas en procesos de memoria y aprendizaje, así como en el mantenimiento del estado de ánimo. Se ha descrito que una disminución de la neurogénesis en el adulto induce trastornos depresivos y que la eficacia de los antidepresivos depende de la generación de nuevas neuronas en el GD. Por ello, el conocimiento del proceso de adquisición de nuevas neuronas en el adulto y su modulación puede suponer una herramienta importante para paliar daños cerebrales y enfermedades neurodegenerativas y psiquiátricas. Numerosos estudios han demostrado que las hormonas tiroideas HT, son esenciales para la neurogénesis y la gliogénesis durante el desarrollo, pero hay muy pocos trabajos que hayan analizado su función en el adulto. El objetivo de esta tesis fue analizar in vivo la posible modulación de la neurogénesis del adulto en el GD por las HT, así como explorar posibles implicaciones funcionales relacionadas con esta modulación. Los resultados obtenidos indican que el hipotiroidismo durante un corto periodo de tiempo en el adulto disminuye significativamente la capacidad proliferativa del GD, reduciendo tanto el número de precursores neuronales en proliferación, como el número de unidades proliferativas. Además, el hipotiroidismo afecta gravemente a los neuroblastos inmaduros disminuyendo su numero, alterando su distribución y provocando un desarrollo anormal de su árbol dendrítico. Estos cambios en la neurogénesis afectan algunas funciones dependientes del hipocampo. Los animales hipotiroideos muestran un mayor comportamiento de tipo depresivo que los eutiroideos en un modelo experimental de depresión (prueba de nado forzado). El tratamiento crónico de las ratas hipotiroideas con HT fue capaz de recuperar la tasa de neurogénesis en el GD y normalizar el comportamiento de estos animales. Nuestros resultados indican que las HT son esenciales para la neurogénesis del adulto en el GD y sugieren que los desórdenes del comportamiento depresivo provocados pro el hipotiroidismo del adulto en humanos pueden estar relacionados, entre otros, con la disminución de la neurogénesis en el GD. Todo lo anterior podría ser importante para futuras aplicaciones terapéuticas en la modulación de la neurogénesis endógena y desórdenes del comportamiento.

Autor: SANTANA SANTANA JOSÉ RAMÓN.
Año: 2005.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA [www.ulpgc.es].
Centro de lectura: CENTRO SUPERIOR DE CIENCIAS DE LA SALUD.
Centro de realización: CENTRO SUPERIOR DE CIENCIAS DE LA SALUD.

Resumen: INTRODUCCIÓN La TPO es una proteína de membrana regulada por la TSH esencial para la producción de las hormonas tiroideas. Los cambios cuantitativos o cualitativos de la TPO se relaciona con anormalidades en su biosíntesis debido a enfermedades tiroideas. Se ha sugerido que el cáncer de tiroides se asocia a anomalías en la expresión de TPO. De esta forma el estudio de la inmunotinción de la TPO, usando anticuerpos como el Mab-47, se hace necesaria en tejidos normales y patológicos tiroideos. Algunos hallazgos sugieren que los cambios cualitativos en la TPO podrían ocurrir en algunos estadios del proceso neoplásico. SE ha observado una reducción inmunohistoquímica de TPO mediante el anticuerpo monoclonal mAb-47 en más del 95% de los tumores malignos. Esta anomalía se ha utilizado como factor de predicción de malignidad en los nódulos tiroideos estudiados por punción con una sensibilidad superior al 95% y una especificidad superior al 85% los tumores foliculares. Esta diferencia permite discriminar tumores benignos de malignos en aproximadamente en el 50% de los casos. Ahora bien la especificidad de este método de diagnóstico es baja debido que los porcentajes de inmunotinción de TPO son intermedios en los casos restantes. PLANTEAMIENTO Y OBJETIVOS Nos planteamos en la presente Tesis Doctoral, el estudio de la expresión inmunohistoquímica de la proteína TPO (Moab-47) en el Tiroides normal y patológico mediante herramientas estadísticas, así como, su estudio comparativo con el factor de proliferación ki67 y con la proteína del ciclo celular p53. El objetivo principal es valorar si la expresión inmunohistoquímica puede tener un valor pronóstico y de supervivencia en el cáncer de tiroides. MATERIAL Y MÉTODOS Se estudiaron un total de 139 pacientes operados de cáncer de tiroides en el HUIGC, de los cuales fueron 42 carcinomas papilares, 38 carcinomas foliculares y 16 medulares e indiferenciados y 43 casos de patología benigna entre adenomas, tiroiditis e hiperplasia. Se hizo un seguimiento de 20 años y se valoró la expresión inmunohistoquímica de TPO mediante el Mab47, p53 y Ki67 por el sistema AB-peroxidasa y revelado con 3-3' diaminobencidina en tejidos fijados en formalina tamponada e incluidos en parafina. Los resultados se cuantificaron por doble score de intensidad y porcentaje de tinción y los datos se analizaron por métodos estadísticos en paquete SPSS-13. RESULTADOS Y DISCUSIÓN La expresión de TPO descendió de forma significativa con el tipo histológico tumoral y el estadio TNM, siendo negativa en los carcinomas anaplásicos y en algunos medulares. Iguales resultados, aunque inverso, se obtuvieron con la proteína p53 y el factor de proliferación Ki67. Resultados disparen se obtuvieron en los carcinomas Foliculares, no así en los Papilares, en los que se apreció reducción de TPO en relación al grado de desdiferenciación de los mismos. Para la supervivencia total la TPO negativa se relaciona con los tumores de pero pronóstico a los 15 años de seguimiento, siendo igualmente negativa para el tiempo libre de enfermedad. Igualmente lo fue para los caos con intensidad débil o moderada. Para los pacientes con TPO intensa en el momento del diagnóstico, la supervivencia total y el tiempo libre de enfermedad fueron óptimos, a los 20 años de seguimiento. La comparación entre los resultados obtenidos por nosotros y la literatura revisadas, en relación a los carcinomas foliculares y papilares tanto en su forma clásica como en sus tipos histológicos tiene el denominador común de la reducción de expresión TPO de acuerdo con la pérdida de diferenciación celular y grado TNM, obteniendo nuestros datos significado distinto, posiblemente por el número casos estudiados y por usar un método de contaje de la expresión TPO y estudio estadístico, incluida la supervivencia no abordada en la literatura. CONCLUSIONES 8 La may 4fd oría de los carcinomas papilares 81% tuvieron escasa TPO, siendo un buen marcador para estas neoplasias. Los carcinomas indiferenciados y anaplásicos no la expresa. Relacionando la TPO y la supervivencia total al os 20 años, esta fue de un 72% en los pacientes con TPO negativa, mientras que para una TPO intensa todos sobrevivieron. Parece razonable proponer que la tiroperoxidasa por procedimientos inmunohistoquímicos, deba incluirse como factor pronóstico en el cáncer de tiroides junto con otros como tipo histológico, tamaño tumoral, edad e invasión regional y a distancia.

Autor: MARTÍ SANCHIS ESMERALDA.
Año: 2006.
Universidad: POLITÉCNICA DE VALENCIA [www.upv.es].
Centro de lectura: Dep. Biotecnologia.
Centro de realización: Universidad Politécnica de Valencia.

Resumen: El tomate es una especie hortícola que, gracias a sus características genéticas, constituye un sistema modelo para estudios del desarrollo en plantas. Micro-Tom es un cultivar de tomate que se ha tomado como modelo en diferentes estudios biotecnológicos realizados recientemente en esta especie. Su fenotipo enano, su ciclo de vida corto y la facilidad de ser transformado mediante Agrobacterium son características que lo convierten en un buen sistema modelo. Sin embargo, no se conocen las bases genéticas ni moleculares que generan el particular fenotipo de este cultivar. En el presente trabajo se han caracterizado molecularmente dos mutaciones que generan dos características fenotípicas de Micro-Tom: la mutación dwarf (d), que afecta a un gen de la biosíntesis de brasinosteroides (BR) y causa enanismo y rugosidad en las hojas, y la mutación self-pruning (sp), que afecta a un gen implicado en el control del proceso en que se alternan las fases vegetativas y reproductivas, causando una determinación acelerada de las unidades simpodiales y dándole a la planta una apariencia muy compacta. Además se ha determinado que, en Micro-Tom, las giberelinas (GAs), hormonas necesarias para en el crecimiento normal de la planta, no tienen alterada la ruta de biosíntesis ni de respuesta, por lo que una tercera mutación propuesta en la bibliografía para éste cultivar, miniature (mnt), no está relacionada con el metabolismo ni la señalización de estas hormonas. El cuajado y el desarrollo del fruto, particularmente el de tipo partenocárpico, son dos de los caracteres de interés biotecnológico en tomate y ambos procesos dependen de GAs. En el presente trabajo se ha realizado un estudio comparativo de la expresión de un gen de biosíntesis de GAs de tomate (SlGA20ox1) implicado en la fructificación, en Micro-Tom (mediante análisis por RT-PCR) y en Arabidopsis (utilizando un fragmento de 851 pb del promotor de dicho gen fusionado a GUS).