LIPIDOS

Autor: Ribosa Fornoví Isabel.
Año: 2003.
Universidad: RAMÓN LLULL [www.url.edu].
Centro de lectura: Escuela Técnica Superior IQS.
Centro de realización: Escuela Técnica Superior IQS.

Resumen: Se ha estudiado el proceso de solubilización de liposomas grandes ( 200 nm) y unilaminares de fosfatidilcolina de huevo y ácido fosfatídico (en relación molar 9:1), por diferentes tensioactivos iónicos, no iónicos y anfotéricos. Se ha empleado tanto la espectrofotometría de absorción como la espectroscopía de resonancia magnética nuclear de P31, para la determinación de los parámetros físico-químicos que caracterizan dicho proceso: la relación molar tensioactivo/fosfolípido en los liposomas saturados de tensioactivo, la relación molar tensioactivo/fosfolípido en las micelas de tensioactivo saturadas de fosfolípido y la concentración de monómeros de tensioactivo que permanecen en disolución en el medio. Se ha analizado la influencia de la estructura molecular del tensioactivo en los valores de los parámetros físico-químicos obtenidos. Además, considerando los liposomas como estructuras fosfolipídicas biomiméticas, se ha examinado la relación entre dichos parámetros y la toxicidad acuática de los tensioactivos observada sobre la especie Daphnia magna.

Autor: PALACIOS MARTIN LOURDES.
Año: 2004.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGIA.

Resumen: Este trabajo aborda la identificación de la proteína de rata purificada en nuestro laboratorio que se denominó erCEH (colesterol éster hidrolasa de retículo endoplásmico) y su posible papel en el metabolismo lipídico de los hepatocitos. Su secuencia aminoacídica reveló que la proteína pertenece a la familia de proteínas que presentan 4 dominios SNc (Staphiloccocus Nuclease) y 1 dominio Tudor. No se encontraron suficientes indicios para atribuirle una actividad colesterol éster hidrolasa, por lo que ha sido redenominada como SND p102. En hepatocitos y células HepG2 y CHO se ha inmunolocalizado básicamente en citoplasma, preferentemente en microsomas. Mediante infección adenoviral de hepatocitos de rata para sobreexpresar o anular la expresión de la proteína SND p102 se ha visto su implicación en la movilización del fosfolípido desde el citoplasma hacia vías secretoras, principalmente la secreción biliar, aunque también hacia la secreción de lipoproteínas, sin afectar al nº de partículas de VLDL secretadas.

Autor: CANO GONZALEZ BEATRIZ.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FUNDACION JIMENEZ DIAZ.

Resumen: Existen múltiples evidencias de que la presencia de factores de riesgo cardiovascular (dislipidemias, obesidad, diabetes...) en la edad infantil contribuye de forma importante a la aparición de la enfermedad cardiovascular (EC) en la edad adulta. Los niveles de dehidroepiandrosterona sulfato (DHEA-S), principal esteroide suprarrenal C19 segregado por la zona reticular de la corteza adrenal, se consideran como factor condicionante de EC aunque la literatura presenta importantes discrepancias al respecto. En adultos, la relación de la DHEA-S con la EC se establece a través de su influencia sobre factores de riesgo clásicos como los niveles de lípidos o a través de su relación con otros factores predisponentes como la obesidad. Los datos de la relación de la DHEA-S con los factores de riesgo en población infantil son escasos. Al estudiar factores de riesgo cardiovascular a la edad prepuberal, 6-8 años, observamos la influencia de la dehidroepiandrosterona-sulfato (DHEA-S), que comienza a producirse a esta edad, en el efecto que el genotipo de Apo E ejerce sobre los niveles de lípidos plasmáticos. Así mismo, hemos constatado que las alteraciones metabólicas asociadas a la obesidad cambian con la edad del niño apuntando al estado de maduración sexual como responsable de la presencia de estas alteraciones. Estas evidencias nos llevaron a pensar que la DHEA-S puede estar contribuyendo a los niveles de determinados factores de riesgo a una determinada edad. Por todo ello, nos propusimos analizar dicha hormona en 854 niños/as de edad prepuberal y aclarar así la posible relación de la DHEA-S con los factores de riesgo de EC en esta etapa de la infancia. Las conclusiones a las que llegamos son que a lo largo de esta edad de 6-8 años las concentraciones de DHEA-S experimentan aumentos progresivos y significativos y que las niñas hasta los 8 años siempre tienen unos valores de DHEA-S más altos que los niños. Los aspectos más directamente relacionados con las concentraciones de DHEA-S son el peso, la talla, el IMC y el peso al nacer. A esta edad la DHEA-S modula el efecto de la insulina sobre los niveles de lípidos, especialmente los niveles de C-HDL. Por último, los niños con sobrepeso y obesidad presentan unos niveles de DHEA-S significativamente más altos que los niños de peso normal y las alteraciones lipídicas asociadas a la obesidad están moduladas por la DHEA-S.

Autor: ARTIEDA OSEÑALDE MARTA.
Año: 2004.
Universidad: ZARAGOZA [www.unizar.es].
Centro de lectura: HOSPITAL UNIVERSITARIO MIGUEL SERVET.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO MIGUEL SERVET.

Resumen: Los macrófagos tienen funciones esenciales en todas las fases de la aterosclerosis, desde el desarrollo de la estría grasa al proceso que contribuye a la ruptura de la placa y al evento cardiovascular. Por ello, la identificación de marcadores de macrófagos activados posee un enorme interés, ya que puede ser una herramienta muy útil para predecir el riesgo cardiovascular individual. La enzima quitotriosidasa, por ser un marcador de macrófagos activados, podría ser utilizada como un marcador de aterosclerosis "in vivo". En este trabajo se describió que la actividad sérica de la enzima quitotriosidasa se encontraba significativamente elevada en sujetos con patología aterosclerosa,153 sujetos con ictus aterotrombótico y 133 sujetos con enfermedad isquémica coronaria, respecto a 148 sujetos control. Además, la actividad sérica quitotriosidasa aumentaba con el grado de estenosis carotídea en sujetos que habían presentado un ictus aterotrombótico. Por otra parte, la concentración de la proteína C reactiva en suero se encontraba significativamente elevada en sujetos con patología aterosclerosa respecto a controles. Sin embargo, no existía correlación entre la actividad sérica quitotriosidasa y la concentración de la proteína C reactiva en ninguno de los grupos del estudio, lo que indica que ambos marcadores son mamadores inflamatorios independientes. Además, se llevó a cabo un estudio prospectivo de una media de 4 años con el grupo de sujetos con enfermedad isquémica coronaria, para analizar el valor predictivo de la actividad sérica quitotriosidasa en la predicción de eventos cardiovasculares, y comparado con el de la proteína C reactiva. Los resultados del análisis indicaron que la actividad sérica quitotriosidasa basal predecía el riesgo de eventos cardiovasculares en sujetos con enfermedad coronaria estable en los siguientes 4 años con un valor predictivo similar al de la proteína C reactiva, siendo mejor marcador de aquellos eventos que se presentaron a partir de los 2 años. Además, la combinación de ambos marcadores mejoraba la identificación de aquellos sujetos con menor riesgo de evento cardiovascular. La Hipercolesterolemia Familiar (HF) es una enfermedad con gran variabilidad en la respuesta frente a elevadas concentraciones de LDL, tanto en el fenotipo lipídico, riesgo de cardiopatía isquémica y presencia de xantomas tendinosos (XT). La acumulación en los tendones de grandes cantidades de macrófagos cargados de lípidos, especialmente de LDI. oxidada (LDLox), es el origen de los XT en sujetos HF. Sin embargo, se desconoce la causa por la que algunos sujetos HF desarrollan XT y otros no lo hacen. La comparación del perfil de expresión génica del "pool" de macrófagos de sujetos HF con XT (n=8) y sin XT (n=6) mediante el"microarray" de expresión HG-U133A de Affymetrix mostró una expresión génica diferencial en 12 genes en ausencia de incubación con LDLox, y de 30 genes tras una incubación con LDLox, con fruiciones en el remodelado del entorno, inmunomodulación, inflamación y susceptibilidad a la apoptosis. Los macrófagos de sujetos HF con XT mostraron una respuesta diferencial a LDLox, acumulando más lípidos neutros (analizado por tinción de las células con Rojo de Nilo y citometría de flujo), una mayor respuesta inflamatoria y una menor susceptibilidad a la apoptosis. El beneficio de las estatinas es superior al esperado por su papel hipolipemiante, dado que producen efectos sobre la fisiología de casi la totalidad de células involucradas en la aterogénesis, entre ellas el macrófago. Se desconocen la mayoría de las funciones de las estatinas en la regulación de la expresión génica en el macrófago. La comparación del perfil de expresión génica mediante el "microarray" H 8 G-U 133A 794 del "pool" de macrófaaos (de 10 sujetos sanos no relacionados) incubados con LDLox y tratados con la estatina atorvastatina respecto al "pool" de macrófagos incubados solamente con LDLox mostró una expresión génica diferencial en 54 genes, de los cuales 46 estaban sobreexpresados y 8 inhibidos. La atorvastatina produce, en macrófagos incubados con LDLox, cambios en la expresión de genes involucrados en la síntesis endógena de colesterol y en otras vías metabólicas independientes, principalmente relacionadas con proteínas reguladas por intermediarios isoprenoides y con otras vías reguladas por los factores de transcripción SREBP. La atorvastatina, además de inducir uña disminución de la síntesis endógena de colesterol, regula la entrada de colesterol al macrófago, ya que a las proteínas Rab5, reguladas por isoprenilación (direrencialmente expresadas en respuesta atorvastatina), se les ha atribuido un papel regulador en la endocitosis de lipoproteínas modificadas vía receptores "scavenger", y regula el eflujo del colesterol, ya que a esteroil-CoA desaturasa (diferencialmente expresado en respuesta a atorvastatina) se le ha atribuido un papel regulador en esta vía, regulando la insaturación de ácidos grasos y fosfolípidos de la membrana plasmática, y por ello, la fluidez de la misma.

Autor: ACÍN MARTÍNEZ SERGIO.
Año: 2004.
Universidad: ZARAGOZA [www.unizar.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: 1. El aporte de una elevada cantidad de grasa monoinsaturada en forma de aceite de oliva virgen en la dieta no eleva la lesión arteriosclerótica con respecto a una dieta rica en carbohidratos, en el ratón carente de la apolipoproteína E. Sin embargo, este efecto es suprimido por la presencia de colesterol. 2. Los componentes minoritarios del aceite de juegan un papel importante en la regulación del nivel de triglicéridos y colesterol plasmático, así como en la modificación de la expresión génica hepática y en la regulación de la lesión arteriosclerótica. 3. Una dieta enriquecida en aceite de orujo extraído por procedimientos mecánicos disminuye la lesión con respecto a una dieta enriquecida en aceite de oliva refinado y eleva la expresión de orosomucoide lo cual está asociado con una menor expresión de Mac-1 de monocitos circulantes. 4. El suplemento de la dieta con escualeno produce un acúmulo del mismo en el hígado de los ratones machos carentes de apo E y está correlacionado con una disminución de la grasa hepática y de la lesión arterial. Por el contrario, en las hembras, este suplemento no induce acúmulo de escualeno en el hígado, asociado a una ligera esteatosis hepática y sin cambios en la lesión aterosclerótica. Estos resultados indican que el sexo es un factor importante a la hora de valorar el comportamiento de este modelo en las distintas condiciones experimentales. 5. El suplemento de la dieta con hidroxitirosol incrementa la lesión en el ratón carente de apo E, incremento que está correlacionado con la expresión de Mac-1 en los monocitos circulantes, especialmente en machos.

Autor: MORENO GUTIERREZ JUAN ANTONIO.
Año: 2005.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Objetivos: Determinar si el polimorfismo -219G/T, en el promotor de la ApoE, determina la respuesta postprandial así como los niveles de la proteína. Estudiar si los polimorfismos -219G/T y E2/E3/E4 modifican los niveles lipídicos, la susceptibilidad a la oxidación "in vitro" y el tamaño de las LDL, en respuesta al tipo y cantidad de grasa de la dieta. Material y métodos: Se realizó un test de sobrecarga grasa en 51 hombres sanos apoE 3/3, asi como un estudio de intervención con 3 dietas distintas en otros 84 jóvenes sanos. La primera contenía un elevado porcentaje de grasa saturada (SAT) (38% grasa total, 20% SAT) y luego se les administró de forma randomizada y cruzada una dieta rica en hidratos de carbono (HCO) (30% grasa, 55% HCO) y otra rica en grasa monoinsaturada (MONO) (38% grasa, 22% MONO). Resultados: Los hombres homocigotos TI presentaron la mayor respuesta postprandial en los triglicéridos, colesterol y retinil palmitato en quilomicrones, así como en la ApoB-48 en los remanentes de quilomicrones. Además, presentaban los menores niveles plasmáticos de ApoE durante este periodo. Los portadores del alelo -219T presentaron un mayor descenso del C-LDL y ApoB, al sustituir la dieta SAT por la dieta HCO. La sustitución de la dieta SAT por la HCO o MONO, indujo un mayor incremento en la fase de latencia de resistencia a la oxidación de las LDL en los homocigotos TI. El tamaño de las LDL fue mayor en las personas apoE 4/3 que en apoE 3/3 y apoE 3/2, independientemente de la dieta. Además, la sustitución de una dieta HCO por una dieta MONO incrementó el tamaño de las LDL en las personas apoE 3/3 mientras que lo disminuyó en las apoE 4/3. Conclusiones: Los homocigotos TI presentan menores niveles de ApoE y un retraso en el aclaramiento de las lipoporoteínas ricas en triglicéridos en la fase postprandial. La presencia del alelo -219T aumenta la susceptibilidad a la oxidación "in vitro" de las LDL e incrementa los niveles plasmáticos de C-LDL y ApoB al consumir la dieta SAT, en hombres apoE 3/3. La sustitución de la dieta HCO por la dieta MONO incrementa el tamaño de las LDL en las personas apoE 3/3, mientras que lo disminuye en las apoE 4/3.

Autor: Pérez Fernández Rebeca.
Año: 2005.
Universidad: VALLADOLID [www.uva.es].
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: En este trabajo se estudia las distintas funciones biológicas de la fosfolipasa A2 de grupo VIA (iPLA2-VIA) en las células U937. Estas células se sometieron a estrés oxidativo gracias al tratamiento con agua oxigenada (H2O2). Las conclusiones a las que se llegaron fue que el tratamiento con H2O2 en las células U937 provoca la liberación de ácidos grasos entre ellos el ácido araquidónico (AA) a través de la enzima iPLA2-VIA y sin que participe la cPLA2. Además la enzima participa en la hidrólisis fosfolipídica de la membrana causada por el H2O2, pero dicha enzima no es necesaria para el proceso apoptótico que sufren las células U937 con el tratamiento con H2O2. La lisofosfatidilcolina (lisoPC), metabolito de la iPLA2-VIA, ayuda al reconocimiento y posterior fagocitosis de las células U937 apoptóticas. Otro metabolito de la iPLA2-VIA , AA, es una importante señal de apoptosis de las células U937 tratadas con H2O2. Destacar con todos estos datos que la iPLA2-VIA no sólo participa en la homeostasis de la células U937, ya que participa en la señalización de importantes eventos que ocurren dentro de la célula

Autor: BURZACO GALÁN JAIONE.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: El ATP extracelular inhibe la activación plaquetaria inducida por el ADP actuando como un antagonista competitivo de los receptores del ADP, el P2Y1 y el P2Y2. Aunque se han descrito otros efectos para este nucleótido en plaquetas humanas, no se ha caracterizado el papel que lleva a cabo el nucleótido de pruina en la activación plaquetaria inducida por la tormbina. Con el objetivo de investigar la interacción del ATP extracelular con la superficie plaquetria, se han caracterizado los mecanismos de inhibición que ejerce sobre la señalización de la trombina en este tipo celular. Los resultados demuestran que el ATP aumenta los niveles de cAMP de forma dependiente de la concentración y del tiempo de incubación. Observamos además, que en presencia del ácido nordihidroguaiarético (NDGA) o 15(S)-hidroxieicosatetraenoico, inhibidores de la 12-lopoxigenasa, se revierte significativamente la inhibición del nucleótido. Además, aunque el ATP bloquea el aumento de los niveles del ácido 12(S)-hidroxieicosatetraenoico, no disminuye la formación de su precursor, el ácido 12(S)-hidroperoxieicosatetraenoico estimulado por la trombina. La preincubación con SQ-22536 (inhibidor de la adenilato ciclasa) y NDGA revierte casi por completo la inhibición determinada en presencia del nucleótido. Por lo tanto, se concluye que el ATP extracelular ejerce su efecto de inhibición sobre la activación plaquetaria inducida por la trombina al menos a través de dos vías de señalización diferentes e independientes: 1,- Antagonizando con el receptor P2Y12, bloqueando de este modo la inhibición de la adenilato ciclasa. 2,- A través de otro receptor P2 todavía no caracterizado, acoplado a la ruta de la 12-lipoxigenasa. Los estudios realizados con la aspirina y la indometacina indican que el receptor P2Y2 no es el responsable del efecto del ATP. Además, experimentos con PPADs señalan que ni el receptor P2X1 ni el P2Y1 participan de dicha inhibición. El empleo del AR-C67085, antagonista del receptor P2Y12 y agonista del receptor P2Y11, muestra que el receptor P2Y11 tampoco se encuentra implicado. Por lo que un nuevo receptor purinérgico P2X puede estar implicado en la inhibición llevada a cabo por el ATP, permitiendo bloquear a la trombina.

Autor: RUIZ LÓPEZ NOEMÍ.
Año: 2005.
Universidad: SEVILLA [www.us.es].
Centro de lectura: INSTITUTO DE LA GRASA (CSIC) SEVILLA.
Centro de realización: INSTITUTO DE LA GRASA (CSIC). SEVILLA.

Resumen: Los objetivos de esta Tesis Doctoral fueron: PRIMERO Desarrollar un método analítico de extracción rápida de aceite a partir de media semilla, con el fin de determinar con precisión la composición de especies moleculares de triacilglicéridos en el aceite de media semilla de girasol por cromatografía gas-líquido. SEGUNDO Definir un coeficiente matemático que indique la distribución de ácidos grasos saturados entre las posiciones sn-1 y sn-3 del triacilglicérido. TERCERO Caracterización bioquímica de las actividades aciltransferasas (GPAT y LPAAT) microsomales de girasol, responsables de la síntesis de TAGs y por tanto, de la proporción final de las distintas especies de TAGs en un aceite de girasol. CUARTO Purificación parcial de la GPAT con el fin de conseguir su secuencia anminoacídica. QUINTO Clonación y secuenciación del donador de electrones de desaturasas plastidiales, la ferredoxina de girasol. Las conclusiones obtenidas fueron: 1,- Se ha desarrollado un método rápido de extracción de triacilglicéridos (TAGs), basado en la extracción de aceites de tejidos vegetales, utilizando una mezcla compuesta por un 33,3% de metanol con NaCl (0,17 M) y un 66,6% de heptano en volumen. 2,- La extracción óptima de los TAGs, de una muestra vegetal, se consiguió tras una incubación de esta muestra en la mezcla durante 2 horas a 80ºC. La composición de TAGs obtenida es representativa del total de los encontrados en el tejido vegetal. Los TAGs estadios pueden ser posteriormente metilados para obtener la composición en ácidos grasos, permitiendo el análisis de sus ésteres metílicos en la misma muestra de tejido. 3,- Este método permite la extracción de TAGs de un gran número de muestras vegetales de pequeño tamaño. Y por ello, es muy útil para la selección de nuevas variedades vegetales, teniendo en cuenta la composición en los TAGs y ácidos grasos de las semillas y frutos, ya que le embrión permanece intacto. 4,- El coeficiente matemático a SAT, que se ha desarrollado en este trabajo, permite el cálculo de la distribución relativa de los ácidos grasos saturados entre las posiciones externas sn-1 y sn-3 en los TAGs. Este coeficiente puede ser calculado si se conoce la composición total de ácidos grasos saturados de los TAGs, la composición de los ácidos grasos en la posición sn-2, y las especies moleculares de TAGs. 5,- El estudio de los coeficientes aSat indicó la existencia de un alto grado de asimetría en la distribución de los ácidos grasos saturados, entre las posiciones sn-1 y sn-3 de las especies de TAGs de todos los aceites estudiados, excepto en el caso del aceite de arroz. 6,- Asimismo, a partir de aSat, se puede calcular la distribución de cualquier ácido graso en particular en las molecular de TAGs de un determinado aceite. 7,- Las técnicas rápidas de análisis de la composición de TAGs y ácidos grasos, desarrolladas en este trabajo, los datos de loa composición de ácidos grasos en la posición sn-2, y el correspondiente coeficiente de asimetría aSat, calculado a partir de esta información, permitirán la selección de alelos de acitransferasas que presenten diferencias en su especificidad por los distintos ácidos grasos. 8,- El estudio de los parámetros cinéticos, aparentes de las acil-transferasas glicerol fosfato aciltransferasa (GPAT) y lisofosfatidato aciltransferasa (LPAAT) por sus respectivos sustratos, glicerol 3-fosfato y lisofosfatidato respectivamente, mostró similares valores para la constante de afinidad, 353 y 226 uM, y una velocidad máxima 25 veces menor para la GPAT, señalando a esta actividad como la determinante de la velocidad de síntesis de TAGs durante el desarrollo de las semilla de girasol. 9,- La actividad GPAT 8 no se vi a22 o estimulada con el uso de cationes Mg2+ y Mn2+ pero sí cuando fue ensayada con EDTA 10 mM. El pH óptimo de acilación para el GPAT y la LPAAT en microsomas de semillas de girasol en desarrollo fue de 7,5 y 8,5, respectivamente. Los máximos de actividad GPAT y LPAAT relativa se encontraron en las semillas más jóvenes (11 y 15 DDF), semillas que se encuentran en el inicio de la fase activa de síntesis lipídica. 10,- La GPAT mostró una amplia especificidad por todos los acil-CoAs ensayados, excepto para el estearil-CoA. Y, como ya se había visto en otras especies de plantas oleaginosas, el mejor sustrato para esta enzima fue el palmitil-CoA. 11,- La LPAAT presentó una gran especificidad por el oleil-CoA y muy baja especificidad linoleil-CoA, lo que contrasta con el elevado contenido de este ácido graso en la posición sn-2 de TAGs. Esto apunta a que gran parte del ácido oleico incorporado en la posición sn-2f es intercambiado por el ácido linoleico presente en las moléculas de fosfatidilcolina, con lo que la concentración de ácido oleico y linoleico en la posición sn-2 no refleja la actividad LPAAT, sino la de otras enzimas implicadas en la transferencia de ácidos grasos con la fosfatidilcolina. 12,- Se ha conseguido la purificación parcial de la GPAT microsomal de girasol tras una solubilización con Tween80 y después de dos pasos cromatográficos: cromatografía de intercambio aniónico seguida de cromatografía de filtración en gel. Del análisis mediante SDS-PAGE de la fracción purificación, se han obtenido varias bandas, de diferentes tamaños, como posibles candidatas para esta enzima. 13,- El gen Hafdx2 identificado a partir de semillas de girasol codifica para una ferredoxina heterotrófica. Aunque su secuencia y modelo estructural son similares a los de otras ferredoxinas descritas en plantas, defiere de la ferredoxina fotosintética de girasol anteriormente clonada en nuestro laboratorio.

Autor: GONZÁLEZ LÓPEZ MARIA MÓNICA.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: En los últimos años se han realizado grandes avances en lo que respecta a la biología de los lípidos. Actualmente se sabe que los lípidos bioactivos regulan numerosas funciones celulares. La hipótesis del presente trabajo de tesis doctoral es que el ácido lisofosfatídico (LPA), la esfingosina 1 fosfato (S1P) y el cerámido 1 fosfato (C1P), importantes lípidos bioactivos, regulan los procesos inflamatorios en fibroblastos y macrófagos. Los objetivos marcados para demostrar esta hipótesis son los siguientes: 1,- Estudiar si el LPA, la S1P y el C1P son capaces de modular los proceso migratorios en distintos tipos celulares. Para ello que se llevarán a cabo experimentos de migración con los fibroblastos y los macrófagos. 2,- Investigar las rutas de transducción implicadas en los procesos de migración regulados por estos lípidos bioactivos. 3,- Determinar los posibles efectos del C1P en los procesos inflamatorios en macrófagos. 4,- Examinar los mecanismos a través de los cuales el C1P regula dichos procesos inflamatorios.

Autor: MARTÍNEZ SALAZAR ROSA M..
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA, UPV/EHU.

Resumen: Los radicales libres pueden reaccionar con constituyentes celulares modificando parámetros celulares y/o actuar como segundos mensajeros. Estudios realizados anteriormente demostraron que el tert-butilhidroperóxido (TBHP), un oxidante utilizado como modelo de estudio en el mecanismo de las alteraciones originadas por la acción de radicales libres, provoca en hepatocitos estrés oxidativo y liberación de ácido araquidónico (AA) al medio, así como incrementos intracelulares de diacilglicerol (DAG) y AA. El presente trabajo continúa la misma línea de investigaicón ampliando el estudio a otros oxidantes con mayor significado fisiológico que el TBHP. Así, se proponen dos modelos de especies radicalarias o generadoras de radicales libres: A,- La doxorrubicina, un anticancerígeno, capaz de atravesar la membrana plasmática del hepatocito y originar especies reactivas durante su metabolismo, que se han asociado con la toxicidad que produce. B,- La ferrilmioglobina (ferrilMb), una proteína hémica de naturaleza radicalaria, formada al reaccionar la metamioglobina con el H2O2 y que se ha detectado in vivo. El objetivo que se plantea es estudiar la influencia de los oxidantes anteriores sobre los parámetros indicativos de estrés oxidativo, la producción de mediadores lipídicos y las vías principales de estas acciones dentro de la célula, y como afectan al metabolismo y a la secreción lipídica en hepatocitos aislados de rata. De los resultados obtenidos cabe destacarlos siguientes. La doxorrubicina no produjo citotoxicidad en hepatocitos disminuyendo únicamente los niveles de GSH. La doxorrubicina aumentó los niveles intracelulares de DAG y ceramida, e indujo cambios en el estado de fosforilación proteica celular. El acúmulo de DAG en la célula se debe en parte a la activación de la fosfolipasa C específica de PIP2, y por otro lado, a la disminución dela síntesis hepática de glicerofosfolípidos y triacilglicéridos, de forma que el DAG se acumula en el interior de la célula. La disponibilidad de lípidos es menor, por lo que disminuye la secreción de VLDL en presencia de doxorrubicina. La ferrilMB, aunque indujo estrés oxidativo, no modificó la producción de ninguno de los mediadores lipídicos estudiados. La ferilMb bloqueó la secreción de VLDL al igual que la doxorrubicina, pero de forma dependiente de la lipoperoxidación y utilizando mecanismo diferentes.

Autor: SALVADOR IBAÑEZ ANA M..
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: Los carotenoides son un grupo de pigmentos liposolubles de amplia distribución en la naturaleza y aunque son pigmentos muy frecuentes en plantas, solo un número limitado de ellos se encuentra en el plasma y tejidos humanos y su transporte está mediado por las lipoproteínas. Las lipoproteínas son macromoléculas que estructuralmente están formadas por una parte lipídica y por una proteica, cuya función es la de empaquetar los lípidos insolubles provenientes de la dieta y los sintetizados por el propio organismo y transportarlos desde el intestino y el hígado a los tejidos periféricos y de ellos al hígado, devolviendo allí el colesterol al hígado para su eliminación en forma de ácidos biliares. Los carotenoides también se encuentran unidos a proteínas formando unos complejos denominados carotenoproteínas que son característicos, entre otros, de los crustáceos. En el presente trabajo se ha estudiado en el capítulo 1 el efecto del aceite de pescado sobre el almacenamiento de la astaxantina en el músculo de trucha y los efectos sobre las lipoproteinas del suero sanguíneo. El capítulo 2, versa sobre el efecto de la vehiculización de los carotenoides con fosfolípidos y su acumulación en el músculo de trucha arco iris. En el capítulo 3, se estudia la unión del cetocarotenoide astaxantina con lipoproteínas de alta densidad (HDL) de trucha y se comprueba que no se producen modificaciones en la estructura de dichas lipoproteínas. En el capítulo 4, las astaxantina se va unir, en este caso, a las lipoproteínas de la yema de huevo purificadas por ultracentrifugación. Por último, en el capítulo 5 se purifica una lipoproteína vegetal de aceituna y se compara dicha proteína de las zonas normales con la de la zona afectada por la alteración 'mancha verde'.

Autor: BRIZUELA MADRID LEYRE.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: La biosíntesis de aldosterona está regulada principalmente por las hormonas ACTH, angiotensina-II (Ang-II) y K+, no obstante, existen muchas otras moléculas capaces de controlar la secreción de este mineralocorticoide. Los esfingolípidos son lípidos bioactivos que regulan gran cantidad de funciones celulares tales como proliferación, supervivencia, diferenciación y el ciclo celular. Además, pueden actuar como potentes segundos mensajeros y estimular diferentes procesos en el interior celular tales como la migración o la respuesta inflamatoria. Sin embargo, no existen datos en la bibliografía de su implicación en la secreción esteroidea. Uno de los hallazgos más importantes en esta tesis doctoral es el descubrimiento de dos nuevos reguladores de la secreción de aldosterona, la esfingosina-1-fosfato (Sph-1-P) y el cerámido natural fosfato (Cer 1-P). La Sph-1-P estimula la secreción de aldosterona a través de un mecanismo en el cual participa la PKC-alfa, PKC-*, el Ca2+ extracelular y proteínas Gi y en el que se activan las rutas metabólicas PLD/PAP, MEK/ERK1-2 y Pl3-K/PKB. Por otra parte, el Cer 1-P estimula la secreción de aldosterona a través de un mecanismo en el que también participan proteínas Gi y la activación de las rutas de señalización MEK/ERK 1/2 y Pl3-K/PKB pero no PLD/PAP.

Autor: MATABOSCH GERONÉS XAVIER.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: INSTITUT D'INVESTIGACIONS QUÍMIQUES I AMBIENTALS DE BARCELONA (CSIC).

Resumen: En los últimos años se ha demostrado que los lípidos no son sólo componentes estructurales de la membrana plasmática sinó que desarrollan diferentes funciones celulares. Concretamente se ha observado que los productos de degradación de las fosfolipasas son importantes en los procesos de inflamación, entre otros; y parece ser que la fosfolipasa A2 independiente de calcio podría estar relacionada con la esquizofrenia. La síntesis de nuevos potenciales inhibidores de esta proteína para estudiar el metabolismo de estos lípidos ha sido ele objetivo principal en el transcurso de esta tesis doctoral. Para eso se han sintetizado análogos del único inhibidor selectivo de esta enzima (BEL) pero haciendo diferentes modificaciones para intentar obtener un inhibidor reversible igual de selectivo. Una de estas modificaciones fue la introducción de la funcionalidad trifluorocetona, común en diferentes inhibidores de lipasas, en el esqueleto de BEL, pero no se obtuvo ningún producto con gran capacidad de inhibición. También se introdujeron grupos ariloxi- en la estructura, en éste caso tampoco se obtuvieron buenos inhibidores, pero curiosamente dos de esos compuestos argumentaban hasta dos veces la actividad de la enzima selectivamente respeto a otra PLA2. Otra aproximación para preparar nuevos inhibidores fue la síntesis de análogos de sustrato con un grupo de n-hexadecilmercaptato en la posición sn-1 y el grupo fosforilcolina en la posición sn-3 del esqueleto de glicerol, con diferentes funcionalidades (Amida, carbamato, sulfonamida ..) y cadenas laterales en la posición sn-2. En este caso, algunos de los compuestos sintetizados presentaron destacables niveles de inhibición, no obstante cuando se estudió la selectividad frente a cPLA2, se observó que también inhibían la actividad de esta enzima. Además para poder conocer mejor la estructura del centro activo y diseñar mejores inhibidores se clonaron y expresaron dos fragmentos del centro activo de la enzima. Desafortunadamente estos fragmentos se expresaron en pequeñas cantidades y se agregaban en cuerpos de inclusión, esto no permitió su purificación. Durante el transcurso de la tesis, se prepararon también diferentes análogos de ceramida. Los ensayos de actividad de estos compuestos en diferentes enzimas del metabolismo de esfingolípidos mostraron que se había sintetizado una nueva familia de compuestos que abre una nueva línea de desarrollo en el campo de los esfingolípidos. Y se ha obtenido el mejor inhibidor descrito hasta el momento de la enzima esfingomielina sintasa.

Autor: JIMENEZ GOMEZ YOLANDA.
Año: 2006.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: OBJETIVO PRINCIPAL Determinar el efecto a largo plazo de una Dieta Mediterránea, respecto a una Dieta Occidental y a otra Dieta rica en hidratos de Carbono (HC) y ácidos grasos poliinsaturados (AGPs) n-3 de origen vegetal, sobre la activación del NF-kB en las células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) de personas sanas, al finalizar el periodo de intervención dietética y durante el estado postprandial. OBJETIVOS SECUNDARIOS Establecer el efecto de los tres modelos de alimentación en la expresión génica de MCP-1, IL-6 y TNF-a en las PBMCs, al finalizar la intervención dietética y durante el postprandio. En estos periodos de estudio determinar la respuesta de las moléculas ICAM-1, VCAM-1, MCP-1, IL-6 y TNF-a a nivel plasmático, y analizar la asociación de la inflamación con el perfil lipídico y el estrés oxidativo. DISEÑO Y METODOLOGÍA Se seleccionaron veinte sujetos sanos, normolipémicos y homocigóticos para el alelo E3 de la apoE. Todos los voluntarios siguieron tres periodos de intervención dietética de cuatro semanas de duración cada uno, de acuerdo a un diseño randomizado y cruzado: Dieta rica en ácidos grasos saturados (AGSs), en ácidos grasos monoinsaturados (AGMs) y, en HC y AGPs n-3 de origen vegetal. Tras 12h de ayuno, a todos los participantes se les administró un desayuno rico en grasa, de composición igual al a que consumía en cada uno en los periodos de intervención dietética: Desayuno rico en mantequilla, rico en aceite de oliva y rico en nueces. RESULTADOS En situación de ayuno, la dieta Mediterránea, a las 4 semanas, produce una menor activación del NF-kB, en PBMCs, comparada con la Occidental. Además, la dieta Occidental induce un incremento en los niveles de ARNm del gen del TNF-a, comparada con la Mediterránea y del MCP-1, respecto a la dieta rica en HC y AGPs n-3, en PBMCs. Asimismo, hubo un mayor incremento en sVCAM-1 con la ingesta de la dieta rica en AGSs que con las otras dos dietas. En el estado postprandial, observamos que un desayuno rico en mantequilla produce un aumento de los niveles de ARNm del TNF-a e PBMCs, comparado con las otras dos sobrecargas grasas, y que los desayunos ricos en mantequilla y aceite de oliva, producen mayor respuesta postprandial del ARNm de la IL-6 que el rico en nueces. Por último, demostramos que con el desayuno rico en mantequilla o nueces existen mayores niveles plasmáticos de VCAM-1 comparado con el rico en aceite de oliva, a las 3h de la ingesta grasa. CONCLUSIONES PRINCIPAL: El consumo habitual de una dieta Mediterránea reduce la activación del NF-kB en PBMCs de personas sanas, comparada con la Occidental. La dieta rica en HC y AGPs n-3 de origen vegetal no muestra diferencia en la activación de este factor respecto a la dieta Occidental. En el estado postparandial no existen diferencias en dicho parámetro entre los tres modelos de dietas estudiadas. SECUNDARIAS 1,- Las PBMCs obtenidas tras la dieta Occidental muestran un incremento en la expresión génica del TNF-a y MCP-1, respecto a la Mediterránea y la rica en HC y AGPs n-3 de origen vegetal, respectivamente. En el estado postprandial, se induce un incremento del ARNm del TNF-a con el desayuno rico en mantequilla respecto de los otros dos desayunos, y una mayor respuesta postprandial del ARNm de la IL-6 con las sobrecargas ricas en mantequilla y aceite de oliva , comparada con la rica en nueces. 2,- La dieta Occidental produce un aumento en la concentración sVCAM-1 comparada con las otras dos dietas. En el periodo postprandial, se origina un incremento de sus niveles en plasma tras el desayuno rico en mantequilla y en nueces, comparado con el de aceite de oliva, a las 3h de la sobrecarga. 3,- Las variaciones observadas en sVCAM-1 se relaciona positivamente con los niveles de c-HDL en el estado de ayuno y, negativamente con los de LPOs y triglicéridos en el periodo postprandial.

Autor: CATURLA CERNUDA NURIA.
Año: 2006.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE [www.umh.es].
Centro de lectura: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE LA UMH.

Resumen: Se analizan las actividades biológicas de compuestos vegetales de distinto origen: Te y Olivo. Con cada uno de ellos se persiguen objetivos distintos y se emplean metodologías diferentes. Con respecto a las catequinas, flavonoides presentes en el té verde se evalúan en primer lugar su actividad antioxidante, tanto en sistema de vesículas sintéticas como en preparados mitocondriales. Se determina que son los galatos de catequina los más eficaces inhbidores de la peroxidación lipídica. Se estudia en profundidad la interacción de los galatos de catequina con membranas: estas moléculas se incorporan a la membrana, aumentando el ordenamiento de los lípidos, conduciendo a una mayor resistencia de la membrana a la solubilización por detergentes no iónicos. A continuación se analiza la actividad antibacteriana de lso galatos de catequina: los autores concluyen que la actividad bactericida se basa en la capacidad de estos compuestos de interaccionar con la membrana bacteriana y desestabilizarla. En el siguiente capítulo de la memoria se estudian las propiedades de un extracto de hoja de olivo. En la particular, la actividad del extracto completo y de su componente mayoritario, la oleuropeína, en la inhibición del a replicación del virus de la septicemia hemorrágica vírica (VHSV), un patógeno de relevancia en el cultivo de la trucha arcoiris en piscifactoría. Los ensayos en cultivo celular demuestran la actividad antivírica de ambos compuestos. Se propone un mecanismos de acción basado en la inactivación directa de la partícula viral. La actividad frente a VHSV de otros componentes minoritarios del extracto de hoja de olivo es también analizada.

Autor: SÁNCHEZ BAUTISTA SONIA.
Año: 2006.
Universidad: MURCIA [www.um.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La Proteína Quinasa C (PKC) participa en numerosos procesos de señalización celular y está implicada en multitud de funciones fisiológicas como crecimiento, diferenciación celular, apoptosis, respuesta inmunitaria, secreción hormonal, entre otras. En la presente tesis se ha estudiado el papel de la región reguladora de las isoenzimas clásicas y nuevas. Además se ha estudiado la estructura secundaria del dominio catalítico de una isoenzima atípica: la PKC zeta. Dentro de la región reguladora se distinguen dos dominios, el C1 que se enlaza a diacilglicerol (DAG) y ésteres de forbol y el dominio C2 que en las PKC clásicas une fosfolípidos aniónicos en presencia de calcio y en las PKC nuevas lo hace de un modo independiente de calcio. Por su parte, el dominio catalítico contiene los sitios de unión del ATP y del sustrato susceptible de fosforilación por la PKC.Teniendo en cuenta todo lo anterior, en la presente tesis se ha estudiado: i) la afinidad de unión del dominio C2 alfa a fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato (PIP2), ii) cómo cambia el ácido fosfatídico en conformación y reorganización como consecuencia de la interacción con el dominio C2 epsilon, iii) la capacidad de unión de distintos dominios C1B de las isoenzimas clásicas y nuevas a diferentes tipos de DAG y en presencia de lípidos negativos, iv) la estructura secundaria del dominio catalítico de la PKC zeta y cómo se modula por la presencia del ligando Mg2+-ATP así como su comportamiento frente a la desnaturalización térmica. La utilización de diferentes técnicas así como diferentes mutantes nos ha permitido determinar que el dominio C2 alfa interacciona con una molécula de PIP2 de un modo dependiente de calcio a través de la región rica en lisinas. Un estudio más extensivo utilizando diferentes tipos de fosfoinosítidos ha demostrado que la presencia de cargas negativas no es determinante en la interacción del dominio C2 con el fosfoinosítido sino que existe un componente específico por el tipo de lípido presentando especial preferencia por el PIP2. Por su parte, el dominio C2 epsilon presenta especial preferencia por lípidos como ácido fosfatídico frente a otros como fosfatidilcolina estableciendo una interacción de tipo electrostático con el primero que se manifiesta por una modificación de la temperatura de transición, un descenso a bajo campo del pico isotrópico del ácido fosfatídico así como en un ensanchamiento del mismo y una disminución de los tiempos de relajación a todas las temperaturas estudiadas. Además, estructuralmente se manifiesta en un cambio conformacional en la cabeza polar del ácido fosfatídico. Además en el estudio de los diferentes dominios C1B de las isoenzimas clásicas (alfa y gamma) y nuevas (delta y epsilon) se demostró un aumento gradual de la afinidad conforme aumentó la concentración de lípido negativo y/o DAG. El dominio C1B epsilon fue el que mayor afinidad presentó en todos los casos experimentales estudiados, presentando especial preferencia por mezclas que contenían el fosfolípido negativo ácido fosfatídico y el diacilglicerol DOG (1,2-sn-dioleilglicerol). Por último, la estructura secundaria del dominio catalítico de la PKC zeta, determinada por espectroscopía de infrarrojo, es flexible y cambia en presencia del ligando Mg2+-ATP. Además éste ejerce un efecto protector frente a la desnaturalización térmica. Los experimentos de correlación bidimensional muestran el orden secuencial en el que suceden las transformaciones de la estructura secundaria por efecto de la temperatura, donde se apreciaron diferencias entre las condiciones de presencia y ausencia de Mg2+-ATP.