PEPTIDOS

Autor: RUIZ NORTES CRISTINA.
Año: 2004.
Universidad: MURCIA [www.um.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: El péptido TRH-Like pGlu-Glu-Pro-amida, un tripéptido relacionado con la hormona liberadora de triortropina, está presente en el semen humano y posee una potente actividad estimulando la capacitación de los espermatozoides. Para conocer el origen molecular de este péptido, se investigó la presencia del mismo y la de los péptidos relacionados con la TRH en la próstata humana, las secreciones prostáticas y el fluido seminal. Los péptidos se aislaron y purificación utilizando diferentes etapas cromatográficas de modo secuencial (cromatografía de exclusión en gel, cromatografías de intercambio iónico y cromatografía líquida de alta resolución), en las que se determinó su presencia y concentración, mediante un radioinmunoensayo (RIA) con un anticuerpo contra la TRH. Las próstatas de cuatro pacientes que presentaban hiperplasia benigna prostática (BPH) y la de un paciente que no presentaba patología alguna, se caracterizaron por contener muy bajas concentraciones de péptidos con inmunorreactividad a la TRH, entre los que se incluye al tripéptido pGlu-Glu-Pro-amida. Estos niveles no justificaban los altos niveles del tripéptido que determinamos en las secreciones prostáticas y el semen; sin embargo, el tejido prostático presentaba altas concentraciones de un péptido de bajo peso molecular relacionado con este tripéptido, que fue detectado con un tratamiento de calor previo al RIA. Esta nueva forma molecular, no descrita anteriormente, y a la que hemos denominado "Péptido I", presenta un grupo básico y una concentración 100 veces mayor, como mínimo, que la del tripéptido en la próstata humana, por lo que debe ser el principal péptido relacionado con la TRH de la misma. Los resultados muestran que los niveles de pGlu-Glu-Pro-amida son insignificantes en la próstata humana, pero éste parece estar presente en ella en forma de un precursor, el Péptido I; por lo que se sugiere que el tripéptido es liberado del mismo fuera de la glángula prostática. Al estudiar el mecanismo de formación de las formas aisladas en la próstata se descubrió la presencia de formas más largas del Péptido I en la misma; posiblemente, estas formas son las que actúan como su molécula precursora, su prohormona. Estas formas más largas son horma sN-ectendidas del Péptido I y son susceptibles, tanto a la hidrólisis del antígeno específico prostático (PSA) como a la de sus actividades enzimáticas, tripsina y quimiotripsina, de manera independiente. Por otro lado, estas formas presentaban mayores niveles en próstatas normales que en próstatas con hiperplasia benigna, y este resultado se correspondía con lo que ocurre a nivel fisioipatológico en que los niveles del PSA son mayores en próstatas con dicha patología. Finalmente, se propuso un mecanismo de regulación de las nuevas formas moleculares descubiertas en la próstata en el que se sugiere un nuevo papel fisiológico para el PSA. Esta proteasa sería la responsable del procesamiento de la prohorma del Péptido I, y por tanto, podría ser la enzima reguladora de la producción de péptidos prostáticos importantes para la fertilidad masculina (fertility promoting peptides).

Autor: VÁZQUEZ RODRÍGUEZ JESÚS.
Año: 2004.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: Las caspasas son una familia de proteasas de cisteína con especificidad por residuos de ácido aspártico (Asp) que están implicadas en la apoptosis, donde actúan como amplificadoras de la señal de muerte celular, y en procesos de tipo imflamatorio. Se han conseguido identificar hasta la fecha once miembros de esta familia de proteasas en el ser humano, y todos ellos presentan similitudes en cuanto a la estructura, secuencia de residuos especificidad por su sustrato. Su implicación en la muerte celular es crítica y variada: inactivación de proteínas que protegen a las células de la apoptosis, desorganización de estructuras celulares o derregulación de proteínas. Constituyen por tanto un objetivo atractivo como diana terapéuticas. Oe todas las caspasas es la caspasa-3 el miembro de la familia con una mayor importancia en cuanto a su implicación en la apoptosis y que es clasificada como una caspasa ejecutora. Por tanto, la modulación de su actividad serviría en un principio para modular la señal de muerte celular o apoptosis. El objetivo principal de la presente tesis fue la síntesis de un nuevo tipo de inhibidores de esta proteasa basados en el anillo de hidantoína como "scaffold".Este objetivo general se dividió en varios subobjetivos. En primer lugar se desarrollaron la condiciones sintéticas adecuadas para la formación de cetonas y aldehido del Fmoc-Asp(O'Su)-OH. Esto se consiguió a partir del tioéster de 2-mercaptopiridina correspondiente que se hizo reaccionar posteriormente con varios dialquilcupratos para dar lugar a las cetonas correspondientes con buenos rendimientos. También se sintetizaron a-halometilcetonas, por reacción con diazometano, y el aldehido correspondiente por reducción al alcohol correspondiente y una sucesiva oxidación de éste a aldehido. Una vez obtenidos los compuestos carbonílicos también se investigó la manera de anclarlos a un soporte sólido. Se ensayó con resina de tipo Wang y con la cloruro de 2-clorotritilo (CTC) para anclar los derivados de Asp por su cadena lateral y con resinas de tipo hidrazina, semicarbazona y semicarbazida para anclarlos por el grupo carbonilo mediante la formación de una imina. Éste último fue el que mejor resultados ofreció cuando se usaba una resina semicarbazida derivada de una resina metilamina comercial. También se investigaron las condiciones de síntesis de las hidantoínas en fase sólida. Se obtuvieron dos condiciones sintéticas para las hidantoínas. En una de ellas se obtenían las hidantoínas con epimerización del centro estereogénico inmediatamente anterior al anillo de hidantoína. El método transcurría por la introdución del carbonilo activado mediante OSC (10 equiv.) en presencia de OMAP (1 equiv.) seguido por dos tratamientos básicos con K2COSy una distinción O,4Mde 18-c-6 en OMF. También se logró obtener un método de síntesis que permitía la obtención de las hidantoínas db forma epiméricamente puras. En este caso la introducción del carbonilo activado se hizo mediante COI (5 equiv.) seguido por dos tratamientos básico con OIEAen OMF (1:4). Una vez establecidas las condiciones sintéticas de los derivados carbonílicos y el anillo de hidantoína se sintetizaron sucesivas familias de compuestos ayudados por los resultados que ofrecían los ensayos biológicos además de estudios de dinámica molecular. Se sintetizaron en total 8 generaciones de compuestos que se planificaban de acuerdo a los resultados que ofrecían. La primera generación consistía en hidantoínas que estaban unidas directamente al residuo de Asp y que estaba formada por OAPA que era acilado en su cadena lateral con compuesto, heteroaromáticos. La segunda generación se hizo introduciendo un nuevo residuo entre el anillo de hidantoína y el residuo de Asp. Las hidantoínas Se: sintetizaron con diversos aminoácidos con su cadena lateral funcional izada. La tercera generación se realizó con Abu como residuo entre el anillo G hidantoína y el Asp y las hidantoínas se formaron con la Arg teniendo el grupo guanidinio funcionalizado de diversas maneras: tetrasust 8 ituido 1 2cd ) protegido con sulfonilos aromáticos. Además de los ensayos de competición frente a caspasa-3 se realizaron pruebas de estabilidad metabólica frente a suero humano y demostraron tener una gran estabilidad. También se realizaron ensayos de viabilidad de los que se pudo deducir que estos compuestos no son tóxicos.

Autor: TEIXIDÓ TURÁ MERITXELL.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA, FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: El objetivo principal de la tesis se centra en el conocimiento de las propiedades fiscoquímicas qu hacen posible que un péptido sea capaz de cruzar la barrera hematoencefálica. Este objetivo se puede concretar en una seríe de etapas: Diseño de un algoritmo genético que permita relacional las propiedades fisicoquímicas con la capacidad de cruzar la barrera hematoencefálicas. Puesta a punto y análisis comparativo de de diferentes ensayos (cromatográficos, de partición entre fases, celulares in vitro..) que permiten conocer la permeabilidad de un péptido frente a la barrera hematoencefálica. Síntesis de una primera generación de péptidos propuesta por el algoritmo genérico. Evaluación de esta primera generación de péptidos y estudio de los compuestos con un mejor transporte. De los resultados de la presente tesis se pueden establecer las siguientes conclusiones: La aproximación en el diseño de péptidos que combina el algoritmo genético, la síntesis de péptidos en fase sólida i la evaluación por IAMC ha mostrado su utilidad para profundizar en el estudio de la capacidad de moléculas peptídicas para cruzar la barrera hematoencéfalica. Entre los péptidos de la primera generación destaca el péptido 3, trasportado por difusión pasiva del que se ha estudiado se estructura por dicroismo circular y resonáncia magnética nuclear, mostrando unas interesantes propiedades de agregación. El péptido 22 también ha mostrado interesantes propiedades de transporte, pudiendo su naturaleza de dipol jugar un papel importante. La síntesis de la primera generación ha constituido un importante reto sintético debido al alevado contenido de N-metil aminoácidos presentes. Una séroe de reacciones secundárias han sido identificadas y evitadas en la medida de lo posible: productos de deleción y sobreincorporación durante la elongación de la cadena peptídica, reacciones de fragmentación y de formación de DKPs durante el tratamiento acidolítico de escisión y desprotección, así como una elevada complejidad cromatográfica de los péptidos ricos en N-metil aminoácidos. El análisis comparativo de las diferentes técnicas de predicción del transporte a través de la barrera hematencefálica nos ha hecho decantar por la cromatografía de membrana artificial immobilizada (IAMC) como técnica para establecer ránquings de evaluación de la capacidad de los péptidos para cruzar la barrera hematoencefálica por difusión pasiva. El algoritmo basandose en los datos de IAMC para la primera generación de 24 péptidos ha creado una segunda generación, del estudio de la cual cabe esperar una mejora de la capacidad de cruzar la barrera hematoencefálica. La permeabilidad en el ensayo PAMPA és un criterio más exigente que IAMC. El uso de esta técnica se debe reservar para el análisis de poblaciones más evolucionadas.