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PROTEINAS

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14 tesis en 1 páginas: 1
  • ESTUDIO DE LA ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL TRANSPORTADOR DE MELIBIOSA D'ESCHERICHIA COLI POR ESPECTROSCOPÍA DE INFRAROJO.

    Autor: DAVE COLL NATÁLIA.
    Año: 2002.
    Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
    Centro de lectura: FACULTAT DE MEDICINA.
    Centro de realización: ESCOLA DE DOCTORAT I FORMACIÓ CONTINUADA.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#107165
    Resumen: El transportador de melibiosa (MelB) es una proteína de membrana de Escherichia coli que acumula alfa- o beta-galactósidos en el interior de la célula, gracias a la energía suministrada por los cationes Na+, H+ o Li+, contrasportados de forma simporte. Se estudió la proteína solubilizada en detergente docecilmaltósido y reconstituida en lípidos d'E.coli en cuatro condiciones diferentes de sustratos: H+, Na+, H+ y melibiosa, y Na+ y melibiosa. El estudio de la MelB en H2O realizado mediante espectroscopia de infrarrojo de transmisión reveló que la proteína de la forma reconstituida contiene un 50% de hélices, un 20% de lámina beta, un 17% de giros reversos y un 12% asignado a otros tipos de estructuras. Estos datos fueron reforzados por los resultados de estructura secundaria obtenidos en D2O. La cuantificación de estructura secundaria es coherente con el modelo de estructura secundaria que consta de 12 hélices transmembrana. Los resultados también revelaron cambios en las estructuras secundarias inducidos por los sustratos. La accesibilidad global de las estructuras secundarias de la MelB al solvente acuoso se determinó mediante cinéticas de intercambio de D2O. Los resultados revelaron una accesibilidad del 54% cuando la MelB se incuba con Na+ o H+. Por el contrario, la adición del azúcar melibiosa resultó en una disminución de la accesibilidad al solvente acuoso en un 5-10%. Un análisis más detallado de la accesibilidad reveló que la adición de azúcar protege principalmente las estructuras lámina beta. El análisis de espectros de infrarrojo de la MelB en H2O y D2O, obtenidos con radiación polarizada, reveló cambios en la orientación de las hélices según el sustrato unido. Se determinó que para la MelB unida al H+, con o sin melibiosa las hélices forman un ángulo conl o normal de la membrana de 26º. Por el contrario, la adición de Na+ disminuye la orientación de las hélices hasta 36º.
  • PRODUCCIÓ I CARACTERITZACIÓ DE VARIANTS DE LA RIBONUCLEASA PANCREÁTICA HUMANA DISSENYADES PER ADQUIRIR PROPIETATS CITOTÒXIQUES.

    Autor: BOSCH GRAU MONTSERRAT.
    Año: 2003.
    Universidad: GIRONA [Más tesis de esta universidad] [www.udg.es].
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: UNIVERSITAT DE GIRONA.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#106975
    Resumen: Con la finalidad de estudiar las bases moleculares de la citotoxicitad de las ribonucleasa pancreáticas, se construyeronn diversas variantes dela HP-Rnasa utizando dos estrategias distintas.En la primera se generarón variantes del enzima resistentes a la acción del inhibidor proteico de ribonucleasas (RhI) mediante la sustitución de residuos implicados en la interficie de contacto entre la ribonucleasas y el (rhI). En la segunda, se añadió el motivo RGD en regiones de superficie de la proteína implicadas también en la formación del complejo con el (Rhi) . De esta forma se pretendía promover simultáneamente la interacción del enzima con la membrana celular y la reducción de su intercción con el inhibidor.Se comprobó que sólo las variantes portadoras de múltiples sustituciones eran capaces de evitar la intercción con el inhibidor. El estudio del porcentaje de inhibición de la síntesis proteica en células incubadas con cada una de las variantes mostró que sólo dos de ellas adqurían propiedades citotóxicas.Sorprendentemente, la variente más citotóxica de entre estas resultó ser sensible al HRI. Se trata de PE5, y presenta un valor de IC50 solamente entre 5 y 15 veces inferior a los presentados por la onconasa. Este resultado demuestra que la sensibilidad al HRI no es un facto imprescindible para la toxicidad de las ribonucleasas.Así mismo, ninguna de las variantes portadoras del motivo RGD adquirió capacidades citotóxicas. Los análisis de internalización de las variantes marcadas radiactivamente demostraron que sólo la onconasa es internalizada eficazmente durante las primeras 7h de incubación. Se descarta de esta manera la posibilidad de que las propiedades citotóxica de PD5 sean el resultado de una mayor eficiencia de endocitosis. También se comprobó que la adición del motivo RGD no es capaz de promover la internalización de las proteínas que lo contienen . Mediante microscopia confocal de fluorescencia se empezarón a detectar las variantes humanas en el interior de las células sólo después de 24h de incubación. Todas las variantes generadas presentaron una eficíencia catalítica superior al 50% dela actividad de su proteína de origen, PM5. Este resultado indica que probablemente la estructura del centro activo de las variantes no ha sido afectada drásticamente por las sustituciones introducidas. No obstante, en todos los casos se produjo una disminución de la termoestabilidad con relación a PM5. El estudio de las vías de tránsito intracelular de tres de las variantes de la HP-Rnasa (PE5,PM5 y una variante no citotóxica aunque sí resistente al Hri)mostró que todas ellas siguen la misma ruta de transporte, que las conduce desde la superficie celular hacia los lisosomas. Esta ruta no fue afectada por la adición de drogas que alteran lasvías de tránsito retrógrado, como la monensina y la brefeldina A. Pero sí por la bafilomicina A1, que actúa neutralizando el gradiente de Ph endosomal y frenando el tránsito endosonal hacía los lisosomas. De acuerdo con estos datos, los valores de citotocicidad de las variantes se incrementaron de manera significativa sólo en presencia de esta droga, sugiriendo que las ribonucleasa llegan al citoplasma después de cruzar las membranas del sistema endosomal en algún punto anterior a los lisosomas. La caracterización del macanismo de citotoxicidad de la variante PE5 sugirió que la presencia de un segundo motivo de tres Arg en ésta proteína le proporcionaba una señal de transporte nuclear, el cual sería el responsable de su localización en este compartimento. Así pues, la porción de enzima que consigue llegar al citosol 8 desde lo 563 s endosomas es conducida rápidamente hacia el núcleo de la célula mediante el mecanismo de transporte activo clásico. Por su afinidad xon el rRNA, el enzima se concentra a continuación en el nucleolo, donde probablemente realiza su actividad catalítica. Así mismo, la interación dela variante PE5 con los receptores encargados del transporte a núcleo (las importinas,) que se produce a nivel de NLS, impediría la formación del complejo enzima-Hri,evitando así el bloqueo del enzima por parte de su inhibidor. Los resultados obtenidos en ésta tesis ofrecen una nueva estrategia para el diseño de ribonucleasas citotóxicas, basada en la adición de segmentos NLS con el objetivo de promover el transporte nuclear de los enzimas. Esta capacidad podría permitir superar factores que hasta el momento se habían considerado como claramente restrictivos de la citotóxicidad de las ribonucleasa pancreáticas, como són la sensibilidad de los enzimas al HRI o su baja de internalización.
  • PROTEÍNAS DE RESERVA DE MOSTAZA AMARILLA Y 1,3-BETA-GLUCANASA DE POLEN DE OLIVO COMO MODELOS DE ESTUDIO DE PROTEÍNAS ALERGÉNICAS.

    Autor: PALOMARES GRACIA OSCAR.
    Año: 2004.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.
    Centro de realización: FAC. CC. QUÍMICAS, DPTO. BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR I.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#108012
    Resumen: El trabajo de investigación presentado en esta Tesis Doctoral está enfocado hacia el estudio y caracterización de proteínas alegénicas de mostaza amarilla y polen de olivo. En concreto se ha llevado a cabo la caracterización estructural e inmunológica de los dominios N- y C-terminal de Ole e 9, alergenos principal de polen de olivo con actividad 1,3-beta-glucanasa, para lo que ambos dominios se produjeron de forma recombinante en la levadura P.pastoris y se purificaron a homogeneidad. Se ha demostrado que las 1,3-beta-glucanasas están implicadas en procesos de reactividad cruzada entre pólenes, alimentos vegetales y frutas y se ha establecido con modelo de ratón alérgico a Ole e 9 en el que se ha ensayado un tratamiento profiláctico con los fragmentos recombinantes. Además se ha iniciado un estudio de mapeo epitópico del C-terminal de Ole e 9 y se ha analizado la relevancia clínica de ambos dominios recombinantes. Por otro lado, se ha producido la forma precursora de Sin a 1, alergeno principal de mostaza amarilla, en la levadura P.pastoris lo que ha permitido analizar sus propiedades estructurales e inmunológicas y compararlas con las de la forma natural. Este estudio ha permitido proponer que la proteína recombinante podría ser utilizada como marcador de sensibilización a mostaza. Además se ha aislado e identificado un nuevo alergeno de mostaza de alto peso molecular. Se trata de una globulina 11S, denominada Sin a 2, que se ha caracterizado estructural e inmunológicamente. Finalmente, se ha clonado el cDNA que codifica para Sin a 2 y analizado las propiedades de dicha secuencia.
  • PLEGAMIENTO Y ENSAMBLAJE DE LA PROTÉINA DE DIVISIÓN CELULAR FTSZ DE METHANOCOCCUS JANNASCHIL.

    Autor: OLIVA BLANCO M. ÁNGELA.
    Año: 2004.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
    Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIÓN BIOLÓGICAS-CSIC (MADRID).
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#108570
    Resumen: FtsZes una de las proteínas que intervienenen la divisiónde procariotas. Ensamblaen el sitio de divisiónformando un anillodenominado anillo Z, que constituye el armazón sobre el que serán reclutadas el resto de las proteínas que intervienen en la división celular. FtsZ está altamente conservada entre los organismo procariotas e Incluso se ha encontrado en cloroplastos y algunas mitocondrias de organismos eucariotas. Es una proteína homóloga de la tubulina eucariótica, ambas son GTPasas y presentan la misma estructura terciaria. Tubulina requiere gran número de chaperonas moleculares y cofactores para adquirir su estructura nativa y funciona, mientras que FtsZ de M.jannaschii no parece tener los mismos requerimientos y es capaz de plegar in vitro desde un estado desnaturalizado. En este trabajo se ha analizado el ensamblaje polimórfico de FtsZ de M. jannaschii, y mediante técnicas de microscopía electrónica y procesamiento de imagen se ha propuesto que la estructura básica de ensamblaje de esta proteína es un filamento formado por dos protofilamentos que discurren paralelos. Distintas interacciones laterales entre estos filamentos dan lugar a los diferentes tipos de polímeros observados a lo largo del estudio. Finalmente se ha analizado el cambio conformacionallnducido por la hidrólisis de nucleótido del GTP unido a FtsZ empleando cristalografía y difracción de rayos X. La estructura del protofilamento de la proteína ha mostrado que ésta forma los mismos contactos axiales durante el ensamblaje que los de tubulina en los mlcrotúbuios. También se ha caracterizado la estructura del sitio activo de la proteína y se ha determinado que para observar el cambio conformacional inducido por la hidrólisis de nucleótido es necesario el estudio del sitio de unión de nucleótido completo (la interfase entre dos moléculas) y no el del monómero (que es el que se ha estudiado hasta la fecha).
  • STRUCTURAL AND FUNCTIONAL STUDIES ON PROTEINACEOUS METALLOCARBOXYPEPTIDASA INHIBITORS.

    Autor: LÓPEZ AROLAS JOAN.
    Año: 2004.
    Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
    Centro de lectura: FACULTAT DE CIÈNCIES.
    Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#108790
  • REGULACIÓN DE LA INICIACIÓN DE LA SÍNTESIS DE PROTEINAS POR ESTRÉS OXIDATIVO.

    Autor: O`LOGHLEN VELICIA ANA.
    Año: 2004.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.ucm.es].
    Centro de lectura: FACULTAD CIENCIAS BIOLOGÍCAS.
    Centro de realización: HOSPITAL RAMON Y CAJAL.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#108986
    Resumen: La Tesis doctoral estudia el estrés oxidativo generado por U2O2 en células PCI2 diferenciados con NGF,H2O2 produce una fuerte inhidirción delo sintesis de proteinas en paralelo con el aumento en la fosfonlación del Eif2x, la disminución en los niveles de fosfolación del eIF4E y 4E-BP1 y la inhidición de la actualidad del eIF4F y de la poteina fosfatosa PP1. Además de todo que el U2O2 produce muerte celular que se remite con el tratamiento con el antioxidante N,acetil-cisteina(NAC).NAC revisión impide la inhateción dela sistesis poteica. Por último , identifican y rucieterizan una nueva no forma de lu eII4E quinusa MNK1, que denominan MnK1B se localiza en núcleo y que se expresa en mucho tejidos.
  • APLICACIÓN DE TÉCNICAS DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA DE FUERZA ATÓMICA AL ESTUDIO DE LA INTERACCIÓN LÍPIDO-PROTEÍNA EN MODELOS DE MEMBRANA.

    Autor: MERINO MONTERO SANDRA.
    Año: 2004.
    Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#112122
    Resumen: Las proteínas de membrana constituyen entre un 25 y un 30% de las proteínas presentes en las células, pudiendo estar implicadas, en algunos casos, en mecanismos de resistencia a determinados fármacos. Es por ello de gran interés el estudio de estas proteínas en modelos biomiméticos tales como los proteoliposomas o los cristales 2D. La aplicación de técnicas manométricas, como la microscopía de fuerza atómica (AFM), así como determinados métodos de fluorescencia (cálculo del incremento de potencial electrostático de superficie y anisotropía de la fluorescencia), permiten el estudio del proceso de reconstrución de proteínas. La hipótesis de trabajo y objetivo principal de esta Tesis fue el estudio detallado del proceso de reconstitución de dos proteínas transmembranarias, la porina Omp1 de Serratia marcescens y la lactosa permeasa de Escherichia coli (LacY),tomando como modelo para comprobar la posible aplicación de las técnicas utilizadas a este tipo de moléculas, el citocromo c y la melitina. Finalmente, se concluyó que tanto los proteoliposomas, como las láminas lípido-proteicas obtenidas fueron totalmente estables en solución y sobre un sustrato plano. La LacY reconstituida en POPC fue cristalizada en 2D y visualizada por AFM, presentando un motivo dimérico. Los parámetros de celda, fueron: a=13,15nm, b=16,74nm, y=116, concordantes con una simetría de tipo p2.
  • ALTERACIÓN DEL RELOJ CIRCADIANO DEL CASTAÑO (CASTANEA SATIVA MILL.) DURANTE LA DORMANCIA INVERNAL Y EN RESPUESTA A LAS BAJAS TEMPERATURAS

    Autor: RAMOS ARANGUREN ALBERTO.
    Año: 2005.
    Universidad: POLITÉCNICA DE MADRID [Más tesis de esta universidad] [www.upm.es].
    Centro de lectura: E.TÉ.S. DE INGENIEROS DE MONTES.
    Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS DE MONTES.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#112420
    Resumen: Se han caracterizado en el castaño europeo clones de cDNA de los genes CsTOC1 y CsLHY, homólogos a los elementos del oscilador circadiano de Arabidopsis. El ritmo circadiano de los RNA mensajeros de los genes CsTOC1 y CsLHY en raíz, tallo y hojas de plántulas de castaño crecidas en condiciones estándar de luz y temperatura (22ºC y LD) es similar al descrito para el reloj de Arabidopsis. Este comportamiento se observa también en los árboles adultos durante las épocas de crecimiento vegetativo. Se ha comprobado que durante la dormancia invernal del castaño se produce una alteración en el funcionamiento del reloj circadiano tanto en las yemas como en el tallo: los niveles de los mensajeros de CsTOC1 y CsLHY no oscilan y se mantienen permanentemente elevados. Una interrupción similar se induce en las hojas y tallos de las plántulas en respuesta a las bajas temperaturas (4ºC). En Arabidopsis no se inducen estas modificaciones por efecto del frío o del invierno, lo que indica la existencia de diferencias en las piezas o en los mecanismos de regulación de los relojes de ambas especies. La expresión de los genes CsTOC1 y CsLHY del oscilador de castaños endodurmientes o expuestos a 4ºC recupera el ritmos circadiano cuando son transferidos a 22ºC, lo que significa que la alteración del relojo no es intrínseca al proceso de endodormancia sino una consecuencia directa de la exposicón a las bajas temperaturas. Sin embargo, esto no excluye que dicha alteración pueda tener un papel en el desarrollo de la misma. Se discute la influencia que puede tener la parada del reloj en el metabolismo de los árboles durmientes, y se plantea que el diferente comportamiento de castaño y Arabidopsis en respuesta a las bajas temperatura implica que el proceso de aclimatización al frío en las plantas leñosas de climas templados debe tener características específicas significativas en comparación con el del las plantas herbáceas anuales.
  • SUBDOMINIO HELICOIDAL DE DMAK: CAMBIOS CONFORMACIONALES E IMPLICACIÓN EN EL CICLO FUNCIONAL

    Autor: FERNÁNDEZ SÁIZ VANESA.
    Año: 2005.
    Universidad: PAÍS VASCO [Más tesis de esta universidad] [www.ehu.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
    Centro de realización: BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR - FAC. CIENCIAS.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#117830
    Resumen: La presente Tesis Doctoral se centra en el estudio del subdominio helicoidal C-terminal de la chaperona DnaK, representante mayoritario de las proteínas Hsp70 en E.coli. Este grupo de chaperones moleculares se encuentra ampliamente distribuido en procariotas y en el citosol y orgánulos eucariotas. Participan en un amplio espectro de actividades como son el ensamblaje de complejos proteicos, el transporte a través de membranas, el plegamiento de proteínas sintetizadas de novo, así como en la solubilización de agregados proteicos formados en situaciones de estrés celular. Todo este amplio conjunto de actividades se realiza a través de un mecanismo que implica cambios conformacionales concertados en los dos dominios funcionales de que constan las proteínas Hsp70. Se han estudiado por medio de técnicas biofísicas y bioquímicas el papel de las hélices C-terminales de DnaK en la comunicación alostérica entre ambos dominios de la proteína y en la estabilidad del centro de unión a sustrato. Así mismo, se han identificado las interacciones que posibilitan el anclaje de las hélices C-terminales sobre el centro de unión a sustrato, y que regulan por lo tanto la accesibilidad del mismo. Por último, se ha estudiado la interacción de las cochaperonas GrpE y DnaJ con DnaK, y el papel que desempeña el dominio de unión a sustratos en esta interacción, y sus repercusiones fisiológicas.
  • PROTEASES I INHIBIDORS COM A MODELS PER A ESTUDIS DE RELACIÓ ESTRUCTURA-FUNCIÓ I AGREGACIÓ

    Autor: PALLARÈS GOITIZ IRANTZU.
    Año: 2005.
    Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.uab.es].
    Centro de lectura: FACULTAT DE CIENCIES.
    Centro de realización: UNIVERSITAT AUTÒNOMA DE BARCELONA.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#118104
    Resumen: En la presente tesis se han desarrollado estudios de estructura de proteasas aisladas y en complejo con sus inhibidores endogenos mediante cristalografía de rayos-X, que han permitido determinar en detalle sus mecanismos enzimáticos y de inhibició. Así mismo, dichas proteasas e inhibidores han sido utilizados como modelos de proteínas no involucradas en enfermedades que tienen la capacidad de formar estructuras amiloidogenicas des de estados total y/o totalmente desplegados.
  • ESTABILIDAD Y ESTABILIZACIÓN DE PROTEÍNAS CON EL MODELO DE LA APOFLAVODOXINA DE ANABAENA PCC7119.

    Autor: BUENO FERNÁNDEZ MARTA.
    Año: 2005.
    Universidad: ZARAGOZA [Más tesis de esta universidad] [www.unizar.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#119461
  • ANÁLISIS Y APLICACIÓN DE ESTRATEGIAS PARA EL DESCUBRIMIENTO DE FÁRMACOS: SÍNTESIS, QSAR Y MODELIZACIÓN BASADA EN EL RECEPTOR

    Autor: VILAR VARELA SANTIAGO.
    Año: 2005.
    Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA [Más tesis de esta universidad] [www.usc.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#120219
    Resumen: En la presente Tesis Doctoral se han desarrollado modelos teóricos de predicción de la actividad anti-VIH y vasodilatadora mediante la utilización de métodos de cálculo de descriptores moleculares en combinación con técnicas estadísticas para establecer una relación entre la estructura molecular y la actividad biológica (métodos QSAR). También se han realizado cálculos de interacción fármaco-receptor mediante metodologías de tipo docking y se ha realizado una síntesis orgánica de una serie de cumarinas análogas al resveratol con una buena actividad vasodilatadora.
  • ESTUDIOS ESTRUCTURALES DE LECTINAS DE ALGAS MARINAS Y DE VEGETALES SUPERIORES

    Autor: NAGANO CELSO SHINITI.
    Año: 2006.
    Universidad: VALENCIA [Más tesis de esta universidad] [www.uv.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
    Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#118439
    Resumen: Las lectinas son (glico)proteinas de origen no inmune, que poseen al menos un dominio no catalítico capaz de unir especifica y reversiblemente mono u oligosacáridos. Las lectinas son ubicuas en organismos de toda la escala evolutiva, estando implicadas en multitud de procesos biológicos, tanto fisiológicos como patológicos. La disposición espacial de los lugares de unión de azúcares es un elemento clave para el reconocimiento de glicanos en la superficie celular El objetivo global de la Tesis fue profundizar en aspectos estructurales y evolutivos de lectinas vegetales. Por una parte, se han caracterizado las lectinas HCA y HML de las algas rojas marinas Hypnea cervicomis e Hypnea musciformis, respectivamente. Estas lectinas contienen 90 aminoácidos y sus secuencias son muy similares. Las estructutras primarias de HCA y HML constan de dos dominios homólogos entre sí, dispuestos en tandem y no muestran similitud de secuencia con ninguna proteína descrita. Proponemos que HCA y HML son miembros fundadores de una nueva familia de proteínas. Por otra parte, la Tesis se centro en la determinación de las bases estructurales del equilibrio dimero-tetramero dependiente del pH que presentan algunas lectinas de la tribu Diocleinae de la familia Papilionoideae de las leguminosas. Para ello, se ha empleado un abordaje basado en técnicas de Biología molecular (expresión recombinante de lectinas nativas y mutantes), Biofísica (equilibrio de sedmentación) y Biología Estructural (determinación de las estructuras cristalinas de las lectinas recombinates). Debido al complejo sistema de procesamiento post-traduccional asociado a la biosíntesis de las lectinas de leguminosas, la expresión recombinante de las lectinas en Escherichia coli requirió el diseño de un gen sintético que codificara a la proteína madura (cadena alfa). Las lectinas de Dioclea guianensis (r-aDguia) y Dioclea grandiflora (r-aDGL) producidas de forma recombinante en E. coli a partir de sus genes sintéticos son bioquimícamente indistinguibles de sus homólogas aisladas de semillas. Se ha logrado generar el equilibrio dimero-tetrámero dependiente del pH a partir de la lectina r-aDGL, tetramérica en el intervalo de pH de 4-8.5, mediante tres mutaciones E123A, H131 N, K132Q. La existencia del equilibrio dimero-tetrámero se correlaciona con una conformación retraída de los bucles 117-122, los cuales no pueden establecer contactos con resíduos de las subunidades opuestas que estabilicen la asociación tetramérica independiente del pH.
  • ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DEL DOMINI EXTRACEL-LULAR DE 4F2HC (CD98) HUMÀ.

    Autor: FORT I BAIXERAS JOANA.
    Año: 2006.
    Universidad: BARCELONA [Más tesis de esta universidad] [www.ub.es].
    Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA DE LA UNIVERSITAT DE BARCELONA.
    Enlace a esta ficha: http://www.kriptia.com/QUIMICA/BIOQUIMICA/PROTEINAS/1#120426
    Resumen: La familia de transportadores heterométicos de aminoácidos (HATs) posee la característica única de estar compuestos por dos subunidades; una subunidad pesada (HSHAT) y una subunidad ligera (LSHAT) unidas por un puente disulfuro. Mutaciones en alguno de sus miembros son responsables de aminoacidurias hereditarias, como la lisinuria con intolerancia a proteínas (LPI) o la cistinuria. Esta tesis recoge los resultados obtenidos a partir de la expresión en E.coli y la posterior purificación del dominio extracelular de 4F2hc humano, una de las cadenas pesadas de los transportadores heteroméricos de aminoácidos. El principal resultado es la resolución de la estructura tridimensional de este domino de la proteína mediante cristalización y difracción de rayos X. Se ha resuelto dos tipos de cristales, el monoclinico a 2,1 A (con una molecular en la unidad asimétrica) y el ortorómbico a 2,8 A (con dos moléculas en la unidad asimétrica coordinando un átomo de zinc). El ectodominio de 4F2hc tiene una estructura muy parecida a las alfa-glucosidasas de insectos y consta de un dominio A, que es un barril (alfa/beta)8 o barril TIM y un dominio C, compuesto por 8 hojas beta antiparalelas. El trabajo presenta la estructura de 4F2hc y la compara con las estructuras conocidas de glucosidasas de bacterias. También se presenta un modelo estructural para rBAT, la otra subunidad pesada de los transportadores heteroméricos de aminoácidos. Pero la producción i purificación de esta proteína nos ha permitido realizar, también, estudios de función y interacción con otras moléculas. Esta tesis intenta aportar información para el estudio estructura-función de estos transportadores, pero también para el estudio de las diferentes funciones y procesos en los que 4F2hc hga estado vinculado en la liberatura, como función de integrinas y tumorigénesis. Finalmente se discute sobre la existencia fisiológica del homodímero del ectodominio encontrado en el cristal ortorómbico y el papel de la coordinación de zinc.
14 tesis en 1 páginas: 1
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