QUIMICA CLINICA

Autor: MORENILLA PALAO M. CRUZ.
Año: 2003.
Universidad: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE [www.umh.es].
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD DE VALENCIA.

Resumen: El receptor de vanilloides (TRPV1) es un canal iónico sensible a la capsaicina, protones y calor que se expresa en los nociceptores y que juega un papel principal en el dolor periférico térmico y en el dolor inflamatorio. La expresión y actividad de TRPV1 se encuentran moduladas positivamente por la presencia de agentes pro-algésicos y pro-inflamatorios, aunque sigue sin saberse cuales son las vías de transducción responsables de este fenómeno de sensibilización del canal. En este estudio se uso la técnica del doble híbrido en levaduras con el fin de identificar proteínas celulares que interaccionaran con el dominio amino-terminal de TRPV1. Dos proteínas vesiculares, SNAPIN y Sinaptotagmina 9, interaccionan fuertemente con el dominio amino-terminal de TRPV1 en estudios tanto in vitro como in vivo. Además en neuronas de gánglio de raiz dorsal TRPV1 co-localiza con proteínas de membrana vesicular, como VAMP-2, Ni SNAPIN ni Sinaptotagmina 9 afectan a la actividad del canal en condiciones normales, en cambio si inhigen parcialmente la protenciación de la respuesta de TRPV1 inducida por la activación de la proteína quinasa C (PKC). La potencia del bloqueo observado por estas proteínas fue similar al provocado por la toxina botulínica A, un potente bloqueador de la exocitosis. Los resultados derivados del presente estudio revelan la existencia de un mecanismo dirigido por la PKC de movilización rápida de canales TRPV1 alojados en vesículas hacia la membrana plasmática. Este mecanismo de regulación de los niveles del canal presentes en la membrana podría estar implicado en el desarrollo y mantenimiento de la hiper-algesia térmica asociada a los procesos inflamatorios. El descubrimiento de esta nueva vía de regulación pone de manifiesto la complejidad de la maquinaria intracelular de la nocicepción y su papel en el dolor inflamatorio. A su vez, representa un nuevo punto de estudio para conocer su validez como diana terapéutica para el desarrollo de nuevos fármacos analgésicos más potentes y específicos.

Autor: RODRÍGUEZ VARGAS ELISENDA.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: INSTITUTO DE CIÈNCIA DE MATERIALS DE BARCELONA.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Autor: GARCERAN ORTEGA M. JOSE.
Año: 2004.
Universidad: MÁLAGA [www.uma.es].
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: MEDICINA.

Resumen: PLANTEAMIENTO Y OBJETIVOS La artroplastia primaria de rodilla (APR) puede dar lugar a una pérdida sustancial de sangre y el 31 30-50% de estos pacientes reciben transfusión de sangre alogénica (TSA). Dado que la TSA es un recurso terapéutico escaso, cada vez más caro y no exente de riesgos, se ha comprobado la efectividad de dos estrategias para reducir las necesidades de TSA en pacientes sometidos a APR. PACIENTES Y MÉTODOS En el HCU Virgen de la Victoria, los resultados en 200 pacientes que recibieron sangre recuperada de los drenajes postoperatorios (grupo A2) se compararon con los de un grupo control retrospectivos (grupo A1). En el HU Miguel Servet, los resultados de 81 pacientes que recibieron hierro sacarato perioperatorio (2x200 mg,iv), mas eritropoyetina si la Hb preoperatoria era menor de 13 g/dL (1x40,000 UI, sc) (grupo B2), se compararon con los de un grupo retrospectivo de 100 pacientes (grupo B1). RESULTADOS El porcentaje de pacientes con TSA en el grupo A2 fue menor que el A1 (56.5 vs 11%, respectivamente; p menor 0.01). Los mismo ocurrió en el grupo B2 respecto al grupo B1 (30 vs 3.7%, respectivamente; p menor 0.01). Sin embargo, el 23% (17/74) anémicos del grupo A2 y el 10% (2/19) del grupo B2, necesitan TSA. CONCLUSIONES En pacientes APR no anémicos ambas estrategias fueron igualmente efectivas para eliminar la necesidad de TSA. Sin embargo, en pacientes anémicos sería necesaria la combinación de ambas para tener un mayor margen de seguridad.

Autor: TRULLOLS SOLER ESTHER.
Año: 2005.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI [www.urv.cat].
Centro de lectura: FACULTAT DE QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAT DE QUIMICA. URV.

Resumen: La informació química sobre la composició d'una mostra pot ser molt diversa: des de saber de quins analits es composa un cert material a saber exactament en quina quantitat s'hi troben o de quina forma hi són presents, si estan relacionats estructuralment entre ells, etc. D'acord amb tota aquesta varietat, els mètodes analítics es classifiquen en dos grans grups: els mètodes d'anàlisi qualitativa i els mètodes d'anàlisi quantitativa. Segons les característiques del problema analític es triarà un o altre tipus de mètode d'anàlisi. Quan l'objectiu és saber què hi ha en una mostra desconeguda, un mètode qualitatiu serà el mes adequat. En els darrers temps, aquests mètodes han estat objecte d'estudi, i s'utilitzen avui dia, en molts camps d'aplicació. Per exemple, en l'anàlisi d'aliments és habitual l'ús d'un mètode qualitatiu per determinar si un o més analits es troben presents en la mostra per sobre o per sota d'una determinada concentració. Però si l'interès és saber la quantitat d'un determinat component en una mostra, l'opció d'un mètode quantitatiu serà la més adient. Aquesta tesi s'ha centrat en els mètodes d'anàlisi qualitativa pels nombrosos avantatges que presenten. Aquests mètodes poden ajudar a destriar mostres en funció de si aquestes presenten una quantitat d'un cert analit al voltant d'un valor de concentració prèviament establert, abans de ser quantificades. És a dir, s'utilitzen com a pas previ a l'aplicació del mètode quantitatiu, implicant un estalvi de feina, de temps i de diners important si es tracta de quantificar contaminants, detectar adulteracions o qualsevol altra situació en la que no es pugui sobrepassar una certa concentració. En aquests casos només s'ha de quantificar la mostra que en el mètode qualitatiu revela un resultat en el que es sobrepassa aquesta certa concentració. En d'altres àmbits d'aplicació, els mètodes qualitatius estan perfectament integrats en el procediment estàndard d'operacions, pel que, llevat en situacions molt específiques, un resultat positiu no necessita ser confirmat mitjançant una anàlisi posterior amb un mètode quantitatiu. A més de la importància de triar un mètode analític adequat a cada problemàtica, cal destacar que és igual d'important tenir fiabilitat sobre el resultat trobat i, per tant, sobre el mètode emprat. Això vol dir que qualsevol mètode analític ha de tenir definits els seus requeriments i qualitats analítiques i que s'ha de comprovar que aquests paràmetres prèviament definits, realment tenen el valor que se'ls ha assignat. D'aquesta confirmació se'n diu Validació, i és una condició indispensable per a poder emprar un mètode analític. D'aquesta manera es poden garantir els resultats demanats pels clients/usuaris. A més, des de l'aprovació de la norma ISO 17025 aquesta comprovació del mètode analític i dels seus resultats encara s'ha fet més recomanable. Fins fa poc temps, la validació de mètodes analítics s'ha centrat en els mètodes quantitatius. El resultat ha estat una sèrie de guies/pautes perfectament establertes d'ús molt comú. Però no hi ha cap protocol general per a validar un mètode qualitatiu. Amb aquesta tesi es vol contribuir a millorar aquesta situació. Es comença amb una revisió de les classificacions i de les definicions lligades a aquests mètodes, a més d'un repàs sobre quines institucions han fet esment d'aquest tema. Es segueix amb una proposta de classificació d'aquests mètodes i, finalment, es defineixen aquells paràmetres de qualitat que es consideren més importants en la validació. En les tres aplicacions pràctiques presentades es descriuen les característiques intrínseques del mètode d'anàlisi qualitativa. Des 8 prés, es 498 defineixen els paràmetres que s'adeqüen millor als requeriments del mètode i, finalment, es proposa un protocol de validació que permet el seu establiment. El cas de la revisió de les classificacions i definicions emprades en aquest àmbit, com en el cas de la presentació de les contribucions corresponents a diferents institucions, s'han traduït en dues publicacions que s'adjunten en la tesi. Pel que fa a les aplicacions pràctiques, una d'elles també s'inclou com a article publicat i les altres dues, s'inclouen com a articles acceptats.

Autor: EGIDO GABÁS MERITXELL.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA - UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: En la biosíntesis de las proteínas, una de las etapas esenciales es el plegamiento y la agregación. Este proceso requiere habitualmente de cofactores y de otras proteínas denominadas chaperonas moleculares. Si en la secuencia de aminoácidos existe una mutación, puede no producirse el plegamiento y/o agregación de la proteína, por lo que la proteína resultante no es plenamente activa o bien es degradada y no llega a su lugar de acción. La terapia de chaperonas químicas se describe como una nueva aproximación terapéutica para el tratamiento de diversas enfermedades sisosomales o neurodegenerativas. Esta terapia se basa en la interacción dela proteína con pequeñas moléculas de bajo peso molecular que asisten al plegamiento correcto de la proteína mediante una interacción no covalente de tipo ligando-proteína, con un modo de acción equivalente al de las chaperonas moleculares. En esta tesis se han sintetizado nuevos aminociclitoles como candidatos a chaperonas químicas para el tratamiento de una de las glicoesfingolipidosis: la enfermedad de Gaucher. La síntesis de estos compuestos se ha llevado a cabo mediante la apertura regio y estereoselectiva de epóxidos y aziridinas cuyas síntesis se hayan ampliamente descritas en la literatura. También se discuten los resultados de actividad in vitro de estos compuestos sobre diversos enzimas; la glucosilceramida sintasa microsomal, la glucosilceramida hidrolasa lisosomal, la Imiglucerasa (Cerezyme®, Genzyme), la alfa-glucosidasa la levadura, la beta-glucosidasa de almendra y diversas glicosidasas involucradas en el metabolismo de los glicoesfingolípidos. Los compuestos sintetizados mostraron una elevada especificidad por la glucosilceramida hidrolasa junto a una inhibición competitiva y unos estudios de determinación de la actividad enzimática en condiciones de desnaturalización indican que estos compuestos podrían, a bajas concentraciones, estabilizar la glucosilceramida hidrolasa y aumentar su actividad, es decir, son candidatos a chaperonas químicas para el tratamiento de la enfermedad de Gaucher.

Autor: GELLA CONCUSTELL ALEJANDRO.
Año: 2005.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La tesis está orientada en última instancia al desarrollo de inmunoanálisis para la determinación de la coriogonadotropina (hCG) en muestras de suero o de orina humanas. Los primeros métodos utilizados para la determinación de la hCG eran "bioensayos" y luego "radioinmunoensayos". Ambos perdieron vigencia por diversas causas: laboriosos, poco sensibles y poco específicos (bioensayos), necesidad de instalaciones reguladas, etc. Cuando la hCG purificada fue asequible, pudieron prepararse anticuerpos específicos y se desarrollaron diversos tipos de inmunoanálisis con mejores prestaciones que los "bioensayos" y mayor facilidad de uso que el "radioinmunoanálisis". En los casos en que la determinación se realiza como prueba rápida de embarazo, son especialmente útiles determinadas variantes de inmunoanáisis denominadas "pruebas rápidas", que no precisan de instrumenteal y pueden ser realizadas por personal no especilaizado. En el presente trabajo se han desarrollado y validado dos sistemas de ensayo para la determinación de la hCG. Por un lado un enzimoinmunoanálisis en microplacas para realizar determinaciones cuantitativas de en muestras de suero sanguineo y por otro lado una inmunocromatografia en nitrocelulosa para realizar determinaciones cualitativas en muestras de orina y orientada como prueba rápida de embarazo. Además se han desarrollado diversas tecnologías aplicables a la obtención de materias primas de origen biológico que intervienen en los inmunoanálisis como la obtención y purificación de la hCG, la obtención y purificación de anticuerpos monoclonales contra la hCG, la preparación de nanopartículas de oro coloidal a gran escala y la conjugación de anticuerpos contra la hCG con peroxidasa y con oro coloidal.

Autor: Camprubí Giménez Sandra.
Año: 2006.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: Facultat de Medicina.
Centro de realización: Facultat de Medicina - Unitat de Bioquímica - Universitat Autónoma de Barcelona.

Resumen: El Streptococcus pyogenes es una bacteria grampositiva responsable de infecciones estreptocócicas en el hombre, como la faringitis o el impetígeno, pero también es el causante del desarrollo de las secuelas postinfecciosas com la fiebre reumática o la glomerulonefritis aguda. La fiebre reumática es la principal causa de muerte por cardiopatía en personas menores de 45 años en paises subdesarrollados. Como el organismo humano responde immunológicamente a las infecciones estreptocócicas con una plétora de anticuerpos contra los componentes celulares y extracelulares del S. pyogenes, el diagnóstico serológico de estas infecciones se basa en la respuesta immune contra productos extracelulares como la estreptolisina O (SLO), la desoxiribonucleasa B, la hialuronidasa, la NAD-glicohidrolasa o la estreptoquinasa. La detección de los anticuerpos antiestreptolisina O (ASO) está ámpliament acceptada com a prova para el diagnóstico de las infecciones estreptocócicas, ya que aproximadamente el 80 % de los pacientes infectados presentan títulos elevados de estos anticuerpos en sangre. Actualmente, existen varios immunoanálisis para la detección de estos anticuerpos, aunque el más utilizado es el immunoanálisi turbimétrico basado en la aglutinación con látex sensibilitzado con SLO purificada apartir de cultivos de S. pyogenes. No obstante, los cultius de esta bacteria presentacos debido a su patogenicidad. Además, los cultivos son de difícil estandarización y, por los requerimientos nutricionales del S. pyogenes, los medios de cultivo se encarecen. Por estas razones, la producción de un SLO recombinante se planteó como una alternativa para resolver estas dificultades. En el presente trabajo, se elegió un sistema de expressión procariota, Escherichia coli, porque era biológicamente seguro, sus cultivos eran reproducibles i de coste relativamente bajo. En primer lugar, se obtuvo la secuencia codificante para la SLO apartir del DNA genómico del S. pyogenes y se prepararon dos vectores de expresión recombinante, el pBAD-SLO y el pJLA603-SLO-His. A continuación, se realizaron los estudios de la expressión de estos dos vectores y se determinaron las mejores condicions para obtener la máxima producción de SLO. Apartir de estos estudios, se escogió el sistema induïble por L-arabinosa, con el vector pBAD-SLO, para realizar el escalado del cultivo en el bioreactor debido a su mayor producción de la proteína recombinant. Seguidamente, se purificó la SLO recombinante mediante cromatografía de afinidad de iones metálicos immobilizados ya que la proteína recombinante presenta una cola de histidinas fusionada en el extremo C-terminal. Se optimizaron las condicions de unión de la SLO a la resina y se escaló la purificación mediante la tecnología StreamlineTM. Se caracterizó molecular y antigénicamente la proteína purificada i se confirmó tanto su identidad como su antigenicidad. Finalmente se aplicó la SLO recombinante purificada en el desarrollo de un immunoanálisis turbidimétrico. A partir de los controles y de la caracterización realizados, se consideró que era viable la utilización de la SLO recombinante purificada para la determinación de anticuerpos ASO en sangre.