ANALISIS BIOQUIMICO

Autor: MUÑOZ MARTÍNEZ JOSÉ ANTONIO.
Año: 2004.
Universidad: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE CIÈNCIES.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: El trabajo que se presenta en esta Tesis se centra en el estudio de la litiasis oxalocálcia como enfermedad que afecta a un gran sector de la población, caracterizada por una alta prevalencia e incidencia, alta morbilidad y altas tasas de recidiva. Aún en el actualidad se desconocen una importante cantidad de aspectos relativos a los mecanismos de formación de los cálculos y su etiología, y en consecuencia no se dispone de las diagnosis ni de los tratamientos terapéuticos eficientes que serían deseables. Este trabajo intenta abundar en una mejor comprensión de la etiología litiásica mediante el desarrollo de herramientas analíticas para una mayor eficiacia en el diagnóstico de las alteraciones urinarias y en la prevención de esta enfermedad. Estos objetivos se han llevado a cabo trabajando a diferentes niveles: 1,- Desarrollo de una serie de metodologías analíticas simples aplicables a la determinación de marcadores de la litogénesis. 2,- Estudio de la variación temporal (diaria y estacional) del riesgo litógeno. 3,- Caracterización in vitro de las propiedades inhidoras de diferentes sustancias. 4,- Evaluación de la idoneidad de la orina nocturna como espécimen más adecuado al estudio de las alteraciones responsables de la litogénesis, frente a los inconvenientes que presenta la orina de 24 horas, normalmente utilizada a estos efectos.

Autor: GONZÁLEZ GOMEZ DAVID.
Año: 2004.
Universidad: EXTREMADURA [www.unex.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Autor: PEÑA LUQUE FERNANDO.
Año: 2004.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ANALÍTICA.

Resumen: El objeto de esta Memoria fue el desarrollo, validación y aplicación de diversas metodologias analiticas que permitieran el análisis directo de muestras de aceite de oliva con vistas a realizar un control de calidad de las mismas. Esto se llevó a cabo mediante la caracterización del aceite analizado a través de la señal global proporcionada en el instrumento por el perfil de volátiles de la misma. Para la consecución de dicho objetivo se empleó un instrumento comercial consistente en un módulo de espacio de cabeza acoplado a un espectrómetro de masas (HS/MS) que actuaba como detector. El sistema empleado permitia además la opción de incluir entre ambos módulos un cromatógrafo de gases para obtener información discriminada del aceite analizado. La calidad del aceite de oliva se estudió en esta Memoria en base a tres aspectos diferentes: clasificación de los tres tipos principales de aceite, contaminación con diversos compuestos (como disolventes halogenados e hidrocarburos volátiles) y adulteración con otros tipos de aceite de inferior calidad, bien sea mediante aceite de oliva de inferior calidad, o mediante aceite de semillas. El empleo de diversos tipos de herramientas quimiométricas para el tratamiento de los datos fue fundamental en el desarrollo de dichas metodologias. Se emplearon tres tipos de técnicas diferentes, como son técnicas de reconocimiento de pautas (incluyendo técnicas de visualización, de clasificación y de modelado), técnicas de regresión y técnicas de selección de variables. Se ha seguido la linea de investigación de nuestro grupo FQM-2l5 de la Junta de Andalucia orientada al desarrollo de estrategias analiticas de vanguardia-retaguardia.

Autor: BENASCO RODRIGUEZ JOSE PEDRO.
Año: 2004.
Universidad: LA LAGUNA [www.ull.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUIMICAS.
Centro de realización: LA LAGUNA.

Resumen: En la tesis se hace un estudio de maduración de la variedad de uva malvasía, en tres denominaciones de origen canarias, Abona, Ycoden-Daute-Isora y Lanzarote, para las añadas de 1999, 2000 y 2001. En dicho estudio de maduración se estudia el peso de 100 bayas, el pH, la acidez total, el grado brix, el ácido tartárico, el málico, el cítrico y el nitrógeno facilmente asimilable. También, se realizan microvinificaciones de elaboración de vinos dulces en las tres añadas y las tres denominaciones de origen, y se les analiza cinco grupos de parámetros, uno relacionado con la acidez del vino, el segundo relacionado con el cuerpo del vino, el tercero con el color, los polifenoles y el sulfuroso, el cuarto con los metales y la conductividad, y el quinto relacionado con los volátiles mayoritarios.

Autor: LOZANO PÉREZ CARLES.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Se ha obtenido una serie de conjugados de flavanoles a partir de un extracto vegetal mediante un proceso de despolimerización ácida en presencia de derivados de cistenia. Los monómeros de flavanoles derivatizados se separaron eficientemente del crudo de extracción mediante cromatografía de intercambio iónico, debido a la carga neta introducida al derivatizar. Posteriormente fueron purificados por cromatografía en fase reversa C18 obteniendo los correspondientes derivados de epicatequina, catequina y epicatequin 3-O-galato conjugados con cisteina, O-etilcisteina y N-acetil-O-metilcisteina. Dichos compuestos presentaron un mayor capacidad antiradicalaria que la correspondiente epicatequina mediante ensayos con los radicales linbres DPPH (el cual se reduce vía donación de hidrógenos y/o por transferencia electrónica) y HNTTM (el cual se reduce solo por transferencia electrónica). En general, los compuestos que contenían el grupo gálico fueron los que generaron una mayor capacidad antiradicalaria en ambos estudios. También se realizaron estudios in vitro con lineas tumorales humanas de melanoma (A375 y M21) y de colon (HT29) y con una línea no tumoral de queratinocitos (HaCaT), observándose una moderada inhibición en la viabilidad celular, siendo los compuestos que contenían un grupo galato los que presentaron mayor efectividad. A nivel de ciclo celular, solo los derivados que contenían el grupo gálico presentaron una alteración en el cicclo, aumentado la fase S. Igualmente se les observó una mayor inducción de la apoptosis en las linias tumorales, pero no en la línea no tumoral de queratinocitos. Dicha inducción a la apopotosis se corroboró con otras técnicas en las que se observó condensación de cromatina y la fragmentación del ADN. Sorprendentemente, uno delos derivados que contenía un grupo galato no presentó alteración en el cilco celular ni indujo apoptosis en las células tumorales. Igualmente, su poder antiradicalario mediante transferencia electrónica (HNTTM)fue insuitadamente bajo aun conteniendo el gurpo galato. Dichos resultados nos empujaron a hipotetizar la posible relación entre la transferencia electrónica y su efecto en la maquinaria celular. Asimismo, el radical estable HNTTM nos permitiría predecir de forma sencilla la capacidad por-apoptótoica de los compuestos según su capacidad de transferencia electrónica.

Autor: ABELLÁN SÁNCHEZ MARÍA DEL ROSARIO.
Año: 2005.
Universidad: POMPEU FABRA [www.upf.edu].
Centro de lectura: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: Las hormonas recombinantes eritropoyetina (EPO) y hormona de crecimiento (GH), prácticamente iguales a las endógenas y de corta vida media en circulación, son de difícil detección directa en el control antidopaje. Se determinaron los valores poblaciones de los biomarcadores indirectos EPO, receptor soluble de la transferrina, insulin-like growth factor-I (IGF-I) y procolágeno tipo III péptido (P-III-P), en poblaciones seleccionadas de deportistas, y el efecto del ejercicio y los distintos tipos de entrenamiento sobre su concentración sérica. La comparación de resultados obtenidos mediante distintos ensayos demostró la necesidad de una validación exhaustiva previa a su utilización. A excepción de P-III-P, los biomarcadores séricos propuestos para la detección de rhEPO y rhGH no se encuentran directamente afectados por el nivel atlético, el ejercicio o la distinta carga de entrenamiento realizada a lo largo de la temporada deportiva. La edad es la principal influencia sobre las concentraciones séricas de IGF-I y P-III-P.

Autor: Dondapati Srujan Kumar.
Año: 2006.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI [www.urv.cat].
Centro de lectura: Escuela Técnica Superior de Ingeniería Química.
Centro de realización: ETSEQ.

Resumen: Existe una demanda creciente de dispositivos de análisis multianalito, con aplicaciones potenciales en los campos de la biomedicina y biotecnología, así como en el ámbito industrial y ambiental. Para el desarrollo de estos dispositivos resulta esencial un buen control espacial durante la etapa de inmovilización de las biomoléculas de interés; cada una de ellas debe ser depositada de forma precisa sobre la superficie del sensor (por ejemplo, un transductor amperométrico), evitando solapamientos que puedan comprometer la especificidad del sistema. El objetivo de esta tesis es desarrollar diferentes métodos de patterning para la inmovilización selectiva de biomoléculas. El primer método consiste en la electrodeposición selectiva de nanopartículas de oro biofuncionalizadas para el desarrollo de biochips. Se trata de un método de patterning controlado electroquímicamente, en el que las nanopartículas de oro se modifican en primer lugar recubriéndolas con diversos enzimas y a continuación se electrodepositan selectivamente sobre la superficie de un electrodo. Como parte de esta metodología, se prepararon nanopartículas de oro biofuncionalizadas utilizando tres estrategias diferentes: a través del enlace dativo oro-tiol, por adsorción directa o mediante interacción electrostática siguiendo la técnica layer-by-layer (capa por capa). Para la funcionalización de las nanopartículas de oro se emplearon distintas biomoléculas, como los enzimas peroxidasa de rábano (HRP), glucosa oxidasa (GOX) y albúmina de suero bovino (BSA), y finalmente oligonucleótidos modificados con moléculas fluorescentes y grupos tiol. Las nanopartículas biofuncionalizadas fueron caracterizadas mediante técnicas de espectroscopía UV-visible, microscopía electrónica de transmisión (TEM) y medida del potencial zeta. Mediante espectroscopía UV-visible se observó un pico de resonancia de plasmón característico de las nanopartículas modificadas, relacionado con la estabilidad de la preparación. La medida del potencial zeta permitió la caracterización de las nanopartículas de oro modificadas capa por capa con polímero redox y enzimas. También se estudiaron los cambios en el potencial zeta de nanopartículas modificadas con BSA a distintos valores de pH. Tras la preparación de las partículas biofuncionalizadas, se llevaron a cabo estudios fundamentales de electrodeposición de nanopartículas de oro modificadas con BSA y un polímero redox, con el fin de analizar el efecto de varios parámetros: potencial aplicado, tiempo de deposición, distancia entre los electrodos, superficie del electrodo auxiliar y pH del medio. Para estudiar el comportamiento electrocatalítico de las nanopartículas modificadas una vez electrodepositadas, se llevaron a cabo experimentos utilizando coloides de oro modificados con HRP y GOX. A continuación se empleó esta metodología para el desarrollo de biochips, utilizando dos configuraciones diferentes. En la primera, se electrodepositaron nanopartículas de oro funcionalizadas con GOX y HRP y modificadas con un polímero redox sobre la superficie de un chip de electrodos interdigitados (IDE), consiguiendo eliminar por completo las repuestas no específicas. En la segunda configuración, las partículas se modificaron con una capa adicional de polímero redox, comprobando de nuevo la ausencia total de respuestas no específicas después de la electrodeposición. Esta método de patterning es genérico y puede utilizarse para la producción de diversos biochips. El segundo método de patterning también está basado en el control electroquímico, y consiste en la modificación de los electrodos con monocapas autoensambladas electroactivas cuya funcionalidad es modulable en función del potencial aplicado. En esta metodología, la monocapa electroactiva contiene grupos acetal que pueden ser desprotegidos selectivamente mediante la aplicación de un potencial en zonas específicas de la superficie del electrodo. De esta manera quedan expuestos en la superficie grupos aldehído activos, que pueden ser fácilmente conjugados con aminas primarias presentes en las biomoléculas de interés. Los e 8 nzimas G db8 OX y HRP se usaron como proteínas modelo para comprobar la versatilidad de esta técnica. Su aplicabilidad para la fabricación de biochips se demostró con medidas amperométricas y medidas en tiempo real mediante resonancia de plasmón de superficie combinado con electroquímica (eSPR). La tercera metodología es también un sistema de patterning controlado electroquímicamente, pero en este caso se utiliza la inmovilización del 4,4-bipiridil como base para la creación de biochips. Se sintetizaron moléculas de 4,4-bipiridil funcionalizadas con grupos carboxílicos, que fueron caracterizadas electroquímicamente y a continuación conjugadas con las biomoléculas de interés para la creación de biochips. La selectividad de estos sistemas se demostró colorimétricamente, obteniéndose niveles mínimos de respuesta inespecífica. Por último, el cuarto de los métodos de patterning desarrollados está basado en la técnica de fotolitografía. Los enzimas glucosa oxidasa y sarcosina oxidasa se depositaron selectivamente junto con un polímero redox sobre la superficie de electrodos interdigitados utilizando un proceso de lift off, consiguiendo eliminar por completo las señales cruzadas o cross-talk. Como parte de esta metodología se optimizaron varios procedimientos de inmovilización de las biomoléculas, con el fin de seleccionar la estrategia más adecuada. También se llevaron a cabo ensayos con diferentes reactivos para eliminar la adsorción inespecífica. Finalmente, el sistema optimizado fue aplicado sobre IDEs fabricados mediante fotolitografía. Los sensores de glucosa y sarcosina respondieron de forma selectiva a sus respectivos sustratos, con ausencia total de cross-talk. La presente tesis está estructurada en 7 capítulos. En el Capítulo I se exponen las bases del desarrollo de biochips, métodos de patterning con control electroquímico, otros métodos de patterning selectivo y las técnicas de fotolitografía, así como un resumen de la tesis. El Capítulo 2 y 3 describe la síntesis de coloides de oro, la modificación con biomoléculas, los estudios de estabilidad y los estudios fundamentales de electrodeposición de las nanopartículas de oro modificadas sobre la superficie de los electrodos. En el Capítulo 4 se muestra la aplicación de la electrodeposición de nanopartículas de oro biofuncionalizadas para la creación de biochips. El Capítulo 5 describe la inmovilización selectiva de biomoléculas mediante la desprotección electroquímica de monocapas autoensambladas electroactivas. En el Capítulo 6 se muestra la síntesis, caracterización e inmovilización selectiva de derivados de 4,4- bipiridil funcionalizados con HRP. El Capítulo 7 describe el patterning selectivo en la escala micrométrica de dos oxidasas sobre un chip de electrodos interdigitados mediante fotolitografía. Finalmente, el Capítulo 8 resume las conclusiones y el trabajo futuro.