ANALISIS CROMATOGRAFICO (3)

Autor: GARCÍA VILLAR NATIVIDAD.
Año: 2005.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAT DE QUÍMICA DE LA UNIVERSIDAD DE BARCELONA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El objetivo global de la presente tesis doctoral es el desarrollo de metodología analítica que permita la determinación sensible de aminoácidos y aminas biógenas. Para ello se ha investigado la utilización de biosensores enzimáticos, metodologías en flujo continuo y diferentes técnicas de separación como la cromatografía de líquidos (HPLC) y la electroforesis capilar (CE), en las que se ha empleado la detección potenciométrica, espectrofotométrica y la espectrometría de masas (MS). Asimismo, se han aplicado diversos métodos quimiométricos para el diseño de los experimentos y el tratamiento de los datos. En primer lugar, se desarrollan tres métodos potenciométricos utilizando un biosensor enzimático de lisina. Dicho biosensor está basado en un electrodo potenciométrico de contacto metálico (All-solid-state) selectivo (ISE) de ion amonio y consta de una membrana sobre la que se inmoviliza químicamente la enzima lisina oxidasa. La lisina es degradada en el biosensor, liberando amonio que es detectado por el ISE de amonio. Se establece un método potenciométrico para la determinación de lisina basado en el análisis conjunto de los datos multivariantes generados por un sistema de sensores en serie, compuesto por el biosensor de lisina y siete ISEs de NH4+, K+, Na+, Li+, Ca2+, Mg2+ e H+. Seguidamente, se optimiza un método de HPLC para la determinación de lisina utilizando el biosensor potenciométrico desarrollado como sistema de detección. Por último, se desarrolla un método de análisis por inyección en flujo basado en un sistema potenciométrico diferencial ene l que el biosensor de lisina es empleado como electrodo de trabajo, mientras que como electrodo de referencia se utiliza un electrodo de amonio circular. Los métodos desarrollados se aplican a la determinación de lisina en muestras de pienso de alimentación aminal y en productos farmacéuticos. A continuación, se desarrollan tres métodos analíticos para la determinación de aminas biogénas. Estos se basan en la derivatización de los analitos con el reactivo 1,2-naftoquinona-4-sulfonato de sodio (NQS) y en la separación cromatográfica o electroforética de los derivados para su posterior detección espectrofotométrica. El primer trabajo permite determinar histamina mediante un sistema de derivitzación en línea (on-line) acoplado a HPLC. Se centra especialmente en la optimización de las condiciones de reacción en continuo, que permiten derivatizar la histamina en condiciones perfectamente controladas. En este caso, la separación de la histamina de los aminoácidos y otras aminas se consigue inyectando la muestra derivatizada, directamente, en el sistema cromatográfico. El siguiente trabajo, se lleva a cabo la derivatización precolumna off-line de las aminas biógenas seguida de una etapa de extracción líquido-líquido que permite limpiar la matriz de las muestras y preconcentrar los analitos. En tercer lugar, se desarrolla la separación de los derivados de las aminas biógenas mediante electroforesis capilar en zona, como alternativa a la cromatografía de líquidos. En este caso se han estudiado diversas estrategias de derivatización in-capillary que permiten limpiar la matriz de las muestras y preconcentrar los analitos. En tercer lugar, se desarrolla la separación de los derivados de las aminas biógenas mediante electroforesis capilar en zona, como alternativa a la cromatografía de líquidos. En este caso se han estudiado diversas estrategias de derivatización in-capillary que permiten la automatización y simplificación del proceso de derivatización. También se estudia la posibilidad de mejorar la sensibilidad mediante la inyección electrocinética de las muestras. Los métodos desarrollados en este apartado se aplican a la determinación de aminas biógenas en muestras de vino tinto. Finalmente, se desarrolla un método de HPLC-ESI-MS para la determinaci 8 ón de lo 38b s isómeros cis y trans de la hidroxiprolina, la hidroxilisina y los aminoácidos proteicos. Se basa en la derivatización precolumna de los analitos con el reactivo quiral N2-(5-fluoro-2,4-dinitrofenil)-L-valinamida (L-FDVA), y en la separación cromatográfica de sus derivados mediante HPLC. La detección de los analitos se realiza espectofotométricamente y adicionalmente mediante espectrometría de masas, utilizando una fuente de ionización de electrospray y un espectrómetro de masas de tripo cuadrupolo.

Autor: RODRÍGUEZ DIAZ RAFAEL CARLOS.
Año: 2005.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En esta Memoria se ha contribuido al desarrollo de métodos analíticos fácilmente aplicables al análisis de rutina mediante el uso de iones lantánidos como reactivos. Se propone por primera vez un método que implica inmovilización de los iones terbio(III) y europio(III) en tiras de celulosa para su uso como reactivos secos en la determinación de los antibióticos ciprofloxacina y tetraciclina en fluidos biológicos. La medida de la intensidad luminiscente de ambos quelatos de forma independiente permite la resolución de la mezcla sin necesidad de tratamientos matemáticos complejos para conseguir la discriminación de ambas señales. La utilidad analítica de estos iones como reactivos en disolución se ha ampliado mediante el desarrollo de diversos métodos directos y cromatográficos con derivatización post-columna parla determinación de compuestos orgánicos. Se ha realizado un estudio sistemático del comportamiento lumniscente de quelatos de antibióticos del grupo de las quinolonas con terbio. Los elevados niveles de sensibilidad obtenidos para el quelato terbio(III)-ciprofloxacina han permitido su determinación en muestras de leche, utilizando la metodología de tiempo resuelto. Por otra parte, el similar comportamiento luminiscente observado para los quelatos de terbio de estos antibióticos dificulta la determinación individual de uno de ellos en presencia de los demás, para lo que se requiere una etapa de separación cromatográfica adicional. Se han comparado los resultados obtenidos para flumequina, con medidas de fluorescencia y tiempo resuelto, para los métodos directo y cromatográfico. La sensibilidad y selectividad del método cromatográfico con detección fluorescente permiten la determinación de este antibiótico en muestras de tejidos animales y leche, con un tratamiento de muestra sencillo para la eliminación de proteínas. Los buenos resultados obtenidos para flumequina han servido como base para la separación cormatográfica con derivatización post-columna de ocho antibióticos quinolona utilizados en la práctica veterinaria. Este método se ha aplicado a la determinación de ciprofloxacina, enrofloxacina, danofloxacina y flumequina en muestras de leche con resultados satisfactorios. También se ha extendido la aplicabilidad analítica del terbio (III) como reactivo derivatizante para la separación de ocho compuestos fenólicos, en concreto ácidos hidroxibenzoicos y catequinas, en muestras de vino blanco. Se ha demostrado por primera vez la utilidad del iterbio(III) como reactivo analítico para la obtención de medidas de dinámicas de dispersión a larga longitud de onda y se ha aplicado a la determinación de los iones inorgánicos sulfitos y fosfatos basados en la formación de especies poco saludables con este fin. La selectividad espectral y temporal se mejoran mediante la realización de medidas cinéticas y a larga longitud de onda, debido a la eliminación de señales estáticas de fondo y las de otros componentes de la muestra que pueden emitir a longitudes de onda menores. La similitud de los resultados de los métodos propuestos con los proporcionados por los métodos oficiales confirma su utilidad práctica en el análisis de muestras reales.

Autor: LUCENA RODRÍGUEZ RAFAEL.
Año: 2005.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Las técnicas de separación no cromatográficas están presentes en casi todos los procesos de medida bio(químicos) con distintas finalidades. De la misma forma es habitual su presencia en las configuraciones automáticas basadas en sistemas de flujo. En la investigación recogida en esta Tesis Doctoral se ha pretendido avanzar en su aplicación en las metodologías tanto en inyección en flujo continuo como secuencial, para el diseño de autoanalizadores multiparamétricos en el ámbito alimentario y de sensores de infrarrojo en los contextos medioambiental e industrial. El trabajo desarrollado pretende introducir desarrollar y validar herramientas analíticas innovadoras orientadas a la mejora de las determinaciones basadas en la medida de índices totales. Esta opción es consistente con la tendencia de la información analítica demandada por los clientes del laboratorio analítico en la que también se plasma el concepto de simplificación. Por eso se ha optado, en la mayoría de los casos, por el uso de un detector de respuesta universal poco empleado en este contexto como es el detector evaporativo de dispersión de luz, aunque también se han empleado en casos concretos la espectroscopía UV-vis y la fluorescencia. Asimismo se ha avanzado en el diseño de sensores de ATR-FT-IR basados en la integración de la separación (microextracción líquido-líquido) y la detección. Asimismo, se ha avanzado en la definición del concepto de autoanalizador adaptándolo a las tendencias actuales en la relación con la demanda de información por parte de los clientes del laboratorio analítico. Así, en este caso la respuesta proporcionada por el autoanalizador es: A,- Múltiple, determinando hasta tres parámetros empleando una única alícuota de muestra, de forma que la discriminación entre familias se lleva a cabo mediante la implementación en el autoanlizador de distintas técnicas de separación. B,- Global para familias de compuestos dado que no existe separación cromatográfica entre los distintos componentes de la muestra. Igualmente, se ha innovado en el campo de las técnicas de separación mediante: A,- El diseño de una cámara multiusos perfectamente compatible con las configuraciones de flujo cuya principal característica es la versatilidad ya que puede, con el mismo diseño básico, implementar distintas técnicas de separación con o sin el uso de membranas. B,- El diseño de un sensor de infrarrojo basado en el uso de una membrana hidrófoba que permite automatizar completamente el proceso analítico al estar acoplado en línea con un sistema de inyección secuencial en flujo (SIA) así como simplificar notablemente el mismo al integrar las etapas de separación (microextracción líquido-líquido) y detección (ATR-FT-IR). Las herramientas desarrolladas se han aplicado a la resolución de problemas analíticos relacionados con: A,- La medida de parámetros directamente relacionados con la calidad de alimentos como leche, bebidas refrescantes, vinos, zumos de fruta y cerveza. B,- La estimación de parámetros de interés medioambiental e industrial que permiten determinar el grado de agotamiento de baños de desengrase alcalinos.

Autor: SANTOS LUQUE BRICIO.
Año: 2005.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: A lo largo de esta última década, la Química Analítica ha experimentado un desarrollo exponencial con la aparición de nuevos instrumentos, nuevas técnicas y nuevas herramientas de tratamiento de muestra. En este tiempo la electroforesis capilar se ha convertido, debido a su elevado poder de resolución, en una herramienta analítica imprescindible en muchas situaciones. Análisis y controles industriales, análisis clínicos, medioambientales, toxicológicos, análisis quieral o análisis genético, son claros ejemplos de esto. Este potencial analítico se ve considerablemente amplificado cuando se híbrida esta técnica de separación con la detección por espectrometría de masas dado que se une el elevado poder de resolución de la técnica con la sensibilidad y selectividad de la espectrometría de masas. A pesar de este gran potencial, el uso de los equipos CE-MS en los laboratorios de rutina se encuentra restringido, fundamentalmente debido a las limitaciones o inconvenientes inherentes a la técnica. Estas limitaciones son debidas por un lado a la baja cantidad de muestra que se puede introducir en los sistemas electroforéticos, y por otro lado en la diucion que sufren los analitos en la interfase de electrospray al mezclarse con el sheath liquid. Además la necesidad de analizar muestras complejas provoca la aparición de efectos de matriz. En este sentido se hace necesaria la introducción, en un gran número de metodologías, de etapas de tratamiento muestra que solucionen estas limitaciones. Por otro lado, los laboratorios de rutina necesitan de herramientas o metodologías analíticas robustas, completamente automatizadas que involucren la mínima participación del analista. Además es deseable que sean técnicas rápidas, que impliquen el uso de la mínima participación del analísta. Además es deseable que sean técnicas rápidas, que impliquen el uso de la mínima cantidad de muestra y sobre todo que sean simples. A lo largo de esta Tesis Doctoral, se ha avanzado en el desarrollo de herramientas analíticas asociadas a la electroforesis capilar hibridada a la espectrometría de masas en un equipo comercial, que han permitido aumentar el potencial analítico de la técnica y facilitar la transferencia de esta técnica a los laboratorios de rutina. Para ello, se ha hecho uso del sistema de preplnishment para efectuar etapas de tratamiento de muestra, concretamente extracción en fase sólida (SPE), mediante la inclusión de minicolumnas en el propio sistema. Así mismo, se han llevado a cabo una serie de modificaciones instrumentales y se han propuesto acoplamientos, que han permitido aumentar el potencial analítico de los equipos comerciales de CE-MS. En este sentido se han acoplado unidades de tratamiento de muestra basadas en técnicas de flujo, FI o SI, de forma discontinua (At-line) a través del sistema de replenishment y de forma continua (on-line), a través del diseño de una interfase que ha podido ser integrada en el equipo mediante la realización de una serie de modificaciones instrumentales simples (con las debidas normas de seguridad). También, dentro de los acoplamientos continuos, se ha desarrollado una interfase que ha permitido la integración de la microestracción en fase sólida (SPME) con los equipos hibridados CE-MS. Por último, se ha llevado a cabo la transformación del equipo comercial de CE-MS en un equipo integrado que nos permite efectuar separaciones bidimensionales. El equipo propuesto, además, de presentar una elevada robustez y eficacia, sólo requiere de la inclusión de un electrodo modificado y de un simple conmutador.

Autor: PENSADO GÓMEZ-ULLA LUIS.
Año: 2005.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA [www.usc.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA DE LA UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA DE LA UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE COMPOSTELA.

Resumen: Los hidrocarburos aromáticos policíclicos (PAHs) conforman una de las familias de contaminantes medioambientales históricamente más investigadas en el campo de la química analítica debido a su carácter carcinogénico y mutagénico al que numerosos organismos internacionales hacen referencia, tales como la OMS, la EPA, la IARC, etc. Sin embargo, además de su origen natural, las crecientes emisiones derivadas de la industrialización de la sociedad, sumado a los continuos avances de la ciencia que ofrece a los investigadores nuevas herramientas y nuevas técnicas, y las continuas revisiones en la legislación vigente, sitúa a los PAHs en un lugar destacado y de actualidad permanente en el que la química analítica debe avanzar. El trabajo recogido en esta memoria supone el desarrollo y optimización de nuevas técnicas analíticas aplicadas al análisis de PAHs en diversas matrices medioambientales. Además de la aplicación de programas informáticos específicamente diseñados tanto para la optimización de separaciones por HPLC en gradiente ternario como para la composición de muestras aplicada al análisis de PAHs, el trabajo aborda novedosas metodologías de extracción de estos contaminantes en diferentes muestras de interés ambiental.

Autor: GARCIA DEL MORAL GARCIA Ma. DEL PILAR.
Año: 2005.
Universidad: LEÓN [www.unileon.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AMBIENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AMBIENTALES.

Resumen: LA TENDENCIA ACTUAL EN GANADERÍA ES EVITAR LA CONTAMINACIÓN NITROGENADA LIMITANDO LA INGESTIÓN POR PARTE DE LOS ANIMALES DE UN EXCESO DE PROTEÍNA DEGRADABLE. POR ELLO, SE TIENDE A INCLUIR EN LA DIETA DE LOS RUMIANTES SUPLEMENTOS PROTEICOS DE BAJA DEGRADABILIDAD, QUE COMPLEMENTEN A LA PROTEÍNA MICROBIANA SINTETIZADA EN EL RUMEN. LOS SUPLEMENTOS DE ORIGEN ANIMAL HAN SIDO PROHIBIDOS DEBIDO AL PROBLEMA DE LA ENCEFALOPATÍA BOVINA Y SE ESTÁN UTILIZANDO ALGUNOS DE ORIGEN VEGETAL. ENTRE LOS QUE CABE DESTACAR LOS TANINOS. DE MODO MUY GENERAL, PODRÍA DECIRSE QUE CONTENIDOS BAJOS O MODERADOS EJERCERÍAN EFECTOS BENEFICIOSOS SOBRE LOS ANIMALES Y SIN EMBARGO, CONTENIDOS ALTOS TENDRÍAN EFECTOS CLARAMENTE NEGATIVOS, QUE PRODUCIRÍAN ALTERACIONES RENALES Y HEPÁTICAS E IRRITACIONES EN EL TRACTO DIGESTIVO. DENTRO DE LOS TANINOS SE PIENSA QUE LOS HIDROLIZABLES SON LOS QUE PRODUCEN CONSECUENCIAS MÁS NEGATIVAS, YA QUE SE DEGRADAN A COMPUESTOS FENÓLICOS SIMPLES QUE PUEDEN SER LOS CAUSANTES DE SU TOXICIDAD. LOS PRINCIPALES EFECTOS SE MANIFIESTAN EN EL RUMEN, DONDE ACTÚAN SOBRE LOS MICROORGANISMOS DEL MISMO, DISMINUYENDO LA SÍNTESIS DE PROTEÍNA MICROBIANA. RELACIONADOS CON ELLA, ESTÁN UNA SERIE DE SUSTANCIAS, ENTRE LAS QUE DESTACAN CREATININA Y LOS DERIVADOS PÚRICOS, ALANTOÍNA, ÁCIDO ÚRICO Y XANTINAS, QUE SE EXCRETAN EN LA ORINA DE RUMIANTES Y LAS BASES PÚRICAS, ADENINA Y GUANINA, PRESENTES EN PELLETS BACTERIANOS. EL ANÁLISIS DE ALGUNOS DE ESTOS METABOLITOS NITROGENADOS ES NECESARIO PARA ESTUDIAR EL EFECTO DE LOS TANINOS EN LOS RUMIANTES, PORQUE APORTAN INFORMACIÓN SOBRE LOS PROCESOS DE FERMENTACIÓN RUMINAL. LA NECESIDAD DE UN ANÁLISIS FIABLE Y PRECISO DE ESTAS FAMILIAS DE COMPUESTOS, EN DIFERENTES MATRICES, NOS HA LLEVADO A PONER A PUNTO MÉTODOS ANALÍTICOS SUFICIENTEMENTE SENSIBLES QUE PERMITAN DETECTAR Y CUANTIFICAR, DE FORMA SIMULTÁNEA, EL MAYOR NÚMERO POSIBLE DE COMPUESTOS. POR OTRO LADO SE HA PRETENDIDO QUE ESTOS MÉTODOS PERMITIESEN, SÓLO CON ALGUNAS MODIFICACIONES EN LAS CONDICIONES EXPERIMENTALES, REALIZAR EL ANÁLISIS DE LOS DISTINTOS GRUPOS ESTUDIADOS, GARANTIZANDO SIEMPRE LA NO INTERFERENCIA DE UNOS COMPUESTOS CON OTROS. SE HA ELEGIDO LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC), PORQUE, ES LA TÉCNICA MÁS UTILIZADA EN EL ANÁLISIS DE ESTE TIPO DE SUSTANCIAS, SOBRE TODO EN FASE INVERSA..EN ESTE TRABAJO SE PRESENTA, COMO ALTERNATIVA, LA CROMATOGRAFÍA POR PARES DE IONES PARA INCREMENTAR LA RETENCIÓN Y MEJORAR LA SEPARACIÓN DE LOS COMPUESTOS ESTUDIADOS, ALGUNOS DE ELLOS MUY POLARES, COMO ES EL CASO DE LA ALANTOÍNA. EN RESUMEN, EN ESTA TESIS DOCTORAL, SE HAN PUESTO A PUNTO MÉTODOS ANALÍTICOS DE HPLC POR PARES DE IONES QUE, CON LIGERAS MODIFICACIONES EN LAS CONDICIONES EXPERIMENTALES, HAN PERMITIDO LA DETERMINACIÓN DE DIFERENTES FAMILIAS DE COMPUESTOS DE INTERÉS EN EL CAMPO DE LA NUTRICIÓN ANIMAL, EN MUESTRAS DE DIVERSA NATURALEZA, LO QUE HA CONSTITUIDO EL OBJETIVO FUNDAMENTAL DE ESTE ESTUDIO.

Autor: LEÓN LEAL ANDRÉS GERARDO.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se ha estudiado la influencia de la presencia de distintas ciclodextrinas (CDs): beta-CD, 2-hidroxipropil-beta-CD, 2,3-dimetil-beta-CD y 2,3,6-trimetil-beta-CD, adicionadas a las fases móviles sobre las condiciones de la separación de alcaloides derivados de beta-carbolina: norharmano, harmano y harmina. Estos compuestos poseen una gran significación biológica, ya que, además de la diferente actividad farmacológica que presentan, aparecen de forma endógena en el organismo humano como consecuencia de la ingestión de alcohol y determinados alimentos. Las CDs adicionadas convenientemente a las fases móviles mejoran las separaciones cromatográficas de compuestos química y estructuralmente muy relacionados (isómeros). En este trajo de investigación se emplearon dos fases estacionarias de sílice modificada, C1 (metilo) y como referencia C18 (octadecilo). Como fases móviles se optimizó la proporción disolvente orgánico/tampón acuoso paralas mezclas metanol/tampón, etanol/tampón y n-propanol/tampón. Se estudió la influencia de la temperatura en el proceso de separación. Así mismo, se determinaron por HPLC las constantes de asociación de los complejos alcaloide-CD, en las diferentes condiciones experimentales descritas para todos los alcoloides y las distintas CDs estudiadas. Además, se caracterizaron los complejos de inclusión sintetizados y aislados por técnicas espectroscópicas de resonancia magnética nuclear y de luminiscencia. Los resultados obtenidos demuestran que la presencia de CDs afecta muy significativamente a las separaciones, ya que permite obtener eficacias de separación similares a las que se obtienen mediante el empleo de fases móviles sin CDs pero con una proporción más elevada de solvente orgánico en la fase móvil. La presencia de CDs permite reducir la proporción de disolvente orgánico en la fase móvil; lo que se denomina fases móviles limpias, por su contenido mayoritario en agua. Se ha determinado como la presencia de concentraciones crecientes de CD en las fases móviles afecta a la selectividad de las separaciones. La eficacia aumenta a medida que aumenta la concentración de CDs alcanzando un máximo para luego disminuir a concentraciones elevadas. Los coeficientes de selectividad se incrementan cuando la fase estacionaria es C1 pero no en el caso de las C18. Los valores e las constantes de asociación obtenidos varían dependiendo del tipo de CD y de fase estacionaria-fase móvil empleada. En general, al aumentar la temperatura disminuyen las constantes de asociación. Los estudios por técnicas espectroscópicas de luminiscencia demuestran la inclusión, ya que se produce una alteración muy significativa en los equilibrios de transferencia de protón del norharmano en estado excitado. Los resultados obtenidos mediante 13C-RMN demuestran la inclusión de los alcoloides estudiados, ya que las señales correspondientes a los carbonos C-6 y C-7 del anillo de beta-carbolina muestran desplazamientos significativos con respecto a los correspondientes patrones. Los experimentos 2D-ROEXU-RMN confirman estos resultados.

Autor: ROSALES CONRADO NOELIA.
Año: 2005.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS, UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Resumen: Debido a su gran eficacia y selectividad, los herbicidas fenoxiácido son muy utilizados en la agricultura actual para el control de las malas hierbas de hoja ancha, por lo que sus residuos se encuentran presentes en una gran variedad de matrices. La determinación de este tipo de herbicidas, tanto en forma ácida como de ésteres, se ha llevado a cabo mediante cromatografía líquida capilar, cLC, con detección ultravioleta en diferentes modos de separación: isocrático/isotermo, isocrático/temperatura programada y gradiente de elución/isotermo, puedo que debido al pequeño diámetro interno de la columna, la transferencia de calor es muy efectiva y la influencia de la temperatura en la retención es considerable. Para obtener la máxima sensibilidad en el análisis, se ha realizado un estudio exhaustivo de las condiciones de inyección, a través del cual se ha establecido la importancia de la introducción de grandes volúmenes de muestra junto con el empleo de técnicas de localización en cabeza de columna para evitar pérdida de resolución. Debido a la complejidad de las muestras tratadas y con objeto de alcanzar los bajos niveles de residuos permitidos por ley, se han desarrollado procedimientos de reconcentración y limpieza, fundamentalmente mediante extracción en fase sólida. Para ello, se han evaluado las características de retención y elución de los herbicidas en distintos absorbentes en base gel de sílice y base polimérica, y se han seleccionado los más adecuados en función del tipo de muestra y de la compatibilidad de la etapa de preconcentración y determinación mediante cLC con las metodologías de localización. Los diferentes métodos desarrollados, han permitido la determinación de fenoxiácidos en muestras de menta fresca y zumo de manzana a niveles del máximo permitido por las regulaciones españolas y europeas, en suelos y en orina humana, a niveles que permiten establecer el grado de contaminación de trabajadores que utilizan con asiduidad estos productos. Por otra parte, se han puesto a punto métodos para la resolución enantiomérica de aquellos herbicidas, que como el 2,4-DP, MCPP y 2,4,5-TP presentan quiralidad y por tanto, sólo uno de los isómeros es el responsable de su actividad. Entre todas las fases estacionarias quirales estudiadas, únicamente el antibiótico vancomicina, ha permitido obtener adecuada enantioselectividad. Mediante estos métodos, no sólo se puede realizar el control de los residuos, sino que también se puede determinar la pureza y cantidad de cada uno de los isómeros en las formulaciones comerciales. En definitiva, los estudios realizados en esta tesis doctoral, ha puesto de manifiesto la utilidad, eficacia y sensibilidad de la cromatografía líquida capilar par el análisis de este tipo de compuestos a muy bajos niveles de concentración en muestras biológicas, medioambientales y alimentos, con la ventaja adicional del menor consumo de disolventes orgánicos y cantidad de residuos generada, que presentan los sistemas capilares utilizados.

Autor: CORDOBÉS MARTÍN SHANDRA.
Año: 2005.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: La conidiación es un proceso morfogenético común en los hongos filamentosos y consiste en la producción de esporas asexuales con la finilidad de la dispersión de la especie. Éste es un proceso complejo en el que intervienen estímulos ambientales y programas genéticamente establecidos. La mayoría de los hongos filamentosos son capaces de conidiar en medio aéreo pero la capacidad de reproducir el proceso en cultivos sumergidos es también posible en condiciones controladas muy concretas. Se ha demostrado que la inducción de la conidiación en Penicillium cyclopium viene determinada pro la acumulación en el entorno de la células de la conidiogenona, un diterpeno endógenos secretos al medio. La inducción de la conidiación en Aspergillus nidulans está mediada por un metabolito terpenoide de características similares a la conidiogenona. Según el mecanismo de inducción propuesto, el micelio produce constitutivamente el inductor, y una vez alcanzada la concentración umbral se desencadena la indución de la conidiación y se ha comprobado que el hongo tiene un mecanismo propio de la inactivación de esta señal. Asimismo, se han encontrado mutantes aconidiales que apuntan a un sistema de regulación con la participación de más compuestos.

Autor: ORTIN MARTINEZ NATALIA.
Año: 2005.
Universidad: ZARAGOZA [www.unizar.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En el trabajo realizado se ha abordado el estudio de los compuestos azufrados presentes en el vino. Estos odorantes pueden resultar de gran impacto en el aroma del vino debido a que pueden proporcionar grandes intensidades aromáticas aunque se encuentren presentes en pequeñas concentraciones. Se caracterizan fundamentalmente por su penetrante aroma y por ser muy reactivos e inestables. Estos factores van a condicionar su determinación, así como la complejidad intrínseca del vino. Los analitos estudiados fueron: 4-mercapto-4-metil-2-pentanona, furfuriltiol, 2-metil-3-furantiol, acetato de 3-mercaptohexilo y -mercaptohexanol. Se han ensayado, a lo largo del trabajo realizado, cuatro aproximaciones para intentar esta determinación: 1. Extracción selectiva mediante la formación de complejos específicos con p-hidroximercuribenzoato empleando una detección por espectrometría de masas. 2. Optimización de un método para su detección específica con un detector específico de azufre: detector fotométrico de llama pulsada. 3. Acoplamiento de extracción en fase sólida con microextracción en fase sólida mediante el uso de disolventes no volátiles. 4. Derivatización de tioles en vino con 4-vinilpiridina con posterior aislamiento de los derivados con extracción en fase sólida y detección por espectrometría de masas. En la segunda parte del trabajo se realizó la caracterización química del aroma de vinos de alta calidad: 6 vinos de la variedad Merlot y 6 vinos de la variedad Chardonnay. Para ello en primer lugar se determinó la naturaleza de los odorantes activos y en segundo lugar se establecieron las relaciones existentes entre los descriptores sensoriales que permiten la diferenciación entre vinos y la composición aromática de los mismos. La estrategia planteada se basa en realizar un análisis sensorial descriptivo cuantitativo de los vinos seleccionados, lo cual nos proporciona los descriptores discriminantes entre los vinos. A continuación se realiza en análisis olfatométrico a partir de extractos representativos de los vinos. Tras el análisis cuantitativo de los odorantes del vino se establece la jerarquización aromática para determinar los odorantes discriminantes , los odorantes constitutivos y los irrelevantes. Se realiza el análisis multivariante de los vinos y se establecen una serie de hipótesis que son verificadas mediante ensayos de adición. Siguiendo este protocolo se estudiaron 6 vinos de Merlot y 6 vinos de Chardonnay de anta calidad procedentes de distintas partes del mundo. Se realizaron ensayos de reconstitución del aroma de uno de los vinos de Chardonnay y de un vino rosado de Garnacha con bastante éxito

Autor: SALGADO PETINAL CARMEN.
Año: 2006.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA [www.usc.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: Se realiza un estudio de aplicación de la técnica de microectracción en fase sólida (SPME) para la extracción y determinación de diversidad de compuestos, considerados contaminantes medioambientales, aplicado a matrices tanto acuosas como sólidas. Los compuestos estudiados pertenecen a los siguientes grupos: - Fármacos inhibidores selectivos de la captación de serotonina - Compuestos sulforados volátiles: alquiltioles y ácido sulfhídrico - Fragancias sintéticas: MUSK policíclicas y nitro MUSK - Retardantes de llama : Bifenilos polibromados(PBBs) y Difeniléteres (PBDEs) - Ácidos carboxílicos perfluorados (PFCAs) En todos los estudios se han optimizado las condiciones de SPME combinada, en algunas matrices complejas, con otras técnicas de extracción con disolvente ( MAE, US y ASE). Para la determinación final de los compuestos extraídos se emplo la cromatografía de gases con detector de captura electrónica o acoplada con espectrometría de masas. Todos los métodos analíticos propuestos en la memoria presentan una buena selectividad, permitiendo llegar a límites de detección del orden de los ng/L. Además, esta metodología muestramayor sencillez que otras técnicas de análisis desarrolladas para la determinación de esos mismos compuestos.

Autor: MACIA I PUIG MARIA ALBA.
Año: 2006.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI [www.urv.cat].
Centro de lectura: FACULTAT DE QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAT DE QUIMICA. URV.

Resumen: La Tesi Doctoral que porta per títol, âDiferents estratègies per augmentar la sensibilitat en electroforesi capil·lar. Aplicació a la determinació de fàrmacs antiinflamatorisâ, sâha basat en el desenvolupament de diferents estratègies per a disminuir els límits de detecció (LODs) de l'electroforesi capil·lar (CE) a la determinació de fàrmacs antiinflamatoris. Les estratègies desenvolupades sâhan basat en la injecció d'un gran volum de mostra en el capil·lar mitjançant l'aplicació de tècniques de preconcentració tant electroforètiques com cromatogràfiques, i en l'ús de l'espectrometria de masses (MS) com a sistema de detecció per augmentar la capacitat de detecció dels analits. La present Tesi Doctoral sâha centrat en la determinació de fàrmacs antiinflamatoris no esteroïdals (NSAIDs) en el medi ambient aquàtic a baixos nivells de concentració. L'interès a la determinació d'aquests ha augmentat molt darrerament degut al seu elevat consum tant en espècies humanes com en animals. Aquests fàrmacs arriben a les estacions de tractament d'aigües residuals (EDAR) a través de diferents procedències, i posteriorment aquests poden entrar en el medi ambient aquàtic degut a la seva gran estabilitat. Diferents estudis han demostrat la determinació d'aquests fàrmacs a nivells de baixos ng·L-1 en les aigües superficials. Aquests estudis sâhan realitzat principalment tant per cromatografia de gasos (GC) com per cromatografia de líquids (HPLC) emprant l'MS com a sistema de detecció. L'CE també ha estat emprada per la determinació d'aquests fàrmacs, però la seva aplicació principal ha estat en l'anàlisi de mostres biològiques. Tot i els grans avantatges que proporciona la tècnica d'CE, aquesta presenta una baixa sensibilitat que limita la determinació d'analits a baixos nivells de concentració. Aquest fet és degut com a conseqüència del petit volum de mostra que es pot injectar en el capil·lar i del petit camí òptic que tenen els capil·lars que sutilitzen. Amb l'objectiu de millorar la sensibilitat de la tècnica i d'ampliar la seva aplicabilitat en altres camps, com el mediambiental, el desenvolupament de diferents estratègies per a disminuir els LODs són molt importants i són objecte d'estudi de diferents grups d'investigació. En la present Tesi Doctoral sâhan aplicat i comparat diferents tècniques de preconcentració electroforètiques per la determinació d'aquests fàrmacs en els diferents modes electroforètics, com l'electroforesi capil·lar per zones (CZE), la cromatografia capil·lar de microemulsió electrocinètica (MEEKC) i la cromatografia capil·lar micel·lar electrocinètica (MEKC). La majoria d'aquestes tècniques sâhan basat en la supressió del flux electroosmòtic (EOF) per eliminar la matriu de la mostra del capil·lar desprès d'haver injectat un gran volum de mostra. L'avantatge d'addicionar un supressor de l'EOF al medi electrolític és que aplicant un sol voltatge negatiu es duu consecutivament la preconcentració i la separació electroforètica. L'aplicació d'una tècnica de preconcentració cromatogràfica, basada en l'acoblament in-line entre l'extracció en fase sòlida (SPE) i l'CE, també sâha aplicat a la determinació de NSAIDs en una mostra d'aigua. El gran potencial de les tècniques de preconcentració tant electroforètiques com cromatogràfiques és que ha permès la determinació d'aquests fàrmacs a nivells de ng·L-1. Aquests resultats sâhan obtingut emprant prèviament la tècnica d'SPE off-line per preconcentrar els analits i netejar la matriu de la mostra. Una altra estratègia emprada per la determinació de NSAIDs en el medi ambient aquàtic ha estat l'ús de l'MS com a sistema de detecció. Aquest acoblament permet la confirmació i la identificació dels diferents analits que puguin estar presents en una mostra. D'aquesta manera, ha estat possible la determinació dels fàrmacs en estudi en aigües superficials i la identificació d'aquests en les aigües procedents de diferents estacions EDAR. En aquest c 8 as sâhan 32c emprat com a tècniques de pretractament la tècnica d'SPE off-line, i la combinació de l'extracció líquid-líquid (LLE) i l'SPE off-line, respectivament.

Autor: SÁNCHEZ PRADO LUCÍA.
Año: 2006.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA [www.usc.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICA.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN Y ANÁLISIS ALIMENTARIO.

Resumen: El objetivo principal del trabajo desarrollado en esta tesis es demostrar que la Microextracción en Fase Sólida (SPME) puede ser aplicada para llevar a cabo estudios de fotodegradación de diversos contaminantes orgánicos; pero no sólo como técnica de extracción y concentración, sino también como soporte o matriz en la que se producirá la fotodegradación. En la fotodegradación en fibra, foto-SPME, la extracción es una etapa previa a la irradiación, al contrario de lo que sucede en el resto de procedimientos existentes aplicados al estudio del comportamiento fotoquímico de diversos contaminantes orgánicos. Se ha estudiado la fotodegradación de diversas clases de contaminantes orgánicos medioambientales "en fibra" (foto-SPME) y en agua. La SPME es una técnica muy apropiada que simplifica los estudios fotoquímicos de distintos compuestos orgánicos. En la foto-SPME, la fibra de SPME sirve como soporte para la fotodegradación, mientras que en la fotodegradación acuosa sólo se emplea como técnica de extracción. En resumen, la foto-SPME permite: -Trazar las curvas cinéticas de fotodegradación de los contaminantes estudiados; -Calcular los parámetros cinéticos, constantes de velocidad y tiempos de vida media; -Establecer los mecanismos de fotodegradación en función de los fotoproductos detectados; y -Trazar el comportamiento fotoquímico de estos fotoproductos, puesto que estos a su vez son susceptibles de fotodegradarse. Se han evaluado distintos factores que pueden afectar a la fotodegradación en fibra como la potencia de la radiación, la longitud de onda de la misma, la concentración inicial de contaminante o la presencia de materia orgánica disuelta. Para verificar si el comportamiento fotoquímico en la fibra de SPME reproduce lo que sucede en el medioambiente, también se ha realizado la fotodegradación en agua de todos los compuestos estudiados, empleando la SPME como técnica de extracción después de la irradiación; y los resultados obtenidos se han comparado con los obtenidos mediante foto-SPME. De este modo, se ha establecido el comportamiento fotoquímico de distintos pesticidas, fragancias sintéticas, retardantes de llama y de un bactericida. Todos ellos se fotodegradan de un modo prácticamente completo en el tiempo estudiado. Se han detectado mediante foto-SPME, en total, ciento cincuenta y nueve fotoproductos de todos los contaminantes estudiados; mientras que mediante fotodegradación en agua sólo se ha observado la formación de noventa y cuatro de ellos. La aplicación práctica en el mundo real de la foto-SPME se ha plasmado en el estudio del comportamiento fotoquímico del bactericida triclosán en muestras de agua residual reales, contaminadas con este compuesto, sin adición del mismo. También se ha demostrado la validez de la foto-SPME para estudiar la fotodegradación empleando como fuente de radiación un simulador de radiación solar y luz solar natural. Al emplear la fotodegradación "en-fibra" se evita el uso de disolventes orgánicos, habitualmente perjudiciales para el medioambiente y para el hombre. Puesto que la fotodegradación tiene lugar en la propia fibra de SPME y los fotoproductos se generan "in-situ", no son necesarias etapas de extracción con posterioridad a la irradiación. Precisamente debido a que no son necesarias estas etapas, se trata de un procedimiento sencillo, rápido y por el que, además, se minimiza la posible "pérdida" de fotoproductos en las etapas de extracción. Por otro lado, debido al elevado factor de concentración de la SPME, los estudios de fotodegradación se pueden realizar a niveles de concentración no tan elevados como requieren los métodos "clásicos" o habituales, y que son más representativos de los niveles encontrados en el medioambiente.

Autor: LARRETA ASTOLA JOANA.
Año: 2006.
Universidad: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACUTLAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA.

Autor: MORET SOLÀ SÒNIA.
Año: 2006.
Universidad: GIRONA [www.udg.es].
Centro de lectura: UNIVERSITAT DE GIRONA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE GIRONA.

Resumen: El control de herbicidas y otros analitos orgánicos presentes en el medio ambiente constituye una práctica habitual en los laboratorios desde la implantación de las legislaciones que ponen límites a las concentraciones de estas sustancias. Por esta razón, es necesario el desarollo de nuevas metodologías analíticas para el control de compuestos orgánicos en el medio. Frecuentemente, estos analitos se encuentran a niveles traza tanto en aguas como en suelos, conjuntamente con un alto contenido de sustancias húmicas y fúlvicas. Uno de los retos en este tipo de análisis es el tratamiento de la muestra (extracción, concentración y "clean-up" de los analitos para una cuantificación correcta). Estos procesos tienen que estar complementados con el uso de técnicas cromatográficas que permitan la medida final de los analitos. La investigación que se presenta en esta tesis se centra en el desarrollo de un método para la determinación de 2,4-D, MCPA y sus metabolitos fenólicos y de otro para la determinación de cafeína. El primero de los procedimientos desarrollados se ha aplicado al seguimiento de los herbicidas y sus metabolitos fenólicos en suelos de un campo de golf, mientras que el segundo se ha utilizado para la determinación de cafeína en aguas naturales y, posteriormente, en aguas residuales. La cromatografía líquida de par iónico es la técnica utilizada en la determinación de herbicidas acídicos y compuestos clorofenólicos ya que no se requiere una derivatización de los analitos previa al análisis cromatográfico. En el Capítulo 2 se desarrolla un método de cromatografía líquida de par iónico (IP-HPLC) para la determinación conjunta, en aguas y suelos de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), ácido 4-cloro-2-metilfenoxiacético (MCPA) y sus principales metabolitos clorofenólicos, 2-metilfenol (2-MP), 2-clorofenol (2-CP), 4-clorofenol (4-CP), 4-cloro-2-metilfenol (4-C-2-MP) y 2,4-diclorofenol (2,4-DCP). El método desarrollado para el análisis conjunto de los siete analitos se basa en la utilización de una fase móvil de acetonitrilo:agua (30:70) con 10 mM de hidróxido de tetrabutilamonio (TBA-OH) a pH=7.2, fijando la longitud de onda de trabajo a 230 nm. La separación de los analitos se consigui en un tiempo inferior a 22 minutos y los resultados obtenidos muestran que el método presenta una linealidad adecuada. Para la determinación de cafeína (Capítulo 6) se utilitza la cromatografía líquida de fase inversa con una fase móvil de acetonitrilo:agua (20:80), fijando como longitud de onda de trabajo 272 nm. En la mayoría de los métodos de determinación de contaminantes orgánicos es necesaria la introducción de etapas de preconcentración y "clean-up" previas a la deteccuón, ya que estos se encuentran a niveles traza y las técnicas cromatográficas no son suficientemente sensibles para detectar estos niveles. La extracción en fase sólida es la técnica más aplicada por su simplicidad y sencillez, y por el gran número de fases sólidas disponibles. En el Capítulo 3 se evalúan diferentes fases sólidas para el enriquecimiento y "clean-up" de los analitos, conjuntamente con un desarrollo de la etapa de extracción de los analitos del suelo. El adsorbente SDB-1 es la mejor opción para la concentración de los siete analitos cuando son extraídos de las muestras de suelo con hidróxido sódico 0.01 M. Para la cafeïna (Capítulo 6), al ser un compuesto neutro, se ha realizado la concentración y "clean-up" con un adsorbente de sñilice con cadenas C18 (ACCUBOND), obteniéndose recuperaciones cuantitativas trabajando con volúmenes de muestra de 100 mL, a niveles de 0.1 mg L-1, flujos de carga de 25 mL min-1 y eluciones con 2 mL de metanol. Paralelamente a la extracción en fase sólida, en el Capítulo 4 se estudia una alternativa que tiene como objetivo mejorar las condiciones de concentración y "clean-up" para 2,4-D, MCPA y sus metabolitos fenólicos. Se ha optado por el desarrollo de un sistema de membrana líquida soportada acoplada al sistema IP-HPLC. Para los estudios mediante SLM se han utilizado dos tipos de geometría: membran 8 as lamin 82f ares y fibra hueca ("hollow fiber"). La técnica de preconcentración de mambrana líquida en geometría tubular se ha comparado con la técnica de extracción en fase sólida (SPE). En esta comparación se observa que ambas proporcionan un elevado nivel de "clean-up" en los extracots de suelos, un alto factor de concentración y una eficiente separación de los analitos en relación a la amteria orgánica presente en las muestra de suelos. No obstante, el sistema de membrana líquida aporta mejores resultados globales ya que la fase receptora es un medio acuoso totalmente compatible con el método de detección por IP-HPLC y todos los analitos pueden ser extraídos y analizados en una única fracción. Finalmente, en el Capítulo 5 la metodología analítica desarrollada se ha aplicado al estudio de los procesos de adsorción y transporte de 2,4-D, MCPA y sus metabolitos fenólicos en suelos. En el laboratorio, el estudio de la adsorción se ha ealizado mediante experimentos en "batch" que han permitido determinar las correspondientes isotermas de adsorción, y ensayos en columna. Con el objetivo de estudiar la dinámica de los herbicidas en condiciones reales, se ha llevado a cabo un experimento de campo. Se realizó una aplicación controlada del herbicida comercial Bi-Hedonal, que contiene como ingredientes activos 2,4-D y MCPA y simúltaneamente de un trazador, en una parcela de 100 m2 situada en el campo de golf Serres de Pals, irrigada con agua regenerada.

Autor: PERÉ TREPAT EMMA.
Año: 2006.
Universidad: BARCELONA [www.ub.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUÍMICAS.
Centro de realización: FACULTAT DE QUÍMIQUES, UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: En esta Tesis se aplica Quimiometria a dos de las etapas de la determinación analítica de contaminantes en el medio ambiente. Se ha aplicado Quimiometria al análisis de tablas de datos ambientales, donde se ha estudiado y analizado sistemáticamente mediante la aplicación de diversos métodos quimiométricos, la presencia y distribución de contaminantes en el medio ambiente, ya sean compuestos orgánicos o metales, obtenidos en estudios de seguimiento (monitoring) y control de diferentes compartimentos medioambientales (atmósfera, agua, sedimentos, peces…). Y de donde se deducen las fuentes de contaminación más importantes, tanto de tipo natural como de tipo antropogénico, y tanto de tipo puntual como de tipo difuso. También se deducen su distribución geográfica y/o su evolución temporal. Todo esto con la finalidad de contribuir a la evaluación general de la calidad ambiental existente en la actualidad en las diferentes áreas geográficas bajo estudio. Al mismo tiempo también se profundiza en el conocimiento, desarrollo y uso generalizado de lso diferentes métodos quimiométricos propuestos. Una segunda aplicación de la Quimiometria ha sido el análisis de datos cromatográficos y concretamente, se ha estudiado y resuelto los problemas de coelución cromatográfica en los análisis de muestras complejas mediante técnicas quimiométrica. Tradicionalmente la determinación de bioacidas se lleva a cabo por cromatografía líquida con detección por diodos en serie (LC-DAD) o bien por cromatografía líquida con detección por espectrometría de masas (LC-MS). En este sentido, en esta Tesis se proponen procedimientos de resolución quimiométrica en aquellos casos donde las posibles estrategias experimentales tradicionales presentan problemas relacionados con la coelución de compuestos de interés, el solapamiento de sus espectros o fragmentación MS en los iones comunes o similares; o también cuando se quieren optimizar los parámetros de tiempo y/o costes de las determinaciones cromatográficas. Se ha aplicado el procedimiento de Resolución Multivariante de Curvas por mínimos cuadrados alternados (MCR-ALS), en la resolución, identificación y cuantificación de compuestos fuertemente coeluidos cromatográficamente en muestras medioambientales y en presencia de fuertes interferencias y efectos matriz. Se ha utilizado el procedimiento MCR-ALS en el análisis cromatográfico con columnas cortas (cromatografía rápida), las cuales proporcionan eluciones más rápidas de los compuestos de interés y por tanto un ahorro considerable de tiempo y reactivos, pero también desgraciadamente coeluciones más fuertes.

Autor: MARTÍNEZ CAÑAS MANUEL ALEJANDRO.
Año: 2006.
Universidad: EXTREMADURA [www.unex.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE EXTREMADURA.

Resumen: El presente Trabajo de Investigación tiene como objeto el estudio analítico de algunos antibióticos quinolónicos y fluroquinólonicos de uso en medicina y veterinaria, y el desarrollo de nuevos métodos de determinación analítica de los mismos. Las técnicas de trabajo utilizadas han sido tanto electroanalíticas como de luminiscencia molecular y HPLC. Las aplicaciones posteriores se han hecho en fluidos biológicos, preparaciones farmacéuticas y tejidos animales. Se han utilizado distintas estrategias químicas (medios micelares) y quimiométricas (técnicas de derivadas, métodos de calibración multivariante) para el establecimiento de los métodos de análisis. Entre estos últimos podemos citar métodos de primer orden (regresión por mínimos cuadrados parciales, regresión de componentes principales y regresión clásica por mínimos cuadrados), segundo orden (PARAFAC, N-PLS, Unfolded-PLS) y métodos no lineales (Redes Neuronales Artificiales), así como métodos de optimización y diseño de experimentos. Los métodos desarrollados presentan un indudable interés desde le punto de vista de su aplicación agroalimentaria y farmacologíca, al permitir nuevos procedimientos de análisis sencillos y sensibles.

Autor: SANCHEZ MARTINEZ MARIA LOURDES.
Año: 2006.
Universidad: CÓRDOBA [www.uco.es].
Centro de lectura: CAMPUS DE RABANALES.
Centro de realización: CAMPUS DE RABANALES.

Resumen: En esta Memoria se ha demostrado la utilidad de los fluoróforos de larga longitud de onda y/o el uso de reactivos inmunoquímicos en diversas metodologías determinativas. Se ha propuesto dos métodos analíticos basados en cromatografía de inmunoafinidad con detección fluorimétrica indirecta para la determinación de alquibencenosulfonatos de cadena lineal (LASs) en muestras ambientales. Se ha comparado las características de las medidas de fluorescencia a larga longitud de onda con las proporcionadas por un fluoróforo convencional. Se ha desarrollado tres métodos basados en inmunoensayo por polarización de la fluorescencia (FPIA) a larga longitud de onda para la determinación de haptenos de bajo peso molecular, como la amikacina y los tensioactivos LASs, así como para la determinación de macromoléculas como la gliadinas. Las innovaciones metodológicas más relevantes conseguidas, las cuales suponen una ventaja con respecto al FPIA convencional, han sido: 1, Desarrollo de tiras de inmunoreactivo mediante la tecnología de reactivos secos y medidas de polarización de la lfuorescencia en estado sólido, aplicada a la determinación de amikacina en muestras de suero. 2,- Marcaje de gliadinas con un complejo de ruteniol(II) para el desarrollo de tiras de un método FPIA a larga longitud de onda para el análisis de alimentos sin gluten. 3,- Utilidad de las medidas dinámicas de FPIA a larga longitud de onda para la determinación de LASs en muestras ambientales. Se han propuesto tres métodos cinéticos de respuesta rápida mediante medidas de luminiscencia a larga longitud de onda. Así, se ha ampliado la utilidad del colorante verde de indocianina como reactivo analítico para el desarrollo de un método cinético para la determinación fluorimétrica de amikacina a larga longitud de onda en muestras de suero. Se ha descrito un fluorinmunoensayo homogéneo, utilizando un marcador de terbio, para la determinación de gliadinas en muestras de alimentos. Por último, se ha puesto de manifiesto la utilidad de las medidas dinámicas de polarización de la fluorescencia para la determinación de LASs mediante el método FPIA a larga longitud de onda anteriormente mencionado. La aplicación de todos los métodos desarrollados en otras investigaciones al análisis de muestras reales ha proporcionado resultados satisfactorios, lo que demuestra su utilidad práctica.

Autor: EXPOSITO CIMADEVILLA YOANA.
Año: 2006.
Universidad: OVIEDO [www.uniovi.es].
Centro de lectura: FACULTAD DE QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA DE LA UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Resumen: En esta tesis se ha realizado un estudio en produndidad sobre el comportamiento hidrofóbico de las proteínas y como influyen en la calidad de la sidra natural asturiana y en sus propiedades espumantes. Para ello, se ha puesto a punto un método de análisis de proteínas según sus características hidrofóbicas, por cromatografía líquida en fase reversa (RP-HPLC), empleando una columna C18 (250 x 4.6 mm, 5 micras y 300 anstrons) y utilizando como fase móvil una mezcla de acetonitrilo, ácido trifluoroacético y agua en modo gradiente. Antes de llevar a cabo el análisis cromatográfico, fue necesario estudiar un procedimiento de limpieza y concentración, que permitiera aislar el material proteico a los niveles adecuados para su detección. Para ello, se estudiaron diferentes tratamientos de muestra: Precipitación, Intercambio iónico, Ultrafiltración, Diálisis y Filtración en Gel. De todos ellos, la Filtración en Gel, se consideró el más adecuado, por ser el procedimiento capaz de concentrar y eliminar interferentes al mismo tiempo, con rapidez y con una mayor recuperación del material proteico. Además se comprobó que este tratamiento cumplía con los niveles de precisión adecuados para caracterizar el perfil proteíco de una sidra natural. La electroforesis clásica, confirmó la presencia de proteínas una vez finalizado su tratamiento y nos mostró bandas de proteínas con pesos moleculares comprendidos entre 20 y 97 KDa. El método optimado, se ha aplicado al análisis de sidras naturales asturianas fermentadas de modo tradicional y a sidras espumosas elaboradas por el método Champenoise. Sus propiedades espumantes se han evaluado, teniendo en cuenta las características de las proteínas presentes y mediante la determinación de sus parámetros espumantes (la altura máxima, HM: la altura estable, HS y la estabilidad de la espuma, TS). En las sidras naturales asturianas, el perfil de proteínas obtenido por cromatografía, junto con la aplicación de varias técnicas quimiométricas (ANOVA, PCA) a los resultados obtenidos, ha permitido, la diferenciación de las sidras en función del atributo sensorial espalme, de sus propiedades espumantes y de la tecnología puesta a punto en el proceso de elaboración. En el intento de determinar qué tipo de proteínas están presentes en la espuma y por tanto determinan su formación y características, se ha llevado a cabo la extracción de la espuma sobre las sidras asturianas, separando así la sidra en dos fracciones: espuma y el resto, denominado base de la sidra. En las sidras fermentadas por el método Champenoise, se ha realizado una comparación del contenido y características de sus proteínas, y de las propiedades de espuma en muestras fermentadas en dos años diferentes e inoculadas con dos tipos de levaduras. Con los datos obtenidos, se comprobó que la aplicación de técnicas estadísticas multivariantes permiten la clasificación de las muestras a través de su perfil cromatográfico. La utilización de la técnica de correlaciones canónicas sobre los resultados obtenidos, ha permitido establecer correlaciones existentes entre los parámetros de espuma y las características de las proteínas encontradas en las sidras estudiadas. De los resultados obtenidos, empleando la cromatografía líquida como método de análisis y la filtración en gel como técnica de limpieza y concentración de la muestra, se ha llegado a las siguientes conclusiones: - Hay mayor cantidad de proteínas en sidras naturales de buena calidad. - Con solo dos proteínas, una de hidrofobicidad baja y otra de hidrofobicidad media, se clasifican las sidras según su calidad. - En la elaboración de sidras naturales de forma industrial, hay mayor contenido de proteínas y en concreto de las más hidrofóbicas. - Las proteínas de hidrofobicidad media-alta, son las que mayor influencia ejercen en los parámetros de espuma. - Las proteínas que se extraen a la espuma son 8 las más 389 hidrofóbicas. - El perfil proteico puede distinguir entre sidras fabricadas con manzana autóctona y foránea, además de diferenciar el tipo de levadura empleada en sidras de segunda fermentación.