BACTERIAL METABOLISM

Autor: JUIZ RÍO SANDRA MARIA.
Jahr: 2005.
Universität: SANTIAGO DE COMPOSTELA [www.usc.es].
Ort der Lesung: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Ort der Vorbereitung: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Inhaltsangabe: Photobacterium damselae ist ein gamma proteobacteria aus der Familie Vibrionaceae und umfasst derzeit zwei Unterarten: P.damselae subsp.piscicida (Infektionserreger der pasteurelosis in Fisch) und P.damselae subsp.damselae. Zu den Zielen dieser Arbeit sind wir genetisch charakterisieren einige der Faktoren, die für die Virulenz des P.damselae subsp.piscicida, wobei ein besonderer Schwerpunkt auf der Beschaffung von Eisen. Wir haben auch analysiert genetischen Vielfalt zwischen Stämmen dieser Unterart, und einige der genetischen Unterschiede zwischen den Stämmen in den beiden Unterarten von P.damselae. Als Ausgangspunkt haben wir festgestellt, dass das erste Gen kodiert ein Protein, Pelz (Eisen Aufnahme Regulierungsbehörde), die gezeigt hat Sequenzhomologie von 99,3% zwischen den beiden Unterarten von P.damselae, unterschiedliche Proteine aus einem einzigen Aminosäure in der 148 besteht . Außerdem haben wir gezeigt, dass Pelz wirkt auf P.damselae als transkriptionelle Regulierungsbehörde abhängig von der Konzentration von Eisen in der Mitte. Außerdem wurde identifiziert und charakterisiert ein System für die Aufzeichnung hemo Gruppen als eine Quelle von Eisen in den beiden Unterarten von P.damselae unterstützt, der sich aus Proteinen HutA, TonBExbBD, HutBCD und HutWXZ. Dieses System zeigte hohe Ähnlichkeit zu den Proteinen der Ernte Systeme hemo anderen Mitgliedern der Familie der Vibrionaceae, und in der Nähe zu 100% Identität zwischen den beiden Unterarten. Allerdings haben wir festgestellt, Anzeichen von intraspecific microevolución in diesem System: das Gen Rezeptor äußeren Membran hutA unterbrochen stellen eine pseudogen in vielen der Stämme piscicida. Neugierig, die nur Stämme von subsp.piscida besitzen das Gen hutA intakt ein Potenzial von klonale Isolate aus Japan. Das System Einzugsgebiet hemo wird in vivo- während Infektion P.damselae subsp.piscicida im Steinbutt, wie sich aus der Analyse der Präsenz der mRNA von operon tonBexbBexbBexbBhutBCD in Proben von infizierten Fisch. Es hat sich auch gezeigt, dass es keine redundanten Systemen zu erfassen hemo, da die Inaktivierung von hutCD geht es um die Unmöglichkeit der Nutzung hemo Gruppen als die einzige Quelle von Eisen. Anwendung der Technik Subtraktive Hybridisierung, haben wir 21 Regionen des Genoms eines bestimmten Stammes von piscicida, die nicht vorhanden waren in einem Stamm avirulenta. Durch das Studium der Verteilung von diesen Regionen der DNA in der 28 Stämme P.damselae subsp.piscicida mit unterschiedlichem Hintergrund und geographische Isolation von verschiedenen Hosts, wurde festgestellt, dass es sich um eine sehr heterogene Mikroorganismen aus der genetischen Sicht. Wir haben keine Fälle, in zwei Stämme zeigt genau das gleiche Muster der Verteilung der 21 Regionen analysiert. Es wurden auch zum ersten Mal in dieser Erreger Gene codieren transposasas. Diese Gene finden sich in mehrere Kopien, in das Genom, bilden ein Muster, dass sich in jedem Stamm analysiert. Darüber hinaus haben wir festgestellt, in einem einzigen Stamm der piscicida Gensequenzen ähnlich wie die mobilen Element SXT in V.cholerae. Dieses Element groß (ca. 100 KB) ist Vertreter einer Familie von Transposons conjugativos und integrativos führt, die Gene für die Resistenz gegen mehrere Antibiotika. Frühere Studien hatten gezeigt, dass die einzelnen Subspezies. In P.damselae erzeugt eine sideróforo anders. Die Anwendung dela Subtraktive Hybridisierung ermöglichte die Isolierung und Charakterisierung einer Region des Genoms von ca.. 22 KB im subsp.piscicida, die ein Gen operon durch Eisen, einschließlich einer etwaigen Membran Rezeptor für sideróforos und 2 pé 8 ptido si 6f4 ntetasas nicht ribosómicas (Irp1 und Irp2) hohem Molekulargewicht. Diese Proteine erscheinen, in Bezug auf die Begrenzung Eisen Vorbereitungen Membranen insgesamt Stämme von subsp.piscicida, die Abwesenheit von den Strapazen des subsp.damselae. Die Inaktivierung des Gens irp1 vor Einfügung dass P.damselae subsp.piscicida nicht sideróforos und nicht in der Lage ist zu wachsen encondiciones Beschränkung Eisen. Darüber hinaus, die Mutation des Gens irp1 führte zu einer Erhöhung der LD50 in mindestens zwei Befehl Größenordnung in Bezug auf die elterliche Belastung, die belegen, dass das System vermittelten Eisen Aufnahme durch sideróforos ist ein Faktor für die Virulenz des P.damselae Subspezies . Piscicida in Fisch. Die Analyse der Präsenz dieser Gene in einer Sammlung von Stämmen zeigten, dass sich die beiden Unterarten sind einzigartig auf bestimmte Stämme von subsp.piscicida. Interessant ist, dass die Sequenzen aminoacídicas des Proteins kodiert von diesem operon zeigen eine hohe Ähnlichkeit mit der Proteinsynthese sideróforo yersiniabactinaproducido Stämme von Yersinia Spp, deren Gene sind nach wie vor eine Pathogenität Insel. Analyse der funktionellen Domänen von Proteinen Irp1 und Irp2 hat Beweise dafür, dass die sideróforo von P.damselae subsp.piscicida kann strukturell verwandten yersiniabactina.

Autor: MORÁN ZORZANO MARÍA TERESA.
Jahr: 2005.
Universität: PÚBLICA DE NAVARRA [www.unavarra.es].
Ort der Lesung: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Ort der Vorbereitung: UNIVERSIDAD PÚBLICA DE NAVARRA.

Inhaltsangabe: Stärke ist die grundsätzliche Art und Weise der Speicherung von Energie in vielen Pflanzenarten. Es ist ein wesentliches Element in der Ernährung von Mensch und als Rohstoff in vielen industriellen Prozessen. Die Glykogen wiederum ist die wichtigste Form der Energiespeicherung in vielen bakteriellen Spezies. Wie der Stärke ist ein homopolisacárido von Glucose-Molekülen. Beide Bakterien und Pflanzen wurde akzeptiert, dass die traditionell ADPglucosa pirofosforilasas ist das einzige Enzym produzieren ADPglucosa (ADPG), die für die Biosynthese von Stärke und Glykogen. Aber unser Team hat angesammelten Beweise für die Existenz von anderen wichtigen Quellen der ADPG Anlage. Das ist der Grund, warum ich in diesem Papier zu untersuchen, die mögliche Existenz von zusätzlichen Quellen ADPG in der Herstellung von Bakterien. Zu diesem Zweck zeichnet er Stämme von Escherichia coli und Salmonella enterica Mutanten in der Operon glgCAP deren Produkte sind für die Synthese von ADPG, deren Nutzung für Glykogen-Synthese und Abbau dieser poliglucano. Diese Arbeit, die in Kapitel 1, präsentiert Beweise dafür vor, dass der Enterobacteriaceae besitzen mehrere wichtige Quellen für ADPG. Angesichts der Tatsache, dass bakterielle Akkumulation von Glykogen kann nicht nur durch die Synthese von ADPG, sondern auch für seine Hydrolyse, ich weitergegangen zu charakterisieren, die rechtlichen Aspekte des ADPglucosa pirofosfatasa (AspP) aus Escherichia coli. Erste Studien, die in Kapitel 2 zeigt, dass kleine Steigerungen der Aktivität dieses Enzyms führt zu einer Reduzierung der Inhalt von Glykogen, was darauf hinweist, dass AspP geregelt ist, es sei denn, es würde sammeln Glykogen in das Bakterium. Nachfolgende Studien zeigten, dass AspP ist stark regulierten sowohl von makromolekularen Crowding-Effekte und Mechanismen von Membran-induzierte Translokation von Substanzen, die in Bakterienkulturen gesättigt. In Kapitel 3 beschreibt die Identifizierung und Charakterisierung des Proteins entspricht AspP bakterielle Anlage. In einem ersten Schritt zu untersuchen, ihre mögliche Beteiligung an der Steuerung der ADPG Ebenen im Zusammenhang mit der Synthese von Stärke, produziert und caractericé Pflanzen produzieren AspP. Die Blätter dieser Pflanzen zeigten eine signifikante Reduzierung der Ebenen der beiden ADPG als Stärke, was darauf hinweist, dass die Pflanze AspP hydrolytischen katalysiert die Aufschlüsselung der einen Pool von ADPG im Zusammenhang mit der Synthese von Stärke. Schließlich ist auf die Tatsache zurückzuführen, dass unsere Gruppe vor kurzem gezeigt, zum ersten Mal die Existenz eines Mechanismus für die Erfassung endocítica Saccharose in heterotrophen Zellen, habe ich die Möglichkeit untersucht, dass dieser Mechanismus ist direkt an der Steuerung des Niveaus der ADPG und Stärke in diesen Zellen . Zu diesem Zweck, wie sie in Kapitel 4, ich verglich die Preise der Akkumulation dieser Stoffe in die Zellen kultiviert sycamora in Anwesenheit und Abwesenheit von Inhibitoren der Endozytose. Die Anwesenheit von Inhibitoren führt zu verminderter Stärke, Saccharose und ADPG, bestätigt, dass die meisten der Saccharose apoplástica ist Abholung durch Endozytose, die konvertiert werden sollen in ADPG-almidón.

Autor: JIMÉNEZ ZARCO JOSÉ IGNACIO.
Jahr: 2005.
Universität: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Ort der Vorbereitung: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Inhaltsangabe: Der Stamm Pseudomonas putida KT2440 Mikroorganismus ist ein Modell für die Prozesse in Bezug auf die biologische Abbaubarkeit von Schadstoffen in der Umwelt, in Ergänzung zu anderen Anwendungen der Biotechnologie. In dieser Arbeit hat eine detaillierte Studie über die beteiligten Gene und die Abbauwege von aromatischen Verbindungen, die in das Genom der Stamm KT2440 ermöglichen catabólico bestimmen, die gesamte Potenzial des Bakteriums vor dieser Art von Verbindungen. In diesem Zusammenhang haben wir festgestellt, fünf Routen zentralen Abbau, für die Metaboliten protocatecuato (pca Gene), Catechol (Gene Katze), Phenylacetat (Gene pha), homogentisato (Gene hmg) und galato (Gene gal). Darüber hinaus haben wir festgestellt, dass Gene kodieren Routen peripheren Abbau von p-hydroxybenzoat, Benzoat Verbindungen fenilpropenopides, quinato, feniletilamina, fenilalcanoatos, fenilacetaldehído, Phenylalanin und Tyrosin. Ein weiteres Ergebnis der Analyse war es, einen neuen Weg der Zerstörung von Nikotinsäure (Gene nic), eine aromatische Verbindungen N-heterociclo, die in ihrer Zerstörung erzeugt Metaboliten mit hoher biologischer Aktivität in der Synthese von Pharmazeutika. Die molekulare Charakterisierung von Genen nic führte zur Identifizierung neuer Enzyme, die Mineralisierung. In einer ersten Phase beinhaltet eine nicotinato Hydroxylase (NicAB), eine abhängige Hydroxylase Molybdän, die zuvor noch nicht charakterisiert, und das verwandelt die ácidonicotínico Säure 6-hidroxinicotínico welches in der Synthese von Insektiziden. In einer zweiten Stufe, einem 6-Hydroxylase hidroxinicotinato (NicC) wandelt Säure 6-hidroxinicotínico Vermittler in den mittel-2,5-dihidroxipiridina, welches in der Synthese von Säure aminolevulínico Vorläufer für die Synthese von Anti-Tumor-Verbindungen. Die 2,5-dihidroxipiridina leidet der Verlust der aromatischen durch das Handeln der NicX, das ist das erste Mitglied einer neuen Familie von dioxigenasas Zusammenhang aminopeptidasas. Diese Reaktion erzeugt acid N-formilmaleámico, die sich in Säure maleámico durch das Enzym NicD, das ist das erste desformilasa beschrieben innerhalb der Familie der a / b-hidrolasas. Lso wurden auch Gene identifiziert nicF und nicE, die in den letzten zwei Etappen des Weges, den Erhalt und Maleic acid Fumarsäure, IMI. Nic Gene sind organisiert in drei operons transcripcionales nicAB, nicXR und nicCDEFTP, die durch Säure 6-hidroxinicotínico, während nur Nikotinsäure induziert die Expression von Operon nicAB. NicR fungiert als Repressor Meinungsäußerung nicXR und nicCDFTP, während als induzieren die Expression von nicAB.