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AUSDRUCK DER GLYKOPROTEIN UND DIE BOHV - 1 IN E. COLI. IDENTIFIZIERUNG EINER SEQUENZ ZYTOTOXISCHENAutor: SERRA HARTMANN XAVIER. Jahr: 2004. Universität: AUTÓNOMA DE BARCELONA. Ort der Lesung: FACULTAD DE CIENCIAS. Ort der Vorbereitung: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA. Inhaltsangabe: Die bovinen Herpesvirus Typ 1 (BoHV - 1) ist ein alphaherpesvirus die zu den wichtigsten ätiologischen Agent der Box Rindern Atemwegserkrankungen verantwortlich für die hohe wirtschaftliche Verluste in der Viehwirtschaft. Impfung gegen BoHV - 1, sondern reduziert Infektion und der klinischen Zeichen Derivate, nicht daran hindert, nach einer Infektion mit dem BoHV - 1 Haustier. Daher sind diese Tiere könnte sich zu einer Hochburg des latenten Infektion. Controlling BoHV - 1 durch die Entwicklung der Tilgung Programme, die auf serologischen Identifizierung und Schlachtung von infizierten Tieren. Bei der Durchführung dieser Programme werden Marker-Impfstoffen defectivas in einem oder mehreren Genen, die eine Immunantwort erzeugen, die sich von der tritt nach einer Infektion mit BoHV - 1 Gew.. Gemeinsam wird getestet Differentialdiagnosen serologischen Test ermittelt, dass das Vorhandensein von Antikörpern gegen die / n Glykoprotein / abwesend / s in der Marker-Impfstoff bei Tieren infiziert mit BoHV - 1 Gew.. Unsere Arbeitsgruppe führte die Entwicklung eines Impfstoffes leben Marker gegen BoHV - 1 defekt im glicoproteían E (gE-) (BoHV - 1 gE-). Zusammen mit dem Bau von BoHV - 1 gE-, adressiert den Ausdruck von rekombinanten Escherichia coli, der gE- der BoHV - 1. Der Ausdruck der gE- war notwendig, sowohl für die endgültige Charakterisierung des Virus defectivo wie für die zukünftige Entwicklung eines Tests, dass pemitiera Differenzierung serologische zwischen geimpften Tiere mit dem Virus BoHV - 1 gE- und Tiere, die von Stämmen BoHV - 1 war es giftig bis E . Coli. In dieser Arbeit wurde festgestellt, dass die Aminosäuresequenz TRAPP von gE- der BoHV - 1 ist verantwortlich für die Toxizität im Zusammenhang mit dem Ausdruck der extrazellulären Domäne des Glykoprotein aus E.coli. Die teilweise Abschaffung des TRAPP ist hinreichende Bedingung für die Wiederherstellung normaler pflanzliche Wachstum und die Akkumulation des Proteins zum Ausdruck gebracht. Es wurde festgestellt, dass die Reihenfolge TRAPP ist auch giftig, wenn man sie integrierten nativen Protein E.coli. Die Toxizität von TRAPP ist aufgrund der Natur der Folge, und keine Antwort auf eine Verwendung von Codon fremd die E.coli noch auf die Aktivierung von princpales Proteasen des Bakteriums. Darüber hinaus Toxizität dela Folge TRAPP korreliert mit dem Fehlen einer solchen Polypeptid Folge Codierung für E.coli. Bestimmung TRAPP hat dazu geführt, dass die Identifizierung von Peptiden viele andere auch kaum Unterschiede zwischen dieser Proteine E.coli, und diese Tatsache mögliche Relevanz für die Meinungsfreiheit heterológa Proteine, die in das Bakterium. Also, durch homologe Rekombination Techniken, hat sich ein Stamm von BoHV - 1 defekt für die Folge RAPPR der gE- (BoHV - 1 RAPPR). Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Reihenfolge TRAPP ist nicht erforderlich, um die Rolle der gE-, dh direkte Übertragung zwischen den Zellen BoHV - 1. Substitution dela Folge RAPPR, im Gegenteil, es bringt eine kleine Änderung in der Art der angeblichen Virus Interaktion mit Komponenten der Zellmembran und der extrazellulären Matrix. Schließlich, in dieser experimentellen Arbeit und hat ferner ein Panel monoklonaler Antikörper gegen das gE- der BoHV - 1 für die Verwendung in einer serologischen Test differenzierte gemeinsame Durchführung der Impfung mit BoHV - 1 gE-. Der Test Design, einem ELISA-Test blockiert ist sensibel und spezifisch für den Nachweis von Antikörpern gegen 8 der gE- von 333 L BoHV - 1, und zeigt Versprechen als ein Versuch, um die Entwicklung eines endgültigen Test. COINMOVILIZACIÓN UND STABILISIERUNG OXIDASAS UND CATALASAS: BIOTECHNOLOGISCHE ANWENDUNGEN.Autor: BETANCOR DUTRENIT LORENA. Jahr: 2004. Universität: AUTÓNOMA DE MADRID. Ort der Lesung: FACULTAD DE CIENCIAS. Ort der Vorbereitung: INSTITUTO DE CATÁLISIS , CSIC..
Inhaltsangabe: Die oxidasas haben ein hohes Interesse der Biotechnologie, wie sie in der Lage sind, Katalysator für sehr spezifische Oxidation von organischen Verbindungen unter milden Bedingungen und die Reaktion mit molekularem Sauerstoff als Oxidationsmittel. Allerdings sind diese Enzyme sind instabil, weil sie nicht leidet Inaktivierung durch die Dissoziation von Untereinheiten, Verzerrung ihrer dreidimensionalen Struktur, die Dissoziation der cofactors oder chemische Veränderung durch das Wasserstoffperoxid erzeugt als Nebenprodukt der Oxidation Reaktion. Das Hauptziel dieser Arbeit ist die Optimierung Biotrans- katalysiert durch oxidasas durch die Vorbereitung derivativen unbeweglich hoch stabilisiert. Um dieses Ziel zu erreichen haben wir versucht zwei komplementäre Strategien: Immobilisierung kovalente multipuntual und multisubunidades (zur Vermeidung von Verzerrungen des Enzyms Molekül oder Dissoziation von Untereinheiten) und coinmovilización der oxidas wie mit catalasas zu beseitigen in-situ Wasserstoffperoxid gebildet. Die biotrasnformaciones untersucht wurden: die Vorbereitung der Säure cetoadipiI7 - aminocefalosporanico. Von Cefalosporina C mit einer Zubereitung von D - aminoácido Oxidase und Katalase coinmovilizadas, Vorbereitung Säure glucónico mit einer Ableitung von Glukose Oxidase und Katalase coinmovilizadas und Vorbereitung fructooligosacátidos von Saccharose mit einem fructosiltransferasa (FST) unbeweglich in der Anwesenheit von Glukose Oxidase ist verpflichtet, entfernen Glukose gebildet als Nebenprodukt der Reaktion, da dies ein efeto Inhibitor auf der FST. Es produziert ein breites Spektrum von Derivaten immobilisierten der catalasas unterschiedlicher Herkunft (Rinder Leber (BLC), Aspergillus niger, Micrococcus Iysodeikticus und Thermus ther-) mit unterschiedlichen Strategien physikalisch-chemischen. In allen Fällen sind diese Enzyme stabilisiert durch Immobilisierung (mit Faktoren, die Stabilisierung von 13, 30, 3 und 50 mal stabiler als die löslichen Enzym. Zusatz, der DAAO von Trigonopsis variabilis und Glukose oxidas zu Aspergillus niger auch unbeweglich und stabilisiert durch Adsorption an Muttergesellschaft aminadas Und der anschließenden Schnittstellen mit Glutaraldehyd. Immobilisierten Vorbereitung der DAAO wurde 6800 mal stabiler als das lösliche Enzym, während die Stabilisierung erreicht Faktor für GOX (ein Enzym sehr robust) 96 im Hinblick auf die Enzym löslich. War auch eine Ableitung FST stabilisiert und optimiert Adsorption an Muttergesellschaft aminadas und die nachfolgenden Schnittstellen mit Glutaraldehyd. Jedem biotransforrflaciones studiert, getestet, die Effizienz der Kupplung Oxidase / Katalase durch unterschiedliche Strategien: durch das Verschwinden eines Produkts, bestehend aus Wasserstoffperoxid (wie im Falle der Vorbereitung von sauren cetoadipil 7 - aminocefalosporanico), Verschwinden von hemmende Wirkung von Glukose auf die Tätigkeit der FST bei der Vorbereitung der Fructoologosacáridos, durch die Fähigkeit des GOX vollständig oxidiert eine Lösung von Glucose 100 mM, dass in der Abwesenheit von Katalase nicht möglich war, angesichts der Inaktivierung von Peroxid erlitten durch die GOX. CHARAKTERISIERUNG DER PHASE DER SINÁPTICA REKOMBINATION HOMOLOGA IN BACILLUS SUBTILIS UNDAutor: CARRASCO CABEZAS BEGOÑA. Jahr: 2004. Universität: AUTÓNOMA DE MADRID. Ort der Lesung: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA. Ort der Vorbereitung: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA. Inhaltsangabe: Charakterisierung Phase der Nachkriegszeit homologe Rekombination in Bacillus subtilis und. Die homologe Rekombination ist der Vorgang, bei dem das genetische Material zwischen Molekülen der DNA, deren Sequenz Homologie zeigt. Die Schnitte in die doppelte Kette von DNA in Bakterien hauptsächlich durch homologe Rekombination zu reparieren, spielt es eine untergeordnete Rolle bei Eukaryonten repariert werden, indem nicht gewerkschaftlich organisierten Kollegen Extremen. In diesem Prozess ist es möglich, drei Phasen: vor sinapsis, wo sie verarbeitet werden, um die DNA Substrat ADNcs auf dem filamenta Protein RecA; Synapsen, wo RecA produziert die Suche nach Homologie und der Austausch von Ketten und nach sinapsis wo ist Die Migration von Ketten und die Bildung und die Verfügbarkeit von Strukturen Holliday. In Bacillus subtilis, die Gene, die in verschiedenen Rekombination von recA wurden in Gruppen epistáticos: (recF, recL, recO, recR, recN) (addA addB) (recP, recH) (recU ruvA, ruvB, recD) (recS, recQ , RecJ) und (recG) mit unterschiedlichen Anfälligkeit für Agenten, die DNA und die Gene recA an Orten, das Zentrum mit allen Gruppen zu kodifizieren, die wichtigsten Proteine im Rekombination. Die Gene, die in den Gruppen epistáticos und kodieren Proteine, die in der Phase vor sináptica der Rekombination während die von Genen kodiert und Gruppen, die in der Nachkriegszeit. Während des normalen Wachstum in der mutierten Gene, die in Gruppen epistáticos und Probleme bei der Trennung der Chromosomen mit einem 3-7% der Zellen anucleadas, eine große Anzahl von Zellen mit nucleoides Kondensate und lange Räume Zytoplasma freien DNA. Der Komplex RuvAB zusammen mit helicasa RecG Durchführung der Migration der Replikation Gabel, wenn ein Schaden eintritt, um Strukturen Holliday und Eiweiß RecU wurde zeichnet sich in dieser Studie als resolvasa Schneiden dieser Strukturen. Es wird vermutet, dass in der Abwesenheit von Protein Verarbeitung Vermittler im Prozess der Rekombination Resolution Strukturen Holliday richtet sich an die Bildung rekombinanter Moleküle (Dimere in runden Chromosomen), oder alternativ gibt es dieser Resolution und sind Chromosomen. Wir haben diese isoliert Schutz- Mutationen, die sich in Genen sms und subA. Das Protein hat SMS Homologie mit RecA und Lon Proteasen, obwohl es noch nicht charakterisiert. Das Protein SubA hat kein Gegenstück in E. Coli und bisher unbekannte Funktion. In Ermangelung von Genen sms und subA ist teilweise unterdrückt den Phänotyp der Wiedergutmachung und Segregation in Mutanten von Gruppen und. Proteine SMS und SubA könnte an der Stabilisierung der Vermittler verzweigte während Rekombination. In Abwesenheit des Proteins RecA gelöscht Defekt Segregation aber nicht gelöscht Defekt Reparatur der DNA von Mutanten recU1 und recG. RecA führt die Invasion von Ketten, die in das Fehlen dieses Proteins ist nicht gebildet Holliday Strukturen, die dem Substrat RecU und RecG und die Auflösung nicht in Richtung auf die Bildung dímeros.En B. Subtilis gibt es kein Gegenstück Sequenz des Proteins RuvC E . Coli und unbekannten analoge Durchführung der Auflösung der Strukturen der Holliday. Es ist geprägt Protein RecU als reswolvasa Mehrheit der Strukturen Holliday B. Subtilis. RecU bindet DNA-Kettenabbruch einfach (ADNcs) und doppelte Kette (ADNcd) in einem Prozess, unabhängig von ATP-abhängigen und Magnesium. Darüber hinaus bindet effektiver verzweigte Strukturen von drei und vier Filialen (Holliday Strukturen) durch Hybridisierung der Oligonukleotide und die Effizienz der Union nimmt 40 mal im Falle von synthetischen Replikation Gabeln. RecU kurz diese ist 8 tructura 33d s von Holliday in einer bestimmten Reihenfolge, aber nicht in der Lage ist, um die DNA linear oder superenrollado dieser Website Anerkennung. Der Schnitt kommt auf der gleichen Position in Ketten mit der gleichen Polarität. IDENTIFIZIERUNG UND FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG VON NEUEN VERMITTLER IN DIE REAKTION DER ARABIDOPSIS BEI NIEDRIGEN TEMPERATURENAutor: LOPEZ COBOLLO ROSA MARIA. Jahr: 2005. Universität: AUTÓNOMA DE MADRID. Ort der Lesung: FACULTAD DE CIENCIAS. Ort der Vorbereitung: FACULTAD DE CIENCIAS. Inhaltsangabe: Die Pflanzen reagieren unterschiedlich auf niedrigen Temperaturen. Eine solche Reaktion ist der Prozess der acclimation zu niedrigen Temperaturen, die eine adaptive Prozess, der ermöglicht verbessern oder zu entwickeln, eine größere Toleranz gegenüber dem Gefrierpunkt Temperaturen nach bisher nicht Gegenstand niedrigen Temperaturen. Diese adaptiven Prozess, genannt acclimation zu niedrigen Temperaturen ist sehr komplex und beinhaltet viele physiologische und biochemische Veränderungen, die meisten von ihnen durch Veränderungen in der Genexpression. Es ist noch nicht bekannt, wie Pflanzen wahrnehmen der Rückgang im niedrigen Temperaturen und dieses Signal wird an die Stelle der adaptiven Antwort. Daraus ergibt sich die Bedeutung der Identifizierung und Charakterisierung von neuen Vermittler in der Reaktion auf die niedrigen Temperaturen. In unserem Labor isoliert eine Reihe von Genen, deren Expression wird durch die Exposition gegenüber 4Â ° C auf niedrigem Niveau in der Modellpflanze Arabidopsis thaliana. Einer von ihnen, RCI1A, kodiert ein Protein aus der Familie der 14-3-3, die schon seit vielen Verwicklung in die Regulierung biologischer Prozesse. Ein weiterer von ihnen, RCI5, kodiert eine Familie von Monooxygenase FMO, die sich nicht bewusst, der eine Funktion in Bezug auf die Stresstoleranz von Pflanzen. In dieser Arbeit, vor der wir stehen ein tieferes Verständnis der beiden Gene, die Teilnahme an dem Prozess der acclimation zu niedrigen Temperaturen. In unserem Labor wurde RCI1A steigert ihren Ausdruck in Reaktion auf die niedrigen Temperaturen und gleichzeitig nach wie vor ermutigend. Kodieren der Isoform? Die Familie des Proteins 14-3-3. In dieser Arbeit, erstens, führen wir eine Fusion traducional zwischen Promoter RCI1A und Whistleblower GUS Gens, die uns ermöglicht, zu zeigen, dass die Expression dieses Gens kommt aus sehr frühen Staaten und der Entwicklung in allen internationalen Gremien, Erhöhung nur in der Antwort auf Kälte , Und das ist geregelt transkriptionelle Ebene. Zu prüfen, die Rolle der RCI1A als Reaktion auf die niedrigen Temperaturen aislamos einer mutierten Null im Ausdruck RCI1A. Diese mutierten, rci1a - 1, die eine kleine auf eine kleinere Zelle, und dass blüht früh Bezug auf Genotyp wilden deutet darauf hin, dass RCI1A hat eine wichtige Rolle bei der Kontrolle der Zelle die Größe und die Dauer der Blüte von Arabidopsis. Gleichzeitig ist es mehr Toleranz für das Einfrieren Temperaturen sowohl unter Kontrolle als Akklimatisierung. Die molekulare Analyse der Mutante zeigten, dass RCI1A regelt Teil der Genexpression aktiviert ist, dass als Reaktion auf niedrige Temperaturen, speziell negativ moduliert die Expression von CBF1 und CBF3. Da dieses Gen ist nicht durch die ABA oder Faktoren CBFs, ist ein gutes Werkzeug für die Suche Vermittler auf der Straße Signalisierung durch die niedrigen Temperaturen. Deshalb haben wir isoliert und charakterisiert 7 Mutanten, die im Ausdruck RCI1A in Reaktion auf 4Â ° C (drx). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass möglicherweise entsprechen Verbindung Punkte in der Antwort auf Stress im Zusammenhang mit verschiedenen Antwort Akklimatisierung. De esta tesis también hemos caracterizado la expresión génica en RCI5, deaktivieren Nuevo gen. en Arabidopsis, induzierbaren por temperaturas Bajas y estrés salino. Eine detaillierte Analyse seiner Rede, durch die Zusammenlegung traducional Promoter RCI5 mit der GUS Gens zu dienen, hat sich vorzugsweise induziert in der vaskulären Gewebe der Blätter und Blumen in der Antwort auf beide Stress. RCI5 kodiert für ein Protein der Familie FMO. In Fischen wurde festgestellt, dass FMOs sind in der Synthese von TMAO, ein potenter osmoprotector. Nach der Reinigung des Proteins haben wir festgestellt, dass RCI5 ist Monooxygenase Funktion in vitro nicht. Und transgenen Pflanzen sobreexpresando Gen haben es uns ermöglicht, zu zeigen, dass RCI5 auch funktionell in vivo ausgeschlossen werden. Die Pflanzen 35S:: RCI5 größere Toleranz gegenüber Einfrieren Temperaturen, die beide unter Kontrolle, wie Akklimatisierung, und als Reaktion auf Stress Salz, die mit einer Funktion RCI5 als Reaktion auf die beiden Stress. RCI5 regelt positiv 8 der ausdruck 458 esión von Genen, die Teil regulón CBF/DREB1 und Genen, die auf die Beseitigung von ROS. Wir haben gezeigt, die Existenz von TMAO in der Arabidopsis, und das Niveau dieses Molekül sich in Reaktion auf 4Â ° C und NaCl. Die Ergebnisse dieser Arbeit haben gezeigt, dass die TMAO, ist zumindest teilweise auf RCI5, und das ist eine neue Signaltechnik Molekül, aktiviert die Genexpression, die in Reaktion auf die niedrigen Temperaturen und der Salzgehalt Stress. FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG DER DIENSTLEISTUNGEN / GEFAHREN KINASE DOPPELTE PKL12 ALS CO- FAKTOR TRANSKRIPTIONELLE UND SEINE BETEILIGUNG AN ONCOGÉNESISAutor: Guinea Gutiérrez Bárbara. Jahr: 2005. Universität: AUTÓNOMA DE MADRID. Ort der Lesung: Centro Nacional de Biotecnología. Ort der Vorbereitung: Centro Nacional de Biotecnología.
Inhaltsangabe: PKL12 ist eine Ser / Thr Kinase, die sich vor allem in den Golgi-Apparat. Aber nach Medikament Behandlungen, wie brefeldina Ay nocodazol, PKL12 ist trasloca den Kern. In diesem Fach subzelluläre PKL12 als seine eigenen transkriptionelle und Zusammenarbeit Faktor Gen als VEGF. Es scheint, dass seine Tätigkeit Kinase ist unabhängig von seiner Fähigkeit zur Verlagerung der Kern. Auch PKL12 ist in der Lage, in Zusammenarbeit mit Onkogene wie v - Src und seine Überexpression in der Zelle NIH/3T3 macht es fähig, die mehr Taschen von Transformation. Außerdem haben wir ein neues Protein isoliert, inmunorelacionada mit PKL12, die wir auch als PKL12 - große Bruder (PKL12 - BB) und ist sobreexpresada im Tumor Zeilen wie CMT, sowie Leukämie Kindheit und carciomas erwachsene Menschen. Schließlich haben wir erzeugten murinen Modellen für die Untersuchung der biologischen Funktion der PKL12 in vivo ausgeschlossen werden. ENTWICKLUNG VON VERFAHREN TRANSGENESE MIT VEKTOREN LENTIVIRALESAutor: Punzón Gau Ma. Isabel. Jahr: 2005. Universität: AUTÓNOMA DE MADRID. Ort der Lesung: Centro Nacional de Biotecnología. Ort der Vorbereitung: Centro Nacional de Biotecnología. Inhaltsangabe: Design eine Methode der Transgenese subzonal Embryo mit Vektoren lentivirales in reiner Belastung der Maus, C57BL / 6. Charakterisierung von transgenen Mäusen sowie Segregation lentiviral. Mit Hilfe der Technik für den Erhalt transgenen Mäusen Immungeschwächte NOD / scid als Modell der menschlichen Xenotransplantation / morino, und mit dem Ausdruck biologisch aktive menschliche Protein. UMFRAGE UND ÜBERWACHT METHODEN FÜR DIE ANALYSE VON MUSTERN DER GENEXPRESSIONAutor: Mateos Gil Álvaro. Jahr: 2005. Universität: AUTÓNOMA DE MADRID. Ort der Lesung: Facultad de Ciencias. Ort der Vorbereitung: Príncipe Felipe. Inhaltsangabe: In dieser Arbeit "Umfrage und überwacht Anwendung von Methoden für die Analyse der Genexpression Muster" hat eine Studie über die Durchführung der Aufsicht Lernen Methoden für die Analyse der Daten der Genexpression Ebene Genomik. Die Muster der Genexpression sind, die durch die Technik der Microarrays und bestehen aus den Ausdruck der Werte für die meisten oder alle Gene in einem Genom auf der Ebene der Transkription. Die Lernmethoden sind überwacht eine Reihe von Techniken im Bereich der statistischen Lernens und der künstlichen Intelligenz. Durch solche Methoden können multivariaten Datensätzen. Die Definition Merkmal dieser Methoden ist definiert mit Hilfe der Informationen unabhängig von den Daten selbst, daher der Name "Aufsicht". Typisch, diese Angaben können aus verschiedenen Klassen der verschiedenen Elemente in der Datenbank. Durch einen Prozess des Lernens von Beispielen, deren Klasse bekannt ist, diese Art von Entscheidungen in Übereinstimmung mit Methoden, die verwendet werden kann für die Einstufung von Elementen der Klasse unbekannt. In dieser Arbeit haben die Methoden des Lernens und der Aufsicht perceptrón perceptrón mehrschichtige (zwei bekannten Arten von neuronalen Netzen) und Support Vector Machines (SVM). Wo erforderlich, die kombiniert perceptrón und SVM mit einer Methode namens unbeaufsichtigt Clustering SOTA, um die Dimensionalität der ursprünglichen Daten. Anwendung der Methoden überwacht aufgeführten datensätze der Genexpression, hat eine Studie von Genfunktionen Vorhersage der Hefe Saccharomyces cerevisiae. Es wurde auch auf die Vorhersage der phänotypischen Klasse der Tumor Proben und gesund. Schließlich, er hat eine Methode der bi- Clustering überwacht, auch bekannt als "Signatur Algorithmus" für die Studie der modulare Aufbau der Abschrift in verschiedenen Krebsarten. MODULATION DER KATALYTISCHEN EIGENSCHAFTEN VON PENICILLIN G ACILASA DURCH IMMOBILISIERUNG FÜHRTE ZU DER NATIVEN ENZYM UND GENETISCH VERÄNDERTENAutor: ESTRUCH LORENDEAU MARIA ILONA. Jahr: 2005. Universität: AUTÓNOMA DE MADRID. Ort der Lesung: INST. DE CERAM.Y VIDRIO, CSIC.. Ort der Vorbereitung: INST. DE CATAL. Y PETROL. CSIC,.
Inhaltsangabe: Penicillin G acylase (CPA) katalysiert die Spaltung der Carbonsäureamid Anleihe in der benzylpenicillin (Penicillin G) Seite - Kette zu produzieren phenylacetic Säure und 6 - aminopenicillanic Säure, die Ausgangsmaterial für die Synthese von mehreren Halbfinale synthetischen Antibiotika. Dieses Enzym kann auch verwendet werden, um ein Katalysator für die umgekehrte Reaktion von Halbleitern Synthese von à - lactam Antibiotika. PGA aus Escherichia coli ist die am weitesten verbreitete und synthetischen hydrolytischen Enzyms. Diese acylase wird als immobilisierten Derivat auf solide unterstützt, um sicherzustellen, gute Aktivität Stabilität Eigenschaften unter Betriebsbedingungen. Es wurde berichtet, dass die verschiedenen immobilisierten Derivate von PGA Mai weisen unterschiedliche katalytische Eigenschaften. Das Hauptziel dieses Ph.D. Diplomarbeit ist die Erstellung von immobilisierten Derivate von nativen und rekombinanten PGA synthetische mit guten Eigenschaften, die für die kinetisch kontrollierte Synthese von einem Vorläufer des Cephamandole. Dieses Ziel wurde konzentriert über drei wichtigsten Untergruppen Ziele: a - Bewertung von synthetischen Eigenschaften der verschiedenen Derivate von nativen PGA. Verschiedene Derivate vorbereitet wurde a. - Mit unterschiedlichen Ausrichtung des Enzyms auf die Unterstützung, Ba - unterstützt durch die Verwendung mit verschiedenen physikalischen Eigenschaften, etwa durch Sperrung der Unterstützung (nach Immobilisierung des Enzyms) mit unterschiedlichen Liganden klein. Diese Derivate beurteilt worden sind, in Bezug auf einen kritischen Parameter in enzymatische Synthese: das Verhältnis zwischen synthetischen und hydrolytischen Aktivität der immobilisierten Enzym. B. Durch den Einsatz eines rekombinanten - PGA (Lys mit einer Reihe von Gruppen auf der gegenüberliegenden Gesicht für die aktive Zentrum) haben wir in der Lage, die immobilisierten Enzym (durch diese Region) auf glyoxyl - agarose. Die Eigenschaften der neuen synthetischen Derivate wurden ebenfalls beurteilt. C. - Eine neue Mutanten von PGA wurde entworfen, um die besten Immobilisierung und die besten synthetischen Eigenschaften. Die Pac Gen aus E. coli ATCC 11105 wurde mutagenized durch PCR auf seiner 3 'Ende, die dem Ende des à Kette. Die Überproduktion der rekombinanten Enzym wurde, die durch das Klonen die mutagenized Pac Gen in die pET101/D-TOPO Expressionsvektors. Nach der Reinigung der mutierten war unbeweglich und die katalytischen Eigenschaften des freien und immobilisierten Enzym wurden mit denen des nativen Enzym, in der kinetisch kontrollierten Synthese von einer Zwischenstufe von Cefamandol. Die Einführung dieser neuen Tag Immobilisierung verbessert die Effizienz sowie die katalytischen Eigenschaften des immobilisierten Enzym. Insbesondere die immobilisierten mutierte Enzym synthetischen Eigenschaften gezeigt, viel besser als das native Enzym und ihre katalytische Effizienz auch nach der Immobilisierung. PRODUKTION ALDOLASAS REKOMBINANTE: VON DER MOLEKULARBIOLOGIE, UM DIE ENTWICKLUNG VON VERFAHRENAutor: Vidal Conde Luis. Jahr: 2005. Universität: AUTÓNOMA DE BARCELONA. Ort der Lesung: Escuela Técnica Superior de Ingeniería (ETSE). Ort der Vorbereitung: Ingeniería Química. Inhaltsangabe: Mit aldolasas als Biokatalysatoren für die Bildung von Verbindungen mit CC estereoquímica definiert hängt wesentlich davon ab, die Entdeckung von neuen aldolaas und die Fähigkeit der disponerlas auf dem Markt für Strom desmostrar Macht in der Synthese von chiralen sintones Dieses Papier ist ein Beitrag auf dem Gebiet der asymmetrischen Synthese Basiert auf der Verwendung von Enzymen durch Klonen neue aldolasas natürlichen, und die Entwicklung von Verfahren für den Erhalt aldolasas rekombinante abhängig DHAP, Glycin und Acetaldehyd für den Einsatz in der Synthese von Verbindungen mit komplexen zwei neue chirale Zentren estereoquímica definiert und ergänzen. Enzyme Ziel dieser Arbeit sind die vier aldolasas abhängig DHAP (ramnulosa 1-fosfato aldolasa, fuculosa 1-fosfato aldolasa, Fructose 1,6 bifosfato aldolasa, tagatosa 1,6 bifosfato aldolasa), zwei aldolasas abhängigen Glycin (Threonin aldolasas) und aldolasas abhängig Acetaldehyd (desoxiribosa 1 - Fosfato aldolasa). Insbesondere dieser Arbeit ist zusammengefasst in fünf wesentliche Punkte: Erstens, wir haben sieben geklonten aldolasas Prokaryoten mikrobiellen aus verschiedenen Quellen, vor allem E. Coli, in einer homogenen Plattform, die es ermöglicht, einfach und vielseitig Überexpression des löslichen intrazelluläre Enzyme wie Eiweiß zu einer Fusion Queue histidinas. Zweitens, es hat sich eine globale Strategie für die Reinigung geben das Produkt funktional und eine minimale Anzahl von Schritten mit hoher Performance und Stabilität. Drittens, wir haben zu-Punkt Methoden für die Bestimmung von Aktivitäten aldolásicas spezifische Tests auf der Basis von enzymatischer espectrofotométricos basiert auf der Reaktion mit dem natürlichen Substrat der einzelnen. Vierter wurde das System ausgewählt, um ramnulosa 1-fosfato aldolasa (RhuA) als Modell für die Festlegung eines reproduzierbaren Prozess zur Produktion, die Optimierung der Kern-conditioning Überexpression von rekombinanten Proteinen in E. Coli. Fünftens, es hat an der Entwicklung einer Strategie für die wachsende Halbleiter für die Erlangung hoher Zelldichte Kulturpflanzen, die Kriterien für die Optimierung der Induktion der Expression des rekombinanten Proteinen zur Maximierung der Produktion und Produktivität RhuA. Schließlich, mit Techniken der Molekularbiologie, hat sich auf die Verbesserung der Plattform des Ausdrucks, auf den Einsatz von Antibiotika als Marker Auswahl, immer Nachdenken über ihre Anwendung zu industriellen Maßstab. Insbesondere hat sie ein Plasmid desarrolado Ergänzung eines auxotrofía Glycin für die das Wachstum von E. Coli Medien Mutante identifiziert, ohne den Einsatz von Antibiotika. Dieses neue System ermöglicht es Design-Strategien für die Zukunft wachsende wirtschaftliche mehr für die Produktion von rekombinanten Proteinen mit einer geringeren Umweltbelastung EINE GESELLSCHAFT VON AGENTEN UND MUSIK FÜR MASCHINENAutor: ESNAOLA CAMPOS URKO. Jahr: 2005. Universität: PAÍS VASCO. Ort der Lesung: FACULTAD DE INFORMÁTICA. Ort der Vorbereitung: FACULTAD DE INFORMÁTICA. Inhaltsangabe: Diese Dissertation präsentiert eine neue Art der Interaktion máquina-persona, máquina-máquina basiert auf einer musikalischen Sprache, die bereits genannte "Sprache MiReLa Musical '. Diese Sprache kann von der Mehrheit der Musikinstrumente, Handys und PDAs. Es kann silvado. Es hat eine besondere Anstrengungen unternehmen, um eine Sprache zur Gestaltung seiner musikalischen Phrasen sind einfach zu silvadas. Diese These stellt auch einen Überblick über eine verteilte Architektur, die leicht zu integrieren, verschiedene Aspekte zu berücksichtigen und den Betrieb eines mobilen Roboters. Er hat den Namen "Verband der Makler. Es schlägt vor, eine Möglichkeit zu schaffen Netzwerke von Agenten. Jeder Agent fügt neue Funktionen an die Roboter. Dies nutzt die Fähigkeiten der Spieler bereits vor dem hinzugefügt, die in das Netzwerk. Die Kommunikation zwischen den Spielern ist einfach. OLIGONUKLEOTID BASIERT - BIOSENSOREN FÜR DAS LABEL FREI ELEKTROCHEMISCHE DETEKTION EIWEIß UND DNA-INVOLVIERENDENAutor: Mir Llorente Mònica. Jahr: 2006. Universität: ROVIRA I VIRGILI. Ort der Lesung: Escuela Técnica Superior de Ingeniería Química. Ort der Vorbereitung: Escuela Técnica Superior de Ingeniería Química.
Inhaltsangabe: Die Arbeit in dieser Diplomarbeit beschreibt die Entwicklung neuer Plattformen elektrochemische Biosensoren um Systeme, die für eine einfache Detektion von Analyten, die wir brauchten eine Kennzeichnung vor, der diese entweder um Reagenzien für die Erkennung. Diese Plattform biosensórica erlauben auch die Erkennung einer Vielzahl von Analyten auf dem gleichen Team zu einem günstigen Preis. Um zu vermeiden, dass die Kennzeichnung DNA-Proben sind die Entwicklung eines Systems der Bewegung. Diese Methode der Selbst-Branding basiert auf der Vertreibung von Oligonukleotid-Moleküle mutiert und Kennzeichnung, die zwar mit Mutationen hibridar ist in der Lage, mit der Sonde in der Aufklärung immobilisierten Biosensor, i also wenn dies in Anwesenheit des Analyten durch die Sonde hat eine Höhere Affinität für die Analyten, dass das Molekül mutiert, die Analyten verdrängt Oligonukleotid mutiert und Kennzeichnung diminuyendo gut Biosensor-Signal, das proportional zu der Konzentration der Analyten. Er führte auch verschiedene Strategien zur Entwicklung eines elektrochemischen Biosensoren basieren auf der Oligonukleotide (aptámeros) für die Detektion von Protein ohne vorherige Kennzeichnung dieser Analyten. Erste ein generisches System, basierend auf der Oligonukleotide, die erkennen können beide Nukleinsäuren und Proteinen. Es zeigte fünf Konfigurationen von elektrochemischen Biosensoren basieren aptámeros zu erkennen Thrombin nicht überprüft.
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