PHYSIKALISCHE BIOCHEMIE

Autor: DÍAZ MORENO IRENE.
Jahr: 2004.
Universität: SEVILLA [www.us.es].
Ort der Lesung: CENTRO DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS ISLA DE LA CARTUJA.
Ort der Vorbereitung: INSTITUTO DE BIOQUÍMICA VEGETAL Y FOTOSÍNTESIS . UNIVERSIDAD DE SEVILLA CSIC..

Inhaltsangabe: Interaktionen trasitorias zwischen Biomolekülen haben sich in der Mitte der Untersuchung in vielen Bereichen der Biochemie Moderna.La weiterhin strukturelle Charakterisierung mit jedem der strukturellen hochauflösenden Techniken ist es wichtig, zu verstehen, die Rolle dieser Art von dieser Komplexe. Die Arbeit dieser Dissertation wurde, die mit einem doppelten objetivo.Por einer Hand, eingehende Kenntnis der molekularen Interaktionen und der strukturellen Charakterisierung der komplexen Übergang zwischen Proteinen, die Zielausrichtung Ende Kompression Faktoren, die die Beziehung zwischen der Struktur und Funktion Von Proteinen, sowie die Möglichkeiten der Interaktion und die Ausbildung für diese Art von komplexen instabil oder schwach. Wurde besonderes Augenmerk auf die Eigenschaften, die ein Protein, ihre Fähigkeit zur interaccionear legt vorübergehend mit anderen. Das zweite Ziel ist ein Fortschritt in der Entwicklung und Kenntnis von zwei espectroscopias unerlässlich für die Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen Biomolekülen in Lösung: Nuclear Magnetic Resonance MRT und der Absorption von X XAS.Este Entwicklung Ray wiederum hat zwei verschiedene Aspekte: bei Gerichtsverfahren, Optimierung der Qualität der NMR Spektren und XAS in Konzentrationen límite.a Ebene der Methodik, so dass bahnbrechende, XAS zur Untersuchung komplexer zwischen Biomolekülen und Adressen zum ersten Mal die carazterización strukturellen zwischen löslichen Proteinen und Membranen durch NMR in Lösung.

Autor: PERÁLVAREZ MARÍN ALEJANDRO.
Jahr: 2004.
Universität: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Ort der Lesung: FACULTAT DE MEDICINA.
Ort der Vorbereitung: ESCUELA DE POSTGRADO.

Inhaltsangabe: Die bacteriorodopsina (BR) ist die einfachste photosynthetische System ist bekannt, denn es entsteht ein elektrochemisches Gefälle von der Energie des Lichts, die Protonen über die Membran, die von der ATP - sintasa für Energie, in der Mangel an Sauerstoff. Methoden für Molekularbiologie Mutagenese Protein, kombiniert mit biophysikalischen Studien, ist es bestimmt die rechtzeitige Veränderungen in der Reihenfolge Protein auf die Struktur und Funktion des Proteins. In dieser Studie haben wir vorgeschlagen, um festzustellen, die Rolle der prolinas in den alpha - hélices B (Pro50), C (Pro91) und F (Pro186), zusätzlich zu den Kräften und Wechselwirkungen, die für die Situation und wie verzerrt den Propeller C die BR Anlass zu Anlass Thr90 - Pro91. Diese Helix ist der Schlüssel Mechanismus der Proton Transport, da sie die beiden Abfälle espártico (Asp85 und Asp96), die direkt an den Transport des Protons. Die biophysikalischen Studien deuten darauf hin, dass Prolinas in den alpha - hélices transmembranen hauptsächlich spielen eine dynamische Rolle in der Bacteriorodospsina. In Bezug auf den Grund Thr90 - Pro91 in der Hélice C unterstreichen die Bedeutung dieses Mechanismus zu entwickeln, eine ordnungsgemäße Funktion der Transport protrón. Die Ergebnisse für Bacteriorodopsina sind erweiterbar zu anderen transmembranen Proteinen.

Autor: LIDON MOYA MARIA DEL CARMEN.
Jahr: 2005.
Universität: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE [www.umh.es].
Ort der Lesung: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR.
Ort der Vorbereitung: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR.

Inhaltsangabe: Das Hauptziel dieser Studie war die Identifizierung und Charakterisierung einer Verbindung mit der Fähigkeit, heterodimerizar mit CA - C (carboxylgruppenhaltigen Terminal Domäne des Proteins aus cápsida HIV - 1), und so verhindern, dass die Versammlung der natürlichen cápsida, und folglich, Die Infektiosität von HIV / Aids. Zu diesem Zweck wird die Arbeit gliedert sich in drei Kapitel. Das erste Kapitel hat thermodynamische Charakterisierung von CA - C mit verschiedenen biophysikalischen Methoden: Fluoreszenz, DC, FTIR, NMR, und durch die Größe der Ausgrenzung Chromatographie molekularen unterschiedlichen Bedingungen von pH und Temperatur, um zu beschreiben, die Stabilität des Monomers und dimérica Formen der CA - C, und zu charakterisieren, mögliche Zwischenhändler, könnte in Bezug auf die Reaktion plegamiento - asociación von Proteinen und Energie zu verstehen, die Faktoren, die das dimerización. Die Ergebnisse zeigen, dass das Gleichgewicht der thermischen Denaturierung von CA - C besteht aus drei unabhängigen reversibel und thermischen Übergänge: (i) der erste Übergang (Tm 307 K), die die von NMR und FTIR, ist die Dissoziation der dímero CA - C , Der zu einem Vermittler Monomer gefaltet, (ii) eine zweite Übergang (Tm 325 K), die von Fluoreszenz SLA, Anisotropie und DC in der Nähe von Ultraviolett, um desplegamiento teilweise gefaltet Zwischen- Monomer, und (iii) Der dritte Übergang (Tm 332 K), die die von DC in der fernen Ultraviolett, Absorption, NMR und FTIR trägt die desplegamiento globalen Broker Monomer teilweise gefaltet. Darüber hinaus haben wir auch die thermodynamischen Parameter der Entkopplung und denaturiertem Formen dimérica und Monomer von CA - Ca physiologischen pH-Wert. Es wurde festgestellt, dass CA - C, entweder Monomer als dimérica, unterliegt einer Übergangsphase conformacional bei pH Säure, die ein geschmolzenes Kügelchen, deren Eigenschaften sind vergleichbar mit denen, die Vermittler Monomer teilweise gefaltet, die in den Saldo der thermischen Denaturierung CA - C. Die Zweite Kapitel hat die Gestaltung der ein Peptid (CAC1), die auch die Reihenfolge der einzelnen Propeller, der die Schnittstelle dimerización von CA - C (- hélice 2), und haben ihre Struktur und Eigenschaften Partnerschaft CA - C durch verschiedene Biophysikalische Techniken: Fluoreszenz, DC, NMR, nach Größe Ausgrenzung Chromatographie molekularen Affinität Chromatographie analytischen, und ITC. Experimente DC, nach Größe Ausgrenzung Chromatographie molekularen und NMR zeigte, dass CAC1 ist in der Lage, mit CA - C. Darüber hinaus durch Fluoreszenz, Affinität Chromatographie analytischen, und ITC, so wurde festgestellt, die scheinbare Dissoziationskonstante von heterocomplejo zwischen CAC1 und CA - C, der etwa 50 Millionen, nur fünf Mal höher als der gesamte Domain (10 M). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass dieses Peptid kann als ein Modell für die Gestaltung ein antiviraler Wirkstoff. Und das dritte Kapitel hat sich verpflichtet, die Gestaltung von Proteinen - Struktur CA - C, aber kleiner, die auch alle - hélice 2, auch andere Rückstände, die für dimerización. Diese miniproteínas wurden durch Protein Engineering Techniken, und hat versucht, der Ausübung seiner Meinungsfreiheit und Reinigung. Keine der Änderungen, die sich zum Erwerb miniproteínas, die nur so lange, bis der zweite Propeller CA - C erlaubt die Expression von Proteinen, aber es war der Ausdruck und Tuning Protokoll Reinigung von ein Fragment CA - C enthält Rückstände 146-214 Domain intakt, Für die spätere Durchführung der biophysikalischen Studien.

Autor: LEÓN MADRENAS XAVIER.
Jahr: 2005.
Universität: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Ort der Lesung: FACULTAT DE MEDICINA.
Ort der Vorbereitung: UNITAT DE BIOFÍSICA.

Autor: SOT SANZ JESÚS.
Jahr: 2005.
Universität: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Ort der Lesung: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Ort der Vorbereitung: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Inhaltsangabe: Um besser zu verstehen, das Phänomen der Flöße und die Auswirkungen von Ceramiden in der Zellmembran, haben wir eine Reihe von Studien und biophysikalischen Modell Bläschen. Auf den ersten untersuchten wir die Wirkung von Lipid-Zusammensetzung im Widerstand gegen die solubilization von Triton X-100 führende Ursache für diesen Widerstand. Zu diesem Zweck analysiert die Wirkung von Triton X-100 und Bläschen gebildet hauptsächlich von PC / SM / Ch. Es wurde beobachtet, dass esfingomielina muss vorhanden sein (und andere nicht esfingolípidos) und Cholesterin zu verursachen Widerstand gegen die solubilization von Triton X-100, und dass dieser Widerstand war höher als 37Â ° C bis 4Â ° C, abnehmend, wie die Erhöhung des Anteils PC. Dieses Verhalten war nicht nur abhängig von der Existenz eines geordneten flüssige Phase, wie in ähnlichen Proportionen der Lipid-Flüssigkeit sortiert, die Interaktion zwischen der Gruppe der Cholesterin-und Hydroxy-Gruppe arbonilo der SM, erhöht die Widerstandsfähigkeit von Flügel solubilization Triton X-100. Unter den Bedingungen, in denen es eine partielle solubilization, Abfall ist nicht aufgeschlossen hatte eine Zusammensetzung der Nähe von PC / SM / Ch (1:1:1), die können nicht sicher sein, dass die Membran resistent gegen Reinigungsmittel entsprechen den bestehenden Strukturen in der Membran oder Sind das Ergebnis einer teilweisen solubilization und die anschließende reesamblaje der bicapas Lipid. Continuing solubilization Experimente waren auf der Suche nach einer einfachen Lipid-Gemisch sollte so verhalten, wie die Flöße, oder ob sie widerstandsfähig gegen solubilization bei niedrigen Temperaturen, werden mit zunehmender Temperatur löslich, dieses Ziel wurde mit der Probe SM / Be. Ein Blick auf die Zusammensetzung der Abfälle resistent gegen solubilization konnte beobachtet werden, dass sich bereichert und Cer, zusätzlich zu passieren, dieser Widerstand war notwendig Verpackung eine hohe Lipid-Kohlenwasserstoff-Ketten, so dass dieser Widerstand nur aufgetreten mit cermidas lange Kette und mit gesättigten Phospholipiden. Mit DSC-und Fluoreszenz-Zerfall, es wurde beobachtet, dass das Vorhandensein einer kleinen Menge von Cer produziert das Aussehen der bestellten Domains, die mit dem erhöhten Anteil der Ceramid auch festgestellt, dass die Fusion von diesen Bereichen an die Erhöhung der solubilization. Schließlich haben wir den Prozess der solubilization in GUVs SM / Cer durch Fluoreszenz-Mikroskopie beobachtet, dass in den Prozess der solubilisation der Triton X-100, die auf einem Vorzugspreis Grundlage für die SM-reiche Domains ohne dass dies Auswirkungen auf die scheinbare Domains Ceramid reichen. Das letzte, was wir waren die Auswirkungen untersucht, der den Ceramiden lange Kette (Cer16) und kurze (Cer6 und CEr2) in der Lipid-Membranen. Durch Studien über die Überzieher, es wurde festgestellt, dass sowohl die Cer2 als Cer6, verhielt sich wie anfifilos löslich, so dass sie in der Lage sind solubilizar Überzieher und bicapas, konnte aber nicht vollständig solubilizar bilayer. Mit anderen Techniken (DSC, 31P-RMN, und X-ray diffraction), studierte wir den Effekt, dass diese produziert Ceramide in der Übergangsphase Gel-fluido und lamelar-Sechskant von Phospholipiden. Die Ergebnisse zeigten, dass es zwei Arten von Interaktion ceramida-fosfolípido, entsprechend den Ceramiden lange oder kurze Kette. Vertreter können als charakteristisch für diese beiden Klassen der Cer16 und Cer2. Die Cer16 gemischt wenig mit Phospholipiden in der Gel-Phase, obwohl solubilizaba flüssigen Phase. Außerdem wird der Übergang lamelar-hexagonal. Im Gegensatz dazu, die Cer2 gut gemischt mit Phospholipiden in der Gel-Phase, flüssige Phase der Stabilisierung. Die Cer6 Zwischenziele Eigenschaften zeigen.

Autor: CONTRERAS GÓMEZ FRANCESC-XABIER.
Jahr: 2005.
Universität: PAÍS VASCO [www.ehu.es].

Inhaltsangabe: Diese These wurde die Untersuchung der Veränderungen sowohl durch die Tätigkeit als esfingomielinasa Ceramiden, die Struktur und die physikalischen Eigenschaften der Zellmembran. Zu diesem Zweck hat sie beobachtet worden, wie Cholesterin erlaubt den Abbau von esfingomielinasa auch bei Temperaturen unterhalb der Temperatur des Übergangs Gel-fluido der esfingolípido durch die Bildung von Phasen líquido-ordenadas. Darüber hinaus wurde beobachtet, wie Ceramiden, die bereits in situ durch die esfingomielinasa, oder bereits hinzugefügt extern induzierte Bewegung trasnbicapa (Flip-Flop) Lipide in biologischen Membranen und Membran-Modell. Schließlich, so beschreibt er, wie die Ceramide scramblasa hemmen die Aktivität der Membranen durch einen unabhängigen Mechanismus der PKC, und befindet sich mit der scramblasa in apoptotischen Zellen.

Autor: LORIZATE NOGALES MAIER.
Jahr: 2005.
Universität: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Ort der Lesung: UNIVERSIDAD DEL PAIS VASCO.
Ort der Vorbereitung: UNIDAD DE BIOFÍSICA (CENTRO MIXTO CSIC-UPV).

Inhaltsangabe: Diese These hat sich in der Studie der Regionen ectodominio gp41 von HIV-1, die die Fähigkeit zur Interaktion mit Membranen. Insbesondere ist die Anerkennung von Antikörpern verwendet als Kriterium für die Festlegung der Staaten, die in der Membran oder physiologisch relevanten Lösung. Die Reihenfolge Domain-Schnittstelle (preTM), die sich neben Membran stabilisiert oligoméricos wie in den verschiedenen Phasen des Proteins in der virión. Darüber hinaus ist die epítopo Anerkennung durch die neutralisierende Antikörper 4E10, die in der Sequenz, die erkennen epítopo mitten in der Membran Typ Flöße. Schließlich, so wurde festgestellt, dass auf der Bühne des nativen Proteins gp41, und die Fusion Peptidsequenz nfipática und angrenzend an den Domain-Schnittstelle (preTM), USAID, interagieren, und dass diese Interaktion würden einige dieser komplexen Löslichkeit und damit verhindert, In den Prozess katalysierte Fusion von gp41, Sequenzen, die viel Affinität für Membranen interagieren nicht mit ihm, bevor sie aktiviert werden. Darüber hinaus würden diese Interaktion schaffen eine Struktur nicht leicoidal in der Region AID Struktur von der neutralisierenden Antikörper 2F5.