LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE LES MALADIES DES VÉGÉTAUX

Auteur: BARAJAS RAMÍRES DANIEL.
Année: 2004.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS (CSIC).

Résumé: La plupart des virus sont capables d'induire chez les plantes qui infectent une réponse du gène silencieux, qui avait servi sur la plante hôte comme un mécanisme de défense naturelle contre le virus. Dans le même temps, de nombreux virus capable de se battre en produisant des protéines qui interfèrent avec le mécanisme du gène silencieux. L'équilibre entre l'induction de l'antiviral défense de la plante, en se fondant sur des gènes silencieux, et de la suppression de cette défense par des virus, est probablement l'un des facteurs qui déterminent le cours d'une infection virale. Dans cette thèse a été utilisée plantes transgéniques exprimant les séquences de protéines pour la faire taire gène suppresseur postranscripcional (PTGS) HC-Pro virus de la sharka ou virus de la variole du prunier (PPV), afin d'étudier le processus de gene silencing induit répondre à ce transgène et de la Effets possibles de la protéine HC-Pro, encodé par le transgène, le silencieux et le gène de résistance au virus. Grâce à notre système, nous voulions fournir de l'information sur l'équilibre entre le potentiel d'induction et de la répression du gène silencieux par des virus. Il transforme les plantes Nicotiana benthamiana constructions gène dérivé de HC-Pro de PPV. Il a utilisé une version traduisible (HCt), conçue pour produire la protéine HC-Pro, et une autre version n'est pas traduisible (HCn). Elle détermine les niveaux d'expression de la protéine HC-Pro dans plusieurs lignes HCt obtenus, ainsi que la capacité de la protéine HC-Pro exprimé réprimer silencieux génico.La HC-Pro protéine exprimée dans plusieurs lignes HCt n'avait aucun pouvoir d'influer sur le gène Silencieux testé dans un certain nombre de systèmes. Nous avons étudié la résistance du câble à péage dans les plantes transgéniques HC-Pro. Nous avons identifié deux lignes HCt et deux autres HCn avec une forte proportion de plantes résistantes PPV et PVX-HCT, un virus dérivé de chimérique PVX qui porte le gène HC-Pro de PPV. Résistance à la PVV et PVX-HCT, un virus dérivé de chimérique PVX qui porte le gène HC-Pro de PPV. Résistance à la PPV en corrélation avec de faibles niveaux d'accumulation de l'ARNm transgène dans la présence de petits ARN d'interférence (siRNA) et de transgène spécifique du transgène silencieux d'un gène gusA, qui a homologie avec la partie 3 'du transgène HC-Pro. Tout cela donne à penser que la résistance au câble à péage est le résultat d'un gène silencieux postranscripcional induite par le transgène HC-Pro partie des plantes transgéniques. Nous avons étudié les facteurs génétiques qui déterminent gène silencieux du transgène HC-Pro dans une proportion de plantes résistantes ligne HCt2 PPV. La résistance est génétique et probablement déterminé par la présence d'un locus spécifique transgène HC-Pro entre plusieurs loci dans le línes HCt2, comme suggéré par la proportion de plantes résistantes PPV près de 3 / 4 du total et la présence de deux loci de Le transgène dans le secteur non-plantes résistantes PPV. Il a également étudié la répression du gène silencieux du transgène HC-Pro par PVY infection par le virus, ou le CMV, et son effet sur la résistance du câble à péage. Ces deux virus sont capables de réprimer gene silencing du transgène HC-Pro. En outre, dans le cas de l'infection par le CMV, nous avons été en mesure de prouver la suppression de la résistance du câble à péage. Résultats 8 obtenid 453 ans, sont examinés du point de vue de l'éventuel rôle de la protéine HC-Pro le gène silencieux subi par le transgène qui encode. Dans le cadre de ce travail supplémentaire, mis à l'épreuve la capacité de lever des gènes silencieux de la protéine p29 champignons CHV1 virus chez les plantes. Cette protéine partage certaines des caractéristiques typiques du gène suppresseur de musellement des plantes et des animaux. Meidante plusieurs essais n'ont pas permis de démontrer l'activité suppresseur de faire taire par géncio protéine p29 dans les plantes, mais ce fait ne permet pas d'éliminer la possibilité que p29 fonctionner comme un gène suppresseur de silencieux dans la levure.

Auteur: GÓMEZ VIDAL SONIA DOLORES.
Année: 2005.
Université: ALICANTE [www.ua.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: DEPARTAMENTO CIENCIAS DEL MAR Y BIOLOGÍA APLICADA.

Résumé: Les thèses comprend l'étude de la colonisation endofítica du champignon entomopathogène Beauveria bassiana, Lecanicillium dimorphum et L. Cf. Psalliotae, quitte Phoenix dactylifera L. Elle a été évaluée au histologique, biochimique et moléculaire, l'impact d'un tel comportement endofítico sur les mécanismes de défense de P. Dactylifera, pour application dans la lutte biologique. Les champignons entomopathogènes survécu endofíticamente dans inoculé feuilles de P. Dactylifera inondations terrain pendant au moins 30 jours. Les champignons ont été isolés jusqu'à trois centimètres au lieu de l'inoculation, en l'absence de symptômes ou d'anomalies dans l'apparence des feuilles et le reste de l'usine. Les champignons colonisés principalement tissus parenchymatous, de plus en plus dans les espaces internationaux et intracellulaire, et les faisceaux vasculaires sans causer de dommages au niveau cellulaire. Toutefois, P. Dactylifera répondu à la colonisation endofítica grâce à l'accumulation de phénols, les dépôts de protéines et de modifier les parois des cellules parenquimáticas colonisés. Colonisation endofítica aussi modifié les niveaux d'expression des protéines de P. Dactylifera. Par protéomiques études, comparant proteomas tissus inoculés avec les champignons entomopathogènes, proteomas tissus non inoculé, notant que la colonisation endofítica éventuellement favorise réponses défense P. Dactylifera. Dans l'étude, a développé un modèle d'interaction entre les champignons non pathogènes et de la seule famille de monocotylédones avec transportant arbre et d'une grande importance au niveau mondial. Ce modèle a des applications dans la lutte biologique contre les ravageurs et les maladies, et des études sur les interactions plantations microorganismo au niveau cellulaire, biochimique et moléculaire.

Auteur: COTXARRERA VILAPLANA MARIA LURDES.
Année: 2005.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: UNITAT DE FISIOLOGIA VEGETAL. DEPARTAMENT DE BIOLOGIA VEGETAL.

Résumé: L'utilisation d'herbicides et de la protection des végétaux a été et est encore aujourd'hui, un outil très utile dans l'agriculture. Toutefois, il présente de nombreuses difficultés, et, par conséquent, la législation régissant leur utilisation est de plus en plus restrictives. Dans ce scénario, il est nécessaire de développer de nouvelles techniques propres à assurer un contrôle efficace des maladies à un risque plus faible, et plus conforme aux critères de durabilité. Dans ce papier, nous avons analysé l'efficacité de l'utilisation des milieux de culture formulée composts et Trichoderma asperellum T34 pour le contrôle des campus podredura concombre causée par Rhizoctonia solani et à la fusariose vasculaire tomate causée par Fusarium oxysporum f.sp. Lycopersici. D'autre part, a eu lieu le développement d'outils moléculaires pour le suivi spécifique des agents de contrôle biologique du genre Trichoderma spp.en substrats de culture. Nous avons analysé la possibilité d'éliminer les déchets du marché du compost produit avec les boues d'épuration des eaux usées et des déchets d'élagage (METROCOMPOST) épuisé substrat de compost pour la culture des champignons, alperjuo compost, du compost sous-produit de la fabrication du liège, du compost et de sous-produit de l'industrie a produit l'alcool (compost Vigne). Dans les tests de contrôle de l'efficacité podredura campus concombre capacité nominale de suppression des composts âgés entre six mois et un an (composts jeunes), et âgés de un et demi à trois ans (compost mûr). Le développement d'outils moléculaires pour le suivi précis de la T34 a été la découverte d'un fragment d'ADN caractéristique des T34 par amplification aléatoire par RAPD une collection de 51 isolats de Trichoderma spp., Et la conception d'amorces spécifiques pour le fragment caractéristique détecté. En outre, pour la quantification spécifique de la souche de Trichoderma hmatum th382 dans la culture des médias mis au point une procédure fondée sur la technique de PCR en temps réel d'amplification avec amorces spécifiques. La fusariose vasculaire tomate pourrait être contrôlée efficacement grâce à l'utilisation de compost METROCOMPOSTS, et l'inoculation de l'agent de contrôle biologique pour T34. Le compost METROCOMPOST entraîné une forte fugistasis pathogène. Leur capacité de l'enlèvement était lié à la suite de facteurs biotiques et abiotiques: légère pH élevé, haute conductivité électrique, d'abondantes populations de bactéries et de l'activité microbiologique élevé. L'agent de contrôle biologique T34 traduit par une forte inhibition de la croissance de la FOL. Spécialement d'être mis en œuvre deux semaines anteriorida inoculation de l'agent pathogène. En termes de podredura campus concombre, seuls les jeunes METROCOMPOST composts et de liège a permis d'obtenir un niveau de contrôle significatif de la maladie, alors que tous les composts plus d'un an et demi analysé déposé une capacité de contrôle des maladies hautement efficace. Inoculation T34 amélioration de la capacité d'élimination des composts jeunes champignons et de liège, et les composts matures dans lesquelles l'incidence de la maladie a été plus élevé. Les amorces conçues pour T34 permis de différencier la souche antérieure d'une collection de 9 souches de Trichoderma spp., La démonstration du degré élevé d'spécifié obtenus. Enfin, la procédure de PCr temps réel mis au point pour la quantification des Th382 donné des résultats équivalents à la technique de dilution en suspension substrat échantillons inoculés avec des densités de l'ordre de 10 6 conidies / ml substrat.

Auteur: PUJOL ABAJO MARTA.
Année: 2006.
Université: GIRONA [www.udg.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAT DE CIÈNCIES ECONÒMIQUES I EMPRESARIALS.
Lieu de préparation: UNIVERSITAT DE GIRONA.

Résumé: Erwinia amylovora est une bactérie fitopatógena causant d'importantes pertes économiques dans la production de poires et de pommes au niveau mondial. Traditionnellement, le contrôle du feu bactérien a été menée par des produits chimiques, pour la plupart réalisés avec des composés de cuivre, ou d'antibiotiques en fonction de la loi dans chaque pays. Cependant, l'utilisation répétée de pesticides chimiques a conduit à des effets indésirables tels que l'apparition de souches résistantes et de la présence de résidus dans les denrées alimentaires et l'environnement. Pour cette raison, nous avons développé des méthodes alternatives de contrôle comme la lutte biologique. Dans le groupe de phytopathologie à l'Université de Girona a été choisi et met au point l'agent de lutte biologique contre le feu bactérien Pseudomonas fluorescens EPS62e pour sa grande efficacité dans le contrôle des infections causées par E. Amylovora immatures dans les fruits, les fleurs et plantes poire. Dans le but d'aider le développement de l'agent de lutte biologique P. Fluorescens EPS62e, cet ouvrage a été conçu une méthode de traçabilité moléculaire basée sur la PCR en temps réel et évalué la colonisation et la survie de la souche EPS62e après leur inoculation dans le domaine de pomme et de poire. Le développement d'une méthode de PCR en temps réel en cause (i) la détection des polymorphismes dans le génome de EPS62e, (ii) la sélection de fragments amplifiés EPS62e discriminatoires à l'égard des autres souches pour la conception d'amorces SCAR (Sequence Caractérisés Amplified Régions) , (Iii) l'évaluation de la spécificité des amorces SCAR, et (iv) la conception d'une PCR en temps réel dans une région de séquence interne SCAR. Pour détecter certaines séquences sont naturellement présents dans le génome de EPS62e utilisé deux méthodes basées sur la PCR qui ne nécessitent pas de connaissances préalables de l'amplification du génome de plusieurs arbitraire (RAPD) et le PCR non spécifiques (U-PCR). Grâce à ces deux techniques d'amplification des profils ont été obtenus qui ont permis à la discrimination EPS62e contre d'autres souches de la même espèce. Il secuenciaron trois pièces d'amplification spécifique d'EPS62e obtenues à l'aide de RAPD-PCR et U et une paire d'amorces conçues dans chaque séquence d'obtention SCAR markers. La spécificité des amorces SCAR a été évalué par 161 souches de la même espèce, au sein de 75 souches d'espèces apparentées et 61 échantillons de légumes fermes commerciales. Sur les trois paires d'amorces conçues SCAR, les deux couples sont tout à fait spécifiques pour la détection des EPS62e, alors que la troisième paire de SCAR primers montrait pas aussi spécifiques que les ajouts ont été obtenus dans d'autres souches de la même espèce. Depuis les deux marqueurs ont été conçus spécifiquement SCAR deux PCR en temps réel des sondes de type TaqMan ®. Ces deux conceptions de PCR en temps réel étaient spécifiques EPS62e, avec un niveau de détection de 102 UFC / g de poids frais, et une courbe standard linéaire de l'ordre de cinq unités logarithmique. Durant le développement et l'optimisation de la PCR en temps réel a été procédé à une étude de traçabilité de la population de EPS62e arables, la poire à feuilles ambiante contrôlée par deux couplés avec les techniques classiques PCR. Ces deux techniques sont fondées sur le comptage des viable plaque (RVP) et le nombre le plus probable (NPP) en milieu sélectif, suivie par PCR avec des amorces SCAR. Les deux techniques sont utiles pour retracer EPS62e, car il n'y avait pas de différences significatives entre les valeurs estimées par les deux techniques. Le niveau de EPS62e arables, la population a diminué progressivement, passant de 107 à 105-104 UFC / g de poids frais pendant les 17 premiers jours, puis est resté stable pendant 11 jours jusqu'à la fin du procès. Malgré la pertinence de ces deux techniques de localisation 8 EPS62e, 10c5 RVP a été sélectionné dans le milieu sélectif pour les essais suivants. La PCR en temps réel a été méthode validée de la façon dont la traçabilité des EPS62e grâce à l'utilisation simultanée de la méthode de RVP dans diverses expériences en matière de fleurs et de feuilles de pomme, et les résultats ont été statistiquement comparées et contrastées. Les expérimentations ont été conduites en conditions de serre et sur le terrain dans la région du Maine (France) au cours du printemps 2004. Les résultats obtenus avec des fleurs Apple a montré une bonne corrélation entre les niveaux de population estimés par PCR en temps réel et RVP. L'agent de lutte biologique efficace EPS62e était un colonisateur de fleurs Apple, pour atteindre le niveau élevé de la population se situant entre 107 et 108 UFC / corimbo. Cette population est restée au cours de la cuajado et le développement des fruits, 54 jours après le traitement, où jusqu'à 99% de la population de la région était limité calice du fruit. Toutefois, les résultats obtenus avec des feuilles de pomme étaient totalement différentes, comme la population les niveaux de EPS62e diminué au fil du temps. À quitte Apple, les valeurs estimées par PCR en temps réel était sensiblement différente de la valeur obtenue par le RVP. Globalement, les valeurs de la PCR en temps réel a été supérieure aux valeurs de RVP. Cette différence entre les méthodes a été attribuée à deux causes possibles: l'entrée dans un Etat viable, mais non arables (VBNC), d'une partie de la population de EPS62e peut entraîner une sous-estimation de RVP, et la présence de l'ADN non dégradé à partir de cellules mortes peuvent provoquer Une surestimation par PCR en temps réel. L'utilisation combinée des méthodes moléculaires et cultivo dependientes-EPS62e a été montré que dans des conditions optimales de la colonisation et de fleurs d'Apple est probablement en situation de stress et de difficultés à survivre sur les feuilles de pomme. Adaptabilité de EPS62e épiphytes dans la pomme et la poire a été évalué dans des conditions de terrain à Gérone au cours du printemps 2005. Nous avons évalué divers facteurs susceptibles d'influer sur son avenir et son éco-efficacité après avoir été libéré sur le terrain, l'influence des conditions climatiques, l'espèce de plante hôte, l'influence des micro-organismes autochtones, et à sa capacité de se propager d'arbres non traités jusqu'à Arbres. Il n'y avait pas de différence entre le modèle de la colonisation et les niveaux de population des EPS62e dans les fleurs de pommiers et de poiriers. L'agent de lutte biologique avec succès colonisés fleurs appartenant à deux espèces, avec des niveaux élevés de population comme cela avait été observé dans des études antérieures menées en France, pour atteindre la capacité de charge microbienne des fleurs à 107-108 UFC / corimbo. Les conditions climatiques semblaient être idéal, car il n'est pas observé aucun changement brusque des niveaux de population au cours des essais. EPS62e a réussi à coloniser et dominer le micro de fleurs, ce qui représente jusqu'à 100% de la surface arable totale microbiotes quelques jours après le traitement. En outre, EPS62e a été détecté dans toutes les fleurs non traitées situé entre 15 et 35 mètres du site d'inoculation, montrant une bonne aptitude à se propager. Même dans ces conditions, la population de EPS62e Apple feuilles dans des conditions de terrain ont diminué au fil du temps à être au-dessous de la limite de détection de la technique de 30 jours après le traitement. Ce travail montre que la souche EPS62e est bien adaptée à la colonisation de fleurs sur le terrain, d'encourager leur utilisation dans une stratégie de lutte biologique contre le feu bactérien.

Auteur: SACRISTÁN PÉREZ MINAYO GONZALO.
Année: 2006.
Université: BURGOS [www.ubu.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: Les bactéries qui favorisent la croissance de la plante, connue sous le nom de PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria), se caractérisent par rizobacterias qui colonisent les racines des plantes et de stimuler la croissance des plantes de façon significative la fois directement et indirectement. L'objectif général de cette thèse est l'identification et la caractérisation moléculaire et microbiologique des PGPR et l'étude de leur implication dans la santé et la production agricole. L'objectif est d'évaluer l'utilisation de ces rizobacterias dans la production agricole de la betterave à sucre, les courges et les tomates, ainsi que de contribuer à l'étude des méthodes de contrôle des maladies des végétaux, en particulier la capacité de contrôle biologique de ces agents pathogènes des plantes PGPR visage. Elle vise également à étudier et à évaluer les capacités de contrôle par rapport à Rhizoctonia solani Parasite, et Ralstonia solanacearum Meloidogyne incognita, tous ces agents pathogènes rizosféricos. La souche utilisée dans cette thèse a été Pseudomonas fluorescens PfO - 1 exerçant des effets bénéfiques sur la betterave à sucre, de tomates et de potiron, non seulement dans la stimulation de la croissance des plantes, mais aussi dans la lutte biologique contre les pathogènes végétaux. La production de saccharose dans la betterave à sucre a augmenté de cultures et optimisé avec l'inoculation de PGPR. Utilisation de Pseudomonas fluorescens PfO - 1 est efficace contre Rhizoctonia solani et il semble que stimulé un mécanisme de résistance acquise systémique à Meloidogyne incognita, devant la tomate. Avec les résultats semble raisonnable d'envisager Pseudomonas fluorescens PfO - 1 comme un PGPR dans ces cultures. L'utilisation de PGPR dans les tomates, betteraves à sucre et de squash, cela est possible et bénéfique, non seulement dans l'augmentation de la production agricole, mais aussi dans la performance globale, et peut-être de plus faibles coûts. En outre représente une alternative à l'utilisation des produits phytopharmaceutiques, car elles sont parfois utilisées abusivement. Ces techniques de contrôle biologique sont plus compatibles avec le développement d'une plus rationnelle et l'agriculture durable.

Auteur: ROMERO HINOJOSA DIEGO FRANCISCO.
Année: 2006.
Université: MÁLAGA [www.uma.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: Le mildiou est la plus fréquente des maladies fongiques en cucurbitacées cultures dans le monde. Dans le sud de l'Espagne Podosphaera fusca a été décrit comme le seul agent étiologique de la maladie. Le développement de la résistance des pathogènes nombre des fongicides et de la demande de l'agriculture commerciale plus respectueux de l'environnement, située au contrôle biologique parmi les plus intéressants des stratégies alternatives de contrôle de garder à l'esprit. Dans cette thèse nous plante évaluer la possibilité de contrôler le mildiou à l'aide de différents agents biologiques et élucider les mécanismes par lesquels mené son action inhibitrice. Dans la première partie de cette étude, nous avons retenu deux champignons microparásitos, Ampelomyces quisqualis et Lecanicillium lecanii et 4 souches identifiées comme par Bacillus subtilis en sa capacité à contrôler la maladie avec succès dans des expériences in vitro,. Plus tard, dans des tests avec des semis de melon, tenue à huis clos de culture, nous voyons que l'humidité relative des valeurs supérieures à 90% favorables à l'activité biologique de ces agents biologiques. Enfin, la capacité antogonista de ces agents biologiques a été confirmé par des tests de melon tenue plantes de la serre, où les taux ont été obtenus contrôle de la maladie sont similaires à ceux obtenus par un produit chimique utilisé comme fongicide. En ce qui concerne les mécanismes d'action des employés, en utilisant différentes techniques de microscopie ressembler à A.quisqualis comportées comme endoparásito et biótrofo stricte, tandis que l.lecanii agi comme ectoparásito, montrant également une étape de la vie saprofita. Pour confirmer le rôle des antibiosis dans l'activité biologique des souches de B.subtilis, des expériences ont été menées avec filtré exempt de cellules bactériennes obtenu des réductions de la maladie autour de 90%. Comme le même temps, nous voyons est dans la réduction des symptômes de la maladie sont associés à une réduction similaire du taux de germination des conidies de P.fusca due à l'induction de dommages morphologiques et cytologiques en fin de compte responsable de leur incapacité à germer. Grâce à l'utilisation de différentes techniques d'analyse identifier la production d'antibiotiques lipoptídicos. La capacité de ces composés purifiés d'inhiber la germination des conidies de P.fusca appuyé sa participation à l'activité de biocontrôle. Enfin, par mutagenèse dirigée à perturber la production de ces composés, nous confirmons que lipopéptidos la famille de ituínas et genficinas sont essentiels dans le bioterrorisme activité de ces souches B.subtilis. Les résultats obtenus dans cette thèse suggère que certains agents biologiques sont de bons candidats à l'inscription au contrôle intégré des programmes de lutte contre le mildiou de curcurbitáceas.