AMELIORATION DES ANIMAUX

Auteur: URDANETA VARGAS AIXA EFRAILDA.
Année: 2004.
Université: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE VETERIANARIA.
Lieu de préparation: ESCUELA DE POSTGRADO.

Résumé: Afin d'améliorer la production des embryons in vitro à (PIVE) ovocytes de chèvre perpúber, trois études ont été conçues dans cette enquête. Le but de la première étude était de déterminer dans ovocytes sélectionnés par le test de crésol lumineux bleu (BCB), l'effet de l'ajout de glutathion (GSH), seul ou en association avec glusoca le milieu de culture in vitro, (CIV), le développement embryonnaire D'ovocytes de chèvre perpúber. Les ovocytes ont été exposés à un essai BCB et ont été classés comme suit: ovocyte cytoplasme de bleu (BCB +) et le cytoplasme d'ovocytes sans le bleu (BCB). Les ovocytes BCB + a montré plus élevé de maturation nucléaire ovocytes BCB - et le groupe de contrôle (82,6%, 55,7% et 74,7% respectivement). Le pourcentage d'ovocytes poliespérmicos était plus élevé dans les ovocytes BCB - que la BCB +. De la supplémentation en milieu de culture (CIV) avec 1 mM de GSH n'affecte pas le développement embryonnaire, mais le pourcentage total d'embryons développé après la récolte a été plus élevé en ovocytes dans BCB BCB + -, indépendamment de la supplémentation en GSH. L'ajout de glucose, seul ou avec d'GSH n'affecte pas le développement embryonnaire. L'objectif de la deuxième étude était d'évaluer l'effet de l'ajout de différentes concentrations de cystéamine (100uM, 200uM ou 400uM) Middle d eMIV et moyens de CIV (50uM ou 100uM) sur le développement embryonnaire des ovocytes de chèvre perpúber choisis par le BCB essai. L'ajout de 400 uM cystéamine Moyen MIV amélioré la fécondation et du développement embryonnaire normale d'ovocytes BCB - pour les mêmes niveaux d'ovocytes BCB +. Les proportions des morulae plus développés blastocyste n'ont pas été affectées par les traitements. Enfin, on a étudié l'effet de l'ajout de la cystéamine (400uM) et le milieu de MIV, glutathion (1mM) Middle FIV et ionomicina la moyenne sperme qualification. Ce traitement amélioration de la fécondation normale zygotes avec pronúcleos homme et le développement embryonnaire d'ovocytes chèvre prepuber, mais n'a pas amélioré l'élaboration blastocyste.

Auteur: ANDRADE MARTINS DE CARVALHO BESSA ANA CELESTE.
Année: 2004.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE VETERINARIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE VETERINARIA.

Résumé: L'objectif de cette étude était d'évaluer les effets sur la mobilité, l'intégrité de la membrane plasmique et acrosomal, niveau de formation, et mitochondriale activité acrosomal réaction, présente intégrant différents crioprotectores de diluants pour refrigeración'y gelés sperme canin. À cet effet ont été menées 4 expériences, dans laquelle le sperme conservé par réfrigération et congélation ont été analysés par les méthodes classiques, et en fonction de l'expérience, des essais supplémentaires pour évaluer la fonctionnalité du spermatozoïde, et notamment: - motilidad déterminé par le système SCA @ 2002, - intégrité de la membrane plasmique déterminé par essai endósmosis ou colorées en fluoroeromo iodure propididum (IP) et l'éosine de coloration, - intégrité de acrosoma déterminée par la coloration spécifique Spennac @ lectine ou fluorescents Pisum Sativum (PSA) et Arachis hypogées (NPA), - Cstado formation elortetraciclina (CCT), - actividad mitochondriale par tineión avec Rodaminal23 (R123) - aptitude et l'expérience acrosomal réaction de l'incubation avec le calcium ionóforo A23187 et leetinas fluorescentes. Les résultats pour chaque variable est eon'elacionaron un de l'autre dans chaque expérience. Pour exécuter ces expériences ont été utilisés poules de sperme obtenu auprès de la fraction espennática différents eyaeulados du 19 penos entre 2 et 7 ans, de races différentes et de la fertilité testé auparavant. La sélection des eyaeulados a été réalisée en tenant compte d'une mobilité totale de plus de 80%, progressif motilité de plus de 70% et le pourcentage d'anomalies morphologiques moins de 20%. À l'expérience, j'ai apprécié l'incorporation des acides aminés solvant refroidissement Tris fructosa - ácido citrique et 20% jaune (moitié de contrôle) et a été proposé rcduceión la concentration de jaune. Les résultats suggèrent que la supplémentation avec la taurine à 30 et 5OmM ne prévoit que de légères améliorations motilité espem1átiea et que l'ajout de 30mM de Taurine a contribué à réduire la S'10el proportion de jaune, pas de différences significatives avec les moyens de contrôler le jour 7. Seules des différences significatives ont été observées entre les diluants contenant 20 et 10% de pointe pour la visuellement estimatif total motilité dans les jours 2 et 3 (P moins O OO1). Il ya eu des hautes et importantes gèle catre résultats motilité estimé visuellement et par le biais de l'analyse, que les résultats de l'essai hipo - ósmosis (-r entre 0703 et 0976, la hausse pO Ol). Le marquage avec la CCT a permis de différencier les statistiques pour le modèle SR sperme réfrigéré dans diluants avec 20% jaune O, 30 YSOmM de la taurine, en diluant avec 30mM qui induit un pourcentage plus élevé dans les plus brefs délais (14,67%, le CN jour 3, P = 0007). La deuxième expérience a été menée afin d'évaluer la capacité des etilénglieol comme eríoprotector dans le solvant gel de sperme canin, alternativement ou associés à de glycérol ou de pâtes Equex @. Utilisation etilénglieol a14% motilité donne des résultats similaires à ceux obtenus avec 8% glycérol, mais est néfaste lorsqu'il est utilisé à 8% (P plus O O5). Ajout Equex STM S @ Coller avec un solvant% etilénglicol améliore les résultats par rapport a14% etilénglicol ou 8% glycérol (-p davantage O O5). Utilisation etilénglicol pas obtenu de meilleurs résultats que le solvant Uppsala - Equex (cc Glycérol% S et O, 5% de Equex - STM Coller), qui pennite augmenté la survie cellulaire après descongelac 8 ionique. En 839 la troisième expérience ont été comparés avec les résultats de l'évaluation de l'activité mitoeondrial espelmátiea, à l'aide eitometda flux après coloration avec RI23 liés à la propriété intellectuelle, à l'évaluation de la vitalité par tineión avec eosina - nigrosina et motilité estimé subjectivement; pouvoir établir haute eonelaeioncs Y compris (1'de 0992 à 0999, P supérieur O O1). Dans la quatrième expérience étudié l'impact du gel supplémentaire diluant Uppsala - Equex avec les acides aminés de taurine ou hipotaurina lien aO, 25, 5Oy 75mM dans divers aspects des fonctions espelll1áticas. On a obtenu une influence significative sur la motilité espennátiea Toutefois, l'ajout de 25mM de hipotaurina introduit une valeur sensiblement plus faible facteur ALH après 2h en incubation à 38Â ° C (P = 0021), tout en ajoutant 5OmM de hipDtaurina a donné lieu un plus grand% de cellules Espontáneamcnte reaccionadas (PI - PSA +) immédiatement après décongélation après 1:30 heures à l'incubation et à 38Â ° C (P = O OOIy 0004, respectivement). De plus, l'ajout de 2,5 et 10 1Mde de calcium ionóforo à canins sperme décongelé et incubé pendant 20min à CCM à 38Â ° C autorisée induire une augmentation de la réaction aerosómica vcrdadera (PI - PNA +) après S, IS et 30 minutes, mais en ineubaeión, Il a été possible ohservar différences (p = O, FS) dans le pourcentage de réactions acrosómicas à ISmin d'incubation avec 2,5 Â ¡1Mde ionóforo; atteignant solvant avec 5OmM - Taurina plus fort pourcentage par rapport à diluycntes avec 7SmM - Taurina, 25 et 50mM - Hipotaurina et Aucune différence en comparaison avec un solvant. Ces diluants avaient entre 19 et 22% de moins que le contrôle RA.

Auteur: FERNANDEZ SANTOS MARIA DEL ROCIO.
Année: 2005.
Université: CASTILLA-LA MANCHA [www.uclm.es].
Lieu de l'exposition: E.T.S. DE ING. AGRO. DE ALBACETE.
Lieu de préparation: INST. DE INVES. EN REC. CINEG (IREC).

Résumé: Le protocole pour la congélation des échantillons espermáticas epididimarias utilisé jusqu'ici a été pratiquement la même que pour le séminal échantillons provenant eyaculados animaux de compagnie. L'objectif global de ce travail a été orientée vers l'adaptation de ces protocoles pour l'utilisation avec des échantillons espermáticas epididimarias de cerf ibérique, dans le but d'améliorer l'efficacité de même pour ce type d'échantillon. Tout d'abord, nous avons étudié l'effet combiné de deux variables - la vitesse de refroidissement et de la concentration du jaune d'oeuf dans le solvant sur la survie des spermatozoïdes epididimarios réfrigéré. Une fois connus les effets du jaune d'oeuf sur le sperme epididimarios en réfrigération, nous avons décidé de les étudier au stade de la cryopréservation. À cette fin, d'une part, une expérience a été conçu pour déterminer quelle concentration et le mode de préparation du jaune d'oeuf (contre centrifugé complète) ont été les plus adaptées pour la congélation des spermatozoïdes epididimarios des chevreuils. D'autre part, nous avons étudié les effets combinés des trois variables sur congelabilidad d'échantillons espermáticas epididimarias Deer ibérique: la concentration du jaune précisé concentration finale du glycérol et vitesse de refroidissement de 22 Â ° C à 5 Â ° C. Ensuite, on étudie l'influence De divers crioprotectores bien que la température ajoutant crioprotector (22 Â ° C - temperatura ambiente - ou 5 Â ° C) sur la congelabilidad tels sperme. En poursuivant notre objectif d'optimiser le protocole pour la congélation des échantillons espermáticas epididimarias des cerfs, nous avons effectué deux autres expériences. Le premier, conçu pour déterminer la plus appropriée de solvant osmolalité (Tris citrato - fructosa) et le second, d'étudier les effets de l'ajout de sucre de solvant congélation. Enfin, nous avons étudié les différentes solutions possibles de l'effet protecteur des antioxydants au cours de la cryoconservation de sperme epididimarios Deer ibérique. Après les résultats de cette thèse, nous proposons que la congélation des spermatozoïdes epididimarios Deer ibérique est effectué à l'aide d'un solvant Tris citrato - fructosa complété avec 20% de jaune clarifié et une concentration finale de 6% de glycérol. Le glycérol peut être ajouté à la température ambiante (22 Â ° C), et le refroidissement doit être rapide (? 4,2 Â ° C / mn). Nous suggérons l'ajout de l'antioxydant enzymes diluant le gel, ce qui assurerait une plus grande protection pour les doses gelés.

Auteur: CIUDAD LADRERO MARIA ANGELES.
Année: 2005.
Université: ZARAGOZA [www.unizar.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE VETERINARIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE VETERINARIA.

Résumé: Le principal objectif de ce travail était de déterminer les facteurs qui entourent AI moutons de race Rasa Aragonesa dans le programme Choix pour prolificité de l'UPRA-Oviaragón, qui influencent leur vie reproductive résultats. Ces facteurs ont été regroupés en 3 types: celles qui touchent son propre AI féminine (âge, condition corporelle, l'intervalle entre les naissances et les précédentes AI), auxquels elles se rapportent à la très technique (durée du traitement progestativo, lorsque l'insémination S'agissant de la préparation des doses séminales et de respect à la fin du traitement progestativo, solvant utilisé, inseminador, etc.), Et celles qui ont à voir avec les facteurs liés à l'exploitation et la gestion en agriculture (fécondité moyen de la ferme, Marge brute de l'agriculteur expérience dans l'utilisation de cette technique, etc.). Parmi ces facteurs, les plus influents sont l'âge de l'ovin (meilleur résultat de 2 à 3 ans), le solvant (de meilleurs résultats avec du lait écrémé que Tris-tes de plus de 6% de jaune d'œuf et 3% de glycérol), l'âge de Étalons (de meilleurs résultats avec les âges de 27 à 72 mois), le CC du mouton (de meilleurs résultats avec CHD entre 3 et 3,5); moment de l'insémination (IA de meilleurs résultats si elle est menée dans le Top 5 heures après la préparation du sperme et De 54,75 heures après la fin du traitement progestativo). Enfin, nous avons étudié l'effet de la saison sur la reproduction des résultats de l'IA, tels que de meilleurs résultats entre juillet et octobre.

Auteur: CARDOZO CERQUERA JAIME ANTONIO.
Année: 2005.
Université: ZARAGOZA [www.unizar.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE VETERINARIA.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA.

Résumé: L'objectif général de cette thèse est d'approfondir la connaissance des protéines du plasma séminal et de la membrane plasmique des spermatozoïdes des moutons, des composants essentiels pour le bon fonctionnement de sperme. La technique utilisée, permet à l'électrophorèse bidimensionnelle de caractériser des mélanges complexes de protéines, l'identification des changements qualitatifs et quantitatifs dans la réponse cellulaire aux variations ambiéntales. La caractérisation de la protéine à la fois le profil du plasma séminal, comme la membrane plasmique des spermatozoïdes moutons, et leurs variations en fonction de facteurs saisonniers et les agents stressants, constituaient les éléments de base de cette étude. Le travail initial du possible, la normalisation des divers protocoles afin d'établir la quantité de protéines, à la fois liquide séminal et de la membrane plasmique, qui, avec l'utilisation de tampons hygiéniques de solubilisation spécifiques pour les différents échantillons étudiés, ce qui permet l'obtention de gels, à haute résolution des points de protéines . Le liquide séminal des mammifères est complexe fluide qui sert de moyen de transport du sperme des testicules à rencontrer l'ovule (Thomas 2003), qui contient une variété de composants biochimiques, certains d'entre eux relativement réglementation spécifique de l'opération, le spermatozoïde. Il a été décrit une part importante de protéines du plasma séminal, dans des domaines tels que la motilité et la viabilité de l'éjaculation du sperme, et aussi dans des domaines clés tels que la formation et l'interaction entre les gamètes. Par conséquent, dans ce rapport, nous avons créé une carte de référence] 2D de protéines du plasma séminal et, éventuellement, les relations avec les pourcentages de spermatozoïdes viables et mótiles, et la concentration des spermatozoïdes éjaculation. Il a identifié 252 «points de protéines», a établi que la grande majorité (86%) ont un pH acide et sont glicosiladas. De même, il ya eu une importante influence de la gare (ou la reproduction non-reproduction) de la concentration de certains d'entre eux, et l'apparition et la disparition de certains autres dans l'une ou l'autre station. Les corrélations positives et / ou les points négatifs ont été établies entre certaines protéines et de qualité variable séminales mentionnés suggèrent que pourrait interagir ensemble pour assurer un bon fonctionnement des spermatozoïdes. Les résultats de l'analyse par 2D-PAGE et inmunodetección établi la composition des bandes de protéines RSVP14 et RSVP20 de liquide séminal, qui a été proposé que dans les études précédentes en mesure de protéger et / ou réparer les dommages à la membrane des spermatozoïdes par la chaleur Choc par le froid, en mettant en évidence les points qui sont constitués de protéines et de faible poids moléculaire pH acide. RSVP14 Le groupe est formé de six points en protéines », tandis que la bande RSVP20 cette constitué par deux points, peut-être avec un autre degré de glycosylation et / ou la phosphorylation. L'analyse des séquences par le biais de séquençage interne "de novo" toutes les informations précédemment obtenues par la dégradation de Edman automatisé, et a conclu que RSVP14 est lié à la famille des protéines de la majorité dans le plasma séminal bovine (BSP), tandis que l'un des points qui ont trait à La RSVP20 aucune homologie avec une protéine contenue dans les bases de données des mammifères. L'analyse électrophorétique de la protéine dans la membrane plasmique des spermatozoïdes a révélé la présence de 150 points de protéines "sur la carte 2D référentielle, avec des variations saisonnières de la concentration de certains articles, ainsi que la présence exclusive de deux points dans l'accouplement Saison, qui pourrait laisser entendre son importance dans le processus de reproduction. Les études réalisées par western blot 8 aron registre de la réaction de 790 avec six points contre l'anticorps générés Banda RSVP14 de liquide séminal, un résultat qui confirme que ces protéines dérivées du plasma séminal et adsorbées à la membrane des spermatozoïdes comme cela a été démontré dans de précédents travaux. Enfin, il a été constaté que la cryopréservation causes variation de la protéine profils de la membrane plasmique des spermatozoïdes, la perte de points et quelques autres nouvelles en ce qui concerne les cartes en 2D de protéines de sperme frais. L'ajout de protéines du plasma séminal dans le milieu de cryoconservation ont conduit à une augmentation significative de la concentration de l'un des points qui font partie de la bande RSVP 14 confirmant encore son adsorption à la membrane des spermatozoïdes. En résumé, ces études ont tenté de venir en aide par le biais de techniques 2D-PAGE de générer des connaissances de base sur les principales protéines présentes dans le liquide séminal et de la membrane plasmique des spermatozoïdes. En outre, elle a fourni de nouvelles données relatives à l'effet des variations saisonnières et des agents stressants en profils électrophorétiques des protéines, afin d'être en mesure d'établir des stratégies de gestion visant à accroître l'efficacité du sperme de reproduction du système de production des moutons.

Auteur: GARCÍA TOMÀS MÓNICA.
Année: 2006.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Auteur: APARICIO DONOSO INÉS MARÍA.
Année: 2006.
Université: EXTREMADURA [www.unex.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE VETERINARIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE VETERINARIA.

Résumé: Lorsque les spermatozoïdes sont déposés dans les voies génitales féminines, feront l'objet d'une série de changements physiologiques et biochimiques qui lui permettront d'atteindre l'œuf et fecundarlo. Ces changements représentent une augmentation de la mobilité, la formation, et enfin la acrosomal réaction. Même si ces changements sont en cours, in vivo, in vitro, peuvent également être obtenus à partir de la moyenne d'incubation chimique définie, qui permet d'étudier les bases physiologiques et biochimiques qui régissent ces processus. Ainsi, il a été démontré que les deux motilité, de la formation que les acrosomal réaction sont réglementés ou associés à l'évolution de l'état de phosphorylation de plusieurs protéines. Dans cette thèse nous nous sommes fixés les objectifs suivants: - Etudier les relations possibles entre les voies de signalisation intracellulaires grâce à la médiation de la tyrosine phosphorylation de la protéine et les processus de formation des spermatozoïdes de verrat. B - Pour déterminer le rôle de intracellulaire tracé de la Fosfatidilinositol 3 - Quinasa (Pl3K) dans la régulation de la mobilité, la formation, acrosomal réaction et la viabilité du sperme de sanglier. C - Examiner le rôle possible des Glucógeno Sintasa Quinasa 3 (GSK3) dans la régulation de la motilité, de la formation et acrosomal réaction du sperme de varraco. D - Pour déterminer la relation entre les voies intracellulaires de l'AMP / protéines Quinasa Malheur à la Fosfatidilinositol 3-Quinasa/Proteína Quinasa B dans la régulation de l'activité de la Glucógeno Sintasa Quinasa 3alfa et de la motilité du sperme de sanglier. Nos résultats nous permettent de conclure que le processus de formation des spermatozoïdes de verrat cette partie réglementée par des voies de signalisation intracellulaire impliquant l'exercice de tirosinas kinases et sérine / reonina la kinase GSK3. De même, dans la tyrosine phosphorylation d'une protéine de 32 kDa (appelée p32) peut être utilisée pour plus de précision et les processus de formation des spermatozoïdes acrosomal réaction de sanglier. Dans ces cellules, les processus de formation et pseudocapacitación induite par choc thermique sont régies par différentes voies de signalisation intracellulaire. En outre, la survie de la cellule de sperme de verrat est réglementée, au moins en partie, par PI3K. La motilité du sperme de verrat est régulée négativement par PI3K et positivement par PKA. Enfin, le GSK3alfa représente une convergence des différentes communes effecteur des voies de signalisation intracellulaire qui régulent la motilité des spermatozoïdes dans le sanglier.