BIOPHYSICS

Auteur: GONZÁLEZ MUÑOZ DIANA M..
Année: 2003.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID.
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE FARMACIA.

Résumé: Le développement de l'ADN recombinant génie, et tous nés des techniques de biologie moléculaire qui vous permettent de manipuler le génome d'un organisme vivant, a permis l'obtention de fragments d'ADN portant le gène ou les gènes qui sont souhaitées dans des quantités illimitées (cloner l'ADN recombinant). L'expression des gènes clonés dans des bactéries, Escherichia coli fondamentalement, il a été largement utilisé dans l'industrie pour la production de protéines à usage pharmaceutique, et de la recherche, pour la recherche biochimique et / ou de protéines structurales produites. La bactérie peut produire une grande quantité de protéines recombinantes pour des trucs, souvent à faible coût, à grande échelle par des fermenteurs industriels, cependant, dans nombre de ces processus, le produit des intérêts a déposé, sous la forme d'agrégats insolubles et des inactifs, soit sous la forme De l'inclusion du corps. Il est donc nécessaire d'entreprendre un processus de repliement des protéines in vitro à la suite de l'acquisition de son activité biologique. Cette thèse a porté sur l'étude du remplacement de l'urée par différents additifs dans l'analyse in vitro pliage de la BMP-2 de l'homme exprimés dans Escherichia coli. Cette protéine peut être caractérisée comme étant un facteur qui induit osteogenético phénotypes cellulaires osteoblásticos dans indiferenciadas. L'étude de ces additifs a été menée en induisant un marqueur osteoblástico comme activité de la phosphatase alcaline dans une lignée cellulaire mioblástica, particulièrement dans la lignée de cellules C2C12. Nous avons enquêté sur la présence de différents additifs evluándose de la même concentration que la concentration des protéines présentes dans le pliage et comparées aux résultats obtenus en présence de l'urée, qui a été établi précédemment dans notre laboratoire. Ces conditions présenté les résultats préliminaires supérieurs aux conditions de contrôle, ont été menés sur une plus grande échelle afin de purifier la protéine active et d'établir ainsi les rendements. Il a également effectué une première caractérisation physico-chimique de la rhBMP-2 en solution. Elle a été utilisée comme une technique permettant de mesurer l'émission de fluorescence intrinsèque de la protéine, pour suivre la distorsion provoquée dans la rhBMP-2 par divers agents chimiques, les études qui ont été menées avec la caractérisation de la solubilité de la même grâce à la spectroscopie UV - Vis.

Auteur: GARCÍA SÁEZ ANA JESÚS.
Année: 2004.
Université: VALENCIA.
Lieu de l'exposition: BIBLIOTECA DEL CAMPUS DE BURJASSOT.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Résumé: La famille des protéines Bcl - 2 sont d'importants régulateurs de apotosis, et de s'acquitter de leurs fonctions lorsqu'ils sont associés à des membranes cellulaires. Dans ce document, nous avons abordé la caractérisation de l'interaction de représentant des membres de la famille Bcl - xL. Enchère et Bax, avec des lipides des membranes. Identifiée pour la première fois les domaines de l'interaction avec ces protéines dans les membranes par "cartographie" par elicosilación. Certains de ces domaines sont synthétisés chimiquement, et analysé leur capacité à permeabilizar membrane dans des systèmes modèles (vésicules unilamelares grandes et bicapas plat). Parallèle a commencé sa caractérisation médias lipides et lipidomiméticos par dicroismo circuler et de spectroscopie infrarouge. Les résultats nous ont permis de soulever des modèles d'action.

Auteur: IVORRA CANO ANTONI.
Année: 2004.
Université: POLITÉCNICA DE CATALUÑA.
Lieu de l'exposition: aula de teleensenyament.
Lieu de préparation: C4 Despatx Direcció nord.

Auteur: GUTIÉRREZ MARTÍN M. YOLANDA.
Année: 2004.
Université: EXTREMADURA.
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: Dans cette thèse étudie les effets causés par le stress oxydatif induit par peroxinitrio et extracellulaires peroxyde d'hydrogène sur les niveaux de Ca2 + libre intracellulaire dans les cellules excitables. Premièrement, nous étudions la modulation de pompes Ca2 +, à la fois dans la membrane plasmique des vésicules de sinaptosomas (PMCA) et vésicules de sarcoplásmico réticulum du muscle squelettique (SERCA) induites par le stress oxydatif généré par l'exposition à ONOO-. Pour étudier l'homéostasie du Ca2 + cytosolique dans les cellules excitables exposés à la NAS - 1, à titre d'agent de libération ONOO- ont été utilisées comme un système modèle: les cellules granulaires du cervelet (CCG) et myo tubes myoblastes différenciés de la lignée de cellules C2C12. D'après les résultats, nous pouvons dire que: * Le traitement de la membrane plasmique des vésicules de sinaptosomas avec ONOO- inhibe l'activité de la PMCA. Cela inhibe également oxydatif activité Ca2 + ATPase du réticulum sarcoplasmático. L'inhibition de ces activités implique une perte de la capacité de transporter les ions Ca2 +, qui peut contribuer à la déréglementation du Ca2 + intracellulaire homéostasie. * L'exposition de ces vésicules à ONOO- résultats de l'oxydation des groupes thiols et nitración déchets tirosinas. Utilisation de la Ca2 + ATPase du réticulum sarcoplasmático nous avons constaté que la cible principale de ONOO- est situé à sa cytosolique domaine. Physiological concentrations d'agents de réduction tels que le NADH, l'ascorbate et le glutathion réduit protéger la Ca2 + ATPase du réticulum sarcoplasmático de ONOO-. * Les canaux de Ca2 + activés de type L - Tension cellules granulaires du cervelet sonaltamente sensibles à l'oxydation des espèces / nitrosativas générées lors de la décomposition et NAS - 1. La Ca2 + ATPase de la membrane plasmique était inhibée à des concentrations supérieures à ces espèces réactives, et modifier ainsi l'homéostasie du Ca2 + dépend de l'intensité du stress oxydant. * Myo tubes C2C12 disposent de voies de Ca2 + activés intracellulaire dépôts de vidange présentant des propriétés pharmacologiques différentes de celles des canaux de type dihydropyridine sensibles. Ces propriétés sont identiques à celles décrites pour les canaux SOC (Store opérant canaux calciques). Stress oxydatif / nitrosativo extracellulaires générés pendant la décomposition de l'INS - 1 relentiza entrée capacitativa Ca2 + médiation canaux SOC.

Auteur: PÉREZ LÓPEZ SILVIA.
Année: 2005.
Université: BARCELONA.
Lieu de l'exposition: FACULTAT DE FARMACIA.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Résumé: Cette thèse est structurée en deux parties distinctes. La première partie a été étudié un peptide synthétique, multimérica structure, le MAP [VP1 + VP3], qui contient des sites potentiellement antigéniques des protéines virales VP1 et VP3 hépatite A et la seconde, de peptides de synthèse correspondant à la protéine E1 du virus GBV - C / HGV ou virus de l'hépatite B, et leur interaction avec des membranes modèles. Les principaux objectifs de cette première partie de la thèse de doctorat ont étudié la capacité inmunógena peptidique MAP [VP1 + VP3] avec deux formules différentes qui ont été administrés à des animaux d'expérience, et de valoriser les différences qui ont été réalisés en termes de la cupidité et de la reconnaissance termes Epítopos constitutifs de la macromolécule en utilisant deux techniques différentes, un immunoessai technique est classique comme ELISA, et un autre roman est basé sur la résonance de plasmón de surface (RPS). Au cours de 98 jours a été suivi d'un protocole de vaccination, dans laquelle les lapins 1 et 2 ont été vaccinés avec un peptide MAP [VP1 + VP3], Al lapin 1 était administrée avec une formulation de traitement adjuvant de Freund, et le lapin 2 une formulation Avec des liposomes MLV. Dans le lapin 1 le montant total des anticorps resté élevé jusqu'à la dernière vaccination, qui a noté une baisse, peut-être due à un effet de tolérance. Dans le lapin 2 niveaux d'anticorps étaient de plus en plus à un pic de 98 jours. Dans les deux cas, ont été mesurés les niveaux d'anticorps au mois de la dernière vaccination et a noté que dans le cas du lapin 1 était tombée pratiquement à zéro, et non pas dans le cas du lapin 2. Dans son analyse de la cupidité ont utilisé deux techniques différentes, le test ELISA et la technique RPS. Dans nos études, les courbes expérimentales faites pour calculer la cupidité de ELISA n'étaient pas complètement adapté à la théorie des courbes du modèle suivi, conçu pour les anticorps monoclonaux. Ce décalage entre le modèle théorique et le pilote a été attribuable à la fois à la complexité de l'antigène MAP [VP1 + VP3], comme l'analyte (anticorps). L'antigène est un peptide complexe, avec au moins 3 sites de réactifs, VP1, VP3 et la conformation MAP [VP1 + VP3] et les anticorps peut réagir avec mono ou bivalencia. Dans les procès de RPS, l'un des plus troublants a été la recherche d'une approche mathématique qui pourrait s'adapter à notre modèle. Le MAP [VP1 + VP3] contenant plus d'une epítopo, comme on le voit dans la technique ELISA, qui est déjà reconnu à la fois la construction MAP [VP1 + VP3] comme un processus linéaire de peptides. En outre, les IgG pourrait interagir avec le ligand avec 1 ou 2 domaines F ter chacun des epítopos, ce qui rend le modèle plus complexe encore. C'est sans doute la raison pour laquelle aucun des modèles mathématiques d'analyse de s'adapter pleinement à nos données. Toutefois, compte tenu de la dissociation des constantes, qui sont inversement proportionnels à la cupidité et indépendant de la concentration dans des conditions de la saturation, des comparaisons peuvent être faites. Tant l'analyse par ELISA avec RPS indiqué que les liposomes antisérum produit un plus profond que le traitement adjuvant de Freund. Dans la deuxième partie de la thèse, a été étudié et synthétisé des peptides synthétiques correspondant à la protéine de l'enveloppe E1 hépatite G (GBV-C/HGV). Le GBV-C/HGV, récemment découverts, a été identifié comme un potentiel inhibiteur de la réplication du virus du sida (VIH). L'utilisation du modèle de la membrane et la capacité d'interagir avec les peptides synthétisés à l'aide de techniques différentes, a été le principal objectif de cette deuxième partie. Comme la protéine a été choisie pour étudier les E1 du virus GBV-C/HGV, qui appartient à la structure des protéines du virus. Il n'ya pas d'études à ce jour connus aujourd'hui sur cette protéine, en hausse de 8, à ebc l être protéines structurelles doivent avoir des sites dans son antigénicité flux. Dans la synthèse des peptides, nous avons choisi différentes souches de GBV-C/HGV et les a comparés à l'aide du programme Clustalw pour obtenir la séquence des conservé qui s'écartent de la synthèse. La conclusion était que la séquence a montré les meilleures caractéristiques en termes antigénicité, tourne la version bêta, et hidrofilia était comprise entre les acides aminés 53-66. Une autre méthode a également été utilisée pour analyser les régions hidrobóbicas de protéine E1. La méthode choisie a été un algorithme appelé Predict Protein suisses sur la base de protéines. Le profil de la 190 bis protéine E1 a été analysé par le programme PHD (profil nourris réseau neuronal systèmes de HeiDelberg). Autour de la région correspondant aux acides aminés 53-66 sélectionnés, figurent, selon l'algorithme de prédiction PHDhtm, une hélice transmembranaire. L'algorithme PiMohtm également confirmé la présence de l'hélice. Car on pensait derivatizar le peptide E1 (53-66) avec un acide gras, l'acide palmitique, car de cette manière, il pourrait tenter d'imiter le natif hydrophobes environnement dans lequel il était. Parce que les protéines extrêmes sont décrites comme potentiellement inmunogénicos, depuis la protéine E1 du virus a été peu estudiad, il a été décidé que sinetizaría aussi un peptide correspondant à la fin aminés terminaux. À cette fin, et puis de suivre la même procédure qui a été suivie pour la sélection des peptides E1 (53-66), nous avons choisi d'acides aminés entre les positions 3 et 17, afin d'obtenir un peptide de 15 bis. Il a apprécié l'interaction de la membrane des peptides synthétisés modèle grâce à diverses techniques: l'isotherme de Langmuir, la fluorescence, calorimétrie différentielle à balayage et Brewster angle de la microscopie. Les peptides de E1 (53-66), E1 (3-14) Gy E1 (3-17) R intègre faiblement en jarre d'une autre charge électrique. Toutefois, le taux de pénétration a été plus importante dans anioniques jarre, ce qui implique l'existence d'une composante électrostatique qui peut s'expliquer par la nature des cationique des peptides expériences à la fois le pH (7.4). Le PalmE1 (53-66) se joint à une autre jarre charge électrique: zwitteriónica (DPPC et DOPC) et anions (DPPG et DOPG). Les résultats obtenus par le test de l'union isothermes indiqué que l'interaction présente la séquence E1 (53-66) avec les lipides étudiés, il est essentiellement dû à la présence de charges positives peptidique. Pour sa dérivé palmitoílo, l'interaction est plus grand en lipides et DOPC DPCC (zwitteriónicos) avec anioniques lipides. Les résultats obtenus par calorimétrie différentielle à balayage a indiqué que la séquence E1 (53-66) avaient une plus grande capacité d'interaction avec les liposomoas MLVs de DPPC DPPG et que les séquences appartenant à la partie terminale aminés de la protéine evoltura E1. Et les résultats de l'épreuve du syndicat isothermes indiqué que l'interaction présente la séquence E1 (53-66) avec les lipides étudiés, il est essentiellement dû à la présence de charges positives peptidique. Pour sa dérivé palmitoílo, l'interaction est plus avec DOPC lipides et DPPC (Zwitteriónicos) avec anioniques lipides.

Auteur: OLASAGASTI ARSUAGA FÉLIX.
Année: 2005.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID.
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.

Résumé: La thèse présente et discute un modèle théorique du système cellulaire automantenido qui est compatible avec les lois établies par l'énergie thermodynamique. Le modèle présente un système de réactions qui forment les éléments constitutifs des membranes, ainsi que les éléments nécessaires à leur autonomie énergétique. L'étude a été réalisée à l'aide d'un formalisme d'équations différentielles qui est établi à la suite d'une analyse approfondie du réseau estequiométrico réactions. Le mémoire présente les résultats de recherches menées avec deux modèles expérimentaux qui appuient les hypothèses formulées dans le modèle théorique. D'une part, nous avons étudié le transport de protons dans les vésicules vésicules géantes car ils sont parfaits pour l'étude des réactions des systèmes encapsulés et de protons peut être un des éléments responsables de la cellule de la stabilité dans le modèle théorique. D'autre part, explore les possibles abiotiques synthèse des acides ribonucleicos comme des éléments capables de réaliser des processus catalytiques dans le système cellulaire. De cette manière, en combinant la méthode expérimentale et théorique, qui aborde des questions stades conserves organisation de la matière, avant la formation des premiers êtres vivants, et répond aux questions essentielles dans les dernières étapes de l'évolution chimique.

Auteur: MONTES BURGOS LIDIA RUTH.
Année: 2005.
Université: PAÍS VASCO.
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Lieu de préparation: DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR.

Résumé: Cette thèse a pour objectif principal les effets de fosoflipasas C esfingomielinasas sur les propriétés structurelles et fonctionnelles de bicapas lipidique. Cela aura utilisé divers enzymes d'origine microbienne, qui esfingomielina hydrolysé et, dans certains cas, également glicerofosfolípidos, générant respectivement céramides et diacilgliceroles. Il a étudié le contenu et la mise en liberté permeabilización vésiculaire induite céramides, ou générées in situ (par l'hydrolyse enzymatique esfingomielina travail), ou ajoutés dans les membranes. Cela a été utilisé comme système de LUV aux différences dans la composition des phospholipides et cholestérol, contenant des molécules fluorescentes coincées à l'intérieur. Dans la plupart des expériences ont utilisé de petites quantités de céramides, ce qui peut exister en vertu de l'état physiologique de signalisation dépendantes de céramides. Deux propriétés de céramides sont importantes pour le processus de restructuration des membranes, sa capacité à induire la membrane négatif virages et leur tendance à séparer latéralement dans le plan de la membrane, ce qui se traduit dans les domaines riches en céramides. Listeria monocytogenes est une bactérie qui provoque des infections chez les humains et les animaux. La bactérie sécrète un automate active sur plusieurs types de glicerofosfolípidos (PC et SM), qui peut être définie de façon plus appropriée comme un esfingomielinasa / phospholipase C. L'activité enzymatique est accompagné d'importants changements dans la structure des vésicules, tels que: l'agrégation et Mélanger et lipides intervesiculares et ne libérant contenu. Ces résultats suggèrent que le PLC LM induire fusion des vésicules. PlcHR2 est une enzyme qui fait partie d'une nouvelle superfamille fosfolipasas C / phosphatases, qui compte des membres dans une variété d'espèces bactériennes. Nous avons décrit l'activité d'hydrolyse PlcHR2 quand le substrat est sous forme de LUV. PlcHR2 hydrolysé PC et MP, mais est inactif sur d'autres lipides. Le calcium ne modifie pas son activité hydrolytique. L'enzyme induisant la fusion des vésicules, le Ca2 + et n'affecte pas la fusion, mais ajoute à la vitesse d'agrégation et de la vitesse et l'ampleur de la diffusion de contenu. D'autre part, nous avons mené une série d'expériences visant à comprendre l'activité hémolytique de PlcHR2, et tenter d'expliquer son mécanisme moléculaire.

Auteur: CUESTA MATARREDONA EDUARD.
Année: 2005.
Université: BARCELONA.
Lieu de l'exposition: UNIVERSIDAD DE BARCELONA, IDIBELL.
Lieu de préparation: UNIVERSITAT DE BARCELONA, IDIBELL.

Résumé: OBJECTIF Fructose 1,6 - bisfosfat (F1 6BP) protège l'organisme contre un grand nombre de processus qui causent l'inflammation. Hipotetizamos que le principal effet de la F1 6BP est d'empêcher l'activation des macrophages et la sécrétion des cytokines. Notre intention était d'identifier des cibles cellulaires et les titulaires de ce sucre bifosforilado et étudier dans le détail son mécanisme d'action. INTERVENTIONS L'action protectrice de F1 6BP a été testé chez le rat Saprague - Dawley (entre 200 et 250 grammes en poids), à laquelle ils avaient été induits hépatite à travers l'invention de galacctosamina (GalN). In vivo les effets de la F1 6BP été évaluée en déterminant le plasma transaminases activité, le dosage des endotoxines dans le plasma et la détermination du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) dans le plasma et le foie chez les rats traités Total avec GalN. Les objectifs de la F1 6BP de réduire la réponse des macrophages à lipopolisacrádio LPS ont été déterminés par l'étude de la corrélation entre l'évolution de la production de TNF-alpha et le flux de potassium à travers la membrane cellulaire de cultures primaires de cellules de Kupffer. DÉCISIONS ET PRINCIPAUX RESULTATS resutlados obtenu des études in vivo indiquent que le traitement par F1 6BP empêche les dommages causés par l'administration deGalN dans les cellules parènquima foie. Cette protection a été associée principalement à la réduction de la réponse inflammatoire. FF1, 6BP empêcher endotoxinémie induite GalN rat, et ce en corrélation avec l'inhibition de la sécrétion de l'histamine de mastocytes péritonéale, un événement qui précède l'augmentation des endotoxines dans le plasma et le foie dans la production de TNF-alpha. En outre, le traitement par F1 6BP réduit la sensibilité des macrophages à la LPS, ce qui provoque une diminution de la production de TNF-alpha. In vitro, les résultats montrent que F1 6BP inhibe la réponse et la sécrétion de TNF-alpha par les cellules de Kupffer à être administrés LPS. La F1 6BP prévenir ces effets en inhibant l'activation des canaux de potassium par LPS dans ce modèle cellulaire. CONCLUSIONS L'effet des modulateurs des canaux de potassium dans le exogènes ajout de F1 6BP explique ses effets comme antihistaminique et anti-inflammatoire, ce qui augmente sensiblement la intérêt thérapeutique de ce composé bifosforilado.

Auteur: DOMENECH CABRERA OSCAR.
Année: 2006.
Université: BARCELONA.
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FÍSICA Y QUÍMICA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE QUÍMICA.

Résumé: L'objectif principal de cette thèse a été l'étude des propriétés physico-chimiques de l'intérieur de la membrane de la mitochondrie et de l'interaction avec le cytochrome c modèle membranaire. Pour réaliser diverses techniques ont été utilisées: jarre de Langmur et Langmuir - Blodgett films, de la spectroscopie de fluorescence, la microscopie à angle de Brewster et Atomic Force Microscopy. La conclusion générale de cette thèse a été: "Pour résoudre le calcium induit les phases H II de l'échantillon POPE: CL (0,8: 0,2, mole: mole). Composition Il s'agit du point le plus stable tant fostolípidos et correspond à la fraction molaire à l'intérieur de la membrane mitochondries. Etendre ces inverse des micelles formée bicapas plat sur un support solide, montrant la ségrégation latérale enrichi en LC domaines dans lesquels le cytochrome c rejoint spécifiquement. Dans ce modèle, l'intérieur de la membrane de la mitochondrie POPC se comporteraient comme un espace dans les domaines de l'enrichissement POPE formant la matrice lipidique. "Le processus inverse serait une explication pour la libération du cytochrome c de l'intérieur de la membrane mitochondrie pendant apoptose.