BIOLOGIE MOLECULAIRE (5)

Auteur: ARIZ LÓPEZ DE CASTRO USUE.
Année: 2005.
Université: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE MEDICINA.
Lieu de préparation: PROGENIKA BIOPHARMA S.A. Y DEPARTAMENTO NEUROCIENCIAS (UPV).

Résumé: La sclérose en plaques est une maladie inflammatoire démyélinisante du système nerveux central et le plus commun des troubles neurologiques chez les jeunes adultes. Pour une meilleure compréhension des processus impliqués dans le développement des maladies démyélinisantes comme celui-ci, il est important d'utiliser des maquettes dans lequel ils peuvent conduire le processus de desmielinizaicón et permettre à la sélection de nouvelles cibles moléculaires d'intérêt. Le modèle utilisé dans ce travail a consisté en l'isolement et la culture des oligodendrocytes de rat périnatale nerf optique (P12). Ces cultures ont été stimulées avec des agonistes des récepteurs glutamatérgicos (AMPA ou kainato) à des concentrations apoptotique simulant le processus de oligodendroglial la mort qui survient dans la maladie. Afin d'obtenir une vue d'ensemble des changements qui se produisent dans la cellule a effectué une analyse de l'expression génique différentielle avec des puces d'expression (Affymetrix ®), des cultures et des récoltes stimulé contrôle. Les résultats ont été validés par PCR quantitative en temps réel a obtenu une liste de gènes dont l'expression varie suivant la mise en œuvre de mesures incitatives. L'un d'eux, Dusp6 avéré être impliqué dans le processus de la mort depuis exitottóxia inhibition de la synthèse d'oligonucléotides antisens par l'intermédiaire de son entraîné une augmentation de la survie des cellules suite à la mise en œuvre de mesures d'incitation excitotóxicos, ce qui est un point de départ pour la conception de nouveaux traitements.

Auteur: JUSTO FERNÁNDEZ ALFREDO.
Année: 2005.
Université: VIGO [www.uvigo.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: Dans cette thèse a étudié la taxonomie, l'écologie et la phénologie de corología genres amanita, limacella, torrendia, pluteus volvariella et dans la péninsule ibérique et les îles Baléares. Il a obtenu une liste de 94 taxons répartis de la façon suivante: amanita (43), lamacella (5), torrendia (1), pluteus (33) et volvariella (12). Elle propose 2 nouvelles espèces pour la science et la cité 2 taxons pour la première fois sur le continent européen.

Auteur: SEPÚLVEDA JUSTO MARIA DEL ROSARIO.
Année: 2005.
Université: EXTREMADURA [www.unex.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Auteur: SEGRELLES HUELGA CARMEN.
Année: 2005.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FAACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: CIEMAT (CENTRO DE INVESTIGACIONES ENERGÉTICAS MEDIOAMBIENTALES Y TECNOLÓGICAS).

Résumé: De l'origine de cancers épithéliaux constituent plus de 80% de tous les cancers diagnostiqués chez l'homme. Il ya de nombreuses études en cours pour tenter d'établir la cause de cette perturbation transformations néoplasiques. Dans de nombreux cas, ce processus est le résultat d'altérations des oncogènes et / ou suppresseur de tumeur gènes codant des protéines qui font partie des voies de transduction des signaux impliqués dans l'homéostasie cellulaire. Une grande partie de ces études sont réalisées grâce à des modèles animaux. En ce sens, le modèle de la cancérogenèse chimique dans la peau de souris (DMBA / TPA), est l'un des plus célèbres modèles d'induction carinogénesis chimie. Dans ce modèle, les données indiquées dans cette thèse montrent que la signalisation médiée par la kinase Akt (PI3K/Akt) est un élément clé de médiateur dans le développement de carcinogéneiss en peau de souris. En outre, des études de la tumorigenèse in vivo de démontrer que la surexpression de Akt dans la lignée de kératinocytes PB augmente leur capacité tumorigéncia. Les tumeurs obtenues pour micro-injection de ces kératinocytes transformé cinétique montrent une rapidité d'une plus grande taille et d'un plus haut degré de malignité. Cette transformation médiatisée Akt traduit par une augmentation de la stabilisation de beta catenin dans le cytoplasme, une augmentation de la transcription, la traduction et la localisation ciclina D1 et une augmentation de la transcription, la traduction et la stabilité de la c- oncogène myc, elle produit dans la cellule dans la déréglementation Le processus de prolifération et l'apoptose. En outre, l'activation de Akt dans les kératinocytes conduit à mécanismes de tir angiogénique, par l'intermédiaire d'un poste de régulation du VEGF, ce qui permet une plus grande croissance de la tumeur. Enfin, les animaux transgéniques exprimant une permanence actif Akt développer spontanément dans les tumeurs qui confirme akt rôle dans le développement de la tumorigenèse épithéliales.

Auteur: GARCÍA-ARANDA JIMENEZ CRISTINA.
Année: 2005.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE FARMACIA.

Résumé: Ces dernières années, on a développé un intérêt croissant fondamentale et clinique par des chercheurs de travailler ensemble sur une question de grande importance sociale, comme c'est le cancer. Bien que les chiffres sur l'incidence du cancer sont alarmente, ces chiffres occulter le fait que, au niveau cellulaire, la transformation maligne est extrêmement rare. En fait, nous sommes effectivement protégés de la tumorigenèse par un ensemble complexe de mécanismes de défense et le développement des tumeurs n'est possible que lorsque ces mécanismes inactivés. Comme vous le savez, les voies par lesquelles le contrôle de la tumeur suppression a été révélé différents points de règlement que les critiques sont souvent modifiés au cours de la progression maligne. Le raccourcissement des télomères et la répression de la télomérase dans la plupart des tissus somatiques humaines, est un obstacle majeur à nous protéger contre le cancer. En revanche, la stabilisation des télomères, généralement par l'intermédiaire de l'activation de la télomérase, est une étape critique dans la prolifération des cellules indéfiniment, et donc à la formation de tumeurs. Cela a conduit à un grand intérêt à identifier le rôle de la télomérase et des télomères dans le processus tumorigènes, l'objectif ultime étant de leur utilisation comme cibles thérapeutiques pour imiter la croissance exponentielle des cellules transformées. L'enquête sur la dynamique des télomères, qui nous offre une excellente occasion de comprendre les mécanismes de contrôle de la prolifération cellulaire. Cette thèse est une version plus détaillée de la compréhension du contexte et des mécanismes par lesquels les télomères et la télomérase contribuer à l'élaboration de différents types de tumeurs humaines, telles que le cancer colorectal, le cancer de l'estomac et le cancer ne microcítico poumon. Les prévisions pour fins d'analyse différents paramètres de telomeric rôle dans ces tumeurs a révélé que dans le cas de cancer, le cancer colorectal et non microcítico poumon tumeurs pas réactivé télomérase conférer un pronostic plus favorable que ceux qui détecte l'activité de l'enzyme, alors que les tumeurs gastriques Dans la réactivation de la télomérase semble avoir aucun impact pronostic. Dans les trois types de tumeurs, nos résultats n'ont révélé aucune association significative entre l'activité télomérase et le telomeric longueur, et que les mécanismes de maintien de l'enzyme de substitution télomères constituent un événement de très peu d'importance. Analyse de la telomeric longueur dans les trois pathologies, a révélé l'importance de cette étude dans le but de prévisions, ainsi que le double rôle des télomères dans le processus tumorigénicos. Dans le cas du cancer colorectal, nous avons été en mesure de démontrer in vivo le rôle de la protéine TRF1 comme un régulateur négatif de la longueur de teloméros. TRF1 est sobreexpresada dans les tumeurs du colon, et de leurs niveaux étaient sensiblement plus élevés dans les cas qui montrent telomérico raccourcissement. Son analyse fournit un groupe de patients avec un pronostic plus favorable dans les cas réactivé télomérase. Nous avons constaté que les altérations de ces gènes sont communs dans le cancer colorectal et avoir des implications importantes pour la perte de contrôle de la croissance, propres cellules tumorales. Nous pensons que cette étude pourrait être utile dans d'oncologie clinique humaine pour la sélection des patients avec différents résultats cliniques curatives après une intervention chirurgicale, afin d'établir des protocoles de traitement adaptés à chaque groupe de patients.

Auteur: FERNÁNDEZ MILLÁN ELISA.
Année: 2005.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA DE LA UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.
Lieu de préparation: FACULTAD DE FARMACIA DE LA UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Résumé: Cette thèse a été effectuée dans un modèle animal de la sous-alimentation, où la protéine a été montré précédemment qu'une restriction de 65% de l'apport de la mère au cours de la troisième semaine de la gestation augmente dans le fœtus à terme, de la masse des cellules bêta et la réponse Insulino - secretora de glucose et d'acides aminés. Lorsque la sous-alimentation continue pendant la période postnatale à l'âge adulte, il semble que la situation inverse: une réduction de la masse des cellules bêta en parallèle avec une blessure dans la réponse insulino - secretora. L'étude des processus métaboliques et moléculaires responsables de ces troubles dus à la malnutrition globalha été l'objectif principal de cette thèse. À la suite ont abouti aux conclusions suivantes: 1 - La restriction de l'apport de la mère pendant le dernier tiers de la gestation, ce fœtus à terme une augmentation de la réponse à l'insuline du glucose, en raison d'une teneur plus élevée pancréatique d'insuline et une augmentation de l'expression De la gène qui encode. En outre, plus le métabolisme oxydatif du glucose de ces animaux pourrait être l'amélioration de l'activation de p38/SAPK2 et, par conséquent, PDX - 1. 2 - La sous-alimentation chronique, dès le stade fœtal jusqu'à ce que les 70 jours de la vie, se traduit par une baisse de la libération d'insuline en réponse au glucose, à la suite d'un mineur contenu pancréatique d'insuline et l'expression des ARNm de l'hormone. Ce recul semble être directement lié aux faibles niveaux de pancréatiques PDX - 1 trouvée dans les rats adultes sous-alimentés. En outre, l'activation du facteur de transcription pourrait également être réduite par une baisse des métabolisme oxydatif du glucose observé chez ces animaux. 3 - Augmentation de la masse des cellules bêta, présent dans les fœtus à terme, de mères sous-alimentées, semble être lié à une augmentation de la réplication de ces cellules en raison de niveaux élevés de pancréatiques IGF - 1. Ce fait est favorisé par le plus grand nombre de bénéficiaires de l'IGF - 1 présenté par fœtale îlots, et la forte expression dans le pancréas du transporteur protéine IGFBP - 2. Par conséquent, l'action locale de IGF - 1 semble protéger fœtales pancréatiques endocrines Impact de la dénutrition maternelle dans un moment crucial pour le développement et la croissance des cellules bêta. 4 - La malnutrition maternelle causés dans le fœtus à terme une augmentation de la teneur îlot IRS - 2 et l'activation de la voie IRS-2/PI3K/Akt, tant au niveau de référence et après stimulation par le glucose et IGF - 1. Tous ces changements moléculaires semblent être responsables de la réplication des cellules bêta supérieur trouvés dans fœtus malnutrition, et donc pourrait contribuer à une augmentation de la masse des cellules bêta. 5, les cellules beta de rat adulte sous-alimentées conserve la capacité de se régénérer spontanément après l'impulsion de pancreotomía partie des 90%. Dans ce processus activement IGF - 1, dont la surexpression dans le pancréas, en réponse à la pancreotomía favorise les rats sous-alimentés dans la régénération des cellules bêta par la stimulation, à court terme, de neogénesis, et à plus long terme, la réplication, avec une efficacité supérieure à Celui observé dans le contrôle de la population. Nous pensons donc que notre modèle animal intra-utérin et de la sous-alimentation chronique est un outil très utile pour analyser, in vivo et in vitro, les effets que peuvent avoir différents facteurs sur le développement, la croissance et la régénération des cellules bêta pancreáti 8 Cass.

Auteur: RODRÍGUEZ HERNÁNDEZ CARLOS JAVIER.
Année: 2006.
Université: POLITÉCNICA DE VALENCIA [www.upv.es].
Lieu de l'exposition: Dep. Biotecnologia.
Lieu de préparation: Universidad de la Laguna.

Résumé: L'immunosuppresseur FK506 (Tacrolimus, Prograf) a augmenté le taux de survie de la transplantation d'organes. Immunosuppresseur FK506 exerce son action par inhibition de la phosphatase de la calcineurine dans les cellules T activées. Malheureusement, la thérapie FK506 est associée à des effets thérapeutiques n'ont pas été non désirées, dont le diabète, l'implication de divers autres cibles de la calcineurine. Pour identifier ces objectifs, nous avons étudié la toxicité cellulaire de FK506 en gemación levure Saccharomyces cerevisiae. FK506 augmentation de la sensibilité de la levure de stress osmotique d'une manière indépendante de la calcineurine et des protéines liant à FK506. FK506 également suscité une forte et rapide d'acides aminés activation de la voie de la maîtrise globale des éléments nutritifs (GCN). Le prototrofía ou excès de tryptophane tryptophane enlevé la toxicité de FK506, ce qui montre que le tryptophane rapide moitié de cet effet. La mutation des gènes GCN3 et 4 partiellement soulagée toxicité de FK506, suggérant que l'activation de la voie par GCN FK506 est aussi impliqué dans la tolérance osmotique. FK506 renforcée phosphorylation de la kinase dépendante de Hog1p stress osmotique mais sans induction d'un journaliste dépendant Hog1p. Fait intéressant, l'interruption du gène GCN2 aboli hiperfosforilación de Hog1p dépendants FK506 et restauré l'activité du journaliste dépendant Hog1p. En revanche, l'interruption du gène affecté HOG1 l'activation de Gcn2p et la traduction d'un journaliste GCN4-lacZ dépendante FK506. Cela démontre l'existence d'une interaction fonctionnelle entre les kinases Gcn2p et Hog1p. Pris ensemble, ces données montrent que les acides aminés rapide que l'activation de la voie GCN induite FK506 contribuer à la sensibilité cellulaire aux stress osmotique et montrent une boucle de régulation positive entre les itinéraires et GCN HOG.

Auteur: TÁRRAGA HERRERO SUSANA.
Année: 2006.
Université: POLITÉCNICA DE VALENCIA [www.upv.es].
Lieu de l'exposition: Dep. Biotecnologia.
Lieu de préparation: Universidad Politécnica de Valencia.

Résumé: Les plantes, plus de l'évolution, ont développé un certain nombre de mécanismes pour se protéger de l'attaque par des agents pathogènes. Certains de ces mécanismes sont constitutifs, en cours de création sur le terrain avant l'arrivée de la maladie, tandis que d'autres mènent après la perception des signaux pathogène découlant de l'attaque et d'offrir une protection non seulement sur le site de l'infection, mais systématiquement, le long de la plante entière . De nombreuses études indiquent que l'acide salicylique (SA) joue un rôle crucial dans la fixation des réponses défensives. Le plus immédiat est une augmentation très significative de leur taux d'accumulation necrotizantes contre les infections à la fois au site de l'infection que dans les zones distales de la plante. En outre, l'application exogène de la résistance systémique induite SA, ce qui signifie, entre autres choses, une accumulation de protéines de défense, tels que les protéines liées à la pathogenèse (PR). En étudiant la possible implication d'autres composés phénoliques sur la voie de signalisation de la réaction défensive des plantes, a été décrite dans notre laboratoire, dont l'acide 2,5-dihidroxibenzoico ou de l'acide gentísico (GA), montre une augmentation significative de leur accumulation dans les niveaux Infections necrotizantes pas. Ce composé, dérivé métabolique HS, étant exogène appliqué dans plants de tomates, induit une série de protéines PR différentes de celles qui induit SA, qui peut avoir un rôle complémentaire à celui de SA dans le visage de la signalisation des agents pathogènes chez les plantes. Tant la SA et de l'AG, comme c'est le cas avec de nombreux autres métabolites secondaires, sont accumulés dans la plante sous forme de glycoconjugates. Réactions glicoconjugación composé de l'union d'une ou plusieurs molécules de sucre à un métabolite en question et sont catalysées par des enzymes de la famille des glicosiltransferasas. Cette conjugaison modifier la structure, la stabilité et d'autres propriétés

Auteur: CAPARRÓS MARTÍN JOSÉ ANTONIO.
Année: 2006.
Université: POLITÉCNICA DE VALENCIA [www.upv.es].
Lieu de l'exposition: Universidad Politécnica de Valencia.
Lieu de préparation: Universidad Politécnica de Valencia.

Résumé: Nous avons isolé deux gènes d'Arabidopsis thaliana, AtGpp1 et AtGpp2 par homologie avec les phosphatases levure de bas poids moléculaire Gpp1 et Gpp2, qui montrent la spécificité DL-glycérol-3-fosfato et aussi partager homologie avec DOG1 et DOG2 que defosforilan 2-deoxiglucosa-6 - Fosfato. En utilisant une approximation de la génomique comparative, les gènes ont été identifiés comme putativas protéines hidrolasas similaires à ceux dehalogenasas haloácidas. AtGpp1 (gi 18416631) et AtGpp2 (gi 18423981), codent pour des protéines qui partagent une identité de 95% avec un predecida MW de 33 et 27 KDa et un pI de 7,8 et 5,6 respectivement. Les deux isoformes ont haute spécificité DL-glycérol-3-fosfato, pH optimal à 7,0 km et l'autre dans une fourchette de 3.5-5.2 mM. AtGpp1 et AtGpp2 exprimé sur le développement dans tous les organes de la plante, le plus souvent en siliques, et l'expression n'est pas affectée par le stress osmotique ou oxydatif ion. Conjuguée à l'extrémité N-terminale de AtGpp1 il ya une putative peptide de transit chloroplastique à cTP, AtGpp2 dépourvue de ce signal est prédit comme cytosolique, ce cloisonnement a été confirmée par un fractionnement subcellulaire. L'étude immunohistochimique de localisation utilisant des anticorps anti-AtGpp2 indique que les protéines AtGpp sont principalement situées dans meristemos fleur immature et éléments vasculaire de la racine, tige, feuilles, silícuas et le développement de l'embryon, en particulier dans le cytosol, ainsi que dans les chloroplastes des cellules de différents Types d'Arabidopsis, en frappant sur la situation particulière de cellules de tissus d'accompagnement floemático. Les plantes transgéniques d'Arabidopsis, qui ont un sobreexpresan AtGpp2 modifié l'activité de la phosphatase et d'une meilleure tolérance au stress sel, osmotique et oxydatif.

Auteur: MARCO MARÍN CLARA.
Année: 2006.
Université: VALENCIA [www.uv.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
Lieu de préparation: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA.

Résumé: Au cours de mon travail de thèse, j'ai abordé quatre enzymes dont la fonction spécifique de synthèse et la libération de phosphate anhydrides, qui sont essentiels à la biosynthèse des acides aminés ornithine / arginine, la proline, l'isoleucine et de la lysine, ainsi que pour la synthèse microbienne de nucleátidos de pyrimidine. Avant mon insertion dans le laboratoire, elle a identifié un repliement caractéristique commune au roman et carbamate kinase enzymes (Marine, A. et al., 1999; Ramón-Maiques, S. et al., 2000) et acétylglutamate kinase (Ramon -- Maiques, S. et al., 2002). Les deux enzymes appartiennent au groupe des Enzyme Commission CE 2.7.2, transferidores un fosforilo un groupe carboxylate, et donc, avec la tâche spécifique de la synthèse des anhydrides mixtes carboxflico-fosfárico, voies de biosynthèse des acides aminés. Carbamato kinase kinase et acétylglutamate appartiennent à la famille des acides aminés structurel kinase (base de données PFAM, de la famille PFO0696; http. / / Www.sanger.ac.uk / Software / Pfam), la famille de la séquence des acides aminés de similarité, également, les enzymes aspartatoquinasa, Glutamate 5-quinasa, UMP kinase bactérienne et N-acétyl-L glutamato synthase. Compte tenu de la similitude entre la séquence d'acides aminés d'enzymes de la famille kinase, le laboratoire a proposé que le plissement de carbamate acétylglutamate kinase kinase et serait commune au reste de la famille d'enzymes et de l'expérimentation de cette hypothèse a été l'un des principaux objectifs Des laboratoires et mon travail. Une partie de mon travail initial porte sur acétylglutamate kinase (NAGK), enzyme dont la structure a déjà été donnée à la haute résolution (Maiques-Ramon, et al., 2002), par d'autres membres du groupe que j'ai développé mon travail. Mon travail au titre de cette enzyme a été corroborée par mutagenèse dirigée, les inférences découlant de l'étude fonctionnelle structurelle avance. Compte tenu de la similitude entre acétylglutamate kinase et aspartoquinasa (AK), une autre famille d'enzymes, acides aminés kinase, une clé de la synthèse de la thréonine, la méthionine, l'isoleucine et de la lysine, et avec un grand potentiel en matière de biotechnologie, nous utilisons l'information structurale de NAGK, Pour effectuer des travaux de mutagenèse dirigée aspartoquinasa, dont les résultats nous ont permis de construire un modèle structurel de l'AK, qui est jusqu'à présent la meilleure approche à la structure de cette enzyme. Le troisième enzyme qui j'ai étudié, l'UMP kinase, joue un rôle essentiel dans la synthèse des pyrimidines de nucleátidos et a la particularité d'enzymes au sein de la famille kinase de faire la synthèse des acides aminés de la formation d'un acétique fosfárico-fosfárico. Mon travail avec cette enzyme a été axée sur la détermination de sa structure à l'aide d'x-ray diffraction Enfin j'ai étudié l'enzyme glutamate 5 - kinase, un élément clé dans la synthèse de la proline dans les micro-organismes et les plantes, ce qui constitue aussi un élément essentiel à la synthèse de ornithine chez les animaux . J'ai déterminé la structure tridimensionnelle de la glutamate 5-quinasa E. Coli difraccian par rayons X La portée de l'étude avec les quatre enzymes objectif de cette thèse a toujours été la recherche structurelle connecter caractéristiques structurelles et fonctionnelles associées aux comportements. Le travail que j'ai fait, a conduit des ailes publications suivantes:-Site-directed mutagenesis d'Escherichia coli acétylglutamate kinase et aspartokinase III sondes le catalyseur et le substrat de mécanismes contraignants de ces acides aminés kinase famille d'enzymes et permet une modélisation tridimensionnelle de aspartokinase. Clara Marco-Marfn, James Ramón-Maiques, Sandra Tavarez et Vincent Rubio. Journal of Molecular Biology (2003) 334, 459-476. -- La première fois la cristallisation et préliminaire à rayons X cristallographiques analyse d'un type de bactéries archaeal UMP-kinase, une enzyme clé dans la biosynthèse de la pyrimidine microbienne. Clara Marco-Marín, Juan Manuel Escamilla-Honrubia et Vincent Rubio. Biochim. Biophys. Minutes. (2005) 1747, 271-275. -- La structure cristalline de la kinase Pyrococcus furiosus UMP donne un aperçu de la catalyse et de la réglementation dans la biosynthèse des nucléotides pyrimidiques microbienne / Clara Marco-Marin Fernando Gil-Ortiz et Vincent Rubio. Journal of Molecular Biology (2005) 352 8, 438-45 3e7 4. -- Une nouvelle architecture en deux domaines au sein de l'acide aminé kinase enzyme de la famille ont révélé par la structure cristalline d'Escherichia coli glutamate 5-kinase. Clara Marco-Marin Fernando Gil-Ortiz, Isabel perez-Javier Arellano Cervera, Ignacio Fita et Vincent Rubio. Accepté le Journal of Molecular Biology.

Auteur: BOURGON BAQUEDANO LUCRECIA CATALINA.
Année: 2006.
Université: POLITÉCNICA DE VALENCIA [www.upv.es].
Lieu de l'exposition: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE VALENCIA.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE VALENCIA.

Résumé: Auparavant, dans notre laboratoire, et en raison des techniques de dépistage d'une banque d'ADNc d'Arabidopsis a été isolé correspondant à l'ADNc du gène SRL1 par le phénotype de tolérance au sel conférant expression dans la levure Saccharomyces cerevisiae. La protéine codée dans le ADNc semblait être impliqués dans le traitement des pré-ARNm. Cela implique une nouvelle relation entre les cellules tolérantes au sel ecuarióticas et un processus d'une grande importance dans le métabolisme cellulaire comme c'est le traitement de pré-ARNm. L'objectif de ce doctorat Thèse a porté sur l'analyse biochimique et fonctionnelle SRL1 et étudier le mécanisme d'inhibition de l'épissage dans la présence de sel. Il a mené l'étude de l'expression des gènes d'Arabidopsis thaliana SRL1 plantes sous différentes conditions de stress. Ces études ont révélé que le gène est activé transcripcionalmente sel dans des conditions de stress, des températures élevées et à faible contrainte hydrique et de traitement à l'acide abscísico. Comme une nouvelle étude bioinformático séquences du promoteur du gène SRL1 indiqué la présence dans la même séquence homologue à celles d'autres gènes dont l'expression a été déclenchée dans les mêmes conditions de stress. En outre, dans l'étude quantitative du phénotype de la sécheresse et de tolérance au sel dans les plantes transgéniques d'Arabidopsis que sobreexpresaban SRL1, il a été observé que les plantes transgéniques obtenues poursuite de l'élaboration et de la reproduction végétative, tant par rapport aux conditions de stress pour les non dosés. Par RT-PCR technique Modifié obtenu confirmation que la poursuite de l'intron splicing a été la cible ou la toxicité du sel dans les deux usines et dans la levure. De même noter que la surexpression de plantes SRL1 se combattre cette inhibition. L'utilisation d'anticorps polyclonaux reconnaissant protéines SRL1 permis inmunolocalizar subcelularmente cette protéine chez Arabidopsis thaliana racines et Allium cepa la fois dans des conditions normales et traitées avec du sel. Sa prestation a été, dans tous les cas compatibles avec leur statut en tant que facteur d'épissage, car elle était située dans le noyau en forme diffuse, en l'absence de sel pour passer regroupées sous la forme de taches dans la saline.

Auteur: JAVIER BELLIDO SANCHEZ.
Année: 2006.
Université: CANTABRIA [www.unican.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE MEDICINA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE MEDICINA.

Résumé: Le cytosquelette de microtubules se compose de microtubules et de protéines accessoires. Les microtubules sont des polymères de tubuline, une heterodímero constitué d'une molécule d'alpha et un autre betatubulina. À la fois la synthèse des monomères et la formation de heterodímero sont des processus complexes et finement régulée car elle est nécessaire pour assurer le bon pliage de cette façon, vous pouvez rejoindre le microtúbulo. En outre prefoidina ces processus et de CST (qui siègent aussi sur le plissement de l'actine), impliquant un maximum de cinq cofacteurs (p14oCoA, CoB, CDC, C et CoE) et de protéines Arl2.P14, C et Arl2 impliqués dans le pliage de la bêta Tubuline. Le principal objectif de cette thèse est d'étudier le rôle de Arl2. On a cloné le gène humain dans des vecteurs d'expression permettant de purifier la protéine recombinante. Il ya eu aussi des anticorps polyclonaux spécifiques qui seront utilisés pour déterminer la localiación à histochimiques et intracellulaires Arl2 dans les différents tissus et lignées cellulaires utilisant des techniques inmunocitoquímicas. Examinera aussi le rôle de p14 dans les cellules de mammifères en inhibant la synthèse de tests utilisant les techniques génétiques silencieux. Objectifs: Arl2 dans le clonage des vecteurs adaptés à son expression dans des cellules bactériennes et ecucarióticas, à la fois comme "mild type 'comme un' taG 'histidinas pour la facilité de purification. La production et la purification de protéines recombinantes. Etude biochimiste, immunocytochimiques et immunohistochimique de l'expression Arl2 dans les différents tissus et types cellulaires. Production de complexes Arl2 Cod grâce à la co-cellules Sf9 avec baculovirus recombinants. La production et la purification de la p14 conformément à la méthodologie décrite. Etude de l'effet d'inhiber la synthèse de p14 et Arl2 par siRNA dans des lignées cellulaires appropriées objet de l'enquête.

Auteur: BOSCH PRESEGUE EULALIA.
Année: 2006.
Université: POLITÉCNICA DE CATALUÑA [www.upc.edu].
Lieu de l'exposition: SALA DE CONFERÈNCIES, EUETIT.
Lieu de préparation: ETSEIB, PAVELLÓ G Campus SUD.

Résumé: Rhodopsin (Rho) est responsable de la faible lumière visuelle photorécepteur vision. Ce récepteur, qui se trouve dans la cellule de tige de la rétine, a sept hélices transmembranaires et un prototype est membre de l'récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) superfamille, étant le seul membre de la superfamille dont la structure a été résolue par rayons X Chrystallography. L'étude des RCPG est d'intérêt pharmacologique suspens parce qu'ils sont impliqués dans une large variété de processus physiologiques et physiopathologiques. Les études structurales et fonctionnelles de Rho devraient fournir des indices sur les motifs structuraux communs dans GPCR et nous permettre d'élucider les bases moléculaires de la commune un projet de mécanisme d'activation. Par ailleurs, l'étude des mutants Rho maladies associées à la rétine, telles que la rétinite pigmentaire (RP) fournit des informations sur les mécanismes moléculaires de cette pathologie. L'objectif principal de ce travail est le démantèlement des détails de structure qui sous-tendent les mécanismes moléculaires de l'activation de Rho et de son interaction avec transducin. Dans ce but, nous avons analysé la structure et le rôle fonctionnel des hélices I et II de Rho, ainsi que le rôle de la rétine dans le processus photoactivation du récepteur. Nous avons également tenté de déterminer les acides aminés impliqués dans la spécificité des protéines G reconnaissance. Nous avons étudié le adRP mutants G51A, G51V et G89D, ainsi que la non-naturelle des mutations au niveau de ces postes, afin de déterminer le rôle des hélices I et II à Rho structure et à la lumière des changements conformationnels activation. La caractérisation de mutations à la position 51 montre que cette position est très sensible à la taille de la chaîne latérale introduit. L'augmentation du volume de la chaîne latérale d'acides aminés peuvent être introduits en corrélation avec la tombée de la nuit et de la conformation active (MetaII) la stabilité et finalement à la capacité d'activer les protéines G transducin. L'étude des mutations au 89 position accusation suggère que l'effet est plus important que les mutations dans cette position. En outre, G51V et G89D mutants ont montré une anomalie photoblanchiment, avec formation d'une altération photointermediate qui est en équilibre à MetaII. Nous suggérons que G51V et G89D mutants modifier le projet d'équilibre entre MetaIa, MetaIb et MetaII à favoriser la MetaIb photointermediate, et ce fait avec l'instabilité observée MetaII pourraient être les défauts moléculaires qui a causé MOP. Wt Rho a été régénérée avec 11-cis-7-methylretinal (7-méthyl-Rho), de mieux comprendre en quoi la opsin-rétinienne attelage processus et de déterminer le rôle de la rétine dans le processus photoactivation. 7-méthyl-Rho montré chromophore formation semblable à Rho, mais un comportement anormal photoblanchiment avec formation d'une altération photointermediate qui est en équilibre à MetaII photointermediate. Le groupe méthyle à C7 de la rétine introduirait un changement structurel à proximité de Met-207 qui aurait pour effet de piéger MetaIa récepteur à la conformation au cours du processus de photoactivation. MetaIa, MetaIb et MetaII équilibre serait contrôlée par un réseau complexe d'interactions entre les hélices I, II et VII de rhodopsin opsin et aussi par des interactions et de la rétine. Dans une autre approche, nous avons construit et exprimé Rho-mutants m3 à boucles intracellulaire C-II et C-III. Ces mutants ont montré chromophore formation et photoblanchiment comportement similaire au Rho Wt. Seul point mutants à la boucle C-II montrait transducin activation comme Wt Rho, à l'exception de V138S mutation qui a causé une réduction de l'activation transducin comme mutants à la boucle C-III et conjugué C-III mutants chez C-II et de boucles. Aucune de ces mutants a révélé Giáq activation à l'égard de la protéine Wt. Les résultats suggèrent que Val-138, Val-227, Val-250, Val-254 et de l'Ile-255 acides aminés de Rho participer à transducin contraignantes et / ou d'activation, et que les interactions hydrophobes impliquant ces résidus serait un facteur important dans la médiation Rho - transducin interaction.

Auteur: VÁZQUEZ MARTÍN ALEJANDRO.
Année: 2006.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGICAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Résumé: Le fatty-acid synthase est la principale enzyme impliquée dans la synthèse des acides gras. Cette protéine est sobreexpresada, dans la plupart des cancers humains, et son inhibition induit l'apoptose des cellules tumorales. Dans cette étude, nous avons évalué la combinaison de traitements antineoplásticos inhibiteur de l'acide gras synthase dans des lignées cellulaires du cancer du sein. Nous avons remarqué que la puissance conjointe des effets de la anthracyclines, cisplatine et 5-fluoro-uracile, est un additif en combinaison avec un antagoniste faslodez et en combinaison congefitinib et tamoxifène. Nous avons conclu que l'acide gras synthase module la sensibilité des cellules tumorales aux agents chimiothérapeutiques et de traitements est une nouvelle cible pour le traitement du cancer du sein.

Auteur: SÁNCHEZ MOLINA SARA.
Année: 2006.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de l'exposition: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Résumé: Mutations éteint à Ras oncogène dans un constitutivement active avec la capacité de transformer la cellule. Une des cibles potentielles dans ce processus de transformation est la chromatine. Dans ce contexte, nous étudions les modifications des histones et modifiant --- histones dans la transformation cellulaire induite par Ras.

Auteur: MARTÍN JAULAR LORENA.
Année: 2006.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Résumé: Cette thèse a été caractérisée en arginine transport dans les macrophages primaires issus de fœtus foie et la moelle osseuse, ainsi que dans les macrophages alvéolaires. Nos résultats indiquent que dans les conditions basales, les flux de l'arginine dans la membrane plasmique de ces primaires les macrophages se produit principalement par le système de transport et L + (augmentation de 75%), avec une petite contribution et le système + (mayor10%). L'activité et l'+ L peut être due à LAT et + et + LAT - 2. Les ARNm de + LAT1 est le plus abondant de tous les transporteurs pour l'arginine. L'activité du système et + est due à l'expression de CAT - 1 avec la contribution de CAT - 2 dépend de la souche d'animaux utilisés pour l'étude. Les activités des systèmes b0, et B0 + + ne sont pas présents dans ces les macrophages. Le traitement primaire des macrophages avec des incitations et des alternatives classiques d'activation induit une augmentation significative dans le domaine des transports par le système de médiation et +. E revanche, la prolifération ne produit qu'une modeste augmentation de l'activité et +. Pour l'activation, mais pas à la prolifération, cette augmentation est médiatisée par CAT 2B. En effet, l'absence de CAT - 2 s'engage transport et le métabolisme de l'arginine induit l'activation classique et alternatives sans compromettre la prolifération. Le métabolisme de l'arginine macrófago detectivos pour le CTA - 2 est une réponse à des situations d'macrófago forte demande de l'arginine. En réponse à un traitement par GM-CSF augmente le principal moyen de transport des macrophages en arginine CATA - 2B et le métabolisme à l'enzyme Arginasa I. En l'absence de CATA - 2 il ya une compensation partielle des CAT - 1 de l'effet de GM CSF *- . Dans les macrophages et pour défectueux + LAT - 1 n'est pas engagé de transport et de l'arginine dans le métabolisme réponse à l'activation ou le traitement par GM-CSF. Toutefois, on note une augmentation de la teneur de cette intracellulaire particulier lorsque métabolisme des acides aminés à travers arginase est inhibée. Ces données suggèrent que la production de arginian grâce et + LAT - 1 est impliquée dans la régulation de la teneur de cette intracellulaire d'acides aminés.

Auteur: MIRONES AGUILAR ISABEL.
Année: 2006.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: CENTRO DE INVESTIGACIONES ENERGÉTICAS MEDIOAMBIENTALES Y TECNOLÓGICAS (CIEMAT).

Résumé: L'angiogenèse concise dans la formation des vaisseaux sanguins de préexistantes autres. SE est un processus complexe qui exige la coordination de l'interaction de multiples types de cellules. Le facteur de croissance Endotelio vasculaire (VEGF) est indispensable à l'angiogenèse peau, toutefois, n'a pas encore été pleinement caractérisé le rôle d'autres molécules de signalisation spécifiques vasculaires, en partie à cause d'un effet possible de la part de VEGF qui masquent cette fonction. Dans cette étude, nous avons isolé et caractérisé une lignée cellulaire de la souris kératinocytes, spontanément immortalisés, et manquent de VEGF adenoviral par le transfert de gènes de recombinasa Cre, les sous-cultures de série, dans des conditions contrôlées et le clonage de cellules. Le Southern blot et ELISA confirmé la perte complète du gène et protéine VEGF niveau, respectivement, dans les clones de kératinocytes traités avec le recombinasa. Nous avons testé le tumorigénicas de cellules, ainsi que de leurs caractéristiques de croissance et de différenciation in vitro et in vivo. Injection par voie sous-cutanée dans des souris immunodéprimées identifié l'absence de tumorigènes potentiel de la lignée cellulaire tient au VEGF. Le procès de différenciation in vitro dans des conditions de forte concentration de calcium, a révélé que ces cellules conservent leur capacité à se différencier la normale. En outre, deux modèles ont été testés transplantation cultures organotípico à des souris immunodéprimées (caméras de silicone et de la transplantation ortotópico). Dans les deux csdos, kératinocytes carence en VEGF ont été en mesure de former une peau normale du point de vue de l'architecture et de l'organisation épidermique. De nombreuses études décrit la création de lignées de cellules kératinocytes inmortalizadas par oncogènes toutefois, dans ce travail, nous avons créé une lignée cellulaire de souris déficientes kératinocytes en angiogénico principal facteur (VEGF), qui conserve intactes les caractéristiques de ce type de cellule, ce qui constitue un outil important pour Étudier les itinéraires angiogénicas indépendamment de la forte influence de VGF.

Auteur: ANDREU SOMAVILLA NURIA.
Année: 2006.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Résumé: Cette thèse a été divisé en deux chapitres pour le travail accompli dans les deux groupes de recherche, où il a accompli. L'objectif de la première partie de la thèse était d'identifier de nouveaux gènes suite d'un rapprochement de clonage humain in silico de bases de données en utilisant les technologies écologiquement rationnelles et de la collection de clones IMAGE disponibles. Nous avons identifié un nouveau gène a été nommé PALML (Uparalemmin semblable) en raison de sa ressemblance avec la protéine humaine PALM (paralemmin), et mapó en 1p21. PALML s'exprime essentiellement comme un transcrit de 2,4 ko, et a une ubiquité d'expression. Afin de déterminer l'implication de ce gène dans les syndromes primaires vesicoureteric le reflux (VUR) est mis au point la technique d'analyse mutacional SSCP - HD pour ce gène, que l'on retrouve uniquement un changement nucleotídico qu'il était silencieux 1 sur 5 personnes à l'VUR étudiés. Le raffinage de l'emplacement chromosomique de PALML confirmé son endroit 1p21, à l'exclusion de leur implication dans VUR. L'étude s'est poursuivie avec la détermination de la localisation subcellulaire des protéines PALML, dans le cytoplasme des cellules. La deuxième partie de la thèse a porté sur l'étude du syndrome de Wiskott-Aldrich. Le gène responsable de ce syndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) est appelé WASP, est situé sur le bras court du chromosome X. Ce gène codant pour une protéine qui est exprimée exclusivement dans les cellules hématopoïétiques, et est impliqué dans la réorganisation du cytosquelette d'actine Et dans diverses voies de transduction des signaux. Nous avons étudié 35 familles avec le syndrome espagnol de Wiskott-Aldrich et thrombocytopénie liée à la chromosome X, qui a identifié 18 mutations de différent. Au cours de cette thèse, nous avons identifié 4 des mutations nouvelles qui n'avaient pas été précédemment décrit comme causant des maladies. Cette maladie a un héritage récessif lié à l'chromosome X, de sorte que, en principe, les femmes heterozigotas pour une mutation du gène WASP sont porteurs asymptomatiques. Nous avons étudié le cas de 2 femmes espagnoles heterozigotas pour une mutation du gène WASP qui a montré des symptômes de la thrombocytopénie. L'analyse de la structure de l'inactivation du chromosome X dans ces femmes nous a permis d'établir une corrélation entre la présence de symptômes cliniques d'un changement dans la nature de l'inactivation du chromosome X (cellules hématopoïétiques de ces femmes ont préféré le chromosome X inactif transporteur WASP allèle sauvage). L'analyse du dysfonctionnement cellulaire associé à cytosquelette d'actine dans les lymphocytes B nous a permis de déterminer: B lignées de cellules provenant de patients avec WS failles dans la réorganisation du cytosquelette d'actine en réponse à la stimulation de la bradykinine, ainsi que dans la formation des pseudopodios. La capacité de formation des pseudopodios dans les cellules B EBV, ainsi que la réglementation de la normale cytosquelette d'actine en réponse à la stimulation avec brdiquinina, est rétabli par le transfert de gènes utilisant WASP vecteurs rétroviraux.

Auteur: FERRER ORTA CRISTINA.
Année: 2006.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de l'exposition: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.
Lieu de préparation: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR DE BARCELONA (CSIC).

Résumé: Le virus de la fièvre aphteuse est un prototype du genre Aphthovirus appartenant à la famille des Picornaviridae. Ce groupe de virus est l'un des plus petits et se caractérise par la présence d'une seule molécule d'ARN simple et chaîne de polarité positive comme génome. La fièvre aphteuse est une maladie contagieuse affectant la aritodáctiles (animaux biongulés). Les principales causes de la difficulté de contrôler les ravageurs de la fièvre aphteuse, on trouve une forte variabilité dans les manifestations pathogènes, la diversité antigénique facile de transmission, la capacité d'établir et de la persistance des infections asymptomatiques, et le peu d'efficacité des vaccins existants jusqu'ici. Beaucoup de ces causes tient à la limite de copier et de l'absence de mécanismes de correction présentées par l'ARN dépendant de l'ARN polymérases responsables de la réplication de son génome. Le RpdR sont les éléments centraux du cycle de vie du virus à ARN. Dans toutes les structures résolues à ce jour, vous pouvez voir la structure sous la forme de sa main droite, avec subdominos des doigts, la paume et le pouce. Ces domaines sont semblables à ceux des autres types de polymérases décrit jusqu'ici. L'ARN polymérase est une importante cible thérapeutique, et que, si elles augmentent le taux de mutations de ces polymérases peuvent causer ce virus est maîtrisé par l'excès des mutations. L'objectif initial de cette thèse était d'étudier la structure de la polymérase 3D du virus de la fièvre aphteuse et la façon dont elle fonctionne, cela va soulever la résolution de la structure de la polymérase comme libre et en formant des complexes avec l'ARN, nucléotides, les analogues de nucléotides et de protéines Initiateur de la réplication VPg. Il a été possible de résoudre la structure de la polymérase 3D VFA, qui fournit un ensemble de pliage sous la forme de sa main droite fermée caractéristique de RpdR, où l'on peut différencier les sous-domaines des doigts, la paume et le pouce. En fait avec les différents complexes de l'ARN ont pu identifier les nucléotides ARN qui interfère avec ces deux chargé de diriger la chaîne d'ARN moule au centre actifs, comme lso effectué la réaction des nucléotides plus. Il ya eu également identifié les acides aminés responsables de la sélection des nouveaux nucléotides. Dans les complexes polymérase 3D protéine VPg a décrit le complexe de lancement de uridilación, il n'ya pas eu de changements spectaculaires dans la conformation polymérase 3D, mais elles ont maintenant été identifiés acides aminés responsables du processus uridilación et a remarqué la présence de deux ions dans le centre actif De la protéine. Toutes ces données peuvent servir de base à la conception de nouvelles thérapies antivirales qui sont porteurs du virus à l'extinction par l'accumulation de mutations.

Auteur: MERCHAN STEPHANIE EMILIE.
Année: 2006.
Université: POLITÉCNICA DE VALENCIA [www.upv.es].
Lieu de l'exposition: Dep. Biotecnologia.
Lieu de préparation: Universidad Politécnica de Valencia.

Résumé: Les mécanismes d'homéostasie K + et H +, pourtant très bien étudiées, demeurent partiellement connue. Dans le cas de la levure Saccharomyces cerevisiae, la sortie de protons de la cellule est réglementée par la H + ATPase Pma1p, dont le fonctionnement dépend de l'entrée du potassium par l'intermédiaire de transporteurs à haute affinité Trk1 et Trk2. Études génétiques ont établi que le convoyeur Trk1 est activé par les kinases Hal4/Sat4 et Hal5 et inhibée par phosphatases Ppz1 et Ppz2. En ce qui concerne l'intégrité des cellules, nous avons montré que les souches qui manque le gène PPZ1 et PPZ2 apparaître une augmentation de la turgencia due à l'accumulation excessive de potassium, qui affecte à la fois la taille de cellule et de la tolérance à des concentrations élevées de ces ions dans la externes Environnement. Elles ont également démontré que l'augmentation de turgencia produit une constante du stress dans la paroi de ces cellules souches. Ces phénotypes sont dépendants de la présence de gènes codant des transporteurs de potassium forte affinité, TRK1 et TRK2 et peut être sauvé par la présence d'un stabilisateur osmotique. Dans une deuxième partie des travaux, nous avons établi que Trk1 est située dans la membrane plasmique sous-domaines appelés "radeaux." De plus, nous démontrer que Ppz1 est également située sur la membrane plasmique, sa localisation subcellulaire est modulé en fonction du niveau D'expression des Trk1 et Ppz1 et Trk1 collaboration inmunoprecipitan In vivo. D'autre part, Trk1 semble phosphorylée fois in vivo et in vitro et in vivo la phosphorylation est augmentée dans mutante ppz1 ppz2. Enfin, notant la progression du cycle cellulaire, nous avons constaté que les mutants ppz1ppz2 sont plus sensibles aux agents qui endommagent l'ADN, présente un retard dans le développement de la phase S du cycle cellulaire, et ont une fréquence plus élevée de mutations qu'une souche. En outre, nous confirmons que la combinaison de la perte de fonction des gènes PPZ1 et CDC7 est fatale. CDC7 est une kinase nécessaire au cours de la phase S pour la reprise de la progression des fourches de réplication arrêtées. Ce phénotype, comme décrit précédemment, est dépendante de la présence de gènes TRK1 et TRK2. Ces données, considérées ensemble, suggèrent fortement l'existence d'un défaut dans les mécanismes de réplication de l'ADN en termes d'un pH élevé et la forte concentration de intracellulaire du potassium.