BIOLOGIE MOLÉCULAIRE DES MICRO-ORGANISMES

Auteur: GUISANDE ÁLVAREZ JOSÉ ANTONIO.
Année: 2001.
Université: VIGO [www.uvigo.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS DE VIGO.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS DE VIGO.

Résumé: L'Espagne est le plus grand producteur de mollusques bivalves de l'Europe, la plus grande part de cette activité dans la Galice. L'agriculture intensive produit une augmentation du risque d'épidémies de maladies infectieuses, qui crée la nécessité de suivre et de contrôler à la fois sur l'environnement et sur leur propre croissance coquillages. Les objectifs de l'étude sont d'identifier polifásica bactéries associés à la culture de mollusques bivalves, la sélection des tests phénotypiques différentiels pour sa caractérisation et la conception des sondes olognonucleótidos spécifiques permettant son identification rapide. Un total de 488 souches isolées de l'eau, le phytoplancton, des semences, des larves et élevage des palourdes et des huîtres en Galice et 51 souches de référence ont été caractérisés par phénotypique taxonomie numérique utilisant 92 des tests physiologiques, morphologiques et biochimiques. Différentes espèces du genre Vibrio ont été identifiés le plus souvent à partir d'échantillons de palourdes, les huîtres de culture et de l'eau, tandis que Pseudomonas et Pesudoalteromonas étaient le plus souvent isolés entre les sexes à partir d'échantillons de phytoplancton. Ce document propose un ensemble de tests phénotypiques pour la présomption de l'identification des principaux groupes identifiés bactérienne. En raison de l'identification rapide qui permet à ces tests et seront très utiles pour le contrôle de la qualité des mollusques bivalves, les usines de traitement ou industrielles personnel travaillant dans le contrôle sanitaire et hygiénique. Un total de 71 isolats anaérobies facultatives représentants de la fenones obtenus par taxonomie numérique ont été caractérisés en utilisant ribotipado. Les profils ribotípicos obtenus ont été inclus dans 9 ribogrupos. Les représentants de chacun phylogénétiques ont été analysées par séquençage du gène codant pour l'ARNr 16S. L'identification polifásica permis d'isolement pour la première fois V.trasmaniensis, V.kanaloae, V.pormeroyi et V.neptunius d'autres cultures et palourdes, et aussi la conception de certains oligonucléotides qui permettent son identification rapide.

Auteur: RUIZ GARCÍA MONTSERRAT.
Année: 2003.
Université: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE [www.umh.es].
Lieu de l'exposition: MEDICINA.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNÁNDEZ.

Résumé: L'application des techniques moléculaires à l'étude de la production de la tuberculose est une percée dans la compréhension de cette maladie. Techniques plus utilziadas sont: RFLP de IS6110 (norme technique estime que l'insertion d'une séquence), et des techniques basées sur la PCR (spoligotypius, VNTR yAFLP très utiles comme compléments à RFLP de IS6110). RFLP est utilisée pour améliorer les connaissances sur l'épidémiologie de la tuberculose dans les populations, poire n'est pas capable de discriminer les souches de moins de 6 copies de IS6110, dans ces cas pourrait être utile techniques basées sur la PCR. Nos objectifs étaient les suivants: 1 - Améliorer la compréhension de l'épidémiologie de l'ABC dans le domaine de la santé Elche en appliquant la technique de référence IS6110 - RFLP. 2 - Evaluer l'importance et l'utilité des AFLP complétant IS6110 - RFLP et à l'applicabilité à l'étude de cette maladie. 3 - Étude de l'épidémiologie moléculaire correspondant à l'épidémiologie classique.

Auteur: NADAL MATAMALA ANNA.
Année: 2003.
Université: GIRONA [www.udg.es].
Lieu de l'exposition: CIENCIAS.
Lieu de préparation: LAB. INVESTIGACIÓN DE MEDICINA INTERNA-HEPATOLOGIA DEL HOSPITAL DE LA VALL D'HEBRON.

Résumé: Le virus de l'hépatite C (VHC) conduit à une hépatite chronique qui affecte plus de 171 millions de personnes. Il s'agit d'un virus à ARN positif chaîne est classé dans la famille Flaviviridae et de l'ARN, comme la plupart des virus est caractérisé par un taux élevé de mutation. L'une des principales conséquences biologiques du taux élevé de mutation est de la résistance au traitement. Voulait que les autres solutions thérapeutiques pour lutter contre le virus, y compris l'utilisation de ribozimas dirigidad directement contre le génome ARN du virus. La ribonucléase P (Rnasa P) est une ribozina qui est présent dans tous les organismes car il est l'enzyme responsable de la maturation des prescursores de transfert d'ARN. Il s'agit d'un endonucleasa de très spécifique et diffère des autres naturelles ribozimas pourquoi reconnaît éléments destructurales plutôt que dans l'ordre. Le plus intéressant basé sur la thérapie est qu'il a été démontré que l'on peut orienter leurs activités vers guider RNA utilisant toute une séquence de l'ARN que lorsque Hybride avec l'ARN cible, l'hybride imiter la structure secondaire du substrat narural. L'objectif ultime de ce travail est coupée, in vitro I'RNA VHC utilisant ribozima Rnasa P. Nous avons étudié deux modèles de Rnasa P, Rnasa P humains guidés par des séquences extérieures de guide (EGS) i RNA M1 de l'Rnasa P E.coli liées à la séquence guidée par l'extrême 3 '(ribozima M1GS). Avant de diriger ribozima, nous avons étudié la structure et la variabilité d'une région du génome du virus, car il a été décrit qui sont des facteurs qui peuvent limiter l'efficacité de toute ribozima. Le présent document fournit des données de l'accessibilité et de la variabilité d'une région interne de genomo, la région E2/NS2.Los résultats ont montré que in vitro, a été de diriger les deux Rnasa P humains comme ribozima M1GS avait HCV RNA et coupées dans une position par défaut, comme accessible . Une analyse des mutations de penser que la région est variable étudiée. En raison de l'interaction avec les séquences guide est sensible aux variations de cibler ces mutations pourraient affecter l'efficacité du tribunal. Devant ces résultats et dans le cas de viser une stratégie thérapeutique serait d'attaquer plusieurs cibles simultanément. D'autre part, deux coupes ont été marquées observées sur le génome VHC lorsque incubées avec cet extrait de Rnasa P séquences de l'homme en l'absence d'orientation. Pour carecterización ont appliqué différentes techniques qui peuvent être divisées en méthodes directes (RNA empreintes digitales) i indirecte (inmunoprecipitación et inhibition compétitive). Les résultats montrent que Rnasa P humains enzyme est responsable de la spécificité des réductions qui sont situés, l'un sur l'entrée interne ribosomes (IRES), et l'autre dans la région de codage structurelles et non structurelles. Le Rnasa P est l'un des métabolisme de l'ARNt. En outre, si un virus est très variable, ces structures doivent être important pour le virus, car il est maintenu dans toutes les variantes naturelles analysées. Quel que soit leur rôle, la présence de ces structures replantea initiale stratégie thérapeutique parce que sa ressemblance avec eltRNA les rend vulnérables à l'attaque Rnasa P directement, sans la nécessité d'orienter les séquences.

Auteur: LLARENA FERNÁNDEZ MARTA.
Année: 2004.
Université: PAÍS VASCO [www.ehu.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Résumé: Cyanobactéries dans le nitrate / nitrites sont transportés à la baisse par le biais d'une cellule convoyeur "ATP-binding cassette (ABC) a appelé NRT, composé de quatre sous-unités protéines: NrtA (sous-unité periplásmica responsable de la fixation de l'azote / nitrites), NrtB (sous-unité transmembranaire) , NrtC et NrtD (sous-unités de nucléotides contraignant). Le filamenteux cyanobacterium, thermique, et non la fixation d'azote, Phormidium laminosum avaient été identifiés les gènes nrtA, nrtB et nrtC, qui codent l'ABC transporteur de nitrate / nitrites, qui fait partie du opéron nir, avec le gène mirA, qui consolide le nitrite réductase. Cette étude a permis d'identifier le gène nrtD, après mrtC, une partie de opéron nir. La sous-unité NrtC transporteur de nitrate / nitrites P.laminosum a été purifiée à partir de cellules déficientes en azote et il a été démontré que hydrolysé in vitro de l'ATP, en l'absence d'autres éléments du convoyeur. Gènes nrtC et nrtD ont été cloné dans un plasmide d'expression pQE - 9 et ont été exprimées dans E. coli, comme la purification de protéines de fusion à la file d'attente histidinas. Nous avons caractérisé sous-unités His6NrtC et His6NrtD pour sa capacité à catalyser l'hydrolyse de l'ATP, en ce qui concerne leur spécificité pour plusieurs substrats et inhibiteurs de sensibilité, ce qui révèle que les deux protéines hydrolysées in vitro de l'ATP. En outre, grâce elctroforesis en gels de polyacrylamide dans des conditions de dénaturation n'a été détectée la formation homodímeros de NrtC, His6NrtC et His6NrtD. La formation de homodímeros de His6NrtD a également été testé par spectrométrie de masse MALDI - TOF.

Auteur: BONJOCH FORNOS XAVIER.
Année: 2004.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Résumé: Le genre Bifidobacterium a été proposé comme un indicateur de l'origine de la contamination fécale, comme certaines espèces de Bifidobacterium sp. Il se trouve uniquement chez les humains et d'autres animaux à sang chaud. Ces micro-organismes peuvent être utilisées pour distinguer entre les humains et les animaux contamination fécale. Celles-ci sont dans une concentration entre 10 9 et 10 10 UFC / g dans les matières fécales. En outre, anaérobie leur physiologie, leurs besoins alimentaires complexes et l'incapacité de se multiplier en dessous 30Â ° C ont peu de chances de jouer dans le milieu extraenterico. L'objectif de cette thèse a été l'optimisation de ces techniques pour la détection et la quantification des bifidobactéries spp.en échantillons des eaux usées. L'analyse sélective des médias pour la détection de Bifidobacterium, Beerens, HBSA et BFM, a présenté des énumérations très similaires dans les eaux usées, ce qui montre une haute spécificité pour la détection des bifidobactéries. Toutefois, le moyen Beerens et HBSA récupéré un nombre sensiblement plus élevé et de l'égalité des bifidobactéries arables pas le milieu BFM. Le coloniale hybridation avec la sonde a permis une confirmation Bif énumérations pratique, en donnant une correction à la fraction de la croissance donnant pas de moyens spécifiques utilisés. La moyenne HBSA permet de calculer le ratio bibidobacterias respect total bibidobacterias fermentation du sorbitol / Y / T), ce qui a permis de distinguer l'origine de la contamination fécale. Les valeurs de ce ratio au-dessus de 0,20 indiquent une origine humaine de la pollution. Les valeurs inférieures à 0,20 indiquent une contamination d'origine animale. Cette étude a mis au point une PCR pour plusieurs espèces B.adolescentis et B.dentium comme un outil complémentaire pour caractériser les moléculaire origine de la contamination fécale dans l'eau. La limite de détection de cette technique est 10 3 CFU/100mL. Pour quantifier ces espèces dans l'environnement a procédé à une PCR quantitative pour ces deux espèces (proposé comme indicateur de la contamination fécale dans les eaux usées). Cette technique fournit une limite de détection de 10 4 UCF/100mL. Enfin, les études ont été menées inactivation des Bifidobacterium genre dans l'eau des rivières à travers toutes les techniques mises au point à la thèse. Genre Bifidobacterium est potentiellement une bonne indication de l'origine de la récente contamination fécale dans l'eau. Mais sa faible persistance dans l'environnement aquatique est un inconvénient lorsque la contamination fécale n'est pas nouvelle.

Auteur: CANTERO GONZÁLEZ SALAZAR LAURA.
Année: 2004.
Université: POLITÉCNICA DE MADRID [www.upm.es].
Lieu de l'exposition: E.T.S. INGENIERÓS AGRONOMOS.
Lieu de préparation: E.T.S. INGENIEROS AGRONOMOS.

Résumé: La rhizosphère est la surface du sol est modifié par la présence d'exsudats et les racines des plantes. En conséquence, il existe une plus grande activité microbienne dans le reste de la terre, et c'est dans la rhizosphère, où est le début de l'interaction entre la bactérie symbiotique Rhizobium fixatrices d'azote et de la racine du légume. % & / Research récemment révélé l'existence de systèmes autoinduction ( "le quorum sensible"), dans de nombreux Rhizobium, qui peuvent jouer un rôle important dans les premières étapes de la reconnaissance et de la colonisation de la rhizosphère de la légumineuse hôte (Rodelas et coll. 1999 ). Les systèmes sont autoinduction chimiques intercellulaire systèmes de communication qui permettent de détecter des cellules bactériennes de la taille de la population dans laquelle ils se trouvent. Dans le meilleur des cas étudiés, les signaux chimiques sont des molécules acil - homoserian des lactones (AHLs), qui, de par sa structure, librement traverser les membranes cellulaires. Ces molécules sont synthétisées à de faibles niveaux normalement agir en tant que coorganisateurs inductoras ou coorganisateur represoras systèmes gène au-dessus d'un seuil. Précisément en raison de leur structure chimique qui leur permet d'entrer et de sortir de la cellule, seul ce seuil sera atteint d'une cellule de déterminer quand un nombre suffisant de cellules est à proximité immédiate de cette cellule. Ce sont donc des systèmes de détection de la densité cellulaire, et a démontré son importance dans le processus dans lequel la taille de la population est importante, car la pathogénicité, la luminescence, et ainsi de suite. Le système mieux connu dans rizobios est de Rhizobium leguminosarum bv.viciae A34 en symbiose avec les pois, grâce au travail effectué par Downie et coll. (Voir l'examen Wisniewski Dyé - Downie, 2002). L'objectif principal de cette thèse est fondée sur des études antérieures de systèmes autoinduction dans cette souche, et est de déterminer la nature, la composition, les fonctions et la régulation de tels systèmes dans autoinduction souches du Rhizobium leguminosarum bv.viciae UPM791 et 3841. Les objectifs spécifiques poursuivis dans ce Thèse de doctorat: 1 - Etude sur la production de molécules type de signal acil - homoserina des lactones (AHLs) souches UPM791 et 3841. Cela aura lieu les techniques de chromatographie sur couche mince de séparer et d'identifier des molécules permettant de synthèse. 2 - Identification et description à la fois dans les souches des différents systèmes de autoinduction gène responsable de la production de ces molécules, ainsi que sa localisation dans le génome. Cela aura lieu les techniques de biologie moléculaire (PCR, hybridation avec sondes ...) pour permettre à la caractérisation de ces systèmes. 3, - Recherche de gènes et de protéines qui sont régies par des systèmes autoinduction. Cela sera utilisé pour la séparation de protéines en utilisant des techniques de haute résolution des gels à deux dimensions, afin de permettre la comparaison des proteomas de souches différentes en termes de présence et de l'absence de acil - homoserina des lactones (AHLs). Ces protéines varier son expression peut être identifié par empreinte peptidique (spectroscopie de masse MALDI - TOF) et de la comparaison avec la banque de données nous donnera la séquence génomique. 4 - Détermination du rôle des systèmes autoinduction dans la survie et la compétitivité des R.leguminosarum dans la rhizosphère et à la surface de la plante. Ces activités se dérouleront études fonctionnelles dans la présence et l'absence de AHLs nécessaires à la détermination des paramètres tels que l'adhésion à la racine, ou l'efficacité en symbiose au début et à la fin des étapes de l'interaction avec la plante.

Auteur: LUQUE ALMAGRO VICTOR MANUEL.
Année: 2004.
Université: CÓRDOBA [www.uco.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: Dans la ville de Cordoba, de l'industrie joyera généré à la suite de leur activité un déchet contenant de fortes concentrations de cyanure libre et complexe cianuro - metálicos. Dans le but de concevoir un processus de la biotechnologie pour éliminer ces composés toxiques ont été isolés de la boue Guadalquivir qui passe dans Cordova, une bactérie alcalófica capable de dégrader le cyanure en milieu alcalin. Les bactéries, qui est classée comme Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT5344, de l'utilisation des résidus de cyanure libre ou bijoux comme une source d'azote pour la croissance aérobie. Le chemin de la dégradation du cyanure dans cette bactérie passe par cianhidrinas, alors que leur capacité à synthétiser sideróforos vous permet d'utiliser les complexes cianurados très stable, comme le ferrocyanure férrico.Una rapprochement protéomique a révélé que P.pseudoalcaligenes CECT5344 cyanure induit une protéine qui pourrait être Impliqués dans la synthèse de sideróforos (fosforribosilglicinamida formiltransferasa) protéines impliquées dans la protection contre le stress oxydant (alkyle hidroperóxido réductase et d'un ADN la protéine de liaison de type ferritine), une réglementation protéines normalement induite dans des conditions de limitation de l'azote (RP - 2) et d'une protéine de choc thermique . En P.pseudoalcaligenes CECT5344, métabolisme cyanate pourrait dépendre d'un convoyeur et le bicarbonate sont contrôlées par catabolite répression. Ce travail établit pour la première fois un lien entre le métabolisme et la cyanate cyanure, mais dans un gène mutant cynS indique que le cyanate pas esun intermédiaire de l'assimilation forcée de cyanure. Jusqu'à présent, P. Pseudoalcaligenes CECT5344 est la première bactérie qui dégrade décrit cyanure à pH alcalin, et en l'absence de glucose. Toutes les fonctions de cette bactérie un parfait candidat pour une utilisation dans proceos biotechnologie, comme cela a été démontré avec destoxificacióm résidus de bijoux dans un bioréacteur et à la construction d'un biocapteur de cyanate.

Auteur: MARÍN ALBERDI M. DOLORES.
Année: 2004.
Université: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR SEVERO OCHOA.

Résumé: Ce document a obtenu une souche de Saccharomyces cerevisiae boulangerie industrielle capables amilolítica pour inclusion dans son génome gène SWA 2 de Schwanniomyces Occidentaux. La nouvelle souche ne contient que de l'ADN de levure et possède un haut niveau d'utilisation de l'amidon. La transformation de la levure a été réalisée grâce à un processus d'intégration de la génomique ont conduit allocus ILV2. Le gène SWA 2 est exprimé sur une constitutifs promoteur l'ADH 1. Il a étudié la croissance, et l'utilisation de la capacité de fermentation de l'amidon de la nouvelle souche obtenue. Panaderia effectué des tests ont révélé qu'il n'ya pas d'améliorations significatives lors de l'utilisation de la transformée souche de S. cerevisiae. Nous avons donc évoqué la coexpresión de amilasa SWA 2 avec d'autres activités amilolíticas. À cette fin, nous avons étudié le système amilolítico de levure Phaffia rhodozyma, comme une possible les activités des donateurs amilolíticas. Levure Phaffia rhodozyma a été largement utilisée dans l'industrie alimentaire, car elle produit les pigments astaxantina. Dans cet article, nous avons étudié la croissance de la levure sur divers substrats et analyse votre système amilolítico. Il a été purifié à partir de celle-ci - glucosidasa extracellulaire de la levure en utilisant la chromatographie d'échange d'ions. Le poids moléculaire de la protéine purifiée est 115 + -7% fondée sur le témoignage de filtration moléculaire d'une manière non dénaturés. Le SDS-PAGE gels de déterminer que la protéine est composée de deux sous-unités d'environ 60 kDa chacune. Les conditions d'activité maximale sont 45Â ° C et de pH 5,5. L'enzyme a une forte activité sur le maltose, maltotriosa et oligosaccharides et non hidrolizalos substrats, qui sont formés par des liens à (1,6). Le nouveau - glucosidasa présente activité transglicosidasa et peut être utilisé pour la synthèse des fructo-oligosaccharides, d'une capacité prébiotique. Nous avons déterminé les constantes cinétiques de l'enzyme sur différents substrats. Afin d'obtenir le gène pour glucosidasa décrites, il a généré une genoteca d'ADNc de Phaffia rhodozyma. Il a également été conçu dégénérer oligonucléotides ciblant des différentes régions conservées un glucosidasas, pour amplifier l'intérieur des séquences de gènes par PCR.

Auteur: MARTIN MARCOS MARIA DEL PILAR.
Année: 2004.
Université: SALAMANCA [www.usal.es].
Lieu de l'exposition: CENTRO DE INVESTIGACION DEL CANCER.
Lieu de préparation: INSTITUTO DE MICROBIOLOGIA BIOQUIMICA.

Résumé: Gcn4p est un activateur transcriptionnel d'au moins 539 gènes chez Saccharomyces cerevisiae. L'expression du gène GCN4 est réglementée traduccionalmente fonction de la disponibilité des acides aminés, d'une "reprise de la traduction", qui repose sur quatre phases de la lecture court dans la région dirigeant ARNm - GCN4 et d'une série d'effecteurs positifs ( GCN) et négatifs (RPC). La caractérisation génétique de la mutation spontanée gcd17 a identifié à RPL33A comme une nouvelle GCD gène dont le produit est requise pour la répression traduccional de GCN4 dans S. cerevisiae. L33A est une protéine essentielle pour la sous-unité du ribosome 60S qui fait partie d'une famille de protéines hautement conservées eucaryotes impliquées dans la liaison à la ARNt. La mutation ponctuelle rpl33a - 1 détermine le remplacement de la glycine à la position 76 par l'arginine, dans un domaine de la protéine L33A hautement conservée évolutif. Un modèle de la structure tridimensionnelle de L33A prédit que le G76 fait partie d'une boucle extérieur rigide, et que la mutation ne modifie pas le repliement de la protéine. Mutations remplacer certains déchets synthétiques dans le même domaine par d'autres produits de base ont les mêmes conséquences phénotypiques que la mutation spontanée rpl33a - 1. Tant la mutation rpl33a - 1 comme remplaçant RPL33A par un allèle nul, ce qui cause de multiples irrégularités dans le traitement de l'ARN ribosomique et de l'assemblage de présélection partículas 60S, provoquant une grave pénurie de sous-unité 60S maturité dans la cellule. L'absence de sous-unités 60S cause de graves défauts dans l'initiation de la traduction des ARN messagers en général levure, mais peut aussi favoriser la traduction des ARNm - GCN4 en particulier. Le mécanisme par lequel ce phénomène se produit dans des mutants gcd17 a cherché à interpréter en proposant plusieurs modèles, en se fondant sur la réglementation traduccional de GCN4 et de l'intégration des données obtenues dans ce travail.

Auteur: Busquets Martí Núria.
Année: 2005.
Université: AUTÓNOMA DE BARCELONA [www.uab.es].
Lieu de l'exposition: Facultad de Ciencias.
Lieu de préparation: Universidad Autónoma de Barcelona.

Résumé: Des études antérieures réalisées dans notre laboratoire ont caractérisé structurellement et phénotypique la bacteriófago SE1. Cette bacteriófago présente une haute fréquence de transduction capable d'infecter S. Enterica et sérovar Enteritidis sérovar Typhimurium. Suite à cette ligne de recherche, ce travail a été soulevée à élargir la génétique description de ce bacteriófago et caractériser les différents rôles phages SE1 état lisogenia, comme la conversion lisogénica, de l'intégration et de sa génétique commutateur ou régulateur. Le sequenciación génome bacteriófago SE1, d'un genoteca fágica et de la marche directement sur le génome a révélé qu'il a une longueur de 41941 Anonyme, traduit dans 67 orf. La comparaison avec la base de données GenBank révélé que les phages, à l'instar d'autres fagos lambdoides, est une mosaïque résultat de la recombinaison génétique et transferéncias horizontale avec d'autres bactériophages. La séquence a permis obtenus montrent que la carence dans l'extrême carboxi terminaux periplasmátic de la protéine codée par un gène de conversion lisogénica (GtrC) pourrait être la cause de la qualité du bacteriófago P22 serait capable d'infecter une cellule lisógena par bacteriófago SE1. En outre, le présent ouvrage a été donné la séquence des opérateurs dans la région pour s'entretenir avec les protéines de régulation de la génétique cI commutateur ou régulateur. À travers l'épreuve retard électrophorétique (EMSA) et l'empreinte a défini la séquence consensus des motifs de rejoindre les opérateurs protéines cI: AtAN3tTN3TATT. D'autre part, análisi la composition de l'unité de transcription génique cI par RT-PCR pirmitió déterminer que le gène orf23 partie. La protéine Orf23 sérieux potentiel de réglementation de la superfamille des ATPasas liés à la partition de la génomique. Mutants dans ce gène défectueux ont un augmento d'induction des lytic cycle dans la présence de mitomycine C, ce qui indique que cette protéine peut être un modulateur de la protéine cI ou pourrait interagir avec lui. C'est la première fois qu'une protéine caractérisé ce superfamília de ATPasas un bacteriófago qui est intégré dans le génome de son hôte.

Auteur: VICENTE GARCÍA RUBÉN.
Année: 2005.
Université: BARCELONA [www.ub.es].
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGÍA UNIVESIDAD DE BARCELONA.

Résumé: Cette thèse présente les études réalisées sur Kv1.3, l'un des canaux de potassium qui existent dans les macrophages et de son règlement à différents stimuli dans la prolifération cellulaire et l'activation. Plus précisément, la première contribution qui est jointe décrit comment le potassium canaux Kv1.3, Kv1.5 et Kir2.1 sont responsables de la circulation de la tension de sortie dépendant de l'entrée et de rectification d'être détecté dans ces cellules. Ce document montre comment Kv1.3 et Kir2.1 sont très réglementés à la fois par l'MCSF facteur de croissance comme facteurs induisant l'activation des macrophages comme ellipopolisacárido et cytokines TNFa, il électrophysiologiques changements dans le débit Kv. Ces études montrent comment, et pas seulement Kv1.3 est réglementée dans le processus de prolifération et d'activation, mais qui exige leur participation à ces processus. En plus de cette régulation (! Ion ci-joint un travail qui montre que cette modulation est un mécanisme qui peut être important dans différentes patologias systémique dont ces médiateurs sont présents dans la cachexie, les septicémies ou de l'inflammation chronique. Par ailleurs, un deuxième alinéa, dans ce Thèse de doctorat porte sur les changements dans la présentation Kv électrophysiologiques dans la prolifération et l'activation. Discute de la possibilité d'être dues à des changements dans la composition du complexe funcional.En cet égard est une contribution qui décrit la présence de macrophages, dans toutes les sous-unités Kv ¡3 étudié Moins Kv ¡34. Prolifération induit MCSF augmenter l'expression de toutes les sous-unités adjoints, alors que l'activation des stimuli divers, LPS et TNFa, réguler l'expression des gènes di ces protéines forme différente. Paramètres cinétiques de l'exode de potassium agir sur ces sous-unités, ainsi que la constante d'activation , L'inactivation et deactivación, ont été analysés dans une tentative de lier des changements moléculaires changements electrofisiológfeos dans avec prolifèrent et les macrophages activés. Une autre analyse de l'alignement électrophysiologiques changements dans les macrophages activés provient d'une publication en cours de préparation dans lequel il décrit Kv1 .5 est en mesure de Associent à Kv1.3 pour former un complexe fonctionnel générateur sorties de potassium. Ce document études montrent association par microscopie confocale et de l'électronique ainsi que la pharmacologie études confirment que la formation du complexe heteromérico. Changements dans la électrophysiologiques paramètres de la circulation, selon la composition Du complexe ont été examinées lors de divers modèles de l'expression hétérologues. Enfin, il est suggéré que les changements des seuils qui se produisent dans ce flux à divers stimuli tels que TNFa, pourraient être dues à des changements dans estequiometría des sous-unités qui composent le complexe du générateur L'exode de potassium dans les macrophages. Localisation subcellulaire et de l'environnement entourant protéines membranaires sont décisives dans les rôles. Dans le troisième paragraphe de cette mémoria présenté des études sur la biologie cellulaire du complexe formé par Kv1.3, à la fois de son trafic que sa localisation membranaire. Était en train d'étudier l'influence de différentes sous-unités présentes dans le complexe sur la biologie cellulaire de la présente, en tenant compte de l'influence de la sous-unité Kv1.5, qui avait déjà été décrite dans les macrophages, et est accompagné du dernier premières études de l'internalisation de la chaîne Grâce vesículas couché clatrina.

Auteur: NICOLAS MOLINA FRANCISCO ESTEBAN.
Année: 2005.
Université: MURCIA [www.um.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Résumé: Mucor circinelloides est un champignon filamenteux qui a une large distribution, a trouvé dans le sol, le fumier et d'autres substrats organiques en décomposition. Il appartient à la classe Zygomycota caractérisée par l'existence d'un accouplement Fusion gametangios, présentant un mycélium généralement cenocítico (chez certaines espèces peuvent présenter certaines cloisons), et produire des spores aflageladas et immobiles. L'ARN de gène silencieux est un mécanisme complexe de la régulation des gènes, conservés dans le monde eucariota (une exception notable est S. cerevisie), qui conduit à la suppression de l'expression des gènes grâce à la médiation de petites molécules d'ARN qui provoquent la destruction des ARNm, inhiber la traduction Ou inhiber la transcription. Initialement décrite comme un mécanisme moléculaire de la défense contre les virus et les transposons, ces dernières années, il a été démontré que ce mécanisme est également impliqué dans la régulation des processus complexes tels que la formation de heterocromatina, le développement et la physiologie des organismes. En plus de révéler l'existence d'un monde jusqu'alors inconnu de la régulation des gènes, les ARN de gène silencieux est devenu un outil fondamental dans l'étude du rôle des gènes, même à permettre le développement de nouvelles disciplines telles que la génomique fonctionnelle L'objectif global de ce travail a Été la caractérisation moléculaire du mécanisme de gène silencieux de l'après-guerre champignon M. Circinelloides: M. Circinelloides présente un mécanisme transgène induite gène silencieux, qui se traduit par l'introduction de copies de gènes exogènes tronçonner carB. Le phénotype taire est instable et réversible, et est le résultat direct d'une forte réduction des niveaux d'ARNm matures gène carB. Cette diminution n'est pas due à une baisse du taux de transcription de ce gène chez les individus réduits au silence, mais à la dégradation des ARNm matures, indiquant que le gène silencieux est observée après transcripcional.El silencieux gène dans M. Circinelloides n'est pas associée à la méthylation de transgéniques Séquences. Toutefois, elle est liée à la présence d'un grand nombre de copies du transgène, qui restent comme episomas des structures multiméricas. Dans M. Circinelloides, le transgène induite gène silencieux est associé à la présence de molécules siRNAs antisens et le sens. Il existe deux classes de siRNAs antisens, 21 et 25 ment, qui est différentiellement accumulées au cours de la croissance végétative du champignon. Le silence sur M. Circinelloides est associée à une amplification des processus qui se produisent dans les molécules siRNAs côté des deux classes de taille, correspondant à des séquences situées en aval de la molécule induisant. Les deux types de siRNAs sont générés essentiellement de la région 3 'ARNm cible. Elle a cloné le gène dicer1 M. Circinelloides ce chiffre avec une protéine caractéristique structurelle domaines de l'enzyme Dicer. L'expression de ce gène se produit tout au long de la croissance végétative et conduit à plusieurs transcrits, qui diffèrent sur le site de polyadénylation et / ou de poursuites de l'un quelconque de ses variantes les introns. Il n'est pas possible de connaître la fonctionnalité de substitution transcriptions. L'analyse fonctionnelle des nuls des mutants pour le gène dicer1 indique que le gène n'est pas essentiel dans le mécanisme de silencieux et suggère l'existence d'au moins un gène cubeuse plus loin. Il n'est pas exclu cependant que le gène dicer1 d'être redondants rôle dans le mécanisme du gène silencieux. Le phénotype des mutants de nul pour dicer1 indique que ce gène est impliqué dans le mycélium de croissance et de la morphologie de la hyphae, suggérant l'implication des dicer1 dans les processus réglementaires endogène grâce à la médiation de l'miARNs

Auteur: CATANESE GAETANO.
Année: 2005.
Université: CÓRDOBA [www.uco.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: Le melva (Auxis thazard et Auxis rochei) est une espèce de thon avec la plus grande importance à l'Andalou industrie de la pêche, et plus particulièrement dans l'industrie. En dépit de son importance économique, dans la mesure n'ait pas procédé à une étude détaillée afin de déterminer le degré de variabilité génétique dans les populations naturelles, a développé ni aucun système d'authentification des produits transformés melva. À cet égard, le manque de données sur ces espèces moléculaires a empêché sans doute résoudre ces problèmes. Par conséquent, dans cette thèse a été isolé et caractérisé de marqueurs moléculaires mitochondriaux et nucléaires, ont enquêté sur les caractéristiques génétiques des populations naturelles de A.rochei et a développé un système d'authentification des produits en conserve. Ils ont analysé des copies de A.rochei venant de la Méditerranée occidentale, l'océan Atlantique et le Pacifique Est est. De l'espèce Auxis thazard ont obtenu des copies de l'océan Indien occidental. Comme marqueurs mitochondriaux, il a séquencé le mitogenomas de A.rochei (Atlantique et Pacifique) et A.thazard ainsi que le thon T.thynnus, T.alalunga, Elalletteratus et K.pelamis. Le total varie entre 16501 et 16503 Anonyme pour A.rochei et 16506 Anonyme pour A.thazard. En comparant les séquences ont été trouvées entre 761 et 773 postes polymorphe. Le contenu et l'organisation a suivi le modèle général de vertébrés. L'analyse phylogénétique a révélé l'existence de deux lignées mitochondriales (mitotipo I et II) à A.roche. En outre, il y avait une origine monophylétique de A.rochei et A.thazard à l'égard d'autres espèces de thon. Pour la population de l'étude A.rochei analysé des marqueurs mitochondriaux (le cytochrome contrôle par région) et nucléaires (espaceurs ribosomique ITS - 1 et Sa - 2 et les microsatellites). Ces deux marqueurs ont révélé l'absence de différenciation génétique entre les populations atlantiques et méditerranéennes. En revanche, dans le Pacifique, la population a montré une nette séparation égard de 2 ci-dessus et pour les trois marqueurs (cytb Fst entre 0025-0031, ITS - 1 et ITS - 2 Fst entre 0083-0087, les microsatellites Fste entre 0015-0027). Données biologiques et à l'isolement par la distance expliquer ces résultats. La différenciation des échantillons Pacifique soutenir les données décrites par d'autres auteurs fondée sur des caractéristiques morphologiques et merísticas, à l'existence d'une sous-espèce A.rochei eudorax dans cette région du Pacifique. Enfin, il a mis au point et optimisé un système de multiples MS - produits PCR pour l'authentification préservé melva. Ce système était fondé sur la publication simultanée amplification de trois régions différentes mitochondriaux: le cytochrome b spécifiques A.rochei, ATPase 6, spécifique A.thazard, ARNr 12S, comme un contrôle positif d'amplification. Les essais effectués sur les produits sur le marché ont montré la spécificité et la fiabilité du système d'authentification de melva.

Auteur: SANTIAGO MORA RAQUEL MARIA.
Année: 2005.
Université: CÓRDOBA [www.uco.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: Le recours généralisé d'herbicides dans l'agriculture a conduit à l'étude en cours sur les effets de ces produits sur l'environnement, ainsi que l'étude des processus de dégradation acquérir une grande importance. La simazine est un herbicide triazínico qui a été largement utilisé dans une variété de cultures, y compris dans l'oliveraie. Dans ce travail a été quantifiée par PLC, la simazine résidus de terre d'oliviers dans la province de Cordoba, un seul des échantillons a été détecté une concentration de la simazine supérieure à 0,1 ppm. Il a été déterminé la cinétique de la minéralisation de la simazine en deux étages d'oliveraie. Nous avons réussi à isoler les microorganismes capable de croître avec la simazine comme l'unique source de carbone et d'azote. Parmi les micro-organismes isolés, sont ceux qui peuvent dégrader les herbicides et isolé les micro-organismes, bactéries, qui doivent former un consortium pour dégrader la simazine. Ces micro-organismes, les bactéries et les champignons ont été identifiés, ou au moins été en mesure de déterminer le groupe taxonomique auquel ils appartiennent par les techniques moléculaires. Parmi les microorganismes sont identifiés Xanthomonas, ps Variovarax ps Pseudothantomonas mexicaine Acidovarax sp et Methylopila capsulata. Trois itinéraires ont été décrites dégradation de la simazine dans divers micro-organismes ont été détectés et isolés les gènes codant pour les enzymes impliquées dans cette dégradation.

Auteur: PAZ GONZALEZ BEGOÑA.
Année: 2005.
Université: LEÓN [www.unileon.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AMBIENTALES.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD DE LOEN.

Résumé: Objectifs de ce travail à domicile offerts à de l'enquête étaient les suivants: 1. Un programme de développement classique de la sélection fondée sur la chance de changement. 2. CLONACIÓN des gènes de B. trispora impliqués dans le BIOSÍNTESIS de CAROTENO-, et / ou fourni une expression constitutive. 3. DEVELOPPEMENT D'UN PROTOCOLE transformer B. trispora. 4. Expression de gènes de BIOSINTÉTICOS-CAROTENO dans M. CIRCINELLOIDES et B. trispora. 5. Effet de la lumière sur la production dans CAROTENOIDES m. CIRCINELLOIDES et B. trispora. Être détecté, et les gènes CLONADO record CARACTERIZADO, CARB et de la CARRA. ORF gen de la notice (1561 PB) posee 4 INTRONES, codi-ACTINA A G, et la promotion de leur région est fonctionnelle dans E. coli et A. chrysogenum. Gènes et la CARRA est CARB liés dans une région de 4,5 kb du génome de B. trispora, et est en TRANSCRIBEN sens OPUESTOS sous le contrôle d'un promoteur bi-directionnel de 611 pb. GEN CARB de l'ORF (1955 PB) 2 posee INTRONES et codi Une protéine à l'activité FITOENO déshydrogénase. Gen de la CARRA ORF (1894 PB) 1 INTRÓN posee et codi Une protéine à l'activité FITOENO SINTASA / LICOPENO CICLASA. Gen de la CARB SUPERPRODUCTORA de la CEA? - CAROTENO B. trispora F-744 possèdent la mutation A1791C, qui conduit au remplacement de l'être dans ce AMINOÁCIDO B. trispora NRRL 2457 dans la position 528 par ARG dans ce F-744 (S528R). Gen de la CARRA CEA F-744 propres T497C la mutation qui conduit à un remplacement de ce pro AMINOÁCIDO NRRL en 2457 dans la position 143 en étant dans ce F-744 (P143S)). Les gènes de la CARB et de B. trispora CARRA sont fonctionnelles dans m. CIRCINELLOIDES. Gen de la CARB B. trispora additionnel à la carence en activité FITOENO déshydrogénase de la CEA m. CIRCINELLOIDES MS23 gen CARRA et complétant la lacune dans les activités FITOENO SINTASA et LICOPENO CICLASA du CEA M. CIRCINELLOIDES MS8. L'expression du gène de la CARRA B. trispora en m. CIRCINELLOIDES MS12 augmentations de la production G-CAROTENO et des intermédiaires BIOSINTÉTICOS G-CAROTENO, LICOPENO et NEUROSPORENO. La présence de la lumière des augmentations de production dans CAROTENOIDES m. CIRCINELLOIDES, tandis que cette diminution de la production de ces deux cultures individuelles mixtes B. trispora. Production de cultures mixtes sur CAROTENOIDES B. trispora est supérieure à NETAMENTE obtenue à la même culture des différentes souches. La transcription des gènes de la CARB et de B. trispora CARRA sont induits en termes de l'obscurité, le contraire de ce qui se passe dans m. CIRCINELLOIDES.

Auteur: Blanco Calvo Moises.
Année: 2005.
Université: A CORUÑA [www.udc.es].
Lieu de l'exposition: Facultad de Ciencias.
Lieu de préparation: Facultad de Ciencias.

Résumé: Le hemo est une molécule d'intérêt du point de vue du métabolisme de l'énergie, puisque, en plus d'intervenir dans la capture et le transport d'oxygène (indispensable pour le processus d'obtention de l'énergie par la respiration) fait également partie en tant que protéines fonctionnelles de la chaîne de transport électronique Et de la phosphorylation oxydative mitochondriale. En outre, dans le cas de la levure, agit comme un capteur d'oxygène à la pile, et est impliqué dans la régulation des gènes dépend de la disponibilité de l'oxygène. Par conséquent, la hemo une molécule est essentiel que, compte tenu de son importance, elle pourrait aider à élucider pourquoi les différences entre métabolique levure Kluyveomyces lactis et Saccharomyces cerevisiae, et nous fournir des outils pour améliorer leur ferme biotechnologie. Le gène HEM13 S. Hypoxic cerevisiae, est un gène qui code pour l'enzyme coproporfirinógeno oxydase (CPO), qui catalyse la sixième étape de la voie de biosynthèse groupe hemo. Tant le gène et la protéine qu'il produit sont des points clés dans la régulation de la synthèse des hemo dans S. cerevisiae. D'un côté, le Bureau central du projet est la première enzyme de la route besoin d'oxygène comme substrat dans la réaction, de façon que la face d'une baisse de l'oxygène peut devenir un goulot d'étranglement pour la production d'hemo (donc, il existe une relation directe entre hemo Et les niveaux d'oxygène) D'autre part, ScHEM13 est un gène hypoxique, c'est-à-dire augmente fortement l'expression dans des conditions hypoxiques. Dans la réglementation ScHEM13 intervient en outre hemo comme l'initiateur d'une cascade de régulation conduisant à la suppression aérobie ou desrepresión hypoxique gène. Cette thèse a isolé le gène KlHEM13 d'un genoteca K. Lactis et a procédé à un essai d'une complémentation mutante Schem13, notant que KlHEM13 encode un PCO façon similaire à la S. cerevisiae que les deux sont fonctionnellement interchangeables. A la base de ce qui précède, a mis au point une prédiction de la structure tertiaire de la BCP K. Lactis s'inspirant de la récente cristallisation et structurelles élucidation de la BCP S. Cerevisaie, avec une ressemblance étroite entre les deux. Il a également étudié la régulation de KlHEM13 en réponse à l'oxygène par le biais de mesures d'activité? - Galactosidasa Et nord. KlHEM13 est réglementée d'une manière similaire à la manière dont elle ne ScHEM13, parlant tellement répandue dans l'hypoxie. Toutefois, KlHEM13 semble suivre un modèle de règlement autre que celle décrite pour ScHEM13 car, alors que celui-ci est réprimé par un facteur Rox1 aérobiose, KlHEM13 pas affecté par KlRox1. Il révèle la faiblesse aérobie expression de KlHEM13 dans une souche mutante dans le gène KlROX1 codage répresseur du même nom. De même, il semble que KlHEM13 n'est pas régie par des facteurs de S. cerevisiae, Loa Agir sur l'expression des gènes hipóxicos. Nous avons identifié les points d'initiation de la transcription pour KlHEM13 et deux des plus intenses se sont réunis 3Â'del premier ATG (ATG1) pautra de l'ORF et 5Â'de un seconde interne ATG (ATG2). Ils ont aussi trouvé d'autres points faibles 5Â'del ATG1 parmi eux un présent seulement pu hipóxicas. L'analyse des transcrits par RT-PCR a révélé qu'il existe certaines qui ont tous deux ATGs et des fusions à lacZ utilisant à la fois ATGs indiquer qui est susceptible de générer des deux protéines (bien que l'on ne sait pas si cela se produit de façon naturelle) a également obtenu Nulle mutante de KlHEM13 pas possible en l'absence de précurseurs hemo, a été vérifié et mesuré leur activité BCP ainsi que leur souche isogénica sauvages de cultures et d'aérobic cellule dans la fraction soluble (libre mitochondries et les membranes) nul mutante de KlHEM13 comme prévu , Aucune activité BCP. Mais si la souche a présenté à ce qui, du moins dans les conditions d'essais, le BCP K. Lactis est cytosolique comme son homologue S. cerevisiae. Enfin a été étudié par des tableaux, la régulation transcriptionnelle en réponse à l'oxygène disponibilité d'un certain nombre de gènes K. Lactis homologues de l'qu'on 8 et S. 4 e 1 cerevisiae, encoder des facteurs de transcription impliqués dans la régulation des gènes dépendant de l'oxygène. Les gènes ont été étudiés: HAP1, ROX1, MOT3 Et MGA2. K. Lactis Dans aucun de ces gènes montrent après six heures de l'hypoxie, montrer les changements dans l'expression à l'égard de aérobie. Dans le cadre de cette étude a également analysé le comportement des gènes dans la voie de biosynthèse hemo K. Lactis encore étudié: KlHEM2, KlHEM3, KlHEM4, KlHEM14, KlHEM15. KlHEM14 indiquent une légère après six heures d'induction de l'hypoxie, rien de comparable à l'induction de près de trois fois celle montre ScHEM14.

Auteur: CORDON PRECIADO VIOLETA.
Année: 2005.
Université: SALAMANCA [www.usal.es].
Lieu de l'exposition: CENTRO DE INVESTIGACION DEL CANCER.
Lieu de préparation: CENTRO DE INVESTIGACION DEL CANCER.

Résumé: Pour assurer l'intégrité du génome, les cellules eucaryotes ont mis au point des mécanismes d'adaptation, connu sous le nom de "postes de contrôle", qui coordonne la réparation des lésions de l'ADN dans la progression du cycle cellulaire. Dans la levure Saccharomyces cerevisiae le kinases Rad53 est un régulateur de ces mécanismes. À son tour, est une protéine essentielle pour la croissance normale des cellules. Par étiquetage fin carboxi - le terminal de la protéine Rad53 avec epítopo A, nous avons créé une souche mutante caractérisée par une réduction des niveaux de ces kinases. Les cellules de levure portant l'allèle rad53HA sont apparemment normal, car elles sont viables et n'ont pas de défauts manifestes dans la croissance cellulaire. Toutefois, lorsqu'il est exposé à un traitement par agents génotoxiques montrent une sensibilité inégale égard à la forme sauvage, ce qui indique qu'ils sont defectivas de l'activation de certains postes de contrôle. L'exposition de ces cellules à un traitement par l'hydroxyurée, un médicament qui inhibe la synthèse de l'ADN, la viabilité de perdre en raison d'un effondrement de la fourche de réplication en cours, comme le montre l'électrophorèse en deux dimensions de l'ADN. En revanche, lorsqu'ils sont exposés à des doses de sublétaux agent alkylant metil - méthane - sulfonato, les cellules rad53HA sont plus tolérants que le type sauvage de drogues, présentant une croissance plus élevée en sa présence, qui pourrait être expliqué par un prématuré désactivation de la fonction de contrôle. La protéine de fusion est fonctionnelle, comme l'ont montré les essais autofosforilación place. En outre, la surexpression renverse sa sensibilité aux agents génotoxiques observés dans la souche marqués, ce qui indique que les défauts qui devraient être mises en place pour les faibles niveaux de la basale kinases. Ce travail montre que la modulation de l'activation de Rad53 est cruciale pour le bon fonctionnement des postes de contrôle et d'une réduction de l'activation de la même cause, contrairement à certains agents génotoxiques, l'augmentation de la survie cellulaire en présence de lésions de l'ADN.

Auteur: GODIO FERNÁNDEZ RAMIRO PEDRO.
Année: 2006.
Université: LEÓN [www.unileon.es].
Lieu de l'exposition: FACU.DE CIEN. BIOL. Y AMBIENTALES.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.

Résumé: Il a été développé et optimisé une stratégie efficace pour la conversion à H. Sublateritium, médiatisé par A. Tumefaciens. Elle a montré l'importance d'utiliser des séquences promoteurs appartenant, au moins au même service (Basidiomycotina) de transformer efficacement les espèces du genre Hypholome. Il ya eu une forte corrélation entre le pH du milieu de culture et la production d'acide clavárico dans différents milieux de culture testés. Il ya eu aussi l'influence de divers facteurs sur la production d'acide clavárico, y compris l'ajout de cuivre, de l'agitation de la culture ou des suppléments d'huile. Ont été identifiées dans le génome de la souche HS898 H. Sublateritium deux gènes codant des enzymes importantes dans la biosynthèse des stérols et des acides clavárico, erg1 et osc1; ces gènes ont été clonés et séquencés. Le gène erg1 de 1659 paires de bases, codant pour une protéine de 461 acides aminés avec une masse moléculaire de 49079 kDa déduits. La protéine codée par ce gène, montre les régions de la FAD contraignant conservé certaines caractéristiques de monooxigenasas. La surexpression du gène erg1, porte augmenté la production d'acide clavárico en rapport avec l'augmentation de la posologie de gènes, mais augmente également la croissance du mycélium. L'atténuation des gènes erg1 génère un phénotype typique dépendant ergostérol (transformants fera que s'accroître si le milieu de culture est ajouté ergostérol), suggérant que le gène erg1 éventuellement être impliquées dans le métabolisme du primaire Sublateritium H., et aussi dans le métabolisme secondaire, comme elle Réduit la production d'acide clavárico. Le gène osc1 de 2840 paires de bases, codant pour une protéine de 721 acides aminés avec une masse moléculaire de 82388 kDa déduits. La protéine codée par ce gène, introduit les régions conservées "QW" caractéristique de la majorité des terpenociclasas. La surexpression du gène osc1, porte augmenté la production d'acide clavárico en rapport avec l'augmentation de la posologie de gènes, sans augmenter la croissance du mycélium. La perturbation du gène osc1 causes des interruptions dans la synthèse de l'acide clavárico. En outre, la croissance du gène mutant osc1 entrecoupées est similaire à la souche parentale, et ne nécessitent donc aucune supplémentation avec ergostérol pour leur développement normal, ce qui suggère que le gène osc1 seul est impliqué dans le métabolisme de H. Sublateritium secondaire, en particulier Sur la route biosintética acide clavárico. L'atténuation des osc1 gène, soit par le biais de la stratégie de l'ARN antisens ou de la stratégie de l'interférence ARN confirme les résultats obtenus lorsque le gène osc1. H. exigences étaient Sublateritium mutant superproductores comme subproductores acide clavárico. L'analyse des mutants a révélé que certains des gènes qui sont sobreexpresados dans superproductores mutants, sont directement liés à la biosynthèse des stérols.

Auteur: GONZALO ASENSIO JESUS ANGUEL.
Année: 2006.
Université: ZARAGOZA [www.unizar.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA.

Résumé: La tuberculose est actuellement la principale cause de décès dus aux maladies infectieuses, à plus de deux millions de personnes meurent chaque année et le tiers de la population est infectée par Mycobacterium tuberculosis. Bien que la tuberculose est une maladie traitable avec des antibiotiques et peut être prévenue par la vaccination, l'apparition de souches résistantes aux médicaments antituberculeux et de la variable d'efficacité protectrice du vaccin BCG contre les formes pulmonaires de la maladie reste la victoire contre la tuberculose hors de portée. La recherche d'un vaccin efficace continue, les initiatives conjointes des laboratoires européens et américains ont rendu possible la construction de l'efficacité des vaccins candidats. En fait, le point de départ de ce travail a été le gène phoP, dont le rôle dans la virulence de M. tuberculosis a déjà été étudié dans notre laboratoire en collaboration avec l'Institut Pasteur à Paris. Un mutant phoP construit dans la souche clinique MT103 donne une meilleure protection contre la tuberculose que le BCG dans plusieurs modèles animaux, ces résultats suggèrent que le mutant comme un candidat prometteur pour vivre vaccin. Cependant, bien que la virulence du phénotype mutant phoP a été bien étudiés, les mécanismes moléculaires qui conduisent à l'atténuation ne sont pas caractérisés. Par conséquent, cette thèse a été axée sur la compréhension de la fonction des gènes phoP et déchiffrer son rôle dans la virulence de la tuberculose. PhoP est un régulateur transcriptionnel qui fait partie du système à deux composants (2CS) PhoPR M. tuberculosis. Le 2CSs médiane transcripcionales modifications en réponse à certains stimuli et sont impliqués dans la régulation de la virulence de bactéries pathogènes. Afin de caractériser le rôle du système génétiquement PhoPR, nous avons construit par delección mutant dans le gène phoP ou les deux gènes phoPR dans trois différentes souches de M. tuberculosis. L'analyse biochimique de ces mutants montrent que PhoP coordonnée et régule positivement la synthèse des lipides impliqués dans la virulence de M. tuberculosis. Ces résultats, en plus d'être une bonne explication pour le phénotype des mutants atténués phoP représentent l'une des premières preuves expérimentales de la régulation transcriptionnelle du métabolisme lipidique dans la tuberculose. Ce travail a également porté sur la compréhension du mécanisme d'action du système PhoPR. Le fait que certaines de ces 2CSs autorregulan ses propres termes, nous a conduit à étudier les interactions entre les PhoP avec son propre promoteur et de la transcription du gène phoP. Nos résultats montrent que l'ARNm de phoP est synthétisée à partir de trois sites d'initiation de la transcription (c. à thé) suggérant une régulation complexe de son expression. Nous avons également montré que PhoP rejoint son propre promoteur. La région comprend PhoP union de l'c. à thé de ce gène. Ces résultats suggèrent que PhoPR est un système auto-régulé et qui nous fait penser que l'expression de gènes réglementée par PhoP dépend en grande partie de leur propre expression. L'un des objectifs les plus ambitieux de cette étude était d'identifier les gènes réglementée par PhoP dans une tentative de comprendre le niveau transcriptionnel atténuation de la souche mutante. Pour identifier le regulón de PhoP ont mené deux études: l'identification de profils transcripcionales utilisant puces à ADN pour étudier les modes d'expression en deux dimensions par électrophorèse des protéines. Ces deux expériences montrent une bonne corrélation, ce qui donne de la force à notre étude. Les résultats indiquent que PhoP pourraient être impliqués dans la régulation du contrôle transcripcionales trois parcours: la rénovation de l'enveloppe cellulaire, l'adaptation métabolique à la pénurie d'oxygène et de la réponse aux chocs thermiques. Transcripcionales Ces réponses sont liées au mode de vie intracellulaire M. tuberculosis, et donc avec 8 s à 4c5 ou virulence, donc altération de la phoP mutantes pourraient causer atténuation. Bien que le phénotype atténué de la souche mutante devrait être principalement due à la mutation du gène phoP, polymorphismes propre souche parentale MT103 pourrait avoir contribué à l'caractéristiques phénotypiques et les propriétés du vaccin mutant phoP, par conséquent, on a essayé de déterminer la souche polymorphismes MT103 . Les résultats obtenus au moyen de puces à ADN démontrent la perte de certains gènes dans la souche MT103 rapport à la souche de laboratoire H37Rv.

Auteur: REVERTER BRANCHAT GEMMA.
Année: 2006.
Université: LLEIDA [www.udl.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE MEDICINA UDL.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUT UDL.