LEVURE

Auteur: CIUDAD SÁNCHEZ ANTONIA.
Année: 2002.
Université: EXTREMADURA [www.unex.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: DPTO. MICROBIOLOGÍA FAC. DE CIENCIAS.

Résumé: La levure Candida albican maladie est un champignon qui provoque une infection systémique au sida et les patients sous traitement, le système immunitaire. Ceci a été identifié dans un champignon homologue protéines Rad52 de Sacchatomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe et de l'homme. L'absence de CaRad52p dans la cellule aboutit à des défauts dans les mécanismes de recombinaison homologue reflétées dans le processus d'intégration de la génétique des fragments líneales ADN plasmidique entretien, ainsi qu'une plus grande instabilité génomique, qui se manifeste par exemple dans la perte des chromosomes à haute fréquence. L'absence de CaRad52p dans la cellule champignon provoque également une croissance pseudofilamentoso est dans une position où il n'est pas induite par la croissance --. Enfin, les cellules manquent CaRad52p sont plus invasifs et moins virulents.

Auteur: FRASÉS CARVAJAL SUSANA.
Année: 2003.
Université: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE [www.umh.es].
Lieu de l'exposition: MEDICINA.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNÁNDEZ.

Résumé: La cryptococcose est une maladie fongique maladie grave et souvent opportunistes, souvent affectent les patients avec la détérioration du système immunitaire. La maladie n'est pas parmi ceux qui sont considérés être notifiée dans n'importe quel pays du monde il ya donc une inégalité de l'information sur son impact sur la population en général et des groupes les plus exposés tels que les personnes atteintes du SIDA, les patients atteints d'un cancer ou d'individus récepteurs de la transplantation d'organes. Les différents écologie, la répartition géographique, l'épidémiologie et la virulence de ses deux variétés (Cnvar. Neoformans et Cnvar.gattii) a pris une intéressante impulsion à l'étude de nombreux physiologique et moléculaire, les aspects de cette levure. Les études cherchant typage moléculaire sérotypes et variétés Cruptococcus, ont cherché à interpréter les termes edpidemiológico recherche de motifs qui font preuve d'un certain rapport à l'origine des isolats. Les marqueurs moléculaires proposé jusqu'ici comportent des éléments répétés du génome (ce que l'on appelle les séquences minsatélites), les schémas digetión de certains gènes, la séquence des espciadores intergénicos entre gènes ADNr et autres. Certains de ces marqueurs ont proposé d'établir une répartition selon les zones géographiques, mais les résultats ne sont pas encore concluants, et il est d'un grand intérêt pour élargir l'échantillon de valeur. Dans ce document, nous avons analysé 110 souches de la Constitution de sources diverses (environnement, clinique et clinique vétérinaire humaines). La caractérisation des isolats a été réalisé à la fois du point de vue phénotypique et génotypique. D'une part, ont été analysées des variables telles que la diversité phénotypique, auxonotipo et sérotype C.neoformans. La caractérisation génotypique a été effectué sur la base de l'évaluation de 5 marqueurs. Deux d'entre eux sont situés dans la région de l'ADNr (5.8S - SES et ISM), un autre pour le gène URA5 et les deux autres sont minisatellite séquences (M13 et (GACA) 4). Les résultats de cette étude montrent que l'étude de 110 souches de C.neoformans révéler l'existence de 99 profils génotypiques et 23 profils différents phénotypiques, ce qui démontre la forte variabilité intraespecie dans cette levure. L'analyse phénotypique de la levure révèle que le sérotype A est la plus répandue dans notre pieux, cette variable est le facteur clé dans le phénotypiques grappes, en l'absence de bloc de l'homologie de présenter plusieurs souches de différents sérotypes regroupés. Genotypic analyse de la levure montre un bon marqueur moléculaire différencié en fonction de l'employé. Cette fomra, l'enquête marqueur 5.8Sy leur écartement inergénicos (IST) montre son utilité comme cible pour un bon diagnostic moléculaire et comme un bon marqueur pour la dactylographie interespecie. Pour sa part, RFLP de gènes conservés, 5S et IRA5 rassemble isolés avec plus d'un trait en commun reconnaissable phénotype (sérotype plus origine). Etaient également présents, clonale stabilité. Ces marqueurs sont reproductibles à l'intérieur et entre. Toutefois, il ya de bons marqueurs pour l'étude des souches très proches parce qu'ils sont incapables de faire la différence entre eux. L'analyse des schémas obtenus avec le marqueur minisatellite M13 agrégats variété isolés en leur offrant un grand nombre de modèles dans la gamme neoformans. Ce marqueur combiné à l'information donnée par le sérotype est un outil utile pour l'application et 8 pidemiol 82b ógica. Quant à la minisatellite (GACA) 4 est celle qui offre une plus grande variabilité intraespecie, être très utile car il est capable d'identifier et primoinfecciones rechutes, ainsi que de caractériser les mimso isolées obtenues à partir de deux échantillons biologiques. L'analyse du marqueur minisatellite (GACA) 4 en isolé du déclenchement de la cryptococcose chèvres, met en lumière les différences entre les souches, qui gardait la plupart des autres marqueurs ne parviennent pas à adopter. En tout cas, la caractérisation d'isolats de cette étude ont montré que les preuves de l'existence d'entériner la troisième variété de Cruptococcus neoformans (Cnvar grubii). Dans notre étude, tous les marqueurs moléculaires testé discriminer clairement entre les deux variétés classiques (et gattii neoformans). L'analyse conjointe des profils trouvés avec chacun des marqueurs moléculaires et le potentiel d'équivalence avec des traits de comportement, l'écologie, etc des isolats, montre que les outils moléculaires sont une proposition utile pour des études épidémiologiques et des aspects spécifiques du phénotype parmi ceux qui souligne Sérotype. Cette étude met également l'accent sur la découverte de la première cryptocoques var.gattii sérotype B en pathologie humaine en Espagne. On soupçonne que cette variété peut être originaire de notre région, mais dans une minorité. La dernière démonstration de son existence en tant que souche autochtone en Espagne sera obtenu lorsque isolés à l'état sauvage. L'épidémiologie moléculaire de la maladie exige cryptococcose analyse d'un plus grand nombre d'isolats, en particulier les variétés et les sérotypes minorité, à approuver l'utilisation de marqueurs moléculaires.

Auteur: GARCERÁ TERUEL ANA.
Année: 2003.
Université: VALENCIA [www.uv.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE MARCIA.

Résumé: Après la partielle de l'annotation du génome de Candida albicans, une étude a été réalisée in silico 'de la base de données de C.albicans. Deux gènes ont été identifiés avec des caractéristiques de protéines de la paroi de la cellule, le CIP 3054 avec 62% d'homologie avec le gène ScSSR1 (protéine sécrétoire Stress Response) de Saccharomyces cerevisiae, qui a été appelé CaSSR1 et à l'Île-du-Prince-Édouard 564. Nous avons effectué l'interruption de ces deux gènes dans le but d'étudier l'implication dans la construction de la paroi cellulaire. Interruption du gène Ca SSR1 causé une plus grande sensibilité à la souche parentale à calcofluor blanc et rouge Congo matières distorsions sionan polymères de la paroi cellulaire. L'étude de la documentation publiée par l'activité enzymatique zimiliasa avec la plupart B - 1 ,3 - glucanasa montré la disparition d'une espèce de 70 Kda protéines. Plus de gène CaSSR1 de souche gène CaSRR1 conduit à l'émergence de l'espèce de novo et de protéines dans l'extrait zimoliasa de la souche sobreexpresante gène CaSSR1. Pour localiser les protéines CaSSR1 et Ca564 sont marqués avec le c- myc épitope, introduit après le tribunal à peptidasa du signal, l'emplacement dans C.albicans ne pouvaient être effectuées avec cette épitope, tandis que dans Saccharomyces cerevisiae ont été détectés dans des extraits de ces protéines SDS et Fraction de la membrane mitigés. Une étude du site à l'aide d'ancre GPI la paroi cellulaire de la protéine CaSsr1, un certain nombre de bâtiments qui ont été éliminés dans la région hidrobfóbica correspondant aux acides aminés 217 et 234, a été impliqué dans l'ancrage de la région et p, p + 1, P +2, correspondant aux acides aminés 199 à 201, décrits comme nécessaires à l'ancrage de la paroi cellulaire. Différentes versions ont été introduits dans la souche mutante pour le gène CaSSR1 et est considéré comme l'ancre à parede de différentes versions, dans le cas de la version dans laquelle le site a été retiré p, p +1, p +2, il n'a pas été détecté dans L'extrait zimiliasa, mais a été détectée une nouvelle espèce de protéines libérées dans le milieu de culture, dont les acides aminés 199 à 201 sont nécessaires pour l'incorporation de la protéine de la paroi cellulaire. Dans le cas de la suppression de la file d'attente pour hydrophobes des acides aminés 217 à 234, paroteína résultat a été trouvé dans l'extrait zimoliasa. L'étude de l'expression des gènes CaSSR1 a été étudiée dans la levure et de la morphologie mycélium, s'exprimant aussi bien dans les deux stades. Dans l'ensemble, l'expression de gène CaSSR1 est réalisée grâce à la virologie, ils sont représentés dans les 6039 gènes C.alicans et une série de contrôles de gènes, le profil transcriptionnel de cette mutante a été comparé avec son parent souche, alors qu'un total de De 39 gènes qui a changé d'expression en raison de l'interruption du gène CaSSR1 dans les conditions étudiées. Sur le nombre total de gènes 18 sont de fonction inconnue. Nous avons trouvé sept gènes sobreexpresados un total de 27 réprimée.

Auteur: QUIRÓS ASENSIO MANUEL.
Année: 2004.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Résumé: Levure Debaryomyces hansenii ne peut s'isoler dans une variété d'habitats, y compris les aliments transformés. Dans certains d'entre eux, comme le fromage, il a été jugé utile, dans son discours à partir de leur arrivée à échéance. Dernièrement, il a été suggéré que l'on pourrait ajouter aux cultures initiateurs de saucisses à améliorer leurs caractéristiques organoleptiques. Mais, dans cette thèse se trouve d'un côté la capacité physiologique (augmentation du rendement métabolique) de développer l'état de l'environnement dans les chambres de maturation et d'autre part, la capacité à se détériorer à travers la production de gaz a augmenté en présence d'additifs sont couramment utilisés pour le traitement De saucisses. Dans cette thèse, d'ailleurs, est conçu et évalué la qualité de la moitié cromogénico, sélectif et différencié pour cette levure basé sur la détection de l'enzyme beta glucuronidasa. De même, il élabore une méthode permettant de déterminer différentiel contre d'autres espèces de levure contaminer les aliments qui sont souvent basées sur l'étude du polymorphisme de fragments de restriction dans la région IGSE de Adn ribosomique (ADNr ISM PCR-RFLP). Cette technique est également applicable à d'autres espèces du genre Debaryomyces où ils peuvent vérifier leur valeur taxonomique.

Auteur: ROMÁN GONZÁLEZ ELVIRA.
Année: 2004.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA.
Lieu de préparation: DPTO. MICROBIOLOGÍA II (FACULTAD DE FARMACIA , UCM.).

Résumé: Les voies de transduction des signaux médiée par les MAP kinases sont l'un des principaux systèmes qui permettent aux organismes de s'adapter aux changements dans l'environnement qui les entoure, dans bien des cas, de réglementer les processus essentiels pour la cellule. À cet égard, et avec l'augmentation de l'incidence et le taux de mortalité de champignon Ce micro-organisme pathogène, les études sur la levure, qui a considérablement augmenté ces dernières années. Dans notre groupe de travail, nous avons cloné et caractérisé certains des éléments de ces routes dans le champignon pathogène C.albicans. Plus précisément, nous avons établi que la voie HOG est impliquée dans l'adaptation à différents types de stress osmotique et oxidativo - stimuli qui induisent l'activation des MAP kinases dans la voie hog1, ainsi que dans la régulation de la transition dimórfica et de la virulence dans ce champignon. Cette étude a abordé l'étude des protéines Sho1 en physiologie C.albicans, depuis plusieurs aspects. Premièrement, nous avons caractérisé la réponse de la mutante sho1 aux stimuli qui déclenchent la route (solution saline et d'oxydation) et analysés par l'obtention de doubles mutants sho1 hog1, epistasis la possibilité de relations entre les gènes SHO1 et HOG1. En outre, des études menées dans mutante ssk1 nous ont permis d'établir que la branche est médiatisée Ssk1 -y pas médiatisée par Sho1 - principalement responsable de la transmission de l'impulsion activateur MAP kinases Hog1 en réponse au peroxyde d'hydrogène. Deuxièmement, il a analysé le rôle des Sho1 dans la biogenèse de la paroi cellulaire fongique, établissant l'existence d'une voie possible SVG en C. Albicans en croissance végétative pour réglementer et contrôler l'activation des MAP kinases Cek1 qui nécessite l'activation de la protéine Sho1. Enfin, il a étudié la relation entre SHO1 et de la transition dimórfica dans ce champignon.

Auteur: VESES JIMÉNEZ VERÓNICA.
Année: 2004.
Université: VALENCIA [www.uv.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE FARMACIA.

Résumé: Par inmunorrastreo un genoteca l'expression de Candida albicans avec un anticorps polyclonaux spécifiques à la forme de champignon qui mycélium (PAb lutte -gt) a été isolé, cloné et caractérisé un nouveau gène de ce micro-organisme. Ce gène est contenue dans le contig 5-3205 du projet de séquençage du génome de C. Albicans, et contient un cadre de lecture qui code pour une putatif polypeptide de 288 acides aminés avec un poids moléculaire d'environ 32921 Da. La suppression de gène isolé entraîné une grave anomalie de la morphogenèse de C. Albicans, qui se caractérise par la formation de chaînes de levure, de sorte que le gène a été nommé ABG1 (anglais, "altéré en herbe croissance"), basé sur le phénotype de croissance gemación Altéré observé dans le souches mutantes pour ce gène. Procès Immunoblotting de subcellulaire des fractions avec un anticorps polyclonaux contre Abg1p et de la fusion des études en protéine fluorescente verte (GFP) de Aequorea Victoria, a révélé que Abg1p était située dans la membrane vacuolaire C. Albicans. Le modèle de la fluorescence des protéines Abg1p - GFP colocalizó avec celle observée à la suite de la coloration avec FM4 - 64, agent de taches et de la membrane vacuolaire vésicules endocíticas. Afin d'établir le rôle de ABG1 dans la biologie de C. Albicans procédé à la construction d'un nul mutantes, qui n'a pas pu avoir lieu en dépit de l'aide de deux techniques différentes de gène perturbation. Il procède à la construction d'une mutante conditionnel, dans lequel le premier exemplaire de ABG1 a été interrompu avec la cassette URA - dynamiteur et le deuxième exemplaire a été placé sous le contrôle du promoteur de MET3. En supprimant l'expression d'ABG1, par l'action répressive de la méthionine et la cystéine sur le promoteur de MET3, les mutants n'a pas été en mesure de se développer, qui a établi le caractère essentiel de ABG1 pour C. Albicans. L'analyse phénotypique des mutants conditionnelle révélé des anomalies dans la morphologie, la taille et le nombre de vacuolas présents dans les cellules. La suppression de ABG1 en C. Albicans provoqué, en outre, des défauts de la division cellulaire. Dans les cellules levaduriformes, modifications dans le processus de citocinesis, et les cellules miceliales a été détecté un plus grand nombre de ramifications dans la hyphae. La répression génique ABG1 abouti à une série de pleiotrópicos effets tels que l'accroissement de la susceptibilité à des agents qui interfèrent dans la biogenèse de la paroi cellulaire, comme Calcofluor blanc et rouge Congo, et une plus grande résistance à la SDS, ce qui suggère une possible modification de la structure et / Ou la composition de la paroi cellulaire. Il a également détecté une augmentation de la sensibilité de la souche mutante agents antifongiques à la famille des azolés. Cela pourrait indiquer un changement dans l'un des mécanismes de résistance à ces médicaments, tels que les pompes de circulation, dont certaines ont été décrites qui sont situés dans la membrane de vacuolaire. La recherche de protéines qui interagissent en vivo avec Abg1p moyen d'une technique de marquage avec des protéines A, a révélé l'interaction possible de Abg1p un aminopeptidasa (Ape2p) et une protéine de la famille des protéines de stress thermique (Ssa1p). A partir de ces observations, on peut suggérer un modèle pour Abg1p dans la membrane vacuolaire C. Albicans, dans laquelle le produit du gène ABG1 agir comme récepteur Ape2p, pour être transportés dans le cytosol à travers la membrane vacuolaire l'interaction avec Ssa1p. Ce document présente pour la première fois, des preuves de l'existence d'un gène produit, Abg1p, qui intersecte avec la biologie cellulaire vacuolaire morphogenèse, biogenèse de la paroi cellulaire et de la progression du cycle cellulaire, processus d'eux tous intimement liés à la virulence de C. Albicans . En outre, Abg1p est la première protéine vacuolaire essentiels décrits dans le présent champignon, et est sans rivale dans les cellules de mammifères, qui représentent 8 à un di 2ca annie potentiel pour le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques.

Auteur: GONZALEZ-NOVO SANCHEZ ALBERTO.
Année: 2004.
Université: SALAMANCA [www.usal.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Résumé: Ce micro-organisme est un champignon pathogène opportuniste homme avec un intérêt croissant médical. Pour C. Albicans peut développer son infectiosité, il est très important de la capacité de faire la transition entre les différentes morphologie constituent son cycle de vie. Il existe une famille de protéines, appelée septinas très important fongiques morphogenèse. Dans le modèle de la levure S. cerevisiae, connu sept septinas, dont cinq se trouvent dans un cercle cou entre la mère et la fille cellules. Afin de vérifier si C. Albicans dans le septinas sont impliqués dans la morphogenèse, nous avons procédé à delecionar, CaCDC10, et analysé le phénotype des souches générées. Ainsi, il a été constaté que bien que ni la capacité ni la morphologie cellulaire de filamentation être affectée dans une large mesure, oui, il ya eu une grave perturbation de la structure de la paroi de la cellule et les cloisons, et le processus de séparation des cellules. Par essais sur des modèles animaux, il a été constaté que CaCDC10 est nécessaire de développer l'infection, une bonne adhésion aux cellules épithéliales efficacement et coloniser différents tissus. Nous avons, grâce à l'expérimentation emplacement des différentes protéines dans les souches mutantes de C. Albicans, qu'il existe une hiérarchie dans l'assemblage des divers éléments de la structure septinas. Enfin, afin d'approfondir l'analyse de la structure moléculaire de septinas de C. Albicans, nous analysons l'état de phosphorylation de différents septinas. Ainsi, nous voyons que le septina CaShs1 est fosforilada, et que cette phosphorylation de se produit dans le cou. En outre, cette protéine subit une augmentation de la quantité et de la filamentation la phosphorylation, qui sont uniques parmi septinas. Ces changements dépendent de la ciclina spécifiques à incandescence Hgc1 et phosphatases CaCdc14 et Ypa1.

Auteur: PABLO SÁNCHEZ GUADALUPE.
Année: 2004.
Université: EXTREMADURA [www.unex.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE EXTREMADURA.

Auteur: AHUATZI CHACON DEIFILIA.
Année: 2005.
Université: OVIEDO [www.uniovi.es].
Lieu de l'exposition: DPTO DE BIOQUIMICA,BIOLOGIA MOLECULAR.
Lieu de préparation: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR. FACULTAD DE MEDICINA.

Résumé: Deux des plus importantes protéines impliquées dans la répression par le glucose chez Saccharomyces cerevisiae sont Mig1 et Hxk2. Le mécanisme par lequel opère la protéine Hxk2 n'est pas précisément connue, mais la partie tributaire Mig1 est connue dans le détail. Dans le présent document, nous montrons que la protéine Hxk2 a une localisation nucléaire est réglementée par le glucose et Mig1, un répresseur transcriptionnel de glucose responsables de la répression de nombreux gènes sont tenues de conserver la protéine Hxk2 dans le noyau. Mig1 et Hxk2 interagir in vivo dans un procès de double hybride et expériences in vitro inmunoprecipitación et coprecipitación de type "TPS - déroulez." Nous avons constaté que le décapeptide K6 - M15 de Hxk2, il est nécessaire que la localisation nucléaire de la protéine Est également essentiel pour l'interaction avec Mig1. Nos résultats démontrent que l'interaction Hxk2 - Mig1 est physiologiquement importante parce que les deux protéines ont été détectés dans un complexe avec des fragments d'ADN contenant le site MIG1 promoteur SUC2 la fois in vivo et in vitro. Nous avons également constaté que le S311 - Mig1 est essentiel pour l'interaction avec les protéines Hxk2 et de l'emplacement dépendant Snf1 de Mig1. Nous concluons que Hxk2 opère en interaction avec d'Mig1, inhibant sa phosphorylation au cours de la croissance sur le haut du glucose et de générer un répresseur complexe qui sera situé dans le promoteur des gènes de S. cerevisiae réglementée par Mig1.

Auteur: FERNÁNDEZ LOPEZ ALMUDENA.
Année: 2005.
Université: CÓRDOBA [www.uco.es].
Lieu de l'exposition: E.T.S.I. AGRONOMOS Y MONTES.
Lieu de préparation: E.T.S.I. AGRONOMOS Y MONTES.

Résumé: Le travail a été élaboré dans l'isolement, l'identification et la caractérisation de la levure responsable de la production des vins fins vieillissement de la PDO "Montilla-Moriles." Ils ont isolé des souches de levure dans une cave dans la région de Montilla, dans la Différentes étapes de l'élaboration du vin (ALVEAR Cave). Il traite de l'étude, en utilisant des critères taxonomiques, physiologique et moléculaire, tout en appliquant un modèle mathématique sur le comportement et l'évolution de ces levures, pour les différents paramètres de vin. Enfin, il ya eu une étude comparative avec les souches équivalent de la zone de vin de Jerez, choisi par la similitude dans le processus de développement et de vins fins de leur proximité géographique.

Auteur: MONTIEL DIAZ VERA.
Année: 2005.
Université: CÓRDOBA [www.uco.es].
Lieu de l'exposition: E.T.S.I. AGRONOMOS Y MONTES.
Lieu de préparation: E.T.S.I. AGRONOMOS Y MONTES.

Résumé: Levure Debaryomyces hansenii est un organisme que l'on retrouve dans des environnements à forte concentration saline et / ou de faible activité de l'eau salée ou de jus de fruit. Les mécanismes par lesquels cet organe est en mesure de développer dans ces milieux sont inconnues, mais je pense qu'ils sont différents. Le présent document examine certains des facteurs qui peuvent déterminer la nature halotolerante de D.hansenii par des études de biochimie et de biologie moléculaire. Dans une première section examine les caractéristiques de la fluidité et de la composition de la membrane plasmique de l'organisme à diverses conditions de stress salin et le pH. Dans la deuxième section identifie et étudie le rôle d'une cible potentielle de sodium Debarymyces, Hal2p. Cette protéine est impliquée dans les processus de tolérance au sel dans la levure, les plantes et les animaux. La troisième section traite de la distribution intracellulaire de sodium et de potassium dans cette levure et identifie un gène impliqué dans le processus de distribution. Nhx1 est un convoyeur vacuolaire impliqué dans la régulation de la concentration de cations et le pH dans l'espace citoplasmático.

Auteur: MARTÍNEZ-SOLANO GONZÁLEZ LAURA.
Année: 2005.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE FARMACIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE FARMACIA, UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Résumé: Macrophages sont les cellules du système immunitaire dont le rôle dans la lutte au large de la candidose systémique est essentielle. D'une part, et a agi comme fagocíticas cellules sécrètent des cytokines sont capables d'activer d'autres cellules et à diriger la réponse immunitaire. Ils peuvent également agir comme des cellules présentatrices d'antigène. Dans le but d'approfondir le rôle de ces cellules, nous avons réalisé une étude protéomique de la réponse d'une lignée de cellules murines demacrófagos (RAW 264,7) par rapport à une souche de cellules de Candida albicans (SC5314), les deux vivent comme inactivé par la chaleur comme l'a Décrite à exercer des effets différents sur l'activation des macrophages et des cellules épithéliales. Il a été étudié phagocytose des deux types de cellules à 45 min. Et on a assisté à une condensation F-actina autour de la levure vivante. Dans le même temps, l'interaction a été étudiée l'expression différentielle de protéines macrófago, et ont été de nombreuses différences d'expression, non seulement entre la ligne de base de contrôle des macrophages (2D de la carte de référence), et ceux qui sont confrontés, que ce soit les cellules inactivées par la chaleur ou du vivant Cellules, mais aussi avoir remarqué de nombreuses différences dans l'expression de la protéine entre les deux stimuli. Nous avons été en mesure d'identifier 50 protéines, dont 30 sont d'expression différentielle. 30 Ces protéines sont impliquées dans diverses: morphogenèse, la transduction du signal, le destin cellulaire, la synthèse des protéines, le métabolisme et l'homéostasie du fer. Si nous assister expression différentielle des fonctions de ces protéines, dans son ensemble, on peut dire que, après 45 minutes de l'interaction, à la fois des cellules vivantes et de C.albicans inactivé macrófago faire ressortir une augmentation de la protéine impliquée dans la réorganisation du cytosquelette et éventuellement certains Impliquées dans la protection contre l'apoptose. Cependant, les cellules inactivées pour stimuler la chaleur voies métaboliques comme glicólisis ou de la voie des acides tricarboxílicos. En outre, des cellules vivantes provoquer une réaction essentiellement pro-inflamatoria, à la différence des inactivé par la chaleur, par opposition à la réponse qui est fondamentalement anti-inflamatoria. Afin d'approfondir la réaction des macrophages par rapport à C.alicans, nous avons au point la méthodologie de conduite de l'enquête de quatre fractions subcellulaires: cytoplasme, organite, le noyau et du cytosquelette et l'augmentation de notre temps à l'interaction 3h. L'étude de l'expression différentielle de protéines de différentes subproteomas se fait avec la technologie DIGE. Nous avons étudié trois d'entre eux a observé que la fraction du cytosquelette apparaît plus profondément modifié ailes 3h interaction. Ce travail ouvre de larges perspectives dans l'étude de l'interaction macrófago-C.albicans peut permettre la découverte de nouvelles stratégies dans le traitement de la candidose systémique et de nouveaux facteurs de virulence de la levure et, par conséquent, de nouveaux objectifs de lutte fongique.

Auteur: PALOMINO MARTINEZ CARLOS AARON.
Année: 2005.
Université: OVIEDO [www.uniovi.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE MEDICINA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE MEDICINA.

Résumé: Pendant les quatre années de scolarité FICYT j'ai travaillé sur les protéines Rgt1, un facteur de transcription qui supprime l'expression de certains gènes, en l'absence de glucose, et en participant à l'expression des autres dans la présence de la même chose. Nord par des tests, et RT-PCR analyse de l'expression des bêta-galactosidasa ont montré que RGT1 est constitutivement exprimé. En outre, grâce à des expériences avec l'aide de fusions GFP localisation avons vérifié que constitutivement localisé dans le noyau. Analyse de l'expression du promoteur HXK2 fusionnées dans le schéma de lecture de l'indicateur gène bêta-galactosidasa en mutants rgt1 (obtenues par le biais de la génomique interruption) et les différentes sources de carbone ont montré que Rgt1 régule l'expression des gènes HXK2 dans S.cerevisiae, inhibiéndola avec les médias non fermentescibles Des sources de carbone. Mais un mutant rgt1 pas avoir modifié l'expression du gène SUC2 (inhibée par une protéine complexe qui Hxk2 et Mig1 partie), qui code pour l'invertase. Ces données concordent avec d'autres résultats montrant que Mig et Hxk2 pas avoir modifié leur schéma de la localisation cellulaire dans rgt1 mutants. Pour savoir comment cela fonctionne sur Rgt1 promoteur HKK2 ont effectué des tests de mobilité retard electroforética utilisés comme sondes séquences régulatrices dans le promoteur du gène HXK2 marqué radiomarqué. Différents complexes ADN-protéine en fonction de la source de carbone. Afin de démontrer que Rgt1 lie directement au promoteur HXK2 ces tests ont été répétés avec une protéine recombinante Rgt1 purifiés, et effectué des tests inmunoprecipitación de la chromatine (CglP). Des tests ont été réalisés sur la double hybride coinmunopreciptación et coprecipitación TPS déroulante afin de démontrer l'interaction in vivo et in vitro entre Rgt1 et protéines Hxk2 et Med8 dans différentes conditions de croissance. Nous avons également identifié la région spécifique de Hxk2 qui interagit avec Rgt1 bâtiments à l'aide de différentes versions delecionadas gène HXH2. Nous avons effectué une deuxième étude visant à déterminer le potentiel des kinases et phosphatases qui régulent la liaison de l'ADN Rgt1. Grâce à une analyse de l'Ouest et dans les tests de mobilité retardé electroforética nucléaire extraits d'une batterie de souches mutantes et en utilisant une protéine Rgt1 marqués avec le epítopo A nous trouvons que la sous-unité de Tpk3 PKA est le plus important pour la kinase de l'état de phosphorylation de Rgt1 Fermentativas pouvoir et Snf1 est une kinase indispensable au bon état de phosphorylation de Rgt1 pas dans la culture des médias fermentativos. Comme pour les phosphatases, les sous-unités Bmh pas participer à l'élimination des phosphates Rgt1; protéines Reg1, trasloca à la phosphatase Glc7 à votre noyau, ne semble pas participer directement sur Rgt1, mais si vous avez une influence indirecte par l'intermédiaire de son effet sur Snf1. En outre Tpk3 n'est pas nécessaire pour l'union de Rgt1 ADN dans la croissance des médias avec le glucose et Snf1 pour la liaison à l'ADN dans la culture médiatique ne fermentativos. En mutants Glc7 Rgt1 est liée à l'ADN afin instituant (depuis Snf1 est constitutivement activée). Nous avons également identifié une interaction entrelasproteínasRgt1 et Med8 (à la fois nécessaire à la répression de l'expression des gènes HXK2 en l'absence de glucose) la croissance par le biais des médias ne fermentativos procès Dual Hybrid coprecipitación TPS et déroulez. De fournir une explication physiologique de cette interaction, on a une expérience de la chromatine Immunoprécipitation des deux paires d'oligos, flanquent le moyen d'accompagnement et de deux RGT1 le moyen MED8 gène HXK2 respectivement. Il était considéré comme un PCr utilisant comme un moule eluído procedent le 8 et le 59ème AD N ChlP et deux paires d'oligos, flanquent le moyen d'accompagnement et de deux RGT1 le moyen MED8 gène HXK2 respectivement. Ajouts apparue avec les deux paires (286 et 266 pb, respectivement), mais pas le fragment amplifié englobant les deux régions (854 pb), qui témoigne de la formation d'un blucle niveau de l'ADN, parce que sans cette structure est impossible d'expliquer que, pour amplifier les Deux petits fragments, et non l'ensemble du morceau. Ce test, en plus de souligner à nouveau l'interaction de Rgt1 et Med8 montré que l'inhibition de l'expression des gènes HXK2 médias avec une faible croissance de glucose est dû à la formation d'une boucle dans la chromatine produit par l'interaction entre Rgt1 et Med8.

Auteur: Valdivieso Ugarte Magdalena.
Année: 2005.
Université: GRANADA [www.ugr.es].
Lieu de l'exposition: Facultad de Ciencias.
Lieu de préparation: Puleva Biotech S.A..

Résumé: À l'exception de ceux qui sont appelés organismes anaérobies, qui sont adaptées

Auteur: GARCIA LLORENTE IGNACIO.
Année: 2005.
Université: SALAMANCA [www.usal.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Lieu de préparation: DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y GENETICA.

Résumé: L'(1,3) - glucano est un polymère essentiel dans la paroi cellulaire de Schizosaccharomyces pombe. La thèse porte sur l'étude de la biosynthèse et la dégradation du polymère. La biosynthèse de (1,3) - glucano est effectuée par Mok1p au cours de la croissance végétative. Il a été détecté la présence de l'activité (1,3) - glucanasa dans S. Pombe, toutefois, dans le génome de la levure, il existe deux ORFs codant deux protéines, Agn1p et Agn2p à forte identité avec les enzymes décrites (1,3) - glucanasas autres champignons. Dans la partie qui analyse la dégradation (1,3) - glucano démontre que Agn1p et Agn2p sont activité enzymatique (1,3) - glucanasa. Agn1p est nécessaire pour la séparation des cellules se produit correctement. Agn1 + conjoncturelles et exprimé la protéine est situé dans la cloison de séparation, et l'enzyme responsable de la dégradation de (1,3) - glucano anneau paroi cellulaire dans la région de la cloison. Dans la partie qui analyse de la biosynthèse de (1,3) - glucano caractérisée protéines Mok11p, Mok12p, Mok13p et Mok14p, ces protéines ont une grande similitude avec l'identité et de la (1,3) - glucán synthétase Mok1p. Mok12p, Mok13p et Mok14p sont nécessaires pour le processus de formation du ascosporas arriver normalement. Mok12p se trouve dans les membranes des ascosporas et de la synthèse, à l'(1,3) - glucano nécessaires à la ascosporas va emballer correctement, et viable. Mok13p se trouve dans les membranes des ascosporas tôt dans le processus de formation et de la synthèse, à l'(1,3) - glucano nécessaires à la ascosporas sont résistants à diverses conditions de stress. Mok14p synthétise (1,4) - glucano donnant les spores de couleur marron caractéristique de la présence de vapeurs d'iode. Ce polymère est impliquée dans la résistance des spores à différents types de stress. Mok14p et (1,4) - glucano sont situées les deux partenaires à la paroi du asca comme ascosporas.

Auteur: MARTIN CUADRADO ANA BELEN.
Année: 2005.
Université: SALAMANCA [www.usal.es].
Lieu de l'exposition: CENTRO DE INVESTIGACION DEL CANCER.
Lieu de préparation: INSTITUTO MICROBIOLOGIA - BIOQUIMICA.

Résumé: La paroi cellulaire est une structure présente dans la levure et d'autres champignons qui entoure complètement la cellule servant de protection. Les enzymes impliquées dans la dynamique degradativa de bêta glucano, composante majoritaire de la paroi cellulaire, sont bêta glucanasas, qui catalysent l'hydrolyse de la liaison bêta - O - glicosídico de la chaîne d'hydrates de carbone. La première partie de la thèse centrée sur l'étude structurelle de (1,3) bêta endoglucanasas la famille GHF81 de la levure Schizosaccharomyces pombe, SpEng1 et SpEng2 et Saccharomyces cerevisiae ScEng2. Il procède à la purification de ces protéines et d'analyser les différentes variables de biochimiques. Par CLHP - PED a été étudié son mécanisme hydrolytique démontrant sa capacité à se dégrader au moins une laminari - pentasacárido, d'une manière similaire aux autres membres de la famille GHF81. Nous avons identifié le potentiel catalytique domaine de ScEng2 à sa fin carboxyle, qui est ensuite purifié et analysés. Par mutagenèse dirigée ont identifié plusieurs acides aminés essentiels à son activité enzymatique. En outre, il a été démontré que SpEng1 a un domaine contraignant glucanos à sa carboxyle fin, il a été constaté à épurer et de la spécificité par rapport au substrat insolubles avec lien (1,3) bêta. Ultérieurement, nous avons étudié l'implication de Eng1 et Agn1 ((1,3) alpha - endoglucanasa) dans le processus de séparation et les mécanismes cellulaires de transport et dans les domaines où une action est requise. Nous notons que Eng1 est nécessaire de se dégrader au premier cloison qui sépare les deux cellules filles après la mitose, et Agn1 la paroi du cylindre qui entoure cette cloison de séparation. Les deux protéines sont situées dans un cercle autour de la cloison cellules à l'état sauvage. L'étude de son emplacement dans les mutants défectueux dans la cellule de séparation, comme le complexe exocisto, mid2 et spn, a conclu que dans S. Pombe, l'anneau du septinas fonctionner comme un marqueur de la sécrétion de position correcte et de l'emplacement de Eng1 et Agn1, ce qui Être transportés par des vésicules vers les extrémités de la cloison par l'intermédiaire du complexe exocisto.

Auteur: CONDE LUQUE RAUL.
Année: 2005.
Université: EXTREMADURA [www.unex.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE CIENCIAS.
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Auteur: GARCIA SALCEDO RAUL.
Année: 2006.
Université: CÓRDOBA [www.uco.es].
Lieu de l'exposition: ETSIAM.
Lieu de préparation: ETSIAM.

Résumé: Agriculture vastes zones arides et semi-arides des régions du monde dépend de l'irrigation et enfrena à un sérieux dilemme: d'augmenter ou au moins de maintenir la productivité des cultures, ainsi que les sols et l'eau sont de plus en plus salée. Bien que le problème de la salinisation touche principalement les plantes agricoles d'intérêt, ce ne sont pas les seuls systèmes modèles utilisés pour la recherche dans ce domaine. Saccharomyces cervisis est un modèle expérimental simple et facile à utiliser qu'il est fréquemment utilisé dans l'étude de la salinité. Dans le présent travail est proposé comme un modèle d'organisme de ce type de recherche pour Debarymoyces hansenii, une levure plus tolérantes au sel Saccharomyces cerevisiae, et pour cette raison, offre certains avantages pour l'identification de nouveaux facteurs génétiques impliqués dans les mécanismes de tolérance au sel. D.hansenii est une levure marine habite également dans d'autres milieux saumâtres et les saucisses pour lesquelles a été défini comme un levure osmo -, cero - et halotolerante. Dans cet article, nous avons abordé thèse de la halotolerancia et de l'étude de la tolérance au pH élevé D.hansenii en trouvant de nouveaux gènes (GZF3 et TDH1) impliquées dans ces processus, ainsi que par l'étude d'un gène précédemment décrite dans S. cerevisiae, (KHA1) sous Le mécanisme halotolerancia. Le gène DhGZF3 codage pour le premier facteur de transcription de la famille GATA identifié D.hansenii. L'analyse de ce gène en fonction de sa surexpression dans Saccharomyces cerevisiae suggère que comme ScGZF3 régule négativement l'expression des gènes sensibles à catabolite régulation de l'azote (RCN), mais qui était différente de la gène Saccharomyces cerevisiae pour leur participation à certains phénomènes tels Que la tolérance au pH alcalin et le sel. L'expression de DhGZF3 donne Saccharomyces cerevisiae un phénotype de tolérance de pH élevé et de certaines drogues telles que rapamycin phénotype, ainsi qu'une sensibilité aux toxiques tels que les cations lithium et le sodium. Cette deuxième phénotype est expliqué sur la base de la diminution du niveau d'expression du gène ENA1 dans les cellules transportant le gène D.hansenii. L'analyse transcriptionnelle de cellules qui sobreexpresan DhGZF3 révèle la suppression d'un grand nombre de gènes, dont plusieurs sont impliqués dans le métabolisme de l'azote, parmi ces frappant inhibition de l'expression de tous les gènes impliqués dans la synthèse de la Lys de La - aminoadipato. Parmi les transporteurs décrits dans Saccharomyces cerevisiae liés homéostasie ionique est codée par le gène KHA1. Les travaux sur ce gène d'accord pour attribuer un rôle dans le transport de potassium et de la réglementation de la intracellulaires de pH, mais en désaccord sur d'autres aspects tels que leur localisation cellulaire barajándose comme la membrane plasmique potentiels ou orgánulo intracellulaire. La séquence du génome de D.hansenii il est très similaire au codage gène KHA1 de Saccharomyces cerevisiae. Les résultats de l'étude suggèrent que cette séquence codant une protéine impliquée dans le transport de sodium, situé à quelques orgánulo intracellulaire éventuellement l'appareil de Golgi. L'étude de halotolerancia dans D.hansenii grâce à la protéomique méthodologie a permis d'identifier plusieurs protéines dont l'expression est altérée dans le cadre de la réponse adapatativa cette levure au sel. Le gène qui code pour l'une de ces protéines a un degré élevé de gènes THD1 - 3 de Saccharomyces cerevisiae qui encoder trois isoformes de l'enzyme gliceraldehido - 3 à P déshydrogénase (GAPDH). En présence de sodium induit l'expression de la protéine DhTdh1 et, par conséquent, dans ces conditions, l'augmentation de l'activité GAPDH.